Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

M ICROBIOLOGIA GENERAL

Microbiologia este acea ramur a biologiei care se ocup de studiul fiinelor vii invizibile
ochiului liber numite microorganisme. Acestea pot fi bacterii, virusuri, ciuperci microscopice, respectiv
parazii unicelulari- protozoari.
Rolul microbiologiei const n studierea proprietilor fizice, chimice i biologice ale
microorganismelor, utilizarea celor folositoare i distrugerea celor duntoare omului.
Datorit echipamentului enzimatic foarte bogat, microorganismele au rol important n
urmtoarele procese:
- circulaia elementelor vitale- C, N, P, S, Fe-; unele microorganisme preiau din sol, ap, aer
molecule necesare proceselor de dezvoltare i producerii de energie. Plantele i microorganismele
fototrofe folosesc energia solar pentru a sintetiza substane organice din bioxidul de carbon al aerului i
substanele anorganice din ap i sol. Plantele sunt folosite de ctre om i animale pentru nutriie. Dup
moartea acestora, substanele organice complexe ajung din nou n mediul extern unde microrganismele
le descompun n substane anorganice care vor sta la baza noii sinteze. Fr acest proces de mineralizare,
sursele biologice ale mediului nconjurtor s-ar epuiza rapid.
- n geologie au rol n producerea zcmintelor de crbune, iei, sulf, fier, etc.
- microorganismele acvatice pot avea rol util intervenind n circulaia materiei din ap, dar i
duntor cauznd mbolnviri la peti i intervenind n procesele corozive.
- n diferite ramuri ale industriei se folosesc microorganisme, astfel n industria alimentar pentru
producerea lactatelor, a vinului i a berii, n industria medicamentelor pentru producerea de antibiotice,
interferon, hormoni, vitamine, etc., n industria textil, sau pentru producerea de detergeni. Exist
microorganisme care se folosesc n agricultur.
Rolul duntor al microorganismelor se manifest n procesele corozive ale monumentelor
istorice- cldiri, sculpturi din piatr, picturi- i ale metalelor, prin alterarea alimentelor i a materialelor
plastice.
De asemenea, rolul duntor poate afecta omul i animalele, determinnd mbolnvirea acestora.
Microbiologia medical se ocup de studierea microorganismelor duntoare omului i de mecanismele
de aprare ale organismului uman. Noiunea de microbiologie a fost introdus de SEDILLOT n anul
1878.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Ramurile microbiologiei medicale sunt: bacteriologia, virusologia, micologia i protozoologia.

Bacteriologia se ocup de studierea bacteriilor, virusologia studiaz virusurile, micologia ciupercile
microscopice, iar protozoologia paraziii unicelulari.
Cunoaterea microbiologiei medicale este necesar pentru diagnosticul i tratamentul specific al
bolilor infecioase, precum i pentru elaborarea msurilor de profilaxie nespecific (sterilizarea,
dezinfecia, antisepsia, asepsia) i specific (elaborarea de vaccinuri).

Bacteriolo gia medical

Are trei ramuri:
- bacteriologia general care descrie caracterele generale ale bacteriilor;
- patogenitatea, infecia, imunitatea n infecii, capitole care trateaz proprietile
bacteriilor de a produce boal, respectiv totalitatea proceselor ce se desfoar n
organismul uman i rezistena specific aprut n urma infeciei;
- bacteriologia special se ocup de descrierea genurilor patogene pentru om.

Istoria bacteriologie i medicale

Datorit dimensiunilor reduse ale bacteriilor, istoria acestora cunoate trei etape: cea din
antichitate, cea marcat de descoperirea microscopului i cea a microbiologiei tiinifice.
Medicii din antichitate s-au mprit n idealiti, care presupuneau existena unei puteri divine cu care
ncercau s explice apariia epidemiilor, i n materialiti care explicau apariia bolilor infecioase pe
baza observrilor empirice. Din a doua categorie au fcut parte:
- Hipocrate (460- 375 .e.n.)- a introdus teoria miasmelor, considernd c bolile sunt date
de aerul contaminat al mlatinilor,
- Thuchidide (460- 395 .e.n.) a menionat rolul fiinelor foarte mici, numii contagium
animatum, n bolile infecioase,
- Varro (116- 27 .e.n.)- considera c epidemiile au fost cauzate de animalele mici din aer,
pe care le numea animalia minuta,
- Fracastro (1478- 1553) sublinia caracterul contagios al pestei, al variolei i al sifilisului.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Descoperirea microscopului a marcat nceputul unei etape noi n istoria bacteriologiei:

- n 1590 fraii Zaccharias i Hans Jansen au elaborat primul telescop, tehnica lefuirii
lentilei fiind aplicat cu succes n construirea primului microscop de ctre Antony van
Leeuwenhoek (1632- 1723). El a observat pentru prima dat microorganismele n
diferitele secreii i caviti ale omului, precum i cele din natur. Fiind un amator, nu a
realizat legtura dintre microorganismul observat i boala produs de acesta.
- Descoperirea microorganismelor a relansat problema genezei sponate- apariia vieii din
nimic, teorie infirmat de Redi (1667), Spallanzani i n final de Pasteur.
Fondatorul microbiologiei tiinifice a fost Luis Pasteur (1822- 1895). Printre realizrile sale cele mai
importante amintim introducerea sterilizrii i a asepsiei, a anaerobiozei i a aerobiozei n bacteriologie.
Studiind procesele de fermentaie, realizeaz c fiecare tip de fermentaie se datorete unui alt tip de
microorganism. Reuete s identifice microorganismele care determin mbolnvirea viermilor de
mtase, stabilete legtura ntre agentul infecios i boal, observ c tulpinile care conin bacterii
mbtrnite nu mai sunt capabile s produc boal, le folosete ca vaccin n cazul cholerei ginilor.
Alternd cultura bacilului crbunos prin nclzire, elaboreaz vaccinul anticrbunos. Una dintre cele
mai importante realizri ale lui este, ns, vaccinul antirabic elaborat prin adaptarea virusului la iepure.
Robert Koch (1843- 1910) a contribuit de asemenea, la punerea bazelor microbiologiei tiinifice. El a
descoperit bacilul crbunos i ciclul biologic al acestuia, ceea ce include i descrierea sporogenezei. A
descoperit bacilul tuberculos (1882), vibrionul choleric (1883), i a introdus o serie de metode noi n
bacteriologie, printre care figureaz folosirea mediilor solide pentru cultivarea bacteriilor, aplicarea
coloraiilor, fotografierea microscopic, etc. A elaborat postulatele care i poart numele i care cuprind
criteriile necesare pentru ca o infecie s fie produs de o anumit bacterie. Klebs i Loeffler au
contribuit la descoperirea i prima izolare a bacilului difteric.
Mecsnikov (1845- 1916), a descris procesul de fagocitoza realizat de leucocite, punnd astfel bazele
imunologiei.
Semmelweis (1847) i Lister (1867), au introdus antisepsia i asepsia n ginecologie prevenind febra
puerperal, respectiv n chirurgie.
n secolul al XIX-lea, care se numete i epoca de aur a bacteriologiei, s-au descoperit agenii
patogeni ai majoritii bolilor infecioase i s-au pus bazele imunologiei.
Fodor (1886) arat rolul bactericid al serului uman. Roux, Yersin i Kitasato descriu exotoxinele
(1888). Babe, Behring i Kitasato pun bazele seroterapiei (1890). Pfeiffer i Isaeff descriu bacterioliza
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

(1894). Bordet elaboreaz reacia de fixare a complementului n 1896, i Richet descrie anafilaxia n
1902. Ehrlich pune bazele chimioterapiei (1910), Tworth i d`Herelle descriu bacteriofagii (1915 i
1917). Ramon transform exotoxina n anatoxin (1924) iar Fleming descoper lizozimul (1922) i
penicilina (1929).
Introducerea chimioterapicelor i a antibioticelor n tratamentul bolilor infecioase a determinat
modificri fundamentale n evoluia acestora. Introducerea metodelor genetice moderne ajut la
identificarea precis a bacteriilor.

