Studiul Hemoglobinei, Dozarea Hemoglobinei, Cristelele

Teichmann, Spectroscopia hemoglobinei,Determinarea

grupelor sangvine

Med an I

 Protein complex, formeaz 80-90% din

reziduu uscatal hematiei-funcia de
transport al gazelor respiratorii= pumon
molecular
Feroprotein, GM=68.000 daltoni , tetramer
4 subuniti egale fiecare tetramer 17.000
daltoni
Hem gruare prostetic, i globina din clasa
histonelor

Hemoglobina
Este o protein specific pentru celulele
eritrocitare
E o protein a crei sintez final este
hemul la care se adaug HEM-ul ce
urmeaz alt cale
Stare nativ , cu Fe++ combinaie lax
Stri anormale ea formeaz cu oxigenul un
compus stabil (oxidare adic producerea
unor oxizi adevrai)

 Globina HBA=2 lanuri alfa=141 aa, 2lanuri beta=146 aa

HBA2=2 lanuri alfa i dou lanuri delta-o micaproporie
HBF=2 lanuri alfa, 2 lanuri gamma alt secven a aa i o
izoleucin n plus fa de HBA, la natere 70-80% din HB
e de tip fetal , proporie care scade pn la 1 an la sub 1%
Hemoglobine embrionare (GowerI, Portland, Gower II)
dup spt 12-apar probabil sacului vitelin
Hb Fetal i embrionar au alt afinitate fa de O2 dect
hemoglobina adult

 Condiii patologice hemoglobine modificate

secvena i nr aa globinei=consecine funcionale
importante privind afinitatea i transprotul gazelor
,forma hematiei, rezistena ei la hemoliz
Hb anormale C,E, S etc.
HbS=valin n loc de acid glutamic n poziia 6 a
lanului beta al globinei hematii falciforme
anemie hemolitic+icter

 Hemul component prostetic, colorat,

hemul, un nucleu porfirinic cu 11 duble
legturi conjugate
pO2/HbO2
i interaciune
Hem-hem
(Porutz 1970)

 Influena 2,3 DPG rezultat din untul

Rapaport-Luebering
n prezena 2,3 DPG afinitatea Hb pentru
O2 e sczut, oxigenarea determin
expulzarea 2,3 DPG ceea ce duce la
creterea afinitii pentru O2

 Inel heterociclic organic numit profirin

compus din patru grupri pirolice legate
ntre ele
Nu toate porfirinele conin Fe dar o serie
dintre ele sunt metalproteine i conine
hemul cum ar fi mioglobina, citocromul,
catalaza i sintetaza oxidului nitric
endotelial

 Pigmentul propriu-hem 4% din molecula de

Hb iar globina 96%
Sngele de om aprox 15 g Hb la 100 ml
% de Fe din Hb=0,334%cantitate metal va
fi aproximativ 50 mg la 100 ml snge i de
4-5 g n tot sngele din organismul uman
Sngele conine mic proporie de Fe n
afar de cel combinat cu Hemoglobina

 CO2 Hb depinde de
pCO2=carbohemoglobina
Creterea pCO2, creterea concentraiei
tisulare de H+, creterea temperaturii locale
i a concentraiei de 2,3 DPG scad afinitatea
Hb pentru O2 grbinu-i disocierea, adic
deplasnd la dreapta curba de disociere

 met Hb, carboxi Hb(COHb), sulf Hb

(SHHb)
metHb=dat oxidrii hemului cu Fe+++(fier
feric) fixeaz stabil OH n locul legrii
O2methemoglobinreducataza cu cofactorul
NADH i datorit aciunii protectoare a
glutationului i acidului ascorbic fac ca
metHb s se menin n cantiti mici 1% n
corp n condiii normale

 Ageni methemoglobinizani=fenacetina,
antipirina, lidocaina, bismutul subnitric,
oxideaz fierul=nu mai poate trasporta
oxigenul normal

Dozarea Hb n snge

I Metoda colorimetric:
Tall quits
Hemoglobinometru Dares
Metoda acid hematin Hb
hematina acid o sol brun
hsurat colorimetric cu adaos de HCL1/10N SAHLI
Metoda hematinei alcaline

Dozarea hemoglobinei
II. Metoda fotoelectric colorimetric
1. Metoda oxihemoglobinei
Msoar hemoglobina normal
Utilizeaz 0,007 N NH4OH sau 0,1% Na2CO3
Se citete cu lungimea de und de 540 nm

2. Cyanmethemoglobina

Determinarea hemoglobinei
II Metoda specific gravitaional CuSO4
Gravitaia specific a sulfatului de cupru este de
1,053 ntr-un echivalent de hemoglobin de
12,5 gm%

III Metoda gazometric=metod indirect

Principiu 1 g Hb=1,34 ml O2

IV Metoda chimic=metoda indirect

Principiu 1 g Hb=3,47 mg Fe

Spectroscopia hemoglobinei
https://
www.youtube.com/watch?v=Rx7pYwWem
Co
Compuii hemoglobinei i pigmenii hemici
plasai n drumul unei raze de lumin alb
absorb unele unde de anumite lungimi i
las s treac restul undelor

