MIRELA BURCEA

MICROBIOLOGIE GENERAL
Procariote i Eucariote

EDITURA GRANADA EXIMCO BUCURETI

2002'

Pentru informaii i comenzi: EDITURA GRANADA EXIMCO,' Bucureti, sectorul 1 Str. Eremia Grigorescu nr. 22, tel.: 211.47.86

Prefa
Microbiologia este o tiin cu un pronunat caracter aplicativ. Cu toate acestea, nsuirea tehnicilor de lucru n laboratorul de microbiologie nu poate incepe nainte de cunoaterea detaliat a obiectului de studiu al acestei tiine - microorganismele. Prezentul manual ncearc o abordare didactic a ceea ce nseamn structura celulei microbiehe procariote i eucariote. Dup abordarea cronologic a principalelor evenimente care au contribuit la dezvoltarea microbiologiei ca tiin i a personalitilor care au fcut posibil evoluia ei, sunt tratate aspecte viznd obiectul de studiu al acesteia - principalele grupe de microorganisme, a cror structur este prezentat detaliat pe parcursul capitolelor urmtoare. Ilustrarea bogat cu ajutorul schemelor i a fotografiilor la microscop, prezentarea comparativ a unor elemente cu ajutorul tabelelor; faciliteaz nelegerea i nsuirea termenilor de specialitate, adesea destul de dificil de memorat, dar fr de care nu este posibil o pregtire adecvat n domeniu i formarea limbajului adecvat de specialitate. Manualul este elaborat ntr-o manier original i este binevenit n biblioteca celor care se pregtesc n domeniul tiinelor biologice sau al biologiei aplicate. El rspunde cerinelor unui nvmnt modern i este rodul muncii autorului ei n instituii de nvmnt superior din Frana, dar i din ar, unde n timpul a numeroase stagii a reuit s acumuleze competene tiinifice incontestabile, extrem de necesare elaborrii prezentei lucrri.

Biolog dr. Petrua Clina Cornea

5

1. INTRODUCERE N STUDIUL MICROBIOLOGIEI 1.1. Obiectul microbiologiei

Microbiologia este tiina care studiaz acele organisme vii care au dimensiuni foarte mici (sub Imm diametru), neputnd fi vzute cu ochiul liber, denumite organisme microscopice sau microorganisme. Din aceast categorie fac parte: bacteriile, algele, ciupercile microscopice sai ftngii, protozoarele i virusurile. Acestea din urm, dei nu se pot denumi microorganisme, sunt studiate tot n cadrul microbiologiei. Numele acestei tiine provine din limba greac: mikros = mic, bios = via, logos = discurs. Microbiologia studiaz de asemenea, i tehnicile specifice care fac posibil observarea i cunoaterea detaliat a alctuirii i dezvoltrii acestor organisme microscopice, precum i metodele de distrugere a lor. Astzi microbiologia este o tiin de mare interes. Dei a avut un debut destul de trziu, ea a cunoscut o dezvoltare extrem de rapid, situndu-se astzi printre tiinele primordiale n evoluia omenirii. Cunoaterea i exploatarea microorganismelor a adus societii numeroase avantaje: producerea pinii, berii, antibioticelor, vaccinurilor, vitaminelor, enzimelor i a multor altor produse importante. Ele stau la baza att a biotehnologiilor tradiionale ct i a celor moderne, de ultim or. Microorganismele sunt indispensabile mediului nconjurtor i permit ciclurilor carbonului, oxigenului, azotului i sulfului s funcioneze n mediul terestru i acvatic. Pe de alt parte microorganismele reprezint i cauza a numeroase probleme n societatea uman, nc de la nceputul existenei acesteia. Maladiile microbiene au jucat un rol major n evenimente istorice cum ar fi cderea imperiului roman sau cucerirea Lumii noi. n 1347, pesta sau "moartea neagr" a lovit Europa cu o

acest dezastru a schimbat cultura european i a pregtit calea Renaterii (Prescott, Harley, Klein, 1995). Astzi, microbiologii i ali cercettori continu s lupte contra altor flagele cum ar fi SIDA. 1.2 Istoria dezvoltrii microbiologici ca tiin Cteva evenimente importante au marcat descoperirea microorganismelor i implicit dezvoltarea microbiologiei ca tiin de sine stttoare (tabelul 1.1). Tabelul 1.1 Principalele evenimente care au marcat dezvoltarea microbiologiei ca tiin
Perioada
98 -55 .C 1546 1676

Evenimentul de interes pentru microbiologie

Perioada morfologic a microbiologiei -filozoful roman Lucreiu sugereaz c forme de existen invizibile provoac maladii; -medicul Girolamo Fracastoro i exprim supoziia c boli grave, deseori incurabile, sunt cauzate de organisme vii care nu pot fi vzute cu ochiul liber; -Antonie van Leeuvenhoek este prima persoan care descoper i descrie " animalculele" i trimite observaiile sale la Royal Society din Londra pentru a fi publicate (1688). El este descoperitorul microscopului i observ fermentaia anaerob, diverse protozoare, alge. Studiaz saliva uman. Perioada fiziologic a microbiologiei -Jenner introduce vaccinul contra variolei ("vrsatul de vnt"); -Schwann i Schleiden emit "Teoria celular"; -Bassi descoper o boal a viermilor de mtase produs de o specie microscopic de ciuperci; -Snow studiaz dezvoltarea unei epidemii de holer la Londra; -Pasteur demonstreaz c fermentaia zahrului la acid lactic este dat de un microorganism. El este fondatorul microbiologiei moderne. Descoper diferite boli infecioase la om i la animale, boli ale vinului i berii, anaerobioza i antibioza. Pune bazele pasteurizrii ca metod de conservare a alimentelor. -Lister public lucrarea sa asupra antisepsiei n chirurgie cu ajutorul fenolului; -Koch descoper agentul patogen al antraxului (Bacillus anthracis); -Koch introduce mediile de cultur solide n microbiologie; -Pasteur pune bazele vaccinrii contra antraxului;

1798 1838-1839 1835-1839 1849 1857

1867 1876-1877 1881

1882

1884 1885 1887 18871888

1890 1892 1895 1897 1897 1899 1900 1903 1906

1910 191.51921 1923 1928 1929 1933 1935 1937 1941 1944

1946

-Koch descoper agenii patogeni ai altor dou boli grave: tuberculoza i holera; -Lucrrile lui Koch sunt publicate pentru prima oar; -Pasteur prepar vaccinul contra turbrii; -ncepe utilizarea cutiilor Petri; -Vinogradski studiaz microbiologia solului; izoleaz i identific bacterii sulfuroase, studiaz chimiosinteza la bacteriile feruginoase; -Beijerink izoleaz din nodozitile rdcinilor de leguminoase bacterii din genurile Rhizobium i Azotobacter. -Von Behring prepar antitoxine contra difteriei i tetanosului; -Ivanovsky lanseaz ideea originii virale a bolii "mozaicul tutunului"; -Bordet descoper i definete complementul n imunologie; -Biichner prepar un extract de levuri care fermenteaz substraturile bogate n glucide, dovedind rolul enzimelor provenind din extractele levuriene n realizarea fermentaiei; -Ross demonstreaz c agentul patogen al malariei este vehiculat de ctre nari; -Beijerink demonstreaz c o particul viral este cauza bolii "mozaicul tutunului"; -Reed demonstreaz c febra galben se transmite prin intermediul narilor; -Wright descoper anticorpii din sngele animalelor imunizate; -Schaudin i Hoffmann arat c Treponema pallidum este agentul patogen al sifilisului; -Wassermann dezvolt testul de fixare a complementului pentru diagnosticarea sifilisului; ; -Ricfeetts demonstreaz c exist ageni patogeni care se transmit prin intermediul cpuelor; -Ehrlich pune bazele chimioterapiei n tratamentul sifilisului; -D'Herelle i Twort descoper virusurile bacteriilor (bacteriofagii); -Alexander Fleming descoper lizozimul; -Apare prima ediie a determinatorului de bacterii Bergey; -Griffith descoper fenomenul de transformare bacterian; -Fleming descoper penicilina; -Ruska construiete primul microscop cu transmisie; -Stanley arat structura V.M.T. (Virusul Mozaicului Tutunului). -Domagk descoper sulfamidele; -Chatton mparte microorganismele n eucariote i procariote; -Beadle i Tatum formuleaz ipoteza "o gen, o enzim". Perioada biologiei moleculare : -Avery demonstreaz c ADN este purttorul informaiei genetice n celul i responsabil de transformarea genetic a bacteriilor, fenomen evideniat anterior de Griffith; -Waksman descoper streptomicina; -Lederberg i Tatum descriu conjugarea bacterian;

lyjj
1955 1959 1961 1962 1970 1973 1975 1977

O CU C Z Y U l i c i imurusujpia tu uunuaai
-Watson i Crick propun structura n dublu helix a AND; -Jacob i Wollman descoper c factorul F este o plasmid; -Jerne i Burnet propun teoria seleciei clonale; -Yalow dezvolt tehnica de dozaj radio-imunologic; -Jacob i Monod propune modelul operonului pentru reglajul genetic la bacterii; : -Pasteur propune structura de baz a imunoglobulinei G; -Arber i Smith descoper endonucleazele de restricie; -Temin i Baltimore descoper transcriptazele la retro virusuri; -Ames dezvolt un test bacterian de detecie a agenilor mutageni i carcinogeni; -Kohler i Milstein dezvolt o tehnic pentru producerea de anticorpi monoclonali. -Lyme descoper borelioza; -Recunoaterea arheobacteriilor ca grup distinct de bacterii; -Realizarea sintezei insulinei graie tehnologiei ADN recombinant; -Dezvoltarea microscopului cu efect tunel i cu baleiaj; -Obinerea vaccinului contra hepatitei B prin tehnici de inginerie genetic; -Gech i Altman descoper ribozimele; -Montagnier i Gallo descoper virusul uman al imunodeficienei (HIV); -Mullis dezvolt tehnica de polimerizare n lan (PCR); -Primul vaccin contra hepatitei B obinut prin inginerie genetic i recunoscut ca utilizabil la om; -Primul test de terapie genic uman