Istoria bacteriologie i romne

Fondatorul colii romne de microbiologie a fost Victor Babe (1854-1926). El i-a nceput
studiile de medicin la Budapesta, transferndu-se n anul trei la Viena unde a absolvit n 1878. Primele
interese ale lui Babe s-au orientat spre anatomo-patologie ca ulterior s vin n contact cu lumea
interesant a bacteriilor. Din 1880 a devenit profesor de anatomopatologie la Budapesta, continundu-i
studiile la Heidelberg, Strasburg, Berlin i Paris, unde au elaborat primul curs de bacteriologie medical
mpreun cu profesorul Cornil (1885). Astfel, Babe a devenit un savant de nivel european. A fost
invitat n Regatul Romn pentru a elucida cauza mbolnvirii bovinelor din ar. Babe a gsit agentul n
hematiile animalelor, considerndu-l bacterie. De fapt, era vorba de un protozoar care astzi i poart
numele: Babesiida. Datorit rezultatelor importante a fost invitat la Bucureti s organizeze n cadrul
Universitii de Medicin Instituiile de Anatomopatologie i Bacteriologie. Astfel, n 1899
Universitatea a avut cele mai moderne instituii din Europa.
Babe a rmas ataat de Institutul medical de la Budapesta, rmnnd n contact cu fotii colegi.
n anul 1907 Asociaia Medical Regal de la Budapesta l-a ales membru de onoare. A devenit rectorul
Universitii de Medicin la Bucureti, i dup primul Rzboi Mondial a organizat i Universitatea de
Medicin din Cluj. A predat anatomopatologie, bacteriologie i medicin legal. Ca om de tiin a avut
1300 de publicaii, descriind un numr mare de bacterii, astfel corpusculii metacromatici la bacilul
difteric, numii corpusculii Babe- Ernst. A descoperit incluziile virale din neuronii persoanelor
suferinde de rabie, care au rol important n diagnosticul bolii. Acestea poart numele de incluziile
Babe- Negri. A pus bazele seroterapiei, a anticipat antagonismul bacterian i implicit posibilitatea
antibioterapiei.
mpreun cu fratele su Aurel, au elaborat un manual de anatomopatologie general i special.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Din 1891 a redactat revista Romnia medical, i din 1893 a devenit membru al Academiei
tiinifice Romne. A studiat tuberculoza i lepra, a introdus n Romnia vaccinul antirabic i
seroterapia n difterie. A militat pentru mbuntirea situaiei medicale a poporului romn, fiind totodat
un adept al modernizrii.
Ion Cantacuzino (1863- 1934) i efectuat studiile la Paris i a fost colaborator al lui Mecsnikov. Studiaz
imunitatea celular i cauza vibriolizei n organism. Descrie imunitatea de contact. n 1901 se ntoarce la
Bucureti prelund conducerea Institutului de Cercetri Medicale n cadrul Universitii de Medicin. Se
ocup mai ales de prevenie, ntre 1908 i 1910 organiznd ....institutul Sanitar. Introduce vaccinul
antituberculos, prin reforma sanitar elaboreaz legea Cantacuzino, punnd bazele activitii medicale i
ale preveniei. Folosete pe scar larg vaccinul anticholeric la soldaii romni care particip la rzboiul
balcanic, ei fiind protejai. Acesta era marele experiment romn din 1913. Introduce vaccinul antitific.
n 1921 organizeaz Institutul care astzi i poart numele (Institutul I. Cantacuzino) i n care se
elaboreaz pe scar larg vaccinurile i serurile aplicate n prevenia i tratamentul bolilor infecioase.
Aici se elaboreaz i medii de cultur folosite pentru cultivarea bacteriilor.
S-a ocupat de studierea scarlatinei, a febrelor enterale, a difteriei, tifosului exantematic, etc.
C. Ionescu- Mihieti (1883- 1962) a fost elevul i ulterior colaboratorul lui Cantacuzino. S-a
ocupat de problemele importante ale bacteriologiei i ale virusologiei, cum ar fi tuberculoza i
poliomielita.
M. Ciuc (1883- 1969) a descoperit mpreun cu Bordet fenomenul lizogeniei. A avut rol
important n eradicarea malariei (1961).
C. Levaditi (1874- 1953) a fost elevul lui Babe i al lui Mecsnikov. A lucrat n domeniul
diagnosticului de laborator n sifilis, n domeniul imunologiei i al virusologiei.
t. S. Nicolau (1896- 1967) a fost fondatorul Institutului de Virusologie din Bucureti. A studiat
morfologia i epidemiologia unor virusuri: herpesvirusurile, virusurile hepatitelor epidemice, etc.

Clasificarea, morfologia bacteriilor

- Procariote- aparin Regnului Procaryotae mpreun cu algele verzi

Fr membran nuclear- au nucleoid
Un singur cromosom- ADN dublu catenar cel mai frecvent circular
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Morfologia bacteriilor

Este bine definit, cu polimorfism redus, este important n identificarea i clasificarea bacteriilor.
Se disting 3 forme mai importante. Se studiaz pe bacteriile tinere:
sferice- coccus- Staphylococcus, Neisseria, etc.
bastonae- bacillus- Escherichia coli, Bacillus anthracis, Mycobacterium tubercolosis, etc.
spiralate- vibrioni, spirili, spirochete- Vibrio cholerae, Treponema pallidum, etc.

- Mycoplasme- forme nedefinite.

COCCUS:
diametrul- uniform Staphylococcus aureus,
neuniform- boabe de cafea: Neisseria gonorrhoeae,
oval- Streptococcus pyogenes,
ascuit- Streptococcus pneumoniae.
Dup nmulire, dispoziia n spaiu va fi:
la micrococi- izolai,
diplococi- cte doi: S. pneumoniae,
tetracoci- Micrococcus tetragenus,
cubic- Sarcina ventriculi (cte 8)
n lanuri de diferite lungimi: Streptococcus viridans,
n ciorchini: Staphylococcus aureus.

BASTONAE, bacili:
- mai lungi, dect lai
drepi: Bacillus anthracis,
uor ncurbai: Corynebacterium diphtheriae,
ramificai: Mycobacterium tuberculosis,
sporulai:- sporul modific corpul bacterian: Clostridiile,
- sporul nu modific: corpul bacterian: Bacillus anthracis.
Marginile- rotunjite: enterobacteriile- Escherichia coli,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

retezate: B. anthracis,
ascuite: fusobacteriile,
umflate: Corynebacterium diphtheriae.
Dispoziia n spaiu: - cte doi, diplobacillus: Klebsiella pneumoniae,
- n lanuri, streptobacillus: B. anthracis,
- n litere cuneiforme, palisade: C. diphtheriae.
- izolai, dezordonat: enterobacteriile,
forme de trecere: coccobacili: Klebsiella pneumoniae, Bordetella pertussis.

Forma spiralat:
ncurbai parial de-a lungul axului longitudinal: vibrioni,
ncurbai de.a lungului axului longitudinal:
spirili: spire rigide- saprofii,
spirochete: spire flexibile: Treponema, Leptospira, Borrelia.

Mycoplasme: lipsa peretelui celular obinuit- polimorfism.

Dimensiunile bacteriilor: - se exprim n micrometrii.

Variabil / depinde de specie, de stadiul multiplicrii, de mediul de cultur/,
la coci: 0,5-2 m, media 1m
la bacili: lungimea de 0,5- 10 m, limea de 0,1-2 m.
la formele spiralate de 10- 40 m, limea de 0,1-1 m.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Structura ce lule i bacte rie ne

Componente obligatorii
Nucleu
Citoplasm
Membrana citoplasmatic
Perete celular

Componente facultative
Flageli
Capsul
Fimbrii, pili
Spori.

Material nuclear, nucleoid:

nu au membran nuclear- procariote,

un cromosom, un ADN- circular (haploid), excepie: ADN linear la Borrelia burgdorferi,
genul Streptomyces.
raportul dintre bayele nucleotidice G-C depinde de specie
este primul care se replic n cursul diviziunii bacteriene,
studierea prin metode citochimice, electronmicroscopie, cu microscopul cu contrast de
faz.
Citoplasma:- sistem coloidal (cu glucide, lipide, proteine, ap, sruri minerale),

compoziie granular,
ribozomi: rol n sinteza proteinelor, este inta de aciune a unor antibiotice,
granule de volutin Babes-Ernst- C. diphtheriae,
incluzii: glicogen, amidon, lipide, substane anorganice.
Membrana citoplasmatic: 5-10 nanometrii,

din fosfolipide- proteine, ultimele ntr-un procent de 70%,

invaginarea: mezozomi- important n procesul de multiplicare, separarea citoplasmei,
semipermeabil,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

roluri: reglarea presiunii ozmotice,

reglarea difuziunii pasive, prin permeaze- transport specific,
n creterea bacteriilor, n multiplicarea lor,
locul producerii de exotoxine,
inta unor antibiotice, dezinfectante.
Peretele celular: 15-35 nanometrii

afinitate sczut fa de colorani,

compus din: glucide, lipide, proteine,
rigiditatea se datoreaz peptidoglicanului (polimer de mucopolipeptid), N-Acetil-
Glucozamina i N-Acetil-Muramina se repet regulat- produce lan, legtura dintre
straturi, prin puni pentapeptidice,
difer la cei Gram + i Gram - : tabel

Bacterii Gram-pozitive violete Bacterii Gram- negative roii

n interior 40 straturi de peptidoglican, n interior un strat de peptidoglican,
80% din peretele celular, cu pori. 20% din peretele celular,
n spaiul periplasmatic, toxine, enzime
care degradeaz antibioticele.
n exterior- acid teicoic 20%, rol n n exterior: 80%, lipopolizaharidul
aderare. (LPS), lipoproteine, fosfolipidek,
porine (antigenul somatic)
Perete gros i rigid Perete mai flexibil

Unele antibiotice inhib polimerizarea acidului muramic, i implicit i a peretelui celular.

