CROMATINA

SEXUAL

DEFINIIE
Cromatina sexual este un cromocentru cu particulariti morfologice
bine definite care permite stabilirea sexului genetic.
Cromatina sexual este o form de heterocromatin facultativ,
deoarece are morfologie distinct n celule provenite de la persoane cu sex
diferit (la femei - crt.X, la brbai - crt.Y)
Sexul genetic se stabilete n momentul fecundrii gameilor i
reprezint configuraia cromosomilor sexuali ai zigotului i implicit a fiecrei
celule somatice a unui individ. El este n mod normal:
XX pentru femeie;
XY pentru brbat.
Numai aceast configuraie gonosomic asigur o sexualizare normal.

A. CROMATINA X
1. DATE GENERALE
a. Definiie: Cromocentru vizibil, n mod normal, n nucleii interfazici ai
celulelor aparinnd sexului feminin; ea rezult prin heterocromatinizarea unuia
dintre cei doi cromosomi X.
b. Istoric
- descris n 1949 de Barr si Bertram n nucleul neuronilor de le pisica femel;
ulterior cromatina X a fost observat i la alte animale, precum i la om :
- explicarea originii i semnificaiei cromatinei X a fost realizat de MARY LYON
(1961)
Ipoteza MARY LYON privind originea cromatinei X (3 postulate):
(1) rezult prin inactivarea si heterocromatinizarea unuia din cei doi
cromosomi X la femeie;
(2) inactivarea cromosomului X matern sau cromosomului X patern se face la
ntmplare i independent n celule diferite.
(3) inactivarea este precoce (pn n ziua 16 de via intrauterin) i
definitiv (toat viaa);
Dup M. Lyon semnificaia apariiei cromatinei X se datorete
faptului c la om, i la mamifere, este necesar un singur X activ, restul se
inactiveaz, altfel diferena dintre materialul genetic la femeie i brbat ar fi
prea mare. De fapt, nu tot cromosomul X se inactiveaz. O parte mic a
acestuia rmne activ, asigurnd un mic avantaj selectiv sexului feminin (o
mai bun adaptare i o mai mare rezisten la aciunea factorilor exogeni).
c. Metode de studiu:
- studiul celulelor interfazice din orice esut provenit de la organismul feminin
normal. Tehnicile uzuale folosesc frotiul din celulele mucoasei bucale (testul
Barr) i frotiul din snge periferic;
- stabilirea numrului cromosomilor X n corelaie cu numrul de corpusculi de
heterocromatin X.
2. STUDIUL CROMATINEI X N FROTIUL DE MUCOAS BUCAL
a. Tehnica efecturii frotiului de mucoas bucal:
(1) recoltarea: se racleaz (rzuiete) faa intern a obrazului (la copii buza
inferioar) cu o lam de sticl rodat; recoltarea superficial (celule
1

descuamate) se nltur, a doua recoltare se folosete ntinzndu-se un frotiu

celular gros pe o lam de microscop;
(2) fixarea: cu amestec fixator, durata 30 minute 12 ore;
(3) rehidratarea: 4 bi succesive a 5' fiecare cu: alcool 70, alcool 50, ap
distilat I, ap distilat II;
(4) hidroliza: neobligatorie (cu HCl);
(5) colorarea: colorant CARR (fuxin bazic);
(6) examinarea frotiului la microscopul cu imersie
b. morfologia corpusculului Barr
- condensat i intens colorat bazofil (corpuscul BARR);
- situat cel mai adesea periferic, lipit de faa intern a membranei nucleare
(intranuclear);
- forma: ovalar, plan convex, discoidal sau triunghiular;
- mrime medie: 1 micron ( 0,3);
- cnd este situat central trebuie difereniat de nucleol (rotund i mai mare,
brun-crmiziu n coloraia cu verde de metil pironin) i de cromocentri
nespecifici (mai mici sau mai mari cu form neregulat).
c. Frecvena: teoretic 100%, practic aproximativ 30-40%. Aceast
frecven real se datorete:
- excluderii corpusculilor situai central;
- calitilor improprii ale unor nuclei din celulele superficiale sau profunde,
defecte de colorare;
- existenei reale a celulelor cromatin - negative: cromosomul X inactiv nu se
condenseaz din cauza unor condiii metabolice generale sau celulare;
- alte cauze: vrsta, ciclu ovarian, boli, tratamente.
d. Interpretare:
Nr. corpusculi BARR = nr. cromosomi X - 1
- n mod normal corpusculul BARR lipsete la brbat i este prezent ntr-un
singur exemplar la femeie, deoarece brbatul are un singur cromosom X, iar
acesta nu se inactiveaz, n timp ce femeia are 2 cromosomi X, din care unul se
inactiveaz;
- n cazuri patologice - anomalii de numr ale cromosomilor X (disgenezii
gonadice) - poate fi prezent la brbat (47,XXY), absent la femeie (45,X) sau
prezent n mai multe exemplare la ambele sexe;
- mrimea corpuscului BARR depinde de mrimea cromosomului X inactivat
(mai mare de 1 micron: isoXq, mai mic de 1 micron: isoXp, deleie pe
cromosomul X);
- cnd pe aceeai lam se ntlnesc celule cu un numr diferit de corpusculi
BARR, se ia n consideraie numrul maxim gsit deoarece unii ar putea s nu
apar (vezi frecvena).
3. STUDIUL CROMATINEI X N FROTIUL DE SNGE PERIFERIC
a. Tehnica: se evideniaz n nucleul polimorfonuclearelor neutrofile pe
frotiuri colorate cu soluie MAY - GRUNWALD - GIEMSA.
b. Morfologie:
(1) aspectul cromatinei:
- apendici nucleari de tip A au form de "b de tob" (drum stick) i
prezint un cap ovalar sau rotund legat printr-un filament subire de unul din
lobii nucleului PMN;