1979
1980 1982

1982 -1983 1983 -1984 1986 1990

1.3 Contribuia cercettorilor microbiologiei ca tiin

romni

la

dezvoltarea

Victor Babe (1854 -1926, nscut la Viena), medic i bacteriolog, membru al Academiei Romne, este fondatorul microbiologiei romneti i autorul primului tratat de microbiologic din lume (n colaborare cu Victor Cornii, Paris, 1885). A adus contribuii remarcabile la studiul turbrii, leprei, difteriei, tuberculozei. A pus n eviden, n creierul animalelor bolnave de turbare, "corpusculii Babe - Negri", importante n diagnosticarea acestei boli. Este descoperitorul a peste 50 germeni patogeni noi i autorul a numeroase tehnici de colorare a bacteriilor i ciupercilor. Precursor n domeniul seroterapiei 10

i unui dintre primii cercettori care au remarcat fenomenul de variabilitate microbian, mai ales la bacilul difteric i la cel tuberculos. A evideniat n citoplasma unor bacterii anumite formaiuni corpusculare (granulaiile metacromatice Babe - Ernst), importante pentru diferenierea unor germeni. A studiat bacilul leprei, bacilul Koch, streptococii, diferite enterobacterii i a elaborat lucrri tiinifice valoroase despre acestea. Babe este cel care a precizat etiologia hemoglobinuriei bovinelor i a crceagului oilor, afeciuni care au fost denumite "babesioze", iar ageni patogeni au primit numele de Babesia bovis i respectiv Babesia ovis. Si~a adus contribuia la perfecionarea tehnicii propuse de Pasteur n vaccinarea antirabic, pe care a i introdus-o n Romnia. De altfel el este cel care a pus bazele seroterapiei la noi n ar. imunolog, epidemiolog, este fondatorul colii romneti moderne de imunologie i creatorul Institutului de Microbiologie din Bucureti, care i poart numele. Activitatea sa se remarc prin importante contribuii la studiu tifosului exantmatic, al tuberculozei, holerei, scarlatinei. A creeat noiunea de imunitate prin contact ("Problema imunitii la nevertebrate", 1923). A ntemeiat "Revista tiinelor medicale" i "Archives roumaines de pathologie experimentale" n rzboiul din 1913 a condus campania de combatere a epidemiei de tifos exantematic ("Marea experien romn"), Este cunoscut ca unul dintre organizatorii luptei mpotriva tuberculozei din Romnia. A publicat un numr mare de lucrri care abordeaz: virionul holerei i vaccinarea antiholeric, imunizarea activ mpotriva dizenteriei i a febrei tifoide, etiologia i patogenia scarlatinei, vaccinarea B.C.G. .a. Constantin Levaditi (1874 r 1953, nscut n Romnia i stabilit n Frana), microbiolog, virusolog i imunolog, profesor universitar la Cluj, membru al Academiei Franceze de Medicin i Membru de onoare al Academiei Romne, a fost fondatorul colii franceze de inframicrobiologie. Cteva din rezultatele muncii sale se concretizeaz prin lucrri care i aduc contribuia n domeniul cultivrii i punerii n eviden n esuturi a spirochetelor. El a introdus tratamentul cu bismut n tratarea sifilisului. mpreun cu cercettorul K.Landsteiner a elaborat studii viznd epidemiologia poliomielitei, cultivarea virusului poliomielitei pe alte celule dect cele nervoase. Aceste cercetri au creeat premizele preparrii vaccinului antipoliomielitic. Levaditi a studiat i patologia herpesului, a zonei-zoster, encefalitei letargice,

loan Cantacuzino (1863 -1934, nscut la Bucureti), microbiolog,

MiHai Ciuc (1897 - IVO/, nscut m Komamaj, proiesor universitar la Iai i la Bucureti, microbiolog, parazitolog i igienist romn, a fost un foarte activ organizator al campaniei de eradicare a malariei n Romnia, dar i peste hotare. Activitatea sa de cercetare s-a concretizat prin numeroase lucrri privind fenomenul de bacteriofagie, malarioterapie, patogenie i epidemiologie a malariei, etiologie i patologie a scarlatinei. A desfurat de asemenea, cercetri asupra rickettsiozelor, salmonelozelor, colibacilozelor. A pus n eviden, mpreun cu J.B.V.Bordet, lizogenia (1921). tefan Nicolau (1897-1967, nscut n Romnia), a fost ntemeietorul colii romneti de virologie i fondatorul institutului de profil care astzi i poart numele. Activitatea sa se remarc prin contribuiile fundamentale la studiul a numeroase boli virotice: herpesul, turbarea, febra aftoas, zona-zoster. El a introdus noiuni cum ar fi: paraimunitate, septinevrit. Cercetrile sale referitoare la hepatita epidemic au dus la izolarea virusului hepatitei epidemice sclerogene (Hepatitele inframicrobiene"). A studiat probleme de oncogenez (Cancer i virusuri"). Pentru activitatea sa tiinific a primit premiul de stat. 1.4 Importana microbiologiei pentru omenire Odat demonstrat teoria germinal a bolilor infecioase, la sfritul secolului al XlX-lea, conform creia aceste boli sunt cauzate de germeni sau microbi patogeni i nu reprezint o pedeaps a divinitilor aa cum mult vreme s-a crezut, au devenit posibile: - studierea, cultivarea i identificarea agenilor microbieni responsabili de numeroase infecii care au afectat omenirea; - aplicarea conceptului de asepsie, antisepsie i profilaxie, descoperite de Pasteur i de ali civa medici i microbiologi ai epocii. Graie cercetrilor ntreprinse, s-a ajuns la punerea la punct a unor tehnici care permit controlarea sau prevenirea transmiterii bolilor infecioase. Sterilizarea este principala aplicaie a asepsiei, termen care semnific absena total a microorganismelor dintr-un mediu sau dintr-un produs. Graie aplicrii tehnicilor de acest tip s-a observat n timp o diminuare considerabil a ratei mortalitii post-operatorii. Odat cu evoluia microbiologiei ca tiin a nceput preocuparea tot 12

mai asidu pentru salubritatea public, pentru dezvoltarea metodelor de protecie i profilaxie ca mijloace de reducere a riscului contaminrii i a apariiei unor epidemii. Imunologia este tot un rezultat al evoluiei microbiologiei. Dezvoltarea ei ca ramur a microbiologiei a fcut posibil aplicarea primelor msuri de prevenie a contaminrii persoanelor sntoase de ctre cele bolnave, prin imunizare n urma vaccinrii. De asemenea, colaborarea dintre microbiologi i chimiti a dus la producerea de substane antimicrobiene (antiseptice, dezinfectante, sulfamide, antibiotice). n zilele noastre microbiologia prezint un cvadruplu interes: medical, tiinific, industrial i tehnologic. n plan industrial, microorganismele prezint un interes economic considerabil. Pe de o parte, ele sunt utilizate n fabricarea unui numr mare de alimente extrem de diverse: pinea, brnzeturile, iaurturile, murturile, marinatele, buturile alcoolice etc., dar i pentru obinerea unor produse organice, imposibil de obinut pe alte ci tehnologice dect cu ajutorul microorganismelor: vitamine, antibiotice, hormoni, insecticide biologice, biomas proteic neconvenional etc. Cunoaterea microorganismelor i a modului n care se dezvolt acestea, fac posibil evitarea contaminrii i deprecierii materiilor prime i a produselor alimentare n timpul prelucrrii i stocrii lor etc. Este bine s cunoatem faptul c microorganismele pot deprecia i materiale ca hrtia, fierul, pielea, pe care trebuie s le protejm adecvat. n plan tiinific, ncepnd cu anul 1950, microorganismele au devenit preioase obiecte de cercetare, graie avantajelor pe care le prezint: - cultivare i manipulare simple; - multiplicare rapid ce permite studierea unui numr mare de generaii n timp scurt; - stabilitate genetic accentuat; - existen unicelular; Graie muncii cu microorganismele s-au putut acumula principalele cunotine actuale de biochimie, genetic, farmacologie. Cercetrile de microbiologic se afl la originea revoluiei biotehnologice de la sfritul secolului al XX-lea. Ca urmare a acestora, a devenit posibil gsirea unor soluii pentru numeroase probleme teoretice i aplicative:

- dezvoltarea tehnicilor ADN recombmant care permite integrarea unei gene strine ntr-un genom bacterian i astfel, obinerea n cantiti nsemnate, pe cale industrial, a unor substane greu de obinut pe alte ci; - cercetarea puterii carcinogene a unor compui chimici; - depoluarea unor medii contaminate cu produse toxice, materii organice provenind din activitile gospodreti, industriale i agricole; - valorificarea deeurilor prin producerea de suplimente alimentare pentru animale i chiar pentru om, n principal proteine neconvenionale (Single Cell Protein). - dezvoltarea unor tehnologii agricole noi, care pot reduce poluarea; de exemplu utilizarea simbiozei leguminoase-bacterii fixatoare de azot pentru eliminarea fertilizrii suplimentare cu ngrminte azotate. 1.5 Domeniile microbiologiei Lumea microorganismelor este extrem de divers, iar microorganismele se gsesc aproape peste tot. Totodat microbiologia modern este o disciplin foarte vast, cu numeroase ramuri speciale. Ea are un puternic impact asupra medicinei, agriculturii, tiinelor alimentare, ecologiei, geneticii, biochimiei etc. Microbiologia este n egal msur o tiin fundamental i aplicativ. Ea poate fi mprit n dou mari ramuri: microbiologie general i microbiologie special. Microbiologia general se ocup de morfologia i fiziologia microorganismelor pe categorii bine definite, pe cnd microbiologia special abordeaz fiecare grup taxonomic n parte (familii, genuri, specii de microorganisme). De asemenea, n ramura microbiologiilor speciale pot fi ncadrate i acele microbiologii cu un caracter aplicativ strict delimitat, cum ar fi: microbiologia medical i imunologia, microbiologia industrial, microbiologia agricol, fitopatologia, microbiologia alimentar, geomicrobiologia, microbiologia apei, a aerului etc. Microbiologii la rndul lor pot fi specialiti n anumite domenii ale microbiologiei, fiind spre exemplu: virusologi (studiaz virusurile), bacteriologi (studiaz bacteriile), algologi (studiaz algele), micologi (studiaz ciupercile) etc. De asemenea, ei pot studia probleme de citologie, fiziologie, ecologie, genetic, taxonomie microbian, biologie 14

molecular etc. Muli microbiologi lucreaz n domenii aplicative ale microbiologiei, cum ar fi microbiologia medical, microbiologie alimentar sau i mai strict, microbiologia produselor lactate. Cu ce se ocup microbiologul profesionist? Acela care lucreaz n domeniul medical trebuie s identifice agentul patogen care determin o boal infecioas Ia om sau la animal. Microbiologul din domeniul sntii publice este n legtur cu cel ce lucreaz n domeniul medical, dar el trebuie s previn mbolnvirea populaiei, controlnd starea de igien a localurilor publice, a halelor de producie alimentar, a surselor de ap ce deservesc localitile etc. Microbiologul ecologist studiaz relaiile dintre microorganisme i habitatul lor. El este interesat de contribuia microorganismelor la ciclul carbonului, al azotului, al sulfului, n sol, ap etc. Acesta studiaz totodat efectele polurii asupra microorganismelor, dar i modul n care microorganismele influeneaz aceast poluare, accentundu-i sau diminundu-i efectele. Viitorul microbiologiei este strlucit. Dezvoltarea tehnicilor ADN recombinant i a ingineriei genetice, face ca microbiologia s se dezvolte mult mai rapid azi dect n trecut. Promisiunile microbiologiei au fost foarte bine redate de microbiologul Ren Dubos: " Ct de extraordinar este c peste tot n lume, microbiologii particip astzi la activiti att de diferite ca studiul structurii unei gene, controlul unei boli, procesele industriale bazate pe capacitatea fenomenal a microorganismelor de a descompune i sintetiza molecule organice complexe. Microbiologia este una dintre profesiile cele mai gratifiante pentru c ea d practicienilor ei posibilitatea de a fi n contact cu toate tiinele naturale i de a contribui pe numeroase ci la bunstarea omenirii." (dup Prescot, Harley, Klein, 1995). 1.6 Caracteristicile fundamentale ale microorganismelor Microorganismele se deosebesc de alte entiti vii printr-un anumit numr de proprieti structurale i funcionale: tip de organizare celular caracteristic, unicelularitate, in vizibilitate cu ochiul liber, potenial metabolic specific, omniprezen i abunden.
1.6.1 Organizarea celular

