Capitolul II.

Formarea N-nitrozoaminelor n tutun

i n fumul de igar
II.1. Formarea N-nitrozoaminelor specifice tutunului
Incidena cancerului avanseaz moderat n majoritatea rilor europene, inclusiv
n Republica Moldova. Mortalitatea prin cancer n Republica Moldova este marcat
printr-o sporire consecutiv i alarmant, de la 115 la 100 000 locuitori n anul 1986
pn la 137 la 100 000 locuitori n anul 1997. Ritmul nalt de cretere a mortalitii
prin cancer, remarcat n Moldova, este cauzat de diagnosticul tardiv al tumorilor (n
stadiul IV fiind depistai 28,6% bolnavi) [144]. Aceast situaie este determinat i de
numeroi factori de risc: chimici, fizici, biologici, stresul, fonul radioactiv, alimentaia
incorect, fumatul.
Din punct de vedere structural, ponderea cea mai mare n cadrul mortalitii prin
cancer n Moldova o deine cancerul pulmonar. n perioada anilor 1980-1999 la brbai
se ntlnete mai frecvent cancerul pulmonar, apoi urmeaz cancerul gastric, cancerul
pielii, hemoblastozele, cancerul buzei, cancerul cavitii bucale i al faringelui. La femei,
incidena cancerului pulmonar ocup locul III dup cancerul snului i cancerul pielii,
ns mortalitatea cea mai nalt aparine cancerului pulmonar. Statistica demonstreaz
c 80% din pacieni decedeaz n primul an dup depistarea cancerului pulmonar i
numai 8-10% din ei au ansa de a supravieui 5 ani [144].
Fumatul este considerat n prezent drept un factor de risc major n etiologia cancerului, responsabil, dup unele estimri, de 85% din mbolnvirile de cancer bronhopulmonar [145]. n Statele Unite 90,3% din decesele cauzate de cancer pulmonar la
brbai i 78,5% la femei pot fi atribuite fumatului [146]. Asbestul i radonul, precum
i ali factori profesionali pot cauza cancerul pulmonar. ns, rspndirea larg a fumatului cuplat cu aciunea agenilor cancerigeni n mediul nconjurtor demonstreaz
c fumatul este cauza dominant a cancerului pulmonar [147]. Riscul fumatului n
apariia cancerului cavitii bucale, al faringelui i al esofagului este considerabil,
dar mai sczut dect n apariia cancerului pulmonar [148,149]. Prezena simultan a
fumatului i a consumului de alcool duce la formarea cancerului cavitii bucale, al
faringelui [148] i al esofagului [150]. S-a constatat c circa jumtate din populaia
Moldovei este reprezentat de fumtori [145]. Amestecul de NNK i NNN produce
tumori n cavitatea bucal la obolani. NAT posed la fel activitate cancerigen.
Hidrocarburile policiclice aromatice (HPA) i N-nitrozoaminele specifice tutunului (NAST) sunt dou grupe principale de substane cancerigene prezente n tutun i n
fumul de igar ce pot cauza apariia cancerului pulmonar att la fumtori, ct i la nefumtori expui fumului de igar [146]. N-nitrozonornicotina (NNN), 4-(metilnitrozamino)-1-(3-piridil)-butanona (NNK), N-nitrozoanatabina (NAT) i N-nitrozoanabazina (NAB) sunt patru din apte N-nitrozoamine specifice tutunului (NAST) identificate. NNN i NNK se formeaz n procesul de nitrozare a nicotinei i reprezint un
interes deosebit, deoarece pot fi identificate numai n tutun i posed activitate cance 67

rigen extrem de nalt [151]. NNK induce cancerul pulmonar la roztori independent
de ruta de administrare. La fel, NNK cauzeaz tumorile maligne n mucoasa nazal,
ficat i pancreas. NNN cauzeaz tumorile maligne n esofag, cavitatea nazal, plmni
la obolani, la oareci la tractul respirator, iar NAB aproape nu este cancerigen [151].
Pentru a face concluzii despre impactul fumatului, este necesar nelegerea comprensiv a riscului pentru sntate, cauzat de fumat. n acelai rnd, necesit a fi investigate diferite aspecte, cum sunt identificarea i analiza cantitativ a substanelor
toxice n fum, transportul i metabolismul acestor substane n organismul uman.
n 1996, Green i Rodgman au comunicat c n fumul de igar au fost identificate 4800 de substane chimice [152], dintre care 69 de substane n anul 2000 s-au
constatat a fi cancerigene. Lista substanelor cancerigene din fum include, pe lng
benzo(a)piren, alte nou hidrocarburi aromatice policiclice, patru amine aromatice,
nitrozoamine, aldehide i alte substane organice i anorganice. Potenialul cancerigen
al acestor substane a fost evaluat n conformitate cu clasificarea substanelor cancerigene, introdus de Agenia Internaional pentru Cercetarea Cancerului (AICC) [153].
n conformitate cu clasificarea dat, fumul de igar conine 69 substane cancerigene
pentru animale, din ele 48 sunt posibil cancerigene pentru om, 8 sunt probabil cancerigene pentru om i 11 sunt substane, a cror toxicitate i cancerigenitate pentru
om este demonstrat.
II.1.1. Formarea N-nitrozoaminelor specifice tutunului din predecesori
N-nitrozoaminele specifice tutunului constituie o grup de substane cancerigene
care au fost identificate numai n tutun i n fumul de igar. Numeroase studii analitice
efectuate de diferii savani au demonstrat c N-nitrozoaminele formate din alcaloizii
tutunului, aa-numite N-nitrozoaminele specifice tutunului, se conin n cantiti considerabile att n tutun, ct i n fumul de igar. n tutun i n produsele de tutungerie au
fost identificate apte N-nitrozoamine specifice tutunului NNN, NNK, NNAL, NAT,
NAB, iso-NNAL i iso-NNAC. Structurile acestor substane i ale predecesorilor lor
sunt prezentate n Figura II.1 [10]. A fost stabilit c NNN, NNK i NAT se conin n
tutun n cantiti mai nalte dect alte N-nitrozoamine specifice tutunului. NNN, NNK
i NNAL posed proprieti cancerigene cele mai active. Expoziia zilnic estimat
constituie 20 g de NAST pentru fumtori [154,155].
Se consider c nitrozoaminele care ptrund n organismul fumtorului pot fi formate la diferite etape de producere i utilizare a igrilor: n procesul de cretere i
dezvoltare a tutunului; n procesul de prelucrare tehnologic; n urma fumatului n
fracia de baz i secundar a fumului de igar; n organismul fumtorului.
Cinetica procesului de nitrozare a nicotinei a fost studiat parial [156,157]. S-a
stabilit c nitrozarea nicotinei duce la formarea a trei substane principale: NNN, NNK
i NNA [169]. n rezultatul transformrii secundare a acestor substane, precum i al
fragmentrii i oxidrii ciclului pirolidinic pot fi formai 14 ali compui. La fel, s-a
stabilit c la pH 3,4 i la temperatura 20C aproape 80-90% din cantitatea iniial a
nicotinei nu se supune nitrozrii dup 17 ore. n condiii mai severe (excesul de nitrit
68

i 90C) viteza procesului de formare a NNN i NNK crete, iar formarea NNA nu se
observ [157]. Creterea vitezei procesului de formare a NNN i NNK la temperaturi
ridicate indic posibilitatea formrii NAST la arderea tutunului. ns, n condiii reale
nu se observ excesul agenilor de nitrozare fa de concentraia nicotinei. Alte cercetri
cu privire la nitrozarea nicotinei nu au fost efectuate.

Fig. II.1. Formarea NNA specifice tutunului din predecesori.

Cantitatea de NAST ce se formeaz n tutun n procesul de cretere i dezvoltare

a plantulei depinde n mare msur de soiul tutunului, precum i de cantitatea de ngrminte azotice folosite [158]. ns, a fost artat c prelucrarea tehnologic a tutunului duce la formarea cantitilor de nitrozoamine care cu mult depesc concentraiile de NAST n tutunul verde neprelucrat [147,159,160].
Astfel, majoritatea cercettorilor au ajuns astzi la concluzia c fermentarea tutunului este un proces complex de natur enzimatic, microbiologic i chimic.
Chamberlain i Chortyc [158] au studiat influena procesului de maturizare tehnologic asupra acumulrii de NAST n diferite soiuri de tutun. Ei au demonstrat c fertilizarea tutunului cu compui de azot n timpul creterii, precum i durata maturizrii
tehnologice, duc la acumularea cantitilor mai nalte de NAST n tutun. Dei exist
numeroase comunicri cu privire la prezena cantitilor considerabile de NAST n
tutun i n fumul de igar [143,160], condiiile ce determin acumularea NAST n
tutun nu sunt bine cunoscute. Reieind din faptul c NAST sunt formate din alcaloizi
piridinici, s-a presupus c concentraii mai nalte de alcaloizi n tutun vor duce la acumularea mai intensiv a NAST. Djordjevic i col. [161] au demonstrat prezena corelrii pozitive ntre cantitatea de alcaloizi i NAST n tutun. ns, cercetrile acestor
autori au fost axate pe un exces considerabil (de 3000 de ori) de alcaloizi n tutun