- apendici nucleari de tip B sau noduli sesili prezint aceeai mrime i

form ca i apendicii nucleari de tip A dar sunt legai direct la nucleu printr-o
baz larg de implantare.
(2) culoare: intens bazofil.
(3) mrime: 1,5 microni.
c. Frecvena:
- normal la femeie: 1/38 PMN (1/6 --> 1/98 PMN).
- n practic, pe o lam cu frotiu din snge periferic trebuie s fie cel puin 6
apendici tipici pentru a declara cromatina X pozitiv i s nu existe nici un
apendice tipic n cel puin 500 neutrofile studiate pentru a declara cromatina X
negativ.
d. Interpretare:
Nr. apendici nucleari = nr. cromosomi X - 1
Interpretarea se face dup aceleai reguli ca i n cazul frotiului
de mucoas bucal.

B. CROMATINA Y
a. Origine: aspectul interfazic al celor 2/3 distale ale braului q al
cromosomului Y;
b. Morfologie:
- se evideniaz prin colorare cu quinacrin
- corpuscul intens fluorescent (corpuscul F), vizibil n nucleul interfazic;
- mrime 0,25 microni;
- situat liber sau lipit de membrana nuclear;
- frecvena: diferit n diferite esuturi ale sexului masculin:
* 70-80% n fibroblati;
* 45% n spermatozoizi;
c. Interpretare:
Nr. corpusculi F = Nr. cromosomi Y
- corpusculul F este prezent exclusiv la brbat ntr-un singur exemplar; poate fi
prezent n dou exemplare la persoanele cu cariotip 47,XYY.

C. VALOAREA PRACTIC A TESTULUI CROMATINEI

SEXUALE
(INDICAII I LIMITE)
Testul cromatinei X este un test rapid, foarte util n multe situaii, care
poate fi efectuat n condiii de dotare minim, cu mijloace modeste.
1. INDICAII:
a) prenatal: n celulele extrase prin puncie amniotic;
- permite stabilirea sexului genetic al ftului n anomaliile gonosomale
recesive (de exemplu hemofilie sau miopatie Duchenne) n cazul n care femeia
este purttoare a genei anormale (risc 50%).
b) la natere: n cazul ambiguitii sexuale la nou nscuii cu testicul
nepalpabil.
- pentru precizarea sexului genetic i punerea n concordan cu sexul civil;
sexul civil are importan mai ales n edificarea ulterioar a sexului
psiho-comportamental.
c) mai trziu: n diferite anomalii de sexualizare:
- pentru precizarea sexului genetic;
3

- diagnosticul disgeneziilor gonadice - orhitice sau ovariene - anomalii de

numr i structur a cromosomilor sexuali.
d) n medicina legal i criminalistic: pentru precizarea provenienei
feminine sau masculine a unor fragmente de esuturi, pete de snge, fire de
pr.
2. LIMITE:
Testul cromatinei sexuale este un test subiectiv, nu poate depista toate
mozaicurile i nici anomaliile autosomilor; n multe situaii, pentru rigurozitate
necesit efectuarea cariotipului.

D. PRACTIC
- Realizai tehnica de obinere a frotiului de mucoas bucal;
- Analizai la microscop frotiurile obinute i stabilii sexul gonadic al persoanei
de la care s-a recoltat;
- Analizai la microscop cromatina sexual din frotiurile din snge periferic;
- Analizai diapozitive, plane i fotografii referitoare la heterocromatina sexual
n diferite celule de la brbat i femeie;
- Discutai condiiile n care este indicat realizarea testului Barr;
- Facei corelaii ntre mrimea corpusculului Barr sau a corpusculului F i
situaiile fiziologice sau patologice ale celulei respective.
E. VERIFICARE CUNOTINE
1. Definii urmtorii termeni:
- corpuscul barr
- sex genetic
- corpuscul F
apendice nuclear
- drum stick
- nodul sesil
- disgenezie gonadic
sex gonadic
2. ntrebri:
- Care sunt postulatele ipotezei Lyon asupra inactivrii unui cromosom X la
femeie?
- Care este corelaia dintre numrul de corpusculi Barr i numrul cromosomilor
X?
- Care sunt caracterele morfologice ale corpusculului F i care este semnificaia
lui?
- Care este explicaia discordanei dintre frecvena teoretic i cea practic a
cromatinei sexuale?