Termenul biomarker este acceptat n ultimii ani, dei are nc o

definire inconsistent. Biomarkerii sunt oricare din rspunsurile

biologice la o substan chimic la nivel individual sau o
ndeprtare a organismului de starea normal a organismului.
Clasificare a rspunsurilorbiologice : biochimice, fiziologice,
histologice, morfologice i comportamentale -biomarkeri.
Anumite exemple de biomarkeri la nivele diferite de organizare
sunt artate n tabelul 10.1. Rspunsurile biologice la nivele de
organizare superioare nivelului individual (populaie, comunitate i
ecosistem ) sunt considerate ca bioindicatori. Totui, din punct
de vedere al importanei, unele rspunsuri sunt considerate, n
general, biomarkeri specifici. Relaia dintre biomarkeri i
bioindicatori privind specificacitatea i relevana ecologic este
artat n figura 10.1. n general, se poate spune c este dificil de
descris modificrile ecologice (chiar dac subierea cojii oulor la
unele specii de psri este cauzat de p,p'-DDE ,iar imposex ul la
crabi de TBT), ntruct i schimbrile fiziologice sunt legate de
schimbarea masiv a populaiei.

Clasificarea biomarkerilor
Au fost propuse mai multe clasificri ale biomarkerilor. Mai frecvent utilizat
este mprirea n acestora n dou tipuri de biomarkeri:
de expunere;
de efect.
Biomarkerii de expunere -rspunsuri care indic expunerea organismului
la substane chimice, dar nu d nicio informaie asupra nivelului efectelor
adverse pe care acestea le cauzeaz.
Biomarkerii de efect sau poate, mai corect, efectele toxice (din cauz c
toi biomarkerii prin definiie produc un astfel de efect) -rspunsuri care induc
efecte adverse demonstrate asupra organismului.
Conceptul de biomarker se bazeaz pe modificrile parametrilor fiziologici
artate n figura 10.2.
Modificarea strii de sntate a unui individ, odat cu creterea timpului
de expunere la o substan chimic este indicat printr-o curb dreapt,
plecnd de la o stare de sntate complet reversibil la schimbrile
ireversibile care pot conduce la moarte. Punctele de tranziie pe traseul
acestei ci sunt:

organismul s fie anterior stresat,

funciile sunt afectate, iar organismul, dei stresat, este capabil s compenseze acest
stres,

organismul nu este capabil s compenseze un timp ndelungat,

schimbrile sunt reversibile, iar ndeprtarea stresului permite nsntoirea organismului,

punctul r -schimbrile sunt ireversibile i n final moartea.

Specificitatea biomarkerilor

mprirea biomarkerilor n specifici i nespecifici este necesar ntruct efectele

asupra sistemului imunitar pot fi cauzate de o varietate larg de poluani. O
list a biomarkerilor n funcie de gradului lor de specificitate este dat n tabelul
10.2.
Biomarkerii specifici, ct i cei nespecifici au o valoare important n
evaluarea hazardelor. Ex. prin probele de snge ale unei psri maritime-este
determinat activitatea ALAD (dehidrogenaza acidului aminolevulinic), astfel fr alte
msurtori, se determin procentul psrilor maritime expuse intoxicaiilor cu
plumb.
determinarea ALAD nu aduce nicio informaie despre ali poluani
care pot fi prezeni n mediu.
Inhibiia AChE poate fi utilizat pentru a furniza dovezile legale ale morii
provocate de pesticidele organofosforice i carbamate, o astfel de aciune
inhibitorie fiind considerat specific la aceste clase de poluani chimici. Totui,
n ultimii ani, evidenele au indicat c inhibiia AChE este cauzat i de alte
pesticide. Payne (1996) stabilete depresia activitii AChE la peti mai mare de
50% i consider c n acest caz poate fi implicat un complex de poluani. Astfel,
Guillermino i col. (1998) a artat c detergenii i metalele pot inhiba activitatea
AChE i sugernd c utilizarea acestei enzime ca biomarker poate fi extins.
Inducerea monooxigenazelor - o mare varietate de substane chimice -constituie un indicator
sensibil al prezenei poluanilor. Aceasta este o indicaie obinuit prin care organismele afectate de
poluani dau slabe informaii asupra cauzei specifice. n acest caz, biomarkerul are
valoare de studiu
secundar din cauz c poluanii trebuie s fie prezeni la un nivel destul de
ridicat pentru a
provoca un efect detectabil.