69

comparativ cu cantitatea de NAST determinat. Fapt ce nu permite s considerm

cantitatea de alcaloizi ca factor ce limiteaz acumularea NAST n tutun.
Brunnemann i col. [162] au constatat o corelare pozitiv ntre concentraia nitrailor i NAST n tutun i n fumul de igar. Cercetarea igrilor europene [163] de asemenea denot o corelare pozitiv ntre nitrai i NAST n tutunul igrilor. De menionat c i n cazul nitratului se observ excesul de 1000 de ori fa de concentraia de
NAST gsit n tutun.
Posibilitatea formrii NAST la arderea tutunului a fost studiat mai puin. Concluziile cu privire la formarea N-nitrozoaminelor n fumul de igar pot fi formulate n
baza determinrii directe a NAST paralel n tutunul igrilor i n fumul lor. ns, la
arderea tutunului este posibil att formarea N-nitrozoaminelor din predecesori, ct i
descompunerea lor la temperaturi nalte. De aceea, este necesar de a studia mecanismele de formare a NAST n tutun n baza cercetrilor cineticii procesului, lundu-se n
consideraie concentraia agenilor de nitrozare ce pot determina formarea NAST n
fum. A fost constatat c transformarea nitritului din tutun duce la formarea oxidului de
azot NO n fumul de igar. ns, n procesul de nitrozare a aminelor, n lipsa aerului i
la temperaturi pn la 120C, particip bioxidul de azot NO2 care stimuleaz formarea
N-nitrozoaminelor [164].
II.1.2. Formarea endogen a N-nitrozoaminelor
Nu este exclus i posibilitatea formrii endogene a N-nitrozoaminelor specifice
tutunului la ptrunderea fumului n organismul fumtorului [165]. Omul este expus
la ptrunderea nitriilor prin alimentaie, reducerea endogen a nitrailor din produse
alimentare i prin producerea endogen a oxidului de azot [166,167]. Studiile extensive au artat c formarea N-nitrozoaminelor are loc n organismul uman [168]. De
exemplu, nitrozoprolina i ali nitrozaminoacizi ce conin sulf pot fi identificai n
urina omului. Cantitatea lor crete la administrarea nitriilor i a prolinei i descrete
sub influena inhibitorilor procesului de nitrozare, de exemplu, acidului ascorbic. Formarea endogen a nitrozoprolinei poate fi asociat cu expoziia la diferii factori de
risc, inclusiv fumatul. Dup cum a fost menionat, nicotina se supune nitrozrii cu
formarea NNN, NNK i NNA. ns, viteza acestui proces este cu mult mai sczut dect viteza procesului de nitrozare a aminelor secundare nornicotinei sau anabazinei
[156]. Nitrozarea nicotinei nu a fost nregistrat n saliva fumtorilor [169]. Acidul
4-(metilnitrozoamino)-4-(3-piridil)-butiric este unul dintre produsele procesului de
nitrozare a nicotinei; el poate fi format prin transformarea metabolic a NNA. Aceast
substan poate fi format i prin nitrozarea cotininei [170]. Lund n consideraie
faptul c iso-NNAL se elimin neschimbat n urina i fecaliile obolanilor, acest acid
poate servi n calitate de marcher al nitrozrii endogene a nicotinei [170,171]. ns, n
organismele persoanelor care au consumat nicotin sau cotinin cu i fr suplimentarea nitratului, procesul de nitrozare endogen nu a avut loc [171].
Una dintre cile posibile de cercetare a procesului de nitrozare endogen a nicotinei este analiza metaboliilor NNK, NNN sau NNA. Metabolismul NNK duce la
formarea NNAL sau a glucoronidului lui acidul [4-(metilnitrozamino)-1-(3-piridil) 70

but-1-il]--O-D-glucoziduronic la obolani [172]. Ambele substane se elimin din

organism cu urina. NNAL, ca i NNK, posed proprieti cancerigene [151]. S-a constatat c transformarea NNK n NNAL are loc n plmnii fumtorilor [173,174].
Formarea endogen a NNN a fost demonstrat pentru prima dat la obolani [160].
NNAL i NNAL-Gluc nu au fost gsii n urina obolanilor tratai cu nicotin att n
prezena nitritului, ct i fr nitrit. Fapt ce indic la lipsa conversiei endogene a nicotinei n NNK. ns, urina obolanilor tratai cu nicotin conine NNN. Formarea NNN
poate avea loc n rezultatul reaciei directe a nicotinei cu nitrit sau prin nitrozarea nornicotinei formate endogen din nicotin. Ultima variant este mai probabil, deoarece
nitrozarea nicotinei este foarte lent i rezult cu formarea att a NNN, ct i a NNK i
NNA [153]. Nornicotina este metabolitul cunoscut al nicotinei, iar la obolani aproximativ 9% din nicotina administrat se elimin cu urina n form de nornicotin [175].
Ca amin secundar, nornicotina interacioneaz cu nitritul cu o vitez cu mult mai
nalt dect nicotina [156].
Alcaloizii din tutun i din fumul de igar reprezint numai un reactant n reacia
de nitrozare; altul este reprezentat de agenii de nitrozare. S-a stabilit c n rezultatul
ptrunderii nitrailor i nitriilor odat cu consumul produselor alimentare, concentraia
nitriilor n tractul gastrointestinal atinge 4 mg pe zi [176]. Concentraia nitriilor n
saliva oamenilor sntoi constituie 6-10 mg/l, iar dup consumul nitratului poate s
se ridice pn la 500 mg/l [177]. Formarea endogen a agenilor de nitrozare are loc n
rezultatul producerii oxidului de azot din arginin n timpul infeciilor sau inflamaiilor [167-179]. n afar de aceasta, fumul de igar reprezint o surs adugtoare de
oxizi de azot. Unele cercetri au artat c concentraia nitrozoprolinei i a altor nitozoaminoacizi este de 2 ori mai nalt la fumtori dect la nefumtori [168]. Nornicotina
se nitrozeaz cu mult mai rapid dect prolina [156,165] i consecutiv formarea endogen a NNN din nornicotin este destul de probabil. Oamenii, ca i obolanii, metabolizeaz nicotina pn la nornicotin; n afar de aceasta, nornicotina poate fi concentrat n saliva fumtorului [180-182]. Nitriii la fel se conin n saliv. Stomacul
omului asigur pH-ul favorabil procesului de nitrozare [156,165]. Astfel, organismul
fumtorului contribuie la nitrozarea endogen a nornicotinei formate prin metabolismul
nicotinei din fumul de igar.
II.2. Materiale i metode utilizate la analiza NAST
i a predecesorilor din tutun
Materiale
Pentru analiza produselor de tutun i fum de igar au fost utilizate un ir de
N-nitrozoamine:
N-nitrozodimetilamin compania SIGMA, Nr. 7756, puritatea 99,8%; N-nitrozodietilamin compania SIGMA, Nr. 0756, puritatea 99,6%, amestecul standard de 9
N-nitrozoamine EPA 8270 Appendix Nitrosamine Mix (SUPELCO), soluie standard,
cte 2000 ng/ml de fiecare N-nitrozoamin n etanol (puritate diferit pentru fiecare Nnitrozoamin n limitele de la 98,3 pn la 99,9%), N-nitrozoanabazin SIGMA,
puritatea 98,6%, N-nitrozonornicotin, 4-(metilnitrozamino)-l-(3-piridil)-l-butanon,
71

N-nitrozoanatabin, 5-Metil-nitrozonornicotin standard intern, C54-(metilnitrozamino)-l-(3-piridil)-l-butanon standard intern, 4-(metilnitrozamino)-l-(3-piridil)-lbutanol standard intern. Ultimele patru substane au fost sintetizate n Laboratorul de
Sintez Organic de la Centrul de Cancer din Minnesota, Minneanolis, SUA.
La fel, au fost utilizai i ali reactivi: nicotin ( SUPELCO, puritatea 99%), etilmercuritiosalicilat de sodiu (SIGMA, puritatea 99,5%), kiselgur (SUPELCO), acidul
ascorbic (SUPELCO, puritatea 99,4%), fosfatul de sodiu, acidul citric, KOH, NaOH,
H2SO4, Na2SO4, reactivul lui Griess, nitritul de sodiu, 3-glucoronidaza (Sigma Chemical Co., CAT#: G-7396).
Solveni organici: etilacetat, clorur de metilen, alcool metilic, acetonitril, cloroform.
Aparatajul folosit la cercetrile efectuate:
Cromatograful gazos, Model 5890 (Hewlett Packard) cu analizator de energie
termic Model 610 (Thermedics Detection Inc., SUA); coloana capilar DB-1301
(30m x 0,32mm x 0,25um) [6% (cianopropilfenil)metilpolisiloxan; J&W Scientific];
Cromatograful gazos, Model 6890 cu detectorul mass-selectiv, Model 5973 (Hewlett
Packard); coloana capilar HP-5 (30m x 0,25mm x 0,25um); Cromatograful gazos
portativ MTI Seria P-200H; Cromatograful cu schimb de ion (DIONEX DX-500 ti
W/CD 20 detector i pompa gradient GP 40); Cromatograful gazos FRACTOVAP,
Model 4200 cu programator de temperatur Model 410 (Carlo Erba Strumentazione,
Italia); Centrifug/concentrator, Model SVT200H Speedvac (Savant Instruments,
Farmingdale, NY, SUA); Colector de vid pentru extracie n faza solid (Alltech
Associates Inc., Deerfield, IL, SUA) cu cartridge Sep-Pak Plus CI8 (Waters Corp.,
Milford, MA, SUA); Spectrofotometru SF-26 (Rusia); lonomerul 120-2 (Gomel,
Bielorusia); Termostat U-190.
Metode de analiz a N-nitrozoaminelor specifice tutunului
Metodele analitice existente de identificare i analiz cantitativ a N-nitrozoaminelor specifice tutunului sunt bazate pe trei etape principale: extragerea NAST din
tutun, purificarea extractului i analiza cantitativ prin metode cromatografice cromatografia gazoas (CG) sau lichid de performan nalt (CLPI).
La extragerea NAST din tutun s-a folosit soluie-tampon citrat-fosfat, hidroxid de
sodiu diluat i amestecul de soluie-tampon citrat cu toluen. S-au utilizat dou metode
de extragere a NAST din tutun: extragerea timp de 24 ore la temperatura camerei i
extragerea timp de cteva ore prin tratarea tutunului cu ultrasunet.
La identificarea i analiza cantitativ a N-nitrozoaminelor specifice tutunului n
soluiile pregtite se folosete CG sau CLPI combinat cu detector de analiz a energiei termice (AET) / l607, care este specific pentru analiza nitrozocompuilor. n afar
de aceasta, pentru analiza cantitativ a NAST poate fi folosit metoda combinat cromatografia gazoas spectrometria de mas.
Tehnica de lucru. Un gram de tutun condiionat pn la umiditatea constant i
25 ml soluie-tampon citrat-fosfat (pH 4,5, conine acid ascorbic) au fost amestecai
ntr-o eprubet conic (NALGENEIM, 30 ml). La amestecul obinut au fost adugate
C5-NNK i 5Me-NNN n calitate de standarde interne. Probele au fost omogenizate
72