Alte influene (radiaiile, UV) modific peretele celular.
Rezultat: distrugerea celulei, apariia formelor atipice: forme L , la cei G+ protoplast, la cei G-
sferoplast- ele devin rezistente la antibiotice!!!!!!

Capsula:- gel mucos-lipicios, prezena ei este factor de virulen: rol protector/ fa de fagocitoz/,
microcapsula- evideniabil doar prin metode citochimice,
capsula: vizibil i cu microscopul optic, are 1-3 microni,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

de natur polizaharidic, excepie la B. anthracis la care este proteic (polimerul acidului

D- glutamic),
difer i n cadrul unei specii, pe baza ei se definesc serotipurile- S. pneumoniae peste 90
de serotipuri
rol n aderarea celulei- la S. mutans lipire de smalul dentar- rol n cariogenez.
Cili/ flagellum/- organite celulare cu rol n micare,

75 m, subiri, neramificai, flexibili,

proteina specific este flagellina, seamn cu miozina din musculatur,
reprezint antigenul flagelar H,
Bacteriile pot fi:
Atrichi: aciliate: Shigella,
Monotriche: un cil terminal- Vibrionul holeric,
Amfitriche: cte un cil le cele dou poluri
Lofotriche: un mnunchi de cili la un pol, Pseudomonas aeruginosa,
Amfilofotriche: cte un mnunchi la cele dou poluri,
Peritriche: cu cili jur mprejur- E. coli.

Fimbriile: apar la bacteriile G-, n jurul peretelui celular,

organite fine, subiri, scurte, nu au rol n micare,

se observ numai la electronmicroscop,
proteina lor se numete pilin, antigenul F
3 tipuri:- care intervin n aglutinarea hematiilor
- de aderare- rol n patogenitate, determin tropismul bacterian / localizare
enteral, urinar, vascular, etc./
fimbrii sexuale- rol n conjugare- realizeaz legtura ntre bacteria donatoare i
acceptoare.

Sporul: stadiul latent al bacteriei

foarte rezistent,
prezent la genurile Clostridium, Bacillus,
Forma: sferic, oval, modific sau nu corpul bacterian,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Dimensiuni: pn la 1,5 m.
Structura: din citoplasm apare sporoplasma, conine i materialul nuclear. Din membrana
citoplasmatic apare intina. Exina corespunde peretelui celular, este foarte groas, refringent,
iar exosporiumul este stratul extern, mucos- organizat din resturile celulei bacteriene, ce nu ncap
n celul.
Conine foarte puin ap. Prezint lipide, acid picolinic (termorezistent)- B. anthracis rezist
10 minute la 100 C, iar Clostridium botulinum rezist 6 ore la fierbere.
Transformarea bacteriei din form vegetativ n spor se numete sporogenez. Etapele
sporogenezei sunt: pregtirea, maturarea. Fenomenul este reverzibil.

COMPO ZIIA CHIMIC A BACTERIILOR

determinat genetic,
adaptat la condiiile mediului

Apa: 80%

Substane anorganice:
2-30% din greutatea uscat

P, K, Na, Ca, Fe etc.

Oligoelemente: Cu, Mg, Zn,

de structur, enzime, reglarea presiunii osmotice, pH-ului.

Carbohidrai: 10-25%,
Rol plastic, sunt surse de energie,

D.p.v. chimic- mono, oligo i polizaharide

Acumulare, depozitare intra i extracelular: de ex. S. mutans rol n producerea de CARIES

capsula: S. pneumoniae,
peretele celular: mucocomplex

polizaharide specifice: antigene / atg O la Gram- negativi, atg. K de capsul

Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Proteine: 40-80%,

Holoproteine, heteroproteine, complexe

Aminoacidul bacterian: acid diaminopimelinic
Nucleoproteine: multiplicare, sinteza proteinelor, transferul materialului genetic
Structurale: enzime

Lipide: 1-10%
Excepie la g. Mycobacterium: 40%,
granulaii citoplazmatice, formeaz complexe (cu proteine, glucide),
n peretele celular, n membrana citoplasmatic,
acizi grai, gliceride, ceruri, glicero-fosfolipide.

PIGMENI: factori care influeneaz producerea lor: temperatur, vrsta, specia

rol n patogenez, diagnostic,
chromofor: Staphylococcus,
chromopar: Pseudomonas,
comp. chimic:
carotenoizi: Staphylococcus,
chinoinici: Mycobacterium,
phenazinici: Pseudomonas

ENZIME: clasificare
constitutive: permanente
adaptative: prezena lor depinde de substrat (penicilinaza se produce n prezena penicilinei)
n funcie de locul activitii
extracelulare: hidrolaze,
ectocelulare: permeaze,
intracelulare
biochimic:
hidrolaze: lipaze, proteaze, foszfataze
transferaze: aminotransferaze,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

oxidoreductaze: catalaza, peroxidaza,

rol: industrial, rol n agricultur, n bacteriologie

FACTORI DE CRETERE: biocatalizatori

rol n dezvoltarea bacteriilor,
eseniali, stimulani, sintetizai de celula bacterian
vitamine / complexul B, vit K /, factori X, V, acid folic

METABOLISMUL BACTERIILO R
Procese catabolice, anabolice

Rezult n eliberare de energie prin:

fotosintez (bacterii saprofite)
chemosintez- din procese de oxidoreducere (i cele patogene)
acceptorul de H- poate fi :
oxigenul molecular- respiraie aerob,
substan anorganic, dar NU oxigenul- respiraie anaerob,
substan organic- fermentare.
n aceste procese intervin enzime numite DEHIDROGENaze NAD,
stocarea energiei se realizeaz prin macromolecule de ATP.

RESPIRAIA BACTERIILOR:
obligat aerobi: Bacillus anthracis, Mycobacterium tuberculosis, Pseudomonas aeruginosa,
obligat anaerobi: Clostridii (fr citocrom, catalaz),
facultativ anaerobi- bacteriile patogene: S. aureus, E. coli,
microaerofili: spirochete.

NUTRIIE- ANABOLISM: asimilarea surselor de N, C

autotrofe- se hrnesc cu substane anorganice- saprofite, circul. materiei
heterotrofe- necesit i substane organice- flora normal, patogenele
paratrofe: M. leprae, rickettsia- se dezvolt intracelular,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

importana cunoaterii nutriiei: pentru cultivarea bacteriilor,pentru tratamentul infeciilor (diagnostic,

elaborarea de antibiotice)
transport activ (permeaze), pasiv (difuziune).

MULTIPLICAREA BACTERIILOR

Divizie direct, de obicei necesit 20-30 de minute

Dinamica multiplicrii:- cultur pur, mediu lichid, 370 C grade
faza de lag: 2h
faza de cretere logaritmic 12h
faza de staionare: 5h- conc. M
faza de declin
multiplicare lent: N. gonorrhoeae 48 h, M. tbc 30 de zile

pt. elaborarea de vaccinuri i antibiotice se folosesc bacterii din faza de cretere logaritmic

ACIUNEA DIFERIILOR AGENI ASUPRA BACTERIILOR

Pot fi aciuni:
- fizice,
- chimice,
- biologice.

Efectul depinde de:

specia bacterian (capsul, spori)
intensitatea, durata aciunii.

