LP nr.

13
Investigarea tulburrilor echilibrului eritrocitar - teste screening
Pentru obinerea rapid a informaiilor privind echilibrul eritrocitar, ntr-un
context clinic de anemie (paloare, polipnee i tahicardie de efort, astenie, suflu sistolic
funcional, semne de hipoxie cerebral), se impune efectuarea urmtoarelor teste:
I. TESTE UZUALE CU VALOARE DE "SCREENING":
1. Determinarea hematocritului (Ht)
2. Dozarea hemoglobinei (Hb)
3. Numrarea eritrocitelor
4. Examenul frotiului de snge periferic
5. Determinarea constantelor eritrocitare
1. Determinarea hematocritului (Ht)
Volumul procentual ntre elementele figurate i plasm denumit hematocrit (Ht)
reprezint concentraia eritrocitelor din 100 ml snge integral. Constituie cea mai
precis investigaie, cu cea mai mic eroare.
Principiu: sngele recoltat pe substan anticoagulant uscat (amestec de oxalai
Wintrobe) sau pe heparin (o pictur la 5 ml snge), se centrifugheaz pentru
separarea eritrocitelor de plasm i evaluarea raportului volumelor lor.
Determinarea se face prin macrometoda Wintrobe (snge venos) sau
micrometod (snge capilar).
Macrometoda Wintrobe: se introduce snge venos recoltat pe substan
anticoagulant n tubul de hematocrit (confecionat din pipete Westergreen sau pipete
gradate de 1-2 ml), cu ajutorul unei pipete Pasteur montate pe o tetin. Centrifugarea
se face pentru macrometod n centrifug obinuit la 3000 ture/minut, 30 minute.
Microhematocrit: sngele se ncarc prin capilaritate n tubuleele capilare,
heparinate; pentru centifugare sunt necesare centrifuge speciale, centrifugarea
efectundu-se n cteva minute.
Citirea meniscului inferior al coloanei eritrocitare se face direct sau cu rigla. La
microhematocrit citirea se efectueaz pe o nomogram. Rezultatele se exprim
procentual.
Normal:
brbai
femei
copii

: 46% 5%
: 41% 5%
: 38% 5%

nou-nscui : 54% 10%

sugari
: 35% 5%

Valori crescute indic policitemie, iar valori sczute oligocitemie. Rezultatele pot
exprima fie o modificare a masei eritrocitare, fie a concentraiei de plasm (Fig. 1).

Fig. 1 - Variaiile hematocritului n funcie de anomaliile volemice

Variaiile Ht n funcie de modificrile volemice pot fi grupate astfel:
- Ht normal, cu volemie sczut, n hemoragiile acute n faza I nainte de
nceperea intravazrii lichidelor interstiiale.
- Ht sczut, obinuit n anemii cu volemie normal sau sczut (anemii grave);
excepie fac hiperhidratrile (prin transfuzii de plasm) n care volumul eritrocitar total
este normal, scderea Ht fiind consecina hemodiluiei (fals scdere a Ht).
- Ht crescut, prezent obinuit n poliglobulii, n care pletora globular fie nu se
nsoete de hipervolemie (policitemia de altitudine), fie evolueaz cu hipervolemie
(policitemia primitiv i secundar); excepia este constituit de plasmoragii, n care
volemia este diminuat, creterea Ht fiind consecina hemoconcentraiei (fals cretere
a Ht).
2. Dozarea hemoglobinei (Hb)
Coninutul n Hb din 100 ml de snge se poate determina dup metoda Sahli
(colorimetrie vizual) sau dup metoda Drabkin (colorimetrie fotoelectric), care este
mai precis.

Dozarea hemoglobinei prin colorimetrie vizual: Se pune n eprubeta

hemoglobinometrului Sahli (Fig. 2) soluie HCl N/10 pn la diviziunea 10. Se
recolteaz snge capilar, prin neparea pulpei degetului, pn la diviziunea superioar
a pipetei (0,02 ml) i se toarn coninutul peste HCl N/10 din eprubet. Se ateapt
cteva minute (3-5 minute), , timp n care culoarea amestecului se nchide prin
formarea clorhidratului de hematin.
Adugm ap distilat cu pictura i amestecm cu bagheta de sticl. Din timp
n timp se compar nuana coninutului eprubetei cu etalonul. Cnd s-a ajuns la aceeai
nuan, se citete concentraia de hemoglobin pe scara gradat a eprubetei, la partea
inferioar a meniscului de lichid.