Cu excepia virusurilor, toate microrganismele prezint o organizare celular. Dup cum se tie, celula este unitatea funcional a tot ceea ce este viu, capabil s funcioneze autonom, adic s se

ansamoiui aciivnaiior mtraceiuiare i extraceiuiare (autoreglare) i sa se reproduc (autoreproducie). Organizarea celular a microorganismelor prezint dou grade de complexitate, ceea ce face posibil distingerea a dou grupe de microorganisme: procariotele i eucarioteleln tabelul 1.2 sunt prezentate elementele eseniale ce fac posibil departajarea microorganismelor procariote de cele eucariote. Cei doi termeni care definesc grupele generale de microorganisme prezente n lumea vie i au originea n limba greac (caryon = nucleu). La acest cuvnt s-au adugat prefixele pro i eu care nseamn nainte, respectiv adevrat. Altfel spus, procariote = nainte de organizare nuclear i eucariote = cu nucleu adevrat. Eucariotele au o organizare celular mai complex dect procariotele, au un nucleu delimitat de o membran nuclear, cu mai muli cromozomi, fa de procariote care au un nucleu fr membran proprie i cu un singur cromozom. Microorganismele eucariote sunt unicelulare, dar adesea exist i forme pluricelulare sau constituite din filamente plurinucleate, numite coenocite. Microorganismele procariote sunt ntotdeauna unicelulare. Microorganismele eucariote, dei adesea pluricelulare coenocitice, nu prezint niciodat o difereniere sau o specializare celular, fapt ce este observat numai la organismele eucariote superioare (plante, animale). Tabelul 1.2 Caracteristicile generale ale celulei procariote i eucariote
Caracteristica Procariote
simpl aparat nuclear "nucleoid" 1 rare unicelular bacterii

Organizare celular Organizare nuclear Organite specializate Tip de organizare Grupe de microorganisme

complex nucleu adevrat delimitat de o membran numeroase unicelular,, pluricelular, coenocitic alge, fungi (ciuperci microscopice), protozoare

Eucariote

Prezentarea mai detaliat h caracteristicilor anatomice i funcionale ale celor dou tipuri dfe organizare celular prezente n lumea vie este redat sintetic n tabelul 1.3 i n figura 1.1 a i b. Dei se studiaz la microbiologie, virusurile fac parte dintr-un grup distinct. Ele nu au organizare celular, iar structura lor este rudimentar, fiind alctuite doar din dou pri 16

Corpi de

Mezozom

Nucleoid

Ribozom

incluziune

Capsul

Fig. 1.1 a Structura celulei procariote (bacterie flagelat)

Av = vacule autofagice C = centriol CH = cloroplast Ci = cil CR = cromatina DV = vacul digestiv F = microfilamente G = glicogen GA = Aparat Golgi GE, GERL, LD - picturi lipidice M = mitocondrie MT = microtubuli N = nucleu NU = nucleol P = peroxizom PL = lizozom primar PM = membran plasmatic PV = vacuole pinocitare R = ribozomi i polizomi Rb = corpi reziduali RER = reticul endopiasmic rugos SER = reticul endopiasmic neted SY - vacuole secretorii

T S ^t

Caracteristici Anatomice Peretele celular Membrana celulozic Membrana citoplasmic Membrana nuclear Nr. cromozomi

Procariote Animale prezent absent prezent absent 1 singur grup linkage (cromozom circular) ADN plasmidial gel permanent far cureni citoplasmatici subuniti de SOS i 50S libere n citoplasm absente (mezozoinii sunt . echivaleni funcional mitocondriilor) absent absent abseni absente (cromatofdre la bacterii) absente absent
. . : ~

Eucariote Vegetale prezent prezent* prezent prezent mai muli dect 1 ADN mitocondrial i cloroplastic transformri reversibile sol-gel, cureni citoplasmatici Subuniti de 40 S i 60 S asociate reticulului endoplasm ic prezente absent absent prezent prezent mai muli dect 1 ADN mitocondrial transformri reversibile sol-gel, cureni citoplasmatici Subuniti de 40S i 60S asociate reticulului endoplasmic . , prezente

ADN independent de nucleu Citoplasma

Ribozomii

Mitocondriile

Reticulul endoplasmic Aparatul Golgi: Lizozomii Cloroplastele Vacuolele Centriolul Funcionale Tipul respirator Diviziunea mitotic Diviziunea meiotic Mobilitatea

prezent prezent prezeni absente prezente prezent aerob prezent prezent -flageli sau cili compleci -micri amoeboide

prezent prezent prezeni prezente cu excepia fungilor prezente prezent aerob, fermentativ la unii fungi prezent prezent absent**

aerob, anaerob absent (fisiune binar) absent -flageli simpli (filament axial) -alunecare

* la ciuperci este prezent chitina ** unele alge i unii fungi produc celule reproductoare mobile

18

Celula procariot are o organizare simpl, iar volumul celular mai mic. Ea nu are un nucleu adevrat, delimitat de o membran. Numrul de organite specializate este foarte mic. Celula eucariot are o organizare complex, cu nucleu adevrat i numeroase organite specializate. Virusurile nu au citoplasm i nu au un sistem propriu productor de energie. Altfel spus nu au metabolism propriu, fapt ce face ca ele s fie n totalitate dependente de celula gazd n care se dezvolt. Spunem c virusurile sunt parazite obligat intracelulare. 1.6.2 Unicelularitatea i mvizibilitatea Aceste trsturi disting microorganismele de alte categorii de vieuitoare. Dac excludem cteva excepii rare, talia celui mai mare microorganism nu depete cteva sute de microni. Deci, nu poate fi vzut cu ochiul liber. 1.6.3 Talia i volumul celular Cele dou trsturi sunt variabile n funcie de specie. Procariotele sunt n medie mult mai mici dect eucariotele. Cteva exemple se pot observa n tabelul 1.4
Tabelul 1.4 Talia i volumul unor eucariote i procariote (dup J.P.Regnault, 1990) Microorganisme Eucariote Alge unicelulare gen. Micromonas Protozoare Amoeba pro teu s Paramecium caudatum Levuri Saccharomyces cerevisiae Procariote Staphyococcus aureus Escherichia coli Salmonella typhi Talia (\xm) 1 400-600 150-200 1 -30 0,5-1 0,5 - 2,5 0,5-3 Volumul mediu (im3) 5 - 15 000 10 000 -50000 20 -50

1 -5

Diametrul mediu al unei bacterii este cuprins ntre 0,5 i lmm, iar lungimea bacteriilor de form alungit (bacilii) nu depete, tn medie, 3 - 5mm. Amoeba i parameciul, eucariote unicelulare din categoria protozoarelor, msoar ntre 400 i 600 mm, n cazul primei i 150 - 200 n cazul celei de a doua.

Microorganismele i n principal bacteriile, sunt dotate cu un potenial metabolic i de reproducere considerabil. n funcie de specie, el poate s se dezvolte fie pornind de la materii minerale, fie pornind de la variate materii organice prezente n natur. Fa de alte vieuitoare, microorganismele dispun de mai multe mijloace de a-i procura energia necesar activitii lor vitale. Din cauza taliei mici i a simplitii de organizare, procariotele sunt considerate adesea forme de via primitive, inferioare. Acest punct de vedere este ns eronat. n primul rnd, raportul suprafa/volum foarte mare, le confer un avantaj considerabil, capacitatea de absorbie a elementelor nutritive fiind direct proporional cu acest raport. Urmare a acestui fapt, bacteriile au o putere metabolic infinit superioar fa de a tuturor vieuitoarelor. S-a calculat c metabolismul lor este de 2,5 milioane de ori mai intens dect cel al omului. Microorganismele i n principal procariotele, sunt dotate i cu un potenial de reproducere considerabil. De exemplu, speciei bacteriene Staphylococcus aureus i-ar trebui n jur de 2 zile pentru ca o cultur a acesteia s ajung la o mas de 6xl027g, ceea ce reprezint masa Terrei. Este de neles faptul c niciodat o astfel de cultur nu va gsi suficiente elemente nutritive pentru a menine un ritm de cretere de asemenea proporii. Comparnd microorganismele cu organismele superioare, s-a constatat c o populaie bacterian i dubleaz masa sa tot la 3 minute, ceea ce o plan face n dou sptmni i un animal n trei luni. O vac de 500kg nu produce pe zi dact 500g protein, n timp ce aceeai mas de microorganisme poate produce de la 2 la 5 tone protein n 24 ore. n prezent, utilizarea reziduurilor petroliere pentru obinerea de protein neconvenional este o practic biotehnologic frecvent practicat n rile avansate pentru suplimentarea hranei animalelor. Aceast practic se bazeaz tot pe valorificarea potenialului metabolic i dc rcproduccrc excepional al microorganismelor. Astfel, pornind de la o ton de reziduuri petroliere se poate obine peste o ton de levuri uscate sau 0,75 t protein brut, echivalentul a 1,7 t turte de soia. 20

1.6.5 Omniprezena i abundena O alt caracteristic important a microorganismelor este abundena lor. Microorganismele sunt prezente peste tot n natur: n aer, n ap, n sol, la suprafaa esuturilor animale i vegetale etc. Consecina prezenei lor pretutindeni poate nsemna pentru om, animale, plante, apariia unor boli. Contra agresiunii acestora, organismele vii i-au creat sisteme proprii de lupt i aprare prin sistemul imunitar caracteristic. mpotriva degradrii produselor alimentare de ctre microorganisme, omul a creeat procedee de conservare adecvate. Nu toate microorganismele sunt ns periculoase, omul profitnd de-a lungul anilor de existena celor utile. Deasemenea, prezena lor n biosfer este important pentru producerea de 0 2 , descompunerea i reciclarea materiilor organice, circuitul elementelor minerale etc. Prin urmare, nu trebuie s neglijm rolul ecologic determinant al microorganismelor n natur. n ceea ce privete abundena lor, microorganismele formeaz grupul de vieuitoare cel mai numeros reprezentat, cu densitatea cea mai mare. n fiecare gram de sol fertil se regsete mai mult de un miliard de microorganisme. n tubul digestiv al animalelor acest numr atinge lmiliard /ml: S-a evaluat de asemenea, c masa tuturor microorganismelor depete n biosfer pe aceea a altor categorii de vieuitoare. 1.6.6 Diversitatea lumii microbiene Lumea microbian numr n prezent peste 500 000 specii, ceea ce demonstreaz marea variabilitate natural a acestei categorii de vieuitoare, diversitate ce face dificil att clasificarea ct i studierea microorganismelor. n prezent, lumea microorganismelor este mprit de ctre specialiti n urmtoarele categorii; alge unicelulare, protozoare, micele (fungi), bacterii i virusuri. n afar de virusuri, care reprezint un grup particular, toate celelalte categorii de microorganisme se caracterizeaz prin cteva trsturi comune. Acestea sunt: - organizarea de tip celular; - metabolism propriu, independent;