Poate fi:
ireversibil (bactericid),
reversibil (bacteriostatic- mutaii)

Aplicare n practic:
- sterilizarea,
- dezinfecia,
- antisepsia,
- asepsia,
- conservarea
- chimioterapia/ antibioterapia.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Aciunea agenilo r fizic i :

temperatura:
psichrofili, mezofili, termofili
supramaximal/ subminimal LIOFILIZARE

radiaiile: (bactericid),
UV (ADN- ul deteriorat, se produce O 3 , H2 O 2 ),
(penetrant),

laserul: efect bactericid instantaneu

ultrasunetele: peste 200 000 Hz

modificarea presiunii osmotice: (rapid)

hipertonie- zbrcire/
hipotonie- explodare/ plasmoftizie

mecanic:
sporii rezist pn la 12 000 atm

Aciunea agenilo r chimic i :

Denaturarea proteinelor
acizi, substane alcalinizante, alcoolul
Inhibarea enzimelor:
formalina,
substane oxidante (H2 O2 , KMnO 4 , Cl-amina, tinctura de Iod),
Srurile metalelor grele (sublimatul), colorani (medii de cultur)
Modificarea permeabilitii bacteriilor:
fenolul- etalon (5%- dezinf.)
detergeni- bromocetul (1- 10%- dezinf)
Gaze:
oxidul de etilen,
formalina (saltele, pturi, ncperi, etc.)

Chimioterapice:
Substane chimice care inhib, distrug germenii n organismul infectat.
Nu duneaz organismului gazd.
Paul Ehrlich (1854- 1915)- substane care se combin cu citoplasma bacteriilor.
Inhibiie competitiv- nlocuiesc metabolii eseniali ai celulei. Ex. sulfonamidele
Domagk:
Prontosil- PAB- sulfonamida, nlocuiete acidul PAB- factor de cretere al bacteriilor
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

n infecii urinare: Negram,

n infecii enterale: Furazolidon,
n tuberculoz: acid izonicotinic, etambutol, rifampicina

Aciunea agenilo r biologic i :

Antibiotice,
Bactericine,
Bacteriofagi,
Antibiotice
Substane produse de microorganisme
Contra altor microorganisme
Fleming penicilina 1928 (aplicare n 1943)
Clasificare

dup provenien
Ciuperci
genul Streptomyces (nystatin, streptomicina)
genul Bacillus (gramicidina, bacitracina)

dup compoziia chimic:

Betalactamine (penicilina, cephafosporine)

Macrolide (eritromicina)

Oligozaharide (streptomicina)

Aminoglicozide (kanamicina, gentamicina)

Polipeptide (polimixina B, colimicina)

Atb cu spectru larg (tetraciclina)

BACTERIOCINE:
proteine specifice, difuzibile
produse de bacterii
bactericide asupra altor specii, altor tulpini
GRATIA- 1925- la E.coli- colicina
Peste 50 de specii produc:
Pseudomonas- piocine
B. Megaterium- megacina
Notate cu litere majuscule
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Determinate de prezena factorului Col.

Receptori specifici pe bacteria sensibil

Bacteriofagii

Sunt virusuri care infecteaz bacteriile, determinnd liza acestora. Reprezint al treilea factor
biologic care acioneaz asupra bacteriilor. Prima dat au fost descrii de Tworth i dHerelle n 1915,
respectiv n1917. Bacteriofagii se gsesc peste tot unde sunt bacterii- n organismul animal i cel uman,
n ap i pe sol. Aproape toate bacteriile au bacteriofagi specifici.
Structura lor poate fi icosoedral, filamentoas, pleomorf sau complex, au dimensiuni ntre 24-200
nm.
Prezint: - capul sau capsidul care este. Este compus din 20 de capsomeri. n interior se gsete acidul
nucleic.
- coada format dintr- un tub gol, contractil, numit teaca cozii care permite transmiterea
acidului nucleic celulei bacteriene. n interiorul tubului se afl cilindrul axial. n continuarea cozii apare
placa terminal hexagonal, avnd un orificiu central i ase fibre ncurbate.
Compoziia: - acid nucleic cu ADN sau ARN, mono sau dublu catenar, conin 3-5 sau chiar 100 de gene,
i
- proteinele protejeaz fagul de nucleaze.

Relaiile bacteriofagului cu celula bacterian:

- exist o specificitate dat de prezena receptorilor pe celula gazd,
- n funcie de efectul produs asupra bacteriei, putem vorbi de:
- fag litic- se replic n bacterie i o distruge, fazele replicrii bacteriofagului sunt:
1. adsorbia- fagul ader de celula bacterian,
2. penterarea- injectarea acidului nucleic n celula int,
3. faza de eclips- ptrunderea acidului nucleic n ADN-ul bacterian, replicarea se poate opri
n aceast faz; n aceast faz se produc componentele fagului;
4. faza de maturare- asamblarea particulelor fagice
5. eliberarea fagului prin distrugerea bacteriei. ntr-o bacterie se produc peste 1000 de fagi.
- fag temperat- rmne n stare latent n ADN- ul celulei bacteriene i se transmite urmailor,
- n funcie de modul cum reacioneaz bacteriile la prezena bacteriofagilor, distingem trei tipuri:
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

- bacterii lizorezistente- nu au receptorii specifici ai bacteriofagilor sau distrug fagul ptruns n

celula bacterian;
- bacterii lizosensibile- bacteriofagii ptrund n ele, se replic i le distrug;
- bacterii lizogene- bacteriofagul ptrunde n acestea, dar se oprete n evoluie (fag temperat)
fr s le lizeze. Se realizeaz un echilibru ntre fag i celula bacterian. Fiind integrat n ADN-
ul bacterian, fagul se transmite ereditar la descendeni. Dac intervin factori ca razele UV sau
X, respectiv aciunea anumitor substane chimice, cum ar fi H2 O2 i analogi ai bazelor din
acizii nucleici, fagul temperat se poate transforma n fag litic.
Prezena bacteriofagilor n celula bacterian determin conversia lizogen a acesteia cu apariia
unor caratere noi, cum ar fi producerea de exotoxin sau rezistena fa de unele antibiotice.
Aplicaiile practice ale bacteriofagiei:
- identificarea bacteriilor prin lizotipie- datorit specificitii relaiilor dintre fag i bacterie,
permite identificarea cea mai fin a bacteriilor. Se aplic n epidemiologie pentru
determinarea sursei de infecie, n bacteriologie pentru identificarea i clasificarea
bacteriilor, i cu scop terapeutic.
- permit introducerea elementelor genetice n bacterii- gene care rspund pentru elaborarea de
interferon, hormoni, inzulin- au aplicaie n industria medicamentelor,
- se pot folosi ca modele ieftine n genetic, biochimie, biofizic i biologie molecular, se
replic rapid.

GENETICA BACTERIAN

E reprezetat de cromosom i de plasmide.

CROMOSOMUL:
ADN CIRCULAR, dublu helicoidal,
lungime 1,1 mm, bazele ca la om- A,T, G, C,
are 2000 de gene ce codific aproximativ 2000 de proteine,
rar: ADN linear (Borrelia).

Genotip- totalitatea genelor,

fenotip- genele care se manifest n diferite caractere.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

PLAZMIDE: elemente facultative extracromosomiale, ADN CIRCULAR, dublu helicoidal,.

Asigur caractere noi bacteriei.
Pot fi:
autonome, replicare liber n citoplasm, sau
integrate reversibil n cromosom (fag temperat, factor de fertilitate: codific pilina, proteina
fimbriilor sexuale).

Factorul de fertilitate (fF):

- lipsete- acceptor (F-)- femela,
- prezent autonom - donor (F+)- mascul,
- prezent integrat n cromosom- (HFr)- supermascul.

Caractere codificate de plasmide:

- antibiorezisten (plasmidul Rf),

- producere de enterotoxin (plasmidul Ent),

- hemolizine (plasmidul Hly),

- bacteriocine (plasmidul Col),

- factori de adeziune -, colonizare-.

Factorul de Antibiorezisten (rF) WATANABE 1961,

- ADN circular, dublu helicoidal,
- codific rezisten fa de 1- 8 antibiotice,
- 1- 8 determinani de rezisten (r) i factorii de transfer de rezisten ai lor (RTF), (1 r codific
rezisten fa de un antibiotic),
- transferul lor se realizeaz prin conjugare, transducie,
- st la baza rezistenei infecioase, realizat n flora normal (G- negativi, tulpini de
Staphylococcus).
VARIABILITATEA BACTERIILOR

Fenotipic: afecteaz o populaie de bacterii genele nu se modific, este fiziologic:

Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

folosesc la adaptarea la mediu,

nu se transmit urmailor,
lanuri la Streptococcus,
pe medii cu bil- Proteus fr cili,
penicilinaza se produce numai n prezena penicilinei,
Genotipic: afecteaz un individ.
Apar modificri n gene, se transmit urmailor:
prin mutaii,
prin transfer de material genetic.

