Explorarea global a coagulrii

Timpul de coagulare
Const n cronometrarea duratei ce se scurge ntre recoltarea unei probe de snge
venos sau capilar i coagularea acestuia.
Se determin prin :
Metoda Lee White ( metoda eprubetelor)
Se determin timpul de coagulare n eprubet a sngelui venos inut n baie de ap la
37 grd C.
Material necesar:
seringi i ace siliconate pentru puncia venoas
eprubete de coagulare
baie de ap la 37 grd c
cronometru
Tehnica de lucru:
Se puncionea! vena cu o sering mic i se scot "3 ml de snge care se
ndeprtea!. Se detaea! seringa de ac# reparti!nduse direct de la ac n cte $
eprubete# cte $ ml de snge. %prubetele se in n baie de ap la 37 grd C.
Cronometrul se declanea! n momentul ptrunderii sngelui n sering: eprubeta nr
" se citete din minut n minut# prin nclinare la &' grd( timpul de coagulare )iind
determinat cnd n momentul n care prin rsturnarea eprubetei sngele nu curge. *n
acest moment ncepe citirea eprubetei nr $# care )iind lsat nemicat # coagulea!
mai tr!iu. Citirea se )ace din minut n minut# cronometrul oprinduse cnd apare
coagularea n eprubeta nr $.
n condiii normale, coagularea n prima eprubet apare ntre 6-10 minute, iar n a
2 a eprubet ntre 8-12 minute.
+impul de coagulare este timpul scurs de la pornirea cronometrului pn la apariia
coagulrii n eprubeta nr $.
Metoda Bazarov ( metoda lamelor)
,tili!ea! snge capilar atunci cnd recoltarea venoas este imposibil ( nou nscut#
copil)
Material necesar:
lame de sticl degresate cu alcool eter i uscate
ace de sering sterile
cutii -etri
.rtie de )iltru
vat
cronometru
Tehnica de lucru:
Se de!in)ectea! lobul urec.ii sau pulpa mediusului# se ateapt uscarea pielii i se
practic o neptur de $3 mm cu un ac de sering. -rima pictur se ndeprtea!#
se aplic apoi o pictur pe lam# ast)el nct pictura sa )ie su)icient de mare i s nu
se de)orme!e. Se declanea! cronometrul. -entru a evita uscarea lama de sticl se
pune ntro cutie -etri peste o .rtie de )iltru ume!it i se acoper. Se )ace controlul
picturii de snge din minut n minut prin nclinarea uoar a lamei. Se oprete
cronometrul cnd prin nclinarea lamei la /0 grd sau rsturnare# pictura de snge nu
se mai de)ormea!.
Durata normal a coagulrii pe lam 6-8 minute.
Timpul de recalcifiere o!ell
Se determin timpul de coagulare al plasmei proaspete o1alat i recalci)iat.
2eactivi: citrat trisodic 3#34# clorur de calciu &0 5
2ecoltarea sngelui : sngele se recoltea! pe anticoagulant: citrat trisodic n
concentraie de 3#34. Se centri)ug.ea! concomitent cu proba martor normal# timp de
' minute la "'00 de turaii6minut.
Tehnica de lucru:
*ntro eprubet se pun 0#$ ml de plasm i se in n baie de ap la 37 de grade Celsius.
Se adaug 0#$ ml clorur de calciu &05# porninduse n acest moment cronometrul.
Se )ac citiri din "' n "' secunde# pn la " minut# apoi citirile se )ac din "0 n "0
secunde# prin nclinarea eprubetei scoase uor din ap. Coagularea este gata cnd
amestecul se coagulea! sub )orma unui c.eag opalescent compact sau # uneori# sub
)orma de )ilamente dense de )ibrin. 7n acest moment se oprete cronometrul. 8alori
normale "min "0 sec $ min "0 sec.
Toleran"a la heparin #in vitro # ($oulier)
Principiu: 7n pre!ena unor cantiti de .eparin determinare timpul de recalci)iere al
plasmei o1alatate se alungete mai mult sau mai puin# n )uncie de starea de .ipo# normo
sau .ipercoagulabilitate a sngelui n momentul testni.
