BIOMARKERI

Termenul biomarker este acceptat n ultimii ani, dei are nc o

definire inconsistent. Biomarkerii sunt oricare din rspunsurile
biologice la o substan chimic la nivel individual sau o
ndeprtare a organismului de starea sa normal.
Clasificare a rspunsurilor biologice : biochimice, fiziologice,
histologice, morfologice i comportamentale -biomarkeri.
Anumite exemple de biomarkeri la nivele diferite de organizare
sunt artate n tabelul 10.1. Rspunsurile biologice la nivele de
organizare superioare nivelului individual (populaie, comunitate i
ecosistem ) sunt considerate ca bioindicatori. Totui, din punct
de vedere al importanei, unele rspunsuri sunt considerate, n
general, biomarkeri specifici. Relaia dintre biomarkeri i
bioindicatori privind specificacitatea i relevana ecologic este
artat n figura 10.1. n general, se poate spune c este dificil de
descris modificrile ecologice (chiar dac subierea cojii oulor la
unele specii de psri este cauzat de p,p'-DDE ,iar imposex ul la
crabi de TBT), ntruct i schimbrile fiziologice sunt legate de
schimbarea masiv a populaiei.

bioindicatori

Rspunsurile biologice la nivele de organizare superioare

nivelului individual (populaie, comunitate i ecosistem )
sunt considerate ca bioindicatori.
Totui, din punct de vedere al importanei, unele
rspunsuri sunt considerate, n general, biomarkeri
specifici. Relaia dintre biomarkeri i bioindicatori privind
specificacitatea i relevana ecologic este artat n figura
10.1. n general, se poate spune c este dificil de descris
modificrile ecologice (chiar dac subierea cojii oulor la
unele specii de psri este cauzat de p,p'-DDE ,iar
imposex ul la crabi de TBT), ntruct i schimbrile fiziologice
sunt legate de schimbarea masiv a populaiei.

Clasificarea biomarkerilor
Au fost propuse mai multe clasificri ale biomarkerilor. Mai frecvent
utilizat este mprirea acestora n dou tipuri de biomarkeri:
de expunere;
de efect.
Biomarkerii de expunere - rspunsuri care indic expunerea
organismului la substane chimice, dar nu d nicio informaie asupra
nivelului efectelor adverse pe care acestea le cauzeaz.
Biomarkerii de efect sau poate, mai corect, efectele toxice (din cauz
c toi biomarkerii prin definiie produc un astfel de efect) - rspunsuri care
induc efecte adverse demonstrate asupra organismului.
Conceptul de biomarker se bazeaz pe modificrile parametrilor fiziologici
artate n figura 10.2.
Modificarea strii de sntate a unui individ, odat cu creterea
timpului de expunere la o substan chimic este indicat printr-o curb
dreapt, plecnd de la o stare de sntate complet reversibil la
schimbri ireversibile care pot conduce la moarte. Punctele de tranziie pe
traseul acestei ci sunt:

organismul s fie anterior stresat,

funciile sunt afectate, iar organismul, dei stresat, este capabil s compenseze acest
stres,

organismul nu este capabil s compenseze un timp ndelungat,

schimbrile sunt reversibile, iar ndeprtarea stresului permite nsntoirea

organismului,

punctul r -schimbrile sunt ireversibile i n final moartea.

Specificitatea biomarkerilor

mprirea biomarkerilor n specifici i nespecifici este necesar ntruct

efectele asupra sistemului imunitar pot fi cauzate de o varietate larg
de poluani. O list a biomarkerilor n funcie de gradului lor de
specificitate este dat n tabelul 10.2.
Biomarkerii specifici, ct i cei nespecifici au o valoare important n
evaluarea hazardelor. Ex. prin probele de snge ale unei psri
maritime-este determinat activitatea ALAD (dehidrogenaza acidului
aminolevulinic), astfel fr alte msurtori, se determin procentul psrilor
maritime expuse intoxicaiilor cu plumb.
determinarea ALAD nu
aduce nicio informaie despre ali poluani care pot fi prezeni n mediu.
Inhibiia AChE poate fi utilizat pentru a furniza dovezile legale ale morii
provocate de pesticidele organofosforice i carbamate, o astfel de aciune
inhibitorie fiind considerat specific la aceste clase de poluani chimici.
Totui, n ultimii ani, evidenele au indicat c inhibiia AChE este cauzat i
de alte pesticide. Payne (1996) stabilete depresia activitii AChE la
peti mai mare de 50% i consider c n acest caz poate fi implicat un
complex de poluani. Astfel, Guillermino i col. (1998) a artat c
detergenii i metalele pot inhiba activitatea AChE, sugernd c utilizarea
acestei enzime ca biomarker poate fi extins.
Inducerea monooxigenazelor - o mare varietate de substane chimice -constituie un
indicator sensibil al prezenei poluanilor. Aceasta este o indicaie obinuit prin care organismele
afectate de poluani dau slabe informaii asupra cauzei specifice. n acest caz, biomarkerul are
valoare de studiu secundar din cauz c poluanii trebuie s fie prezeni la un nivel destul
de

ridicat pentru a provoca un efect detectabil.