In cele ce urmeaza vom trece m revista pe scurt caracterele distinctive ale grupelor enumerate mai sus (tabelul 1.5). n secolul al XII-lea Antonie Van Leeuwenhoeck evideniaz pentru prima dat marea diversitate a lumii microbiene. Mai trziu, n perioada lui Pasteur, devine posibil inventarierea diferitelor caracteristici care permit clasificarea n diferite grupe a microorganismelor. nainte de descoperirea microorganismelor, toate organismele vii erau clasificate n dou mari grupe (regnuri), clasificare fcut de ctre Linne: regnul animal i regnul vegetal. Aceast clasificare, recunoscut de ctre primii naturaliti, a fost rapid confirmat prin argumente tiinifice: - organismele animale obin energia din oxidarea materialelor organice, acumulnd substane de rezerv, grsimi sau glicogen, se mic activ, iar celula lor. este lipsit de perete celular. - organismele vegetale sunt fotosintetizante, utiliznd lumina ca surs de energie; ele sintetizeaz amidonul ca rezerv nutritiv, sunt imobile, iar celula lor posed perete celular. Dup cunoaterea i descrierea noilor forme de via descoperite odat cu descoperirea microscopului - microorganismele - ncadrarea lor n unul din cele dou regnuri, vegetal i animal, devine extrem de dificil, cu toate c unele grupe prezint trsturi care le apropie de plante, iar altele care le apropie de animale. Astfel, algele i ciupercile prezint anumite trsturi comune plantelor, ca de exemplu capacitatea de fotosintez i .prezena peretelui celular celulozic n cazul primelor i al peretelui celular chitinos al celorlalte. De asemenea, protozoarele mobile non-fotosintetizante pot fi considerate animale, dup cum indic i denumirea lor de origine greac (protos = primitiv i zoon = animal). Contrar punctelor comune ale acestor grupe de microorganisme cu lumea plantelor i a animalelor, bacteriile nu au putut fi asimilate nici uneia dintre ele. Totodat, unele microorganisme prezint simultan proprieti ale ambelor regnuri. De exemplu, specia de protozoare Euglena gracilis se caracterizeaz prin faptul c nu are membran celular celulozic ci o membran elastic. Ea are i flageli. Aceste trsturi ar putea s determine ncadrarea euglenei n categoria animalelor. Totui, ea are cloroplaste i realizeaz fotosintez, ceea ce face posibil ncadrarea ei n lumea plantelor. 22

Tabelul 1.5 Caracteristici distincte ale algelor, protozoarelor, micetelor, bacteriilor i virusurilor (dup Regnault J.P., 1990) Caracteristica Organizare celular Organizare biologic Perete celular Tip nutriional Alge Prezent Unicelulare Pluricelulare Prezena celulozei Exclusiv autotrof Prezent Protozoare Prezent Unicelulare Absent Exclusiv heterotrof Absent Micete Prezent Unicelulare coenocitice Prezena chitinei Exclusiv heterotrof Absent Bacterii Prezent Unicelulare Prezena peptidoglicanului Autotrof sau heterotrof n funcie de grup Prezent sau absent n funcie de grup Da Prezent n funcie de grup Prezent Asexuat Sciziparitate Virusuri Absent

Fotosintez

Posibiliti de cultivare n mediu sintetic Mobilitate Reproducere autonom Modul cel mai frecvent de reproducere

Da Absenta* Prezent Asexuat Fisiune binar

Da Prezent Prezent Asexuat Fisiune binar

Da Absent Prezent Asexuat Fisiune binar

Nu Absent Absent Sinteza constituenilor virali prin interme diul celulei gazd

* exist unele excepii

Pentru ieirea clin acest impas, zoologul german Ernst Haeckel propune n 1868 creearea unui al III-lea regn, acela al Protistelor, care reunete: algele unicelulare, protozoarele, fungii i bacteriile. Acest punct de vedere a fost recunoscut de cea mai mare parte a microbiologilor epocii. n 1937, Chatton propune cele dou tipuri de organizare celular n cadrul lumii vii: celula de tip eucariot i aceea de tip procariot Aceast departajare de ordin citologic a condus la divizarea lumii Protistelor n dou mari categorii: Protiste superioare sau eucariote,

albastre-verzi). Marea diversitate morfologic i fiziologic observata n rndul reprezentanilor regnului Protista a ncurajat abordarea de ctre Whittaker i Margulis n 1978 a unei noi clasificri, aceea cu 5 regnuri: Monera (Bacterii i Cyanobacterii), Protiste (Protozoare i Chrysophyte), Fungi sau Mycete (Mucegaiuri, Levuri, Ciuperci adevrate), Plante (Alge verzi, brune, roii, Bryophitae i Trachaeophytae) i Animale (Metazoare). Cele dou regnuri nou introduse de Whittaker erau iniial ncadrate n acelai grup, al plantelor, dar ele prezint 4 trsturi care le difereniaz de acesta: heterotrofia (dependena de materia organic), prezena altor constitueni chimici n peretele celular dect celuloza, organizarea celular frecvent coenocitic, modul de reproducere. Deci, criteriile fundamentale n clasificarea cu 5 regnuri au fost complexitatea organizrii celulare i tipul nutriional. Se poate observa c n acest tip de clasificare, microorganismele se regsesc n 3 regnuri: Monera, Protiste i Fungi. Totui se constat c n unele clasificri termenul de Monera nu este utilizat pentru a desemna denumirea acestui regn. De exemplu, n Manualul Bergey, ediia 1974, cel mai consacrat determinator pentru bacterii, aceste microorganisme sunt ncadrate n grupul Procariote. n ciuda opiniilor contradictorii exprimate de diveri cercettori n evoluia microbiologiei, tendina actual este aceea de a considera regnul Protiste ca fiind n exclusivitate rezervat unicelularelor, aa nct clasificarea cu 3 regnuri este Cea mai utilizat. Clasificarea fcut de Whittaker este ns de interes pentru c sugereaz anumite relaii evolutive ntre diferitele grupe descrise de acesta. Dezvoltarea noilor tehnici de biologie molecular au bulversat nc o dat clasificrile existente. Graie acestora, s-a putut constata c unele organisme care prezint o organizare celular identic pot fi distincte ca urmare a unor diferene majore de ordin molecular. Relevnd prezena unor constitueni celulari proprii unor anumite grupuri microbiene, cercetrile recente au scos la iveal diferene de nebnuit ntre procariote i au impus reconstituirea unor relaii filogenetice. Astfel, s-au lansat noi ipoteze privind evoluia vieuitoarelor i s-a stabilit c toate microorganismele unicelulare, 24

metazoarele i metaphytele descind dintr-un grup ancestral comun denumit Progenote. Prin tehnici de genetic molecular ce permit reperarea secvenelor nucleotidice identice s-au putut regsi caracteristici ancestrale ale organismelor i s~a putut demonstra ipoteza strmoului comun. ( Aplicnd o tehnic propus de C.Woese n 1990, a fost reluat chestiunea clasificrii procariotelor i a fost pus n dubiu pertinena regnului Monera ca unitate ce regrupeaz aceast categorie de organisme. Cercetrile lui Woese demonstreaz existena a 2 grupuri distincte de procariote: Arheobacteriile, de la grecescul arheos care nseamn vechi i Eubacteriile de la eu care nseamn adevrat n aceeai limb. Astzi se consider c exist 3 linii diferite de microorganisme: Arheobacteriile, Eubacteriile i microorganismele eucariote (tabelul 1.6) ce se difereniaz ntre ele printr-un anumit numr de caracteristici moleculare ce se repet i care vizeaz: - natura constituenilor peretelui celular; - tipul de lipide prezente n membrane; -prezena sau absena unor anumite baze azotate n acizii nucleici; - natura pigmenilor fotosintetici; Arheobacteriile Acestea se disting de eubacterii prin diferite caracteristici biochimice, n principal prin natura constituenilor peretelui celular. Astfel, peretele celular al arheobacteriilor conine substane bogate n proteine, n timp ce peretele celular al eubacteriilor este constituit din peptidoglican, o substan care se regsete doar la acestea. n categoria arheobacteriilor se includ: bacteriile termoacidofile, bacteriile halofile i bacteriile metanogene. Ele se disting unele de altele prin caracteristici biochimice i ecologice specifice care explic adaptarea acestora la condiiile de via tipice unor ere ndeprtate, cnd mediul n care triau era bogat n metan i sruri, iar temperatura era ridicat. Bacteriile termoacidofile nu se pot dezvolta dect n medii cu temperatur ridicat i foarte acide (80C, pH sub 2). Asemenea bacterii se mai gsesc astzi n surse termale de ap. Genul Sulfobolus este un exemplu de bacterie termoacidofil i poate fi izolat din izvoare termale sulfuroase. Bacteriile halofile se pot ntlni n apele srate ale oceanelor (salinitatea apei este de 3,5%), dar i n Marea Moart, unde

Bacteriile metanogene sunt foarte rspndite n natur. Ele sunt acelea care produc metanul. Ele se dezvolt n medii srace n oxigen i bogate n hidrogen i gaz carbonic: n ape stagnante, n staii de epurare a apelor, n intestinul unor animale. Graie capacitii lor de a reduce gazul carbonic la metan, aceast grup de microorganisme a fost cea mai adaptat n atmosfera bogat n gaz carbonic i hidrogen i srac n oxigen a nceputului vieii pe pmnt. Un gen al acestui grup de arheobacterii este Methanobacterium. Pn n prezent se cunosc destul de puine detalii referitoare la evoluia acestor 3 grupe de arheobacterii, dar se presupune c, cel mai vechi grup este acela al bacteriilor metanogene din care a descins cel al halofilelor, termoacidofilele dezvoltndu-se complet separat.
Tabelul 1.6 Caractere discriminatorii ntre arheobacterii, eubacterii i eucariote Caracteristici Talia (L) Peretele celular Arheobacterii 1 um -diveri constitueni -niciodat acid muramic -n lanuri ramificate cu legturi esterice absent 1 Timidine absente 30S, SOS 1500 nucleotide 2900 nucleotide
abseni

Eubacterii lfim -acidul muramic este ntotdeauna prezent ca i peptidoglicanul -n lanuri drepte cu legturi esterice absent 1 Timidine absente n general 30S,50S 1500 nucleotide 2900 nucleotide
prezeni

Lipidele membranare i Membran nuclear Cromozomi ARN de transfer Ribozomi (talia subunitilor) Lungimea ARN ribozomal 16S Lungimea ARN ribozomal 23 S
Flageli

Eucariote lO^im -fr perete celular (eucariotele animale) -perete celular fr peptidoglican (eucariotele vegetale) -n lanuri drepte cu legturi esterice prezent ntotdeauna mai muli Timidine prezente n general 40S} 60S 1800 nucleotide 3500 nucleotide i mai multe
prezeni

