IMUNOLOGIA

IMUNOLOGIA
TRANSPLANTULUI
TRANSPLANTULUI
ILEANA CONSTANTINESCU ILEANA CONSTANTINESCU
EDITURA UMF CAROL DAVILA EDITURA UMF CAROL DAVILA
1
2009 2009
2
PREFA
Atunci cnd m gndesc la o boal,
nu caut niciodat un leac pentru aceasta,
ci un miljoc de a o preveni.
LOUIS PASTEUR
Imunologia transplantului este o specialitate nou care i croiete
drumul ntre specialiti prin frumuseea abordrii noilor tehnologii de
biologie molecular, prin semnifcaia rezultatelor i impactul acestora
asupra deznodmntului transplantului.
Att genotiparea alelelor HLA ct i detecia i identifcarea
anticorpilor citotoxici sunt inestigaii imunologice de transplant care au
neoie de o interpretare extrem de laborioas, iar expertiza imunologului
este extrem de important n transplantul renal, medular, cardiac,
hepatic, pulmonar, pancreatic, etc.
Alturi de inestigaiile imunologice pretransplant sunt foarte
importante i ealurile posttransplant care urmresc posibila apariie a
re!etului subclinic, apariia neoplaziilor sau a altor complicaii
imunologice legate de regimurile imunosupresoare practicate, care sunt
decisie n ceea ce priete eoluia pacienilor transplantai.
"entrul de Imunogenetic i #irusologie, $undeni, a fost nfnat n
anul %&&& i are ca domeniu de actiitate imunologia transplantului,
imunologia tumoral, diagnosticul irusologic. Acest centru, este centru
de referin metodologic n imunologia transplantului pentru 'omnia din
anul %&&(, n acelai an obinnd i acreditarea cu $ederaia )uropean
de Imunogenetic *)$I+. ,eria acreditrilor a fost completat de
acreditarea I,- realizat n anul %&&.. /rin intermediul acestui centru, s0
au organizat numeroase 1or2shop0uri interne i internaionale,
simpozioane, cursuri pentru toate centrele de imunogenetic din ar i
pentru comunitatea de transplant din )uropa.
/rin realizrile profesionale, centrul nostru, care este i primul
centru de biologie molecular n diagnosticul imunologiei de transplant
din 'omnia, are o actiitate deosebit de susinut pe toate tipurile de
3
transplant care se efectueaz la noi n ar, monitoriznd anual peste
3&&& de pacieni care au efectuat un transplant.
Aem sperana c aceast monografe a f util tuturor rezidenilor
care doresc s aprofundeze aspectele imunologiei de transplant, de
cercetare sau de practic clinic n domeniul transplantologiei i s
reprezinte o lucrare de referin pentru colegii notrii imunologi din
ntreaga ar.
Octombrie, 2009
Conf. r. I!e"n" Con#t"ntine#c$
%ef$! Centr$!$i &e Im$no'enetic( i )ir$#o!o'ie, In#tit$t$! C!inic
F$n&eni
irector$! e*"rt"ment$!$i &e +r"nt$ri i Cercet"re tiini,c(,
U-F C"ro! ".i!"
4
CUPRINS CUPRINS
COMPLEXUL MAJOR DE
HISTOCOMPATIBILITATE....................................................................................
.9
ORGANIZAREA GENELOR ANTIGENELOR LEUCOCITARE UMANE (HLA)
N COMPLEXUL MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE (MHC)
..9
STRUCTURA MOLECULELOR
HLA
.13
STRUCTURA MOLECULELOR HLA DE CLASA
I13
STRUCTURA MOLECULELOR HLA DE CLASA A II-
A.14
EMERGENA DE NOI
ALELE
1!
LIN"AGE DISE#UILIBRIUM (LEG$TUR$ DEZECHILIBRAT$)
.1%
GENETICA
HLA
..1&
5
SEMNI'ICAIE
CLINIC$
...1&
METODE SEROLOGICE DE TIPIZARE
HLA
1(
TIPIZAREA HLA PRIN TESTUL DE
LIM'OCITOTOXICITATE.19
IZOLAREA
CELULELOR
.)*
PROTOCOL DE LUCRU PENTRU TESTUL LIM'OCITOTOXICIT$II DEPENDENTE DE
COMPLEMENT)1
+ARIABILITATEA REZULTATELOR DE TIPIZARE HLA
SEROLOGICE.))
TIPIZAREA HLA PRIN METODE DE BIOLOGIE
MOLECULAR$)3
INTRODUCERE
.)3
PRINCIPIILE METODELOR MOLECULARE DE LUCRU N
HISTOCOMPATIBILITATE..)!
AMPLI'ICAREA
GENELOR
..)%
GENOTIPAREA HLA
SSOP
)&
GENOTIPAREA HLA
SSP
)(
TIPIZAREA HLA BAZAT$ PE SEC+ENIERE (SBT)
3*
TEHNOLOGIA
MICROARRA,
3)
LIMITELE METODELOR DE BIOLOGIE
MOLECULAR$..34
E+ALUAREA ACURATEEI METODELOR DE TIPIZARE
HLA34
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ N TRANSPLANTUL
RENAL..........................................................................3!
STATUSUL CURENT AL TRANSPLANTULUI
RENAL...3!
'ACTORI DETERMINANI AI E+OLUIEI PE TERMEN
LUNG3%
6
E+ALUAREA ANTICORPILOR
CITOTOXICI
39
SCREENING-UL ANTICORPILOR CITOTOXICI PRIN METODA LIM'OCITOTOXICIT$TII
DEPENDENTE DE COMPLEMENT.39
SCREENING-UL ANTICORPILOR CITOTOXICI PRIN METODA
ELISA..39
IDENTI'ICAREA ANTICORPILOR CITOTOXICI PRIN METODA ELISA
.41
SCREENING-UL ANTICORPILOR CITOTOXICI PRIN METODA
LUMINEX.43
TESTUL
CROSSMATCH
..44
TESTUL CROSSMATCH PRIN METODA
LIM'OCITOTOXICIT$II4!
TESTUL CROSSMATCH PENTRU CELULA
T4!
TESTUL CROSSMATCH PENTRU CELULA
B4%
CROSSMATCH PRIN TEHNICA ELISA PENTRU CELULA T -I
B.4&
CROSSMATCH PRIN METODA
'LO.CITOMETRIEI.49
CROSSMATCHING PRIN TEHNOLOGIA
LUMINEX...............................................................................................................!*
CROSSMATCH-UL PENTRU
AUTOANTICORPI
!1
ALGORITMUL E+ALU$RII IMUNOLOGICE N TRANSPLANTUL RENAL CU DONATOR
+IU.!1
ALGORITMUL E+ALU$RII IMUNOLOGICE N TRANSPLANTUL RENAL CU DONATOR
CADA+RU..!)
E'ECTUL SURSEI DONATORULUI ASUPRA SUPRA+IEUIRII
ALOGRE'EI.............................................................................!!
MATCHING-UL IMUNOLOGIC/ CONCEPTUL DE MATCHING N TRANSPLANTUL
RENAL!&
TRANSPLANTURILE RENALE ABO
INCOMPATIBILE..!(
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ N TRANSPLANTUL
HEPATIC.......................................................................%)
COMPATIBILITATEA DONATOR 0 PRIMITOR N TRANSPLANTUL
HEPATIC.%4
7
BOALA ACUT$ DE GRE'$ CONTRA GAZD$ (G+HD) N TRANSPLANTUL
HEPATIC..%!
MONITORIZAREA PACIENTULUI POSTTRANSPLANT
HEPATIC.%%
E+ALUARE
IMUNOLOGIC$
%&
E+ALUAREA
+IRUSOLOGIC$
%&
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ N TRANSPLANTUL
MEDULAR......................................................................&3
STABILIREA COMPATIBILIT$II
HLA..&
3
SELEC1IA DONATORULUI
NRUDIT
..&4
SELECIA DONATORULUI
NENRUDIT
..&4
SELECTIA DONATORULUI DIN BANCA DE S2NGE DIN CORDONUL
OMBILICAL..&%
APRECIEREA PROBABILIT$1II DE A G$SI UN DONATOR
NENRUDIT&%
GENELE "IR 3I TRANSPLANTUL DE CELULE STEM
HEMATOPOETICE..&&
IMUNOGENETICA NON-HLA 3I TRANSPLANTUL DE CELULE STEM
HEMATOPOETICE&9
POLIMOR'ISMUL GENELOR
CITO"INELOR
&9
ANTIGENELE MINORE DE
HISTOCOMPATIBILITATE
.(*
INCOMPATIBILITATEA ABO 3I SUPORTUL
TRANS'UZIONAL(*
RECONSTITUIREA SISTEMULUI IMUN DUP$ TRANSPLANTUL DE CELULE STEM
HEMATOPOETICE.(1
GLOSAR DE TERMENI - IMUNOLOGIA
TRANSPLANTULUI(!
IMUNOLOGIA TUMORAL$ A NEOPLAZIILOR
POSTTRANSPLANT...............................................................9)
INTRODUCERE
.9)
8
ONCOGENE -I
CANCER.........................................................................................................................................
...........................9%
BAZA MOLECULAR$ A CANCERCINOGENEZEI N MAI MULTE
TREPTE.................................................................................................9%
BIOLOGIA CRE-TERII
TUMORALE
..9(
MECANISMELE IN+AZIEI -I
METASTAZ$RII
.99
MECANISME E'ECTOARE ANTI-
TUMORALE.1*
1
IMUNOSUPRA+EGHEREA
.1*3
A456784898 5:;<=>98 :;>48 =8?:4<@?:58 A8 ?89:9898
T..........................................................................1*4
ANTIGENE TUMORALE
COMUNE............................................................................................................................
........1*%
ANTIGENE DE
DI'ERENIERE....................................................................................................................
......................1*(
PROTEINE
MUTANTE...........................................................................................................................
........................1*9
PROTEINE
SUPRAEXPRIMATE..............................................................................................................
..........................11*
PRODUSE GENICE NORMALE
SUBGLICOZILATE..............................................................................................................1
11
ANTIGENE
+IRALE..............................................................................................................................
..........................113
CONCEPTE
EMERGENTE...................................................................................................................................
............................B.113
IDENTI'ICAREA ANTIGENELOR TUMORALE
UMANE.......................................................................................................................113
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL
CANCERULUI................................................................................11&
MAR"ERI TUMORALI 0 APLICAII
CLINICE...................................................................................................................................11&
ANALIZA STATISTIC$ A DATELOR DE MONITORIZARE
IMUNOLOGIC$...........................................................................................1))
9
ROLUL IMUNOLOGULUI N MONITORIZAREA ANTITUMORAL$ A STUDIILOR
CLINICE....................................................1))
RECOMAND$RI PENTRU MANAGEMENTUL MAR"ERILOR
TUMORALI............................................................................................1)3
METODE DE LUCRU UTILIZATE N IMUNOLOGIA
TUMORAL$...................................................................1)9
TESTE
IMUNOENZIMATICE.........................................................................................................................
...................................1)9
TESTE DE BIOLOGIE MOLECULAR$ N DIAGNOSTICUL IMUNOLOGIC
TUMORAL..131
+ACCINURI N
CANCER
.14*
IMUNIZAREA
GENETIC$......................................................................................................................................
..........................144
MONITORIZAREA TERAPIILOR IMUNOLOGICE N
CANCER................................................................................................................14!
CONTROLUL DE CALITATE N MONITORIZAREA
IMUNOLOGIC$.........................................................................................14%
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A NEOPLAZIILOR APARATULUI RENAL - POSTTRANSPLANT
RENAL14(
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A TUMORILOR RENALE
PARANCHIMATOASE14(
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A TUMORILOR +EZICII
URINARE.1!3
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A ADENOCARCINOMULUI DE
PROSTAT$..1%%
GHID PRACTIC PRI+IND SELECIA TESTELOR IMUNOLOGICE PENTRU
MONITORIZARE N CANCERUL UROLOGIC POSTTRANSPLANT
RENAL.1&%
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A DI'ERITELOR TIPURI DE CANCER -
POSTTRANSPLANT HEPATIC.1()
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A DI'ERITELOR TIPURI DE CANCER -
POSTTRANSPLANT CARDIAC1(4
E+ALUAREA IMUNOLOGIC$ A DI'ERITELOR TIPURI DE CANCER
POSTTRANSPLANT MEDULAR.1(!
CANCERUL N +IITOR/ DIAGNOSTICUL MOLECULAR -I
PROGNOSTICUL.1(%
GLOSAR DE TERMENI - IMUNOLOGIA
TUMORAL$..1(&
10
COMPLEXUL MAJOR DE COMPLEXUL MAJOR DE
HISTOCOMPATIBILITATE HISTOCOMPATIBILITATE
Ileana Consan!nes"#
Organizarea genelor antigenelor leucocitare umane (HLA)
11
n complexul major de histocompatibilitate (MHC)
Complexul HLA ocup un segment de 1,5-2 centiMorgani
pe braul scurt al cromozomului !i conine gene care codi"c
moleculele de #istocompatibilitate de clasa $, a%&nd 2'''
(ilobaze )HLA*A, HLA*+, HLA*C,, moleculele de
#istocompatibilitate de clasa $$, de aproximati% 1''' (ilobaze
)HLA*-.+1, HLA*-/+1, HLA*-/A1, HLA*-0+1,, moleculele
de clasa a treia, de aproximati% 1''' (ilobaze )C2, C1, 2actorul
+, citocromul 0-15', 21-#idroxilaza, 3245
6enele care codi"c aloantigenele HLA de clasa $ !i clasa
a $$-a sunt apropiate unele 2a de altele la ni%elul braului
scurt al cromozomului uman 5 Aceast parte a genomului
constituie sistemul ma7or de #istocompatibilitate )MHC, !i este
denumit complexul HLA 31,2845
Moleculele HLA de clasa $ sunt exprimate la ni%elul
tuturor celulelor nucleate !i al plcuelor sanguine, pe c&nd
moleculele HLA de clasa a $$-a se gsesc la ni%elul celulelor
prezentatoare de antigen, cum sunt celulele dendritice,
lim2ocitele + !i macro2agele 39'45 .olul 2undamental al
moleculelor de clasa $ !i clasa a $$-a este de a se lega la peptide
proprii !i peptide non-proprii, pe care apoi le transport la
membrana plasmatic a celulelor pentru 2enomenul de
recunoa!tere de ctre receptorul pentru antigen al celulei :
31545
Ast2el, prezentarea peptidelor %irale !i bacteriene de ctre
moleculele de clasa $ !i clasa a $$-a antigenelor receptorilor
pentru antigen ai celulelor :, conduce la un rspuns imun5
Moleculele HLA de clasa $ leag peptide 2ormate din 8 -
1' aminoacizi, peptide ce rezult din degradarea proteosomic
a proteinelor citoplasmatice !i prezint aceste peptide
lim2ocitelor : citotoxice, C-8
;
5 Ast2el, moleculele de clasa $
sunt primele care alerteaz celulele : 2a de celulele in2ectate
%iral5
Moleculele HLA de clasa a $$-a leag peptide 2ormate din
19-25 de aminoacizi, care rezult din degradarea endosomal a
12
proteinelor exogene !i endogene !i prezint aceste peptide
lim2ocitelor : helper, C-1
;
5 Moleculele de clasa a $$-a 7oac un
rol important <n stimularea rspunsului imun 2a de organisme
cum sunt bacteriile piogene5 Acti%area celulelor : C-8
;
!i
C-1
;
prin aceste dou ci duce la di%iziune celular !i
di2ereniere, rezult&nd un rspuns imun celular !i respecti%
umoral 31545
Complexul HLA conine aproximati% 15'''5''' de perec#i
de baze de A-= !i este de dimensiune comparabil cu genomul
bacteriei )scherichia coli5 >n interiorul complexului HLA se
disting trei regiuni )?ig51,5
F!$%&% Ha'a s!()l!*"a+ a "o()le,#l#! HLA%
G'#)a'ea "o()le,#l#! HLA -n 'e$!#n!le .e "lasa I/ a II0a 1! a III0a%
n regiunile de clasa I i a II-a sunt redate poziiile relative ale genelor
codificnd izotipurile funcionale ale HLA clasa I i clasa a II-a. La
nivelul regiunii clasei a III-a se observ poziia relativ a genelor care
codific componentele complementului !" # i factorul $. %oate
aceste trei regiuni conin i alte gene.
>n apropierea centromerului cromozomului , exist
regiunea clasei a $$-a care conine genele de clasa a $$-a@ pe
c&nd <n apropierea telomerului, braului scurt al cromozomului
, exist regiunea clasei $ care conine genele de clasa $ 32145
13
>ntre regiunile clasei $ !i a $$-a este situat regiunea clasei
a $$$-a5 Aceast regiune conine o %arietate de proteine di2erite
care codi"c componentele complementului C1, C2 !i
?AC:A.BL +5 At&t regiunea clasei $ c&t !i regiunea clasei a $$-
a conin !i alte gene dec&t cele ale clasei $ sau clasei a $$-a
care sunt ne<nrudite structural cu acestea5
6enele care dau denumirea o"cial a HLA sunt cele din
interiorul complexului HLA care codi"c aloantigenele de clasa
$ !i clasa a $$-a, gene !i pseudogene5
0rincipalele gene de clasa $ codi"c lanurile grele
denumite !i lanurile al2a ale celor 2orme de clasa $ , HLA-A,
-+, -C, -C, -? !i -65 >n completare mai exist !i HLA-H, -D, -E !i -L
care sunt pseudogene ne2uncionale str&ns <nrudite din punct
de %edere al sec%enei nucleotidice cu genele 2uncionale de
clasa $ )?ig52,
F!$%2% Ha'a 'e$!#n!! HLA "lasa I%
Aceast figur ilustreaz genele HLA-H" -&" -' i -L care sunt gene
complete de clasa I nee(primate" respectiv pseudogene. )amilia de
gene *I conine + gene ,ntre care genele *IA i *I$ sunt
e(primate" iar *I" *I- i *I. sunt pseudogene. /enele
nedenumite 0barele verticale scurte1 sunt fragmente de gene de clasa I.
H). este o gen funcional" asemntoare clasei I" la 2# *b
telomeric de HLA-). n completarea genelor cunoscute din aceast
figur mai e(ist ,nc 2+3 de gene care sunt rspndite printre genele
clasei I i care nu sunt ,nrudite structural cu acestea. n populaia
uman toi cromozomii 4 poart cele 4 gene HLA de clasa I. n
contrast cu acest fapt" anumii cromozomi 4 au deleii de 2+3 5b ,n
regiunea clasei I care include i pseudogena HLA-H 6!78.
14
6ena care codi"c F
2
microglobulina, lanul u!or al
moleculelor HLA de clasa $, nu este situat <n complexul HLA ci
pe cromozomul uman 155 -in cauza acestei localizri
cromozomiale gena F
2
microglobulinei nu are o denumire <n
nomenclatura HLA5
Moleculele HLA de clasa a $$-a sunt #eterodimeri compu!i
din lanuri G !i F de dimensiuni similare5 Cxist 5 izotipuri ale
proteinelor HLA de clasa a $$-a care sunt denumite HLA--M,
--A, --0, --/ !i --.5
6enele pentru lanurile G !i F sunt localizate <n regiunea
HLA de clasa a $$-a !i cele mai multe dintre acestea sunt
organizate <n perec#i de lanuri G !i F genice care contribuie la
acela!i izotip )?ig59,5
F!$%2% Ha'a 'e$!#n!! HLA .e "lasa a II0a
Hunt ilustrate 9 tipuri de categorii de geneI gene care
codi"c lanurile !i ale moleculelor HLA de clasa a
$$-a, pseudogene <nrudite cu genele lanurilor !i !i
genele care codi"c alte 2uncii implicate <n procesarea
!i prezentarea antigenelor de ctre HLA de clasa $5 -e
asemenea, sunt menionate genele LM02 !i LM0J care
codi"c subuniti ale proteozomei, genele :A01 !i
:A02 care codi"c un peptid transportor !i gena
tapasinei care 2aciliteaz eliberarea peptidelor din :A0
la ni%elul moleculelor de clasa $5
15
6enele care codi"c lanurile G sunt denumite A )-MA
!i -AA, iar genele ce codi"c lanurile genelor F sunt
denumite + )-M+ !i -A+,5 Aceste gene care codi"c HLA--/
G !i F sunt HLA--/A1 !i respecti% HLA--/+15 0artea din
regiunea HLA de clasa $$ care codi"c moleculele HLA--. este
mai complicat deoarece are c&te%a gene 2uncionale de lan F
precum !i pseudogene, numrul lor %ariind <ntre di2erii
cromozomi 32145 -i2eritele aran7amente pentru genele
lanului F sunt denumite #aplotipuri -.+5
Structura moleculelor HLA
S'#"#'a (ole"#lelo' HLA .e "lasa I
Moleculele HLA de clasa $ conin "ecare o copie a dou
polipeptide !i anumeI un lan greu, glicoprotein de K15(-a
care este ancorat la membran, !i un lan u!or, solubil <n ap,
de 12(-a )?ig51,5
F!$%3% S'#"#'a s"4e(a!"+ a (ole"#le! HLA .e "lasa I%
/enele care codific lanurile grele HLA de clasa I au o structur
caracteristic ,n care diferite domenii proteice sunt codificate de e(oni
separai.
>n total, exonii genelor lanurilor grele de clasa $ conin
1'8L-11'1 nucleotide )incluz&nd codonul terminator, !i
codi"c lanuri grele de 92-9 reziduri de aminoacizi5 )?ig55,
16
F!$%5% O'$an!6a'ea e,on0!n'on a #ne! $ene HLA .e
"lasa I%
La ni%elul lanului greu de clasa $, "ecare domeniu
proteic este codi"cat de exoni di2erii5 L codi"c
sec%ena conductoare, :M codi"c regiunea trans-
membranar, CM: codi"c coada citoplasmatic !i 9NB:
este regiunea 9N netradus5 -i2erene mici <n lungimea
lanurilor grele de clasa $ din di2erite alele sau locusuri,
pro%in din inserii !i deleii <n regiunea
transmembranar !i din modi"cri de lungime ale cozii
citoplasmatice datorit plasrii di2ereniale a codonului
terminator <n interiorul exonilor , J sau 85
0olimor"smul antigenic al moleculelor HLA-A, + !i C este
datorat di2erenelor <n sec%enele de aminoacizi ale lanulului
greu al HLA de clasa $5 Cele mai multe dintre aceste di2erene
apar prin substituii nucleotidice la ni%elul exonilor 2 !i 95
6enele lanului greu al HLA- A, + !i C sunt 2oarte polimor2e <n
contrast cu genele lanului greu al HLA-C !i 6, ce dez%olt un
polimor"sm limitat denumit oligomor"sm5 0entru HLA-?, o
singur alel este recunoscut <n prezent !i de aceea gena este
considerat a " monomor25
S'#"#'a (ole"#lelo' HLA .e "lasa a II0a
Moleculele HLA de clasa a $$-a conin "ecare o copie a
unui lant G !i F, am&ndou "ind ancorate la membran )?ig5,5
17
F!$%7% S'#"#'a s"4e(a!"+ a (ole"#lelo' HLA .e "lasa II%
Lanurile !i prezint "ecare dou domenii
extracelulare, o regiune trans-membranar !i o coad
citoplasmatic5 -omeniile extracelulare ale lanului
sunt
1
!i
2
iar cele ale lanului sunt
1
!i
2
5
Lanurile au 99-95 (-a, iar lanurile au 2-28 (-a,
di2erenele <n dimensiuni dator&ndu-se <n principal glicozilrii5
Arganizarea exon * intron a genelor de clasa a $$-a este
asemntoare genelor de clasa $, ast2el exonii codi"c domenii
separate ale proteinelor 32L45
6enele lanurilor !i au structur similar <n care
exonul 1 codi"c peptidul conductor !i exonii 2 !i 9 codi"c
cele dou domenii extracelulare5
La ni%elul genelor lanului exonul 1 codi"c domeniul
transmembranar !i exonul 5 codi"c coada citoplasmatic5 0rin
contrast, la ni%elul genelor lanului , at&t regiunea
transmembranar c&t !i coada citoplasmatic sunt codi"cate
de exonul 1 )?ig5J,5
F!$%8% O'$an!6a'ea e,on !n'on a $enelo' "o.!*"9n. lan:#'!le ; 1! <
ale (ole"#lelo'
HLA .e "lasa a II0a%
18
Legend4 L - sec%ena conductoare@ :M - regiunea transmembranar@
CM: - coada citoplasmatic@ 9NB: - regiunea 9N netradus5
0olimor"smul moleculelor HLA de clasa a $$-a poate
deri%a at&t de la ni%elul lanurilor c&t !i de la ni%elul
lanurilor , dar acest lucru depinde de izo2orma clasei a $$-a5
0entru HLA--., lanul este monomor2 !i toate polimor"smele
deri% din genele lanurilor 5 Componentul cel mai polimor2 al
genelor de clasa a $$-a este HLA--.+1 pentru care sunt
de"nite 221 de alele 32145
0entru HLA--/ !i -0 at&t lanurile !i contribuie la
polimor"sm, iar genele corespunztoare sunt 2oarte polimor2e5
>n contrast, izo2ormele HLA--M !i HLA--A sunt puin
polimor2e5
E(e'$en:a .e no! alele
Micro%ariaii la ni%elul serotipurilor !i crearea de noi alele
care sunt c#imere a dou serotipuri distincte pot " 2enomene
relati% dinamice5
Alelele noi emerg cu o rat <nalt !i de%in "xate <n populaie, <n
teorie, dac au un a%anta7 selecti% <n prezentarea peptidelor
pro%enite de la organisme in2ecioase5
Alelele noi sunt generate ia mutaii puncti2orme,
recombinri !i e%enimente asemntoare con%ersiei genice 3945
19
F!$%9% No(en"la#'a s)e"!*"!+:!lo' HLA%
0re"xul HLA precede antigenele sau alelele pentru a
de"ni MHC-ul speciei5 -enumirile A, +, C, -. etc,
de"nesc locusul5 Acesta este urmat de un numr care
denot antigenul de"nit serologic sau un numr cu un
asterix care denot alela de"nit molecular5 >n anumite
cazuri, litera O este plasat <naintea antigenului
serologic indic&nd c este o denumire de lucru,
pro%izorie5
L!n=a$e D!se>#!l!?'!#( @Le$+#'+ .e6e"4!l!?'a+A
Abser%aia c alelele de la ni%elul di2eritelor locusuri
genetice exist <n populaie <n acela!i #aplotip, semni"cati%
mai 2rec%ent dec&t ar " a!teptat, se nume!te Lin2age
5ise6uilibrium. ?rec%ena estimat a dou alele )21, 22, a se
produce <mpreun este produsul 2rec%enei genei "ecrei alele
din populaia respecti% )32 a!teptat P 21 x 224, 31J45 ?rec%ena
obser%at este determinat din studii 2amiliale <n cadrul
acelea!i populaii5
Lin2age 5ise6uilibrium este un 2enomen tipic pentru
MHC uman !i se extinde de la HLA-A p&n la HLA--/5 Cel mai
cunoscut exemplu pentru acest 2enomen este #aplotipul din
populaia caucazian A1, COJ, +8, -.1J 314, -.52, -/2 care
este <nt&lnit aproximati% de 1 ori mai 2rec%ent dec&t este
estimat 31J45

enetica HLA
20
Bna din consecinele conglomeratului de gene HLA de la
ni%elul cromozomului este c cei mai muli indi%izi mo!tenesc
un set de alele HLA nerecombinat de la "ecare printe5 Aceste
gene sunt exprimate codominant5 Ast2el, dac tipurile HLA ale
membrilor 2amiliei sunt determinate, segregarea tipurilor HLA
<n interiorul 2amiliei poate " utilizat pentru construirea
tipurilor HLA din "ecare cromozom5 Se#l alelelo' HLA $+s!