(omogenizator Polytron) i tratate cu ultrasunet timp de 1,5 ore. Extractele primite au

fost separate de tutunul fin prin centrifugarea la vitez nalt (15000 rot/min., 10 min.)
i filtrate n eprubete conice din sticl (Kimble, Vineland, NJ, SUA); pH-ul filtratului
a fost adus la 5 prin adugarea soluiei de NaOH de concentraia 10N. Fiecare prob a
fost extras de trei ori cu ajutorul a 12 ml de etilacetat. Extractele au fost combinate
apoi uscate cu 10 g Na2SO4 timp de 30 min. i concentrate pn la sec cu ajutorul concentratorului Speed Vac. Rmiele au fost dizolvate n 0,5 ml clorur de metilen i
aplicate la extragere n faza solid. Cartridgele preconizare pentru extragere au fost
prelucrate cu 5 ml clorur de metilen. N-nitrozoaminele specifice tutunului au fost
eluate din cartridge cu 10 ml de etilacetat i colectate n eprubete conice de 15 ml.
Extractele de NAST n etilacetat au fost uscate (Speed Vac). Reziduul obinut a fost
transferat n microfiole uscate cu 3 x 60 l metanol i redizolvate n 50 l acetonitril.
Cte 2 l din fiecare prob au fost aplicai la analiza CG-ATE.
Probele pentru analiza N-nitrozoaminelor volatile au fost pregtite n conformitate
cu indicaiile metodice folosite n Centrul Naional de Medicin Preventiv pentru
analiza N-nitrozoaminelor volatile (NAV). Cte 50 g de tutun au fost cntrite cu precizia 0,0001 g. Dup adugarea NaCl, Na2SO4 i a acidului sulfanilic, proba a fost distilat cu vapori de ap. N-nitrozoaminele volatile au fost extrase din distilatul primit,
folosind clorur de metilen, 3 x 15 ml. Extractul obinut a fost uscat cu ajutorul Na2SO4
anhidru i concentrat pn la l ml (evaporator rotativ). Probele pregtite au fost aplicate
la cromatograful gazos portabil MT1 pentru analiza cantitativ a NAV.
Pentru analiza nicotinei n tutun i n fumul de igar au fost utilizate dou metode
diferite: CG-MS i analiza spectrofotometric.
Analiza CG-MS. ntr-o eprubet conic (NALGENE) au fost amestecate 50 g de
tutun i 20 ml de metanol. Probele au fost omogenizate (Polytron) i tratate cu ultrasunet timp de 3 ore. Extractele au fost separate de tutunul fin prin centrifugare la vitez
nalt. Cte 200 ml de extract din fiecare prob au fost transferate ntr-o fiol, n care
s-a adugat amestecul de standarde interne (D3-nicotina i D3-cotinina, cte 40 ul).
Probele pregtite au fost congelate la -20C pn la analiza prin CG-MS.
Analiza spectrofotometric. La analiza nicotinei prin metoda spectrofotometric
tutunul a fost supus extraciei cu vapori de ap n prezena NaCl i NaOH. Pentru analiza nicotinei n fum, ultimul a fost colectat la aparatul de fumat (laboratorul chimic,
Tutun-CTC) i a fost dizolvat n aceton. Soluia de aceton a fost supus distilrii
cu vapori de ap n dou etape: distilarea acetonei n prezena H2SO4 i distilarea nicotinei (dup adugarea NaOH). Distilatul colectat (250 ml) a fost analizat spectrofotometric.
Analiza ionilor nitrai i nitrii n tutun s-a efectuat prin dou metode diferite:
cromatografia cu schimb de ioni i metoda poteniometric.
Cromatografia cu schimb de ioni. Tutunul (100 mg) condiionat pn la umiditate
constant a fost amestecat cu 10 ml de ap de calitate HPLC ntr-un tub de sticl centrifugal (50 ml, Kimble, Vineland, NJ, SUA). n setul de probe au fost incluse dou
tipuri de ap 11PLC n calitate de control. Tutunul a fost mrunit cu ajutorul omogenizatorului Polytron i tratat cu ultrasunet timp de 30 minute. Suspensia format a fost
73

centrifugat i extractul apos a fost aplicat la cartridge-ul C-18 SPE (Fisher), condiionat cu 20 ml de metanol. Primele 5 ml de eluant apos au fost aruncate; urmtoarele
2,5 ml de eluant apos au fost colectate ntr-un tub plastic. Probele pregtite au fost
congelate la -20C pn la analiz.
Pentru analiza ionilor nitrai prin metoda poteniometric, l g de tutun a fost
amestecat cu 50 ml de apa bidistilat. Amestecul a fost lsat la temperatura camerei
timp de 24 ore pentru extragerea mai complet a ionilor nitrai. Extractul apos a fost
filtrat; filtratul obinut a fost supus analizei.
Pentru analiza ionilor nitrii, la amestecul ce conine l g de tutun i 50 ml de ap
bidistilat a fost adugat peroxid de hidrogen i acid sulfuric concentrat pentru transformarea ionilor nitrii n nitrai.
II.3. Formarea N-nitrozoaminelor n tutun i n fumul de igar
II.3.1. Determinarea N-nitrozoaminelor specifice tutunului n diferite tipuri
de igri i a predecesorilor lor n tutun i n fumul de igar
Lund n consideraie activitatea cancerigen a NAST extrem de nalt, procentul
mare de fumtori n rndul populaiei Republicii Moldova i incidena nalt a cancerului n ara noastr, este necesar a determina cantitatea acestor substane n igrile
produse n Moldova.
Din rezultatele primite la analiza tutunului i a fumului de igri produse n alte
ri s-a stabilit c cantitatea de NAST n tutun variaz n dependen de soiul, modul
de prelucrare tehnologic, regimul de pstrare. igrile produse n Moldova au fost
procurate n laboratorul chimic al societii pe aciuni Tutun-CTC. Pentru analiz
au fost selectate 18 tipuri de igri, ce reprezint 78,3% din toate tipurile produse n
Moldova. Au fost folosite toate categoriile de la cele mai ieftine igri pn la tipuri
moderne fabricate din tutunul fin prelucrat. Pentru compararea i verificarea rezultatelor primite, au fost folosite i alte tipuri de igri, cum sunt: igrile de cercetare 1R3
(de la Universitatea din Kentucky) i igrile produse n SUA i Europa Marlboro
(SUA), Camel (SUA), Lucky Strike (americane i europene), Monte Carlo (Europa),
Prima lux (Ucraina). Tabelul II.1 reprezint sumarul datelor obinute la analiza NAST.
Variaia rezultatelor obinute la analiza duplicatelor nu a depit 7%. Analiza
datelor obinute a demonstrat c nivelurile NAST n igrile produse n Moldova sunt
cu mult mai sczute dect cantitatea acestor substane n igrile americane [193].
Concentraia medie de NNN n trei tipuri de igri comerciale produse n SUA constituie 3,32 0,88 ug/g comparativ cu 0,59 0,548 ug/g n intervalul de la 0,039 pn la
2,091 ug/g n igrile produse n Moldova.
Pentru NNK i NAT valoarea medie n tipurile de igri americane constituie
1,57 0,178 i 1,99 0,579 ug/g, respectiv, iar valorile corespunztoare pentru igrile
moldoveneti sunt 0,193 0,089 ug/g din intervalul 0,104-0,484 ug/g i 0,160 0,114 ug/g
din intervalul 0,055-0,481 ug/g, respectiv. Tutunul igrilor Astra, Prima, Temp,
Chiinu, Doina i Doina Premium conine cantiti diferite de NAST. Concentraiile
cele mai nalte de NNN de la l,104 pn la 2,091 ug/g au fost stabilite n igrile ce
74

conin tutun fin prelucrat: Tandem, Temp, Chiinu i Fluiera Extra. Concentraiile
altor NAST au fost de asemenea mai nalte n aceste tipuri dect n alte igri produse
n Moldova. Cele mai mari cantiti de toate NAST au fost fixate pentru igrile
Tandem (Fig. II.2, Tab. II.1) [194,197].