Biomarkeri specifici

Biomarkeri specifici sunt considerati:

Inhibiia esterazelor
Monoxigenazele
Studiile asupra materialului genetic
Porfirinele i sintezele hemului
Inducerea vitelogenului

Inhibiia esterazelor

AChE este utilizata ecotoxicologica-special - indic locul lor de

aciune al ST- nivelul lor indic inhibarea, fenomen corelat cu
efectele toxice.

Butiratcolinesteraza (BuChE) -studiat n anumite situaii n paralel cu

AChE-rolul su este necunoscut i nivelul de inhibare nu este att de uor
de corelat cu efectul toxic.

Studiul neuropatiilor provocate de esteraze , a cror

interaciune cu compuii organofosforici (OP) poate conduce la
ntrzierea influxului nervos, a fost limitat la studiile de
laborator. Modul lor de aciune este binecunoscut i a fost artat
anterior.
La vertebrate-inhibiia AChE cerebrale -utilizat la stabilirea
cauzelor morii produse de ctre pesticide carbamate (Mineau,
1991). n condiii ideale, inhibiia n procent de 50-80% poate fi luat

drept dovad a mortalitii provocate de pesticide. n practic, nivelul

poluarii este adesea necunoscut, i de aceea un control adecvat este greu
de obinut.
De asemenea, inhibiia AChE de ctre carbamai este foarte uor
reversibil i se poate pierde cu uurin dup moarte.
Determinarea OP-urilor i a carbamailor este mai dificil
rapid
metabolizai i eliminai; de fapt, analizele chimice ale nivelelor reziduale
nu
au fost larg utilizate n diagnosticul intoxicaiilor produse de

 Creierul - organul cel mai des folosit ca prob

la vertebratele slbatice, ntruct acesta este
principalul loc de aciune al OP-urilor i
carbamailor.
Cu toate c folosirea inhibrii AChE i BuChE
serice - mult mai acceptabil, ntruct
inhibarea AChE cerebrale este mult mai
complex. Studiile
variabilitatea activitii
esterazei este mult mai mare n plasm dect n
creier i de aceea refacerea activitii AChE
serice este mult mai rapid dect a celei din
sistemul nervos i, astfel, diagnosticul bazat pe
activitatea seric a AChE este dificil de
pronunat.

Monoxigenazele

Sistemul monooxigenazelor este cuplat la sistemul de transport

ionic compus din dou enzime, citocromul i flavoproteina
(NADPH-citocrom reductaza). Sistemul este elaborat de reticulul
endoplasmatic al multor organe, dar activitatea este mult mai
ridicat n ficat dect n multe alte esuturi
Reaciile citocrom P450 I-dependente, includ N-oxidarea i Soxidarea; activitile enzimatice frecvent studiate includ
monooxigenazele: etoxiresorufin O-deetilaza (EROD),
hidroxilaza benzopirenic (BePH) i hidroxilaza aril
hidrocarbonic (AAH).
Oxidrile dependente de citocromul P450, includ hidroxilarea
aromatic, hidroxilarea aciclic, dezalchilarea i
dezaminarea. Cea mai larg studiat activitate enzimatic este
cea a N-demetilazei benzfetaminic i a epoxilazei
aldrinic.
Prima demonstraie a efectului pesticidelor organoclorurate asupra
metabolismului hepatic microzomal fost fcut acum peste 30 de anirezultate neateptate la obolani crora n perioada de somn li s-a
administrat fenobarbital dup ce ascunztorile lor au fost pulverizat cu
clordan -a dus la stimularea activitii microzomale hepatice,
medicamentul fiind metabolizat enzimatic -constatare rapid extins i la

Conceptul inducerii activitii monooxigenazelor la pete, cu

scopul monitorizrii polurii mediului maritim prin uleiuri
(petrol), a nceput a fi aplicat pe la mijlocul anilor '70. Aa s-au
obinut date despre inducerea activitii hidroxilazei aril
hidrocarburilor (AAH) la peti la ieirile apei menajere n Los
Angeles sau inducerea activitii etoxiresorufin O-deetilazei
(EROD) la petii din apele efluenilor fabricilor de hrtie din
Suedia.
Inducerea monooxigenazelor de ctre efluenii fabricilor
amintite a constituit unul din cei mai sensibili biomarkeri pentru
tratarea acestui tip particular de poluare.
Utilitatea monooxigenazelor n monitorizarea biologiei
mediului a fost clar demonstrat n cazurile polurii cu
substanele amintite, rspunsul acestora fiind cauzat de o mare
varietate de substane chimice i, de aceea, se poate spune c
sistemul este menit s detecteze o expunere suficient de mare
pentru a produce un rspuns biologic la foarte multe
xenobiotice. Chiar dac despre agentul cauzal se afl puine
lucruri, poate fi folosit pentru delimitarea ariei de aciune a
acestuia, ceea ce este folositor n timp i prin nceperea altor
investigaii detaliate.

