Introducere: Ansamblul variabilelor bio-fizico-chimice ce descriu starea unui bioproces la un moment dat manifest o inter-conexiune ce face imposibil discernerea

influenelor reciproce. De aceea ecuaia general , este posibil doar teoretic n modelarea biosistemelor sunt de preferat modelele deterministice celor probabilistice. Acestea sunt de 2 tipuri: -nestructurate (celulele sunt de tip black box,conteaz cantitatea i sunt influenate doar din exterior) -structurate (au structura celular,introducndu-se vrsta,forma,dimensiunea) Ele mai sunt clasificate astfel: - nesegregate(continue) - se ia n considerare existena celulelor individuale -segregate - se explic existena celulelor individuale cu proprieti distincte Modele nesegregate i nestructurate Acestea pot reprezenta - ecuaii constitutive:-de vitez(cinetica) -de transport -termodinamice - ecuaii de bilan: stoechiometrie Modele cinetice nestructurate pentru creterea i utilizarea substratului

Variabila cheie este viteza specific de cretere

Variabila depinde de timp i e influenat, cum se vede n formula de mai sus, de muli factori (S - substrat, X - concentraia de celule, P - concentraia de produs, T - temperatura, I - inhibitori ai creterii) a) Modele cinetice limitate de ctre substrat Cinetica creterii microbiene e dominat de legea lui Monod:

,max - viteza maxim specific de cretere [1/h];

KS - constanta de saturaie[g/L]

Similar,viteza de consum a substratului este:

Aceste expresii sunt legate ntre ele prin coeficientul de conversie astfel:

Avem si ecuaii alternative: - Ecuatia Teissier:

- Ecuatia Moser:

- Ecuatia Powell: exprim prin Kd influena permeabilitii celulare, difuziei substratului i dimensiunii celulare.

Dezvoltarea unui model cinetic ajut la stabilirea unei descrieri a creterii microbiene. Modelul Konak, a crui formul e o analogie ctre legea puterii (cinetica chimic): ,p - ordin de reacie; k - constanta cinetic

Dac introducem conceptul de vitez relativ de cretere=>

, iar

dac nlocuim n modelul Konak=> ;si se demonstreaz c pentru p=1 vom avea o relaie Teissier iar pentru p=2 va rezulta o relaie Monod. De asemenea, s-a gsit o relaie ntre max i KS:

Kargi i Schuler au derivat ecuaiile generale i au obinut:

,k,m,p-const. Model Monod Teissier Hill-Moser k 1/KS 1/KS n/(KS^(1/n)) M 0 0 1-1/n p 2 1 1+1/n

b) Modele cu influena concentraiei celulare i a concentraiei substratului limitator S-a observat c viteza de evoluie a culturii scade la concentraii ridicate ale lui X, se obine ecuaia Verhulst (cunoscut ca i modelul logistic al creterii):

O ecuaie mai realist, ce exprim i limitarea prin concentraia substratului a fost introdus de Meyrath:

,Y - randamentul de transformare a substratului la celule Cel mai cunoscut model =f(X,S) este modelul Contois, aplicat pentru simplitatea lui:

Prelund modul de gndire al cineticii chimice, Kono i Asai au derivat o ecuaie de cretere ce include coeficientul aparent al activitii de cretere: ,unde KX - const. de vitez de cretere =0,faza de inducie =a, 0<a<1, faza de tranziie(a=*t) =1, faza exponenial de cretere Alte modele interesante n acest domeniu sunt: - Modelul Kishimoto: ,Q1,Q2 - coeficieni de regresie valorile de medie aritmetic - Modelul Staniskis i Levisauskas c) Cinetica cu inhibiie prin concentraia substratului Cele mai uzuale modele sunt: - Modelul Andrews(n regim chemostat):

,Ki-constante de inhibiie n raport cu substratul

- Modelul Webb: - Modelul Yano (multi compleci inactivi enzim-substrat):

Un tip diferit de ecuaie pentru a exprima cinetica (cu inhibiie prin substrat) a fost propus Wayman i Tseng, concentraiile de substrat care sunt mai mari dect o concentraie prag SC inhib creterea liniar conform modelului:

Aceast relaie se poate folosi cnd curba =f(S) nu are forma Andrews ci o descretere liniar a lui , astfel:

d) =f(S,P) Cinetica de cretere cu inhibiie prin concentraia de produs. Se manifest mai multe tipuri de efecte asupra vitezei specifice: descretere liniar, exponenial, stopare a creterii. Cnd nu apare o concentraie prag de la care s nceap efectele, modelul Hinshelwood poate exprima fenomenul.