)e #n "'o(o6o( ese .en#(! 4a)lo!)5 -eterminarea
#aplotipurilor este important pentru identi"carea persoanelor
<nrudite identice, deoarece purtarea de antigene din
#aplotipuri di2erite este 2rec%ent5
?iecare indi%id mo!tene!te dou #aplotipuri MHC de la
"ecare printe !i ast2el are dou alele pentru "ecare dintre
gene5 Aceste alele sunt exprimate codominant5 Mo!tenirea
genelor MHC urmeaz regulile segregrii ale lui 7endel5 >n
cadrul unei 2amilii, "ecare copil mo!tene!te un #aplotip MHC
de la mam !i unul de la tat 31J45 0rin con%enie, #aplotipurile
paternale sunt denumite a !i b !i cele maternale c !i d5 Ast2el,
exist patru genotipuri posibile MHC la ni%elul copiilorI ac, ad,
bc !i bd5 0robabilitatea de a exista oricare dintre cele patru
%ariante de genotipuri este de 1I1 31J45 >ntr-o 2amilie cu 5
copii, cel puin doi dintre copii %or " identici HLA
)presupun&nd ca nu exist 2enomen de crossing oer, )?ig58,5
F!$%B% Se$'e$a'ea alelelo' la n!Cel#l #n#! lo"#s $ene!"%
Se(n!*"a:!e "l!n!"+
21
Clementul c#eie, pentru transplantul renal de succes, este
reprezentat de abilitatea identi"crii corecte a potri%irii
#istocompatibilitii dintre primitori !i donatori !i de a <ncerca
un prognostic de 2uncionalitate, %indecare !i de %ia pentru
ace!ti pacieni a%&nd <n %edere posibilitatea apariiei
2enomenului de re7et )gazd ersus alogre2 renal, sau <n
cazul transplantului medular alogre2 ersus gazd,5
:ipizarea antigenelor leucocitare umane )HLA, 7oac un
rol important deoarece moleculele HLA sunt intele primare ale
rspunsurilor imune <n transplanturile alogenetice, sunt critice
pentru rspunsurile la stimuli antigenici !i sunt implicate <n
susceptibilitatea genetic 2a de anumite boli imune !i
autoimune5
Antigenele !i alelele complexului ma7or de
#istocompatibilitate sunt de"nite !i re%izuite de ctre
Arganizaia Modial a Hntii, care organizeaz periodic
mani2estri !tiini"ce prin care se asigur o abordare comun a
nomenclaturii !i tipizrii5 Cea mai bun potri%ire HLA dintre
toate %ariantele este potri%irea <ntre gemeni identici5
>n practic, acest lucru se <nt&mpl 2oarte rar !i marea
ma7oritate a transplantelor se e2ectueaz <ntre donatori
ne<nrudii !i receptori potri%ii din punct de %edere al
#istocompatibilitii5 Cste 2oarte clar c, at&t pentru
transplantul renal c&t !i pentru transplantul de mdu%, cu c&t
potri%irea este mai bun cu at&t alogre2a %a 2unciona <n
condiii bune iar complicaiile ulterioare %or " minore5 -ac
potri%irea este redus primitorul %a necesita cantiti
considerabile de imunosupresoare pentru a pre%eni re7etul
gre2ei5 Acest lucru conduce la riscul unor maligniti secundare
!i la apariia in2eciilor oportuniste5
Metode serologice de tipizare HLA
Metodele serologice 2urnizeaz 2oarte rapid !i simplu
rezultatele #isto-compatibilitii5 Aceste metode 2olosesc ser
22
care conine anticorpi 2a de antigenele HLA5 Anticorpii anti
HLA sunt 2oarte speci"ci pentru determinanii structurali
indi%iduali care caracterizeaz antigene di2erite ale sistemului
HLA5 Ast2el, c&nd serurile conin&nd anticorpi anti-HLA
sunt puse <n contact cu lim2ocite, anticorpii se leag numai de
antigenele speci"ce int5 C&nd complexul antigen - anticorp
este 2ormat pe supra2aa celulei <n prezena complementului,
acti%area complementului duce la liza celular5 Ast2el, moartea
celulei este un indicator de speci"citate comun a antigenului
!i a anticorpului !i este un rezultat al testului Qpoziti%R5
-etecia acestei speci"citi <ntre anticorp !i antigen
2urnizeaz rspunsul la c&te%a <ntrebri 2undamentale <n
testarea #istocompatibilitiiI
1. "are sunt antigenele HLA ale unei celule particulare8
"nd este cunoscut specifcitatea anticorpului *a9a cum
se ntmpl la reactiii de tipizare HLA+ 9i celula este de
fenotip necunoscut, rezultatul testului poziti cu anticorpi
specifci identifc antigenele celulei.
%. ,unt anticorpi anti HLA ntr0un ser particular8
C&nd un ser este testat pentru prezena anticorpilor anti-
HLA, un test poziti% indic acti%itate anti lim2ocitar <n ser5 -in
modelul de reacii poziti%e !i negati%e, cu un panel de celule
tipizate HLA, poate " gsit speci"citatea anticorpilor5 -ac
serul pacientului reacioneaz cu celulele donatorului, cei doi
indi%izi sunt incompatibili5 Ast2el, printr-un proces !e'a!C/ de
testare a serului !i tipizare a celulelor, antigenele HLA sunt
de"nite, panelul de lim2ocite tipizate este generat !i sunt
create coleciile de seruri tipizate anti-HLA de speci"citate
cunoscut5
T!)!6a'ea HLA )'!n es#l .e l!(Do"!oo,!"!ae
:ipizarea HLA serologic este realizat prin expunerea
celulelor necunoscute la o baterie de antiseruri de speci"citate
HLA cunoscut5 Herurile pentru tipizare sunt selectate pentru
23
a rezulta scoruri poziti%e puternice care s asigure
reproductibilitatea5 -ac celulele sunt omor&te, <n prezena
antiserului !i a complementului, celula se presupune a a%ea
acela!i antigen HLA ca !i speci"citatea anticorpului5
Bn ser ideal pentru tipizare HLA ar trebui s "e
monospeci"c, adic s aib speci"citate pentru un singur
antigen HLA5
:otu!i, <n realitate, aloanticorpii obser%ai <ntr-un singur
ser sunt <n general polispeci"ci5 Bn aloantiser poate conine
anticorpi 2a de multipli determinani de pe antigenul
imunizant5
Anumii determinani sunt clasici, adic, este %orba de
speci"citile HLA pri%ate care caracterizeaz "ecare tip HLA5
Ali determinani sunt publici, adic, sunt <mpriti la c&te%a
antigene care, <n mod colecti%, constituie antigene cross
reactante de grup cross0reacting antigen group )C.C6 group,5
Ma7oritatea antiserurilor HLA sunt seruri complexe obinute de
la 2emei multipare5 Lic#idul placentar s-a do%edit a " o surs
secundar %aloroas de aloantiseruri pentru tipizarea HLA5
Anticorpii anti-HLA sunt de asemenea gsii la pacieni expu!i
la antigene HLA prin trans2uzii de s&nge sau gre2e de organe5
:otu!i, aceste metode de obinere a antiserurilor HLA
sunt di"cile !i de aceea au 2ost elaborate metode care s
utilizeze anticorpi ne"xatori de complement !i care se bazeaz
numai pe legarea antigenului, cum este CL$HA sau citometria
<n Sux5
Muli anticorpi multiclonali reacioneaz cu mai mult de o
speci"citate HLA ceea ce arat existena de determinani
antigenici comuni la ni%elul moleculelor HLA5
Mai nou, 2olosirea metodelor moleculare de tipizare HLA
a crescut, ast2el c e2orturile prin metodele serologice au 2ost
reduse mult5
24
Bn numr 2oarte mic de laboratoare mai menin <nc
metodele serologice de tipizare HLA dar, !i <n aceste situaii,
acestea sunt completate obligatoriu de metodele de biologie
molecular pentru a rezol%a incertitudinile !i limitele metodei
serologice5
Izolarea celulelor
Lim2ocitele sunt tipul celular pre2erat pentru tipizarea
HLA serologic, screening-ul anticorpilor !i crossmatc#ing5 >n
mod tradiional, lim2ocitele sunt izolate din s&nge total
peri2eric prin separare <n gradient de densitate * c&nd
donatorul este %iu5 >n cazul donatorului cada%ru, lim2ocitele
sunt separate din splin sau ganglioni lim2atici5 Lucr&nd
aceast metod, trebuie o gri7 deosebit pentru a prepara o
suspensie celular de %iabilitate 2oarte bun !i care s nu
conin eritrocite !i trombocite5 :ipizarea HLA pentru clasa $$
de antigene HLA, HLA *-. !i -/ este per2ormat pe preparate
lim2ocitare <mbogite cu lim2ocite +5 0rocedurile de izolare
speciale, per2ormate, sunt necesare, deoarece aproximati% 8'T
din lim2ocitele din s&ngele peri2eric sunt celule : inacti%e care
nu conin antigene HLA de clasa a $$-a pe supra2aa lor5
$zolarea lim2ocitelor : !i + cu a7utorul bilelor magnetice
este <n prezent cea mai comun metod pentru tipizarea HLA
!i crossmatc#ing5 +ilele, cptu!ite cu anticorpi o2er
%ersatilitate, %itez a re%enirii celulare !i o bun puritate a
preparatului celular "nal5 +ilele peliculizate cu anti-C-2 sau
anti-C-8 sunt 2olosite pentru izolarea celulelor : !i anti-C-1L
pentru celulele +5 +ilele magnetice pot " 2olosite pentru
obinerea numrului adec%at de celule din s&ngele total, din
di2erite tampoane sau din preparate de lim2ocite din s&ngele
peri2eric5
Celulele legate de aceste bile de%in mai sensibile ca inte
posibil datorit modi"crii membranelor celulare !i ast2el
25
testele necesit o perioad de incubare mai redus ca timp,
2a de metodele standard de citotoxicitate5
Protocol de lucru pentru testul limfocitotoxicitii dependente de complement
Antiseruri HLA indi%iduale sunt dispensate c&te 1 UL <n
godeuri microtest, de speci"citate desemnat, <n plcue de
plastic compuse din ' sau J2 de godeuri a%&nd capacitatea de
15UL5 Bn model de seruri anti HLA este ales cu speci"citi
care acoper toate posibilitile %ariantelor de tipuri HLA5 >n
general, "ecare tip este reprezentat de cel putin doua
antiseruri5 Astzi, laboratoarele obin plcue de tipizare
congelate, comerciale, gata de 2olosit5
0entru tipizarea HLA, serurile dintr-o plcu de testare
sunt dezg#eate !i aproximati% 2''' de lim2ocite sunt
dispensate <n godeu5 Apoi plcua este incubat 9' de minute
la temperatura camerei pentru a permite anticorpilor anti-HLA
a se lega la antigenele lor HLA int speci"ce5 Complementul
)5 UL, este adugat <n general ca ser de iepure !i plcua este
incubat timp de ' de minute5 :estul de citotoxicitate
dependent de complement pentru tipizarea HLA--. !i -/
este per2ormat cu seruri corespunztoare de tipizare de clasa
a$$-a, numai c metoda este modi"cat pentru celule +I iniial
are loc incubarea celulelor, iar serul este <nclzit la 9J
'
C sau
22
'
C pentru ' de minute@ dup adugarea complementului,
amestecul este incubat timp de 12' de minute la temperatura
camerei5 Cre!terea temperaturii este 2olosit pentru a e%ita
reaciile 2als poziti%e care pot rezulta din legarea anticorpilor
nespeci"ci, reacti%i la rece5 C&nd se utilizeaz pentru tipizarea
clasei a $$-a bile imunoabsorbante, timpii de incubare sunt <n
general redu!i cu aproximati% 7umtate, posibil din cauza
slbirii membranei celulare datorit ata!rii bilelor5
0entru a %izualiza celulele moarte !i %ii este adugat un
colorant, eozina M urmat de 2ormalin pentru a "xa reacia,
apoi se utilizeaz microscopul cu contrast de 2az5 Celulele %ii
26
exclud colorantul !i apar luminoase !i re2ractante, iar celule
moarte conin colorant !i sunt u!or mrite de %olum !i
<ntunecate5 Cxist o metod alternati% de %izualizare care
2olose!te Suorocromi, cum este Suoresceina diacetat )%erde,,
<nainte de dispensarea <n plcu5 C&nd celulele sunt omor&te
testul este poziti%, iar Suoresceina curge a2ar !i celulele
QdisparR5 .ezultatele poziti%e sunt comparate cu un godeu
negati%, unde toate celulele sunt %iabile5 He poate aduga un al
doilea Suorocrom de culoare contrastant, cum este ethidium
bromide )ro!u,, pentru a %izualiza celulele moarte5
?iecare godeu este scori"cat indi%idual prin inspecie,
not&nd procentul celulelor moarte per godeu5 :estul este clar
poziti% c&nd cel puin 7umatate din celule sunt moarte5 :ipa7ul
HLA rezult prin interpretarea modelului de reacti%itate al
unor seruri indi%iduale !i a speci"citii lor5 >n 2enotiparea unui
indi%id pentru HLA clasa a $-a se a!teapt s se gseasc
modele de rezultate cu dou antigene pentru, "ecare din
locusurile A, + !i C5 C&nd numai un singur antigen este
identi"cat <ntr-un locus, indi%idul poate " #omozigot pentru
acel tip de antigen sau, laboratorul a e!uat <n a identi"ca cel
de-al doilea antigen deoarece serurile pot s nu conin
anticorpi pentru epitopii prezeni pe celulele int sau e,!s+ o
e,)'!(a'e 'e.#s+ a (ole"#lelo' HLA pe lim2ocitele testate5
Va'!a?!l!aea 'e6#laelo' .e !)!6a'e HLA se'olo$!"e
Herurile de tipizare HLA nu sunt uni2orme deoarece
complexitatea polimor"smului HLA 2ace imposibil crearea un
reacti% standard pentru "ecare speci"citate5 ?iecare laborator
de tipizare HLA are responsabilitatea de a obine antiserurile
adec%ate !i de a monitoriza per2ormana acestora, inclusi% a
produselor comerciale5
.ezultate obinute cu plcuele de tipizare ale
laboratorului pot " comparate cu acelea ale altor colecii de
seruri pentru con"rmarea unui anumit 2enotip HLA5 :oate
laboratoarele de tipizare HLA sunt controlate de ctre
inspectorii ?ederaiei Curopene de $munogenetic )C?$, sau de
27
ctre Hocietatea American pentru Histocompatibilitate !i
$munogenetic )AHH$,, pentru a %eri"ca calitatea reacti%ilor
serologici !i a reacti%ilor celulari 2olosii pentru testarea
clinic5
0rogramele de control de calitate naionale !i
internaionale sunt disponibile pentru tipizare, crossmatching
!i anticorpi citotoxici, iar per2ormana satis2ctoare este
obligatorie pentru acreditarea C?$ !iVsau AHH$ a laboratorului5
A a doua %ariabil a tipizrii HLA serologice este
complementul seric, un reacti% disponibil comercial care
cumuleaz practic serurile de la c&te%a sute de iepuri5 Herul de
iepure conine anticorpi #etero"li cu acti%itate lim2ocitar
antiuman care <i mre!te e"ciena <n testele de citotoxicitate5
Hupraabundena acestor anticorpi antiumani 2ace ca !i
complementul s "e citotoxic !i ast2el se produc rezultate 2als
poziti%e5 ?iecare laborator trebuie s <!i %eri"ce sursa de
complement pentru a gsi %arianta care promo%eaz reacii
citotoxice intense 2r a produce toxicitate nespeci"c5
-eoarece nu exist o surs standard de complement, acela!i
ser testat <n di2erite laboratoare, are potenialul de a produce
rezultate discordante5
Alte %ariabile sunt metodele 2olosite pentru a %izualiza
celulele %ii !i moarte, timpii de incubare !i de"nirea terminrii
perioadei de lucru a testului, precum !i interpretarea
rezultatelor5
!ipizarea HLA prin metode de biologie molecular"
In'o.#"e'e
Hpeci"citile serologice au 2ost identi"cate prin modelul
de legare al anticorpilor <n testele serologice !i din acti%area
lim2ocitelor de ctre antigenele distincte ale complexului ma7or
28
de #istocompatibilitate )MHC, <n testul culturii mixte
lim2ocitare )MLC,5
Cu a7utorul clonrii genice !i a sec%enializrii A-=,
speci"citile antigenelor HLA sunt <n prezent cunoscute a
deri%a din di2erenele de sec%en localizate <n c&te%a regiuni
#iper%ariabile de la ni%elul moleculelor MHC5
Cele mai multe dintre di2erene au aprut din
e%enimentele de con%ersie intragenic !i intergenic care au
condus la polimor"smul complex care caracterizeaz sistemul
HLA5
La ni%elul genelor HLA de clasa a$$-a, regiunile %ariabile
se gsesc <n principal <n exonul 2, iar la genele HLA clasa $@
zonele polimor2e sunt concentrate <n exonul 2 !i 95
Aceste %ariaii de sec%en, sunt localizate <n zona de
legare a antigenului !i la ni%elul regiunilor al2a#elix care
<nt&mpin receptorul celulei :5
Aceste localizri strategice sunt expuse abilitii
sistemului imun de a recunoa!te !i a rspunde la patogeni )!i
posibil autoimunogeni, !i la antigeni endogeni sau exogeni5
Alelele HLA poart multe din acelea!i moti%e sec%eniale
dar <n combinaii di2erite5
>n consecin, antigenele de clasa $ !i clasa a$$-a, pot "
a!ezate ca un pac#et de combinaii ale acestor polimor"sme
sec%eniale, care au ca baz o sec%en comun de nucleotide5
?enomenul obser%at al crossreacti%itii antiserurilor !i
mai recent 2enomenul de cross#ibridizare al nucleotidelor
marcate poate " explicat de 2aptul c anumite antigene pot
a%ea acelea!i sec%ene5
A consecin important a acestor moti%e sec%eniale
purtate <n comun este c anumite combinaii #eterozigote ale
alelelor nu pot " <ntodeauna distinse de o a doua combinaie
di2erit5
29
:oate metodele de tipizare A-= trebuie s ia <n
considerare aceste aspecte c&nd propun sc#emele pentru
identi"carea alelelor5
>n mod e%ident, cea mai per2ormant metod de tipizare
HLA ar " aceea care ar putea per2orma o analiz complet
sec%enial a A-=-ului de la ni%elul genelor HLA pentru "ecare
indi%id5
Hec%enierea nucleotidic automat este 2olosit <n mod
curent ca !i Wstandardul de aurR pentru tipizarea HLA, dar
aceast te#nologie este <n general mai restr&ns pentru
Centrele de $munogenetic care sunt implicate <n programele
de transplant de celule stem #ematopoetice care 2olosesc
2rec%ent donatori ne<nrudii5
>n tabelul urmtor sunt redate comparati% caracteristicile
metodelor de tipizare HLA serologice !i moleculare5
Ta?el#l n'%&% Co()a'a:!e -n'e (eo.ele .e !)!6a'e HLA
se'olo$!"e 1! ?a6ae )e ADN E2F%
Meo.e
SEROLO+ICE ADNG SSPHSSOP A/0 S1T
=umrul de tipuri identi"cabile
HLA-A
HLA-+
HLA-C
HLA--.
HLA--/
HLA--0
21
19
1'
18
L
-
21-151
19-9'1
1'-89
18-282
L-19
-8J
151
9'1
89
282
19
8J
Materialul
probei
2-9 milioane de
lim2ocite %ii
Cantiti in"me de
A-=
Cantiti in"me de
A-=
.eacti%i Aloantiseruri
)2urnizare limitat,
c&te%a monoclonale
Aligonucleotide
sintetice primeri V
oligonucleotide
marcate )2urnizare
nelimitat,
Aligonucleotide
sintetice primeri
)2urnizare
nelimitat,
30
0uterea de a
identi"ca noi
alele
?oarte limitatI
depinde de
disponibilitatea !i
speci"citatea
serurilor
LimitatI bazat pe
cuno!tina
sec%enelor !i pe noi
modele de reacie
=elimitatI noi
alele identi"cate
prin sec%eniere
=i%elul de
rezoluie pentru
alelele cunoscute
=i%el generic -e la generic la ni%el
alelic
=i%el alelic
?actori
importani
Cxpresia HLA pe
supra2aa celular5
Xiabilitatea celulelor
Calitatea !i cantitatea
A-=-ului genomic !i
2actorii de
ampli"care5
Abligati%itatea
respectrii cu
strictee a
protocolului
Calitatea !i
cantitatea A-=-
ului genomic !i
2actorii de
ampli"care5
Metodele moleculare de tipizare o2er a%anta7e
importante 2a de metodele serologice incluz&nd acurateea
mult <mbuntit, rezoluia <nalt !i Sexibilitatea probelor5
Metodele moleculare de tipizare pot " <n particular a%anta7oase
pentru tipizarea probelor conin&nd molecule HLA care sunt <n
acela!i C.C65
C&te%a publicaii au documentat bene"ciul clinic al
tipizrii moleculare e%ideniind <n special cele dou aspecte
de7a menionate !i anume acurateea mult <mbuntit !i
rezoluia <nalt a tipizrii5
Menionm c datele de sec%eniere 2urnizate de
metodele moleculare <mpreun cu cuno!tinele despre
structura !i 2uncia sistemului HLA sunt <n mod curent 2olosite
pentru <nelegerea mai bun a bazei moleculare a
alorecunoa!terii !i a bolilor cu determinism genetic HLA5
P'!n"!)!!le (eo.elo' (ole"#la'e .e l#"'# -n
4!so"o()a!?!l!ae
31
0rima metod de tipizare molecular a detectat lungimea
polimor"smului 2ragmentului de resctricie ).?L0, <n A-=-ul
genomic !i a 2ost 2olosit <n special pentru tipizarea HLA de
clasa a$$-a5
-e asemenea o alt metod de biologie molecular
utilizat 2rec%ent este metoda cu #ibridizare la matria A.=
2olosind oligonucleotide marcate cu sec%en speci"c )HHA0,5
-up descoperirea reaciei de ampli"care genic )0C., au 2ost
dez%oltate rapid c&te%a metode 2acile !i robuste de tipizare
HLA prin biologie molecular5 0rima metod utilizat a 2ost
HHA05 Aceast metod a 2ost urmat de dez%oltarea metodei cu
primeri de sec%en speci"c care se bazeaz pe speci"citatea
ampli"crii pentru a determina tipurile de HLA5
Cea mai recent dez%oltare <n domeniul metodelor de
biologie molecular pentru tipizarea HLA este tipizarea bazat
pe desci2rarea sec%enelor * sec%eniere )H+:, care are
a%anta7ul automatizrii !i a unei acuratei per2ecte5
Hec%enierea este urmat de dez%oltarea te#nologiei
microarra: pentru genotiparea HLA5
>n tabelul 2 sunt prezentate cele mai 2olosite metode de
biologie moleculare <n tipizarea HLA5
Ta?el#l n'%2% Te4n!"! (ole"#la'e .e esa'e a 4!so"o()a!?!l!+:!!
