Numrarea hematiilor

Hematiile sunt numite totodat globule roii sau eritrocite. Acestea reprezint suportul de transport al oxigenului n sngele vertebratelor. Culoarea lor roie se datoreaz prezenei hemoglobinei. Aceste celule iau natere la nivelul mduvei osoase, lund forma unor discuri biconcave, fiind lipsite de nucleu. ns pe lng funcia lor esenial, aceea de transport al oxigenului, ele ndeplinesc un rol important i n reglarea circulaiei. Atunci cnd eritrocitele sunt supuse stressului reprezentat de vasoconstricie acestea elibereaz ATP, care va declana vasodilataia. Totodat, atunci cnd molecula de hemoglobin pe care o conin este deoxigenat, eritrocitele elibereaz S-nitrozotioli, care au deasemenea efect vasodilatator, producnd redirecionarea unei cantiti mai mari de snge spre zonele organismului spoliate de oxigen. Eritrocitele intervin i n rspunsul imun al organismului. Atunci cnd acestea sunt lizate sub aciunea unor ageni patogeni precum bacteriile, ele elibereaz radicali liberi care penetreaz peretele sau membrana acestor ageni, contribuind la liza acestora. Paradoxal, eritrocitele, neavnd nucleu i nici o serie de alte organite celulare precum mitocondrii, acestea nu consum deloc din oxigenul pe care l transport. n plus, neavnd nucleu sau alte organite, eritrocitele nu pot sintetiza ARN, i n consecin nu se pot divide sau repara.

Figura 1. Hematii umane

Figura 2. De la stnga la dreapta hematie, trombocit, leucocit Materiale necesare: microscop optic, pipeta Potain pentru hematii, soluie Hayem, ace sterile, vat, alcool, hemocitometru, lamel de sticl. Examinarea lor se face cu obiectivul uscat mare (60) i ocularul 10, cu condensatorul cobort (lumin slab). Pipeta Potain pentru hematii servete la diluarea sngelui n vederea numrrii eritrocitelor. Este format dintr-un tub capilar, care n poriunea superioar este dilatat, formnd o ampul. Extremitatea lung a pipetei servete la aspirarea sngelui i a soluiei Hayem. Pe aceast poriune se afl gradate cifrele 0,5 i 1. Superior ampulei se gsete cifra 101 mm 3. n ampul se afl o perl de sticl de culoare roie care servete la amestecarea i omogenizarea sngelui cu soluia Hayem. La extremitatea scurt a pipetei se afl un tub de cauciuc prevzut cu o pies bucal. Pentru efectuarea diluiei de 1:200 se aspir snge pn la diviziunea 0,5 i se completeaz cu soluie Hayem pn la diviziunea 101. Diluia de 1:100 se obine aspirnd snge pn la diviziunea 1. Dup ntrebuinare pipeta Potian se spal cu ap distilat, se clatete cu alcool 96, cu eter i se usuc la pompa de vid. n caz de nfundare a capilarului se acioneaz cu un mandren sau cu fir de pr de cal, dup care se pune n HCl 15%.

Figura 3. Pipete Potain Soluia Hayem conine sulfat de sodiu 5g, clorur de sodiu 1g, ap distilat 200ml. Se prepar proaspt i se filtreaz nainte de utilizare. Aceast soluia are rolul de a dilua sngele i de a distruge leucocitele. Camera de numrare Brker este o lam groas de sticl pe care la o adncime de 0,1mm sunt gravate dou reele cu o suprafa de 9mm2 situate simetric fa de un an transversal. Are gravate urmtoarele date: nlime de 0,10mm; suprafaa ptratului mic 1/400mm 2; suprafaa ptratului mediu 1/25mm2. Suprafaa reelei (cadrilajului) 9mm2 este submprit prin linii triple n 9 ptrate mari cu suprafaa de 1mm 2. La rndul lor, acestea se submpart prin linii duble la 16 ptrate medii cu suprafaa de 1/25mm2. La ntretierea liniilor duble se delimiteaz ptrate mai mici cu suprafaa de 1/400mm2. Ptratele mici au latura de 1/20mm, iar cele mijlocii de 1/5mm.

Figura 4. Camera de numrare Camera Brker-Trck reunete elementele camerei Thoma-Brcker. Numrarea eritrocitelor se face n ptratele mici de 1/400mm2. Modul de lucru Curai vrful degetului cu o bucat de vat mbibat n alcool. Degetul trebuie ters viguros, pentru c astfel pe lng faptul c se va cura corespunztor tegumentul se va produce totodat hiperemie (creterea fluxului sanguin local). Se las degetul s se usuce. Cu un ac steril se face rapid o singur puncie la vrful degetului curat suficient de adnc pentru ca sngele s se scurg liber din locul de puncie. Se terge prima pictur de snge cu o bucat de vat, iar cnd apare a doua pictur, se aspir n pipet. Nu se va aspira pn cnd la vrful degetului nu s-a acumulat suficient snge ntruct pipetele au un lumen foarte mic i sngele coaguleaz extrem de uor n ele. Degetul nu trebuie comprimat.