Pigmeni fotosintetici ! Diviziunea ; celular

bacteriorodopsine Fisiune binar

bacterioclorofile Fisiune binar

Clorofile, carotenoide Mitoz, meioz

26

Eubacteriile , n acest grup se ncadreaz bacteriile care se disting de arheobacterii prin cteva caracteristici anatomice i biochimice, dup cum s-a vzut n tabelul 1.6. Aici se includ cyanobacteriile sau algele albastre-verzi, bacteriile fotosintetizante roii i cele verzi, spirochetele i bacteriile comune. Cyanobacteriile, bacteriile fotosintetizante roii i cele verzi se disting n principal de bacteriile din alte grupuri prin faptul c ele conin pigmeni fotosintetizani cu ajutorul crora transform energia solar n energie util activitii celulare. Trebuie semnalat faptul c fotosinteza realizat de bacteriile fotosintetice roii i verzi este diferit de cea a cyanobacteriilor i plantelor pentru c la prima categorie procesul se realizeaz n anaerobioz, pe cnd la cele din urm, n aerobioz. Cyanobacteriile se ntlnesc n numeroase ape dulci i marine. Genuri reprezentative: Anaboena, Nostoc etc. Spirochetele se deosebesc de alte bacterii prin forma lor spiralat, peretele celular flexibil i modul de locomoie particular. Ele se deplaseaz cu ajutorul unui filament axial situat n interiorul celulei ceea ce imprim ntregii celule o micare rapid de rotaie. Unele spirochete triesc n medii naturale: sol, ape dulci, oceanice, n timp ce altele triesc sub form parazit n esuturile omului i ale animalelor. Este cazul genurilor Treponema, Borrelia, Leptospira. Bacteriile comune formeaz o lume extrem de vast i de divers. Ele se caracterizeaz prin unicelularitate, printr-un perete celular rigid, bogat n acid muramic, un compus al peptidoglicanului. Unele specii au mijloace specifice de deplasare. Ele nu sunt fotosintetizante. Un numr mare de specii se regsesc n medii naturale, altele colonizeaz pielea, mucoasele animalelor, ale omului sau triesc pe suprafaa plantelor. Se constat c diferitele grupe de eubacterii se difereniaz ntre ele prin numeroase caractere. Figura 1.2 ilustreaz locul microorganismelor pe scara evolutiv a lumii vii, dup observaiile fcute de C. Woese.

Fig. 1.2 - Locui microorganismelor n lumea vie (Schem - J.P.Regnault, dup observaiile lui C.Woese)

1.6.7 Locul virusurilor n lumea microbian Am constatat c toate clasificrile abordate, referitoare la poziia microorganismelor n lumea vie, nu in seama de existena virusurilor. Aceasta se datoareaz faptului c ele ocup un loc aparte n lumea microbian. Din punct de vedere al organizrii lor, acestea nu pot fi considerate microorganisme, fiind situate mult sub cele mai simple bacterii. ntre eubacterii i virusuri se afl totui microorganisme care pot fi considerate intermediare ntre cele dou. Ele sunt: micoplasmele, rickettsiile i chlamidiile, care dei au o organizare celular procariot ca i eubacteriile, nu prezint toate trsturile tipic bacteriene, apropiindu-se adesea de lumea virusurilor. Totui, majoritatea trsturilor acestor grupuri de microorganisme nu permit ncadrarea lor n lumea virusurilor, ci a bacteriilor (tabelul 1.7). 28

i,.

Tabelul 1.7

Comparaie ntre eubacterii, mycoplasme, rickettsii, chlamidii i virusuri

v

\Caracteristica

Categorial, microbiologic

Prezena simultan ADN, ARN

^x^
-

Prezena peretelui celular

Reproducerea prin fisiune binar + +

Prezena unui sistem generator de energie

Parazitism obligat intraceluiar

+

Virusuri Rickettsii Chlamidii Mycoplasme Eubacterii

+ + +

+
+ +

_
-

- absent; + prezent

Mycoplasmele sunt, fa de celelalte categorii n discuie, singurele care nu au un perete celular. Se constat c Eubacteriile i Mycoplasmele au un sistem propriu productor de energie, ceea ce face posibil cultivarea lor pe medii de cultur n laborator. Opus acestora, Rickettziile i Chlamidiile nu pot efectua propria lor biosintez, pentru c sunt lipsite de cea mai mare parte a enzimelor responsabile de aceast activitate. Ele trebuie deci, s apeleze la metabolismul celulei pe care o paraziteaz. Eubacteriile i Mycoplasmele sunt parazite extracelulare, n timp ce Rickettziile i Chlamidiile sunt parazite obligat intracelulare. Aceast dependen de celula gazd face ca ele s nu poat fi cultivate dect "in vivo", la fel ca i virusurile, pe culturi de esuturi sau celule, n animale de laborator vii, n ou embrionate. Ea se datoreaz simplitii genomului acestor dou categorii de bacterii. Spre exemplu, genomul Chlamidiilor nu conine dect 10% din ADN regsit la eubacterii. Virusurile nu au nici ele im echipament enzimatic propriu i nu pot tri autonom, fiind de asemenea, parazite obligat intracelulare. Cu toate acestea, nu putem spune despre virusuri c sunt simple structuri moleculare autoreproductibile, deoarece structura lor fizico-chimic prezint un grad de organizare superior. n plus, virusurile sunt capabile de continuitate genetic, o caracteristic fundamental a viului. Astzi virusurile nu mai pot fi considerate cele mai simple forme de organizare, acestea fiind viroizii i prionii, despre care vom vorbi la momentul potrivit. Se cunoate n prezent faptul c viroizii sunt formai dintr-o molecul de ARN de 10 ori mai mic dect cel mai mic virus. Prionii sunt formai, la rndul lor, dintr-o molecul de ARN de 100 de ori mai mic dect cel mai mic virus. Ei produc maladii grave. Boala

bolnave. Maladia Creutzfeldt-Jacob este cauzat de un pnon i se caracterizeaz, de asemenea; prin afectarea progresiv i iremediabil a sistemului nervos central.

i>
:

oj itu F i > > i-Tr. ii

- < r .t f

a M^'t JL>: >

r ' v-

v
. ^

'
.

;^*

tS> fj..-' . ; " ' : .; - : ir;,"'-*1. * .. -.v'Of ma ! ' " . - .{, ; - : a M rf .. ' V "

* ;.

Vv

"'- a.

' a

, ' '-T; 1 * r ' i*ii l O v i ^ ^ ^ O , . " '

.

-i ' , .. ' '

v* : : <r
1

, .v -r f - -*;r . . . * *
w .

i i

st\

' * .

'-

.._r?.

..ii,

T'
t . ^

- " ,,
: " ; - :/

^o

' i

: r

30

2. MICROORGANISME PROCARIOTE ANATOMIA CELULEI BACTERIENE

Dup cum am vzut n capitolul precedent, procariotele formeaz un grup vast compus din dou subgrupe: cel al Arheobacteriilor i cz 1 al Eubacteriilor. Bacteriile reprezint grupul cel mai important de microorganisme att din punct de vedere al numrului de reprezentani ct i al importanei ecologice i practice pentru om. n plan teoretic, nelegerea celei mai mari pri a fenomenelor biochimice i de biologie molecular se datoreaiz cercetrii bacteriilor. n prezentul capitol vom aborda problemele referitoare la talia, forma, organizarea i funcionarea celulei bacteriene. Deoarece importana practic a arheobacteriilor este mai restrns, ele nefiind implicate n domeniile medical i tehnologic, ne vom ocupa n cele ce urmeaz cu precdere de grupul eubacteriilor. 2.1 Talia, forma i gruparea bacteriilor 2.1.1 Talia bacteriilor Trebuie s subliniem de la nceput faptul c bacteriile au o talie redus, de 100 de ori mai mic dect aceea a celulei eucariote. Dimensiunea celulei bacteriene este totui variabil n funcie de specie, fiind o caracteristic determinat genetic. Cele mai mici bacterii pot avea un diametru de aproximativ 100 - 200nm. Este vorba despre specii aparinnd genului Mycoplasma care au talia apropiat de aceea a celor mai mari virusuri (Poxvirusurile). Unele bacterii pot avea o talie destul de mare. Astfel, unele Spirochete pot atinge chiar 500|iim lungime. La fel, Cyanobacterii ale genului Oscillatoria, au n jur de 7jam diametru, adic acelai diametru pe care l are o globul roie. Specia E. coli este considerat o bacterie de talie medie, avnd dimensiunile cuprinse ntre 1,1 - l,5jam lime i 2 - 6\xm lungime.

Diametrul aproximativ (lime x lungime n nm 5,4 ori diametrul bacteriei E,coli prezentate dedesupt

Oscillatoria Globul roie

7.000

E. coli

1.300x4.000

llllpr
IIP-

Rickettsie

475

Poxvirus Virusul gripei Bacteriofagul T2 E.coli Virusul mozaicului tutunului Virusul poliomielitei

230x320 85 65x95 65x95 27

Fig. 2.1 - Talia bacteriilor n comparaie cu aceea a globulei roii i a virusurilor

2.1,2 Principalele tipuri morfologice de bacterii Forma celulei bacteriene este, la fel ca i dimensiunile ei, o caracteristic determinat genetic, deci stabil intraspecific. Exist ns i numeroase specii care se aseamn ntre ele, att n ceea ce privete forma, ct i dimensiunile, lucru explicabil la un grup de vieuitoare att de mici i simple cum sunt bacteriile. Cu toate acestea, dup cum vom vedea n cele ce urmeaz, n lumea bacteriilor exist o mare diversitate n ceea ce privete forma. 32

Principalele tipuri i subtipuri morfologice de bacterii Tipul morfologic Bacteriile sferice sau cocii gr. kokkos smn Subtipol morfologie Coci simpli (Micrococi) Dplococi gr. dipJos - dublu Caracteristici Bacterii sferice izolate Aspect microscopic ANEXA i ANEXA 1

Tabelul 2A Cxempfe Micrococcus aureus Diplococcitspneumoniae

Rezult prin diviziunea cocilor dup un singur plan, urmat de meninerea mpreun a celulelor fiice, sub form de perechi. Exist dplococi care se abat de la forma sferic perfect: -bacteriile "flacr de lumnare" -bacteriile "reniforme" sau "boabe de cafea'4 Rezulta prin diviziunea repetat a cocilor Streptococi gr. streptos mpletit dup un singur plan, urmat de meninerea. mpreun. nlnuite, a celulelor fiice Rezult prin diviziunea cocilor dup 2 Tetracoci planuri perpendiculare unul pe altul, sau coci grupai n urmat de formarea unui grup de 4 celule tetrade numite tetrade care se menin mpreun Sarcina Rezult prin diviziunea cocilor dup 3 planuri perpendiculare unele pe altele, urmat de formarea unor grupri cubice de cte 8 - 1 6 celule Rezult prin diviziunea cocilor dup mai Staflococi multe planuri succesive neregulate, gr. siaphUos urmat de formarea unor grupri ciorchine asemntoare unor ciorchini Diviziunea repetat a cocilor urmat de Lampropedia formarea unor aglomerri de 16 - 32 - 64 celule dispuse ntr-un singur plan, asemeni unor "tablete" rectangulare

ANEXA 1

Gen Piieum ococcus Gonococcus; Metiingococcus. Slreplococcusfaecalis

ANEXA 1

Mycr ococcus tei rage nes

A N E X A 3.