Fig. 2
Hemoglobinometrul Sahli i
eprubeta gradat. Eprubeta are
dou scri: uniti procentuale
i grame de Hb la 100 ml
snge; 100% corespunde
la 16 g Hb/100ml

Valoarea Hb exprimat la % se citete direct pe eprubet. La unele modele pe

aceeai eprubet este redat valoarea n grame Hb la 100 ml snge.
Normal:
brbai
femei
copii (indiferent de sex)
nou-nscui

: 14 - 17 g /100ml
: 12 - 15 g /100ml
: 12 - 14 g /100ml
: 25 - 16 g /100ml

sugari
: 16 - 12 g /100ml
Colorimetria fotoelectric
Metoda cu cianmethemoglobin: principiul metodei const n diluia sngelui
ntr-o soluie care conine cianur de potasiu i fericianur de potasiu. Hb este
convertit n cianmethemoglobin. Absorbia soluiei este apoi msurat ntr-un
colorimetru fotoelectric la o lungime de und de 540 nm.
Metoda cu oxihemoglobin: metoda se bazeaz pe capacitatea de combinare a
sngelui cu O2, care este de 1,34 ml O2/ gr Hb. Aceasta este cea mai simpl i rapid
metod folosit cu ajutorul unui colorimetru fotoelectric.
Dozarea hemoglobinei (Hb) i determinarea hematocritului (Ht) sunt testele de
screening hematologic cu care se ncep investigaiile. Valorile sub limita inferioar a
normalului (Hb sub 12 g/100ml la femei sau 14 g/100ml la brbai i Ht sub 36 % la femei
sau 39 % la brbai) indic oligocitemie eritrocitar. n aceste cazuri se va executa i
numrarea eritrocitelor, necesar calculrii unor constante (indici) eritrocitari.
3. Numrarea eritrocitelor
Se poate efectua automat la celoscop (pe baza rezistenei electrice a hematiilor)
sau n hemocitometru (camer de numrat pentru hematii) tip Thoma sau Brker-Trk
(ptratul central).
Se aspir snge pn la diviziunea 0,5, apoi lichid de diluie Hayem pn la
diviziunea 101, n pipeta Potain cu bil roie (pentru eritrocite), realizndu-se o diluie
1/200; dac sngele se recolteaz pn la diviziunea 1, diluia va fi 1/100. Se
omogenizeaz prin agitarea pipetei timp de 1-3 minute pentru liza celorlalte elemente
figurate. Se fixeaz lamela pe camera de numrat i se verific adeziunea prin apariia
inelelor de refracie a luminii (inelele Newton). Se arunc primele 2-3 picturi din
pipeta Potain i se umple cu grij camera de numrat (s nu se preling lichid pe
anurile laterale, s nu ptrund bule de aer), prin aplicarea vrfului pipetei la
marginea lamelei astfel ca pictura s intre n camer prin capilaritate.
Se ateapt sedimentarea eritrocitelor (1-2') dup care se face numrarea, cu
obiectivul 7 i condensatorul cobort, pe 5 ptrate mijlocii delimitate de linii triple
(suprafaa: 1/25 mm2), fiecare ptrat fiind mprit n 16 ptrate mici (suprafaa 1/400
mm2); se numr 4 n diagonal i al 5-lea ales la orice nivel. Elementele aflate pe
liniile despritoare se numr numai pe dou laturi (de ex.: stnga i sus). Pentru a
afla numrul de eritrocite/mmc ar trebui s se numere 400 ptrate mici i de aceea este
necesar s se fac corecia de suprafa (80 x 5 = 400), de nlime (1/10) i de diluie
(1/200). Adic nr. eritrocite numrate x 5 x10 x 200
Numr eritrocite/mmc = Nr. eritrocite numrate x 10.000

Practic, la cifra obinut din suma de pe 5 grupe de 16 ptrate mici, se adaug

patru zero-uri.
Normal :
brbai
: 4,7 milioane 500.000/mmc
femei
: 4,2 milioane 500.000/mmc
nou-nscut : 5,5 milioane 1 milion/mmc
copii
: 4,7 milioane 500.000/mmc
Creterea numrului de hematii poate avea lor n diverse condiii:
a) policitemii false prin scderea volumului plasmatic (plasmoragii, policitemie
de stress etc.);
b) policitemii adevrate prin creterea real a numrului de hematii (nou-nscut,
policitemia vera, hipoxie).
Scderea numrului de hematii poate avea loc n urmtoarele condiii:
a) scderea fals n hemodiluie;
b) scderea real n anemii (prin deficit de producere a hematiilor, prin hemoliz
necompensat, prin pierdere de eritrocite).
4. Constante eritrocitare
Cele mai importante pentru practic sunt urmtoarele:
a) de mrime: VEM (volum eritrocitar mediu) se calculeaz dup formula: Ht x
10/Nr. eritrocite (milioane, sute de mii). Rezultatul se exprim n microni cubi ( 3) pe
eritrocit.
Valori normale: 87 5 3 = normocitoz
Valori sub 80 3 = microcitoz (50-70 3)
Valori peste 100 3 = macrocitoz, megalocitoz (110-140 3).
Exemple de calcul a VEM:
1) Ht = 43%; Nr. eritrocite = 5 mil./mmc