%ste testul cu cea mai mare sensibilitate n aprecierea strii de coagulabilitate global
Material necesar-plasm de testat o1alalat:
plasm martor o1alatat:
ciorur de calciu 9: &0:
.eparin n )iole de '000 ui(
baie de ap la 37;
<
C eprubete# pipete.
-repararea plasmei: 7mediat dup recoltare# prin centri)ugare timp de ' minute la "'==
turaii6min. se obine plasma pentru prepararea diluiilor.
Tehnica de lucru: pentru prepararea diluiilor:
Soluia 7 ($' ml CaCl$ 0." ml .eparin) conine $0 u .eparin. ml(
Soluia 77( / ml CaCl$ l ml soluie 7) conine $ u .eparin6ml sau 0.5 ml CaCl$:. ceea ce
corespunde eprubetei >(
Soluia din eprubeta C se prepar din 0#7 ml soluie 77 ? 0#3 ml CaCl$l:(
Soluia din eprubeta @ se prepar din 0#3 ml soluie 77 ? 0#7ml CaCl$
>iluiile de .eparin n CaCl$ 56&0. se prepar dup cum urmea!:
eprubeta A : 0.' ml CaCl$ )r .eparin:
eprubeta @ : 0.' ml CaCl$coninnd 0#3 u .eparin:
eprubeta C : 0#' ml CaCl$coninnd 0#7 u .eparin:
eprubeta > : 0#' ml CaCl$coninnd "#0 u .eparin.
%prubetele cu diluiile respective se in la baie de ap la 37BC. 7n )iecare eprubeta se adaug cte
0#'ml plasm# ncepnd cu eprubeta >. cu cea mai mare cantitate de .eparin. Cnd plasma a
)ost adugat i n eprubeta A ()r .eparin) se pornete cronometrul. Coagularea# citit prin
nclinarea uoar a eprubetelor. se consider terminat n momentul cnd prin rsturnarea
eprubetei nu mai curge nici o sero!itate.
Reultate: 7n eprubeta A# care nu conine .eparin. sa e)ectuat de )apt un timp
CoDell.# deci timpul de coagulare va )i de 70 sec"'0 sec.
-entru celelalte eprubete contea! acelea n care coagularea plasmei normale a
avut loc dup "0"$ minute. +eoretic aceasta ar trebui s se petreac n eprubeta > care
conine l u .eparin.
7ndicele de coagulabilitate (7C) este raportul ntre timpul de coagulare al
martorului si timpul de coagulare a plasmei bolnavului gsite n proba care conine "u
.eparin la 0.'ml soluie calcic.
!" # timp martor.$timp bolna% # 0.80 - 1,20 &tare de iocoagulabilitate'
!" ( 0.80 # &tare de )ipocoagulabilitate*
!" + 1,20 # &tare de )ipercoagulabilitate.
+estul de toleran la .eparin# mpreun cu timpul de protrombin EuicF.
repre!int o metod sigur de supraveg.ere a .ipocoagulabilitii terapeutice prin
dicumarol si derivaii acestuia.
+estul de toleran la .eparin poate decela stan de .ipocoagulabilitate )ruste# care
evoluea! cu un timp de coagulare normal ( trombocitopenii# .emo)ilii )ruste# scderi
uoare ale )actorilor coagulrii). +estul poate decela# de asemenea# i urmri starea de
.ipercoagulabilitate care se instalea! postpartum# postoperator# la cardiaci dup
administrarea de tonicardiace i diuretice# n cursul trombo!elor arteriale si venoase
Trombela%tografia (artert)
Are drept scop nregistrarea )otogra)ica a )ormrii c.eagului i a modi)icrilor calitilor
sale )i!ice n )uncie de timp. Se )olosete n special pentru determinarea de)icitului de GH777
sau a unei .iper)ibrinoli!e maIore.
,-plorarea cii intrin&eci a coagulrii
Se reali!ea! prin teste globale sau prin determinarea di)ereniat a )iecrui )actor
care intervine n aceast )a!.