Sarcinafa/va

ANEXA i

Slaphylococcus

aureus

ANEXA i

Tximpropeda

hyaina

Bacteriile cilindrice sau bacili gr.bacillus = baston a

Drepte Simplft cu capete rotunjite Diplobacili cu capetele rotunjite Streprobacili cu capete rotunjite -grupai n palsad sau gard -grupai n rozet sau stea Bacili cu capete retezate Bacili cu capete ascuite sau fusiformi Bacili cu capete umflate (forma de haltere, os sau mciuc) Curbate virgul sau vibrion Spirilii Spirochetele Treponemele Leptospirele

Bacili izolai care au form cilindric tipic i capetele rotunjite Bacili grupai n perechi, unii prin extremitile lor Bacili nlnuii, unii prin extremitile lor Bacili nlnuii, unii pe lungime Bacili care formeaz lanuri scurte ce se reunesc n capete sub forma de stea sau rozet Pot fi nlnuii sau izoat Bacili simpli sau nlnuii, fusiformi Bacili simpli sau nlnuii, umflai la capete Bacili curbai de forma unei virgule Bacili spiralai care formeaz ture rigide (nu revin complet la forma dreapt n timpul deplasrii) Bacili spiralai care formeaz ture flexibile, (lungime de 30 - 500pm) Bacili spiralai care formeaz ture flexibile (lungime max. 15pm) Bacili spiralai care formeaz ture flexibile i au extremitile n form de crlig (lungime 5 - lOpm) Bacterii filamentoase, asemntoare miceliului fungic

ANEXA 1 ANEXA I ANEXA 1

Eschericha coti Listetia monocyiogenes

BaciUus rmgater ium

Agrobacter'mm tnmefaciens

ANEXAI ANEXA I

Pusobacieritm

fiisifom

ANEXA 1 ANEXA I ANEXAI ANEXA 1 ANEXAI

Vibrio cholerae Spirillum volutam

Bacterii spiralate lat. spira spiral

Cristispira sp. Treponema Lepiospira pallkhitn interrogan

Bacterii filamentoase

Fig.

Or&

Acimomycetalei

Bacterii p t r a t e Bacterii care formeaz filamente Bacterii care formeaz apendici Bacterii cu triclioame P r ostecate -pedunculate

Bacterii cu aspect ptrat, reunite cte 6 - 8 Bacterii care formeaz filamente multicelulare unise riale. Nu trebuie confundate cu Actinomyceteie Bacterii care prezint apendici celulari semi rigizi Apendicele are forma unui peduncul ce se termin cu un crampon de fixare Apendicele are forma unui mugure mai mic dect celula Bacterii care prezint, apendici "fali", provenind din sub stan te secretate d e celule. Ele nu au perete celular

ANEXAI ANEXA 2 ANEXA 2 gen. Txzptothrbc Beggicrtoa Gen Caulobacler .

-cu nmugurire Cu apendice aeeiular

ANEXA 2

Galfioneliafermginea

bacterii filamentoase, bacterii ptrate i unele tipuri particulare. In cadrul fiecrui tip morfologic exist ns o anumit variabilitate care face posibil mprirea acestora n subtipuri. n tabelul 2.1 sunt prezentate principalele tipuri i subtipuri morfologice de bacterii. 2.1.3 Morfologia bacterian, o strategie de adaptare Principalele aspecte morfologice ale bacteriilor, abordate n subcapitolele precedente corespund unei imagini simplificate a realitii. Ele sunt rezultatul observaiilor fcute asupra unor culturi de laborator cu cretere maxim i nu in seama de extraordinara diversitate morfologic manifestat de ctre bacterii n cursul ciclului lor de dezvoltare n mediul natural acvatic, terestru etc. i care de cele mai multe ori exprim o strategie de supravieuire. Astfel, exist bacterii care sunt amorfe, ovoidale, cubice, n stea, filamentoase, ramificate, pedunculate etc. Ele pot fi grupate, aa cum am vzut, n perechi, grmezi, lanuri, rozete sau palisade. Diversitatea formelor i a modurilor de grupare ale celulelor bacteriene pot fi explicate prin unele funcii. Din acest punct de vedere, raportul suprafa/volum (S/V) la celula bacterian joac un rol major. Bacteria sferic este acea care prezint raportul S/V cel mai mic. Acest raport crete cu ct celula se lungete i se subiaz. Se poate deduce c n condiii de abunden n nutrieni, bacteriile de form sferic, deci cu un raport S/V sczut, pot fi avantajate. Opus acestui caz, ntr-un mediu srac n materii organice, bacteriile n form de bastona, cu o suprafa mai mare, vor putea mai uor capta elementele nutritive dispersate. Este de asemenea, uor de neles faptul c forma bacteriilor traduce i proprietile hidrodinamice optime pentru anumite grupe adaptate mediului de via acvatic. Bacteriile mobile sunt frecvent sferice. Cele adaptate la deplasarea prin alunecare sunt mai adesea bacilare. Formele spiralate caracteristice leptospirelor pot fi pentru acest grup de microorganisme mijloace eficace de deplasare n medii relativ vscoase. Este prin urmare evident, c marea variabilitate a formei bacteriilor corespunde adaptrii fiecreia dintre acestea unei nie ecologice specifice.

36

22 Organizarea celulei bacteriene Celula bacterian prezint elemente structurale obligatorii, existente la toate speciile i diferite structuri particulare prezente numai la anumite specii n tabelul 2.2 i fig. 1.1a sunt prezentate principalele structuri obligatorii i facultative ale celulei bacteriene, precum i principalele funcii ndeplinite de acestea.
Tabelul 2.2 Principalele elemente structurale ale celulei bacteriene i funciile acestora Elemente structurale Obligatorii Peretele celular Membrana plasmatic i mezozomii Spaiul periplasmic Funcii -asigur meninerea formei caracteristice a celulei i o protejeaz de liza n medii hipotonice -barier cu permeabilitate selectiv, limit mecanic a celulei, transport de elemente nutritive i de deeuri, localizarea mai multor procese metabolice (respiraie, fotosintez etc.), detectarea semnalelor din mediu n manifestarea fenomenelor de chimiotactism -locul de transformare al nutrienilor cu ajutorul enzimelor hidrolitice i al proteinelor de legare care se sintetizeaz aici -gel coloidal permanent care menine integritatea nucleoidului (masei nucleare) -sediul organitelor i al incluziunilor celulare -utile n flotarea bacteriilor n mediul acvatic -granule cu rol de rezerve de carbon, fosfor i alte substane cu rol nutritiv -sinteza proteic / -sediul materialului genetic (ADN) -rezisten la fagocitoz -mobilitate : > -conjugarea bacterian i aderarea la diverse suprafee -supravieuire n condiii extreme de mediu (numai la bacteriile sporogene) -elemente genetice extracromozomale

Citoplasma

Vacuolele gazoase Corpii de incluziune Ribozomii Nucleoidul Facultative Capsula i stratul mucoid Flagelii i cilii Pilii i fimbriile Endosporul Plasmidele

2.2.1 Peretele celular Peretele celular este, din mai multe puncte de vedere, una dintre cele mai importante pri ale celulei bacteriene. n afar de mycoplasme i de cteva arheobacterii, cea mai mare parte a bacteriilor

puterea patogen a acestora. Peretele celular poate proteja, de asemenea, celula bacterian contra substanelor toxice. El este totodat locul de aciune al mai multor antibiotice. Aceast structur anatomic bacterian este un complex de membrane i macromolecuie asociate. In funcie de mediul de via n care triesc, diferite grupe de bacterii prezint un perete celular cu funcii i structuri diferite, ca urmare a necesitilor adaptative caracteristice. Astfel, o bacterie parazit obligat intracelular nu are nevoie de un perete celular rigid pentru a se proteja de ocurile osmotice sau pentru a se apra de mecanismele de aprare extracelulare. El trebuie, din potriv, s reziste substanelor antibacteriene elaborate n veziculele lizozomale. O bacterie ce triete n mediul acvatic, va trebui s reziste unei presiuni mai mari care se exercit asupra citoplasmei. Totodat ea trebuie s aib mijloace adecvate de fixare pe un anumit suport pentru a avea condiiile necesare multiplicrii i colonizrii zonei. n medii extreme, bacteriile sau arheobacteriile trebuie s fac fa unor condiii de pH, temperatur, osmolaritate (presiune osmotic) specifice, mari sau mici. Pe baza unei coloraii puse la punct de Christian Gram (medic de origine danez), n 1884, a devenit posibil mprirea bacteriilor n dou grupe majore, n funcie de caracteristicile structurale ale peretelui celular: bacterii gram +, ce se coloreaz n violet nchis i bacterii gram ce se coloreaz n roz-rou. Diferena structural ntre peretele celular al celor dou grupe de bacterii a fost descoperit graie microscopului electronic. Astfel, peretele celular al bacteriilor gram+ este format dintr-un singur strat omogen de peptidoglican sau murein cu o grosime de 20-80fim, ce se gsete la exteriorul membranei plasmatice (fig. 2.2). Peretele celular al bacteriilor gram- este mai complex. El conine un strat de peptidoglican de l-3^im grosime, nconjurat de o membran extern de 7-8jj,m. La microscopul electronic se observ ntre membrana plasmatic i membrana extern a bacteriilor gram-, un spaiu care se numete periplasm sau spaiu periplasmic. S-a artat recent c spaiul periplasmic ar putea fi umplut de o reea lax de peptidoglican. Se pare totui c acest spaiu este de fapt format dintr-un gel i nu dintr-un fluid. Dimensiunea spaiului periplasmic la bacteriile Gram- variaz 38

membran citoplasmic pept>doglicon perete 4 celular

membran . citoplasmic i,uu uiii'MfU*- J - i ww r tW i -periplasm - peptidoglican -lipop.olizaharide . lipoproteine

Fig. 2.2 - Prezentarea schematic a ultrastructurii peretelui celular al bacteriilor Gram-f (stnga) i Gram-(dreapta)

ntre 1 i 71|iim. Studiile recente indic faptul c el poate constitui 20 40% din volumul celular total, dar se cerceteaz n continuare acest aspect pentru a se obine date mult mai precise. Spaiul periplasmic al bacteriilor Gram- conine numeroase proteine periplasmice care particip la nutriia celulei. Bacteriile Garm+ nu au asemenea proteine. Ele excret enzime care se numesc exoeimme. Numeroi cercettori clasific bacteriile dup structura peretelui celular n urmtoarele grupe: - Firmacixtes (lat. firmus = tare; cutis = piele) n aceast categorie intr bacteriile gram-f cu perete celular gros i deci, lipsite de membran extern. - Gracilicutes (lat. gracilis = subire) Aici se pot ncadra bacteriile gram- cu perete celular subire i cu membran extern. - Mollicutes (lat. mollis = moale) Acestea sunt bacterii lipsite de perete celular sau cu perete celular neuniform, defectuos, cum este cazul Mycoplasmelor i al formelor "I/V Dup aceast vedere de ansamblu asupra structurii peretelui celular al bacteriilor gram-f i gram-, vom trece la detalierea acestor aspecte.