E2F%
NUME
REACTI)I
CARACTERISTICI
PROCESE
CARACTERISTICE
Pol!(o'*s(ele
.ee"ae
.?L0
Cndonucleaze
bacteriene de
restricie
,outhern blotting Lungimea 2ragmentului
de restricie
HH0
0rimeri 0C. de
sec%en speci"c
0C.Vgel electro2orez -e la ni%el generic la
ni%el de alel
HHA0
Aligonucleotide cu
sec%en speci"c,
marcate
0C.V#ibridizare a
oligonucleotidelelor
marcate la produsul
0C.
-e la ni%el generic la
ni%el de alel
32
H+:
0rimeri
etic#etaiVterminato
ri de sec%eniere
0C.Vsec%enierea
nucleotidic a
produsului 0C.
=i%el de alel
Y>n prezent este <n curs de in%estigare clinic !i te#nologia microarra:
pentru genotiparea HLA5
Amplificarea genelor
Ma7oritatea metodelor moleculare de genotipare HLA
2olosesc reacia 0C. pentru a ampli"ca selecti% segmentele
genelor HLA care sunt necesare tipizrii5
Hpeci"citatea ampli"crii poate " s)e"!*"+ .e lo"#s )de
exemplu, HLA-A, HLA-+, HLA--.+1,, s)e"!*"+ .e $'#) )de
exempluI -.+1-'1, -.+1-'2, sau cu s)e"!*"!ae alel!"+ )de
exempluI -.+1Y-'1'1, -.+1Y'1'2,5
0entru 0C. speci"citatea este determinat de sec%ena
primerilor !i condiiile de ampli"care )cum sunt ciclurile de
temperatur !i Mg
2;
,5
Cele mai multe sc#eme de tipizare necesit condiii care
e%it co-ampli"carea pseudogenelor5
Geno!)a'ea HLA SSOP
Hibridizarea cu ol!$on#"leo!.e (a'"ae .e se"Cen:+
s)e"!*"+ )sonde, a 2ost prima metod de tipizare HLA bazat
pe 0C.5 Aceast metod simpli"c ampli"carea selecti% a
HLA int urmat de #ibridizarea cu un panel de
oligonucleotide marcate5
Cele dou 2ormate mai 2rec%ent 2olosite suntI
ot sa# #!ot b!ot cu A-=-ul ampli"cat legat de un suport
solid )cum este membrana, !i #ibridizat cu substane de
marcat <n soluie
33
Re.er# &ot sa# #!ot b!ot cu substane de marcat legate
de un suport solid, #ibridizat cu A-=-ul ampli"cat <n soluie5
?ormatul dot blot este 2a%orabil pentru tipizarea unui
numr mare de probe5 Bnele laboratoare cu %olum mare de
lucru, 2olosesc aceast metod pentru tipizarea unor loturi de
L sau 981 de probe5 Metoda reers dot blot este 2a%orabil
pentru testarea unui numr mic de probe5 .eacti%ii pentru
dot;slot0blot sunt disponibili comercial, exist&nd (ituri
standardizate a%&nd toate componentele necesare lucrului
incluse5
A cantitate de 1-5 UL de A-= ampli"cat din "ecare prob
este aplicat pe o membran de nZlon5 -upa #ibridizarea cu
oligonucleotidele marcate, membranele sunt splate pentru a
<ndeprta legarea nespeci"c5
He utilizeaz un substrat ast2el <nc&t se dez%olt o reacie
de culoare rezult&nd un model al #ibridizrii poziti%e !i
negati%e care este 2olosit pentru a desemna tipul HLA5
Bn a%anta7 ma7or al acestui procedeu este c, at&t
controlul poziti% c&t !i controlul negati% pot " incluse pentru
"ecare reacie5
In 'e6#(a/ )'!n"!)!#l (eo.e! ese ?a6a )e 'eCe's
4!?'!.!6a'e5 Materialul A-= extras !i ampli"cat biotinilat este
aport denaturat c#imic !i separat <n spire care sunt #ibridizate
cu oligonucleotide speci"ce marcate )sonde, imobilizate ca linii
paralele pe benzi5
>n etapa urmatoare, de splare, are loc <ndeprtarea
materialului ampli"cat nelegat5 -upa splare, este adugat
con7ugatul cu strepta%idin !i 2os2ataz alcalin care se leag
la #ibrizii biotinilai 2ormai anterior5
$ncubarea cu o soluie substrat, conin&nd un cromogen,
conduce la obinerea unui precipitat griVmaro5
.eacia este oprit printr-o etap de splare !i modelul
reacti%itilor sondelor este <nregistrat5
34
Ampli"carea este e2ectuat prin 0C. )?ig51',5 -atele
obinute sunt introduse <n calculator, iar programul
interpreteaz !i red tipul alelic HLA5
:ipizarea 0C.-HHA0 reprezint o metod cu un <nalt ni%el
de rezoluie !i acuratee5
Aceast metod este 2oarte adec%at pentru analiza unui
numr mare de probe pe o perioad lung de timp, "ind 2oarte
e"cient pentru lucrul pacienilor aSai pe listele de a!teptare5
-eza%anta7ele acestei metode sunt durata mare a timpului de
lucru )L,5' ore, !i costul ridicat <n cazul <n care se utilizeaz
pentru un numr redus de probe5
F!$%&0% Geno!)a'ea ADN HLA )'!n (eo.a SSOP%
Geno!)a'ea HLA SSP
Bna din cele mai 2rec%ente metode de biologie molecular
utilizat pentru genotiparea HLA este metoda de ampli"care
genic cu primeri cu sec%ena speci"c )HH0,5 0erec#ile de
primeri sunt elaborate pentru a ampli"ca speci"c "ecare
sec%en polimor2 HLA care trebuie s "e detectat, pentru a
2urniza ni%elul dorit de rezoluie al tipizrii5 :rebuie menionat
c exist o perec#e de primeri care ampli"c un segment
di2erit al A-=-ului !i care <n mod curent este inclus <n acela!i
35
tub ca !i control intern poziti% al ampli"crii5 A-=-ul int este
adugat <n reacie alturi de primeri !i celelalte componente
de reacie )A-= polimeraza, tamponul, Mg
2;
,apoi este
per2ormat ciclizarea termic5
0rodusele de ampli"care 0C. sunt uzual detectate prin
separare pe un gel de agaroz5 -up electro2orez, A-=-ul
este marcat cu ethidium bromide !i reacia este scori"cat
pentru prezena produ!ilor de ampli"care ai primerilor
controlul intern !i prezena sau absena produsului de
ampli"care speci"c HLA5 Combinarea reaciilor HLA poziti%e !i
negati%e este 2olosit pentru a desemna tipul HLA5 -ac nu
sunt prezente produse de ampli"care speci"ce HLA !i nu se
identi"c nici produsul controlului intern, reacia este cotat
ca e!ec !i trebuie repetat5
=umrul de primeri inclu!i <n test %ariaz <n 2uncie de
locus !i de ni%elul de rezoluie cerut5 0entru o rezoluie sczut
HLA -.+ este ne%oie de 2'-9' de reacii@ pentru o tipizare
A+C, <n mod curent, este ne%oie de 1''-2'' de reacii5 Hetul de
primeri pentru tipizare sunt 2urnizai comercial5
Cum numrul de alele cunoscute este <n continu cre!tere
!i numrul minim de reacii necesare pentru tipizarea HH0
cre!te de asemeni5
A%anta7ul ma7or al acestei metode este c dotarea cu
ec#ipament este minim, timpul necesar pentru testare este
scurt, ceea ce 2ace ca metoda s "e ideal pentru lucru <n cazul
donatorului cada%ru !i este u!or de per2ormat )?ig511,5
-eza%anta7ele ma7ore sunt reprezentate de necesitatea
unui numr mare de reacii !i de ne%oia unei cantiti mari de
A-= <nalt puri"cat care s asigure ca speci"citatea reaciei nu
este compromis5
Bna din slbiciunile 2ormatelor de lucru actuale este c
primerii de tipizare HLA nu sunt <ntodeauna controlai intern5
Ast2el, un rezultat 2als negati% poate " obinut dac controlul
36
intern )o perec#e di2erit de primeri, este poziti%, iar primerii
speci"ci HLA sunt dis2uncionali5
Mai nou, productorii acestor (ituri includ, de regul, !i
controale interne pentru "ecare reacie5
In 'e6#(a/ (eo.a )a'"#'$e #'(+oa'ele ea)eI
A-=-ul este extras din prob !i amestecat cu primeri a%&nd
speci"citate pentru sec%enele caracteristice ale "ecrui tip de
HLA5 Ali6uote din prob sunt plasate <n tuburi separate "ecare
conin&nd un set speci"c de primeri !i apoi sunt ampli"cate <n
termobloc5
0rodusele de ampli"care sunt apoi %izualizate <n
electro2orez, gelul "ind marcat cu ethidium bromide !i
2otogra"at <n lumin BX5
0rezena benzilor indic 2aptul c proba A-= a a%ut
sec%ena corespunztoare unui tip particular de HLA5
Absena ampli"crii implic absena acelei sec%ene
alelice particulare <n proba A-=5
:oate tuburile conin un primer suplimentar care ser%e!te
ca !i control al ampli"crii 0C.5
37
F!$%&&% Re6#laele (eo.e! SSP ADN HLA%
T!)!6a'ea HLA ?a6a+ )e se"Cen:!e'e @SBTA
:ipizarea HLA bazat pe sec%eniere )H+:, implic
determinarea sec%enei nucleotidice a unei segment ampli"cat
aparin&nd unei gene HLA5 Aceasta se realizeaz 2olosind un
sec%enializator nucleotidic automat, iar procedeul se
des2!oar, pe scurt, dup cum urmeazI segmentul de gen
HLA este ampli"cat !i excesul de nucleotide !i primeri este
<ndep&rtat5 A-=-ul ampli"cat este 2olosit ca matri pentru
reacia de sec%eniere iar produsele reaciei de sec%eniere
sunt puri"cate !i aplicate pe un gel de sec%eniere5
.eaciile H+: conin un amestec de nucleotide normale !i
nucleotide modi"cate )dideoxinucleotide, care termin
polimerizarea c&nd sunt <ncorporate <n spira replicati% a
A-=5 Bn primer este 2olosit pentru a iniia sinteza A-=
2olosind A-= polimeraza5 C&nd un dideoxinucleotid este
<ncorporat <ntr-o nou molecul A-= polimerizarea este
terminat5 Ast2el, extensia primerilor este generat ast2el <nc&t
se termin la "ecare poziie a moleculei A-=5
Mar(eri Suoresceni sunt utilizai pentru a distinge
lanurile terminate de "ecare baz )A, C, 6 sau :,5 Mar(erii
sunt <ncorporai 2olosind culori pentru primeri sau culori
pentru dideoxinucleotidele terminatoare5
Cxtensiile primerilor sunt separate pe un gel care rezol%
di2erenele de dimensiuni ale acestor sec%ene A-= p&n la
ni%el de o singur baz5 6elul este e2ectuat <ntr-un
sec%enializator ce conine laser care excit moleculele
mar(erilor !i un detector care <nregistreaz emisia "ecrui
mar(er5
Soft2"re0#l con%erte!te datele primare <ntr-o
cromatogram !i aliniaz automat nucleotidele pentru "ecare
38
poziie5 -atele sunt editate automat !i sec%ena este comparat
cu o baz de date conin&nd toate sec%enele cunoscute, pentru
a alinia alelele <n prob5
Bn a%anta7 al acestei metode este c "ecare sec%en, din
"ecare spir A-= poate " determinat pentru a con"rma tipul5
Acest lucru este recomandat deoarece arte2actele te#nice pot
determina c&teodat pierderea unui nucleotid particular care
poate conduce la o interpretare incorect a datelor de la
#eterozigoi5
In "on"l#6!e/ Ca'!a:!!le (!"! -n se"Cen:a $en!"+ )o *
'eleCae n#(a! )'!n se"Cen:!e'e .!'e"+ "a'e "onDe'+ o
a"#'ae:e )e'De"+ 'e6#laelo'%
In 'e6#(a/ ea)ele (eo.e! s#nI A-=-ul este izolat
din prob !i ampli"cat prin 0C. 2olosind primeri speci"ci de
locus, grup sau alel5
0rodusul de ampli"care este apoi distribuit <n 1 tuburi,
"ecare conin&nd polimeraz, dideoxinucleotide )d=:0, !i
amestecuri de sec%eniere5 ?iecare din cele 1 amestecuri este
marcat cu un terminator de sec%ene SuorescentI tubul 1 cu
citozina marcat )CY,@ tubul 2 cu guanin marcat )6Y,@ tubul 9
cu t#Zmin marcat ):Y,, iar tubul 1 cu adenin marcat )AY,5
0rodusul este ampli"cat prin 0C. pentru a <ncorpora
terminatorii marcai5 Cele 1 tuburi cu probe sunt puse <n
electro2orez pentru a separa produsele de extensie ale
primerilor <n 2uncie de dimensiuni5
Hec%enializatorul detecteaz Suorescena <n "ecare
band !i soft1are-ul con%erte!te datele <n sec%ene
nucleotidice5 -e asemenea, soft1are-ul compar sec%enele cu
o baz de date de sec%ene HLA !i desci2reaz tipul HLA5
Te4nolo$!a -icro"rr"3
39
0rincipiul de baz al #ibridizrii A-= microarra: este
legarea complementar a sec%enelor de acizi nucleici simplu
spiralate5 0e un microarra: )numit !i microcip,, sec%ene
cunoscute denumite inte, sunt ata!ate la locaii "xe )puncte -
spots, pe o supra2a solid cum este sticla, 2olosind punctarea
robotic )?ig512,5
Cele (a! D'e"Cen Dolos!e s#n .o#+ !)#'! .e ADN
micro"rr"3G
a. cA-= sau A-= genomic arra:, cu sec%ene
lungi de A-= complementar de 5''-55'''
perec#i de baze imobilizate, "ecare
reprezent&nd o gen sau un 2ragment speci"c
de cromozom5
b. -ligo arra:, ale cror microcipuri au sec%ene
A-= mai scurte )oligo-nucleotide,, de 2'-1''
perec#i de baze imobilizate ca inte@ sec%enele
necunoscute <n soluie numite sonde )cum este
cA-= sau A.= marcat Suorescent,, se %or lega
la inte complementare imobilizate5
Acela!i principiu se poate aplica !i altor inte !i sonde caI
proteine, glicani, etc5
0entru HLA, te#nologia microarra: %a trebui s-!i
do%edeasc e"ciena !i per2ormana, deoarece sec%enierea
este un concurent redutabil <n ceea ce pri%e!te sensibilitatea,
speci"citatea !i desci2rarea de alele noi5

40
F!$%&2% -icro"rr"3 J (!"'o"!) ADN HLA%
L!(!ele (eo.elo' .e ?!olo$!e (ole"#la'+
Metodele care detecteaz sec%ene c#eie polimor2e,
pentru a deduce un tip HLA pot, uneori, elabora un tip incorect
dac sunt prezente alele necunoscute5 Aceste metode nu pot
detecta <ntodeauna alele noi la ni%elul locusurilor polimor2e
testate5
Mai mult, probleme pot aprea cu di2erite interpretri ale
datelor depinz&nd de lista sec%enelor HLA 2olosite pentru
asamblarea tipului HLA5 Aceste circumstane 2ac s "e di"cil
compararea tipizrilor per2ormate la date di2erite5
>n completare, extrapolarea de la datele de sec%eniere,
limitate la un anumit tip HLA, poate determina uneori
asamblarea de di2erite tipuri depinz&nd de metoda !i reacti%ii
2olosii pentru tipizare5
A limitare ma7or, care a2ecteaz tipizarea ampliconilor
#eterozigoi, este c multiplele interpretri ale datelor sunt
posibile pentru anumite combinaii de alele5 Aceast situatie
poate " rezol%at prin per2ormarea tipizrii pe alele ampli"cate
selecti%5 C&teodat ambiguitile pot " rezol%ate 2olosind o
combinaie de date pro%enite de la dou metode cum ar " de
exemplu, HHA0 !i HH0 sau H+: !i HH05
-in aceste considerente, este obligatoriu ca toate centrele
de imunogenetic !i #istocompatibilitate s aib posibilitatea
de a per2orma cel putin dou metode de genotipare HLA5
A limitare ma7or este dat de 2aptul c interpretarea
datelor este inSuenat de baza de date de sec%ene 2olosite
pentru a interpreta rezultatele obinute5 H+:, care determin
41
sec%ena unui segment ce reprezint o poriune substanial a
genei HLA, este mai puin susceptibil la aceste probleme5 -ac
sec%ena este determinat pentru o alel ampli"cat selecti%,
sec%ena este precis5 -eoarece multe laboratoare nu
determin sec%ena pentru <ntreaga gen HLA, polimor"smul
din a2ara regiunii sec%enei nu este detectat5
Multe laboratoare per2ormeaz metoda H+: 2olosind
matrie #eterozigote cum ar " dou alele HLA-A care sunt co-
ampli"cate5 Aceste date sunt tipic interpretate compar&nd
sec%ena determinat cu sec%enele pentru toate combinaiile
posibile de alele cunoscute5
Bneori aceste rezultate sunt ambigue, cum ar " multiplele
interpretri ale rezultatelor de sec%eniere ale datelor
#eterozigoilor5 -ac baza de date al sec%enelor HLA este
lrgit ca numr, atunci numrul ambiguitilor sau al
interpretrilor alternati%e ale datelor obinute cre!te5
#$aluarea acurate%ei metodelor de tipizare HLA
Complexitatea identi"crii alelelor HLA necesit
asigurarea unor rezultate de <nalt calitate5
Htandardele actualizate !i detaliate pentru tipizarea HLA
bazat pe A-=, sunt meninute de ctre Hocietatea American
pentru Histocompatibilitate !i $munogenetic )AHH$, 314 !i de
ctre ?ederaia Curopean de $munogenetic )C?$,5
Centrele de $munogenetic !i Histocompatibilitate sunt
obligate s participe <n sc#eme de control extern de calitate5
In !)!6a'ea HLA "al!aea ese o )'o?le(+ "4e!e%
Conceptul de control de calitate <n laborator asigur c testul
adec%at este per2ormat cu o competen te#nic de un
standard <nalt pe proba adec%at !i c rezultatul corect este
trimis cu interpretarea cali"cat ctre clinicianul care o cere5
:estele imunologice de #istocompatibilitate au ne%oie de
interpretarea expertului ast2el <nc&t rezultatele a7unse <n
clinic s poat " <nelese corect de ctre clinician5
42
Cu alte cu%inte, laboratorul 2ace parte din ec#ipa de lucru
a clinicii, imunologul a%&nd un rol important <n stabilirea
gradului de potri%ire HLA dintre donator !i primitor !i <n a da
%erdictul pentru transplant din punct de %edere imunologic5
-e asemenea, e%aluarea imunologic post-transplant
renal este la 2el de important, dozarea imunosupresiei !i
determinarea anticorpilor anti-HLA orient&nd terapia de
<ntreinere5
Centrele de imunogenetic !i #istocompatibilitate din
Curopa sunt obligate s se acrediteze cu ?ederaia Curopean
de $munogenetic )C?$,, care documenteaz !i actualizeaz
toate te#nicile de lucru <n ceea ce pri%e!te tipizarea HLA,
determinarea anticorpilor citotoxici !i testul crossmatch5
?ederaia Curopean de $munogenetic )C?$, elaboreaz
standardele de per2orman <n imunogenetic !i
#istocompatibilitate5
EVALUAREA IMUNOLOGICK IN
TRANSPLANTUL RENAL
CCCCCCCCCC CCCCCCCCCCC
Ileana Consan!nes"#/ Ioanel S!nes"#/ Ana Mo!se
Statusul curent al transplantului renal
0rimul transplant renal de succes a 2ost per2ormat la
+oston <n 1L51 <ntre gemeni genetic identici5 $n .omania,
43
primul transplant renal a 2ost e2ectuat de ctre -omnul
0ro2esor -r5 Cugen 0roca <n anul 1L8' la $nstitutul Clinic
?undeni5 >n anul 1LLJ s-a e2ectuat primul transplant renal de
la cada%ru, dup recoltare multiorgan5 >n anul 1LL8 a 2ost
per2ormat primul transplant renal la un pacient diabetic5 >n
acela!i an, s-a e2ectuat primul transplant renal la un adult cu
insu"cien renal cronic prin neoplasm5 Heria
per2ormanelor continu, <n 1LLL a%&nd loc primul transplant
renal la copil, cu rinic#i prele%at de la cada%ru iar <n 2''5
realiz&ndu-se primul transplant renal la un copil ane2ric prin
tumora [ilms bilateral5
:ransplantul renal este tratamentul cel mai e"cient
pentru marea ma7oritate a pacienilor cu insu"cien renal
cronic, <mbuntind semni"cati% calitatea %ieii, <n anumite
cazuri cresc&nd sperana de %ia5
$munosupresia actual per2ormant, a condus la o
e%oluie <n timp mult <mbuntit, supra%ieuirea alogre2elor
renale la un an !i respecti% la cinci ani dup transplantul renal
de la cada%ru "ind <n prezent, de aproximati% L'T !i respecti%
J'T 3945
Acest succes a dus la "'e1e'ea n#(+'#l#! .e
'ans)lane 'enale care nu pot " susinute doar de donatori
cada%ru, al cror numr rm&ne staionar5
>n prezent se utilizeaz din ce <n ce mai mult rinic#i de la
a!a numiii donatori QmarginaliR sau donatori cada%ru cu
criterii de donare QextinseR sau de la donatori non0heart0
beating5 -e asemenea se utilizeaz 2oarte mult !i rinic#ii
pro%enii de la donatori %ii care acoper aproximati% 25T din
transplanturile renale <n Marea +ritanie !i 5'T <n Htatele Bnite
3945
>n .om&nia, programul de transplant renal se bazeaz
aproape exclusi% pe donatori %ii, donatorii cada%ru "ind <n
medie de 2' pe an5
44
Actualmente, <n transplantul renal, toate e2orturile se
concentreaz pentru <mbuntirea pe termen lung a e%oluiei
pacienilor5
&actori determinan%i ai e$olu%iei pe termen lung
>mbuntirile supra%ieuirii pe termen lung sunt <n
principal rezultatul unei e%oluii bune <n primul an post-
transplant 31245
.ata pierderilor alogre2elor renale dup un an a rmas,
<ns, relati% nesc#imbat din anii 1L8', la 9 * 5 T pe an5
0ierderea alogre2elor se datoreaz <n principal ne2ropatiei
cronice a alogre2ei5 .ecurena bolii renale iniiale are loc <n
aproximati% 1'T din cazuri 3945
?actorii de risc imunologic pentru ne2ropatia cronic a
alogre2ei includ episoadele de re7et !i imunosupresia
suboptimal5
7issmatch-urile <ntre donatori !i primitori pentru locusurile
HLA--., HLA-A !i HLA-+ reduce de asemeni, supra%ieuirea pe
termen lung <n transplantul renal5
?actorii non-imunologici care duc la ne2ropatia cronic a
alogre2ei sunt numero!i !i includ %&rsta <naintat a
primitorului, sexul masculin, #ipertensiunea !i %&rsta <naintat
a donatorului5
-eoarece nu exist un tratament e"cient pentru
ne2ropatia cronic a alogre2ei, !i aceasta necesit retransplant,
este important s se <ncerce pe c&t posibil a minimaliza 2actorii
de risc asociai5
LLLLL
0entru transplantul renal, din punct de %edere
imunologic, trebuie parcurse trei etape5 -ac pacientul cu
insu"cien renal cronic se aS <nscris pe lista de a!teptare
de c&i%a ani, se e%alueaz periodic detecia !i identi"carea
anticorpilor citotoxici5
45
0acienii pot dez%olta aloanticorpi ca rspuns 2a de
moleculele HLA strine dob&ndite din sarcini, trans2uzii sau
alogre2e anterioare5 Ace!ti anticorpi pot " cauza re7etului
alogre2ei renale5
>n momentul <n care se pune problema transplantului
renal se e2ectueaz tipizarea HLA, at&t pentru primitor c&t !i
pentru donator, iar <n etapa a treia se e2ectueaz testul
crossmatch5 "rossmatching-ul a 2ost dez%oltat pentru a detecta
aloanticorpii donator * speci"ci <n serul pacienilor care
candideaz pentru un transplant renal5 ?olosirea te#nicilor de
crossmatch sensibile, pentru a e%alua compatibilitatea
primitorilor !i donatorilor de rinic#i, a eliminat 2enomenul de
re7et #iperacut al alogre2elor renale !i a a%ut o contribuie
ma7or la <mbuntirea supra%ieuirii alogre2elor !i a
pacienilor5
:ipizarea HLA 7oac un rol 2oarte important <n
transplantul renal5 Caracteristica moleculelor HLA este imensa
lor di%ersitate la ni%elul populaiei umane5 :ipizarea HLA
detecteaz !i clasi"c aceast di%ersitate5 -e-a lungul anilor,
odat cu progresele te#nicii, au 2ost <n mod continuu
descoperite noi molecule HLA, ast2el <nc&t <n 1LLL s-a trecut
o"cial de numrul de 1''' de alele HLA recunoscute 3245
$denti"carea alelelor HLA este, cu siguran, problema
actual cea mai complex <n diagnosticul molecular5
>n prezent se cunosc mai mult de 19'' alele <n populaia
din <ntreaga lume, la ni%elul celor 12 locusuri exprimate ale
clasei $ !i clasei a $$-a 31'45
0olipeptidele codi"cate de ctre aceste alele di2er una de
alta prin una sau mai multe substituii aminoacidice care sunt
de 2apt mutaii cu sens gre!it )missens, 39'45
=u exist alte locusuri genetice umane mai polimor2e
