Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Adn
Adn
Introducere
Acizii nucleici sunt produi de
policondensare a nucleotidelor
Au rolul de a pstra i mijloci
transferul de informaie genetic
n lumea vie
Dogma central a biologiei moleculare:
replicare
reverstranscriere
ADN
transcriere
ARNm
Protein
traducere
Introducere
Se cunosc 2 clase de acizi nucleici:
Acid dezoxiribonucleic (ADN)
Acid ribonucleic (ARN)
Acid fosforic
1N
2
6 5
7
8
N 4
3
3N
N9
H
Pirimidin
Purin
NH2
O
N
N
N
N
H
H2N
O
HN
N
H
Citozin
N
H
Guanin
NH2
HN
Adenin
N
1
O
CH3
HN
N
H
Uracil
N
H
Timin
Baze azotate
Prezint tautomerie:
Lactam-lactim; structurile lactam
sunt mai stabile
Amino-imino (cele care nu conin grupri
OH
O
hidroxil); structurile
amino sunt mai
N
C
NH
C
stabile
forma lactam
(mai stabil)
forma lactim
NH
NH2
N
forma amino
(mai stabil)
NH
forma imino
Nucleozide
Rezult prin stabilirea unei legturi
N-glicozidice ntre hidroxilul glicozidic
de la C 1 al pentozei i atomul de N
din poziia 9 a unei baze purinice,
sau atomul de N din poziia 1 a unei
baze pirimidinice
Ribonucleozide
NH2
N
CH2OH O
H
H
H
H
OH
NH2
OH
Adenozin
HN
H2N
CH2OH O
H
H
H
H
OH
OH
Guanozin
O
HN
CH2OH O
H
H
H
H
OH
OH
Citidin
CH2OH O
H
H
H
H
OH
Uridin
OH
Dezoxiribonucleozide
NH2
N
CH2OH O
H
H
H
H
OH
NH2
Deoxiadenozin
HN
H2N
CH2OH O
H
H
H
H
OH
Deoxiguanozin
CH2OH O
H
H
H
H
OH
Deoxicitidin
CH3
HN
CH2OH O
H
H
H
H
OH
Timidin
Nucleotide
Sunt esteri fosforici ai nucleozidelor;
n structura acizilor nucleici intr
nucleozide fosforilate la C 5 al
pentozei
Se pot aduga 1,2 sau 3 resturi
fosfat formnd nucleozid mono, di i
trifosfai
Nucleotide
NH2
N
O
-O
P
O-
O
O
P
O-
O
O
O 5'
P
O
O
H
1'
H
OH
X
Acid adenilic (adenozin 5'-monofosfat, AMP)
or acid deoxiadenilic (deoxiadenozin 5'-monofosfat, dAMP)
Adenozin 5'-difosfat, ADP
or deoxiadenozin 5'-difosfat, dADP)
Adenozin 5'-trifosfat, ATP
or deoxiadenozin 5'-trifosfat, dATP)
NH2
N
CH3
HOOC
CH
NH2
CH2
CH2
CH2
O
CH2
O
H
OH
S-adenozilmetionina
O
H
O H
H
OH
H
OH
HN
N
H
N
H
CH3
Xantina
Cafeina
H3C
O
O
N
N
N
N
H
CH3
Teofilina
HN
O
CH3
CH3
Teobromina
NH2
Capt 5'-terminal
N
P
O
CH2
NH2
5'
3'
C
OH,H
legtur fosfat
diesteric
P
H
3'
5'
O
H
O
-
5'
P
N
O
CH2
O
H
H
OH,H
O
-
3'
5'
3'
N
HN
H2N
O
CH2
O
H
H
H
OH
OH,H
Capt 3'-terminal
Sant mare
H
N
H
N
N
Adenin
CH3
Timin
H
Sant mic
Sant mare
H
N
H
Guanin
N
N
N
N
H
Sant mic
Citozin
Forma B a ADN
Formele structurale A i Z
ale ADN
Structura ADN este dinamic n mediul apos al
celulei
Pe lng forma B, predominant n celule, pot
exista formele A-E i Z.