Fig. II.2. Cromatograma obinut n urma analizei GC-TEA a tutunului

ce inhib n igrile Tandem.
Tabelul II.1
Nicotin, ioni nitrai i NAST n tutun din igri (per gram de mas umed)

75

Tutunul condiionat pn la 60% umiditate relativ pentru 24 de ore nainte de analiz. bToate probele au fost analizate n duplicat;
valorile sunt medii. cUniversit. Kentucky Tabacco an Health Research Institute research cigarette containing blended tabaccos in US
comercial products. dEuropean. eND nu s-a depistat.
a

Tabelul II.2
Concentraia total de NAST, NOC i NOCP n tutunul utilizat
la producerea igrilor moldoveneti
nmol/g
mg/g
Tipul tutunului
Total
Total
Total
nicotin
nitrat
nitrit
NAST
NOC
NOCP
Tutun tratat la soare, utilizat la producerea igrilor moldoveneti tradiionale
Moldovenesc 272
Tratata
0,68
1,6
126000
8,5
2,4
2,8
Prelucrat ulterior
1,2
36
49000
7,7
2,1
NDb
Moldovenesc 456
Tratat
1,1
1,2
66000
12
7,6
4,4
Prelucrat ulterior
1,7
31
34000
11
7,0
1,8
Jubiliar 8
Tratat
3,2
5,7
15000
12
8,9
4,2
Prelucrat ulterior
4,8
92
6300
11
8,9
1,4
Doina 211
Tratat
1,3
6,4
47000
16
4,2
6,1
Prelucrat ulterior
2,8
90
16000
15
4,5
3,3
76

Tutun utilizat la producerea igrilor moldoveneti aromatizate

Burley
Tratat c
1,4
2,0
16000
8,9
5,6
Prelucrat ulterior
2,0
37
8900
8,1
4,8
Virginia 401
Tratat d
7,2
9,4
139000
20
17
Prelucrat ulterior
9,6
21
36000
18
16

8,2
1,2
46
4,2

a Prelucrare ulterioar: fermentare pentru tutunul tratat la soare; uscare repetat pentru Burley i Virginia.
b

ND nedetectat. Tratat la aer. Tratat n conducta de aer.

n Tabelul II.1 sunt prezentate nivelurile totale de NAST, NOC i NOCP din tutunul igrilor produse sau comercializate n Moldova [193,194,197]. Fiecare dintre
aceste valori este media a dou analize, ale cror rezultate nu au depit o variaie de
10%.
igrile importate conin niveluri totale nalte de NAST i NOC: n medie 16 i
63 nmol/g, respectiv (n = 6). Media nivelurilor totale de NAST i NOC pentru toate
igrile moldoveneti a fost de 5 i 23 nmol/g (n = 25). Totui, nivelurile acestor grupe
analizate au variat puternic n tutunul igrilor moldoveneti, fiind, de obicei, mai sczute n igrile tradiionale dect n cele aromatizate. Nivelurile medii totale de NOCP
au fost asemntoare n tutunul igrilor moldoveneti i ale celor importate: 29000 i
33000 nmol/g, respectiv.
Diferenele n sosuri i procesele de producere prezint un obstacol adugtor n
ncercarea de a compara coninuturile totale de NAST i NOC n tutunul igrilor. Din
acest motiv, au fost analizate NAST i NOC din tutunul utilizat, de regul, n producerea igrilor moldoveneti tradiionale i aromatizate. Tipurile de tutun tratate la soare,
prezentate n Tabelul II.2, sunt utilizate la producerea igrilor tradiionale, care conin
niveluri de NAST i NOC medii i joase. Tutunurile Burley 320 i Virginia 401 sunt
utilizate la producerea igrilor moldoveneti aromatizate. Nivelurile totale medii de
NAST i NOC n tutunurile tratate la soare au fost de 1,6 i 3,7 nmol/g, respectiv. Dup
fermentare, aceste valori au crescut la 2,6 i 62 nmol/g de tutun. Dimpotriv, nivelul de
NOCP total s-a micorat dup fermentare, cu o medie de NOCP total de 64000 nmol/g
de tutun prelucrat i 26000 nmol/g de tutun fermentat. Tutunul Virginia 401 conine
cele mai nalte niveluri de NAST, NOC i NOCP dintre tutunurile prelucrate cu valorile medii de 7,2; 9,4 i 139000 nmol/g, respectiv (Tab. II.2). Burley 320 conine niveluri moderate ale celor trei grupe analizate. Tutunul prelucrat coninea, de obicei, niveluri mai nalte de nicotin, nitrai i nitrii, dect aceleai tipuri de tutun care au fost
supuse prelucrrii ulterioare prin fermentare sau reuscare (Tab.II.2) [183,192]. Cele
mai nalte niveluri ale aproximativ tuturor grupelor analizate au fost obinute n cazul
tutunului Virginia 401.
A existat o corelaie puternic ntre nivelurile totale de NAST i NOC (r=0,66;
P<0,0001) n mostrele analizate.
Din sumarul datelor obinute la analiza comparativ a igrilor comercializate n
Moldova i n SUA constatm c:
77

Nivelurile de NAST n igrile produse n Moldova sunt cu mult mai sczute dect cantitatea acestor substane n igrile americane.
igrile fr filtru produse din tutunul ordinar conin NAST n cantiti relativ
joase.
Concentraiile cele mai nalte de NNN de la 1,104 pn la 2,091 ug/g au fost
fixate n igrile de tip american fabricate cu utilizarea liniei flux: Tandem, Temp,
Chiinu i Fluiera Extra.
Concentraiile N-nitrozoaminelor specifice tutunului n igrile de import comercializate n Moldova sunt comparabile cu nivelurile acestor substane n igrile
produse n SUA.

II.3.2. Formarea N-nitrozoaminelor la diferite etape de prelucrare

i la arderea tutunului
Se consider c N-nitrozoaminele care ptrund n organismul fumtorului pot s
se formeze la diferite etape de producere i utilizare a igrilor: n procesul de cretere
i dezvoltare a tutunului; n procesul de prelucrare tehnologic; n urma fumatului n
fracia de baz i secundar a fumului de igar; n organismul fumtorului. Cantitatea
de NAST ce se formeaz n tutun n procesul de cretere i dezvoltare a plantulei depinde n mare msur de soiul tutunului, precum i de cantitatea ngrmintelor de
azot folosite. A fost constatat c prelucrarea tehnologic a tutunului duce la formarea
cantitilor nalte de N-nitrozoamine, care cu mult depesc concentraiile de NAST n
tutunul verde neprelucrat [158-160].
La formarea NAST n tutun, este necesar de a determina att cantitatea acestor
substane, ct i a predecesorilor lor la diferite etape de producere a tutunului. Concentraia N-nitrozonornicotinei (NNN) n tutun la diferite etape de producere a tutunului a
fost aleas n calitate de parametru-indice, reieind din urmtoarele constatri obinute
n baza investigaiilor bibliografice i a cercetrilor efectuate:
- concentraia NNN n tutun este cea mai nalt comparativ cu alte NAST;
- exist o corelaie pozitiv puternic ntre cantitatea de NNN i alte NAST n
tutun.
n cadrul studiului dat a fost determinat concentraia NNN format n urma a
dou etape principale de prelucrare tehnologic a tutunului: dup uscare i dup fermentare. Identificarea i determinarea cantitativ a NNN a fost efectuat cu folosirea
sistemului de analiz GC/MS. Rezultatele obinute la analiza diferitelor tipuri de tutun
sunt prezentate n Tabelul II.3.
Tabelul II.3
Variaia concentraiei NNN n timpul fermentrii n diferite tipuri de tutun
NNN, ng/g
Tipul
de tutun