excepia arheobacteriilor prezint n peretel 3 celular un complement de natur polimeric, denumit peptidoglican, care asigur soliditatea i rigiditatea acestui element structural al celulei. Peptidoglicanul sau mureina este format din mai multe subuniti unite ntre ele. Polimerul este format din doi derivai glucidici: Nacetilglucozamina i acidul N-acetilmuramic (un ester lactic al Nacetilglucozaminei), De asemenea, acesta mai conine i 4 sau 5 acizi aminai diferii, n funcie de specie. Compoziia unei subuniti a peptidoglicanului, tipic majoritii speciilor bacteriene gram+ i gram-, este prezentat n fig. 2.3.
N A V i C H O H 2 N A G H ch3 NH-C=0

A oK A" k H H Vj * 0-j /OH H\J HH H

NH~C = 0 CKOH HaC-CH-C = 0 N H
CHS Acid D-!actic

i I CH3C H I c=o 1 N H I

L- alanin

.C H C= O 2 H CC H Z IOOH C N H

D-aanin

H Acid HC (CH2)3 C HC O O

C=0

I I

mezo-diaminopimeiic

NH,

H c CH3 D-Alanine

I I c=o I X

N H

Conectare la o punte interpeptidic sau la acidul diaminopimelic al unei alte tetrapeptide

Fig. 2.3 - Compoziia unei subuniti peptidoglicanice

40

Scheletul acestui polimer este constituit din reziduuri de N-acetilglucozamin i de acid N-acetil muramic, dispuse alternativ, O tetrapeptid constituit din acizi aminai L alternnd cu acizi aminai D, este legat la grupul carboxil al acidului N-acetil muramic. Multe bacterii posed un alt acid diaminat, de regul L-Uzina, n poziia 3, n locul acidului mezo-diaminopimelic (fig. 2.4). Lanurile de peptiduglican sunt reunite ntre ele prin legturi interpeptidice. Adesea, grupul carboxil al D-alaninei terminale este direct legat la grupul aminat al acidului diaminopimelic. n unele cazuri legtura se face printr-o punte interpeptidic (fig. 2.4)

Acid N-acetilmuramiriic

N-aceti!gIucosamin

lant peptidic Pentaglioina punii interpeptidice

Fig. 2 . 4 - Segment de peptidoglican artnd lanurile polizaharidice, lanurile laterale tetrapeptidice i punile interpeptidice.

2,2.1.1 Peretele celular al bacteriilor Gram+ (fig. 2.5) Peretele celular omogen i de grosime redus al bacteriilor gram-f este constituit n principal din peptidoglican (90% din totalul constituenilor) i alte categorii de compui, abseni la bacteriile gram. Dintre acetia: acizii teichoici, acizii aminai .a. Diferitele categorii de bacterii se caracterizeaz prin prezena cu precdere a unor anumii constitueni, dup cum vom vedea n cele ce urmeaz: - acizii teichoici preponderent la pneumococi;

- proteinele M la streptococii din grupa A, bine cunoscui prin proprietile lor antigenice i efectul lor patogen. Acizii teichoici, aflai n cantitatea cea mai mare dup peptidoglican, sunt polimeri de glicerol sau de ribitol reunii prin grupri fosfat. Aceti acizi sunt conectai fie la peptidoglican, fie la lipidele membranei plasmatice. n acest ultim caz ei se numesc acizi UpoteichoicL Acizii teichoici ader la suprafaa peptidoglicanului i sunt ncrcai negativ, dnd pereteleui celular al bacteriilor gram-f ncrctur negativ. Funciile acestor molecule sunt nc necunoscute, dar ele sunt importante pentru meninerea structurii peretelui celular. Bacteriile gram- sunt lipsite de acizi teichoici.
Acizi lipolichoici Acizi teichoici

Fig. 2.5 - nveliul celular al bacteriilor Gram+

2.2.1.2 Peretele celular al bacteriilor GramExaminnd figura 2.6 care prezint structura peretelui celular al bacteriilor gram-, constatm c aceasta este mult mai complex dect aceea a peretelui celular al bacteriilor gram-f-, prezentat n figura 2.5. 42

Lanuri laterale

Porine

Lipoproteine Brun,

Lipopolizaharide Membran extern

Spaiu periplasmic i peptidoglicon

Fosfoipide \ Peptidoglicon Proteine intrinsece

Membran plasmic

Fig. 2.6 - nveliul celular al bacteriilor Gram-

Dou caracteristici de baz permit diferenierea bacteriilor gramde cele gram-f, lund n considerare peretele lor celular: - proporia crescut de lipide; - prezena a 3 straturi de compoziie chimic diferit. n timp ce la bacteriile gram+ proporia de lipide nu depete 4%, la cele gram- ea atinge valori cuprinse ntre 11 i 22%. n figura 2.6 se observ c peretele celular al bacteriilor gram- formeaz 3 straturi distincte i este mai complex dect acela al bacteriilor gram+. Stratul fin de peptidoglican reunit cu membrana plasmatic nu reprezint dect 5-10% din greutatea peretelui celular.La E.coli ea are njur de l|am grosime i nu conine dect 1-2 straturi de peptidoglican. Deasupra stratului de peptidoglican (spre exterior) se gsete o membran extern bogat n lipoproteine Braun, mici molecule proteice ataate prin legturi covalente de stratul de peptidoglican. Elementele cele mai particulare ale membranei externe sunt lipopolizaharidele (LPS), molecule mari, complexe, ce conin glucide i lipide n 3 straturi, dup cum urmeaz: o poriune lipidic spre interior, o poriune format din polizaharide pe centru i un lan lateral O sau antigenul O la exterior. Acesta din urm este constituit din cteva zaharuri particulare, compoziia sa variind de la o su bacterian la

este important din mai multe motive, altele dect acela menionat mai sus. Astfel, datorit faptului c polizaharidele centrale conin zaharuri i fosfai, stratul LPS contribuie la ncrcarea negativ a suprafeei bacteriene. Lipidele A, care intr deasemenea n compoziia stratului LPS, ajut la stabilizarea structurii membranare. n plus, aceast lipid este adesea toxic, aa nct stratul LPS acioneaz ca o endotoxin i provoac unele simptome care apar n infecii bacteriene cu specii gram-. Membrana extern reprezint n ansamblul ei o barier important de protecie, mpiedicnd sau diminund ptrunderea srurilor biliare, a antibioticelor i a altor substane toxice care ar putea afecta bacteria. n afara prezenei membranei externe, bacteriile gram- se mai caracterizeaz i prin alte dou trsturi particulare, i anume: - prezena unui spaiu periplasmic mult mai mare care include stratul de glican redus i care separ stratul intern de peptidoglican de membrana plasmatic; - prezena porilor transmembranari i a canalelor de difuziune, formai din molecule proteice, ceea ce face posibil trecerea moleculelor mici hidrofile (600 - 700 daltoni) prin straturile peretelui celular; Aceste molecule proteice numite porine servesc totodat ca situri de fixare pentru virusurile bacteriofage, dar i pentru unii compui chimici necesari bacteriilor. Membrana extern a bacteriilor gram- este traversat de grupuri de cte 3 molecule de porine care formeaz canale prin care pot trece moleculele mici, aa cum am artat mai sus. Moleculele mari, cum ar fi acelea de vitamina B12 nu pot traversa membrana extern prin porine (aanumitul transport pasiv), fiind necesare mecanisme de transport specific. Membrana extern mpiedic de asemenea, pierderile unor constitueni cum sunt enzimele periplasmice. Avnd n vedere aceste aspecte, peretele celular al bacteriilor gram- acioneaz prin membrana extern ca o "sit molecular". Tabelul 2.3 permite o mai uoar comparare a principalelor caracteristici ale peretelui celular al celor 2 categorii de bacterii, gram+ i gram-. 44

Tabelul 2.3 Diferenele fizice i chimice ale peretelui celular al bacteriilor gram+ i gram(dup J.P.Regnault, 1990) Caracteristica Grosimea (nm) Nr. straturi Dispoziia straturilor Gram+ 15-75 1 -un strat subire de peptidoglican Gram10-15 3 -un strat de, peptidoglican -un strat intermediar de lipopolizaharide -un strat extern de lipoproteine

Compoziia chimic: -peptidoglican (% din masa uscat) -lipide (%) -acizi teichoici -lipoproteine i lipopolizaharide

30-50 1-4 prezeni ntotdeauna n cantitate redus

10 11-22 abseni * n cantitate rnare

2.2.1.3 Mecanismul coloraiei Gram Acest mecanism poate fi explicat prin coninutul mai ridicat n lipide al peretelui celular de la bacteriile gram- pe de o parte i prin grosimea redus a nsi peretelui celular pe de alt parte. Tabelul 2.4 rezum aciunea diferitelor substane n cursul coloraiei Gram. Coloraia Gram constituie ,un element important n identificarea bacteriilor. Ea nu se aplic n cazul algelor, al protozoarelor i al micetelor. Totui se poate aplic la levuri care prezint ntotdeauna o coloraie violet nchis, fiind gram+. Bacteriile gram-t- i gram-, ca efect al diferenei de structur a peretelui celular, prezint diferene importante din punct de vedere fiziologic, n particular n privina sensibilitii la antibiotice i a necesitilor nutritive. Din aceast cauz coloraia Gram este ntotdeauna numai o etap n identificarea taxonomic. Tabelul 2.5 vine s detalieze acestc elemente de difereniere ntre bacteriile gram+ > i gram-.

gram asupra peretelui celular ai bacteriilor Colorantul aplicat Cristal violet sau Violet de Genian Soluie Lugol (Iod)
-v-

Bacterii gram+ Peretele celular colorat n violet Fixarea culorii violet (celula apare colorat n violetnegru) Deshidratarea peretelui celular i a membranei plasmatice antreneaz renchiderea porilor membranari i aa mult mai redui dect la bacteriile gram-. Complexul cristal-violet - Lugol este reinut i bacteriile rmn colorate n violet nchis Celula este deja colorat n violet nchis, deci efectul recolorrii nu se sesizeaz

Bacterii gramPeretele celular colorat n violet Fixarea culorii violet (celula apare colorat n violet-negru) Aciunea alcoolului provoac extragerea lipidelor prezente n cantitate mare. Peretele celular se fragilizeaz i complexul cristal-violet Lugol este antrenat i splat. Coloraia violet dispare. Complexul cristal-violet - Lugol fusese eliminat anterior, iar bacteriile sunt recolorate n roz de ctre safranin

Amestec de decolorare (alcool - aceton)

Safranin sau alt colorant specific utilizat la recolorare

Tabelul 2.5 Comparaie ntre caracteristicile fiziologice ale bacteriilor Gram+ i GramProprieti Necesiti nutritive Rezisten la deshidratare Inhibarea creterii de ctre peniciline Inhibarea creterii de ctre colorani Distrugerea peretelui celular de ctre lizoenzime Excreie de exoenzime Gram+ Relativ complexe Mare Mare Mare Mare Frecvent GramRelativ simple Redus Redus Redus Redus Rar (enzimele sunt reinute n periplasm) Nu Da Redus