dec&t locusurile HLA5 -e exemplu, locusul HLA-+ are mai mult
de 1'' de alele cunoscute 39'45 >n prezent este cunoscut
sec%ena genomic complet a MHC 3245
46
MHC conine mai mult de 2'' de gene, iar dintre acestea
mai mult de 2' de locusuri codi"c proteine implicate <n
legarea !i prezentarea produselor de degradare peptidice ale
proteinelor la receptorul antigenic al celulei :5
Ast2el, MHC particip la di2erite ni%ele <n procesarea
peptidelor antigenice !i la prezentarea acestora 32145 >n
completarea genelor HLA exprimate, exist numeroase
pseudogene de clasa $ !i clasa a $$-a care sunt localizate <n
complexul ma7or de #istocompatibilitate5 Aceste pseudogene
pun probleme dez%oltrii metodelor moleculare de tipizare
HLA, deoarece este necesar a tipiza genele exprimate 2r a "
posibil a se detecta !i pseudogenele apropiat <nrudite5 ?oarte
rar prezena unei pseudogene poate duce la ambiguiti ale
tipizrii moleculare HLA5
=umrul de alele cunoscute, coresunztoare unei
speci"citi particulare, %ariaz de la 1 la mai mult de 5' 3245
A%anta7ul imens al metodelor de tipizare HLA moleculare este
c depisteaz alturi de alelele exprimate !i alelele nule,
silenioase sau puin exprimate5 .elaia <ntre speci"citile
serologice !i tipurile moleculare nu este <ntodeauna direct
)?ig5L,5 -e exemplu, multe alele recent descoperite nu au 2ost
tipizate prin metode serologice !i de aceea nu au speci"citatea
serologic de"nit5
>n contrast 2a de metodele de tipizare serologice,
tipizarea HLA molecular poate detecta orice sec%en
nucleotidic polimor25 Aceasta 2urnizeaz oportunitatea de a
per2orma tipizare HLA la di2erite ni%ele de rezoluie <ncep&nd
de la grupuri de alele p&n la alele idi%iduale5
:ipizarea care de"ne!te grupuri de alele, <n mod curent
aproxim&nd speci"citile serologice, este considerat de
rezoluie 7oas sau generic )de exemplu, HLA--.+1-'1,5
:ipizarea prin metode care rezol% toate alelele cunoscute este
considerat de <nalt rezoluie )de exemplu, HLA--.+1
Y
'1'1,5
:ipizarea care rezol% tipurile HLA dincolo de speci"citile
serologice, dar nu atinge ni%elul alelic, este descris ca tipizare
47
de rezoluie medie )de exemplu, HLA- -.+1*
'1'1V'LV19V1V21V2V99,5
Complexitatea deosebit este cauzat de di2erenele
dintre tipizrile HLA moleculare !i exist o ne%oie cresc&nd
continu, de a actualiza interpretarea datelor de tipizare
moleculare ca !i numrul de alele HLA cunoscute5
C&te%a metode moleculare detecteaz sec%enele c#eie
polimor2e !i 2olosesc aceste date pentru a depista alelele5
$nterpretarea acestor date este inSuenat de baza de date a
sec%enelor HLA 2olosit pentru interpretarea acestor
rezultate5
0reponderena mare a polimor"smului de la ni%elul
genelor clasei $ !i a $$-a are loc <n exonii care codi"c G1 !i G2
la clasa $ )exonii 2-9, !i G1 !i F1 la clasa a$$-a, )exonul 2,,
domenii care leag peptidele procesate 31845
Anumite poziii ale nucleotidelor la ni%elul acestor exoni
sunt in%ariabile, altele pot a%ea dou, trei sau c#iar patru din
bazele existente ca posibiliti5 Ast2el, anumii codoni sunt
constani pe c&nd alii expun %ariate grade de %ariabilitate5
A%&nd <n %edere c exonii polimor" sunt relati%i scuri <n
lungime )aproximati% 25' nucleotide, ei pot " u!or ampli"cai
<n 0C. pentru studii de diagnostic molecular5
-e exemplu, toate alelele -.+1 au codi"cat glicina la
poziia 2' pe c&nd alte alele pot codi"ca glicina, %alina sau
acidul aspartic la ni%elul codonului 85 Cele 28L de alele -.+1
apar din multiplele combinaii posibile ale acestor polimor"sme
3945
#$aluarea anticorpilor citotoxici
S"'een!n$0#l an!"o')!lo' "!oo,!"! )'!n (eo.a
l!(Do"!oo,!"!+!! .e)en.ene .e "o()le(en
48
Hcreening-ul anticorpilor anti HLA este 2olosit pentru a
detecta prezena acestora la pacienii care sunt candidai
pentru transplant renal5 Hcreening-ul a 2ost <n mod tradiional,
per2ormat 2olosind metoda lim2ocitotoxicittii dependente de
complement5
Cele mai multe laboratoare e%alueaz lunar, din punct de
%edere al screening-ului anticorpilor citotoxici, pacienii aSai
pe listele de a!teptare5 Herurile "ecrui pacient sunt testate
pentru prezena anticorpilor <mpotri%a unui panel de celule
care conin cele mai 2rec%ente tipuri HLA <n populaia
donatoare, prezent la ni%elul unor di2erite combinaii de HLA-
A !i + )sau -. !i -/ pentru clasa $$,, pentru a permite
determinarea speci"citilor aloanticorpilor 31945 ?ormatul
poate " ast2el g&ndit ca un test <n mas pentru toi pacienii
sau un test pentru un singur pacient5 0rocentul de anticorpi ,ca
panel )0.A,, este calculat ca procent al numrului de celule
poziti%e 2a de numrul total de celule din panel, multiplicat
cu 1''5
0.A este indicatorul imunizrii pacientului 2a de HLA5
:rebuie menionat c speci"citatea anticorpilor din serurile cu
un 0.A <nalt nu poate " determinat, de cele mai multe ori5
Anumite proceduri cum ar " diluia serurilor sau ambele, se
pot utiliza pentru a determina identi"carea anticorpilor5
S"'een!n$0#l an!"o')!lo' "!oo,!"! )'!n (eo.a ELISA
.ecent a 2ost dez%oltat o metod 2oarte sensibil de 2az
solid pentru detecia anticorpilor anti-HLA 2olosind te#nica
CL$HA5 0reparate puri"cate ale antigenelor HLA sunt
peliculizate pe plcue de plastic !i sunt utilizate pentru a
capta anticorpii anti-HLA din serul pacienilor5
>n acest 2el se e%it 2olosirea celulelor cu <ntregul lor
complex de mar(eri de supra2a5 .eaciile 2als poziti%e,
datorate legrii anticorpilor la antigenele non HLA, sunt
e%itate prin 2olosirea acestei te#nologii5 Antigenele HLA
49
puri"cate, cu a"nitate, sunt izolate din plcue sanguine sau
din liniile celulare lim2oblastoide, cumulate !i "xate la baza
godeului din plcua de plastic <n care are loc testul5
Antigenele deri%ate din placuele sanguine sunt numai HLA de
clasa $, pe c&nd antigenele din liniile celulare lim2oblastoide
pot " de clasa $, de clasa $$ sau combinaii ale ambelor tipuri de
antigene 31L45
A%anta7ele testului CL$HA, 2a de testul con%enional de
lim2otoxicitate dependent de complement, includ procesarea
rapid !i u!oar a mai multor probe, prin cititoare automate de
plcue, !i eliminarea dependenei testului de %iabilitatea
lim2ocitelor !i a complementului 32245
Herul pacientului este incubat <n godeul plcuei
respecti%e unde orice anticorp anti-HLA de a%iditate adec%at
se leag de antigenul "xat5 -up <ndeprtarea anticorpilor
nelegai este adugat un anticorp cuplat cu o enzim care este
direcionat <mpotri%a $g6 uman5 Adugarea substratului
enzimatic conduce la dez%oltarea reaciei de culoare <n cazul
testelor poziti%e5
?ormatul de interpretare a citirii rezultatelor pentru
detecia anticorpilor citotoxici prin te#ica CL$HA poate ", "e
poziti% )anticorpi prezeni ,, "e negati% )anticorpi abseni,5 =u
se calculeaz 0.A, iar testul de identi"care a anticorpilor
citotoxici <n cazul reaciei poziti%e, se e2ectueaz tot prin
te#nica CL$HA !i are o %aloare diagnostic pretransplant
deosebit de important5
-e exemplu, este important de !tiut dac primitorul aSat
pe lista de a!teptare este imunizat !i dac anticorpii citotoxici
identi"cai sunt identici cu alelele HLA ale potenialului su
donator de rinic#i5
>n acest caz, testul crossmatch %a " clar poziti% iar
pericolul unui re7et acut, imediat <n perioada post-transplant,
este iminent5
50
:estul CL$HA este 2ormulat numai pentru detecia
anticorpilor HLA de tip $g65 >n consecint, testul CL$HA
standard nu poate detecta anticorpii citotoxici de tip $gM !i
anticorpii non-HLA dar detecteaz anticorpii $g6 ne"xatori de
complement pe care testele de citotoxicitate <i omit5
:estul CL$HA poate e!ua <n a detecta un anticorp cu
speci"citate pentru un antigen HLA rar, care poate " absent
sau la ni%ele 2oarte sczute <n cumulul de antigene5 .ecent au
2ost dez%oltate teste CL$HA capabile s identi"ce !i anticorpii
de tip $gM5
In 'e6#(a/ )'!n"!)!#l (eo.e! .e l#"'# pentru
screening-ul anticorpilor citotoxici de clasa $ !i a$$-a prin
metoda CL$HA esteI serul pacientului este adugat <n godeuri
cptu!ite cu glicoproteine HLA clasa $, respecti% clasa a$$-a,
permi&nd anticorpilor s se lege )dac sunt prezeni,5
Anticorpii nelegai sunt apoi splai5 He adaug <n godeuri
un reacti% ce conine globulin anti-uman )anti-$g6, cuplat
cu 2os2ataz alcalin !i se incubeaz5 Anticorpii anti-$g6
nelegai sunt apoi splai !i se adaug substratul 0=00 )p-
nitro2enil 2os2at,5 -up 9' de minute de incubare reacia este
oprit adug&nd soluie de #idroxid de sodiu5 -ensitatea optic
a probelor este msurat cu un spectro2otometru5
Ine')'ea'ea 'e6#laelo' #creenin'4$!$i *entr$
A/TICORPII "nti45LA c!"#" I 6i c!"#" AII4A e#te0
Re7$!t"te!e c$ "b#orb"n8( m"i m"re #"$ e'"!( &e 2
ori &ec9t me&i" contro"!e!or ne'"ti.e #$nt
PO:ITI)E.
/ot(0 &iferen8e!e &e citire ;ntre "b#orb"n8e *entr$
&$*!ic"te!e re7$!t"te!or n$ treb$ie #( ,e m"i m"ri &e
20<. Pentr$ " n$ interfer" citire", *e #*"te!e *!(cii n$
TRE1UIE S e=i#te $rme &e re"cti.i #"$ $rme &e t"!c.
51
I.en!*"a'ea an!"o')!lo' "!oo,!"! )'!n (eo.a ELISA
Meo.a .e !.en!*"a'e a anticorpilor anti HLA clasa $ !i a$$-a
prin te#nica CL$HA are, ca principiu de lucru urmtoarele
etapeI
15 Herul pacientului este adugat <n godeuri cptusite
cu glicoproteine HLA clasa $, respecti% clasa a$$-a,
permi&nd anticorpilor s se lege )daca sunt
prezeni,5
25 Anticorpii nelegai sunt apoi splai5
95 He adaug <n godeuri un reacti% ce conine globulin
anti-uman )anti-$g6, cuplat cu 2os2ataz alcalin !i
se incubeaz5
15 Anticorpii anti-$g6 nelegai sunt apoi splai !i se
adaug substratul 0=00 )p-nitro2enil 2os2at,5
55 -up 9' de minute de incubare reacia este stopat
adug&nd soluie de #idroxid de sodiu5
5 -ensitatea optic a probelor este msurat cu un
spectro2otometru5
Ine')'ea'ea 'e6#laelo' Pentr$ i&enti,c"re"
"nticor*i!or "nti45LA c!"#" I, ."!i&"re" re7$!t"te!or e#te
efect$"t( &"c(0
me&i" contro"!e!or ne'"ti.e > 0,22?
me&i" contro"!e!or *o7iti.e @ 0,900
Pentr$ i&enti,c"re" &e "nti45LA c!"#" " II4",
."!i&"re" re7$!t"te!or e#te efect$"t( &"c(0
me&i" contro"!e!or ne'"ti.e > 0,22?
me&i" contro"!e!or *o7iti.e @ A,000
At&t pentru identi"carea de anti-HLA de clasa $ c&t !i anti-
#la clasa a$$-a, rezultatele cu %aloarea densiti optice egal sau
mai mare dec&t %aloarea prag )cut o<, sunt considerate
poziti%e 32J45
52
F!$%&2% P'!n"!)!#l (eo.e! ELISA )en'# .ee":!a an!"o')!lo'
"!oo,!"!%
S"'een!n$0#l an!"o')!lo' "!oo,!"! )'!n (eo.a L#(!ne,
Adat cu cre!terea numrului de pacieni de pe lista de
a!teptare, se pune problema identi"crii anticorpilor citotoxici
pentru a e%alua !ansele acestor pacieni de a e2ectua
transplantul renal <n condiii imunologice de siguran5
53
I clasa de HLA antigene continand godeuri de num9r
733 pozitive rezultate :um9r
;<A =

=
II clasa de HLA antigene continand godeuri de num9r
733 pozitive rezultate :um9r
;<A =

=
Histemul multiplex Luminex poate " 2olosit at&t pentru
screening-ul c&t !i pentru identi"carea anticorpilor citotoxici
a%&nd o sensibilitate !i o speci"citate per2ormant5
0rincipiul acestei noi te#nologii este capacitatea de a
msura simultan analii multiplii <ntr-un singur godeu de
reacie5
Cu te#nologia Luminex, reaciile moleculare au loc pe
supra2aa seturilor de micros2ere colorate codi"cat, 2olosind un
amestec de 2 colorani Suoresceni de intensitate di2erit5
Micros2erele acioneaz ca purttori moleculari care
captureaz o prob !i apoi sunt etic#etate cu un raportor
Suorescent care se leag la proba capturat de pe micros2er5
Micros2erele sunt apoi trans2erate <ntr-un instrument care
2olose!te microSuide pentru a le alinia <ntr-un singur !ir care
%a trece printre dou lasere5 Bn laser lumineaz culorile din
interiorul micros2erei, pentru a identi"ca bila care %a " citit,
!i al doilea laser excit culoarea de pe supra2aa bilei5 0rintr-o
te#nic optic a%ansat sunt captate semnalele de culoare !i
procesarea digital a semnalelor este translatat, <n timp real,
<n date cantitati%e pentru "ecare reacie 32'45
F!$%&3% Te4nolo$!a L#(!ne, .e !.en!*"a'e a an!"o')!lo'%
54
Compar&nd Luminex-ul cu alte metodologii 2olosite pentru
screening-ul anticorpilor )cum sunt C-C-AH6, CL$HA !i
SoOcitometrie,, a 2ost rele%at 2aptul c sensibilitatea acestei
metode este comparabil cu cea a SoOcitometriei 3114 )tabelul
9,5
Ta?el#l n'% 2% Co()a'a:!e -n'e (eo.ele a"#ale Dolos!e )en'#
.ee":!a
an!"o')!lo' "!oo,!"!
Meo.+ An!"o')! .ee"a:! H
oal
M
C-C-AH6 12 V 18
CL$HA 92 V 18
Luminex 11 V J
?loOcitometri
e
18 V J9
0rin te#nica Luminex se pot lucra deodat L de probe,
ast2el <nc&t, se poate 2ace screening-ul !i identi"carea
anticorpilor pe o singur plac, ceea ce <nseamn e"cien
maxim <n testarea pacienilor 31145
!estul crossmatch
Hcopul testului crossmatch este de a detecta prezena, <n
serul pacienilor, a anticorpilor direcionai <mpotri%a
antigenelor HLA ale potenialului donator de rinic#i5 -ac sunt
prezeni, anticorpii semnalizeaz c sistemul imun al
primitorului a 2ost sensibilizat 2a de alelele donatorului !i
este susceptibil a re7eta puternic orice alogre2 ce poart
respecti%ele antigene5
La ni%elul rinic#iului transplantat, inta principal a
acestor anticorpi sunt antigenele HLA de pe endoteliul
%ascular al capilarelor !i arteriolelor5 Complexele antigen
HLA * anticorp de pe endoteliu acti%eaz complementul !i duc
la distrugerea celular, apoi, plcuele agregate, e%entual
55
produc&nd c#eaguri de "brin care <ngusteaz %asele,
cauzeaz necroza isc#emic5
C#iar !i titrul sczut de anticorpi, <n particular cei
direcionai <mpotri%a clasei $ de antigene, pot contribui la
re7etul alogre2ei renale5
-e asemenea, un alt rol important al testului crossmatch
este per2ormana de sensibilitate !i speci"citate pentru
antigenele HLA5
Tes#l "'oss(a"4 )'!n (eo.a l!(Do"!oo,!"!+:!!
Bn test crossmatch simplu poate " per2ormat prin metoda
citotoxicittii clasice utiliz&nd drept int lim2ocitele din
s&ngele peri2eric al donatorului5 Acest tip de crossmatch este
2olosit curent ca !i e%aluare preliminar pentru potenialii
donatori %ii <nrudii pentru transplant de alogre2 renal5
Lim2ocitele din s&ngele peri2eric sunt aproximati% 8'T celule :
care poart numai antigene HLA de clasa $ !i 2'T celule + !i
monocite care poart at&t antigene HLA de clasa $ c&t !i de
clasa a$$-a5
Bn rezultat crossmatch intens poziti%, prin citotoxicitate
dependent de complement )C-C, )5'T sau mai mult, celule
moarte per godeu,, indic <n mod clar prezena anticorpilor
anti-HLA de clasa $5
Ast2el, 1'-2'T din moartea celular poate rezulta dintr-un
anticorp speci"c pentru clasa a$$-a sau se poat datora unui
anticorp slab anti clasa $5 0entru a rezol%a speci"citatea
anticorpilor, crossmatch-ul este per2ormat apoi pe preparate
celulare <mbogite at&t cu lim2ocite : c&t !i +5
Te#t$! cro##m"tcB *entr$ ce!$!" T
"rossmatch-ul pentru celula : se per2ormeaz la
temperatura camerei dar !i la 9J
'
C <n anumite laboratoare
56
pentru a e%ita legarea anticorpilor reacti%i la rece, presupu!i a
" autoreacti%i5 Un es cro##m"tcB )o6!!C )e "el#la T/ )'!n
o'!"e (eo.+/ "on'a!n.!"+ 'ans)lan#l 'enal !n.!De'en
"9 .e sla? ese n!Cel#l .e 'ea":!e% Cxist c&te%a metode
pentru <mbuntirea sensibilitii testului crossmatch prin
C-C pentru celula :I
15 $ncubaia extins pentru a cre!te sensibilitatea * cea mai
simpl modi"care a testului de citotoxicitate este extinderea
timpului de incubare al celulelor, serului !i complementului5
25 Ctapa de splare Amos * aceast metod intercaleaz o
etap de splare dup incubarea celulelor donatorului cu
serul primitorului <nainte de adugarea complementului,
pentru <ndeprtarea 2actorilor anticomplementari din ser5
95 6lobulina anti-uman - citotoxicitatea anumitor anticorpi
poate " ampli"cat prin adugarea unui anticorp, <ntr-o
etap ulterioar, <n mod obi!nuit un reacti% policlonal tip
imunoglobulin anti-uman )AH6,5
In 'e6#(a/ es#l cro##m"tcB pentru celula : prin
metoda C-C prezint urmtoarele etape de lucruI
1 UL din serul primitorului este dispensat <n multiple
godeuri ale plcuei microtest@ pentru pacienii
imunizai sunt puse <n reacie seruri multiple cu 0.A
cunoscut5
Hunt adugate celulele : ale donatorului )2-9 x 1'

,
!i testul este incubat pentru 9'-' de minute5
0entru a cre!te sensibilitatea testului, serurile sunt
splate din godeuri <nainte de adugarea
complementului5
Adugarea unui al doilea anticorp, cum este $g6-ul
de capr anti-uman cre!te !i mai mult sensibilitatea5
-up c&te%a minute de incubare cu AH6, este
adugat complementul !i testul este incubat pentru
<nc ' de minute5
$ncubarea de lung durat a complementului p&n la
9 ore, este uneori per2ormat <n loc de adaugarea
AH65
57
-ac serul primitorului conine anticorpi care
reacioneaz cu celulele donatorului, celulele sunt
omor&te !i colorantul )eozina sau ethidium bromide,
ptrunde <n interiorul celulelor indic&nd un test
crossmatch poziti%5
Un es cro##m"tcB )o6!!C )en'# "el#la T ese o
"on'a!n.!"a:!e )en'# 'ans)lan#l 'enal%
Te#t$! cro##m"tcB *entr$ ce!$!" 1
:estul crossmatch pentru anticorpi cu speci"citate 2a de
antigene HLA de clasa a$$-a necesit 2olosirea lim2ocitelor + ca
!i inte !i aceia!i timpi de incubare extins ca !i la tipizarea
serologic HLA -. !i -/5 Bn test crossmatch poziti% pe celula
+ poate apare datorit unor anticorpi care se leag la antigene
HLA de clasa $ sau de clasa a$$-a5
Mai mult, celulele + sunt un indicator mai sensibil pentru
anticorpii slabi de clasa $ deoarece ei poart molecule de clasa
$ <ntr-o mai mare densitate dec&t celulele :5 "rossmatch-ul prin
SoOcitometrie poate distinge <ntre anticorpii + ade%rai !i
anticorpii slabi de clasa $ ai unui crossmatch citotoxic poziti%
pe celul +5
0entru e%oluia transplantului renal, anticorpilor
pre2ormai 2a de antigenele HLA de clasa a$$-a nu este clar
<nc semni"caia5
:ransplantul renal de succes la pacieni cu titru sczut de
anticorpi anti HLA clasa a$$-a 2ost raportat, dup cum a 2ost
raportat !i 2enomenul de re7et acut al alogre2ei renale <n cazul
titrului crescut al anticorpilor anti-HLA clasa a$$-a5
Cste posibil ca pierderea gre2elor transplantate <n cazul
crossmatch-ului negati% pe celula : !i poziti% pe celula + s "e
datorat componentelor anti-HLA clasa $ ale acestor seruri
aloreacti%e5
58
F!$%&5
C'oss(a"4 )'!n e4n!"a ELISA )en'# "el#la T 1! B
CL$HA 2olose!te anticorpi anti-HLA de clasa $ !i respecti%
clasa a$$-a, care sunt peliculizate <n microgodeurile plcuei5
\ntr-o prim etap se pune lizatul de lim2ocite extrase din
s&ngele donatorului !i antigenul HLA %or " captate !i "xate <n
godeu de ctre ace!ti anticorpi5 Blterior, este pus <n reacie
serul primitorului, urmat de adugarea unui anticorp secundar
anti $g6 uman cuplat cu o enzim
0rin adugarea substratului rezult o reacie de culoare a
crei intensitate este masurata cu a7utorul cititorului CL$HA5
$nterpretarea rezultatelor testului este bazat pe compararea
densitilor optice ale godeurilor de testat 2a de godeurile de
control poziti% !i negati%5 3545
0rincipalul a%anta7 const <n 2aptul c nu este ne%oie de
lim2ocite %iabile sau de "xare de complement, iar testul
imunoenzimatic nu este con2runtat cu inter2erene ale
medicamentelor citotoxice cum este globulina anti-timocite sau
muronomab AE:9 3545
>n Centrul de $munogenetic !i Xirusologie din $nstitutul
Clinic W?undeniR crossmatch-ul este per2ormat printr-un test
59
calitati% CL$HA <n 2az solid pentru detecia anticorpilor $g6
direcionai ctre antigenele HLA din clasa $ !i a$$-a speci"ce
donatorului5
Princi*i$! meto&ei &e !$cr$
0repararea lizatului de lim2ocite ale donatorului
.eacia CL$HA propriu-zis )?ig51,
F!$%&7% Cro##m"tcB J )'!n"!)!#l (eo.e! ELISA%
6licoproteinele HLA sunt preparate din lim2ocite prin
solubilizarea celulelor cu un detergent neionic5 -up
solubilizare, lizatele de lim2ocite se adaug <n godeurile <n care
au 2ost imobilizai anticorpi monoclonali speci"ci pentru HLA
clasa $ !i clasa a $$-a5 6licoproteinele HLA sunt lsate s se
lege de anticorpii monoclonali !i apoi glico-proteinele nelegate
sunt <ndeprtate prin splare5
6odeurile conin&nd glicoproteinele legate sunt testate cu
ser uman pentru a detecta anticorpii anti-molecule HLA5
Anticorpii nelegai sunt <ndeprtai prin splare5
He adaug apoi <n godeuri un reacti% anti-globulin uman
)anti-$g6, marcat cu 2os2ataza alcalin !i godeurile se
incubeaz5 Anti-$g6 nelegat se <ndeprteaz prin splare
He adaug substratul 0=00 )p-nitro2enil 2os2at,)?ig5 1,5
-up 9' minute de incubare reacia este oprit cu soluie de
#idroxid de sodiu5
60
-ensitatea optic a culorii 2ormate se masoar cu un
spectro2otometru5
Ine')'ea'ea 'e6#laelo' J C'!e'!#l .e )o6!!C!ae
He citesc absorbanele la 1'5 sau 11' nm 2olosind "ltrul
de re2erin de 1L' nm5
Con'ol ne$a!C 0/200
Con'ol )o6!!C &/000
Con'ol l!6a 0/900
Re6#laele "a'e a# (e.!a a?so'?an:elo' N 2X (e.!a
Calo'!lo'
"on'oalelo' ne$a!Ce/ s#n )o6!!Ce%
C'oss(a"4 )'!n (eo.a OoP"!o(e'!e!
