An I Medicin general

Numrarea leucocitelor i eozinofilelor

1. Numrarea leucocitelor Leucocitele se mai numesc i globule albe. Rolul lor este acela de a apra organismul mpotriva agenilor infecioi (bacterii, parazii, virusuri) dar i mpotriva altor particule strine. Materiale necesare: pipet Potain pentru leucocite, soluie Trk, ace, alcool, camer de numrat, microscop, vat. Pipeta Potain pentru leucocite servete la diluarea sngelui n vederea numrrii leucocitelor. Este format dintr-un tub capilar, care n poriunea superioar este dilatat, formnd o ampul. Extremitatea lung a pipetei servete la aspirarea sngelui i a soluiei Trk. Pe aceast poriune se afl gradate cifra 0,5 i 1. Superior ampulei se gsete cifra 11. n ampul se afl o perl de sticl de culoare alb care servete la amestecarea i omogenizarea sngelui cu soluia Trk. La extremitatea scurt a pipetei se afl un tub de cauciuc prevzut cu o pies bucal. Diluia de 1:20 se obine aspirnd snge pn la diviziunea 0,5. Dup ntrebuinare pipeta Potian se spal cu ap distilat, se clatete cu alcool 96, cu eter i se usuc la pompa de vid. n caz de nfundare a capilarului se acioneaz cu un mandren sau cu fir de pr de cal, dup care se pune n HCl 15%. Soluia Trk conine acid acetic glacial 1ml, ap distilat 100ml, albastru de metilen 2% 2 picturi. Se prepar proaspt i se filtreaz nainte de utilizare. Aceast soluia are rolul de a dilua sngele. Camera de numrare Brker este o lam groas de sticl pe care la o adncime de 0,1mm sunt gravate dou reele cu o suprafa de 9mm2 situate simetric fa de un an transversal. Are gravate urmtoarele date: nlime de 0,10mm; suprafaa ptratului mic 1/400mm 2; suprafaa ptratului mediu 1/25mm2. Suprafaa reelei (cadrilajului) 9mm2 este submprit prin linii triple n 9 ptrate mari cu suprafaa de 1mm 2. La rndul lor, acestea se submpart prin linii duble la 16 ptrate medii cu suprafaa de 1/25mm2. La ntretierea liniilor duble se delimiteaz ptrate mai mici cu suprafaa de 1/400mm2. Ptratele mici au latura de 1/20mm, iar cele mijlocii de 1/5mm. Se numr leucocitele din 25 de ptrate mijlocii. Modul de lucru Curai vrful degetului cu o bucat de vat mbibat n alcool. Degetul trebuie ters viguros, pentru c astfel pe lng faptul c se va cura corespunztor tegumentul se va produce totodat hiperemie (creterea fluxului sanguin local). Se las degetul s se usuce. Cu un ac steril se face rapid o singur puncie la vrful degetului curat suficient de adnc pentru ca sngele s se scurg liber din locul de puncie. Se terge prima pictur de snge cu o bucat de vat, iar cnd apare a doua pictur, se aspir n pipet. Nu se va aspira pn cnd la vrful degetului nu s-a acumulat suficient snge, ntruct pipetele au un lumen foarte mic i sngele coaguleaz extrem de uor n ele. Degetul nu trebuie comprimat.