Studiile asupra materialului genetic

Rolul fundamental al ADN n procesele de reproducie este

binecunoscut, acest aspect fiind utilizat la evaluarea daunelor
produse ADN-ului de ctre poluanii de mediu care au efecte
genotoxice specifice, n special creterea carcinogenezei i, mai
puine efecte asupra proceselor reproductive
exist o succesiune de evenimente care au loc ntre prima
interaciune a xenobioticului cu ADN-ul i mutaia consecutiv
acesteia, mprite n patru stadii. Primul stagiu este formarea
adiiei prin puni de legtur. n urmtorul stadiu pot fi sesizate
modificri secundare ale ADN-ului, fie o modificare de
suprafa, fie o mrire a procentului de reparaie. Al treilea
stadiu este atins atunci cnd perturbrile structurale ale ADN
ncep s fie realizate. n acest stadiu, celulele afectate prezint
alterri funcionale. Unul din cele mai largi teste utilizate pentru
msurarea aberaiilor cromozomiale este schimbul de
cromatide surori. La final, cnd celulele se divid, distrugerile
cauzate de substanele toxice pot conduce la crearea de ADN
mutant i, consecutiv, alterri n funcionarea genelor.

Au fost utilizate dou moduri diferite de abordare la studierea adiiei de ADN

dup expunerea la poluani:
Marcarea radioactiv -folosind 32P conduce la separarea adiiilor i
gruparea lor prin cromatografie bidimensional n strat subire.
Tehnici specifice de identificare a adiiilor -incluznd spectrometria
fluorescent, tehnicile de cromatografie, i testul imuno-enzimatic -ELISA;
tehnici care sunt sensibile i care pot detecta o adiie la un numr de 108
nucleotide normale.
Cele dou tehnici dau informaii diferite, prima contribuie la obinerea
indexului numrului total de legturi covalente, pe cnd ultima d
informaii despre gradul actual al relaiei cu anumii compui specifici.
Monitorizarea formrii adiiilor furnizeaz cel mai bun mijloc de a detecta
expunerea la hidrocarburi aromatice policiclice (PAH). Stabilitatea
ADN i adiiile formate la hemoglobin, de ctre aceast clas de compui
toxici, sunt indicatori care evideniaz expunerea la ST, dup ce
acestea au disprut din corp.
De fapt, aceste adiii formate la hemoglobin pot fi cel mai studiat mijloc
posibil de test non-invaziv.
n SUA, au fost probate studii la peti i sedimente. Prin determinarea
nivelelor PAH-urilor din sedimente i intestin au fost stabilite i
proporiile adiiilor xenobiotice ADN din ficat msurate prin 32P marcat.

Porfirinele i sintezele hemului

Porfirinele sunt produse pe cile biosintezei hemului, un sistem vital pentru

multe sisteme animale. Au fost studiate dou tulburri majore ale
biosintezei hemului:

formarea n exces a unei cantiti de porfirine dup expunerea la anumite

organoclorurate (OC);

inhibarea enzimei dehidrataza acidului aminolevulinic (ALAD).

1.Biosistemele hemului sunt strns reglate n mod normal, iar nivelul porfirinelor n mod
curent este foarte sczut. Porfiria hepatic este caracterizat printr-o acumulare
masiv a porfirinei n ficat i eliminarea prin urin a acesteia i a acidului porfirinic
heptacarboxilic. Dei mecanismul inducerii porfirinei de ctre OC-uri nu a fost
complet elucidat, se consider n anumite lucrri c inhibarea enzimei
uroporfirinogen decarboxilaza este cea mai veridic cauz. Cele mai implicate OC-uri
n producerea maladiei sunt hexaclorobenzenul (HCB) i PCB-urile.
2. Dehidrogenaza acidului aminonolevulinic (ALAD) este o enzim din calea de
biosintez a hemului. Inhibarea ALAD a fost studiat nc de acum 30 de ani, ca un
mijloc de detectare a expunerii oamenilor la plumbul din mediu i a devenit un
biotest standard din acest motiv, frecvent utilizat n investigaiile lumii slbatice.
Testul este foarte specific pentru plumb, alte metale fiind de 10 ori mai puin
active din cauza inhibrii. La acestea, inhibiia ALAD este rapid, dar efectul este
slab exprimat, ALAD revenind la valorile normale numai dup 4 luni.