Pn la
fermentare

Dup
fermentare

Moldovenesc

90,31

97,78

[NO3-], mg/kg
CNNN, Pn la Dup
%
fermen- fermentare
tare
8,27
36,5
126

78

[NO2-], mg/kg
Pn la Dup
fermen- fermentare
tare
1,93
13,8

272
Moldovata
72
Burley 320

93,01

123,96

33,28

56,5

64,83

118,29

82,47

530

Virginia 207

164,03

217,82

32,79

870

Virginia 401

105,4

155,58

47,61

304

124

35,7

10,9

4,65

410

9,66

1330

18,4

12,0

21,6

4,6

Din datele obinute observm c concentraia NNN n tutun dup fermentare

crete considerabil de la 8,27 pn la 82,47%. Creterea cea mai nesemnificativ a
concentraiei NNN se observ n tutunul Moldovenesc 272 ce are o cantitate sczut
de nicotin. Prezint interes faptul c mrirea concentraiei NNN n tutunul Moldovenesc 272 coreleaz cu micorarea concentraiei nicotinei n timpul fermentrii. Mrirea
brusc a concentraiei NNN n procesul de fermentare tehnologic are loc n tutunul
Burley.
Pentru a clarifica rolul predecesorilor NAST, adic al nicotinei, nitrailor i nitriilor, n procesul de formare a acestor substane a fost determinat concentraia lor la aceste etape, de rnd cu concentraia NNN. Datele obinute sunt prezentate n Tabelul II.3.
Dup cum se vede din acest tabel, concentraia nicotinei n procesul de fermentare se
micoreaz n medie cu 8-10%. Coninutul de ioni nitrai i nitrii variaz ntr-un diapazon larg fr o anumit legitate. ns, trebuie de menionat c cantitatea cea mai
nalt de ioni nitrai i nitrii n tutun (Virginia 207) coreleaz cu concentraia maxim
de NNN. Tutunurile Moldovenesc 272 i Moldovata 72 conin ioni nitrai i nitrii n
cantiti relativ sczute. Concentraia NNN n aceste tipuri de tutun este la fel mai mic
dect n alte tipuri. Astfel, se confirm versiunea cu privire la rolul nitrailor i nitriilor
din tutun ca factori ce limiteaz formarea NAST n procesul de fermentare a tutunului.
Rezultatele analizei tutunului Burley demonstreaz c anume NO2-, dar nu NO3-,
limiteaz formarea NNN n timpul fermentrii. Pn la fermentare, n tutunul Burley
se conineau cantiti nalte de nitrai, iar nitriii lipseau (sau erau sub limita sensibilitii metodei), ceea ce a condiionat o concentraie a NNN la fel sczut. n procesul de
fermentare concentraia NO2- se mrete brusc; simultan se observ o cretere maxim
a concentraiei NNN, comparativ cu alte tipuri de tutun.
Este stabilit faptul c modul de prelucrare tehnologic a tutunului influeneaz
considerabil asupra procesului de formare a NAST la etapa dat. Despre aceasta indic
i rezultatele obinute la analiza comparativ a igrilor produse n Moldova i n SUA.
Diferena concentraiilor NAST, pentru igrile produse n diferite ri, poate fi explicat att prin tehnologia utilizat, ct i prin coninutul diferit al predecesorilor n tutun.
Pentru a evalua nivelul cantitativ de predecesori n tutunul igrilor studiate, a fost
efectuat analiza comparativ a nitrailor i nicotinei n aceste tipuri de igri [183].
Rezultatele obinute sunt prezentate n Tabelul II.1. Din datele experimentale obinute
constatm c nivelul diferit de NAST nu poate fi explicat prin coninutul diferit de
predecesori, deoarece nu a fost stabilit nici o corelare ntre cantitatea de nicotin sau
79

nitrai i coninutul sumar sau parial de NAST. De exemplu, pentru igrile produse n
Moldova, cea mai nalt concentraie de nitrai se observ la igrile Plai (16,27 mg/g).
Aceast concentraie este similar cu concentraia nitrailor n tutunul igrilor 1R3
produse n SUA (16,10 mg/g). n afar de aceasta, concentraia nicotinei n tutunul
igrilor Plai constituie 17,92 mg/g, iar n tutunul igrilor 1R3 12,73 mg/g. Coninutul sumar al NAST n aceste tipuri de igri nu depinde de concentraia predecesorilor
i constituie 3,334 ug/g pentru 1R3 i 0,044 ug/g pentru igrile Plai.
Lipsa corelrii ntre cantitatea de nitrai sau nicotin i coninutul sumar de NAST
poate fi demonstrat i prin analiza comparativ a coninutului de aceste substane n
igrile produse numai n Moldova [193,194]. Spre exemplu, dac comparm igrile
Plai i Chiinu, putem constata c concentraia nicotinei i a nitrailor n igrile Plai
este, respectiv, de 2 i de 1,7 ori mai nalt dect n igrile Chiinu. ns, concentraia
NAST n igrile Chiinu este de 35 ori mai nalt dect n igrile Plai.
Din analiza comparativ efectuat putem concluziona c formarea NAST la fermentarea tutunului depinde de procesul de formare a nitriilor din nitrai, care, la rndul
su, este determinat de modul de prelucrare tehnologic a tutunului.
Fabricarea igrilor la Combinatul de tutun din Chiinu Tutun-CTC se bazeaz
pe dou linii de producere. Linia ordinar este preconizat pentru prelucrarea tutunului
de clasa III i IV, care se folosete i pentru fabricarea igrilor ieftine, inclusiv a igrilor fr filtru. Tutunul este fermentat la temperatura de 60-70C i 17% umiditate
relativ timp de 8-10 zile. n SUA fermentarea tutunului se efectueaz timp de 2-3 luni
pentru transformarea mai complet a substanelor organice din tutun n substane volatile ce asigur aroma i gustul specific al tutunului. Lund n consideraie faptul c n
timpul fermentrii are loc formarea intensiv a NAST, poate fi tras concluzia c durata scurt a procesului de fermentare determin coninutul sczut de NAST n unele
tipuri de igri produse n Moldova.
A doua linie linia-flux este preconizat pentru fabricarea igrilor de tip american, cum sunt Temp, Tandem, Chiinu, Fluiera Extra. Linia aceasta include sosarea
tutunului care are loc la temperaturi ridicate. Astfel, n procesul de prelucrare tehnologic a tutunului se introduce o etap adugtoare. Aceast etap, mpreun cu calitatea
mai nalt a tutunului, determin cantitile mai mari de NAST n igrile de tip american, comparativ cu alte tipuri de igri produse n Moldova.
Formarea N-nitrozoaminelor la arderea tutunului
n literatura tiinific lipsesc date cu privire la cile de formare a NAST n fum,
la arderea tutunului. Pentru a controla formarea NAST la arderea tutunului, igrile
analizate au fost fumate cu ajutorul unui aparat, iar n fumul obinut a fost determinat
cantitatea de NAST. Din rezultatele prezentate n Tabelul II.2 constatm c concentraia NAST n fum constituie n medie 10% din coninutul lor total n tutun [196,197].
Micorarea cantitii NAST nu permite evaluarea direct a posibilitii de formare a
acestor substane la arderea tutunului.

80

Pentru a evalua contribuia formrii NAST n timpul fumatului fa de cantitatea

lor sumar identificat n fum, a fost analizat coninutul oxizilor de azot n fumul igrilor produse n Moldova [184]. Oxizii de azot pot participa n procesul de nitrozare a
nicotinei i a aminelor secundare n calitate de ageni de nitrozare.
Condensatul umed, ce se obine n aparatul de fumat, conine oxizi de azot dizolvai n vapori de ap. Oxidul NO se autooxideaz n prezena O2 cu formarea nitritului:
4 NO + O2 + H2O 4 NO2- + 4 H+
(II.1)
Mecanismul detaliat al acestui proces poate fi descris prin urmtoarele reacii:

NO + O2 ONOO
(II.2)

ONOO (sau NOO2) + NO ONOONO

(II.3)

ONOONO 2 NO2
(II.4)

NO2 + NO N2O3
(II.5)
+
N2O3 + H2O 2NO2 + 2H
(II.6)
Suspensia apoas a fumului a fost obinut prin adugarea apei la extractul fumului cu distilarea ulterioar a acetonei [52]. Nitriii au fost oxidai cu ajutorul peroxidului de hidrogen i cantitatea lor a fost determinat prin metoda poteniometric. Concentraia NO2 n fumul de igar a fost calculat folosind formula elaborat de Neurath
et al. [173] pe baza cineticii procesului de oxidare a NO, coninutului de NO n fum,
coninutului de O2 n fum i profilului de temperatur caracteristic fumului de igar:
X = kbta2 / (1 + 2atbk)
(II.7)
unde: X cantitatea de NO2 ce se formeaz n t sec.;
t = 0,1 perioada de timp, cnd o poriune dat de fum are temperatura 165oC;
k constanta de vitez a reaciei de oxidare a NO n NO2 la condiii date
(k = 7,1109 ml2/molsec);
b concentraia oxigenului n fum (1/2 din concentraia n aer,
b = 4,9610-6 mol/ml);
a concentraia NO n fum (se determin experimental).
Tabelul II.4
Coninutul oxizilor de azot n fumul igrilor produse n Moldova

C NO2 ,

Tipul de igri

CNO,
g/ig

g/ig

Temp
Doina
Prima
Astra
Fluiera
Ancora de Aur
Chiinu
Astra (bulg.)

50
39,17
63,27
49,61
56,91
76,04
47,62
33,64

1,28
0,79
2,06
1,26
1,67
2,97
1,17
0,57

NDMA, ng/ig
n
n fum
tutun
0,65
0,99
0,75
1,94
1,04
0,44
2,28
3,24
5,43
12,02
1,69
2,81
4,68

81

NDEA, ng/ig
n tutun

n fum

0,72

1,04

1,32
-

3,1
0,62

Cosmos
CTC 75

19,59
10,00

0,20
0,05

2,42

3,47
4,13

2,43

Din datele din literatur este cunoscut c, n lipsa aerului, la temperaturi pn la

120oC, anume NO2, dar nu NO, particip n procesul de nitrozare a aminelor cu formarea
N-nitrozoaminelor. ns, n conformitate cu datele obinute experimental, la arderea
igrilor se formeaz NO din nitraii ce se conin n tutun. De asemenea, este cunoscut
faptul c la temperaturi mai nalte de 165oC bioxidul de azot disociaz cu formarea
NO i O2:
t 165 C
2NO2
(II.8)
2NO + O2
n igri, piroliza tutunului are loc la temperaturi cu mult mai nalte dect 165oC.
Astfel, formarea NO2 n fum are loc n rezultatul oxidrii lente a oxidului NO la temperaturi mai joase de 165oC. Prin urmare, putem constata c viteza de formare a
N-nitrozoaminelor n fumul de igar depinde de viteza procesului de formare a NO2,
care n continuare formeaz ageni de nitrozare pentru diferite substraturi (II.9-II.11):
o

(II.9)
(II.10)
(II.11)
n legtur cu cantitatea mic a agenilor de nitrozare n fumul de igar [195], este
necesar a examina sursa de formare a N-nitrozoaminelor volatile la arderea tutunului.
Analiza acestor substane a fost efectuat n 10 tipuri de igri produse n Moldova.
Pentru analiza cantitativ a N-nitrozoaminelor n tutun i n fumul de igar a fost folosit cromatogaful gazos portativ MTI. Identificarea picurilor a fost efectuat cu ajutorul
sistemului GC/MS. Datele obinute sunt prezentate n Tabelul II.4. Spre deosebire de
N-nitrozoamine specifice tutunului, cantitatea de N-nitrozoamine volatile crete considerabil la arderea tutunului [191,196].
Din cele expuse reiese concluzia c acea cantitatea mic de agenii activi de nitrozare, care se formeaz la arderea tutunului, particip n procesul de nitrozare a aminelor secundare, care, la rndul lor, sunt formate n rezultatul pirolizei nicotinei i a altor
substane organice din tutun. n fumul de igar nu are loc formarea adugtoare a
N-nitrozoaminelor specifice tutunului.