Se recolteaz snge pn la diviziunea 0,5 a pipetei Potain pentru leucocite i se aspir soluie Trk pn la diviziunea 11. Aspirarea soluiei de diluie trebuie fcut ct mai rapid pentru a evita coagularea sngelui i pentru a mri acurateea metodei. Se prinde pipeta ntre dou degete i se agit timp de 3 minute pentru a se omogeniza coninutul. Primele dou picturi se ndeprteaz deoarece conin doar soluie Trk. Urmtoarea pictur se aplic la marginea lamei cu care s-a acoperit camera de numrat. La microscop, cu obiectivul cu mrire mic i cu condensatorul cobort (lumin slab), se numr leucocitele din interiorul a 25 de ptrate mijlocii (1/25mm2). Nu se iau n calcul elementele situate pe dou linii de delimitare ale ariei de numrat, ci numai cele de pe dou alturate (ex. dreapta i sus). Calculul numrului de leucocite pe mm3 (X) se face innd cont de totalul leucocitelor numrate (N), nmulind cu suprafaa unui ptrat mijlociu (S=1/25mm2), cu nlimea stratului de lichid (I=1/10mm) i cu diluia sngelui (D=1/20). Totalul se mparte la numrul de ptrate mijlocii pe care s-a fcut numrarea (n=25), dup formula: X=N*S*I*D/n X=N*25*10*20/25 X=N*5000/25 X=N*200 Mai simplu, suma leucocitelor aflate pe cele 25 de ptrate mijlocii se nmulete cu 200 i aflm numrul de hematii pe 1mm3. Interpretare: Valori normale: 6000-8000/mm3 pentru aduli, 14000-21000/mm3 pentru sugari. La copii valorile sunt ceva mai crescute dect la aduli, cu scderea treptat a valorilor, cu atingerea valorilor de la adult ntre 18-21 ani. Variaii fiziologice: n condiii fiziologice numrul leucocitelor crete n: - efortul fizic - exerciiile fizice intense determin leucocitoz marcat, de obicei pe seama neutrofilelor segmentate (se datoreaz trecerii neutrofilelor marginate n circulaie), dar poate fi prezent i limfocitoza; normalizarea survine n mai puin de o or; gradul leucocitozei se coreleaz cu intensitatea efortului fizic i nu cu durata sa; - n timpul ciclului menstrual - n perioada ovulatorie poate aprea leucocitoz uoar i eozinopenie; - n sarcin - n sarcin apare leucocitoz uoar, iar neutrofilia se accentueaz odat cu apropierea termenului; de asemenea, n timpul travaliului apare neutrofilie uneori pronunat, cu normalizarea valorilor dup 4-5 zile i asociat cu eozinopenie; - variaii climatice i sezoniere - cldura i radiaiile solare intense ar determina leucocitoz, iar rezidena prelungit n Antarctica determin leucopenie; - crizele convulsive determin creterea numrului de leucocite. Modificri patologice

Creterea numrului leucocitelor peste valorile normale se numete leucocitoz i apare n infecii acute sau cronice, stri septicemice, inflamaii, traumatisme. Mecansimul este prin faptul c n aceste condiii leucocitele stimuleaz eliberarea unei substane numite CSF (colonz stimulating factor), care la rndul su va stimula producerea de ctre mduv a leucocitelor. La persoanele sntoase numrul leucocitelor se poate dubla n decurs de cteva ore, dac acest lucru este necesar. Scderea numrului leucocitelor sub valorile normale se numete leucopenie i se constat n ocul anafilactic, infecii virale, n distrucii osoase (ex. dup iradiere cu raze X). Creterea exagerat a numrului leucocitelor (peste 30.000/mm3)apare n cancerul sngelui (leucemie). Scderea exagerat a numrului de leucocite (sub 500/mm 3) indic risc de infecii potenial fatale. 2. Numrarea eozinofilelor Eozinofilele intervin n infeciile parazitare, o cretere a acestora putnd indica o astfel de infecie. Ele sunt totodat principalele celule inflamatorii implicate n reaciile alergice. Eozinofilele au diametrul de 10-16, nucleul de form bilobat (bisac), citoplasma conine granulaii colorate rou-crmiziu; procentajul normal 2-4%. Numrarea eozinofilelor se bazeaz pe faptul c acestea se coloreaz intens cu soluie aceton eozin. Materiale necesare: pipet Potain pentru leucocite, camer de numrat, lamele, microscop, ace sterile, vat, alcool, reactiv aceton-eozin. Pipeta Potain pentru leucocite servete la diluarea sngelui n vederea numrrii leucocitelor. Este format dintr-un tub capilar, care n poriunea superioar este dilatat, formnd o ampul. Extremitatea lung a pipetei servete la aspirarea sngelui i a soluiei Trk. Pe aceast poriune se afl gradate cifra 0,5 i 1. Superior ampulei se gsete cifra 11. n ampul se afl o perl de sticl de culoare alb care servete la amestecarea i omogenizarea sngelui cu soluia Trk. La extremitatea scurt a pipetei se afl un tub de cauciuc prevzut cu o pies bucal. Diluia de 1:10 se obine aspirnd snge pn la diviziunea 1. Dup ntrebuinare pipeta Potian se spal cu ap distilat, se clatete cu alcool 96, cu eter i se usuc la pompa de vid. n caz de nfundare a capilarului se acioneaz cu un mandren sau cu fir de pr de cal, dup care se pune n HCl 15%. Reactivul aceton-eozin se compune din: 5ml eozin soluie apoas 2%, 5ml aceton, 90ml ap distilat. Soluia trebuie s fie pregtit proaspt sau se ine la frigider la o temperatur de 4C i se filtreaz nainte de folosire. Camera de numrare Brker este o lam groas de sticl pe care la o adncime de 0,1mm sunt gravate dou reele cu o suprafa de 9mm2 situate simetric fa de un an transversal. Are gravate urmtoarele date: nlime de 0,10mm; suprafaa ptratului mic 1/400mm 2; suprafaa ptratului mediu 1/25mm2. Suprafaa reelei (cadrilajului) 9mm2 este submprit prin linii triple n 9 ptrate mari cu suprafaa de 1mm 2. La rndul lor, acestea se submpart prin linii duble la 16 ptrate medii cu suprafaa de 1/25mm2. La ntretierea liniilor duble se delimiteaz ptrate mai mici cu suprafaa de 1/400mm2. Ptratele mici au latura de 1/20mm, iar cele mijlocii de 1/5mm.