Aceast te#nic de lucru este <ntre 9' - 25' de ori mai
sensibil dec&t metodele serologice %izuale pentru detecia
anticorpilor anti-HLA de tip $g65 Celulele : sunt separate
electronic de celulele +, prin 2olosirea unui anticorp 2a de
antigene de supra2a ale celulelor :,)cum ar " complexul C-9-
0C., marcat cu Suorescein,
A poart electronic poate " creat ast2el <nc&t, numai
celule : marcate cu Suorescein sunt selectate5 Lim2ocitele
donatorului sunt incubate cu serul primitorului pentru a
permite legarea oricror anticorpi anti-donator5 Anticorpii
legai la populaia de celule : selectat sunt detectai prin
adaugarea unui anticorp anti $g6 uman, anti ?c speci"c5
?)abN,
2
este cuplat cu un Suorocrom de culoare di2erit de
cea a anticorpului care marc#eaz celulele : )de exemplu
%erde dac anti C-9 a 2ost ro!u,5 ?loOcitometrul numr
celulele : cuplate !i creaz o #istogram proiect&nd numrul
de celule ersus intensitatea Suorescenei5 Celulele necuplate
61
rm&n l&ng origine iar celulele cuplate la dreapta originii pe
axa ]5
A deplasare la dreapta a %&r2ului de celul :, <n
comparaie cu controlul negati%, indic 2aptul c anticorpii anti-
HLA de clasa $ din serul pacientului s-au legat de celulele : ale
donatorului5 ?loOcitometria se poate per2orma !i pe celule +
legate cu anticorpi speci"ci acestora5
?loOcitometria este <n general per2ormat pe serul cel
mai recent !i pe o selecie de seruri istorice, reacti%e, pentru
toi pacienii aSai pe lista de a!teptare pentru donatori
cada%ru !i care au un risc crescut de re7et )cum ar " alogre2a
re7etat anterior, 0.A <nalt, donator %iu <nrudit cu crossmatch
serologic pe celula : negati% !i pe celula + poziti%,5
C&teodat crossmatch-ul poziti% prin SoOcitometrie
apare c&nd crossmatch-ul serologic pe celula : !i + este
negati%5 $ndicaiile pentru transplant, <n aceste cazuri, rm&n
contro%ersate5 Cxist dou posibile explicaii pentru aceste
obser%aiiI existena prezenei anticorpilor anti-HLA care nu
sunt citotoxici sau exista prezenei anticorpilor blocani care
inter2ereaz cu testarea5
C'oss(a"4!n$ )'!n e4nolo$!a L#(!ne,
0rin aceast metod se poate lucra crossmatch cu
sensibilitate !i speci"citate de per2orman comparabile cu
cele obtinute prin SoOcitometrie5 :otu!i, la ora actual,
utilizarea cea mai de succes a Luminex-ului, ca !i costVe"cien
!i acuratee este pentru detecia !i identi"carea anticorpilor
citotoxici )?ig5 1J,5

62


F!$%&8% P'!n"!)!#l e4nolo$!e! L#(!ne,%
C'oss(a"40#l )en'# a#oan!"o')!
>n e%aluarea crossmatch a serului primitorului pentru
compatibilitate cu donatorul, cel mai important este s
distingem anticorpii nespeci"ci, antilim2ocitari numii
autoanticorpi, de anticorpii speci"ci anti-donator5 0rezena
autoanticorpilor este detectat de testul auto crossmatch <n
care serul pacientului !i lim2ocitele acestuia sunt combinate <n
testul standard de citotoxicitate5
Autoaticorpii pot da rezultate 2als poziti%e <ntr-un test
crossmatch cu lim2ocitele potenialului donator conduc&nd la
descali"carea eronat a acelui donator5 Alternati%, anticorpii
preexisteni pot masca prezena anticorpilor speci"ci anti-
donator5 Auto crossmatch-ul este per2ormat de rutin <n cazul
tuturor crossmatch-urilor cu donatori %ii pentru "ecare ser
care este testat5
Algoritmul corect de testare crossmatc# pentru un
receptor aSat pe lista de ateptare pentru un transplant renal,
const <n punerea <n reacie a lim2ocitelor donatorului cu serul
istoric de la data precedentei e%aluri i cu serul din pre-ziua
transplantului@ concomitent se lucreaz i testul
autocrossmatc#5
63
:estarea pentru autoanticorpi prin SoOcitometrie este, de
asemenea, recomandat <n particular <n cazul unui crossmatch
serologic negati% cuplat cu un test crossmatch poziti%
nea!teptat prin SoOcitometrie5
.ezultate de crossmatch 2als poziti%e, prin te#nica
SoOcitometric, se pot produce c&nd pacientul are
autoanticorpi de speci"citate nedeterminat5 Ast2el de
autoanticorpi poziti%i prin SoOcitometrie nu sunt considerai a
" o contraindicaie pentru transplantul renal5
Algoritmul e$alu"rii imunologice n transplantul renal cu donator $iu
6rupele sanguine ale donatorului !i receptorului trebuie
s "e compatibile5 :ipizarea HLA a7ut la selectarea celui mai
adec%at donator %iu c&nd sunt disponibili mai muli donatori5
>nainte de transplant se e2ectueaz testul crossmatch
pentru e%itarea 2enomenului de re7et #iperacut5 Bn test
crossmatch poziti% exclude transplantul renal de la acel
donator5
64

F!$%&B% ECal#a'ea !(#nolo$!"+ -n Ce.e'ea 'ans)lan#l#! 'enal .e
la .onao' C!#%
Algoritmul e$alu"rii imunologice n transplantul renal cu
donator cada$ru
-onatorul cada%ru !i potenialii receptori trebuie s aibe
grupe sanguine compatibile5 Apoi este per2ormat tipizarea
HLA !i gradul de compatibilitate este 2olosit pentru alocarea
rinic#ilor de la cada%ru5
Anumite date sugereaz c prezena nepotri%irilor HLA
care au 2ost prezente <ntr-o alogre2 anterioar )<n special
pentru locusul -.,, poate duce la pierderea timpurie a
alogre2ei renale5 Ast2el, ar " <nelept s e%itm ast2el de
nepotri%iri5
C&nd 0.A este ^ 1'T este prudent s e2ectum teste
pentru a determina dac unii dintre anticorpi sunt mai mult
autoreacti%i dec&t aloreacti%i5 Anticorpii autoreacti%i nu cresc
riscul de re7et dar cei aloreacti%i cresc riscul de pierdere a
alogre2ei renale5 :itrul mare de anticorpi aloreacti%i se
datoreaz, de obicei, sarcinilor anterioare, transplanturilor sau
trans2uziilor de s&nge5
-eterminarea anticorpilor citotoxici poate " util <n
e%itarea anumitor antigene HLA5 La pacienii 2oarte
65
sensibilizai )0.A ^ 5'T, poate " 2oarte di"cil de gsit un
donator crossmatch negati%5 C%itarea trans2uziilor poate a7uta
ca titrul anticorpilor citotoxici s scad <n timp5
F!$%&9% ECal#a'ea !(#nolo$!"+ -n Ce.e'ea 'ans)lan#l#! 'enal .e
la "a.aC'#%
Ale$e'ea #n#! .onao' C!# .er#$# .onao' "a.aC'# )en'#
'ans)lan#l 'enal
66
F!$%20 Donao' C!# .er#$# "a.aC'# )en'#
'ans)lan#l 'enal%
?olosirea donatorului %iu pentru transplantul renal este
a%anta7oas deoarece supra%ieuirea alogre2ei este mai bun !i
este posibil transplantul preempti% 345 Cel mai bun donator
este, de obicei, un membru din 2amilie5
on"tor$! m"r'in"!
-e!i nu este acceptat <nc o de"niie unanim, ace!ti
donatori includ persoane la %&rste extreme, cu #ipertensiune
sau diabet sau indi%izi cu un risc crescut de transmitere a
di2eritelor boli5 >n mod surprinztor, transplantul de rinic#i de
la un ast2el de donator marginal duce <n multe cazuri la o
2uncie renal bun la ni%elul receptorului5
H-a constatat c transplantul renal dual de la donatori
marginali d rezultate similare transplanturilor cu un singur
rinic#i de la donatori non-marginali 3145 :ransplantul dual nu
pare s creasc rata complicaiilor c#irurgicale 3145 Histemele
de scori"care care 2olosec %ariabilele donatorului cum suntI
%&rsta, #ipertensiunea arterial <n antecedente, 2uncia renal,
67
rezultatele biopsiei renale !i missmatch-ul HLA, pot 2urniza o
abordare cantitati% pentru 2urnizarea rinic#ilor marginali
32945
on"tori non4Be"rt4be"tin'
0rincipala problem legat de transplanturile renale de la
acest tip de donatori este rata crescut de 2uncie renal
<nt&rziat !i de ne2uncionare primar comparati% cu rinic#ii
pro%enind de la donatori cada%ru heart0beating 3845
EDe"#l s#'se! .onao'#l#! as#)'a s#)'aC!e:#!'!! alo$'eDe!
Comparaia <ntre primitorii de rinic#i cu di2erite surse de
donatori, la 9 ani de supra%ieuire a alogre2elor renale, a artat
c cea mai bun supra%ieuire a 2ost obser%at la cei cu
donatori 2rati, HLA identici 345
6re2ele pro%enite de la soi sau soii !i ali donatori %ii
ne<nrudii au supra%ieuit la 2el ca !i gre2ele pro%enite de la
prini, toate supra%ieuind mai mult <n comparaie cu gre2ele
pro%enite de la donatori cada%ru 345
F!$%2&% I()a"#l s#'se! .onao'#l#! as#)'a s#)'aC!e:#!'!! alo$'eDe!
68
'enale .e la .ono'! C!! -n'#.!:!%
Aceste date au <ncura7at centrele de transplant renal
pentru a 2ace c&t mai multe transplanturi de la donatori %ii, <n
acest 2el e%it&nd !i lunga a!teptare pentru un donator de
rinic#i cada%ru5
EDe"ele )o'!C!'!! HLA as#)'a
s#)'aC!e:#!'!! alo$'eDe! 'enale )'oCen!e .e la #n
.onao' C!#
F!$%22% I()a"#l )o'!C!'!! HLA as#)'a s#)'aC!:#!'!!
$'eDe! 'enale .e la .onao'! C!! -n'#.!:!
)dup L.=. Lebec2 !i 7.'. >aroo: * HistocompatibilitZ testing and organ
s#aring, c#apter 8,5
Hupra%ieuirea alogre2ei este cea mai bun pentru
alogre2e HLA identice de la 2rai !i este urmat apoi de
69
alogre2e cu un singur #aplotip nepotri%it5 $mportant este c
timpul de <n7umtire ):_, al gre2elor care supra%ieuiesc la
cel puin un an este proporional cu gradul de matching5
Aceast in2ormaie poate " 2olosit <mpreun cu ali 2actori
pentru a selecta cel mai adec%at potenial donator de rinic#i
32J45
Matching'ul imunologic( conceptul de matching n transplantul renal
$nSuena poziti% a potri%irii HLA asupra supra%ieuirii
gre2ei renale a 2ost demonstrat timp de mai bine de 25 de ani
311, 91, 45 >n practic, gasirea unui donator de rinic#i cu zero
missmatch HLA este extrem de rar5 -e aceea, e2orturile se
concentreaz pentru gsirea unui donator cu minimum de
nepotri%iri HLA sau, se merge mai departe, p&n spre limita
maxim de nepotri%iri, ast2el <nc&t s putem a%ea, totu!i, un
matching HLA optim5
>n acest sens, de exemplu, <ntre 1L88 !i 1LL programele
de transplant renal ale Curotransplant au mers pe minim
potri%ire pentru cel puin un antigen HLA-+ !i un antigen HLA-
-.5
C#iar !i <n prezent, multe programe continu s
2oloseasc aceste cerine minime pentru potri%irea HLA a!a
cum reiese din pro"lul de matching HLA al programului de
alocare de rinic#i al Curotransplant 3L45
>n mod regretabil nu exist <nc un consens general
despre de"niia a ceea ce <nseamn un donator inacceptabil
HLA5
70
>n orice caz, anticorpii citotoxici detectai <n serul actual
al pacientului identi"c antigenele HLA de clasa $
inacceptabile ale donatorului !i prognozeaz un crossmatch
poziti% care este testul "nal <nainte de transplant5
.ele%ana anticorpilor pentru urmatoarele aspecte este
contro%ersatI
1, antigenele HLA de clasa a $$-a@
2, antigenele HLA de clasa $ care au 2ost identi"cate numai <n
serurile istorice ale pacientului@
9, antigenele HLA ale donatorului care au 2ost nepotri%ite <n
cazul unui transplant anterior, dac acest lucru este aplicabil5
:oate aceste restricii imunologice a2ecteaz aproximati%
9'T din pacienii aSai pe lista de a!teptare a Curotransplant
3L45
>n mod ideal ar trebui considerat un index de potri%ire !i
pentru antigenele HLA inacceptabile ale donatorului5
7atching-ul imunologic este rele%ant numai c&nd exist
un numr su"cient de mare de donatori 39145 Cu c&t sunt mai
muli donatori cu at&t este mai mare !ansa unui matching bun,
prin aceasta <neleg&nd o potri%ire de 5'T pentru alelele HLA-
A, + !i -.5
Arice politic de a maximiza numrul de zero missmatch-
uri HLA-A, +, -. ar trebui s acioneze pe un numr c&t mai
mare de donatori posibili5 Acela!i lucru trebuie s se aplice !i
pentru pacienii <nalt sensibilizai5
>n anii receni, progrese mari s-au e2ectuat prin potri%irea
HLA la ni%el de alel 3J45 -e asemenea, trebuie menionat c
muli primitori de alogre2 renal cu nepotri%iri HLA continu
s aib o 2uncie bun muli ani dup transplant, suger&nd c
anumite nepotri%iri HLA sunt totu!i acceptate 3845
>n timpurile testrii serologice HLA un ser cu 0.A <nalt
era considerat a " compus din muli anticorpi anti-HLA5 Mai
71
t&rziu s-a obser%at c serul pacienilor <nalt sensibilizai
a!tept&nd un transplant renal era, <n general, compus dintr-un
numr mic de anticorpi direcionai 2a de antigenele publice,
denumite !i C.C6s !i mai puin din anticorpi multipli, "ecare
reacion&nd cu un antigen HLA speci"c con%enional5 Mai
mult, 2rec%ena C.C6s era mult mai mare, 95T p&n la 88T,
2a de cele mai comune antigene HLA-A !i +5 0rin inter2eren
potri%irea pentru antigenele donatorului !i receptorului incluse
<n acela!i C.C6, respecti% potri%irea C.C6, poate duce la un
numr mai mare de transplanturi potri%ite !i la un ni%el mai
redus de sensibilizare a pacienilor a%&nd gre2e repetate5 >n
completare, datorit includerii unor antigene pri%ate HLA-A !i
+ <n cadrul acelea!i C.C6, un numr de antigene rare pot "
potri%ite mult mai u!or, o2erind posibilitatea unei supra%ieuiri
alogre2ei mult <mbuntite pentru un numr mai mare de
pacieni5
Bn studiu recent de potri%ire pentru QC.C6sR )cross
reactie groups,, a sugerat c at&t donatorii c&t !i primitorii
care sunt potri%ii pentru aceste grupuri de antigene, pot a%ea
mai puine teste crossmatch poziti%e !i pot bene"cia de o
alogre2 renal cu o supra%ieuire de lung durat 3845
>n rezumat, e%aluarea imunologic pretransplant renal a
pacienilor cuprindeI genotipul HLA, anticorpii citotoxici-
screening, dac este cazul identi"care !i testul crossmatch5
T'ans)lan#'!le 'enale ABO !n"o()a!?!le
72
>n mod tradiional, compatibilitatea de grup sanguin este
considerat esenial pentru transplantul renal de succes,
deoarece rinic#ii A+A incompatibili transplantai sunt rapid
distru!i de 2enomenul de re7et #iperacut datorat anticorpilor
anti-A !iVsau anti-+ care se leag de antigenele A !iVsau + de pe
endoteliul gre2ei, acti%&nd cascada complementului !i induc&nd
agregarea trombocitar !i tromboza intra%ascular 3845
>n 1L81, ,lapa2 9i colaboratorii au obser%at c
plasma2ereza rezol% rapid re7etul la un transplant renal
accidental incompatibil ,A+A care s-a produs din cauza unei
erori de lucru a grupelor sanguine5
.ecent interesul pentru 2olosirea rinic#ilor de la donatori
%ii A+A incompatibili a crescut 2oarte mult, mai ales <n ri
unde din moti%e culturale nu exist surs alternati% de
donatori5
C#irurgii 7aponezi au raportat 2aptul c subgrupe
selectate de pacieni pot atinge o e%oluie acceptabil dup
transplantul renal A+A incompatibil, dac anticorpii anti-A+A
sunt redu!i pretransplant combinat cu splenectomie !iVsau
anticoagulante postoperator !i doze <nalte de
imunosupresoare5
:itrurile de anticorpi pretransplant sunt reduse prin
sc#imbare de plasm )plasma exchange, sau imunoabsorbie
cu <nlocuire ulterioar cu plasm tip A+5
Hplenectomia este per2ormat <n <ncercarea de a reduce
capacitatea primitorului de a produce anticorpi anti-AVanti-+ <n
cazul <n care transplantul se e2ectueaz de la un donator de
rinic#i A+A incompatibil5
:erapia anticoagulant cu in#ibitori ai agregrii
trombocitare este utilizat pentru a pre%eni iniierea coagulrii
intra%asculare diseminate intrarenal, datorit re7etului umoral5
Acest tip de transplant poate " aplicat cu succes pentru
pacienii care primesc rinic#i de la donatori %ii !i nu este
posibil <n cazul donatorilor cada%ru5
73
BIBLIOGRAFIE
15 American HocietZ 2or HistocompatibilitZ and $mmunogenetics,
#ttpIVVOOO5as#i-#la5org
25 +axter-LoOe, L5A, and Colombe, +5[5, HistocompatibilitZ :esting
)1L,, in Lange Medical $mmunologZ, :ent# Cdition, 2''15
95 Callag#an, C5 D5, and +radleZ, D5 A5, Current status o2 .enal
:ransplantation Cpt5 1 in :ransplantation $mmunologZ Met#ods and
0rotocols edited bZ 0#ilip Horniclx, Marlene .ose, Humana 0ress
$nc5 2''5
15 Campbell, .5-5 and :roOsdale, D5 $mmunologZ :odaZ 18, 19, 1LLJ5
55 Cec(a, D5M5 and .eed ?5C5, HistocompatibilitZ :esting, Cross-
Matc#ing, and Allocation o2 EidneZ :ransplants in Handboo( o2
EindeZ :ransplantation, ?ourt# Cdition, 6abriel M5 -ano%itc#, 2''5
bZ Lippincott [illiams ` [il(ins5
5 Cec(a, D5M5, :#e role o2 HLA in renal transplantation5 Human
$mmunologZ 5I -1, 1LLJ5
J5 C#ua, M5H5, HarOal, M5 MicroarraZsI =eO tools 2or transplantation
researc#5 0ediatric =ep#rologZ, 18I91L-92J, 2''95
85 -ano%itc#, 65M5, Handboo( o2 EindeZ :ransplantation ?ourt# Cdition,
Lippincott [illiams ` [il(ins, 2''5
L5 -e Meester, D5, 0ersi7n, 6565, Claas, ?5H5D5, ?rei, BI $n t#e aueue 2or a
cada%er donor (idneZ transplantI neO rules and concepts in t#e
Curotransplant $nternational ?oundation5 =ep#rologZ -ialZsis
:ransplantation 15,9, 999-998, 2'''5
1'5 Curopean +ioin2ormatics $nstitute, #ttpIVVOOO5ebi5ac5u(VimgtV#la
115 6il(s, [5.5, 6ore, H5M5, +radleZ, +5A5, Matc#abilitZ in (idneZ
transplantation5 :issue Antigens@ 92I121-12L, 1L885
125 Hari#aran, H5, Mc+ride, M5A5, C#eri(#, [5H5, :olleris, C5 +5,
+resna#an, +5 A5, and Do#nson, C5 05, 0osttransplant renal 2unction in
74
t#e "rst Zear predicts long-term (indeZ transplant sur%i%al5 Eidnei
$nt5 2, 911-918, 2''25
195 Harrison, D, =a%arrete, C5, Helection o2 0latelet -onors and
0ro%ision o2 HLA Matc#ed 0latelets, in Histocompatibilitz :esting5
$mperial Collage 0ress, 2'''@ 9JL
115 HerczZ(, [5?5, Luminex, Xendor ?orum, AHH$ /uarterlZ, 1'1,
:#ird /uarter, 2''95
155 DaneOaZ, C5A5, :ra%ers 0I Antigen recognition bZ : lZmp#ocZtes5
Cd 9 $mmunobiologZ 11-1, 1LLJ, 6arland 0ublis#ing, =eO Mor( and
London5
15 Derius, D5 :5, :aZlor, .5 D5, Murillo, -5, and Leone, D5 05 -ouble renal
transplants 2rom marginal donorsI 2-Zear results5 Dournal o2 BrologZ,
19, 129-125, 2'''5
1J5 Do#nson, A5H5, Eato%ic#, HurleZ5 C5, Hartzman, .5D5, [ade, D5A5,
Human LeucocZte Antigen I :#e Ma7or HistocompatibilitZ Complex o2
Man, 1', L2J-L1, in Clinical -iagnosis and Management bZ
LaboratorZ Met#ods, Do#n +ernard HenrZ, M5-5, 2''1, Haunders,
:Oentiet# Cdition5
185 Little, A-M5, 0ar#am, 0I 0olZmorp#ism and e%olution o2 class $
and class $$ genes and molecules5 .e%ieOs in $mmunogenetisc,
1b1'5-129, 1LLL5
1L5 Lucas, -505, 0aparounis, M5L5, MeZers, L5, Mart, D5M5, cac#arZ,
A5A5,I -etection o2 HLA class $ speci"c antibodies bZ t#e /ui(Hcreen
CnzZme-Lin(ed $mmunosorbent AssaZ5 Clin Lab -iagn Lab $mmunol,
1LLJ@1I252
2'5 Luminex Corporation, 1LL8-2'''5 Luminex 1'' Bser Manual
Xersion 15J .e% +5
215 Mars#, H565C5, 0ar#am, 05 +arber5, +arber L5-5, :#e HLA
?acts+oo(, Academic 0ress, 2'''5
225 Moore, H5+5, 0loeger, =5A5, -e6oeZ, H5.5,I HLA antibodZ
screeningI Comparison o2 a solid p#ase enzZme-lin(ed immunoassaZ
Oit# antiglobulin augmented lZmp#ocZtotoxicitZ5 :ransplantation
1LLJ@ 1I11J5
295 =Zberg, H5 L5, Matas, A5 D5, Eremers, [5 E5, et5 al5 $mpro%ed
scoring sZstem to assess adult donors 2or cada%er renal
transplantation5 American Dournal o2 :ransplantation5 9, J15-J21,
2''95
215 .#odes, -5A5, :roOsdale, D5I 6enetics and molecular genetics o2
t#e MHC5 .e%ieOs in $mmunogenetics, 1I21-91, 1LLL5
255 .odeZ 6lenn C5 HLA +eZond :ears5 -e =o%o, $nc5 2'''@2195
25 Hanger Centre, #ttpIVVOOO5sanger5ac5u(5VH60VC#rVMHCVs#tml
75
2J5 :#elan, -5, .odeZ, 65, American HocietZ o2 HistocompatibilitZ and
$mmunogenetics LaboratorZ Manual, edn5 Lenxa, E5HI AHHM5
285 :roOsdale, D5 $mmunogenetics 11,1-1J,1LL55
2L5 :roOsdale, D5 $n HLA and MHCI 6enes, Molecules and ?unction
)+roOning, M5 And McMic#ael, A5 Cds,, 1LL, +ios Hcienti"c
0ublis#ers, Ax2ord5
9'5 [illiams, :5M5, Human LeucocZte Antigen 6ene 0olZmorp#ism
and t#e HistocompatibilitZ LaboratorZ, :#e Dournal o2 Molecular
-iagnostics, 9, 9, 2''15
915 [u7cia(, :5, Apelz, 65, Matc#abililtZ as an important 2actor 2or
(idneZ allocation according to t#e HLA Matc#5 :ransplantation
0roceedings@ 2JI 11'9-11'5, 1LLJ5
925 cac#arZ, A5A5, -elaneZ, =5C5, Lucas, -505, Ladell, M5H5,
C#aracterization o2 HLA Class $ Hpeci"c Antibodies bZ CL$HA Bsing
Holubilized Antigen :argetsI $5 C%aluation o2 t#e 6:$ /ui(-$- AssaZ
and AnalZsis o2 AntibodZ 0atterns5 Human $mmunologZ 2''1@ 2I9,
228-295
EVALUAREA IMUNOLOGICK IN
TRANSPLANTUL HEPATIC
CCCCCCCCCCCCCCC CCCCCCCCCCCCCCC
Ana Mo!se/ Ileana Consan!nes"#
76
0rimul transplant de "cat la om, a 2ost realizat <n 1L9 de
ctre ec#ipa c#irurgical condus de dr5 :#omas Htarzl, <n
-en%er, HBA5 >n ciuda per2ecionrii continue a te#nicilor
c#irurgicale, transplantul #epatic a rmas la ni%el
experimental, cu o rat a supra%ieuirii la un an de cca5 25T,
p&n prin anii N8' c&nd a 2ost introdus Ciclosporina ca
tratament imunosupresor5
bi <n prezent, de!i rata supra%ieuirii la 1an a a7uns la 8' *
85T !i continu s se <mbunteasc, transplantul de "cat
rm&ne o procedur 2ormidabil dar gre%at de complicaii
2rec%ente5
>n general, a2eciunile #epatice care induc necesitatea
unui transplant, pot " di%izate <n dou grupeI
0 aDe":!#n! a"#eI cum ar " #epatitele %irale 2ulminante5
0 aDe":!#n! "'on!"eI #epatite %irale cronice, #epatite
autoimune, #epatopatii
alcoolice )indicaie contro%ersat, condiionat de abstinena
pretransplant,, ciroz biliar primiti%, colangit
sclerozant, boli metabolice )boala [ilson ,5
:ransplantul #epatic este limitat de numrul de organe
cada%erice disponibile5 >n ultimii ani, numrul organelor
disponibile de la cada%ru a rmas relati% stabil, <n timp ce
numrul pacienilor <nscri!i anual pe lista de a!teptare pentru
transplantul #epatic este <n continu cre!tere5
Aceast discrepan <ntre organele disponibile !i ne%oia
de transplant a condus la ree%aluarea continu a criteriilor de
selecie !i includere pe lista de a!teptare5 >n prezent, scorul
MCL- )Model 2or Cnd-Htage Li%er -isease, este recomandat,
deoarece se bazeaz pe 9 parametri bioc#imici obiecti%i, larg
disponibili !i reproductibili )bilirubina seric, creatinina seric
!i $=. protrombin,, iar pentru populaia pediatric se
utilizeaz un model similar, scorul 0CL- )0ediatric Cnd- Htage
Li%er -isease, care 2olose!te urmtoarele %ariabileI %&rsta,
albumina seric, bilirubina seric total, $=. !i retardul
statural5 31, 2, 9, 14
77
on"tori m"r'in"!i0
3. %&rst ^ 5' aniI de!i %&rsta <naintat a donatorului se
poate asocia cu 2uncia de"citar a gre2ei, lipsa de organe
!i e%oluia 2a%orabil post-transplant par s 7usti"ce
numrul <n cre!tere al donatorilor ^ 5' ani5354
%. steatoza #epaticI "catul cu in"ltrare gras u!oar sau
moderat poate " utilizat cu rezultate bune dac timpul de
isc#emie rece este redus534
?. mar(eri poziti%i pentru %irusul #epatitic + sau CI gre2ele
pro%enind de la donatori cu mar(eri de in2ecie XH+ sau
XHC pot " utilizate la receptori cu ciroz secundar
in2eciei XH+, respecti% XHC, dac se administreaz
tratament pro"lactic speci"c53J,84
Tr"n#*!"nt$! c$ ,c"t ;m*(r8it @s)l! l!Ce'
'ans)lana!on ,G un "cat de la cada%ru este <mprit <n dou
gre2e 2uncionale, lobul drept "ind 2olosit pentru un receptor
adult, iar lobul st&ng )segmentele 2, 9 !i 1, sau segmentul
lateral st&ng )segmentele 2 !i 9, pentru un adult scund sau un
copil5 Ma7oritatea centrelor consider c <mprirea in io
este superioar celei ex io dac sunt luate <n considerare
rezultatele !mediate !i pe termen lung5 0rincipalul deza%anta7
al te#nicii cu "cat <mprit const <n supra%ieuirea mai mic a
gre2ei !i numrul crescut de complicaii biliare comparati%e cu
transplantul #epatic integral5
Tr"n#*!"nt$! Be*"tic ;n &omino reprezint situaia <n