Biomarkeri specifici

Inhibiia esterazelor
Monoxigenazele
Studiile asupra materialului genetic
Porfirinele i sintezele hemului
Inducerea vitelogenului
Inhibiia esterazelor

AChE este utilizata ecotoxicologic a-special -indic locul lor de aciune al ST- nivelul lor indic inhibarea corelat
cu efectele toxice. Butiratcolinesteraza (BuChE) -studiat n anumite situaii n paralel cu AChE-rolul su
este necunoscut i nivelul de inhibare nu este att de uor de corelat cu efectul toxic. Studiul neuropatiilor
provocate de esteraze , a cror interaciune cu compuii organofosforici (OP) poate conduce la ntrzierea
influxului nervos, a fost limitat la studiile de laborator. Modul lor de aciune este binecunoscut i a fost artat
anterior.
La vertebrate-inhibiia AChE cerebrale -utilizat la stabilirea cauzelor morii produse de ctre pesticide
carbamate (Mineau, 1991). n condiii ideale, inhibiia n procent de 50-80% poate fi luat drept dovad a
mortalitii provocate de pesticide. n practic, nivelul poluarii este adesea necunoscut, i de aceea un control
adecvat este greu de obinut. De asemenea, inhibiia carbamailor este foarte uor reversibil i se poate
pierde cu uurin dup moarte.
determinarea OP-urilor i a carbamailor este mai dificil
rapid metabolizai i eliminai; de fapt, analizele chimice ale nivelelor reziduale nu au fost larg utilizate n
diagnosticul intoxicaiilor produse de aceti compui.

esCreierul - organul cel mai des folosit ca prob la vertebratele slbatice, ntruct acesta este
principalul loc de aciune al OP-urilor i carbamailor. Cu toate c folosirea inhibrii AChE i
BuChE serice sunt mult mai acceptabile, ntruct inhibarea AChE cerebrale este mult mai
complex. Studiile au artat c variabilitatea activitii esterazei este mult mai mare n plasm
dect n creier i de aceea refacerea activitii AChE serice este mult mai rapid dect a celei
din sistemul nervos i, astfel, diagnosticul bazat pe activitatea seric a AChE este dificil.

 Creierul - organul cel mai des folosit ca prob la vertebratele slbatice,

ntruct acesta este principalul loc de aciune al OP-urilor i carbamailor. Cu
toate c folosirea inhibrii AChE i BuChE serice - mult mai acceptabil,
ntruct inhibarea AChE cerebrale este mult mai complex. Studiile
variabilitatea activitii esterazei este mult mai mare n plasm dect n creier
i de aceea refacerea activitii AChE serice este mult mai rapid dect a celei
din sistemul nervos i, astfel, diagnosticul bazat pe activitatea seric a AChE
este dificil de pronunat.

Monoxigenazele
Sistemul monooxigenazelor este cuplat la sistemul de transport ionic compus din dou
enzime, citocromul i flavoproteina (NADPH-citocrom reductaza). Sistemul este elaborat de
reticulul endoplasmatic al multor organe, dar activitatea este mult mai ridicat n ficat
dect n multe alte esuturi
Reaciile citocrom P450 I-dependente, includ N-oxidarea i S-oxidarea; activitile
enzimatice frecvent studiate includ monooxigenazele: etoxiresorufin O-deetilaza
(EROD), hidroxilaza benzopirenic (BePH) i hidroxilaza aril hidrocarbonic (AAH).
Oxidrile dependente de citocromul P 450, includ hidroxilarea aromatic, hidroxilarea
aciclic, dezalchilarea i dezaminarea. Cea mai larg studiat activitate enzimatic este
cea a N-demetilazei benzfetaminic i a epoxilazei aldrinic.
Prima demonstraie a efectului pesticidelor organoclorurate asupra metabolismului
hepatic microzomal fost fcut acum peste 30 de ani-rezultate neateptate la obolani
crora n perioada de somn li s-a administrat fenobarbital dup ce ascunztorile lor au fost
pulverizat cu clordan -a dus la stimularea activitii microzomale hepatice, medicamentul
fiind metabolizat enzimatic -constatare rapid extins i la
organoclorurate , PCBurile, PCDT-urile i PCAD-urile+larg varietate de compui de
interes pentru mediu,
organofosforicele, piretroidele i hidrocarburile
policiclice aromate (PAH).

Conceptul inducerii activitii monooxigenazelor la pete, cu

scopul monitorizrii polurii mediului maritim prin uleiuri
(petrol), a nceput a fi aplicat pe la mijlocul anilor '70. Aa s-au
obinut date despre inducerea activitii aril hidrocarbon
hidroxilazei (AAH) la ieirile apei menajere n Los Angeles la peti
sau inducerea activitii etoxiresorufin O-deetilazei (EROD)
la petii din apele efluenilor fabricilor de hrtie din Suedia.
Inducerea monooxigenazelor de ctre afluenii fabricilor
amintite a constituit unul din cei mai sensibili biomarkeri pentru
tratarea acestui tip particular de poluare.
Utilitatea monooxigenazelor n monitorizarea biologiei mediului
a fost clar demonstrat n cazurile polurii cu substanele amintite,
rspunsul acestora fiind cauzat de o mare varietate de substane
chimice i, de aceea, se poate spune c sistemul este menit s
detecteze o expunere suficient de mare pentru a produce un
rspuns biologic la foarte multe xenobiotice. Chiar dac despre
agentul cauzal se afl puine lucruri, poate fi folosit pentru
delimitarea ariei de aciune a acestuia, ceea ce este folositor
n timp i prin nceperea altor investigaii detaliate.