Se numr toate eozinofilele pe ntreaga suprafa a camerei (9*1mm2). Modul de lucru Curai vrful degetului cu o bucat de vat mbibat n alcool. Degetul trebuie ters viguros, pentru c astfel pe lng faptul c se va cura corespunztor tegumentul se va produce totodat hiperemie (creterea fluxului sanguin local). Se las degetul s se usuce. Cu un ac steril se face rapid o singur puncie la vrful degetului curat suficient de adnc pentru ca sngele s se scurg liber din locul de puncie. Se terge prima pictur de snge cu o bucat de vat, iar cnd apare a doua pictur, se aspir n pipet. Nu se va aspira pn cnd la vrful degetului nu s-a acumulat suficient snge ntruct pipetele au un lumen foarte mic i sngele coaguleaz extrem de uor n ele. Degetul nu trebuie comprimat. Lumenul pipetei fiind foarte subire, aceasta se va umple prin fenomenul de capilaritate. Se recolteaz snge din pulpa degetului cu ajutorul pipetei pentru leucocite pn la diviziunea 1 i se dilueaz cu soluia aceton-eozin pn la diviziunea de 11. Se realizeaz astfel o diluie de 1/10. Se amestec coninutul pipetei prin agitare timp de trei minute ntre 2 degete, se arunc primele 2 picturi i se pune a treia pictur n camera de numrat. Numrtoarea se face cu lumin slab i obiecitv cu mrire mic. Eozinofilele cu granulaii intens colorate se disting uor pe fondul roz de celelalte leucocite, care nu se coloreaz. Calculul numrului de eozinofile pe mm3 (X) se face innd cont de totalul eozinofilelor numrate (N), nmulind cu suprafaa unui ptrat mare (S=1mm2), cu nlimea stratului de lichid (I=1/10mm) i cu diluia sngelui (D=1/10). Totalul se mparte la numrul de ptrate mari pe care s-a fcut numrarea (n=9), dup formula: X=N*S*I*D/n X=N*1*10*10/9 X=N*100/9 Interpretare: Valorile normale variaz ntre 100 i 200 eozinofile pe mm3. Modificri patologice Eozinofilia se observ n alergii, helmintiaze, colagenoze, boal Hodgkin, neoplasme, intoxicaii medicamentoase etc. Dac numrul scade vorbim de eozinopenie, care apare n unele boli virotice, condiii de stress, administrarea ACTH-ului i hormonilor corticosuprarenali.