Mutaii
Clasificare:
- spontane- rare, rata mutaiilor 1/10 milioane de multiplicri,
- induse- raze UV, X, substane chimice, antibiotice.
Pot fi :
punctiforme (1 gen), ntinse (mai multe gene),
forward- din bacterie rezult mutantul,
backward- din mutant rezult bacteria original,

exprimare fenotipic
prezent,
absent,
letal- prin alterarea mesajului genetic,

Mecanismul:
substituie- se nlocuiete o baz,
inserie- adugare de o baz,
deleie- tergerea unei baze,
inversare- se inverseaz ordinea la 2 baze,

Mutaii importante:
morfologice (cili, capsul),
caractere de cultur schimbate (S-R),
modificri antigenice: dispare antigenul H sau O,
biochimice apar caractere noi.

Transfer de material genetic:

Transformarea: numai 1%

transmiterea fragmentelor de ADN de la celula donatoare lizat la cea acceptoare,

Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

transmiterea de fragmente ADN artificiale/ tehnica recombinant

Exemplu: pneumococ necapsulat viu+ pneumococ capsulat mort, rezult pneumococ capsulat viu.
Astfel se transmite rezistena la antibiotice, sinteza substanelor noi.

Transducia:
transmiterea materialului genetic prin bacteriofagi temperai,
specializat- se transmit gene din vecintatea fagului integrat,
generalizat- se pot transmite gene din oricare parte a cromosomului,
conversia lizogen.
Astfel se transmit: antibiorezistena, modificri ale caracterelor biochimice, ale structurii
antigenice.

Conjugarea:

exist legturi intercelulare directe ntre celule cu sexe diferite, donor, acceptor,
necesit factorul de fertilitate, pilii sexuali,
Etapele:
1. apare un canal de conjugare,
2. prin acesta se realizeaz transferul unidirecional al materialului genetic,
3. se produce ruperea i reunirea sau copierea alternativ.
Fragmentul de cromosom transferat este n raport cu durata conjugrii. Acest proces a permis elaborarea
hrii genetice a bacteriilor.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Transformarea

Fragment ADN
liber

Transducia

Bacteriofag
temperat

Conjugarea

donor/ mascul recipient/ femel

Figur: posibiliti de transfer al materialului genetic.

Recombinarea genetic

Generalizat- ntre 2 elemente genetic omoloage, ex. doi colibacili.

Situs- specific- transfer ntre dou tulpini taxonomic diferite, ex. colibacil- alt enterobacterie.
- Elemente transpozabile:
Secvene de inserie (IS),
Transpozoni (Tn).

Infe cia
Elementele necesare:
Microorganismul,
macroorganismul,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

mediul nconjurtor

Microorganismul

Patogeneza bacteriilor = potenialul de a produce boal:

virulen: S. pneumoniae,
toxigenez: C. Tetani,
ambele: S. aureus

Virulena- individual:
comunicarea: rspndirea epidemii,
aderare, colonizare (antigene de suprafa, adhezine),
penetrare (activ, pasiv),
adaptare (om, animale, patogenitate),
poarta de intrare (1, mai multe),
colonii S-R, vrsta coloniei, capsula,
enzime: hemolizine, colagenaza, coagulaza.

Determinarea gradului de virulen:

DL 50
Condiii de modificare a virulenei- mutaii
exacerbarea:
treceri repetate pe animale sensibile,
asocierea de germeni,
transfer de material genetic,
trecerea de la om la om- epidemii.
atenuarea:
cultivarea pe medii artificiale, nepotrivite, cu dezinfectani,
expunere la factori fizici.

Toxigeneza

Exotoxinele:
- Sunt proteine specifice, termolabile,
- se pot obine pe medii de cultur,
- sunt prezente i n locuri unde bacteriile nu se pot evidenia,
- apariia efectului necesit timp de incubare,
- prezint tropism diferit, sunt foarte toxice,
- au antigenitate bun- se pot converti n vaccin,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

- speciile mai importante care le produc: Clostridium botulinum, Clostridium tetani,

Corynebacterium diphtheriae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Shigella
dysenteriae.

Endotoxinele:
sunt fosfolipido- lipoproteine termostabile,
se elibereaz la distrugerea bacteriilor Gram-negative (atg. O),
nu necesit timp de incubare, au efecte identice,
antigenitatea lor este sczut,
sunt mai puin toxice (LPS- toxicitate),
produc oc endotoxinic- flora colonului sensibilizeaz organismul.

Tabel nr.: Compararea endotoxinelor i exotoxinelor

PROPRIETI ENDOTOXINE EXOTOXINE
NATURA Lipopolizaharide Proteine
(10 kDa) (50-1000 kDa)
RELAIA CU CELULA Componenta membranei Extracelular, difuzibil
externe
DENATURAT PRIN nu da (cu excepia enterotoxinei S.
CLDUR aureus- rezist 30 minute la fierbere))
ANTIGENITATE Prezent, sczut prezent
FORMARE DE TOXOID lipsete Prezent- prin formolizare, cldur
POTENIAL sczut (>100ug) crescut (1 ug)
SPECIFICITATE sczut crescut
ACTIVITATE lipsete prezent
ENZIMATIC
PIROGENITATE prezent ocazional

Boala infecioas
Postulatele lui KOCH:
- microorganismul s fie prezent n fiecare caz de boal,
- microorganismul s poat fi obinut n cultur pur n laborator,
- microorganismul s produc aceeai boal la animalele de experien sensibile,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Pentru apariia unei boli infecioase sunt necesare:

sursa de infecie- omul bolnav sau purttorul sntos, animalul bolnav sau purttor-,
cile de transmitere
- directe:prin srut, prin placent, prin snge i preparate de snge, prin lapte matern, pe cale
sexual, prin muctur
- indirecte: prin ap, alimente, aer, sol contaminat, prin picturi de saliv, prin obiecte, mini
murdare, prin vector (activ, pasiv)
poarta de intrare- unic, multipl (piele, mucoase- ci respiratorii, aparat urogenital, tub
digestiv-).
Propagarea- unele rmn la nivelul porii de intrare, celelalte se propag prin continuitate, pe
cale hematogen, limfatic.
Stadiile bolii infecioase:
Latena,
Prodroma,
Perioada de stare- (se poate croniciza, poate determina deces),
Reconvalescena,
Vindecarea.

eliminarea agentului infecios- periodic, permanent.

Tipurile de infecii: aparent, inaparent, latent, persistent
-

Rolul macroorganismului
Rezistena natural

Pielea, mucoasele (lizozimul- N-acetil-glucozaminaza, muraminaza),

Flora normal (piele, intestin, cavitate bucal, vagin),
Factori umorali (sistemul complement- bacterioliz, RFC, sistemul de properdin, anticorpi
naturali, monocitina) RFC- reacia de fixare a complementului
Factori celulari (inflamaia, fagocitoza- PMN,MF,Mo, pinocitoza)
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Rezistena legat de specie

exist bacterii patogene numai pentru om- N. gonorrhoeae, N. meningitidis, Treponema
pallidum, C. diphtheriae, Mycobacterium leprae,

exist bacterii nepatogene pentru om- V. cholerae suis- determin cholera porcinelor, etc.

Rolul mediului nconjurtor:

Influene cosmice- meteorologice- climatice,
Influene geografice, socio- economice, etc.

Imunitatea

Imunitatea nseamn aprarea organismului de substanele, microorganismele strine provenite din

mediu sau chiar din interiorul organismului- celule tumorale- (immunis- lipsit de povar, lat.).
Clasificare:
1. imunitate nnscut,
2. imunitate dobndit- natural - activ- trecerea prin infecie aparent, inaparent
pasiv- prin placent sau prin laptele matern,
- artificial- activ- vaccinuri,
- pasiv- prin seruri antibacteriene, antitoxice.

Imunitatea nnscut este simpl, const din diferite bariere care previn ptrunderea
microorganismelor n corpul uman, precum i din reacii celulare i chimice nespecifice. Acestea s-
au descris la rezistena natural a organismului.

Imunitatea dobndit este complex, specific, prin ea organismul recunoate pericolul i

rspunde corespunztor pentru a-l neutraliza sau a-l elimina. Totodat se memorizeaz informaia,
pentru ca la urmtoarea ntlnire cu agentul reacia s fie mai rapid i mai eficient.
n cursul dezvoltrii sale, sistemul imun trebuie instruit s recunoasc propriul (self) i s
nu reacioneze cu substanele i celulele proprii- s devin tolerant (imunotoleran).
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Reacia sistemului imun trebuie s fie adecvat- rspunsul sczut la imunodeficieni

determin infecii severe, iar reacia exagerat a sistemului imun determin reacii de hipersensibilitate
sau boli autoimune.