Concluzii:
Factorii principali ce influeneaz asupra procesului de formare a NAST n tutun
sunt tipul de tutun i modul de prelucrare tehnologic a tutunului.
Concentraia nitriilor este determinat de modul de prelucrare tehnologic a
tutunului i reprezint factorul principal ce limiteaz formarea NAST n timpul
fermentrii.
Durata scurt a procesului de fermentare determin coninutul sczut de NAST n
unele tipuri de igri produse n Moldova.
82

Sosarea tutunului la temperaturi ridicate, care este aplicat n linia-flux, mpreun

cu calitatea mai nalt a tutunului, determin formarea cantitilor mai mari ale
NAST n igrile de tip american, comparativ cu alte tipuri de igri produse n
Moldova.
La arderea igrilor se formeaz oxidul de azot NO din nitraii ce se conin n
tutun.
Concentraia bioxidului de azot, care servete n calitate de agent de nitrozare n
fumul de igar, este foarte mic i reprezint factorul ce limiteaz viteza procesului de formare a N-nitrozoaminelor la arderea tutunului.
Agenii activi de nitrozare formai n fumul de igar particip n procesul de nitrozare a aminelor secundare cu formarea N-nitrozoaminelor volatile, iar formarea
adugtoare a NAST n fumul de igar nu are loc.

II.3.3. Studiul cinetic al procesului de formare a NAST n sisteme-model

Cercetarea mecanismelor proceselor de formare a NAST din predecesori este
foarte important pentru aprecierea adecvat a riscului cauzat de fumat. Pentru aceasta, este necesar studierea cineticii proceselor de formare i transformare a NAST
la diferite etape de cretere, prelucrare tehnologic a tutunului, precum i la arderea
igrilor.
Pentru a determina mecanismele proceselor de formare a N-nitrozoaminelor n tutun
i n fumul de igar este necesar de a studia cinetica procesului de formare a acestor
substane din predecesori pe sisteme-model. n conformitate cu cercetrile efectuate de
prof. Hecht S.S. [182], nicotina i ali alcaloizi ai tutunului sunt predecesorii N-nitrozoaminelor din tutun. n calitate de ageni de nitrozare servesc nitriii care se formeaz
din nitraii ce se conin n cantiti mari n tutun. n afar de aceasta, n timpul arderii
nitraii din tutun pot fi transformai n oxizi de azot. Oxizii de azot pot servi n calitate
de ageni de nitrozare n procesul de formare a N-nitrozoaminelor n fum; de asemenea,
oxizii de azot pot fi supui transformrii ulterioare cu formarea nitriilor. Nitriii formai pot
participa n procesele de nitrozare a nicotinei din fum. Lund n consideraie cele expuse,
este necesar a studia detaliat cinetica procesului de nitrozare a nicotinei cu nitrii.
n prezenta lucrare, procesul de nitrozare a fost urmrit att dup consumul de
substane iniiale, ct i dup acumularea produilor de reacie. Curbele cinetice de
consum al substanelor iniiale (Fig. II.3II.4) n procesul de nitrozare au demonstrat
c mecanismul de nitrozare a nicotinei este complex [189-191,198].

83

Fig. II.3. Curbele cinetice de consum al ionilor

nitrii n dependen de concentraia iniial
a nicotinei; [NO2-]o = 110-4M, pH 3,5.

Fig. II.4. Curbele cinetice de consum al

nicotinei n dependen de [NO2-]o;
[Nic]o = 1,910-4M, pH 3,5.

Studiul dependenei vitezei iniiale (Wini) n procesul de nitrozare a nicotinei de

concentraia nicotinei (Nic) i a nitritului a demonstrat c viteza crete odat cu mrirea
concentraiei substanelor iniiale (Fig. II.5).

Fig. II.5. Dependena Wini de nitrozare a nicotinei n funcie de [NO2-]o

(dup consumul de nicotin); [Nic]o = 1,910-4M; pH 3,5 (a) i de [Nic]o
(dup consum de nitrit); [NO2-]o = 110-4M, pH 3,5 (b).

Curbele cinetice obinute la nitrozarea nicotinei n dependen de pH (Fig. II.6)

au demonstrat c viteza trece prin maximum la pH 3,5 (Fig. II.7).
n conformitate cu datele obinute anterior, la micorarea pH-ului pn la 3,5 n
soluia cu ioni nitrii are loc acumularea N2O3, ca produs intermediar de transformare a
ionului nitrit. La valorile de pH < 2,5 are loc micorarea concentraiei N2O3 i creterea
concentraiei cationului de nitrozoniu (NO+). Apariia maximului vitezei procesului de
nitrozare la pH 3,5 exclude participarea NO+ n procesul dat. Reieind din cele expuse,
putem concluziona c produsul intermediar ce se formeaz la transformarea nitritului
este oxidul N2O3 i el servete n calitate de agent de nitrozare n sistemul NO2- nico 84

tin. Aceast concluzie poate fi extins i la sisteme reale, deoarece pH-ul tutunului
variaz n general n limitele de la 5 pn la 8.

Fig. II.6. Curbele cinetice de consum al

nitritului n f(pH); [Nic]o = 6,310-5M;
[NO2-]o = 110-4M.

Fig. II.7. Dependena Wi n procesul de

nitrozare a Nic de pH; [Nic]o = 1,910-4M;
[NO2-]o = 210-3M.

Pentru nelegerea mai profund a mecanismului procesului de nitrozare a nicotinei, este necesar de a studia cinetica acestui proces dup acumularea produselor de
reacie. n literatur [169] a fost constatat c n rezultatul acestui proces sunt formate
trei nitrozoamine specifice tutunului: N-nitrozonornicotina (NNN), 4-(metilnitrozamino)-1-(3-piridil)-1-butanona (NNK) i 4-(metilnitrozamino)-4-(3-piridil)-1-butanol.
ns, cinetica acestui proces nu a fost studiat detaliat.
n aceast lucrare a fost determinat ordinul reaciei de nitrozare a nicotinei i constantele de vitez pentru trei procese paralele (Fig. II.8). A fost studiat dependena
Wi de concentraia substanelor iniiale, pH i temperatur. Separarea adecvat a nicotinei i a trei NAST a fost atins prin utilizarea metodei cromatografice [193,194].

Fig. II.8. Interaciunea nicotinei cu HNO2 i formarea NNA, NNN i NNK.

Rezultatele experimentale obinute n studiul cinetic al procesului de acumulare a

N-nitrozoaminelor formate au artat c produsul principal al acestui proces este NNA.
85

Viteza iniial de formare a NNA este de ordinul 10-9 mol/(ls), iar viteza iniial pentru
NNN i NNK este de ordinul 10-10 mol/(ls).
Studiul legitilor cinetice de acumulare a produselor de reacie n dependen de
concentraia nicotinei i a ionului nitrit (Fig. II.9, II.10, Tab. II.5) a demonstrat c viteza
acestui proces crete odat cu mrirea concentraiei substanelor iniiale. Variaia
concentraiei substanelor iniiale a fost folosit pentru determinarea ordinului de reacie
dup nicotin i nitrit. Rezultatele primite au demonstrat c reacia este de ordinul 1
dup ambele substane reactante [55].

Fig. II.9. Curbele cinetice de acumulare a

NNN n dependen de [NO2-]o;
[Nic]o = 110-3M, pH 3,5.

Fig. II.10. Curbele cinetice de acumulare

a NNN n dependen de [Nic]o;
[NO2-]o = 110-3M, pH 3,5.
Tabelul II.5

Formarea NAST (NNA, NNN, NNK) la nitrozarea Nic cu nitrii n funcie de [Nic]o;
[NO2-] = 110-3M; pH 3,5; t = 60 min., i n funcie de [NO2-]o; [Nic]o = 110-3M

[Nitrii]0

[Nicotin]0

Funcie
de

Formarea NNA
Wi,
1010
Ms-1
1,0
28
0,2
5,0
14
1,0
10,0
6
2,0
20,0
2
4,1
Wi,
[NO2-]o, [NNA],
1010
104 M 107 M
Ms-1
1,0
27
5,0
14
10,0
6
20,0
1
[Nic]o, [NNA],
104 M 107 M

Formarea NNN
%
[NNN],
NNA 108 M
0,28
0,14
0,06
0,02

36
19
9
1

%
[NNN],
NNA 108 M
0,27
0,14
0,06
0,01

37
19
4
1

Wi,
1010
Ms-1
0,2
1,1
2,4
5,2
Wi,
1010
Ms-1
0,2
1,2
2,5
5,1

Viteza acestei reacii poate fi prezentat prin relaia:

W = k[Nicotina][NO2-]
86

Formarea NNK

Wi,
1010
Ms-1
0,36
26
0,25
0,19
12
1,0
0,09
6
1,75
0,01
1
3,75
Wi,
% [NNK],
10
10
NNN 108 M
Ms-1
0,037
26
0,25
0,019
11
0,8
0,004
7
1,75
0,001
1
3,7
% [NNK],
NNN 108 M