Conformaia A este o elice dreapt mai
compact, cu un pas de 28 si avnd 11
perechi de baze
Conformaia Z corespunde unei elice
stng, cu 12 perechi de baze pe spir i cu
un pas al elicei de 57 . Aspectul catenei este
de zigzag, datorit conformaiei adoptate de
bazele azotate din componen
Denaturarea i renaturarea
ADN
1 .5
1 .4
100
1.3
1.2
50
1.1
Tm
1.0
0
30
50
70
o
( C )
90
Denaturarea i renaturarea
ADN
Denaturarea se poate urmri prin creterea
absorbanei la 260 nm
Temperatura de topire, Tm, este temperatura
la care jumtate din ADN este denaturat
Compoziie ADN n baze azotate influeneaz
Tm; un procent mai mare de GC fa de AT din
ADN determin o cretere a Tm. Coninutul de
perechi de baze GC la om este de 40% iar
punctul de topire in jur de 87 C
n celule pentru denaturare se folosesc enzime
numite helicaze, care utilizeaz ATP
Denaturarea i renaturarea
ADN
pH >11,3 determin deprotonarea bazelor
azotate, ceea ce le mpiedic s mai formeze
legturi de hidrogen
Se prefer denaturarea cu soluii de baze
pentru a preveni ruperea legturilor fosfat
diesterice (se poate ntmpla n cazul
temperaturilor mari sau a pH acide)
La adugarea unor ageni denaturani
(formaida) se produce destabilizarea legturilor
de hidrogen dintre baze, putndu-se face
denaturarea la temperaturi mai mici
Denaturarea i renaturarea
ADN
Renaturarea este procesul prin care se
reface dublul helix prin restabilirea
valorilor de pH, temperaturii sau tariei
ionice la valorile fiziologice
Renaturarea este folosit n tehnica
hibridizrii moleculare care permite
combinarea unei catene de ADN cu o
caten de ARN dac exist un grad mare
de complementaritate ntre cele dou
catene.
TTCGAA
3'
5'
ACCGGT
Hind III
5'
3'
TTCGA
3'
5'
Bal I
Sst I
AGCTT
3'
5'
TGG
CCA
3'
5'
GAGCT
5'
3'
ACC
GGT
5'
3'
capete coezive
capete boante
5'
CTCGAG
3'
TCGAG
5'
capete coezive
Cromozomii eucariotelor
Fiecare cromozom conine o singur molecul de
ADN cu o lungime de aprox. 2 m !!!
mpachetarea presupune scurtarea de 10 000 ori a
lungimii sale
Primul stadiu n condensarea ADN, realiznd un
grad de compactare egal cu 7, este nucleozomul
Nucleozomul este unitatea de baz a
cromatinei; fibra de cromatin arat ca un irag
de mrgele, mrgelele fiind nucleozomii iar aa
poriuni de ADN liber (ADN de legtur cu 8-120
perechi de baze)
Cromozomii eucariotelor
Histonele sunt proteine bazice, cu
mas molecular mic, care
interacioneaz ionic cu anionii fosfat
din catenele de ADN; exist 5 clase
de histone:
Histone bogate n lizin H2A, H2B
Histone bogate n arginin H3, H4
Histone de legtur H1, cu rol de
protejare a ADN de aciunea nucleazelor
Cromozomii eucariotelor
Nucleozomul are forma unui cilindru si cuprinde un
octamer histonic constituit din 2H 2A, 2H2B, 2H3, 2H4 n jurul
cruia se nfoar de aprox. 2 ori cu rsucire spre
stnga ADN format din 140 perechi de baze
Histona H1 se leag de ADN de legtur; ea are rol
esenial n etapa urmtoare de compactare cu formarea
unei structuri care arat ca un solenoid i care asigur o
scurtare de 40 ori a moleculei de ADN
Solenoizii se asociaz ntre ei determinnd o condensare
suplimetar
Proteinele nehistonice din structura cromatinei au rol
n destinderea strii condensate a cromatinei, pentru a
permite replicarea i transcrierea, au rol n viabilitatea
celulei
Nucleozom
Solenoid