Sistemul imun
Toate celulele sistemului imun provin din celulele hematopoietice ale mduvei osoase i ale
ficatului fetal. Liniile mieloide i limfoide se dezvolt separat. Linia limfoid se difereniaz n limfocite
T- timus dependente, limfocite B- din mduva osoas i limfocite NK (natural killer).
Celulele sistemului monocito-macrofagic prezint antigenele celulelor imune. Limfocitele B
secret anticorpi.
Limfocitele T sunt de dou feluri- celule T regulatoare helper- CD4 i celule T efectoare
citotoxice- CD8 .
Celulele T helper activeaz limfocitele B, alte celule T, celulele NK i macrofagele.
Activarea se realizeaz prin contact direct sau prin substane numite limfokine.
Celulele T efectoare distrug celulele int, cum ar fi celulele infectate cu virusuri. Exist
i celule T supresoare care opresc rspunsul imun. Ele sunt de obicei celule CD8 .

Organele limfoide
Sunt primare i secundare.
Organele limfoide primare sunt alctuite din mduva hematopoietic i timus.
Splina, ganglionii limfatici i esutul limfoid asociat membranelor (MALT) alctuiesc al
doilea grup de organe limfoide. Splina extrage din circulaie hematiile modificate i particulele
marcate cu anticorpi. Aici se produc anticorpi fa de antigenele prezente n circulaie.
Ganglionii limfatici acioneaz ca filtre pentru lichidul interstiial i concentreaz antigenele pe
care le prelucreaz celulele prezentatoare de antigen (CPA), respectiv limfocitele. Splina i
ganglionii sunt ncapsulai, iar MALT-ul este dispersat de-a lungul pasajelor, ca mucoasa cilor
respiratorii, mucoasa tubului digestiv, etc.
Limfocitele mature circul n snge, limf, organe limfoide pn cnd se ntlnesc cu
antigenul i vor fi activate de acesta.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Recunoaterea antigenului
Limfocitele T i B recunosc antigenele prin receptorii lor specifici care se leag doar de
antigenul corespunztor. Un limfocit are doar un fel de receptor, prin urmare poate lega doar un
tip de antigen. Cnd celula ntlnete antigenul corespunztor, se activeaz i se multiplic
pentru a produce un clon (grup) de celule identice capabile s neutralizeze antigenul - teoria
selectrii de clon-.
Celula T recunoate doar antigenele legate de moleculele complexului de
histocompatibilitate major (MHC) de pe suprafaa celulelor prezentatoare de antigen.
Limfocitele B se leag direct de antigen.
Complexul de histocompatibilitate major (MHC)
Pe cromosomul 6 al omului se situeaz genele care codific antigenele de
histocompatibilitate (HLA). Ele rspund pentru respingerea transplanturilor n cazul n care
donorul nu corespunde acceptorului. Rolul lor major ns este legarea antigenului prelucrat de
CPA i prezentarea acestuia limfocitelor T. Moleculele HLA sunt de dou tipuri:
1. HLA de clasa I.: HLA-A, HLA-B, HLA-C- ele se gsesc pe toate celulele nucleate
din organism,
2. HLA de clasa a II.: HLA-DQ, HLA-DR, HLA-DP- se observ pe monocite, pe
macrofage, pe limfocite T i B, pe CPA, pe unele celule epiteliale.

Fiecare individ motenete cte un ir de HLA de la ambii prini, astfel numrul lor va fi
12. Moleculele HLA pot lega un numr mare de antigene. n cursul asamblrii lor intracelulare,
moleculele HLA leag peptidele (antigene) i le transport la suprafaa celulei. Moleculele HLA
de clasa I prezint antigene limfocitelor CD8 +, iar cele HLA din clasa II limfocitelor CD4 .

Rspunsul imun
n cursul dezvoltrii fetale i n primele luni dup natere copilul este protejat pasiv prin
anticorpi materni care traverseaz placenta (IgG) i prin cei prezeni n laptele matern (IgA). La
vrsta de aproximativ 9 luni dispar anticorpii materni din organism i copilul trebuie s aib
propriul sistem imun care s lupte mpotriva agenilor patogeni.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Anticorpii:

Sunt produi de limfocitele B activate dup legarea antigenelor de receptorii acestora. Au aceeai
specificitate ca i receptorul limfocitului B care le produce. Legarea specific de antigen va determina:
neutralizarea antigenului (toxin, virus),
fagocitarea complexului antigen-anticorp dup legarea fragmentul constant (Fc) al
anticorpului de receptorul PMN,
distrugerea CPA prin sistemul complement sau prin celule NK, monocite, macrofage
sau granulocite care se leag de Fc al anticorpului.

Anticorpii au forma literei Y, i sunt alctuii din 4 lanuri: dou grele (H) i dou uoare (L),
fiecare lan are o poriune variabil (V) i una constant (C), prile V fiind rspunztoare pentru
leagarea specific a antigenului.

Fiindc anticorpii au dou pri variabile, se pot lega de dou antigene, fiind bivaleni. Locurile
specifice se numesc paratopi, iar corespunztorul acestora pe antigen este epitopul. Prile constante se
fixeaz de complement, de aceea regiunea se noteaz cu Fc (Fig.).

Fig.: Structura anticorpilor (Fab- locul legrii antigenului-paratop,

Fc- locul legrii complementului)

Cunoatem cinci clase de anticorpi: IgG, IgA, IgM, IgD i IgE. Caracterele principale ale
claselor de Ig sunt redate n tabel.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Proprietile claselor de imunoglobuline

IMUNO GREUTATE VALENA CANTITATEA ROLUL

GLOBU MOLECULAR N SER
LINA (MG/ML)
IgG 146 -170 kDa 2 13,5 Ig major n rspunsul imun
secundar (memorie),
neutralizarea toxinelor,
activarea complementului,
trecere transplacentar- apr
copilul pn la vrsta de 9 luni.
IgA 160-385 kDa 2 IgA 3, 55 Protejarea mucoaselor,
4 (IgA IgAs- protejeaz fa de
secretor) proteoliz, este prezent n saliv,
secreii broniale, colostru, lapte
matern, secreii genitourinare, tub
digestiv.
IgM 970 kDa (cel mai 5 1.5 Ig major al rspunsului imun
greu) primar,
activarea complementului
IgD 184 kDa 2 0.03 Prezent mai ales pe membrana
limfocitului B- ca receptor al
celulei B.
IgE 188 kDa 2 0.00005 Imunitate fa de helmini,
declaneaz apariia reaciilor
alergice
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Antigenul

Este o substan strin, care n urma ptrunderii n organism, declaneaz rspunsul imun din
partea acestuia. Antigenul leag anticorpii specifici.

Exist heteroantigene- provenite de la alte specii i antigene provenite de la ali reprezentani ale
aceleiai specii- izo- sau allo- antigenele, ca antigenele hematiilor, etc.

Din punct de vedere biochimic, antigenul este o protein solubil de peste 10 kDa.

i polizaharidele sau lipidele pot constitui antigene dar numai dac sunt legate de proteine.

Antigenele sunt macromolecule n suspensie coloidal, substanele care nu se descompun n

organism, ca celuloza, nu pot fi antigene.

O alt caracteristic a antigenelor este specificitatea- pot lega numai anticorpii specifici- pentru
specificitate rspund grupurile determinante numite- epitopi. Un antigen de obicei are patru valene,
nsemnnd c poate lega patru anticorpi. Dac epitopul sufer modificri, se schimb specificitatea
antigenului.

Antigenul care are greutatea molecular redus se numete hapten. Acesta poate declana
rspuns imun numai dac se fixeaz pe o protein (de exemplu penicilina este hapten).

Antigenele proteice bacteriene sunt- antigenul M al Streptococcului pyogenes, capsula Bacilului

anthracis, cilii enterobacteriilor (antigen H), exotoxinele (C. diphtheriae) i enzimele (streptolizina, etc.)
bacteriene.
Antigenele polizaharidice- constituie haptene i devin antigenice dac se leag de o protein.
Cele mai importante antigene polizaharidice bacteriene sunt: peretele celular al bacteriilor Gram-
negative (antigenul somatic O- endotoxina), respectiv n capsula bacteriilor (S. pneumoniae).

Antigenele bacteriene importante sunt:

1. exotoxinele- proteice,
2. flagelare- antigenul H,
3. capsulare- antigenul K,
4. somatice- antigenul O- de natur lipopolizaharidoproteice (LPS),
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

5. enzimele bacteriene- hemolizine, etc.

La unele bacterii epitopii antigenelor seamn i astfel pot s apar reacii ncruciate, ca la
Rickettsii i la tulpinile de Proteus OX19 . Prin urmare, antigenul de Rickettsia se poate nlocui cu
antigenul de Proteus OX19 .
Uneori propriile esuturi devin antigene- autoantigenele- fa de care se produc autoanticorpi.
Datorit declanrii rspunsului imun, esuturile devenite strine vor fi distruse, aprnd bolile
autimune. esuturile care intervin cel mai des n astfel de reacii sunt: spermatozoizii, glanda tiroid,
lentilele globilor oculari, etc.