Te%tul con%umului de protrombin
%ste un test global pentru calea intrinsec a coagulrii. ,n consum de protrombin normal
evidenia! c toi )actorii care intervin n aceast )a! sunt normali: un consum de
protrombin de)icitar permite locali!area le!iunii n )a!a 7 a coagulrii# iar preci!area
)actorului sau )actorilor din aceast )a! care intervin n modi)icarea testului necesit
determinri di)ereniate.
Principiu: Coagularea sngelui se )ace prin trans)ormarea protrombinei n trombin.
>up coagulare i retracia c.eagului# n mod normal# protrombin nu se trans)orm n
totalitate n trombin. rmnnd n ser o cantitate de protrombin de apro1imativ "0Bo
(protrombin re!idual). +estul consumului de protrombin do!ea! tocmai aceast
protrombin re!idual din ser.
Material necesar:
ser de testat. & ore de la coagulare# n baie de ap la 3J;C: centri)ugare puternic#
decantare( baie de ap alte ' minute pentru inactivarea trombinei(
ser martor (normal) in aceleai condiii(
plasm (normal) adsorbit pe @aS=&(
tromboplastin calcic (tromboplastin un volum CaCl$5 &0. un volum):
baie de ap la 37 C(
eprubete. pipete gradate# etc.
+e.nica: 7ntro eprubeta. peste 0." ml ser de testat# se adaug 0.$ ml tromboplastin
calcic. Se las K0L la. baia de ap # (pentru trans)ormarea protrombinei n trombin). apoi
se adaug 0." ml plasm adsorbit. >in acest moment se cronometrea! timpul de apariie a
c.eagului de )ibrin# care repre!int tocmai timpul testului.
8alori normale :30 sec. /0 sec.
,n timp scurt# sub 30 secunde evidenia! o tulburare n )ormarea tromboplastinei
endogene active# datorit de)icienei )actorilor care contribuie 7a )ormarea ei.
+impul consumului de protrombin este scurtat n: .emo)ilnie A sau @. de)iciene n )actori
H7. H77. H. 87: :trombocitopenii sau trombocitopaiii cu de)icien in Gp3.
%1ceptnd e1istena anticoagulanilor circulani# un timp alungit nu are semni)icaie
patologic.
Timpul de cefalin ,
%ste un test de coagulabilitate global# care permite decelararea originii plac.etare sau
plasmatice a unei coagulopatii: un timp de ce)alin normal evidenia! originea plac.etar a
coagulopatiei: un timp alungit indic originea plasmatic a acesteia
+impul de ce)alin repre!int un timp EuicF la care tromboplastina este nlocuit cu o
suspensie de ce)alin ( de origine cerebral)# iar plasma de testat a )ost n prealabil
deplac.etat.
Materiale necesare:
plasm de testat decalci)icat ( cu citrat de sodiu 3.3Bo sau o1alat de sodiu ".3& Bo. pentru
ambele proporia )iind de o parte coagulant la / pri snge) deplac.etat prin centri)ugare "0
minute la '000 turaii# minut# vec.e de cel mult $ ore
plasm martor (normal) preparat la )el:
CaCl$5 &0.
suspensie de ce)alin preparat e1temporaneu. in diluia de l 6"00. n tampon
veronal:
tampon veronal: 5edmal sol 0."5 '3#"0 ml
CC" 0."9 &"./0ml
Ap dist. '0 ml
(pC M 7.37.& )(vec.ime admis:30 !ile(
baie de ap la 37BC: 6
eprubete. pipete gradate# etc.
Tehnica de lucru:: Se pipetea! ntro eprubeta 0." ml plasm de investigat: se
incubea! eprubeta ' minute la baia de ap la 37 grd C# apoi se adaug 0." ml suspensie de
ce)alin diluat e1temporaneu l 6"00 n tampon veronal i 0." ml CaCl$l: 5 &0: odat cu
adugarea CaCl$ se pornete cronometrul. care se va opri la apariia c.eagului e )ibrin.
Aceeai te.nic se )olosete i pentru plasma normal# in cadrul creia ++- trebuie s )ie
egal cu 3& N "K.
.alori normale' /0 -80 0.
c&Timpul de cefalin ' activator (timpul de tromboplastin parial ++-. A-++)
Se )ace prin adugarea la plasma citrat de )os)olipidece)alina) i a unui activator
(caolin etc).