,k - constanta de inhibiie n raport cu produsul P Aceast relaie a fost modificat, obinndu-se modelul Holzberg: ,K1,K2 constante pozitive Reprezentarea grafic a acestui model:

Un alt model important este cel dat de Ghose i Tyagi:

,Pmax - concentraia maxim de produs din mediu

O ecuaie de tipul =f(P,S) poate fi modelat n analogie cu cinematica enzimatic, Ierusalimsky recomandnd aceast ecuaie, care este cea mai folosit pentru acest domeniu:

,Ki,p - constanta de inhibiie n raport cu P

e) (S,C) , Influena oxigenului dizolvat ca al doilea substrat asupra vitezei specifice de cretere Cel mai utilizat model este acela al lui Olsson(model de tip cinetic cu saturaie):

,KC - constanta de saturaie n raport cu O2 f) Influena altor factori asupra vitezei specifice de cretere Pentru efectul pH-ului, se prezint modelele: - Andreyeva i Biriukov (dezvoltare polinomial) -Jackson i Edwards(cu inhibiie)

Pentru efectul simultan = f(S,pH) avem modelele:- Andreyeva i Biriukov

Influena temperaturii e modelat printr-o lege de tip Arrhenius conform modelului Topiwala i Sinclair:

De altfel, Constantinides modeleaz (T,X) prin ecuaia:

,unde:

Modele cinetice nestructurate pentru formarea produsului - aceast cinetic se ia n raport cu cinetica creterii; a rmas valabil clasificarea Gaden,cu 4 tipuri de cinetic pentru formarea produsului: Tipul 0 producia are loc n celule n faza staionar(transformrile steroizilor i sinteza vitaminei E de ctre Saccharomyces cerevisiae). Tipul 1 - acumularea produsului e direct legat de cretere (producerea acidului gluconic). Tipul 2 - acumularea produsului e parial legat de cretere (producerea acidului citric). Tipul 3 - acumularea produsului nu e asociat cu creterea (obinerea metaboliilor secundari gen penicilina). Recunoasterea fiecrui tip se poate face cu diagrame caracteristice rs,rx,rp=f(t), considernd vitezele specifice qs, (viteza de cretere),qp (viteza de producie).

Pentru tipul 1,vom avea relaiile:

=>

(Constantinides) Considernd pentru qP o dezvoltare de tip Monod, se va obine o funcie pentru viteza de producie n asociere cu creterea.

Pentru al doilea tip, datorit asocierii pariale a formrii produsului, se recomand o combinaie a ecuaiilor, astfel: Kono i Asai au introdus o ecuaie general, bazat pe coeficientul de consum : Pentru tipul 3, rP = f(X), este reprezentat prin relaia rP=KP*X MODELE STRUCTURATE - cele mai importante sunt cele chimice. Formularea riguroas implic introducerea concentraiei intrinseci a unui component (cantitatea de volum celular). Fredrickson introduce bilanul ntr-un bioreactor discontinuu:

,m - biomasa la timpul t; c - masa componentei j pe unitatea de volum celular r - viteza de apariie/dispariie n procesul i a
j j

componentei j V - volumul ocupat de celule (dac acesta este , i se va obine:

constant, vom avea

Elementul Cj poate fi neglijat, avnd un Xj=Cj*V care l poate nlocui. Harder i Roels au trecut n revist aplicaiile n biotehnologie ale modelelor simplu-structurate, n primul rnd principiile de baz: - modificri ale concentraiilor substratelor -> schimbri n viteza de reacie - interaciunea enzimelor cu efectori -> modificri ale aciunii catalitice a acestora - concentraiile macromoleculelor se adapteaz la mediu prin schimbarea vitezei de sintez (concentraia ARN crete odat cu creterea ratei de diluie) - schimbrile de mediu pot duce la schimbri n raportul dintre diferite specii Autorii propun o serie de modele structurale: - creterea biomasei cu modelul bicompartimental - creterea biomasei cu modelul tricompartimental - sinteza enzimelor (modelul operonului, al represiei catabolice, al creterii diauxice)

n acelai timp, modelele cineticii structurale pot descrie dinamica bioprocesului cu celule modificate genetic Pentru cinetica formrii produsului, avem ecuaia: ,k0 - const. vitezei globale de biosintez; - eficiena exprimrii genetice GP - concentraia ADN-ului n plasmide b - const. + - viteza specific de cretere a celulelor purttoare de plasmide Aceast ecuaie poate fi comparat cu modelul nestructurat Luedeking-Piret, ce poate fi exprimat pentru fermentaia cu celule recombinante:

,X+ - concentraia celulelor cu plasmide

Modele cinetice segregate (corpusculare) Acestea sunt nestructurate, au abilitatea ca pornind de la o unic variabil (ex: vrsta celulelor), ele pot descrie complet toate celulele cu aceeai vrst ca avnd aceeai compoziie. Avem un model propus de Bley, pornit de la celule n 2 stri diferite: nenmugurite/nmugurite. Avem concentraiile X1 i X2 i S concentraia substratului. Astfel vom avea sistemul de relaii:

Unde k1(S) reprezint viteza specific a trecerii de la starea X1 la X1, k2(s)

este viteza procesului invers, 1(S) i 2(S) coeficienii de randament a conversiei de la S la X1, respectiv S la X2. Modelele segregate i structurate sunt insuficiet aplicate n bioprocese (preluate din biologia moleculara), iar pentru utilizarea lor trebuie: - evoluia rapid a tehnicilor analitice folosindu-se proprietile optice, electrice sau electromagnetice ale celulelor sau a unor componente celulare ( rezonana magnetic, nuclear). - progrese n modelarea matematic.