Procesarea antigenului exogen

- nglobarea i descompunerea acestuia n endosom.

- rezult peptidele
- se leag de molecula MHC-II
- sunt purtate la suprafaa celulei pentru a fi prezentate receptorilor de pe limfocitele T
CD4- activare,
- activarea celulelor efectoare ale imunitii celulare, respectiv umorale.
- celulele B se activeaz rapid i emit semnale limfocitelor T, pe care le activeaz. Celulele
T activate se vor lega de celule B, care se transform n plasmocite i proliferndu-se se
produce cantitatea de anticorpi specifici eficient.

Distrugerea celulei int infectat cu virus se realizeaz de ctre celulele citotoxice activate chiar
de moleculele MHC-I legate de peptide strine exprimate pe suprafaa celulei int.
Reacia dintre antigen i anticorpi fiind specific, prin cunoaterea unuia se poate determina
cellalt. Acest fapt se folosete pentru identificarea bacteriilor cu seruri- anticorpi- cunoscute, sau pentru
evidenierea anticorpilor specifici din serul bolnavului, folosind antigene-bacterii-cunoscute.
Astfel de reacii sunt reaciile de aglutinare- antigenul fiind corpuscular, reaciile de precipitare-
antigenul fiind o suspensie coloidal, reacia de fixare a complementului (RFC), reacia ELISA
(enzyme- linked- imuno-sorbant-assay), etc.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Reglarea rspunsului imun se realizeaz prin celule T supresoare.

Memoria imunologic
Prima ntlnire cu un antigen strin declaneaz un rspuns lent care se intensific treptat pe
parcursul mai multor sptmni, dup care se stinge odat cu dispariia antigenului. Amintirea ntlnirii
se pstreaz n celule B i T selectate avnd o durat de via lung. Acestea vor declana un rspuns
prompt i eficient la noua ntlnire cu antigenul.

Imunitatea dobndit natural

Se poate realiza activ (postinfecios) sau pasiv (de la mam la ft-nou-nscut-sugar).

Imunitatea n infecii
Infeciile bacteriene, virale, parazitare i fungice sunt foarte rspndite. Imunitatea n infecii
ajut organismul s limiteze dezvoltarea agentului infecios i s-l elimine. Microorganismele au
elaborat o serie de strategii s evadeze rspunsului imun al gazdei. Uneori rspunsul imun exagerat
determin boal.
Imunitatea fa de bacterii se realizeaz prin:
1. lizozim care atac peptidoglicanul din peretele celulei bacteriene,
2. leucocitele polimorfonucleare atrase de proteinele bacteriene, ele fagociteaz bacteriile,
3. macrofagele activate de bacterii,
4. LPS i endotoxinele bacteriene care activeaz sistemul de complement, ceea ce determin liza
bacteriei,
5. polizaharidele bacteriilor ncapsulate activeaz celulele B care produc anticorpi,
6. prezentarea antigenului bacterian cu molecule MHC de clasa II n urma fagocitrii i descompunerii
acestuia, determin activarea celulelor T, care la rndul lor activeaz MF,
7. procesarea antigenului de celule B determin producerea de anticorpi specifici. IgG neutralizeaz
toxinele bacteriene, IgA protejeaz mucoasele, complexele imune activeaz sistemul de
complement, fagocitoza este nlesnit de opsonizarea (marcarea cu anticorpi) bacteriilor.
Strategii de evaziune ale bacteriilor
1. inhibarea fagocitozei- capsula, numai capsula opsonizat se va preta fagocitozei,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

2. bacteriile ncapsulate rezist n celul chiar dup fagocitare- Streptococcus pneumoniae,

Pseudomonas aeruginosa,
3. unele bacterii sunt capabile s distrug celula gazd- Staphylococcus aureus, Streptococcus
pyogenes, Bacillus anthracis,
4. altele supravieuiesc n MF-le inactive i pot fi distruse doar prin imunitatea celular-
Mycobacterium tuberculosis.

Rspunsul imun fa de bacterii poate fi ndreptat i mpotriva propriilor esuturi: astfel anticorpii
care apar n n tonsilite, scarlatin, infecii cu streptococii de grup A, se pot lega de esutul cardiac
activnd sistemul comlement, astfel apare febra reumatoid.
Complexele imune circulante se depun n glomerulii renali, pe membrana sinovial a articulaiilor
mari unde activeaz cascada de complement ducnd la boli ca glomerulonefrita, respectiv artrita.
Infecile persistente ale MF (tuberculoz, lepr) determin un rspuns imun celular cronic prin
eliberarea continu a antigenelor. Se acumuleaz la locul infeciei un numr mare de MF, unele dintre
ele fuzioneaz i se transform n celule gigante. ncorporarea fibroblatilor va delimita infecia, astfel
apare un granulom (tuberculom).

Imunitatea fa de virusuri:
Specificul virusurilor este c ele nu se pot replica n afara celulei gazd, iar ca s ptrund au
nevoie de receptori specifici. n urma replicrii virusului, celula gazd se poate distruge.
1. replicarea viral induce producerea de interferon (IFN) care protejeaz celulele vecine neinfectate,
2. unele virusuri - virusul Epstein- Barr- activeaz cascada de complement, rezultnd n liza celulei
afectate,
3. MF-le preiau virusurile i le distrug, unele ns supravieuiesc, chiar se replic n ele,
4. descompunerea antigenelor virale de ctre celulele B i prezentarea acestora celulelor T induce
producerea de anticorpi specifici; cele din urm se leag de epitopul antigenului prevenind aderarea
lor de receptorii celulei int. n lichidul interstiial domin anticorpii clasei IgG, n circulaia
sanguin cele IgM i pe mucoase IgA. Viruii legai de anticorpi vor fi distrui prin fagocitoz sau n
urma activrii sistemului de complement,
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

5. virusurile intracelulare sunt descompuse, iar proteinele care rezult sunt exprimate pe suprafaa
celulelor mpreun cu molecule MHC de clasa I. Ele vor activa celulele citotoxice CD8+, care vor
distruge celula gazd i vor proteja pe termen lung organismul mpotriva aceluiai virus.
6. virusurile extracelulare sunt ncorporate n MF, antigenele exprimate cu ajutorul moleculelor MHC
de clasa II vor activa limfocitele T-helper care elibereaz IFN, protejnd celulele intacte din
vecintate,
7. celulele infectate cu virus au moleculele MHC modificate ceea ce duce la distrugerea lor de ctre
celule NK (natural killer).
Strategii de evaziune ale virusurilor
Unele virusuri prezint variaii antigenice. Mutaiile punctiforme cauzeaz modificri minore-
drift-, schimbarea vast a genelor duce ns la modificri semnificative-shift- (virusul influenzei de tip
A- driftul determin epidemii, iar shiftul- pandemii).
Herpesvirusurile induc o imunitate sczut care nu este destul de eficient n procesul eliminrii
lor, ceea ce duce la exacerbri periodice ale infeciei.
Virusurile care infecteaz celulele sistemului imun, pot inhiba activitatea acestuia- virusul
Epstein-Barr (EB)- mononucleoza infecioas (celule B), virusul HIV (celule T).

Imunitatea n parazitoze
Mecanismele de aprare sunt urmtoarele:
1. paraziii unicelulari (protozoari)- plasmodiile (malaria)- activeaz MF-le care produc substane
inflamatoare,
2. protozoarii care supravieuiesc n MF- toxoplasmele- se distrug n urma activrii celulelor T-helper
care activeaz la rndul lor MF-le,
3. anticorpii IgG i IgM sunt eficieni n cazul paraziilor care sunt liberi n circulaia sanguin-
toxoplasme (toxoplasmoza), trypanosome (boala somnului) sau care se gsesc n celule ce prezint
antigene parazitare pe suprafaa lor; activarea complementului determin liza paraziilor, iar
marcarea lor cu anticorpi nlesnete fagocitoza,
4. anticorpii clasei IgE sunt deosebit de importani n helmintiaze ca trihineloza, strongiloidoza.
Antigenele prezentate de celulele B activeaz celulele T-helper, care induc producerea de IgE i de
eozinofile; IgE se leag de suprafaa celulei mastoide i de antigen, totodat determin atragerea
eozinofilelor, acestea elibereaz proteine care lezeaz cuticula helminilor.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Strategii de evaziune ale paraziilor:

Variaia antigenelor de suprafa este una dintre posibilitile folosite de Giardia lamblia. Dup
ce apar anticorpii specifici, parazitul i schimb structura antigenelor care astfel nu vor fi recunoscute.
Paraziii mai mari se acoper de antigene care mimeaz esuturile proprii, ca Ascaris lumbricoides care
se nconjoar cu o substan asemntoare colagenului uman. Unii parazii inhib rspunsul imun.
Plasmodiile elaboreaz antigene solubile care neutralizeaz anticorpii specifici i previn fagocitarea lor.
Toxoplasmele se ascund n MF fr activarea lizozomilor care le-ar distruge.
Rspunsul imun antiparazitar poate fi unul exagerat. Helmintul Ascaris lumbricoides determin
producerea mai multor feluri de anticorpi i astfel nivelul celor specifici nu atinge valoarea necesar
distrugerii lui. Totodat organismul prezint simptome alergice, ca urticaria i edemul angioneurotic.