,tili!area suspensiei pulberei de caolin n e)ectuarea timpului de ce)alin are $ avantaIe:.
l .reali!ea! o activare uni)orm a )actorilor tromboplastino)ormrii (7H.
H7. H77)# reali!nd o scurtare a timpului de coagulare a amestecului
$.pre!ena caolinului n amestec permite o citire mai uoar a timpului de coagulare
.alori normale' 10-/00. dar mai corect &e interpretea 2a de un martor' in mod normal
33P de &tudiat nu trebuie & dep4ea&c cu mai mult de 100 33P martor.
++- este prelungit n de)icitul de G8777. 7H# H77# H7# H# 8# 77. 7. n .epatopatii. tratamentul
cu .eparin i n mai mic msur n tratamentul cu antivitamine O
Te%tul de generare al trombopla%tinei (T(T) Bigg%'*ougla%)
%ste indicat cnd ++- este prelungit. Se ba!ea! pe utili!area a 3 LreactiviL
""
preparai din
sngele de studiat:
:
a.serul care conine )actori neconsumai n timpul coagulrii (H77. H7. 7H. H.
(
i 8777):
b.plasma adsorbit pe sul)at de bariu# care este lipsit de protea!ele dependente de vitamina F (77.
877. 7H. H) dar care conine G8. 8777. H7.
c.suspensie de trombocite pentru Gp3 sau un nlocuitor )os)olipidic.
Amestecul celor 3 reactivi la care se adaug Ca$? generea! n timp GHa.
:a o plasm normal (substrat) se adaug cantiti din acest amestec la intervale di)erite (". $. 3#
&. ' minute)# obinnduse scderea timpului n care se produce coagularea ( de la apro1imativ
30/0L la l minut# la "0"'L la ' minute).
>ac +P+ este anormal (valori prelungite la 3' minute) adaosul de reactivi cunoscui ca
normali la amestecul iniial poate s oriente!e asupra )actorului de)icitar. Ast)el# dac in
pre!ena unui timp EuicF normal +P+ se corectea! numai cu ser. de)icitul este probabil de G7H(
dac se corectea! cu plasm# de)icitul este deG8777. +P+ este uti l n diagnosticul di)erenial al
.emo)iliilor A i @.
+P+ este rar utili!at la ora actual# )iind destul de laborios i o)erind doar i ndicii calitative.
Timpul $t+pven
%ste un timp de recalci)iere a plasmei n pre!enta unei cantiti optimale de reactiv
StQpven (tromboplastin parial obinut din venin de viper 2ussel) capabil s active!e
GH n absena G877 i a plac.etelor.
2eactivi
:plasm bogat n trombocite 0." ml:
reactiv StQpven l 6"0000 0." ml(
CaCl$ 0.lml.
Valori-interpretare: 2eactivul StQpven ne)iind standardi!at se va tatona o diluie care
s dea un timp de circa "' L pn la "3L cu plasma normal. Alungirea timpului StQpven
apare in de)icienele de G7. 77# 8 i H.
+impul StQpven permite di)erenierea ntre G877 si GH: in de)iciena de proconvertin.
timpul StQpven este normal# iar n de)iciena de G Stuart -roDer. este alungi t.
>eoarece tromboplastin StQpven are nevoie i de plac.ete# timpul StQpven este alungit i n
trombocitopenii i trombopatii# prin scderea Gp3 sau prin eliberarea sc!ut a Gp3. 7n
trombocito!e i stan evolund cu .iperlipidemie. timpul StQpven este mult scurtat.
Explorarea cii extrinseci a coagulrii
Timpul de protrombin ,uic-
+impul de protrombin EuicF e1plorea! n mod global comple1ul protrombinic. >ac
timpul de protrombin EuicF este normal# toi )actorii comple1ului sunt n concentraie
normal. >ac timpul EuicF este de)icitar. Se )ac determinri di)ereniate ale )actorilor
comple1ului protrombinic (G77. 8# 877. H) pentru preci!area diagnosticului.
-rincipalul su inconvenient const n marea variabilitate a re!ultatelor n )uncie de
reactivul )olosit (activitatea tromboplastinei).