Rolul fundamental al ADN n procesele de reproducie este

binecunoscut, acest aspect fiind utilizat la evaluarea daunelor
produse ADN-ului de ctre poluanii de mediu care au efecte
genotoxice specifice, n special creterea carcinogenezei i, mai
puin efecte asupra proceselor reproductive
exist o succesiune de evenimente care au loc ntre prima
interaciune a xenobioticului cu ADN-ul i mutaia consecutiv
acesteia, mprite n patru stadii. Primul stagiu este formarea
adiiei prin puni de legtur. n urmtorul stadiu pot fi sesizate
modificri secundare ale ADN-ului, fie o modificare de
suprafa, fie o mrire a procentului de reparaie. Al treilea
stadiu este atins atunci cnd perturbrile structurale ale ADN
ncep s fie realizate. n acest stadiu, celulele afectate prezint
alterri funcionale. Unul din cele mai largi teste utilizate pentru
msurarea aberaiilor cromozomiale este schimbul de
cromatide surori. La final, cnd celulele se divid, distrugerile
cauzate de substanele toxice pot conduce la crearea de ADN
mutant i, consecutiv, alterrii n funcionarea genelor.

Au fost utilizate dou moduri diferite de abordare la studierea adiiei de ADN

dup expunerea la poluani:
Marcarea radioactiv -folosind 32P conduce la separarea adiiilor i
gruparea lor prin cromatografie bidimensional n strat subire.
Tehnici specifice de identificare a adiiilor -incluznd spectrometria
fluorescent, tehnicile de cromatografie, i testul imuno-enzimatic -ELISA;
tehnici care sunt sensibile i care pot detecta o adiie la un numr de 108
nucleotide normale.
Cele dou tehnici dau informaii diferite, prima contribuie la obinerea
indexul numrului total de legturi covalente, pe cnd ultima d
informaii despre gradul actual al relaiei cu anumii compui specifici.
Monitorizarea formrii adiiilor furnizeaz cel mai bun mijloc de a detecta
expunerea la hidrocarburi aromatice policiclice (PAH). Stabilitatea
ADN i adiiile formate la hemoglobin, de ctre aceast clas de compui
toxici, sunt indicatori care evideniaz expunerea la ST, dup ce
acestea au disprut din corp.
De fapt, aceste adiii formate la hemoglobin pot fi cel mai studiat mijloc
posibil de test non-invaziv.
n SUA, au fost probate studii la peti i sedimente. Prin determinarea
nivelelor PAH-urilor din sedimente i intestin au fost stabilite i
proporiile adiiilor xenobiotice ADN din ficat msurate prin 32P marcat.

Porfirinele sunt produse pe cile biosintezei hemului, un sistem vital pentru multe
sisteme animale. Au fost studiate dou tulburri majore ale biosintezei hemului:

formarea n exces a unei cantiti de porfirine dup expunerea la anumite organoclorurate (OC);

inhibarea enzimei dehidrataza acidului aminolevulinic (ALAD).

1.Biosistemele hemului sunt strns reglate n mod normal, iar nivelul porfirinelor n mod curent
este foarte sczut. Porfiria hepatic este caracterizat printr-o acumulare masiv a porfirinei n
ficat i eliminarea prin urin a acesteia i a acidului porfirinic heptacarboxilic. Dei mecanismul
inducerii porfirinei de ctre OC-uri nu a fost complet elucidat, se consider n anumite lucrri
c inhibarea enzimei uroporfirinogen decarboxilaza este cea mai veridic cauz. Cele mai
implicate OC-uri n producerea maladiei sunt hexaclorobenzenul (HCB) i PCB-urile.
2. Dehidrataza acidului aminonolevulinic (ALAD) este o enzim din calea de biosintez a
hemului. Inhibarea ALAD a fost studiat nc de acum 30 de ani, ca un mijloc de detectare a
expunerii oamenilor la plumbul din mediu i a devenit un biotest standard din acest motiv,
frecvent utilizat n investigaiile lumii slbatice. Testul este foarte specific pentru plumb, alte
metale fiind de 10 ori mai puin active din cauza inhibrii. La acestea, inhibiia ALAD este
rapid, dar efectul este slab exprimat, ALAD revenind la valorile normale numai dup 4 luni.