Imunitatea n micoze
Localizarea fungilor poate fi superficial, subcutanat sau sistemic.
n funcie de localizare apare i rspunsul imun.
La perosanele cu imunitate celular intact infeciile rmn localizate, ns la cei cu deficiena
celulelor T sau a PMN-lor infecia devine cronic.
Producerea anticorpilor IgE determin reacii alergice, n cazul anticorpilor IgG apar complexe
circulante, iar unele micoze duc la apariia granuloamelor pulmonare.

Imunitatea dobndit natural pasiv

Transferul anticorpilor prin placent sau lapte matern protejeaz parial copilul. Anticorpii IgG
trec placenta i persist n copil pn la vrsta de 6 luni dup care se dezintegreaz. Anticorpii IgA se
transmit prin laptele matern protejnd copilul alimentat natural.

Imunitatea dobndit artificial Poate fi activ i pasiv.

Imunitatea activ se realizeaz cu antigene- vaccinuri- introduse n organismul sntos care i

dezvolt singur imunitatea. Se aplic cu scop preventiv i realizeaz o protecie de durat fa de
majoritatea bolilor infecioase. Se bazeaz pe apariia celulelor T i B de memorie care declaneaz un
rspuns prompt, eficient la noua ntlnire cu antigenul.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Cele mai utile n acest sens sunt vaccinurile vii coninnd microorganisme atenuate, cum ar fi
vaccinul antituberculos efectuat cu Mycobacterium bovis viu atenuat, vaccinul BCG (Bacillus Calmette-
Guerin). O singur doz de vaccin imunizeaz eficient organismul. ns acesta nu se poate aplica la
persoane imunodeficiente, prezentnd risc crescut de diseminare sistemic a microorganismelor. Alt
vaccin viu atenuat este folosit n febra enteral cauzat de Salmonella Typhi. Vaccinurile vii atenuate
sunt aplicate i cu scopul prevenirii unor infecii virale, cum ar fi parotidita epidemic, rubeola,
poliomielita etc.
Vaccinurile inactivate conin microorganisme ntregi distrui prin cldur sau fragmente de
microorganisme sau produsele lor. Deoarece acestea nu se reproduc n organism, nu declaneaz un
rspuns imun puternic, fiind nevoie de administrarea repetat a lor i de asocierea cu adjuvani. Cel mai
des aplicat adjuvant este aluminiul care realizeaz un precipitat cu proteinele din antigen ceea ce
ncetinete eliberarea antigenelor spre sistemul imun. Vaccinuri cu microorganisme distruse se aplic
pentru prevenirea anthracozei, cholerei, influenzei, tusei convulsive (Bordetella pertussis), pestei
(Yersinia pestis), rabiei, etc. Vaccinuri care conin fragmente din capsul bacterian se folosesc n cazul
Streptococcului pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae.
Toxoidele sunt elaborate din exotoxine bacteriene inactivate prin cldur sau prin tratare cu
formol. Astfel acestea i pierd patogenitatea dar i pstreaz antigenitatea. Ultima poate fi stimulat
prin combinarea cu suspensii bacteriene ce conin endotoxine. Exemplu poate fi trivaccinul Di-Per-Te,
care conine toxoid de bacil difteric i tetanic, respectiv bacteriile distruse de Bordetella pertussis.
n tabelul urmtor redm o schem de imunizare.

Tabel nr.: Schem de imunizare

VRSTA VACCIN
La natere BCG, antihepatit B (VHB)
La 2 luni Di-Per-Te, Haemophilus influenzae (Hi),VHB, poliomielit oral (Po)

La 4 luni Di-Per-Te, Hi, Po

La 6 luni Di-Per-Te, Hi,VHB
La 15 luni Parotidit, rubeol, Hi
La 4-6 ani Di-Per-Te, Po
La 10-14 ani BCG dac proba Mantoux este negativ, rubeola (numai fetelor)
La 15- 18 ani Tetanic (se repet la 10 ani), Po
Peste 50 ani Anti- Pneumococcus
Peste 65 ani Anti- Influenza
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Exist multe boli infecioase fa de care nu avem vaccinuri. Printre acestea se numr infecia
cu virusul HIV, malaria i alte parazitoze.
Nici vaccinurile existente nu dau o protecie de 100%.
Creterea eficienei se poate realiza prin folosirea adjuvanilor mai buni, cum ar fi detergenii sau
uleiul, care stimuleaz puternic att imunitatea umoral ct i cea celular n animale de experien, dar
sunt prea toxici pentru organismul uman. Dipeptidul muramic din peretele micobacteriilor stimuleaz
puternic MF-le.
Este mai util folosirea vaccinurilor pure, care conin doar componentele bacteriene, virale ce
declaneaz rspunsul imun specific. Acestea se pot elabora prin tehnici de recombinare genetic:
fragmentul de ADN rspunztor pentru codificarea componentei specifice, se intruduce ntr-o bacterie,
ciuperc, insect, etc care n urma reproducerii, va produce i componentele. Tehnica este foarte util n
cazul virusurilor care se cultiv greu. Aplicarea este realizat n cazul VHB.

Imunitatea pasiv are aplicaie n cazul unor boli infecioase grave n care organismul nu are
posibilitatea s reacioneze n timp util i de aceea trebuiesc introdui anticorpi specifici deja formai.
Se realizeaz cu seruri imune provenite de la animale sensibilizate sau de la persoane care au
trecut recent printr-o anumit boal infecioas i au o concentraie mare de anticorpi specifici (ser
hiperimun).
Dezavantajul acestei metode este c imunitatea nu este de durat, anticorpii strini
descompunndu-se rapid. De asemenea, organismul va fi sensibilizat i la noua ntlnire cu acelai ser
poate s apar o reacie de hipersensibilitate de tip I. (oc anafilactic) i III. (boala serului).
Imunizara pasiv se poate aplica i cu scop preventiv n cazul n care se suspecteaz difterie,
tetanos, botulism, anthracoz, etc.
Microbiologie farmaceutic- Barabs Enik

Hipersensibilizarea este reacia exagerat a organismului fa de un anumit antigen. Exist patru

tipuri, primele trei sunt mediate de imunitatea umoral i ultima este legat de imunitatea celular.
Reaciile de hipersensibilizare sunt redate n tabel.

Clasificarea hipersensibilitii
Tipul Manifestri clinice Mediat Efectori Sensibilizare Mecanismul de aciune
or majori
I Local- urticarie, IgE Histamina; Prin mucoasa IgE aflat pe mastocite,
(Anafilaxie) Sistemic- anafilaxie SRS-A cilor se leag de antigenul
(slow respiratorii, a specific, se elibereaz
reacting tubului histamina i SRS-A
substance- digestiv;
A) parenteral
II Anemia hemolitic a IgG Complemen Parenteral, Activarea
(Citotoxic) nou-nscutului, tcelule K prin ingerare, complementului
hemoliza (killer) transplantare determin liza celulei,
medicamentoas, celulele marcate cu
r.posttransfuzionale anticorpi sunt distrui
rejecia de celule Killer
transplanturilor,
boli autoimune
III Local: r. Arthus; lgG complexe Parenteral Activarea
(Complexe sistemic: serum antigen- (inoculare de complementului de
Imune sickness (boala anticorp, antigen sau ctre complexe
circulante) serului) complement antiser), antigen-anticorp,
; leucocite inhalare (rar) chemotactismul
PMN leucocitelor PMN,
apariia vasculitei
IV Hipersensibilitate Celule Limfokine, Parenteral, Limfokine: factorul de
(hipersensib ntrziat, de contact, T celule T prin contact, inhibarea migrrii,
ilitate citotoxicitate citotoxice prin factorul chemotactic,
mediat (respingerea de transplantare etc. determin necroz
celular) transplanturi), boli vascular; lezarea
autoimune direct a membranei
celulare