V EM =

43x 10
= 86 3 ( normocite )
5

2) Ht = 13%; Nr. eritrocite = 1 mil./mmc

V EM =

13x 10
= 130 3 ( macrocite )
1

3) Ht = 13%; Nr. eritrocite = 2 mil./mmc

V EM =

13x 10
= 65 3 ( microcite )
2

b) de culoare: CHEM (concentraia de hemoglobin din 100 ml mas eritrocitar)

se calculeaz dup formula: Hb(g/100ml) x 100/Ht(%). Rezultatele se exprim n
g/100 ml mas eritrocitar.

Valori normale: 34 2 g/100 ml mas eritrocitar = normocromie

Valori sub 30 g/100ml = hipocromie
Valori peste limita superioar nu se pot ntlni, ntruct concentraia de Hb
eritrocitar este maxim (reprezint saturaia n hemoglobin).
Exemple de calcul a CHEM:
1) Hb = 15 g /100ml ; Ht = 44%

CHEM =

15x 100
= 34 g / 100 ml ( normal )
44

2) Hb = 3,7 g /100ml ; Ht = 14%

CHEM =

3, 7 x 100
= 26 g / 100 ml (anemie hipocrom sever)
14

Calcularea CHEM exclude noiunea fals de "hipercromie", rezultat din

aprecierea valorii globulare:
Valoarea globular (indice de culoare) =

Hb %
2 xN

N = primele dou cifre ale numrului de eritrocite pe mmc.

Valoarea globular normal = 1 (0,75 - 1,15)
Dac VEM este mai mare dect normal, crete cantitatea absolut de Hb din
eritrocit (HEM =

Hbg % x10
; normal = 25-33 pg), dar concentraia maxim (la 100
nr . hematii

ml mas eritrocitar) nu poate fi depit.

5. Examenul frotiului de snge periferic (ex. morfologic al hematiei)
Tehnica executrii fortiului: se recolteaz o pictur proaspt de snge pe
marginea unei lame lefuite, care se aplic pe o lam orizontal, n aa fel, nct
pictura de snge s se ntind prin capilaritate, la marginea de contact dintre cele 2
lame care fac ntre ele un unghi de 30o. Se imprim apoi lamei lefuite o micare de
translaie uoar, ceea ce permite sngelui s se ntind ntr-un strat subire. Dup
ntinderea frotiului se agit lama pentru uscarea imediat la aer. Colorarea frotiului se
face imediat.
Anomalii ale morfologiei eritrocitelor pe frotiu
a) Anomalii de colorabilitate:
* hipocromie (eritrocite palide) cu anulocitoz (anemie feripriv);
* hipercromie, imaginea fals dat de creterea nlimii hematiei i
dispariia zonei centrale clare (anemia megaloblastic, sferocitoz);

anizocromia definete aspectul unui frotiu cu eritrocite hipocrome i

normocrome; eritrocitele bazofile provin din eritroblati bazofili ce i-au
pierdut nucleul nainte de ncrcarea cu Hb i au o tent albstruie (anemiile
grave regenerative).

b) Anomalii de form:
* sferocitoz - hematii de form sferic cu diametrul mic, microsferocite
(anemia hemolitic congenital);
* celule n int - form discoidal cu un punct central (anemia Cooley);
* drepanocite - eritrocite falciforme (hemoglobinoza S);
* poikilocitoz - forme diferite ale hematiilor: aspect de par sau de rachet
de tenis (anemia pernicioas, talasemie);
* corpi n semilun - resturi de eritrocite distruse (anemii hemolitice).
c) Anomalii de mrime:
* macrocite - hematii cu volumul i diametrul mare ntre 8-10 (ciroze,
tulburri de nutriie);
* megalocite - hematii cu dimensiuni mai mari, diametrul peste 10 ,
modificri de form i tulburri de maturaie (anemii megaloblastice);
* microcite (hematii cu dimensiuni mici, avnd diametrul de 5-6 , uneori
srace n hemoglobin, (anemia feripriv), sau cu sferocitoz (anemia
hemolitic congenital);
* anizocitoz (eritrocite de talie variabil cu afiniti tinctoriale diferite hematopoiez crescut).