Inhibarea ALAD a fost folosit ca un indicator al expunerii la plumb n probleme generale, fie n aria urban,
fie de-a lungul autostrzilor, fiind de asemenea specifice studiilor psrilor acvatice cu probleme legate de
plumb. Diferene de trei ori mai mari ale ALAD, au fost gsite ntre obolanii din aria rural i cei urbani n
Michigan (Mouw i col., 1975). Cei mai importani indicatori ai intoxicaiei cu plumb la obolanii din mediul
urban au fost creterea n greutate a rinichiului i creterea incidenei incluziunilor intranucleare. n
acelai mod, s-a difereniat activitatea ALAD la porumbeii din mediul rural, urban la nivel central i, respectiv,
periferic, n zona Londrei (Hutton, 1980).
Testul ALAD este unul simplu, care poate fi realizat fr un echipament costisitor sau
o pregtire de durat.

n concluzie, inhibiia ALAD este un biomarker sensibil,

ns pentru un singur poluant al mediului, plumbul.

msurat

Descoperirea unor specii de peti hermafrodii pe cursul

unor ruri n apropierea scurgerilor de ape menajere a fost
o int a cercetrilor, n scopul evidenierii efectului de
distructiv al estrogenilor la peti, avnd n vedere c
hermafroditismul natural are o inciden foarte sczut.
Examinarea acestui proces la peti a artat c masculii au
un nivel ridicat al vitelusului, care este n mod obinuit
produs numai de ctre femele, acesta fiind o protein a
glbenuului oului.

Schimbrile de comportament reprezint un nivel evoluat de organizare al

biomarkeri-lor, fiind considerat de ctre unii foarte greu de demonstrat.
Unii din cei mai apropiai partizani ai valorilor comportamentului toxicologic
consider c acest comportament al unui organism, reprezint rezultatul final
integrat al biochimiei i fiziologiei proceselor declanate de ST. Astfel, un
singur parametru comportamental este, n general, mult mai cuprinztor dect
unul fiziologic sau biochimic. Cu toate acestea, biomarkerii comportamentului
nu fac parte din procedeele de testare formale.
Exist dou dificulti fundamentale ale testelor comportamentale ale toxicitii
vieuitoarelor din mediului slbatic, astfel:
slaba relevan pentru mediu ntruct se obin i se cuantific foarte repede,
o rezisten foarte puternic mpotriva schimbrilor la cele mai relevante
dintre comportamente (Peakall, 1985).
Studii recente includ multe din efectele metalelor grele. Dac cineva compar
efectele slabe ale concentraiei observate (LOEC), obinute din studii
comportamentale (aprare, atractivitate, ventilaia la peti, rata bolilor) cu
studii cronice (de toxicitate), stabilete c anumite teste comportamentale
sunt mai sensibile. Aceste teste implicnd evitarea prdrii, comportamentul
alimentar, nvarea, interaciunile sociale i variate comportamente
locomotorii, sunt nc insuficient studiate pentru a permite judecarea
sensibilitii i utiliti acestora

Totui, testele comportamentale pot furniza date reale despre relaiile dintre prdtor i
prad, ns testele trebuie s fie validate n mediu .

Biomarkerii specifici au fost identificai n plantele sensibile -este cunoscut

faptul c excesul substanelor chimice specifice a adus o cretere a
produciei unui metabolit care difer prin toleran i sensibilitate.
n prezena unui exces al seleniului, plantele seleniu-sensibile
ncorporeaz Se n aminoacizii cu sulf, conducnd la sinteza enzimelor cu
activitate sczut, care pot conduce la moartea plantelor. n contrast,
plantele Se-tolerante biosintetizeaz i acumuleaz selenoaminoacizi
nonproteici, precum seleno-cistein i Se-metil-selenocistein, care nu pot
cauza probleme metabolice pentru plante. Astfel, selenoproteinele din
plante sunt exceleni biomarkeri pentru Se stres, chiar dac folosirea lor
n mediu nu a fost frecvent reprodus.
Un alt exemplu este o expunere la fluor n exces, produs printr-un minereu
coninnd fluoruri
plantele sintetizeaz fluoroacetil coenzima A i, apoi
realizeaz convertirea, pe calea ciclului acidului tricarboxilic n fluorocitrat.
Apoi , compusul blocheaz calea metabolic prin inhibiia enzimei
aconitaz. Ca un rezultat al acestui proces, acumulrile de fluorocitrat
constituie un biomarker demn de ncredere pentru intoxicaiile cu fluor.
Exist anumite plante biomarkeri pentru metalele libere. Fitochelaii sunt
sintetizai n perioada expunerii la un numr de metale i anioni, precum
SeO42-, SeO42- i AsO43-. Relaiile doz-timp dependen au fost stabilite n
condiii de laborator pentru Cd, Cu i Zn. Pentru aceste monitorizri,
cercetrile au nevoie de producia de fitochelatai din mediu.