Inhibarea ALAD a fost folosit ca un indicator al expunerii la plumb n probleme generale, fie n
aria urban, fie de-a lungul autostrzilor, fiind de asemenea specific studiilor psrilor acvatice
cu probleme legate de plumb. Diferene de trei ori mai mari ale ALAD, au fost gsite ntre
obolanii din aria rural i cei urbani n Michigan (Mouw i col., 1975). Cei mai importani indicatori
ai intoxicaiei cu plumb la obolanii din mediul urban au fost creterea n greutate a rinichiului
i creterea incidenei incluziunilor intranucleare. n acelai mod, s-a difereniat activitatea
ALAD la porumbeii din mediul rural, urban la nivel central i, respectiv, periferic, n zona Londrei
(Hutton, 1980).
Testul ALAD este unul simplu, care poate fi realizat fr un echipament costisitor

Inducerea vitelusului

Descoperirea unor specii de peti hermafrodii pe cursul

unor ruri n apropierea scurgerilor de ape menajere a fost
o int a cercetrilor, n scopul evidenierii efectului de
distructiv al estrogenilor la peti, avnd n vedere c
hermafroditismul natural are o inciden foarte sczut.
Examinarea acestui proces la peti a artat c masculii au
un nivel ridicat al vitelusului, care este n mod obinuit
produs numai de ctre femele, acesta fiind o protein a
glbenuului oului.

Biomarkerii comportamentului

Schimbrile de comportament reprezint un nivel evoluat de

organizare al biomarkerilor, fiind considerat de ctre unii foarte greu de
demonstrat.
Unii din cei mai apropiai partizani ai valorilor comportamentului
toxicologic consider c acest comportament al unui organism, reprezint
rezultatul final integrat al biochimiei i fiziologiei proceselor declanate
de ST. Astfel, un singur parametru comportamental este, n general, mult
mai cuprinztor dect unul fiziologic sau biochimic. Cu toate acestea,
biomarkerii comportamentului nu fac parte din procedeele de testare
formal.
Exist dou dificulti fundamentale ale testelor comportamentale ale
toxicitii vieuitoarelor din mediului slbatic, astfel:
slaba relevan pentru mediu ntruct se obin i se cuantific foarte
repede,
o rezisten foarte puternic mpotriva schimbrilor la cele mai
relevante dintre comportamente (Peakall, 1985).
Studii recente includ multe din efectele metalelor grele. Dac cineva
compar efectele slabe ale concentraiei observate (LOEC), obinute
din studii comportamentale (aprare, atractivitate, ventilaia la peti, rata
bolilor) cu studii cronice (de toxicitate), stabilete c anumite teste
comportamentale sunt mai sensibile. Aceste teste implicnd evitarea
prdrii, comportamentul alimentar, nvarea, interaciunile sociale i
variate comportamente locomotorii, sunt nc insuficient studiate pentru a
permite judecarea sensibilitii i utiliti acestora

Totui, testele comportamentale pot furniza date reale despre relaiile dintre prdtor

Biomarkerii plantelor

Biomarkerii specifici au fost identificai n plantele sensibile -este cunoscut

faptul c excesul substanelor chimice specifice a adus o cretere a
produciei unui metabolit care difer prin toleran i sensibilitate.
n prezena unui exces al seleniului, plantele seleniu-sensibile
ncorporeaz Se n aminoacizii cu sulf, conducnd la sinteza enzimelor cu
activitate sczut, care pot conduce la moartea plantelor. n contrast,
plantele Se-tolerante biosintetizeaz i acumuleaz selenoaminoacizi
nonproteici, precum seleno-cistein i Se-metil-selenocistein, care nu
pot cauza probleme metabolice pentru plante. Astfel, selenoproteinele din
plante sunt exceleni biomarkeri pentru Se stres, chiar dac folosirea
lor n mediu nu a fost frecvent reprodus.
Un alt exemplu este o expunere la fluor n exces, produs printr-un
minereu coninnd fluoruri
plantele sintetizeaz fluoroacetil coenzima A
i, apoi realizeaz convertirea, pe calea ciclului acidului tricarboxilic n
fluorocitrat. Apoi , compusul blocheaz calea metabolic prin inhibiia
enzimei aconitaza. Ca un rezultat al acestui proces, acumulrile de
fluorocitrat constituie un biomarker demn de ncredere pentru intoxicaiile
cu fluor.
Exist anumite plante biomarkeri pentru metalele libere. Fitochelaii sunt
sintetizai n perioada expunerii la un numr de metale i anioni, precum
SeO42- i AsO43-. Relaiile doz-timp dependen au fost stabilite n condiii
de laborator pentru Cd, Cu i Zn. Pentru aceste monitorizri, cercetrile au
nevoie de producia de fitochelatai din mediu.