%
NNK
0,26
0,12
0,06
0,01
%
NNK
0,026
0,011
0,007
0,001

(II.12)

Rezultatul obinut difer de cel pentru procesele de nitrozare a aminelor secundare,

n care ordinul dup amin este unu i dup ionul nitrit doi. ns, rezultatul obinut
este n conformitate cu afirmaiile lui Gowenlock i col., care a constatat c procesul
de nitrozare a unui ir de trialchilamine este de ordinul unu dup ambii reactani. Constanta efectiv a vitezei de reacie poate fi calculat din valoarea obinut a constantei
k prin utilizarea ecuaiei:
k = k(1+[10-pH/10-pKnic])(1+[10-pKa/10-pH]),
(II.13)
unde pKa este pK al acidului azotos i pKNic este pK al nicotinei.
Din datele din literatur: pKa = 3,37 i pKNic = 8,02.
Ecuaia (II.13) a fost folosit la calcularea k pentru fiecare produs obinut la nitrozarea nicotinei prin utilizarea valorilor k, obinute experimental, i valorile pKs, obinute
din literatur.
Constantele k i k pentru formarea NNA, NNN i NNK la pH 3,5 i temperatura
25C sunt prezentate n Tabelul II.6. Constanta vitezei de formare a NNA este cu un ordin
mai nalt dect pentru NNN i NNK, ceea ce corespunde observaiilor lui Hecht S.S.
et al., care susin c NNA este produsul principal n procesul de nitrozare a nicotinei la
pH 3,4 i temperatura 20C [157].
Tabelul II.6
Constantele de vitez pentru formarea NAST din nicotin
i ioni nitrii la pH 3,5; t = 20C
Produs
k(*) x 105, s-1
k(**), s-1
NNA
53,2 +/- 5
36,3 +/- 7
NNN
5,4 +/- 1,5
4,9 +/- 1,1
NNK
7,5 +/- 1,3
5,4 +/- 1,4
(*)

constanta obinut experimental, (**) constanta efectiv de vitez.

Pentru a nelege mai profund mecanismul procesului de nitrozare a nicotinei,

aplicm la sistemul dat mecanismul cinetic, elaborat pentru aminele teriare (Schema 1).
Acest mecanism include formarea particulelor active de nitrozare ONX N2O3 sau
H2NO2+. Nicotina (R3N) se supune nitrozrii reversibile cu formarea R 3NNO+ i, la
etapa ce determin viteza procesului, acest intermediat se supune eliminrii lente a
HNO. Ionul format reacioneaz rapid cu formarea produilor finali ai reaciei de nitrozare. Deosebirea acestui mecanism de cel al procesului de nitrozare a aminelor secundare const n faptul c etapa de nitrozare iniial (k3) nu limiteaz viteza procesului
dat. Etapa ce limiteaz viteza procesului de nitrozare a nicotinei este prezentat de pierderea HNO (k4). Din mecanismul propus poate fi dedus ecuaia vitezei de formare a
produsului final:
W = (K1K3k4/K2)[H+][R3N][HNO2]
(II.14)
Mecanismul acesta corespunde rezultatelor obinute n prezenta lucrare, deoarece
din ecuaia (II.12) rezult c reacia este de ordinul unu att dup nicotin, ct i dup
nitrit.
K1

ONX + H2O
HNO2 + HX
(II.15)

87

K2

H+ + XHX

k3

R3N + ONX
R3NNO+ + Xk 3

k4
R2N = CHR+ + HNO
R3NNO+

k5
PRODUSE
R2N = CHR+
X = NO2 , H2O

(II.16)
(II.17)
(II.18)
(II.19)

Schema 1

II.3.4. Diminuarea coninutului de N-nitrozoamine specifice tutunului

n fumul de igar
Pentru reducerea riscului de cancer pulmonar cauzat de prezena NAST n fumul
de igar, este necesar a diminua concentraia NAST n fumul igrilor produse n
Moldova.
Exist mai multe posibiliti de a reduce cantitatea de NAST n fumul de igar,
de exemplu inhibiia procesului de formare a NAST din predecesori, degradarea
NAST formate, eliminarea NAST din fum, folosind filtre speciale, substituia parial
a tutunului cu alte plante.
II.3.4.1. Influena inhibitorilor asupra procesului de formare a NAST n tutun
Reieind din faptul c N-nitrozocompuii se formeaz n rezultatul nitrozrii aminelor i amidelor, inhibiia formrii acestor substane poate fi atins att prin reducerea
cantitii de predecesori ce particip la formarea NNA, ct i prin folosirea reductorilor capabili de a interaciona cu agenii de nitrozare.
n cazul NAST, n calitate de predecesori servesc alcaloizii tutunului, iar n calitate de ageni de nitrozare particulele active care se formeaz din nitrai i nitrii ce
se conin n tutun. Stabilirea faptului c la fermentarea tutunului se acumuleaz cea
mai mare cantitate de NAST permite de a presupune c aplicarea metodelor de inhibiie
la aceast etap de prelucrare a tutunului va fi maximal eficient.
Procesul de fermentare tehnologic duce la diminuarea concentraiei de nicotin
i a altor alcaloizi ai tutunului. n dependen de condiiile de fermentare, pierderea
nicotinei poate atinge 8-60%. Lund n consideraie faptul c nicotin nu reprezint
factorul ce limiteaz formarea NAST n tutun, precum i importana nicotinei n
asigurarea calitii produselor de tutungerie, reducerea mai intens a coninutului de
nicotin nu are sens.
Dup cum am stabilit mai sus, formarea ionilor nitrii din nitrai limiteaz procesul de nitrozare a nicotinei n timpul fermentrii. Astfel, o cale efectiv de inhibiie a
procesului de nitrozare const n introducerea n tutun a unor substane reductoare,
capabile de a lega nitriii formai.
Acidul ascorbic (AAs) se folosete larg pentru inhibiia proceselor de nitrozare
att n produsele alimentare, ct i n organismul uman. Mecanismul inhibiiei se
bazeaz pe oxidarea AAs pn la dehidroascorbic cu reducerea ionului nitrit pn la
88

NO proces care concureaz cu nitrozarea aminelor. n calitate de inhibitori pot fi folosite i alte substane care posed proprieti reductoare i nu sunt toxice pentru organismul uman. ns, este necesar de a lua n consideraie faptul c compoziia tutunului
influeneaz considerabil asupra calitii produsului final. De exemplu, prezena acizilor organici volatili joac un rol important n formarea aromei fumului; pectinele i
alcoolul metilic influeneaz negativ asupra calitii tutunului. Potasiul influeneaz
pozitiv asupra duratei de ardere a tutunului, iar clorul, sulful i fluorul ncetinesc procesul de ardere. Prin urmare, la selectarea inhibitorilor poteniali trebuie se fie luat n
consideraie influena lor asupra calitii produsului final.
Lund n consideraie cele expuse, pentru a examina posibilitatea inhibiiei procesului de nitrozare a nicotinei, n calitate de inhibitori au fost alese urmtoarele substane:
acidul citric, acidul tartric i tartratul de potasiu.
Elaborarea metodelor de inhibiie se bazeaz pe cunoaterea legitilor cinetice de
formare a NAST. Pentru a determina proprietile inhibitoare ale substanelor selectate
a fost studiat cinetica procesului de nitrozare n prezena lor i rezultatele obinute au
fost comparate cu nitrozarea nicotinei n lipsa acestor substane [185,186,188].
Nitrozarea nicotinei n prezena acidului citric,
acidului tartric i tartratului de potasiu
A fost studiat dependena cineticii procesului de nitrozare de concentraia iniial
a substanelor testate [188].

Fig. II.11. Curbele cinetice de consum al NO2- (a) i Wi de concum al NO2- (b) la nitrozarea
nicotinei n prezena inhibitorilor; [Nic]o = 6,310-5M; [NO2-]o = 110-3M, pH 3,5.

Viteza procesului a fost urmrit dup consumul de nicotin, ioni nitrii i dup
acumularea NNN. Din curbele cinetice de consum al nitritului (Fig. II.11(a)) constatm
c viteza acestui proces crete odat cu creterea reductorilor studiai (Fig. II.11(b)).
Viteza de acumulare a NNN scade n prezena substanelor studiate (Fig. II.12).
S-a stabilit c tartratul de potasiu este inhibitor mai efectiv n procesul de nitrozare a
Nic., comparativ cu acidul citric i tartric [185,186,188]. Adugarea acestor substane
89

n tutun are i alte efecte pozitive asupra calitii produsului final, formnd aroma fumului i influennd pozitiv asupra duratei de ardere a tutunului.
Inhibitorii utilizai au fost examinai experimental n sisteme reale prin adugarea
lor n timpul fermentrii tutunului i analiza ulterioar a NNN n tutunul fermentat.
Rezultatele obinute au confirmat proprietile inhibitoare ale substanelor studiate
(Fig. II.13).

Fig. II.12. Viteza de acumulare

a NNN n dependen de natura
inhibitorilor; [Nic]o = 6,310-5M;
[NO2-]o = 110-3M, pH 3,5.

Fig. II.13. Variaia concentraiei NNN n tutun n

prezena inhibitorilor:
1 - tutun nefermentat; 2 - tutun fermentat fr adaosuri;
3 - tutun fermentat cu acid citric; 4 - tutun fermentat cu
acid tartric; 5 - tutun fermentat cu tartrat de potasiu.

