4.

Etapele identificrii unei bacterii: cultivarea si caracterele de cultivare; caractere biochimice si antigenice
OBIECTIVE: 1. De a discuta scopurile cultivrii bacteriilor. 2. De a prezenta mediile de cultur utilizate pentru cultivarea bacteriilor: definiie, condiiile de baz ale unui mediu de cultur, criterii de clasificare, exemple. De a discuta indicaiile utilizrii mediilor de cultur solide vs. lichide mbogite vs. simple difereniale/selective vs. simple 3. Tehnica nsmnrii n 4 cadrane. Obinerea culturii pure. Descrierea caracterelor de cultur ale bacteriilor pe diferite medii. 1. Scopurile cultivrii: Medical - diagnosticul etiologic al infeciilor bacteriene - testarea sensibilitii la antibiotice Se discut cu studenii necesitatea obinerii culturii pure Cultur pur = constituit din bacterii de acelai fel = etapa indispensabil identificrii i testrii sensibilitii la antibiotice Industrial - obinerea de antigene, vaccinuri, produse de biosintez, bioconversie sau fermentare 2. Definiie Mediul de cultur = soluie apoas a unor substane nutritive (nutrieni, factori de cretere). Nutrieni = substane ale cror soluii pot traversa membrana citoplasmatic. Alimente = material crud din care deriv nutrienii, prin digestie. Factori de cretere = metabolii eseniali pentru cretere: aminoacizi, baze azotate, vitamine. Bacterii fastidioase = dependente de numeroi factori de cretere Condiii pe care trebuie s le ndeplineasc un mediu de cultur : s fie nutritiv. s asigure presiunea osmotic (n general, medii izotone) i pH (n general, 7-7,5) (similare celor din mediul intern). s fie steril, pentru a cultiva exclusiv microorganismele din produsul investigat. s fie transparent faciliteaz urmrirea culturii. s permit separarea, unele de altele, a microorganismelor dintr-un produs microbian.

Condiiile fizico-chimice necesare cultivrii: presiunea osmotic - majoritatea bacteriilor patogene cresc n medii izotone cu mediul intern al organismului gazd - bacterii halofile ( >2 % NaCl) - pH - majoritatea bacteriilor necesit un pH optim n jur de neutralitate (7-7,5) - bacterii acidofile (5-5,5) / bazofile (8,5-9) - temperatura: - bacterii psihrotrofe se multiplic rapid la 20-30C i cultiv lent la temperatura frigiderului - bacterii psihrofile (0-20C) - bacterii mezofile (25-45C) - bacterii termofile (50-70C). - atmosfera de incubare: - bacterii strict aerobe = se dezvolt doar n prezena oxigenului - bacterii strict anaerobe = se dezvolt doar n absena oxigenului - bacterii facultativ anaerobe = cultiv att aerob, ct i anaerob - bacterii microaerofile = cultiv numai n prezena unor concentraii reduse de O 2 (5%) - bacterii carboxifile = necesit pentru cretere cantiti de CO 2 mai mari dect cele din aer (5-10%)

Clasificarea mediilor de cultur (criterii, repartizarea mediilor, exemple) a. dup proveniena nutrienilor: - empirice ingrediente de origine animal sau vegetal - sintetice ingrediente chimic pure studiul necesitilor nutritive ale bacteriilor b. n raport de valoarea nutritiv: -simple - bacterii nepretenioase nutritiv - mbogite - bacterii pretenioase nutritiv c. dup consisten: - lichide produse patologice monobacteriene - solide produse patologice pluribacteriene - semisolide studiul mobilitii i conservarea tulpinilor bacteriene. d. dup scopul utilizrii: - de izolare uzuale - satisfac exigenele nutritive pentru o gam larg de specii bacteriene difereniale - conin substratul pentru anumite enzime bacteriene i un indicator care atest atacarea acestui substrat un caracter metabolic difereniaz ntre ele bacterii cu aspect al culturii identic pe mediile simple. selective - medii solide - inhib dezvoltarea bacteriilor de contaminare a prelevatelor - frecvent sunt i difereniale de mbogire - medii lichide - favorizeaz multiplicarea bacteriilor a cror izolare o urmrim - inhib selectiv flora de asociaie. - de identificare studiul activitii biochimice a bacteriilor n scopul ncadrrii ntr-un gen/specie. - de conservare. 3. Cultivarea i izolarea bacteriilor n cultur pur

Tehnicile uzuale de cultivare a bacteriilor : nsmnarea bacteriilor pentru obinerea culturii pure se efectueaz demonstrativ nsmnarea prin epuizare n 4 cadrane, pe geloz simpl . nsmnare = depunerea n mediul de cultur a materialului bacterian, inoculum. Cultur = totalitatea bacteriilor acumulate prin multiplicare Colonie = mas de cultur, vizibil cu ochiul liber pe suprafaa unui mediu de cultur solid, rezultat prin multiplicarea unei singure celule bacteriene sau a unui grup de celule, numit unitate formatoare de colonii/UFC. Colonie = clon bacterian, DECI cultur pur

Descrierea caracterelor de cultur: condiii optime de cultivare: bacterii cultivabile vs. necultivabile; exigene nutritive: bacterii pretenioase vs. nepretenioase nutritiv; temperatura optim de cultivare: psihrotrofe / psihrofile / mezofile / termofile; atmosfera optim de cultivare: strict aerobe / strict anaerobe / facultativ anaerobe / microaerofile / carboxifile; pH: neutru / bacterii acidofile / bacterii bazofile; presiune osmotic: bacterii care cultiv pe medii izotone/ bacterii halofile. aspectul culturii pe medii lichide / solide (sublinierea diferenelor): forma de cultur S i forma de cultur R pe mediu lichid / solid: Forma de cultur Mediu lichid - tulbur omogen mediile lichide - cultiv sub form de grunji, lsnd mediul supernatant clar Mediu solid - suprafaa neted, lucioas - contur circular - suprafaa uscat, rugoas - margini neregulate

S R

aspectul coloniilor: diametru, circumferina, relief, suprafa, culoare, transparena, consisten, aderena la mediu; modificri ale mediilor de cultur induse de cultivare (se prezint comparativ mediile sterile cu cele nsmnate) hemoliza pe agar-snge: alfa / beta / gamma reacii pe medii difereniale zaharate producerea de pigment difuzibil n mediu producerea unui miros particular.