care un pacient cu o a2eciune genetic !i "cat normal
mor2ologic )de exemplu, amiloidoz 2amilial, prime!te un "cat
de la donator cada%ru, iar "catul pacientului cu amiloidoz este
transplantat unui receptor marginal a%&nd <n %edere c
apariia mani2estrilor amiloidozei 2amiliale apar dup o
perioad lung )2'-9' ani,53L4
Tr"n#*!"nt$! Be*"tic c$ &on"tor .i$ )li%ing donor li%er
transplantation- L-L:,5 Cste o metod bazat pe capacitatea
remarcabil de regenerare a "catului5 -in punct de %edere
istoric, metoda se adresa iniial prinilor ce a%eau copii cu
78
a2eciuni #epatice !i care erau dispu!i s le doneze o poriune
din "catul lor sntos, dar <n prezent se e2ectueaz si
transplantul adult * adult5 ?icatul donatorului se regenereaz
!i este 2uncional 1''T <n circa 1 * sptm&ni5
Aanta!ele L5L@ sunt4 scurtarea perioadei de a!teptare@
posibilitatea alegerii momentului optim, <nainte de apariia
deteriorrii progresi%e a 2unciei #epatice !i condiiei
pacientului@ scderea timpului de isc#emie rece@ cre!terea
rezer%orului de donatori@
5ezaanta!ul ma!or al L5L@ este morbiditatea de aproximati%
1'T !i, <n cazuri rare )'52-'55T,, mortalitatea donatorului 31'-
1945
Compatibilitatea donator ) primitor n transplantul hepatic
0otri%irea dintre donator !i receptor implic doi 2actoriI
1. $r$*$! #"n'$in0 donatorul trebuie s aib grupul
sanguin compatibil dar nu neaprat identic cu al
primitorului5 :otu!i, studiile au artat c un transplant
izogrup o2er o supra%ieuire mai bun dec&t un
transplant cu grup compatibil5
2. &imen#i$ne" cor*$!$i @?o.Q s!6eAI este 2oarte di"cil s
introduci "catul unei persoane bine dez%oltate <n corpul
unei persoane de statur mic !i ca urmare )o'!C!'ea
.!(ens!#n!lo' -n'e )'!(!o' 1! .onao' ese
esen:!al+%
Hpre deosebire de transplantul de rinic#i sau de mdu%
osoas, <n transplantul #epatic, compatibilitatea HLA nu este
necesar cu toate c a 2ost raportat o relaie in%ers <ntre
compatibilitate !i supra%ieuire 31145 Aricum, genotiparea HLA
se e2ectueaz numai <n scopuri !tiini"ce nu !i <n scopul
alocrii alogre2elor #epatice5
79
6enotipul HLA -.+1Y11 este asociat <n J'T din cazurile
de transplant #epatic cu episoade de re7et acut !i cu cre!terea
ni%elului seric al neopterinului, $L-1F, $L-2., $L-85
6enotipul HLA -.+1Y19 este asociat cu in2ecii XHC
posttransplant !i sepsis5
Crossmatc#-ul nu se per2ormeaz de rutin preoperator
dar, ocazional, poate " realizat retrospecti%5 Au 2ost raportate
numai c&te%a cazuri de re7et #iperacut datorate prezenei
anticorpilor anti-donor5 Moti%ul acestei aparente rezistene a
"catului la re7et #iperacut nu este <nc pe deplin cunoscut5 H-a
sugerat c "catul nu este sensibil la anticorpii pre2ormai sau
c, datorit dimensiunilor sale mari, rezult o diluie a
anticorpilor la ni%ele la care ei nu mai sunt noci%i5
Acazional, <n cazul unor transplante combinate, "cat !i
rinic#i, crossmatc#-ul poziti% pretransplant s-a negati%at
posttransplant5 -ou ipoteze au 2ost lansate <n ce pri%e!te
mecanismul prin care se produce aceast scdere a ni%elului
anticorpilor citotoxiciI 1, 2ormarea de complexe imune solubile@
2, pierderea de s&nge asociat operaiei de transplant #epatic
ce determin o scdere a titrului anticorpilor 31145

*oala acut" de gre+" contra gazd" (,H-) n transplantul hepatic
?icatul 2ace parte din sistemul reticuloendotelial, este un
organ mare cu o reea %ascular <ntins !i care conine <n
parenc#im un numr mare de celule lim2oide5 He estimeaz c
numrul lim2ocitelor din parenc#imul unei gre2e #epatice este
mult mai mare dec&t cel dintr-o gre2 de mdu% osoas5
6XH- acut posttransplant #epatic apare c&nd lim2ocitele
imunocompetente ale donatorului, trans2erate odat cu "catul,
sunt acti%ate !i su2er o expansiune clonal5 Mecanismul intim
al acestui proces nu este <nc bine cunoscut5 Lezarea "catului
datorat mane%relor c#irurgicale ar induce o stare de
80
imunosupresie !i alterarea raportului cito(inelor :H1V:H25
.ecent, o mai mare atenie se acord lim2ocitelor : reglatoare
C-1
;
C-25
;
, deoarece ele 7oac un rol important <n
imunoreglare !i imunotoleran, "ind capabile s in#ibe
2unciile lim2ocitelor : C-1
;
, C-8
;
!i a celulelor =E 31545
-iagnosticul precoce al acestei a2eciuni !i strategia
terapeutic reprezint o pro%ocare, <ntruc&t rata de mortalitate
este <nc mare, <n 7ur de 85T5 -in 2ericire incidena acestei
boli este sczut, 1 * 2T, !i pare s "e inSuenat de mai muli
2actori ce in at&t de donator c&t !i de primitorI
compatibilitatea HLA, %&rsta <naintat a primitorului,
imunode"ciena primitorului 31, 1J,1845
Legat tot de aceste lim2ocite imunocompetente ale
donatorului, trans2erate primitorului odat cu organul
transplantat, se descrie a!a-numitul Rs!n.'o( al l!(Do"!elo'
)asa$e'eR @SLPA 31L45
Acest sindrom se re2er la 2enomenul de #emoliz
aloimun mediat de complement, datorat produceiei de
anticorpi antieritrocitari de ctre lim2ocitele + cu memorie ale
donatorului5 ?aptul c acefti anticorpi pro%in de la donator a
2ost demonstrat prin teste de alotipizare a imunoglobulinelor5
-e obicei, speci"citatea este 2ae de antigene eritrocitare
ale sistemelor A+A fi .# si doar ocazional 2ae de antigene
aparein&nd altor sisteme eritrocitare ) Eidd, LeOis ,, situaeie
<nt&lnit atunci c&nd donatorul a 2ost sensibilizat prin trans2uzii
sanguine sau sarcin5 :ratamentul imunosupresor administrat
posttransplant 7oac un rol etiologic important5 Ciclosporina fi
tacrolimusul permit proli2erarea rapid a lim2ocitelor +
trans2erate, care %or produce anticorpi5
Cste o complicaeie raportat mai 2rec%ent <n cazul
transplantelor cu mismatc# minor A+A si poate " cauza unor
#emolize gneexplicateg aprute <n perioada postoperatorie5
$ncidenea HL0 bioc#imic )#aptoglobin sczut, transaminaze
81
fi bilirubin indirect crescute, <n transplantul #epatic este de
circa 9' * 1'T 5
-e obicei apare <n sptm&nile 1 * 9 posttransplant fi are
o e%olueie autolimitat cu remisiune complet <n circa 9 luni5
-intre 2actorii ce inSueneeaz se%eritatea #emolizei amintimI
cantitatea de eesut lim2oid trans2erat, ni%elul izoaglutininelor
eritrocitare la donator <nainte de transplant, capacitatea de
clearence a acestor anticorpi de ctre primitor 32'-2945
>n cele mai multe cazuri tratamentul implic doar
substituia cu mas eritrocitar, izogrup cu donatorul, i numai
rareori sunt necesare i alte mi7loace terapeuticeI
plasma2erez, $g intra%enos, corticosteroizi sau anticorpi
monoclonali anti C-2' ).ituximab, 32145
Monitorizarea pacientului posttransplant hepatic
ECal#a'e !(#nolo$!"+
?enomene de re7et post transplant #epatic pot " <nt&lnite
la peste 5'T din pacienti i sunt tratate relati% uor i cu
succes dac sunt diagnosticate precoce5 -in pcate, semnele i
simptomele clinice )2ebr, dureri abdominale, ascit,
#epatomegalie, inapeten , i testele paraclinice )creterea
ni%elelor serice ale bilirubinei, transaminazelor, 2os2atazei
alcaline, sunt nespeci"ce5
Bzual, diagnosticul se pune prin biopsie #epatic
percutan aspectul #istopatologic sugesti% "ind reprezentat de
in"ltratul celular mixt <n spaiul port, cu epiteliul ductelor
biliare i al %enei centraleVporte alterat5
A pro%ocare continu pentru imunologii !i cercettorii ce
acti%eaz <n domeniul transplantului, este descoperirea unor
noi mar(eri, c&t mai speci"ci !i c&t mai accesibili, care s
permit un diagnostic c&t mai precoce !i prin metode
nein%azi%e, a 2enomenelor de re7et5
82
Cito(inele :H1 !i alte cito(ine proinSamatorii, incluz&nd
:=?-G, $?=-h, $L-2, sunt mediatori primari ai re7etului alogre2ei
325,245 0e de alt parte cito(inele :H2, cum ar " $L-1 sau $L-
1', in#ib rspunsul :H1 !i compromite imunitatea gazdei, dar
promo%eaz tolerena transplantului )2J,5
>n plus, lim2ocitele : #elper, sub aciunea :rans2orming
6roOt# ?actor ) :6?-F , !i a $L-, se pot di2erenia <ntr-un
subset de celule ce secret $L-1J, cito(in recent recunoscut
ca inductoare a rspunsurilor inSamatorii5
$L-1F, $L-2., $L-, $L-8, :=?-G !i neopterina seric
reprezint indicatori "deli ai rspunsului imun mediat celular
la pacienii cu transplant #epatic !i din acest considerent sunt
mar(eri imunologici prognostici pentru 2enomenul de re7et
acut5
Algoritmul immunologic de e%aluare posttransplant
trebuie s cuprind, <n mod obligatoriu, cel puin determinarea
$L-2., :=?-G !i neopterinei pentru o monitorizare imunologic
de acuratee, care s o2ere o imagine c&t mai "del asupra
rspunsului imun celular5
C%aluarea imunologic este cu at&t mai important <n
condiiile imunosupresiei cu in#ibitor de calcineurin !i <n cazul
in2eciilor posttransplant induse de %irusuri din 2amilia
#erpes%iridae care, la r&ndul lor, manipuleaz rspunsul imun
al gazdei5
ECal#a'ea C!'#solo$!"+
C%aluarea %irusologic pre fi posttransplant este 2oarte
important pentru monitorizarea pacieneilor cu transplant
#epatic5
.ecurena a2eciunii iniiale post-transplant este o pro%ocare
ma7or pentru #epatolog5
83
A2eciunea care ridic cele mai importante probleme
legate de recidi%a post-transplant este in2ecia cu XHC5
.ein2ecia gre2ei cu XHC este uni%ersal, recurena #istologic
"ind notat la 5'-8'T din pacieni la 1 an post-transplant5 A
proporie de 15-9'T dintre pacienii cu #epatit cronic C
recurent dez%olt ciroz #epatic la 5 ani post-transplant5
A serie de 2actori se asociaz cu riscul #epatitei XHC
recurente post-transplantI <ncrctura %iral mare pre-
transplant !i precoce posttransplant, genotipul 1b !i 1, anumite
antigene HLA ) HLA -.+1Y19 ,, timpul de isc#emie rece
prelungit, steatoza se%er )^ 9'T,, asocierea carcinomului
#epatocelular, %&rsta donatorului ^ 5' ani, tipul de
imunosupresie )utilizarea AE:9,, numrul episoadelor de re7et
acut tratate cu bolusuri de metilprednisolon, tratamentul
re7etului cu anticorpi anti-lim2ocitari, in2ecia cu %irusul
citomegalic, absena coin2eciei XH+ pretransplant 3,L,28,2L45
.areori recurena in2eciei XHC se asociaz cu 2orme
agresi%e de #epatit ce pot duce la pierderea gre2ei, iar c&te%a
rapoarte recente sugereaz c incidena i se%eritatea
recurenei sunt mai crescute <n cazul transplantului de "cat de
la donatori %ii 39145
Cradicarea in2eciei XHC pre-transplant reprezint
modalitatea optim de pro"laxie a in2eciei gre2ei5 .egimul
anti%iral optim pentru tratamentul #epatitei C recurente post-
transplant este regimul combinat inter2eron, pre2erabil
pegZlat, plus riba%irin5 -urata !i doza optim a "ecrui agent
anti%iral nu sunt <nc standardizate5 .etransplantarea
pacienilor cu in2ecie XHC recurent rm&ne contro%ersat
datorit rezultatelor slabe5
0&n <n urm cu aproximati% o decad, pacienii
transplantai pentru ciroz de etiologie XH+ prezentau cel mai
ne2a%orabil prognostic dintre toi pacienii transplantai pentru
a2eciuni #epatice non-maligne cu o proporie de J9T din
decesele <nregistrate <n primele ' zile posttransplant5
84
.ein2ecia XH+ a gre2ei se poate produce cu particule
XH+ circulante, cu particule %irale pro%enind din sursele de
replicare extra#epatice ale XH+ )sistemul #ematopoetic,
pancreas, sau ambele5
?actorii asociai cu o rat de rein2ecie mai mic i cu
<mbuntirea supra%ieuirii posttransplant includ 3914I
1. 'e)l!"a'e C!'al+ a?sen+ @a?senSa -n se' a ADN0HBV
T!Hsa# A$HBeAU
2% )'o*la,!a )e e'(en l#n$ a 4e)a!e! VHBU
2% 4e)a!a HBV D#l(!nan+U
4. "o!nDe"S!a "# C!'#s .ela @VHDAU
Combinaia imunoglobulin speci"c anti-XH+ )H+$6,-
lami%udin reprezint <n momentul actual regimul pro"lactic
pre2erat <n ma7oritatea centrelor de transplant #epatic din
lume, "ind asociat cu o rat de rein2ecie cuprins <ntre ' !i
L55T 39', 924, iar rata de supra%ieeuire la 5 ani a acestor
pacienei este asemntoare cu a pacieneilor transplantaei
pentru alte a2eceiuni non-%irale5 Monoterapia cu H+$6 sau
lami%udin se asociaz <ns cu dez%oltarea de mutaii ce
con2er rezisten la tratament )mutaii <n gena H pentru H+$6
sau mutaii <n gena 0 a polimerazei %irale * mutaii MM--
pentru lami%udin,5
.etransplantare pacieneilor cu in2eceie XH+ recurent
poate " realizat cu succes dac se asociaz o terapie
anti%iral fi cu H+$6 <n doze crescute5
C!o(e$aloC!'#s#l @CMVA este un patogen 2rec%ent
implicat <n in2eceiile posttransplant, contribuind semni"cati% la
crefterea morbiditeii fi mortaliteii <n transplantul de organe
solide5 Bn risc mai mare de a dez%olta in2eceie primar
simptomatic prezint primitorii seronegati%i care au a%ut un
donator seropoziti%5 Alei 2actori de risc pentru acti%area CMX
suntI tipul de organ transplantat, mismatc#-ul HLA dintre
85
donator fi primitor, intensitatea terapiei imunosupresoare,
sexul 2eminin5
0e l&ng e2ectul direct determinat de in%azia eesuturilor,
CMX este implicat <n patogeneza re7etului acut sau cronic fi
de asemenea crefte riscul de recurene al in2eceiei XHC si
scade supra%ieeuirea global a pacientului fi a gre2ei 39945
A do%ad a rolului 7ucat de CMX <n re7etul alogre2ei este
obser%aeia c terapia pro"lactic fi anti%iral <mbunteefte
2unceia gre2ei fi in#ib re7etul acut5 -efi reacti%itatea imun <n
in2eceiile CMX a 2ost intens studiat <n ultimii ani, mecanismul
imunologic prin care CMX induce re7etul alogre2ei rm&ne
contro%ersat5 Bna din ipoteze suseine c lim2ocitele : CMX-
speci"ce, cu poteneial citotoxic fi productoare de cito(ine
proinSamatorii, cum ar " :=?-G, pot reaceiona direct cu
anumite complexe CMHVpeptide alogene, proces cunoscut sub
denumirea de gimunitate #eteroloagg5 A alt ipotez se re2er
la stimularea indirect a aloimuniteii5 $n2eceia CMX induce
produceia local de cito(ine proinSamatorii, cum ar " :=?-G,
$L-1, $L-, $L-8, sau c#emo(ine CC fi C]C, care determin
recrutarea fi acti%area leucocitelor din gre2 )91,95,5
Cste de7a bine cunoscut rolul pe care <l 7oac imunitatea
celular <n controlul in2eceiei5 Concentraeiile crescute de
neopterin reSect rspunsul imun mediat celular fi <n
in2eceiile produse de CMX sau C+X, 2iind un mar(er imunologic
2oarte util <n diagnosticul acestor in2eceii la pacieneii cu
transplant #epatic, deoarece ni%elele serice de neopterin
cresc <n stadiile timpurii ale acestor in2ecei, de obicei c#iar
<nainte de serocon%ersie5
BIBLIOGRAFIE
15 ?orman LM, LuceZ M.5 0redicting t#e 0rognosis o2 C#ronic Li%er
-iseaseI An C%olution ?rom C#ild to MCL-5 Hepatolog: 2''1@ 99I
1J9-5
86
25 6arcia-:sao 6, Cl2erin( .A5 MCL-I t#e end o2 C#ild-0ug#
classi"cationi A Hepatol 2''2@ 9I 111-5
95 Eamat# 0H, [iesner .H, Malinc#oc M et al5 A model to predict
sur%i%al in patients Oit# endstage li%er disease5 Hepatolog: 2''1@
99I 11-J'
15 [iesner ., CdOards C, ?reeman . et al5 :#e model 2or end-stage
li%er disease )MCL-, and allocation o2 donor li%ers5
>astroenterolog: 2''9@ 121I L1-
55 Hoo2nagle DH, Lonbardero M, cetterman .E et al5 -onor age and
outcome o2 li%er transplantation5Hepatolog: 1LL@ 21I 8L-L
5 Eeedee C+5 Helection o2 patients 2or li%er transplantation5 $n
@ransplantation of the Lier, edited bZ MaddreZ [C, Hc#id C.,
Horrell M?5 Lippincott [illiams ` [il(ins 2''1@ 5-91
J5 Xergas HC, Las(us :, [ang L? et al5 Autcome o2 li%er
transplantation in #epatitis C %irusin2ected O#o recei%ed #epatitis C
%irus-in2ected gra2ts5 >astroenterolog: 1LLL@ 11JI11L-59
85 -odson H?, +on#am CA, 6eller -A et al5 0re%ention o2 de no%o
#epatitis + in2ection in recipients o2 #epatic allogra2ts 2rom anti-
H+c positi%e donors5 @ransplantation 1LLL@ 8I 1'58-1
L5 [iesner .H, .a(ela D, $s#itani M+ et al5 .ecent Ad%ances in
Li%er :ransplantation5 7a:o "lin /roc 2''9@ J8I 1LJ-21'
1'5 American HocietZ o2 :ransplant Hurgeons/ Ct#ics Committee5
0osition paper on adult-to adult li%ing donor li%er transplantation5
Lier @ranspl 2'''@ I 815-81J
115 +roering -C, Hternec( M, .ogiers ]5 Li%ing donor li%er
transplantation5 A Hepatol 2''9@ 98I H11L-H195
12% .enz D?, .oberts D05 Long-term complications o2 li%ing donor
li%er transplan-tation5 Lier @ranspl 2'''@ ) suppl 2,I HJ9-HJ
19% 6#obrial .M, Haab H, Lassman C et al5 -onor and recipient
outcomes in rig#t lobe adult li%ing donor li%er transplantation5 Lier
@ranspl 2''2@ 8I L'1-L'L
115 Mani((am H, Htoc( 0, et al5 Clinical transplantation, in 7edical
Immunolog:, tenth edition edited bZ 0arsloO :6, Htites -0, :err A$,
$mboden D+5 Mc6raO-Hill 2''1@ J1L-J12
87
155 Cdinger M/ Hodman 0, Crmann D, et al5 C-1
;
C-25
;
regulatorZ
: cells preser%e gra2t*%ersus-tumor acti%itZ O#ile in#ibiting gra2t
%s5 #ost disease a2ter bone marroO transplantation5 Bat 7ed 2''9@
LI1111 -5'
15 0erri ., Assi M, :alOal(ar D, et al5 6ra2t %s5 #ost disease a2ter
li%er transplantation I a neO approac# is needed5 Lier @ranspl
2''J@ 19I 1'L2-L
1J5 Hmit# -M, Agura C, =etto 6, et al5 Li%er transplant- associated
gra2t %s5 #ost disease5 @ransplantation 2''9@ J5I118-2
185 C#an CM, Larson AM, 6erns#eimer :+, et al5 Lier @ranspl
2''J@ 19I 51-22
1L5 Audet M, 0anaro ?, 0iardi :, et al5 0assenger LZmp#ocZte
HZndrome and Li%er :ransplantation5"linical and 5eelopmental
Immunolog: 2''8@
2'5 Mazer MH and :riulzi -D $mmune #emolZsis 2olloOing A+A-
mismatc#ed stem cell or solid organ transplantation Current
Apinion in Hematolog: 2''JC11, ,1* J'5
215 Hternberg A D, Lee 6, Croxton :, et al5 He%ere #emolZsis a2ter
minor A+A unmatc#ed (idneZ transplantja non-secrector
transplanted 2rom a donor Oit# #ig# anti-A titre5 @ransfusion
7edicine2'''@1'@1, 8J*8L
225 Ho(ol .D, Htamps ., +oo(er -D, et al55 0osttransplant immune-
mediated #emolZsis @ransfusion 2''2 , %ol5 12, no5 2, pp5 1L8*2'1
295 H#ortt D, [estall 60, .oxbZ -, et al5 A kdangerousN group A
donorI se%ere #emolZsis in all recipients o2 organs 2rom a donor
Oit# multiple red cell alloantibodies5 American Aournal of
@ransplantation, %ol5 8, no5 9, pp5 J11*J11, 2''85
215 0anaro ?, -eC#ristop#er 0D, .ondelli -, et al5 He%ere #emolZtic
anemia due to passenger lZmp#ocZtes a2ter li%ing-related boOel
transplant "linical @ransplantation 2''1@ 18, 9, 992*995
255 Amirzargar A, Lessanpezes#(i M, ?at#i A, et al5 :H1V:H2
cZto(ine analZsis in $ranian renal transplant recipients5 @ransplant
/roc 2''5@ 9J)J,I 2L85-J
25 Lessanpezes#(i M, Amirzargar A, ?at#i A, et al5 Xalue o2
pretransplantation cZto(ine pro"les 2or predicting acute re7ection in
renal transplant recipients5 @ransplant /roc 2''5@ 9J)J,I 2L82-5
88
2J5 Moore E[, de [aal Male2Zt ., Codman .L, et al5 $nterleu(in-1'
and t#e interleu(in-1' receptor5 Annu 'e Immunol 2''1@ 1LI89-
J5
285 6#eorg#e L, 6#eorg#e C5 :ransplantul #epaticI indicaii,
contraindicaii, selecia pacienilor, e%aluare !i alegerea
momentului optim5 'eista pentru )ducaDie 7edical "ontinu
2''2@ 1I 1'J-1115
2L5 0once M, +erenguer M, 0rieto M et al5 H#ould Oe discard old
donors 2or #epatitis C candidatesi :#e importance o2 donor
steatosis5 Hepatolog: 2''9I 98I 22A5
9'5 Han HH, A2man D, Holt C et al5 An edicacZ and cost-edecti%eness
analZsis o2 combination #epatitis + immune globulin and lami%udine
to pre%ent recurrent #epatitis + a2ter ort#otopic li%er
transplantation compared Oit# #epatitis + immune globulin
monot#erapZ5 Lier @ranspl 2'''@ I J11-J185
915 $mperial DC, Eeede C+5 Li%er transplantation in Handboo2 of
lier disease, second edition, edited bZ LaOrence H5 ?riedman,
Cmmet +5 Eeede, C#urc#ill-Li%ingstone, 2''1@ 1'1-115
925 .ao [, [u ], ]iu -5 Lami%udine or lami%udine combined Oit#
#epatitis + immunoglobulin in prop#Zlaxis o2 #epatitis + recurrence
a2ter li%er transplantationI a meta-analZsis5 @ransplant
International 2''L@ 22 )1,I 98J-9L5
995 .azonable ..5 CZtomegalo%irus in2ection a2ter li%er
transplantationI current concepts and c#allenges5 Eorld
>astroenterolog: 2''8@ 11)91,I181L-'
915 .ein(e 0, 0rosc# H, Eern ?5 Mec#anisms o2 #uman
cZtomegalo%irus )re,acti%ation and its impact on organ transplant
patient5 :ranspl $n2ect -is 1LLL@ 1)9,I 15J-1
955 Adams A+, [illiams MA, et al5 Heterologous immunitZ pro%ides
a potent barrier to transplantation tolerance5 D Clin $n%est 2''9@
111)12,I 188J-L5
89
EVALUAREA IMUNOLOGICK IN
TRANSPLANTUL MEDULAR
CCCCCCCCCCCC CCCCCCCCCCCC
Ana Mo!se/ Ileana Consan!nes"#
>n prezent, transplantul autolog sau alogeneic de celule
stem #ematopoietice ) :CHH ,, reprezint o opiune
terapeutic bine*cunoscut, a%&nd un loc bine stabilit <n
algoritmul de tratament al multor a2eciuniI a2eciuni
#ematologice congenitale sau dob&ndite, tumori solide, boli
autoimune, amiloidoz, anomalii ereditare de metabolism 3145
90
Hursele de celule stem sunt reprezentate de mdu% osoas,
s&nge peri2eric, s&nge din cordonul ombilical5 .ezultatele
clinice obinute par s "e similare, indi2erent de surs, iar
alegerea modalitii de recoltare depinde de %&rsta
primitorului !iVsau donatorului, indicaia de transplant,
pre2erina donatorului, experiena !i dotarea centrului unde se
2ace transplantul5
.ezultatul unui :CHH depinde <n mare msur de
urmtorii 2actori de riscI stadiul bolii, inter%alul de timp scurs
de la diagnostic p&na la momentul transplantului, %&rsta
pacientului ) <n general, se obin rezultate mai bune la copii
dec&t la aduli ,, #istocompatibilitatea donator-primitor,
combinaia de sex donator-receptor ) riscul de re7et este mai
mare dac donatorul este 2emeie iar primitorul brbat, 5 -e
asemenea, exist un risc potenial de transmitere a unor boli,
de la donator la primitor, cum ar "I in2ecii, boli congenitale,
boli autoimune, cancere 3245
Stabilirea compatibilit"%ii HLA
?ederaia Curopean de $munogenetic ) C?$ , este 2orul
european ce de"ne!te standardele <n laboratoarele de
#istocompatibilitate !i stabile!te criteriile minime pri%ind
tipizarea HLA pentru :CHH de la donator <nrudit sau
ne&nrudit5
-ar, dac <n transplantul de organe solide, putem %orbi de
mismatc#-uri HLA QacceptabileR situaia este complet di2erit
<n cazul transplantului de mdu% osoas sau de celule stem5
Acest tip de transplant implic c#iar celulele sistemului imun !i
orice nepotri%ire <ntre donator !i receptor, c#iar i modi"carea
unui singur aminoacid <n situsul de recunoatere a antigenului,
poate determina 2enomene gra%e de re7et, "e <n sensul unei
boli gazd contra gre2 "e <n sens in%ers ca boal de gre2
contra gazd5
91
-eterminarea unui potenial donator implic o apreciere
riguroas a disponibilitii i statusului de potri%ire HLA a
membrilor 2amiliei, i identi"carea unui donator ne<nrudit
potri%it, dac nu exist donator <nrudit disponibil5 -eoarece
antigenele HLA determin un rspuns aloimun, potri%irea
HLA 7oac un rol pre%enti% critic <n reducerea riscului de
a2ectare a gre2ei i de apariie a bolii de gre2 contra gazd5
0e de alt parte, e2ectul de gre2 contra leucemie, asociat cu
mismatc#-ul HLA, reprezint un mi7loc imunologic de a reduce
riscul de recuren de boal la pacienii cu risc crescut5
Sele"D!a .onao'#l#! -n'#.!