II.3.4.2. Degradarea fotolitic a N-nitrozoaminelor

Este cunoscut faptul c N-nitrozoaminele se supun descompunerii fotolitice sub
aciunea razelor UV. Aceasta reprezint o alt posibilitate de diminuare a coninutului
de NAST n tutun. Nicotin la fel se supune descompunerii sub aciunea razelor UV,
ns, fiecare tip de igri trebuie s conin o anumit cantitate de nicotin pentru a
corespunde nivelului necesar de calitate. Din aceasta reiese c tratarea tutunului cu
razele UV nu trebuie s duc la micorarea excesiv a coninutului de nicotin. Pentru
optimizarea timpului de iradiere s-au folosit soluii apoase de NNA. A fost studiat
degradarea unui amestec standard de 8 N-nitrozoamine sub aciunea razelor UV i
rezultatele obinute au fost comparate cu procesul de descompunere fotolitic a nicotinei. Concentraia N-nitrozoaminelor i a nicotinei a fost determinat prin metoda
cromatografic. Cromatogramele obinute la analiza probei standard netratate i dup
tratarea cu raze UV timp de 30 min. sunt prezentate n Figurile II.14, II.15, corespunztor. Studiile efectuate au demonstrat posibilitatea descompunerii NNA, fr diminuarea considerabil a coninutului de nicotin n tutun (Fig. II.16,a). Cercetrile privind dependena vitezei de descompunere fotolitic NNA de concentraia acestora a
demonstrat c viteza degradrii crete odat cu mrirea concentraiei substanelor studiate (Fig. II.16,b). Rezultatele cercetrilor efectuate pe sisteme-model au fost aplicate
i pe sisteme reale. Metoda const n extragerea tutunului cu ap, tratarea extractului
apos cu raze UV i ntoarcerea extractului tratat la tutun.
90

Fig. II.14. Analiza cromatografic a amestecului standard de opt N-nitrozoamine

(proba netratat): I NDMA; II NMEA; III NDEA; IV NPYR; V NMor;
VI NDPA; VII NPip; VIII NDBA.

Fig. II.15. Analiza cromatografic a amestecului standard de opt N-nitrozoamine

(tratare cu raze UV timp de 30 min.) I NDMA; II NMEA; III NDEA; IV NPpyr;
V NMor; VI NDPA; VII NPip; VIII NDBA.

Fig. II.16. Degradarea fotolitic a amestecului de NNA i a nicotinei (a)

i dependena vitezei de descompunere fotolitic de [NNA]o (b).
91

II.3.4.3. Adsorbia N-nitrozoaminelor din fum

Crbunele activ este deja utilizat ca ingredient la fabricarea filtrelor pentru igri.
ns, el este costisitor, ceea ce limiteaz utilizarea lui. Din acest motiv au fost examinate posibilitile utilizrii altor sorbeni, i anume: a diatomitului n procesul de fabricare a igrilor pentru obinerea unui coninut mai redus de NAST i, totodat, la un
pre accesibil.
Studiul adsorbiei nicotinei i a N-nitrozoaminelor pe sisteme-model
Adsorbia NNA i a nicotinei pe diatomit a fost studiat pe sisteme-model, din
soluii apoase [185-187]. Pentru cercetri a fost folosit diatomitul moldovenesc neprelucrat i kiselgurul (diatomit fin prelucrat, SUPELCO, Frana). Din datele experimentale obinute la adsorbia nicotinei (Fig. II.17) i a NDEA (Fig. II.18) s-a constatat
c cea mai mare cantitate a substanelor studiate se adsoarbe pe diatomit n primele
10 minute.

Fig. II.17. Adsorbia Nic pe diatomit

neprelucrat i kiselgur.

Fig. II.18. Adsorbia NDEA pe diatomit

neprelucrat i kiselgur.

Din datele obinute experimental au fost calculate constantele de adsorbie a nicotinei i NDEA pe diatomit (Tab. II.7). Compararea constantelor de adsorbie obinute
a demonstrat c adsorbia nicotinei pe diatomit decurge mai intens dect adsorbia
NDEA. ns, la alegerea sorbentului pentru filtrele igrilor trebuie s inem cont de
faptul c N-nitrozoaminele trebuie s fie ndeprtate complet din fumul de igar, iar
diminuarea considerabil a coninutului de nicotin reduce calitatea tigrilor.
Cu scopul examinrii influenei prelucrrii diatomitului asupra adsorbiei substanelor toxice din fumul de igar a fost studiat cinetica adsorbiei nicotinei i NDEA
pe kiselgur. Compararea adsorbiei substanelor cercetate pe diatomit neprelucrat i
kiselgur a artat c adsorbia pe kiselgur decurge mai intens dect pe diatomit pentru
ambele substane.
Diferena constantelor de adsorbie este nesemnificativ (Tab. II.7).
Din rezultatele obinute putem concluziona c activarea special a diatomitului
moldovenesc poate duce la rezultate satisfctoare, permind utilizarea ulterioar la
fabricarea filtrelor pentru igri.
92

Tabelul II.7
Constante de adsorbie a nicotinei i NDEA pe diatomit i kiselgur
Substana

Kads.

studiat

Diatomit neprelucrat

Kiselgur

Nicotin

0,446

1,87

NDEA

0,13

0,27

Metoda a fost experimentat pe sisteme reale, prin adugarea diatomitului n

filtrele igrilor. Diatomitul (sau kiselgurul) a fost introdus n partea central a filtrului
i igrile au fost fumate cu ajutorul aparatului. n fumul rezultat a fost determinat
cantitatea de nicotin, gudroane i NNN. Pentru analiz au fost alese igrile Doina,
MT, Temp i Astra, deoarece aceste tipuri difer considerabil dup coninutul de NAST.
Tabelul II.8
Concentraia de gudroane, nicotin i NNN n fumul de igar
la introducerea diatomitului n filtru
Tipul de
igri

Doina

MT

Temp

Astra

Masa
diatomitului
adugat la
filtru (g)
control
10
50
100
control
10
50
100
control
10
50
100
control
10
50
100

Gudroane,
mg/ig.

Nicotin,
mg/ig.

NNN,
ng/ig.

14,15
11,60
3,05
14,85
14,70
2,50
16,55
15,95
2,10
13,50
13,05
2,55
-

1,24
1,04
0,28
0,97
0,90
0,16
1,06
1,02
0,31
1,03
0,95
0,19
-

28,56
24,20
19,98
15,21
57,12
46,40
35,97
24,42
157,09
125,11
103,91
89,68
10,52
9,44
7,62
4,67

Datele obinute au artat c cantitatea de gudroane, nicotin i NNN n fumul

igrilor testate se micoreaz odat cu mrirea masei de diatomit introdus n filtre.
Analiza comparativ a demonstrat c folosirea diatomitului prelucrat (kiselgur) duce la
93

eliminarea mai eficient a substanelor toxice din fumul de igar (Fig. II.19, II.20).
Rezultatele obinute au demonstrat necesitatea elaborrii metodelor de activare a diatomitelor din Moldova cu scopul utilizrii lor n filtrele igrilor pentru eliminarea
N-nitrozoaminelor din fumul de igar. Lund n consideraie faptul c concentraia
NAST n fumul de igar este cu mult mai mic dect concentraia nicotinei, activarea
special a diatomitului moldovenesc poate aduce la eliminarea practic complet a
NAST din fum.

Kiselgur

Kiselgur

Fig. II.19. Adsorbia NNN

din fumul igrilor MT pe diatomit
i kiselgur.

Fig. II.20. Adsorbia NNN din fumul

igrilor Temp pe diatomit
i kiselgur.

Sumarul datelor obinute n rezultatul studiului mecanismului procesului de formare a N-nitrozoaminelor specifice n tutun i n fumul de igar au permis de a formula
urmtoarele concluzii:
Viteza reaciei de nitrozare a nicotinei este de ordinul 1 dup substanele iniiale
nicotin i ion nitrit, ce corespunde mecanismului procesului de nitrozare pentru
trialchilamine.
Viteza procesului de nitrozare a nicotinei trece prin maximum la pH3,5.
Produsul intermediar de transformare a nitritului este oxidul N2O3, care este agent
de nitrozare n sistemul NO2- nicotin.
Mecanismul procesului de nitrozare a nicotinei include formarea agentului de
nitrozare, interaciunea lui cu nicotina, pierderea HNO i formarea produilor de
reacie.
Concentraia nitriilor este influenat de modul de prelucrare tehnologic a tutunului i reprezint factorul principal ce limiteaz formarea NAST n timpul fermentrii.
La arderea igrilor se formeaz oxidul de azot NO din nitraii ce se conin n
tutun.
94

Concentraia bioxidului de azot, care servete drept agent de nitrozare n fumul

de igar, este foarte mic i reprezint factorul ce limiteaz viteza procesului de
formare a N-nitrozoaminelor la arderea tutunului.
Agenii activi de nitrozare formai n fumul de igar particip n procesul de
nitrozare a aminelor secundare cu formarea N-nitrozoaminelor volatile, iar formarea adugtoare a NAST n fumul de igar nu are loc.

Din sumarul cercetrilor efectuate privind micorarea coninutului de NAST n

fumul de igar putem nainta urmtoarele propuneri:
tartratul de potasiu poate fi folosit n calitate de inhibitor al procesului de nitrozare a nicotinei la fermentarea tutunului;
distrugerea NAST formate la fermentarea tutunului poate fi atins prin tratarea
extractului apos din tutun cu raze UV;
diatomitul moldovenesc poate fi utilizat n filtrul igrilor cu scopul eliminrii
NAST din fumul de igar.

95