Se recolteaz snge pn la diviziunea 0,5 a pipetei Potain pentru hematii i se aspir soluie Hayem pn la diviziunea 101. Aspirarea soluiei de diluie trebuie fcut ct mai rapid pentru a evita coagularea sngelui i pentru a mri acurateea metodei. Se prinde pipeta ntre dou degete i se agit timp de 3 minute pentru a se omogeniza coninutul. Primele dou picturi se ndeprteaz deoarece conin doar soluie Hayem. Urmtoarea pictur se aplic la marginea lamei cu care s-a acoperit camera de numrat. La microscop, n condiiile amintite, se numr hematiile din interiorul a 80 de ptrate mici (1/400mm2) (16 dreptunghiuri mari, plus 16 ptrate mici alturate dac se folosete camera Brker). Nu se iau n calcul elementele situate pe dou linii de delimitare ale ariei de numrat, ci numai cele de pe dou alturate (ex. dreapta i sus). Calculul numrului de hematii pe 1mm3 (X) se face innd cont de totalul hematiilor numrate (N), nmulind cu suprafaa unui ptrat mic (S=1/400mm2), cu nlimea stratului de lichid (I=1/10mm) i cu diluia sngelui (D=1/200). Totalul se mparte la numrul ptratelor mici pe care s-a fcut numrtoarea (n=80), dup formula: X=N*S*I*D/n X=N*400*10*200/80 X=N*800.000/80 X=N*10.000 Mai simplu, suma hematiilor aflate pe cele 80 de ptrate mici se nmulete cu 10.000 i aflm numrul de hematii pe 1mm3. Observaie: n cursul citirii hematiilor, pe lam pot fi observate leucocite. Acestea se disting prin dimensiunea lor mai mare i prin prezena nucleilor i a unor granulaii refringente. Interpretare Numrul normal al hematiilor este n medie la brbat de 5mil./mm 3, la femeie 4,5mil./mm3, iar la nou-nscut 6,5mil./mm3. Variaii fiziologice n funcie de sex - faptul c aceast diferen nu exist nainte de pubertate i nici dup menopauz, dar apare n perioada de maxim activitate a femeii din cauza pierderilor prin ciclul menstrual i a influenelor hormonale testosteronul stimuleaz eritropoieza. n funcie de vrst la nou-nscut scade foarte mult numrul de hematii pn n sptmna a 10-a postnatal ajungnd la 3mil.; iniial valorile sunt mari datorit persistenei hemoglobinei fetale HbF care va fi nlocuit treptat, pe perioada primului an de via. Altitudinea scderea presiunii pariale a oxigenului determin compensator creterea numrului de hematii (poliglobulia de altitudine).

Efortul fizic prin fenomenul de redistribuire a hematiilor datorit influenelor simpatice ce acioneaz la nivel splenic se produce creterea numrului de hematii. Modificri patologice Poliglobuliile (creterea numrului de hematii). Poliglobuliile apar n: afeciuni cronice respiratorii policitemia vera boal hematologic caracterizat prin creterea numrului de hematii fr ca aceasta s reprezinte un rspuns la un stimul extern. Anemiile (scderea numrului de hematii). Durata de via a hematiilor este cuprins ntre 100 150 de zile, aceasta depinznd de echilibrul dintre producere i liz. insuficiena producerii de hematii apare prin:

1. distrugerea celulelor precursoare din mduva osoas n boala de iradiere i ca urmare a administrrii de citostatice 2. lipsa factorilor necesari maturrii eritrocitare cum ar fi: scderea fierului produce anemie feripriv, scderea vitaminei B12 i/sau a acidului folic - produc anemiile Biermeriene i/sau paraBiermeriene pierderile de hematii prin:

1. pierderi de snge total (postoperator) 2. pierderi de mas eritrocitar fie prin hemoliz intraeritrocitar cu hematii anormale, fie prin hemoliz extraeritrocitar. Alte tehnici de determinare a numrului de hematii sunt cele care utilizeaz aparatul numit CELOSCOP. Acesta se bazeaz pe faptul c trecerea unui element celular printr-un orificiu de civa microni va determina modificarea rezistenei electrice. Aceast modificare de rezisten acioneaz sistemul de numrare.