Cel (a! a.e"Ca .onao' este un 2rate potri%it din punct
de %edere al genotipului HLA5
Con2orm recomandrilor C?$ este obligatorie tipizarea
imediat a HLA * A, +, -.+1 la toi membrii 2amiliei
disponibili5 $niial se poate 2ace un screening prin tipizare
2enotipic dar ulterior, la perec#ile compatibile 2enotipic,
tipizarea se de"niti%eaz prin metode de biologie molecular
de rezoluie <nalt care permit descrierea alelelor HLA la ni%el
de 1 digits5
:ipizarea A+-. poate con"rma identitatea genotipic
pentru <ntregul set de gene HLA ) potri%ire 12V12 ,5 -in cauza
unui slab Rdezec#ilibru de legareR <ntre locusul -0 !i locii
-.V-/, <n 1 * 2T din cazuri, datorit recombinrilor pot apare
mismatc#-uri -0 <ntre 2rai alt2el identici5 0robabilitatea ca un
2rate s "e identic HLA este de 25T, <n timp ce probabilitatea
unui 2rate #aploidentic este de 5'T5
Sele":!a .onao'#l#! ne-n'#.!
-ac un 2rate, identic din punct de %edere al genotipului
HLA, nu este disponibil, transplantul cu celule stem
#ematopoietice potri%ite HLA * A, +, C, -.+1V-/+1 de la un
donator ne<nrudit are aceleai rate de supra%ieuire 2r boal,
mai ales pentru pacienii cu risc sczut, dar se asociaz cu o
2rec%en crescut a complicaiilor posttransplant 39,145
92
Mismatc#-urile alelice de obicei implic di2erene <n situsul de
legare al peptidului, ceea ce inSueneaz recunoasterea
dependent de celulele :5
RHtandardul de aurR este reprezentat de tipizarea cu
rezoluie <nalt a locusurilor HLA * A, +, -.+1, -/+1, -0+15
-ac transplantul se 2ace pentru o a2eciune nemalign, nu
este necesar e2ectul de gre2 contra leucemie, mediat prin
incompatibilitatea -0, i potri%irea -0+1 poate " luat <n
considerare c&nd sunt disponibili mai muli donatori
compatibili HLA * AV+VCV-.V-/ )5,5
.ealizarea <n sigurane a transplanturilor de celule stem
de la donatori ne<nrudiei se datoreaz, <n mare parte,
progreselor obeinute <n domeniul imunogeneticii5 La <nceputul
anilor lL', stabilirea compatibilitii tisulare era st&n7enit de
metodele de tipizare HLA de rezoluie slab ) metode
serologice ,, <n special pentru alelele HLA de clasa $5 Htudiile
recente, bazate pe metode de tipizare de rezoluie <nalt
) metode moleculare ,, au artat c potri%irea la ni%el de alel
se asociaz cu rezultate mai bune oricare ar " regimul de
condiionare, mieloablati% sau de intensitate redus 3945
Aricum, importana relati% a "ecrui locus <n parte rm&ne o
problem discutabil5 >n timp ce e2ectul mismatc#-urilor
AV+VCV-.+1 a 2ost bine documentat prin multiple studii
retrospecti%e, rolul incompatibilitii -/ sau -0 rm&ne
contro%ersat5 -ate recente pri%ind transplantul de celule stem
cu depleie de lim2ocite :, de la donator ne<nrudit, arat c
matc#ing-ul HLA- -0+1 se asociaz cu risc crescut de recdere
independent de statusul de compatibilitate a celorlalte locusuri
345
.ezultate di2erite au 2ost raportate i <n studii ce implicau
pacieni de etnii di2erite5 >n populaia 7aponez, mismatc#-urile
AV+VCV-.+1 reprezint 2actor de risc semni"cati% pentru
6XH- acut de gradul $$$ sau $X, i numai di2erenele A, + sau
-.+1 se asociaz cu mortalitate crescut 3J45 Bn alt studiu din
HBA arat c nepotri%irile HLA-AV+VCV-.+1, dar nu i
93
mismatc#-urile -/ sau -0, se <nsoesc de o scdere a ratei de
supra%ietuire 3845
>n cazul potri%irii alelice HLA <n proporie de 8'-L'T, <n
completarea tipizrii HLA de <nalt rezoluie se e2ectueaz i
testul crossmatc#5 >n cazul <n care testul crossmatc# este
poziti%, acest 2apt nu reprezint o contraindicaie absolut
pentru transplantul medular, dar regimul imunosupresor
trebuie recon"gurat <n totalitate5
>n concluzie, toate aceste aspecte legate de potri%irea sau
nepotri%irea alelelor HLA, trebuie luate <n considerare, <n
2uncie i de particularitile clinico-biologice ale cazului care
urmeaz a " transplantat medular5
Sele"!a .onao'#l#! .!n ?an"a .e s9n$e .!n "o'.on#l
o(?!l!"al
>n general, <n acest caz se 2ace tipizare HLA-AV+ cu
rezoluie 7oas i tipizare HLA--.+1 cu rezolutie <nalt i
matc#ing-ul se stabilete la acest ni%el, deoarece se pare c
incompatibilitile HLA sunt mai puin duntoare i cel mai
important parametru, de care depinde rezultatul
transplantului, este cantitatea de celule stem coninut de
unitatea de s&nge recoltat 3L45
A)'e"!e'ea )'o?a?!l!+S!! .e a $+s! #n .onao' ne-n'#.!
$denti"carea unui donator ne<nrudit potri%it la ni%el de
alele HLA, este un proces mare consumator de timp i bani5 0e
baza noilor cunotiine pri%ind 2rec%ena alelelor i
#aplotipurilor <n populaii di2erite, se apreciaz c urmtorii
parametri au un impact negati% )1',I
prezena unor alele rare la pacient ) +Y11'5 ,@
un #aplotip HLA-A+-. care nu se numr printre cele 1'
mai 2rec%ente #aplotipuri la populaia caucazoid@
asocieri +--. neobinuite ) ex5 +5--.+1Y'1'1 ,@
94
asocieri -.--/ neobinuite ) ex5 -.+1Y15'1--/+1Y''9
,@
prezena alelelor +Y2J'5, +18, +Y11'2, +Y11'9, +51 ce
se <nsoesc de un risc crescut de mismatc# HLA-C@
primitor i donator de etnii di2erite@
In "on"l#6!e( Histemul HLA, cu circa 1'' de speci"citi
de"nite serologic i peste 25'' de alele, reprezint o barier
ma7or <n transplantul de celule stem #ematopoetice5
Consensul actual este c, selectarea donatorilor ne<nrudii pe
baza genotiprii HLA prin metode moleculare de rezoluie
<nalt se <nsoete de cele mai bune rezultate5
-ac sunt disponibili mai muli donatori HLA identici, se
recomand alegerea unui brbat, A+A identic iVsau CMX
negati%5
Aricum, importanea "ecrui locus indi%idual rm&ne <nc o
problem desc#is, ce necesit o de"nire mai clar fi, <n acest
sens, o contribueie important %or a%ea studiile multicentrice5
-e asemenea, mai rm&ne de stabilit care este rolul pe care <l
7oac alei 2actori imunogenetici care pot " implicaei, cum ar "I
antigenele sistemului minor de compatibilitate, genele
cito(inelor fi c#emo(inelor, genele E$.5
enele ./0 i transplantul de celule stem hematopoetice
.eceptorii E$. )Eiller cell immunoglobulin-li(e receptors,
sunt molecule care 2ac parte din 2amilia imunoglobulinelor fi
care se gsesc pe supra2aea celulelor =E5 Locusul genelor E$.
se aS pe cromozomul 1L fi 2ace parte dintr-un complex mai
mare numit Complexul .eceptorului Leucocitar )leu(ocZte
receptor complex * L.C,5 -in punct de %edere structural,
receptorul E$. este constituit dintr-o poreiune extracelular, cu
2 sau 9 domenii imunoglobulinice )2- sau 9-,, fi o poreiune
intracelular, lung sau scurt, L )long, fi H )s#ort,5 E$.-urile
cu domeniul intracelular lung au o aceiune in#ibitoare asupra
95
celulelor =E, pe c&nd cele cu domeniul intracelular scurt
transmit semnale acti%atoare5
0rin interaciunea izotipurilor in#ibitoare cu anumite
molecule HLA de clasa $, celulele sntoase sunt prote7ate de
aciunea citolitic a celulelor =E5
Ast2el, receptorii E$. par 7oace un rol semni"cati% <n
controlul rspunsului imun, ceea ce explic asocierile
obser%ate <ntre anumite gene E$. i boli autoimune )artrita
reumatoid,, psoriazis, progresia in2eciei H$X 311, 12,1945
E$. 2-L1 au ca ligand alelele HLA-C de grup 2,
caracterizate prin prezena resturilor de lizin <n poziia 8' i
asparagin <n poziia JJ )CO2, CO1, CO5, CO,, pe c&nd E$.
2-L2 si 2-L9 recunosc alelele HLA-C de grup 1, cu
asparagin <n poziia 8' si serin <n poziia JJ )CO1, CO9,
COJ, CO8,5 E$. 9-L1 este receptor pentru alelele HLA-+O15
-eoarece sunt localizate pe cromozomi di2erii, genele
receptorilor E$. i liganzilor se transmit independent
descendenilor5 6enotipul HLA clasa $ determin <n "nal ce
repertoriu de receptori E$. %a " exprimat pe supra2aa
celulelor =E, ast2el <nc&t "ecare celul =E 2uncional s
exprime cel puin un receptor E$. in#ibitor pentru antigenele
HLA proprii5 Coexpresia a dou sau mai multe E$.-uri
in#ibitoare este mult mai rar 31145
Celulele =E care exprim receptori E$. pentru propriul
HLA de clasa $, dac <nt&lnesc celule cu un alt 2enotip HLA
)aa cum se poate <nt&mpla <n cazul unui alotransplant ,,
sesizeaz lipsa ligandului speci"c i mediaz alloreaciile
)Rmissing sel2R recognition, 31545
Aceste mismatc#-uri E$. - ligand apar deseori in
transplantul cu donator #aploidentic5 C&nd alloreacti%itatea =E
se exercit <n direcia donor * %ersus- primitor pare s aibe un
rol crucial <n <mbuntirea rezultatelor posttransplant
#aploidentic i se asociaz cu 314I
96
rat de recdere de boal, semni"cati% mai mic@
rat de supra%ieuire 2r e%enimente mai bun, at&t la
pacienii transplantai <n perioada de remisiune c&t i la
cei cu recdere de boal@
reducerea riscului global de recdere sau deces@
>n ceea ce pri%efte receptorii E$. acti%atori, liganzii lor
speci"ci nu sunt pe deplin cunoscuei5 He pare c exist o
interaceiune slab <ntre E$.2-H1 fi moleculele HLA-C LZs8' fi
<ntre E$.2-H2 fi moleculele HLA-C Asn8'5 Hpre deosebire de
E$.-urile in#ibitorii, cele acti%atoare prezint o mare %arietate
fi #eterogenitate <n populaeia general fi <n di%erse grupuri
etnice5
Circa 25T din caucazieni, care sunt #omozigoei pentru
afa-numitul #aplotip A, nu posed receptori E$. acti%atori,
restul, #omo- sau #eterozigoei pentru #aplotipul +, prezint
gene in#ibitorii fi %ariate combinaeii de gene acti%atoare5
>n cazul unui transplant de la donator cu =E aloreacti%e,
prezenea #aplotipului + la donator se asociaz cu scderea
incideneei mortaliteii legate de transplant, mortalitate
datorat <n special in2eceiilor5
.eceptorii E$. acti%atori stimuleaz secreeia de cito(ine
fi citotoxicitatea celulelor =E <mpotri%a celulelor in2ectate, <n
contextul abseneei sel2ului, fi de asemenea pot controla in2eceia
printr-un mecanism indirect rezultat din interaceiunea celulelor
=E cu celulele dendritice5 $n %i%o, aceast interaceiune
conduce la o creftere a raportului :#1V:#2 31J,1845
>n concluzie, crefterea numrului de transplante de celule
stem #ematopoetice cu mismatc# HLA este 2ezabil <n prezent,
<n condieiile unei <neelegeri c&t mai complete a mismatc#-urilor
RpermiseR fi a rolului genelor E$.5
97
/munogenetica non'HLA i transplantul de celule stem hematopoetice
-ei tipizarea HLA rm&ne elementul central <n selecia
donatorilor i este un 2actor determinant ma7or <n ce pri%ete
rezultatele obinute posttransplant, sec%enierea genomului
uman a rele%at existena a mii de polimor"sme genice )single
nucleotide polZmorp#isms, a cror semni"caie i importan
<n ce pri%ete transplantul autolog rm&ne <nc a " elucidat5
Pol!(o'*s(#l $enelo' "!o=!nelo'
Multe din polimor"smele genelor cito(ine apar in
regiunea reglatoare a genei i ast2el este inSuenat cantitatea
de cito(ine produs ca rspuns la un stimul in2ecios sau
allogeneic5
Htudiile inieiale s-au 2cut <n transplantul de organe solide
fi s-a demonstrat c pacieneii cu genotip #ig#-secretor de
:=?-G fi loO-secretor de $L-1' prezint risc mai mare de re7et
al gre2ei5 Blterior studiile au 2ost extinse fi <n transplantul de
CHH5
6XH- acuta este rezultatul eliberrii de cito(ine
proinSamatorii )$L-1, $L-, $L-8, :=?-G, <n timpul R2urtunii de
cito(ineR consecuti% radioterapiei fi c#imioterapiei din
regimul de condieionare5 La aceasta se adaug fi acti%area
lim2ocitelor : fi =E ale donatorului, acti%are urmat de
secreeia predominant de cito(ine de tip :#1 )$L-2, $?=-h, :=?-
G ,5
Cito(inele inSamatorii sunt de asemenea implicate <n
patogenia pneumoniei interstiiale, bolii %enoocluzi%e, <n
susceptibilitatea la in2ecii sau <n metabolismul
medicamentelor5
Bn studiu 7aponez, 2acut pe pacienei transplantaei de la
donatori potri%iei, ne<nrudiei, a artat o asociere <ntre
polimor"smul TNF0B72 s! B58 la donator fiVsau primitor fi o
incidene mai mare a 6XH- grad $$$-$X fi o rat mai mic de
98
recdere de boal 31L45 0olimor"smele TNF0; @020BA s! TNF0
< @V&079A s-au asociat cu complicaeii toxice 32'45
0olimor"smele IL0&0 0&0B2 T! 0592 determin aparieia a
trei posibile #aplotipuri care sunt loO-, intermediate- sau #ig#-
secretoare de $L-1'5 Haplotipul loO-secretor la primitor se
asociaz cu 6XH- se%er la pacieneii trataei numai cu
Ciclosporin sau Ciclosporin cu Met#otrexat fi cu
supra%ieeuire mai mic 32145
0olimor"smul IL07 0&83GHG la primitor se asociaz cu
6XH- acut fi cronic5
0olimor"smul IL0&; 0BB9 la donator sau la primitor se
asociaz cu <mbunteirea ratei de supra%ieeuire fi reducerea
mortaliteii legate de transplant 32245
An!$enele (!no'e .e 4!so"o()a!?!l!ae
6XH- care apare dup un transplant de la 2rate HLA
identic este iniiat de lim2ocitele : care recunosc antigene
minore de #istocompatibilitate ) peptide deri%ate din proteinele
intracelulare, codate de gene de pe cromozomi autozomali sau
de pe cromozomul M ,5 Bnele antigene )exI HA-1, HA-2, se
gsesc numai pe celulele sistemului #ematopoietic, iar altele
)exI H-M, HA-9, sunt exprimate ubicuitar pe esuturile normale5
Cele codate de gene de pe cromozomul M sunt implicate <n
transplantul cu mismatc# de sex5 =epotri%irile <ntre donator i
primitor pentru HA-1, HA-2, HA-1, HA-5 se asociaz cu
creterea incidenei 6XH- 32945
Ale $ene !()l!"ae -n a)a'!S!a "o()l!"aS!!lo'
)os'ans)lan @6XH-, episoade in2eceioase, includ 2amilia
supergenelor receptorilor #ormonilor steroidieni )printre care
receptorul pentru estrogen fi receptorul pentru %itamina -,,
genele care regleaz rspunsul gazdei la microorganisme
)mieloperoxidaza, receptorul ?ch,, genele :L.s ):oll-li(e
receptors care acti%eaz celulele prezentatoare de antigen,,
genele =A- )nucleotide-binding oligomerisation domain, 321-
245
99
/ncompatibilitatea A*O Ei suportul trans+uzional
Aproximati% 15 * 25T din perec#ile primitor * donator
2rate HLA-identic, sunt incompatibile A+A5 >n transplantul
mieloablati%, incompatibilitatea A+A se asociaz cu risc crescut
de <nt&rziere <n gre2area celulelor roii, aplazie eritrocitar
pur, #emoliz5 Mismatc#-ul A+A nu a2ecteaz gre2area
neutro"lelor, incidenea re7etului de gre2, progresia bolii sau
supra%ieuirea global 32J45
Po#ttr"n#*!"nt #e "&o*t( $rm(to"re" *o!itic(
tr"n#f$7ion"!(0
pentru incompatibilitate AF- ma!or )ex5 primitor grup '-
donator grup A, se utilizeaz mas eritrocitar de grup ',
indi2erent de grupul sanguin al donatorului sau
receptorului, p&n c&nd anticorpii A+A-speci"ci ai
primitorului sunt nedetectabili fi testul antiglobulinic este
negati%@
pentru incompatibilitate AF- minor )ex5 primitor grup A-
donator grup ', se utilizeaz mas eritrocitar de grupul
donatorului@
pentru incompatibilitate AF- ma!or Gi minor )ex5
primitor grup +-donator grup A, se utilizeaz mas
eritrocitar de grup ', p&n c&nd anticorpii A+A-speci"ci
ai primitorului sunt nedetectabili fi testul antiglobulinic
este negati% fi apoi se trece la grupul donatorului@
0econstituirea sistemului imun dup" transplantul de celule stem
hematopoetice
100
:ransplantul de celule stem o2er un model unic de
reconstituire imun gradual i ilustreaz per2ect relaia dintre
tipul imunode"cienei i in2eciile cu anumii patogeni 32845
$mediat dup regimul de condiionare apare o 2az de
aplazie p&n la regenerarea neutro"lelor de la donator5 >n
aceast 2az exist un risc 2oarte mare pentru in2ecii
bacteriene, 2ungice )aspergiloz,, %irale )<n special cu HHX,5
A doua etap, primele 9-1 luni, se caracterizeaz prin
re2acerea celulelor rspunsului imun <nscut )granulocite,
monocite, macro2age celule =E, i printr-o de"cien a
imunitii celulare5 $n2ecia CMX, datorat <n special
reacti%rii, reprezint cea mai mare problem <n aceast 2az
i, mai puin 2rec%ent apar in2ecii cu %irusuri
respiratoriiVenterice sau adeno%irusuri5
>n a treia etap, dup 1 luni, ma7oritatea pacienilor
prezint o de"cien a imunoglobulinelor, <n special $g625
.egenerarea lim2ocitelor +, C-1L; se realizeaz, de obicei, <n
decursul primului an posttransplant5 0rimitorii de transplant
alogeneic sunt <n mod particular %ulnerabili la in2ecii cu
bacterii <ncapsulate )H5 0neumoniae, H5 $nSuenzae,5
BIBLIOGRAFIE
15 L7ungman 0, Brbano-$spizua A, Ca%azzana-Cal%o M, et al5
Allogeneic and autologous transplantation 2or #aematological
disease, solid tumors and immune disordersI -e"nitions and
current practice in Curope5 Fone 7arro1 @ransplant 2''@ 9JI
19L-11L
25 =iederOeiser -, 6entilini C, Hegenbart B, et al5 :ransmission o2
donor illness bz stem cell transplantationI s#ould screening be
diderent in older donorsi Fone 7arro1 @ransplant 2''1@ 91I 5J-
5
95 0etersdor2 C[5 .is( assessment in #ematopoietic stem cell
transplantation5 Fest /ract 'es "lin Haematol 2''J@ 2'I 155-1J'
101
15 HurleZ CE, [agner DC, Hetter#olm M$, Con2er -L5 Ad%ances in
HLAI 0ractical implications 2or selecting adult donors and cord
blood units5 Fiol Flood 7arro1 @ransplant 2''@ 12I )1 Huppl 1,I
28-99
55 :iercZ DM5 :#e rol o2 HLA in HHC:5 @he )F7@ Handboo2, 5
t#
edition 2''8@ 1-L2
5 H#aO +C, Mars# H6, MaZor =0, et al5 HLA- -0+1 matc#ing status
#as signi"cant implications 2or recipients o2 unrelated donor stem
cell transplants5 Flood 2''@ 1'JI 122'-122
J5 Moris#ima M, Hasazu(i :, $no(o H, et al5 :#e clinical signi"cance
o2 HLA allele compatibilitZ in patients recei%ing a marroO
transplant 2rom serologicallZ HLA-A, +, -. matc#ed unrelated
donors5 Flood %&&%C LLI 12''-12'
85 ?lomenberg =, +axter-LoOe LA, Con2er -, et al5 $mpact o2 HLA
class $ and class $$ #ig# resolution matc#ing on outcomes o2
unrelated donor bone marroO transplantation5 Flood %&&H@ 1'1I
1L29-1L9'
L5 6luc(man C, .oc#a X5 -onor selection 2or unrelated cord blood
transplants5 "urr -p Immunol 2''@ 18I 55-5J'