 Hb4+4O2=Hb4O8
La fel i pentru ceilali compuu exist
diferite lungimi de und

Decelarea sngelui
Petele de snge n medicina legal
Hemoglobina poate aciona ca o peroxidaz
n prezena apei oxigenate. Astfel ea d
reacii de culoare prin oxidarea benzidinei
sau rezinei de guaiac
n prezena NaCL i a acidului acetic , la
nclzire , hemoglobina trece n clorhidrat
de hematin care prin rcire cristalizeaz,
obinndu-se cristalele Teichmann

Cristalele Teichmann

Solue de oxihemoglobin
Clorur de sodiu cristale
Acid acetic glacial
Lam
Lamel
Bec Bunsen
microscop

 ntre o lam i lamel 1 pic snge diluat 1/500-1/1000 care

se acoper cu cteva cristale de NaCl
La marginea lamelei se pune o pictur de acid acetic
glacial ce va ptrunde prin capilaritate ntre lam i lamel
Se nclzete la flacr pn apare culoare brun-violacee
Se rcete
Microscop obiectiv 5-7 pe marginile lamelei
Se vor observa formaiuni romboidale alungite cu unghiuri
ascuite i de culoare brun izolate sau grupate
Acestea sunt cristalele de clorhirat de hematin

Beth Vincent

Beth Vincent-aglutinogenul
Seruri hemotest: 0 (anti-A, anti-B); A (anti-B); B
(anti-A)
Lam de microscop sau tub de sticl de 12100
mm
Ser fiziologic
Pipete Pasteur
Snge sau suspensie 2% eritrocite n ser fiziologic
centrifug

Beth-Vincent-aglutinogenul
Metoda pe lam:
Se pune cte o pictur de ser hemotest n ordinea O la
stnga A mijloc i B la dreapta pe lam
Se adaug o mic cantitate de snge pe fiecare pictur de
ser, cu ajutorul colului unei alte lame, care se ntoarce
pentru fiecare pictur de ser hemotest. Se omogenizeaz
prin amestecare.
Pictura de snge trebuie s fie de 10 ori mai mic dect
cea de ser.
Micarea lamei va fi una lent i rotativ
Citirea se face n primele 2-3 minute cu ochiul liber

Proba Simonin aglutininele

Se pun eritrocite test

0 A B
O x x
O O x
O x O
O O O

 Se pune n contact serul de cercetat cu

eritrocite test cunoscute de grup O, A i B
Se folosete drept martor negativ eritrocite
O pentru a nltura greelile datorate
aglutinrii nespecifice sau aglutininelor
specifice iregulare.

Metoda pe lam
Pe o lam s epun 3 picturi din serul de cercetat.
Pe prima pictur (stnga) se pun eritrocite 0, pe
pictura din mijloc eritrocite A i pe pictura din
dreapta eritrocite B. Adaosul i amestecarea se
realizeaz tot cu colul unei lame, schimbndu-se
la fiecare pictur.
Raportul dintre eritrocite i ser trebuie s fie de
aproximativ 1/10
Citirea se face prin rotirea lent a lamei n primele
2-3 minute, cu ochiul liber

Determinarea Rh
Aglutinarea hematiilor la tratare cu un ser ce
conine anticorpi anti-Rh
Dintre serurile anti-Rh la om, cel ai uor se obine
serul anti-D, ce reacioneaz cu sngele a
aproximativ 85% din indivizii de ras alb. Acest
ser poate conine i anti-C
Prezena factorului anti-C este foarte important
deoarece la tratarea unui snge care conine
antigenul c acesta poate fi considerat Rh-

Material necesar
Vat, alcool, eter,
Ser anti-Rh
Hematii Rh+ i Rh-; suspensie n serul propriu (snge recoltat
pe citrat de sodiu sau fr)
Lame
Cutie Petri cu hrtie de filtru mbibat cu ap (camera umed)
Termostat
Pipet Pasteur
Ac sering

Determinarea pe lam
Sngele de cercetat se recolteaz din pulpa
degetului. Cu o pipet Pasteur se pune ntrun tub de hemoliz 0,5-1ml snge.
Dup coagulare, se sparge cheagul cu vrful
pipetei Pasteur rezultnd eritrocitele
necesare n suspensie de ser propriu
Identic se procedeazpentru recoltarea
eritrocitelor cunoscute Rh+ i Rh-

Determinarea pe lam
Determinarea factorului Rh se face i cu snge recoltat pe
anticoagulant dar reacia apare mai tardiv
Pe o lam se pune o pictur mare de ser anti-Rh ce se
amestec cu o pictur din suspensia de eritrocite de
cercetat. Se omogenizeaz cu colul unei lame.
Pe a doua lam se repet operaia cu eritrocite cunoscute
Rh+ i Rh Se pun lamele n camera umed, pe dou baghete de sticl
Se termostateaz
Citirea are loc la 1-2 ore

Determinarea pe lam
Interpretare:
Subiectul este Rh+ dac s-a produs
aglutinarea
n pictura de control, eritrocitele Rh+
trebuie s fie aglutinate iar cele Rh-, nu
Lipsa de aglutinare cu eritrocitele de
cercetat indic faptul c sngele are Rh-