-rincipiu( 7n pre!ena tromboplastnei tisulare i a cloruriii de calciu# plasma normal se
coagulea! ntrun timp )oarte scurt# de "0 secunde# ocolind prima )a! a coagulrii.
2eactivi: citrat de sodiu 3#3Bo(
tromboplastin (l )iol de tromboplastin pulbere se di!olv n $ ml ser )i!iologic. Se
tine l or la baie de ap la 37
,
C# agitnduse puternic din "0 n "0 min.).
clorur de calciu 5 &0.
+e.nica de lucru: Sngele recoltat pe citrat de sodiu se centri)ug.ea! la "$00 turaii min.
+oi reactivii i plasma decantat sunt inui n baie de ap la 37;
<
C.
7ntro eprubet se introduc: 0. l ml plasm( 0.$ ml tromboplastin calcic.
>in momentul adugrii tromboplastinei calcice. se cronometrea! timpul. Se )ace o prim
citire la ' secunde# a doua la "0 secunde# scond eprubet din ap si ncRinndo in aa
)el nct coninutul s se preling uor pe peretele sticlei. Se oprete cronometrul cnd
se constau apariia c.eagului. -rima determinare este de orientare: se )ac $3 determinri
care permit estimarea e1act a timpului de protrombin EuicF.
.alori normale: +impul de protrombin EuicF al unei plasme normale este m
)unce de activitatea tromboplastinei. Se admite pentru lucru o tromboplastin care d un
timp de protrombin ntre "0 i "3 secunde. Acest timp re)lect variaiile tuturor
)actorilor comple1ului protrombimc. -rin adaosul tromboplastinei tisulare in reacie
timpul EuicF ocolete prima )a! a coagulrii. =rice de)icien care interesea! )actorii
primei )a!e a coagulrii nu poate )i decelat de aceast prob. Ast)el# n .emo)ilie i n
a)eciunile trombocitare. acest test este normal# el e1plornd coagularea e1trinsec.
%1primarea valorilor timpului de protrombin EuicF se poate )ace n:
secunde : "0"3 sec:
indice de protrombin M raportul ntre timpul probei martor si timpul probei de
lucru# nmulit cu "00: indicele de protrombin este o ci)r relativ. convenional care
nu red )idel adevratele variaii (n practic )iind prsit e1primarea n indice)(
e1primarea re!ultatelor n procente )a de normal repre!int singura metod
care d o imagine real asupra variaiilor.
-entru e1primarea re!ultatelor n procente se construiete o curb de diluii
succesive ale unei plasme normale diluat din "0 n "0 ("00. /0. 30. 70. K0. '0. &0. 30. $0.
"04 plasm): dilutiile se )ac n soluie de )ibrinogen 34 sau in plasm adsorbit. Se
determin apoi timpul de protrombin EuicF pentru )iecare diluie de plasm: se notea!
timpul care corespunde )iecrei diluii i se trasea! o curb
>ac pentru plasma normal nediluat se obine# de e1emplu# un timp de "$ sec.
acest timp repre!int un procent de "004 protrombin. -entru un timp dublu# de $& secunde
curba arat un procent de protrombin ntre $0 304( restul timpilor dau procente
intermediare. Aceast curb rmne valabil numai pentru o tromboplastin;: care cu plasma
normal nediluat d "$ sec. Sc.imbarea activitii tromboplastinei necesit construirea
altei curbe.
-entru determinarea procentului de protrombin al plasmei bolnavului termin
timpul de protrombin EuicF al plasmei de bolnav# timpul raportea! pe curba de diluie.
iar punctul corespun!tor de pe curb arat procentul n protrombin al plasmei bolnavului.
Alungirea timpului EuicF poate apare n: insu)iciena .epatic# C7> cu )ibrinoli!
secundar# sindrom )ibrnolitic primar# tratamente cu antivitamine F# icter mecanic. nounscut#
sindromul de malabsorbie. .ipo)ibrinogenemie. administrarea de anticoagulante
(antivitamine F# .eparin)# apariia de anticoagulani n stri patologice (antitrombine.
antitromboplastine. antiGH). erori de te.nic.