1'5 :iercZ DM, +u7an-Lose M, C#apuis +, et al5 +one marroO
transplantation Oit# unrelated donorsI [#at is t#e probabilitZ o2
identi2Zing an HLA-AV+VCVOV-.+1V+9V+5V-/+1- matc#ed donori
Fone 7arro1 @ranspl 2''@ 2I 19J-111
115 [arrington ED, :a(emura H, 6oronzZ DD, [eZand CM5
C-1;,C-28- : cells in r#eumatoid art#ritis patients combine
2eatures o2 t#e innate and adapti%e immune sZstems5 Arthritis
'heum 11I19@ 2''15
125 Martin M0, =elson 6, Lee DH, 0ellett ?, et al5 HusceptibilitZ to
0soriatic Art#ritisI $nSuence o2 Acti%ating Eiller $g-Li(e .eceptor
6enes in t#e Absence o2 Hpeci"c HLA- C Alleles5 A Immunol
1LI2818@ 2''25
195 Martin M0, 6ao ], Lee DH, =elson 6[, -etels ., 6oedert DD,
+uc#binder H, Hoots E, Xla#o% -, :roOsdale D, et al5 Cpistatic
interaction betOeen E$.9-H1 and HLA-+ delaZs t#e progression to
A$-H, Bat >enet 91I12L@ 2''25
102
115 MaOata M, MaOata =, -rag#i M, et al5 .oles 2or HLA and E$.
polZmorp#isms in natural (iller repertoire selection and modulation
o2 edector 2unction5 A )xp 7ed 2''@ 2'9I 99-15
155 .uggeri L, A%ersa ?, Martelli M?, Xelardi A5 Haploidentical
transplantation and =E cells recognition o2 missing sel25 Immunol
'e 2''@ 211I 2'2-218
15 .uggeri L, Mancusi A, Capanni M, et al5 -onor =E cell
allorecognition o2 missing sel2 in #aploidenrical #aematopoietic
transplantation 2or acute mZeloid leu(emia5 C#allenging its
predicti%e %alue5 Flood 2''J@ 11'I 199-11'
1J5 Hmit# H.C, Heusel D[, Me#ta $E, et al5 .ecognition o2 a %irus-
encoded ligand bZ a natural (iller cell acti%ation receptor5 /roc Batl
Acad ,ci I,A 2''2@ LLI 882-8891
185 -egli Csposti MA, HmZt# MD5 Close encounters o2 diderent (indsI
-endritic cells and =E cells ta(e centre stage5 Bature 'eie1s
Immunolog: 2''5@ 5I 112-121
1L5 $s#i(aOa M, Eas#iOase E, A(aza :, et al5 polZmorp#isms in :=?A
and :=?.2 adect outcomes o2 unrelated bone marroO
transplantation5 Fone 7arro1 @ransplant 2''2@ 2LI 5L-5J5
2'5 Mullig#an C6, +ardZ 065 Ad%ance in t#e genomics o2 allogeneic
#aematopoietic stem cell transplantation5 5rug 5eelopment
'esearch 2''1@ 2I 2J9-2L2
215 Lin M:, Htorer +, Martin 0D, et al5 .elation o2 an $L-1' promoter
polZmorp#ism to 6XH- and sur%i%al a2ter #aematopoietic -cell
transplantation5 B )ngl A 7ed 2''9@ 91LI 22'1-221'
225 Cullup H, Htar( 65 $L-1 polZmorp#ism and 6XH-5 Leu2
L:mphoma 2''5@ 1I 51J-529
295 6oulmZ C5 Human minor #istocompatibilitZ antigens5 "urr -pin
Immunol 1LL@ 8IJ5-81
215 Middleton 06, Cullup H, -ic(inson AM, et al5 Xitamin - receptor
gene polZmorp#ism associates Oit# 6XH- and sur%i%al in HLA-
matc#ed sibling allogeneic bone marroO transplantation5 Fone
7arro1 @ransplant 2''2@ 9'I229-228
255 =apolitani 6, .inaldi A, +ertoni ?, et al5 Helected :oll-li(e
receptor agonist combinations sZnergisticallZ trigger a : #elper tZpe
103
1-polarizing program in dendritic cells5 Bature Immunolog: 2''5@ I
JL-JJ
25 Holler C, .ogler 6, +renmoe#l D, et al5 0rognostic signi"cance o2
=A-2VCA.-15 %ariants in HLA-identical sibling #aematopoietic
stem cell transplantationI Cdect on long term outcome is con"rmed
in 2 independent co#orts and maZ be modulated bZ t#e tZpe o2
gastrointestinal decontamination5 Flood 2''@ 1'JI 118L-11L9
2J5 Helbig 6, Htella-HoloOiec(a +, [oinar D, et al5 0ure red cell
apasia 2olloOing ma7or and bidirectional A+A-incompatible
allogeneic stem cell transplantationI .eco%erZ donor-deri%ed
erZt#ropoiesis a2ter long-term treatment using diderent t#erapeutic
strategies5 Ann Hematol 2''J
285 :oubert A5 $mmune reconstitution a2ter allogeneic HHC:5 @he
)F7@ Handboo2, 5
t#
edition 2''8@ 2LJ-91
104
losar de termeni ' /munologia transplantului

Alel+I %ariant a unei gene <ntr-un locus genetic particular5
Cele dou alele, de pe cei doi cromozomi omologi, pot "
identice, !i indi%idul este #omozigot sau di2erite !i el este
#eterozigot5
Alo$'eD+I este tipul cel mai rspandit de gre2 !i se re2er la
situaia <n care un organ se transplanteaz unui indi%id
aparin&nd aceleia!i specii, dar di2erit genetic5
Alo'ea"!C!aeI descrie stimularea celulelor : de ctre
moleculele MHC, altele dec&t cele proprii@ marc#eaz
recunoa!terea moleculelor MHC alogenice5 Ast2el de
rspunsuri sunt numite aloreacii5
An!"o')I este o protein care se leag speci"c la o substan
particular, antigenul corespunztor5 ?iecare molecul de
anticorp are o structur unic care <i permite s se lege
speci"c la antigenul su corespunztor, dar toi anticorpii au
acee!i structur !i sunt cunoscui ca imunoglobuline sau $g-uri5
Anticorpii sunt produ!i de celulele plasmatice ca rspuns 2a
de in2ecie sau imunizare, leg&ndu-se la patogeni,
neutraliz&ndu-i !i <i pregte!te pentru distrugere de ctre
2agocite5
An!"o')! "!oo,!"!I anticorpi anti-HLA
An!$enG orice molecul care se leag speci"c de un anticorp5
=umele lor pro%ine de la abilitatea acestora de a genera
anticorpi5 =u toate antigenele sunt capabile s stimuleze
105
producia de anticorpi@ antigenele care induc producia de
anticorpi sunt denumite imunogene5
ASHII Hocietatea American de Histocompatibilitate !i
$munogenetic5
A#o$'eD+I c&nd un organ se transplanteaz aceluia!i indi%id,
dar <n alt parte a organismului5
CDI "lusters of di<erentiation, sunt grupuri de anticorpi
monoclonali care identi"c aceea!i molecul de la supra2aa
celular5 Molecula de la supra2aa celulei este desemnat C-
urmat de un numar )de exempluI C-1, C-2 etc,5
Cel#lele )'e6enaoa'e .e an!$enI sunt celule <nalt
specializate care pot procesa antigene ale cror 2ragmente
peptidice le proiecteaz pe supra2aa celular <mpreun cu
moleculele necesare acti%rii celulelor :5 0rincipalele celule
prezentatoare de antigen pentru celulele : sunt celulele
dendritice, macro2agele !i celulele +5
Cel#lele T CD3 @Be!*erAG aceste celule a7ut celulele +
pentru a produce anticorpi ca rspuns la stimularea antigenic5
Cele mai e"ciente celule : helper sunt cunoscute ca celule
:H2, care produc cito(inele $L1 !i $L55 Celulele C-1 sunt
importante pentru recunoa!terea peptidelor antigenice legate
la moleculele MHC de clasa a$$-a5 Acioneaz ca !i co-receptori
prin legarea la partea lateral a moleculelor MHC de clasa a$$-
a5
Cel#lele T CDBI sunt celule : care poart co-receptorul C-85
Aceste celule recunosc antigenele, de exemplu antigenele
%irale, care sunt sintetizate <n citoplasma celulei5 0eptidele
deri%ate din aceste antigene sunt transportate de ctre :A0,
asamblate cu molecule MHC de clasa $ <n reticulul
endoplasmatic !i expuse ca complexe peptide MHC de clasa $
pe supra2aa celular5 Celulele : C-8 se di2ereniaz <n celule
: C-8 citotoxice5
Cen!(o'$anI unitate de msur a distanei dintre dou
locusuri <n lin(age, stabilit prin 2rec%ena recombinrilor <ntre
106
locusuri5 Cste egal cu o 2rec%en de recombinare de 1T <ntre
locusuri5 Are simbolul cM5 Bnitate de recombinare5
Cen'o(e'I punct de unire a cromatidelor5 La om sec%enele
centromerice sunt di2erite5
C4!(e'aI coexistena la ni%elul unui singur indi%id sau la
ni%elul esuturilor sau celulelor a dou genotipuri di2erite5 -e
exemplu, primitorul unui transplant de madu% de la un indi%id
genetic di2erit are celulele sanguine de origine ale donatorului
ca !i celulele autologe5 :ermenul pro%ine din mitologia greac,
reSect&nd un monstru cu un cap de leu, un corp de capr !i
coada unui dragon5
C!o=!neI polipetide secretate care a2ecteaz 2uncia altor
celule5 Cito(inele sunt importante pentru interaciunile
celulare din cadrul rspunsului imun5 Cito(inele produse de
2agocitele mononucleare se numesc mono(ine@ cele produse de
lim2ocite se numesc lim2o(ine5
Co. $ene!"I triplete de baze din A-= !i A.= care poart
in2ormaia genetic, necesar sintezei proteinelor5 Cste un
%eritabil dicionar care permite trecerea de la un grup de 9
nucleotide )triplet sau codon, la un aminoacid speci"c5
Co.onI sec%ene a trei nucleotide mA.=, care codi"c un
aminoacid speci"c5
Co.on a(?!$##I care codi"c mai muli aminoacizi cu sens
gre!it )missens,!i care <n urma unei mutaii de%ine un codon
terminator al sintezei lanului polipeptidic5
Co.on !n!:!ao'I unul dintre cei 2 codoni AB6 sau 6B6 care
marc#eaz <nceputul sintezei proteice5
Co.on! s!non!(!I care codi"c acela!i aminoacid5
Co.on! e'(!nao'!I care anun terminarea sintezei
proteinelor5 C&nd ribozomii a7ung <n dreptul lor, sinteza se
opre!te !i lanul polipeptidic este eliminat5
ConCe's!e $en!"+I <nlocuire a materialului genetic de pe un
sit particular al unei cromatide, de ctre materialul genetic
situat pe un punct exact corespunztor, de pe o cromatid ne-
107
sor@ este o 2orm particular de recombinare, care explic
apariia unor anomalii de segregri5
CREGsI "ross reactie groups )grupuri care reacioneaz
<ncruci!at, epitopi publici care sunt responsabili pentru
crossreacti%itatea serologic bine cunoscut care este
obser%at <ntre aloantiserurile HLA5 Modelul crossreacti%itii
serologice a antiserurilor HLA au 2ost utilizate pentru a
categorisi genele HLA de clasa $ <n grupuri ma7ore
crossreacti%e sau C.C6s5 +aza molecular a crossreacti%itii
serologice este existena concomitent, di2ereniat a
epitopilor publici la ni%elul mai multor gene HLA5
C'o(a!n+I complexul de A-=, #istone, proteine ne#istonice
!i puin A.= care compune cromozomul5
C'o(o6o(I purttorul in2ormaiei genetice5
C'oss!n$0oCe'I <ncruci!are, sc#imb de material genetic <ntre
cromatidele cromozomilor omologi5
C'oss(a"4I test care e%ideniaz anticorpi direcionai 2a
de antigenele HLA prezente la ni%elul lim2ocitelor : ale
donatorului )clasa $, sau la ni%elul lim2ocitelor + ale
donatorului )clasa a $$-a, implicate <n rspunsul imun@ prin
acest test se pre%ine 2enomenul de re7et <n transplantul renal5
EFII ?ederaia Curopean de $munogenetic
ELISAI )nz:me0Lin2ed Immunosorbent Assa:, este un test
serologic <n care un antigen sau un anticorp legat este detectat
utiliz&nd anticorpi cuplai cu o enzim care con%erte!te un
substrat incolor <ntr-un produs colorat5 :estul CL$HA este larg
2olosit <n biologie !i medicina ca !i <n imunologie5
E)!o)I determinant antigenic de"nit
E)!o) )'!CaI iniial, un epitop pri%at a 2ost considerat a "
unic la ni%elul unui singur produs genetic alelic5 Astzi prin
epitop pri%at <nelegem epitopii care se aS la ni%elul unui
grup limitat sau 2amilii de alele str&ns <nrudite, cum sunt
alelele A2 )AY'2'1-'22L,, sau alelele +9L )+Y9L '1'11-Y9L15,5
Cpitop de grup este un termen !i mai adec%at pentru a descrie
108
acest tip de epitop !i poate " intersc#imbat cu termenul de
Qpri%atR5
5
E)!o)! )#?l!"!I exist concomitent, di2ereniat <ntre
conglomeratele de gene HLA care <n mod normal aparin la
grupuri di2erite de gene, str&ns <nrudite, de exemplu, existena
concomitent a epitopului public <ntre A2 !i moleculele +5J
sau 585
E,onI sec%en de nucleotide care codi"c o sec%en de
aminoacizi speci"ci5 >n medie, ei sunt constituii din 1''-9''
de nucleotide5 A gen este, ast2el constituit din mai muli
exoni separai prin introni, iar "ecare exon poate " considerat
un modul al unei proteine5
E,)'es!e $en!"+I mani2estare 2enotipic a unei gene speci"ce@
este condiionat de natura genei, dominant sau recesi%, de
interaciunea cu alte gene, condiiile de mediu, penetran !i
expresi%itate5
Feno!)I caracteristicile detectate ale unei celule sau
organism@ rezult din interaciunile genotipului cu mediul5
Gen+I in2ormaia nucleotid care asigur sinteza unei sec%ene
de aminoacizi !i care ocup un locus speci"c5
Geno(I set #aploid de cromozomi5 :otalitate a %ariantelor
genetice de pe un locus dat5 -ac pe un locus se gsesc n
alele, atunci pot exista n #omozigoi !i n)n-1,V2 #eterozigoi5
=umrul total al genotipurilor de pe acela!i locus este egal cu
n)n;1,V25 6enomul uman conine ,1 x 1'
-1'
g A-=,
ec#i%alentul a 58'' de milioane de baze, <n timp ce al
)scherichia "oli are numai 1 milioane5 =ucleul diploid uman
include milioane de gene5
Geno!)I constituia genetic a unui organism5
Ha)lo!)I setul de alele HLA gsit pe un cromozom5
H!so"o()a!?!l!aeI identitate la ni%elul moleculelor de
#istocompatibilitate de clasa $ !i clasa a $$-a5 :ermenul este
2olosit <n sens operaional <nsemn&nd similaritate su"cient
109
<ntre moleculele HLA ale donatorului !i primitorului, <n
transplantul de organe5
HLAI antigene leucocitare umane sau Qleucocite de
#istocompatibilitateR5
I(#no$ene!"+I ramura a geneticii care studiaz
complexitatea proceselor ce asigur aprarea !i integritatea
organismului, <n ipoteza <n care <n organism ptrund antigene
strine@ controlul genetic al imunoglobulinelor, de"cienele
condiionate genetic, rspunsul imun, imunitatea celular etc,
%ariabilitatea genelor implicate <n acest proces )A+A, .#,
HLA, precum !i tulburrile autoimune@ imunogenetica a
descoperit complexul ma7or de #istocompatibilitate, a reu!it s
cartogra"eze regiunea cromozomial pe care este situat
acest sistem, a elucidat structura anticorpilor
)imunoglobulinelor,, a explicat 2enomenele de compatibilitate
!i incompatibilitate, a precizat existena asociaiilor dintre
genele sistemului HLA !i di%erse tulburri5
Ine'le#=!neleI sunt cito(ine secretate <n principal de celulele
mononucleare )lim2ocitele !i 2agocitele mononucleare, care
induc cre!terea !i di2erenierea lim2ocitelor !i a celulelor stem
#ematopoietice pluripotente5
In'onI sec%en de 1''-1''' nucleotide situat <n a2ara sau <n
interiorul genei care separ exonii )sec%enele de nucleotide
A-= care sunt transcrise, !i sunt prezente <n mA.=5 :oi
intronii studiai p&n acum <ncep cu sec%ene 6: !i se termin
cu sec%enele A65 Bneori, sec%enele de <nceput !i de s2&r!it se
repet de numeroase ori5 $ntronii coordoneaz sinteza
proteinelor !i diminueaz 2rec%ena mutaiilor sur%enite <n
cursul recombinrii5
I6o$'eD+I c&nd un organ se transplanteaz <ntre indi%izi ai
aceleia!i specii, cu con"guraie antigenic identic )gemeni
monozigoi,5
L!n=a$eI asociere a dou sau mai multe gene nealele <n a!a 2el
<nc&t se transmit ca o singur unitate dac nu inter%ine
2enomenul de crossing-o%er5
110
L!n=a$e .!se>#!l!?'!#( I legtur dezec#ilibrat * tendin a
unor alele situate pe locusuri di2erite de a aprea <mpreun pe
acela!i cromozom sau #aplotip, <ntr-o sec%en mai mare dec&t
cea a!teptat teoretic5
MHCI complexul ma7or de #istocompatibilitateI regiune
cromozomial 2ormat din locusurile care au rol 2undamental
<n procesele imune5 La om MHC este sistemul HLA, omolog cu
complexul H2, la !oarece5
M!"'oa''aQI te#nologie cu microcipuri, care are ca principiu
de baz #ibridizarea complementar a sec%enelor simplu
spiralate ale acizilor nucleici5 >n genetica cancerului, A-=
microarra: este creat prin plasarea di2eritelor A-=-uri pe un
mic 2ragment al unui microcip, 2olosindu-le apoi, pentru a
e%alua expresia A.= <n celulele normale sau maligne5
M#a:!eI modi"care permanent !i transmisibil a structurii !i
implicit a 2unciei unei gene5 -e obicei, termenul de mutaie se
re2er la o singur gen5 0rin lrgirea conceptului, <n categoria
mutaiilor au 2ost incluse modi"crile numerice !i structurale
ale cromozomilor, precum !i modi"crile numerice ale
genomului )poliploidia,5
Neo)e'!naI pteridin seric secretat de macro2ag@ %alorile
serice crescute ale neopterinei reprezint expresia acti%rii
rspunsului imun celular5
Pol!(o'*s(I <nseamn existena <ntr-o %arietate de 2orme
di2erite5 0olimor"smul genetic este %ariabilitatea de la ni%elul
locusului genei <n care se produc %ariante genice la o 2rec%en
mai mare de 1T5 Complexul ma7or de #istocompatibilitate
)MHC, este cel mai polimor2 conglomerat de gene cunoscut la
om5
P'e6ena'ea an!$en!"+I descrie antigenul ca 2ragmente
peptidice legate la moleculele MHC pe supra2aa unei celule5
Celulele : recunosc antigenul c&nd este prezentat <n acest 2el5
P'o"esa'ea an!$en!"+G este degradarea proteinelor <n
peptide care se pot lega la moleculele MHC pentru prezentare
la celulele :5 :oate antigenele, cu excepia peptidelor, trebuie
111
s "e procesate <n peptide <nainte de a putea " prezentate de
ctre moleculele MHC5
ReWe#l $'eDe!I reacie imunologic direcionat 2a de
moleculele de #istocompatibilitate din gre2 care conduce la
eliminarea sau re7etul gre2ei5
RT0PCRI reacie de ampli"care genic 2olosit pentru a
ampli"ca sec%enele A.=5 Cnzima re%ers-transcriptaza ).:,
este 2olosit pentru a con%erti sec%ena A.= <ntr-o sec%en de
A-= complementar )cA-=,, care este apoi ampli"cat prin
0C.5
Se$'e$a'eI separare a cromozomilor omologi <n meioz,
implicit, separarea !i migrarea <n gamei di2erii a celor 2
membri ai oricrei perec#i de alele5 >n acest 2el se disociaz !i
caracterele materne !i paterne5 Cste prima lege a lui Mendel,
legea segregrii genelor5
S!se(#l "o()le(enI este un set de proteine plasmatice
care reacioneaz <mpreun pentru a ataca 2ormele
extracelulare ale patogenilor5
S!se(#l $'#)elo' san$#!ne ABOI antigene care sunt
exprimate pe eritocite5 Cle sunt 2olosite pentru tipizarea
s&ngelui uman pentru trans2uzii5 $ndi%izii care nu exprim
antigenele A sau + pe eritrocitele lor, <n mod natural 2ormeaz
anticorpi care interacioneaz cu acestea5
S!G QpozitieR, QlocalizareR@ 15 Cea mai mic unitate a unei gene
care poate su2eri o mutaie5 25 Hec%en de nucleotide
recunoscut speci"c de anumite proteine5
Ta)as!n @TAP J "##oci"te& *roteinAG este o molecul c#eie <n
asamblarea moleculelor MHC de clasa $@ o celul de"cient <n
aceast protein are numai molecule MHC de clasa $ instabile
pe supra2aa celular5 :A01 !i :A02 )Qtransporters associated
Oit# antigen processingR, sunt proteine * caset care leag
A:0, implicate <n transportul peptidelor scurte din citosol <n
lumenul reticulului endoplasmatic, unde se asocieaz cu
moleculele MHC de clasa $5
112
TCR @XT0"ell 'e"e)o'YAG receptorul celulei : este al lanurilor
<nalt %ariabile !i #eterodimer legate disul"dic, exprimate de
membrana celular ca un complex cu lanurile C-9
permanente5 Celulele : care poart acest tip de receptor
2rec%ent denumite celule : 5
Telo(e'I cromomer terminal situat la extremitile
cromozomilor care au rolul de a <mpiedica 2uziunea
cromozomilor intaci5
Xeno$'eDaI este transplantul de organe <ntre specii di2erite
)de exempluI de la porc sau de la babuin la om,5
113
114