Eliberare de exotoxine Producerea de endotoxine Rezisten la ocuri fizice

Da Nu Mare

< j

2.2.1.4 Compui chimici particulari ai peretelui celular Ibacterian Unele bacterii conin n peretele celular compui chimici particulari. Menionm 3 cazuri bine cunoscute sub acest aspect: acela al Mycobacteriilor, Chlamidiilor i Arheobacteriilor. Peretele celular al Mycobacteriilor Mycobacteriile formeaz un grup particular de bacterii; Din acesta face parte specia Mycobacterium tuberculosis, agentul patogen al tuberculozei. n afar de peptidoglican, aceste bacterii conin acizi grai particulari i anume acizii mycolici care le confer proprieti particulare: - o mare rezisten la deshidratare; Bacilul tuberculozei poate supravieui timp de sptmni n sput de expectoraie uscat. - rezisten la aciunea unor alcali i la aceea a unor dezinfectani; Mycobacteriile fac parte din categoria bacteriilor alcoolo - acido rezistente, trstur ce se pune n eviden prin aplicarea coloraiei Ziehl-Neelsen. - trecerea dificil n suspensie atunci cnd sunt cultivate n mediu lichid; datorit acestui fapt formeaz un voal la suprafaa mediului i un agregat dificil de separat n unele medii. Pentru acest motiv se practic adugarea de substane tensioactive n unele medii de cultur destinate acestor specii. Acestea fac posibil dispersia uniform a lor. Peretele celular al Chlamidiilor Chlamidiile sunt parazite obligat intracelulare, deci au un ciclu de dezvoltare particular. Forma infecioas a acestora poart numele de corpi elementari i este capabil s penetreze n celula gazd. Aici aceti corpi elementari se transform n form vegetativ, adic n aanumiii corpi reticulai. Pentru a invada celula gazd, corpii elementari trebuie s aib proprieti de suprafa specifice. Peretele celular al chlamidiilor este hidrofob i are un pH negativ. El prezint proteine de membran externe care au puncte izoelectrice cuprinse ntre 5,3 - 5,5. Sunt prezeni i ionii de Ca2+. Aparent, cele dou forme ale ciclului de dezvoltare al Chlamidiilor prezint un perete celular tipic bacteriilor gram-. Totui penicilinele mpiedic transformarea corpilor elementari n corpi reticulai. Membrana extern conine mari cantiti dintr-o protein (OMP) cu greutate molecular de 40kDa i mai mitine

intre ele prm puni disuiturate. Reeaua tormat n aceste condiii are o structur rigid, comparabil cu peptidoglicanul. Membrana extern are de asemenea lipopolizaharide. Structura simplificat a acesteia seamn cu aceea a mutanilor Re ai genului Salmonella, adic o molecul de lipid A legat de 3 molecule de KDO (dup Leclerc, 1995). Peretele celular al Arheobacteriilor Acest grup de bacterii formeaz un grup aparte ca urmare a observaiilor relativ recente. Peretele lor celular este lipsit de peptidoglican. n locul su se gsesc diveri compui bogai n proteine, n lumea Arheobacteriilor se ncadreaz 3 grupe de bacterii: metanogene, halofile extreme i termofile extreme. Ele sunt gram-f sau gram-. n peretele celular al acestora nu este prezent un veritabil peptidoglican, el fiind format fie din pseudomurein, fie din metacondriotin sau dintr-un heteropolizaharid. O alt particularitate a peretelui celular al arheobacteriilor este aceea c apare un strat extern numit Strat S, format din proteine sau glicoproteine. Arheobacteriile gram- nu se aseamn de loc cu eubacteriile din aceeai grup gram. Un caz tipic este acela al genului Thermoplasma care cuprinde o membran citoplasmic asociat unui Strat S i fr perete celular. 2.2.1.5 Bacterii lipsite de perete celular Unele bacterii sunt, n mod excepional, lipsite de perete celular, n aceast categorie intr: - Mycoplasmele, la care absena peretelui celular este o caracteristic specific; - Bacteriile "L" care i-au pierdut peretele celular n urma unei mutaii; - Bacteriile care n anumite condiii nu-i pot sintetiza peretele celular i formeaz aa-numiii sferoplati sau protoplati. Mycoplasmele (PPLO - Pleuro - Pneumonia Like Organisms) au fost evideniate graie unor afeciuni respiratorii provocate la animalele domestice. Ele sunt procariote tipice chiar dac le lipsete peretele celular, ceea ce, de altfel, constituie un bun criteriu de identificare. Prin urmare, singura lor protecie este membrana citoplasmic. Aceasta e bogat n steroli, o categorie de lipide care asigur o bun reglare a presiunii osmotice. Mycoplasmele triesc ns 48

n stadiu de parazit obligat n esuturile i fluidele animalelor i ale omului, deci ele nu sunt expusQ ocurilor osmotice. O alt particularitate a acestui grup de microorganisme este talia lor foarte redus i pleomorfismul lor. Astfel, mycoplasmele au o talie cuprins ntre 125 i 250nm. Este deci dificil observarea lor la microscopul optic. Pe mediu solid ele formeaz colonii cuprinse ntre 10 i 300|nin diametru. Ele au un aspect caracteristic de "ou ochiuri", dar sunt mult prea mici pentru a putea fi vzute cu ochiul liber. Datorit lipsei peretelui celular, mycoplasmele se caracterizeaz printr-un accentuat pleomorfism, ceea ce nseamn o mare instabilitate morfologic. Ele pot fi ovoidale, filamentoase etc. Tot ca urmare a lipsei peretelui celular ele sunt bacterii gram-, iar la peniciline sunt complet insensibile. Mycoplasmele produc infecii ale sistemului respirator (Mycoplasma pneumoniae) i urinare (Ureaplasma irealyticum). Formele "L" Acestea au fost denumite astfel datorit faptului c ele eu fost izolate pentru prima dat la Institutul Lister din Londra, de ctre E. Klineberger, n 1955. Formele "L" au pierdut complet sau parial peretele celular, unele dintre acestea prezentnd un perete celular defectuos. Ele au aprut n urma unei mutaii sau a unor tratamente particulare (cultivare pe medii izotonice sau hipertonice coninnd peniciline). n unele cazuri s-a constatat totui fenomenul de reparare a peretelui celular. O proprietate interesant a acestor bacterii este capacitatea lor de a se dezvolta fr dificultate n mediile de cultur ce conin peniciline, astfel nct mediile coninnd acest antibiotic, n care alte bacterii nu se pot dezvolt au devenit medii selective pentru izolarea lor. Acest tip de bacterii atipice, paraziteaz esuturile animalelor i se pot regsi n condiii osmotice foarte stabile. Patogenitatea lor nu a fost nc foarte clar stabilit, dar se crede c ele ar putea provoca infecii mai mult sau mai puin evidente. S-au ntlnit forme "L" derivate din bacteriile coliforme, din gonococi sau din bacterii difterice, izolate din probe patologice genito-urinare, dar nu sa putut dovedi c ele sunt cauza infeciilor. 2.2.1.6 Rolul peretelui celular - determin forma bacteriilor i asigur susinerea mecanic a celulei;

- asigur protecia osmotic a celulei; Peretele celular este necesar pentru a asigura protecia bacteriei mpotriva distrugerii. n general, citoplasma bacterian este mult mai concentrat dect mediul microbian care este hipotonic. Prin fenomenul de osmoz, apa trece prin membrane selective de tipul membranei plasmatice, de la soluia diluat ctre soluia concentrat. Deci, n mod normal, apa tinde s intre n celulele bacteriene, iar presiunea osmotic poate atinge 20 atmosfere. Membrana plasmatic nu poate suporta asemenea presiuni. n acest caz celula s-ar umfla, producndu-se n cele din urm fenomenul de liz (distrugere), dac nu ar exista peretele celular care s o protejeze mpotriva acestuia. Un mediu hipertonic este mai concentrat dect mediul intracelular. ntr-un asemenea mediu apa iese din celul la exterior, iar citoplasma se dezorganizeaz. Acest fenomen se numete plasmoliz. Rolul protector al peretelui celular mpotriva variaiilor de presiune osmotic este pur mecanic i pasiv. Acesta este asigurat de ctre peptidoglican care se prezint ca o plas protectoare n jurul celulei, mpiedicnd deformarea ei peste anumite limite. Peretele celular nu este niciodat sediul unui transport activ de substane sau a unei activiti metabolice particulare. Rolul su se limiteaz doar la meninerea volumului celular constant i la reglarea mecanic a micrii apei atunci cnd bacteriile sunt plasate n medii hipotonice. Importana peretelui celular mpotriva lizei osmotice a fost demonstrat experimental printr-un tratament cu lizozim sau penicilin. Lizozimul este o enzim ce se gsete n lacrimi, secreii nazale, saliv. El atac peptidoglicanul hidroliznd legturile care unesc acidul N-acetil muramic la carbonul 4 al N-acetil glucozaminei. Penicilina inhib sinteza peptidoglicanului. Dac bacteriile sunt incubate n prezena penicilinei ntr-o, soluie izotonic, bacteriile gram+ sunt transformate n protoplati, adic n celule fr perete celular. Acetia continu dezvoltarea normal atta timp ct izotonicitatea rmne constant. Bacteriile gram- pstreaz resturi ale peretelui celular n urma acestui tratament i sunt denumite sferoplati. Protoplatii i sferoplatii sunt sensibili n egal msur la variaiile de presiune osmotic, lizndu-se n soluii diluate datorit ptrunderii apei n celul n mod necontrolat. Dei Mycoplasmele nu au perete celular, membrana lor plasmatic este mult mai rezistent dect a celorlalte bacterii. Aceast rezisten se 50

datoreaz bogiei ei n steroli. Fr perete celular acestea au ns tendina de a-i schimba forma, fenomen numit pleomorfism, aa cum am mai artat n subcapitolul 2.2.1.5. - asigur puterea patogen a bacteriei Constituenii chimici ai peretelui celular ai unor specii de bacterii determin patogenitateat lor. Este cazul lipopolizaharidelor prezente n cantitate mare n peretele celular al bacteriilor Gram-. Aceti compui intr n alctuirea antigenilor 0 i a unor endotoxine. Prefixul endo indic originea intern a toxinei formate n bacterie. Se mai spune c peretele celular al bacteriilor este sediul determinanilor antigenici care induc resdstena celulei bacteriene la fagocitoz i virulena acestora. - asigur funcia de "sit molecular" pentru bacteriile Gram-, realiznd transportul pasiv al moleculelor din mediul extern n celul prin intermediul porinelor. Astfel, ptrund n mod pasiv n celul substanele hidrofile i nu pot ptrunde n celul substanele hidrofobe. Ca urmare, nu pot intra n celul substane potenial nocive pentru celul, dar nici nu se pierd metabolii importani pentru ea. Compuii care pot intra n celul sunt oligopeptide, oligozaharide, substane hidrofile cu greutate molecular de aproximativ 700daltoni. - asigur funcia de transport specific al unor compui (vitamina B12, maltoza, maltodextrinele, ionii ferici i nucleozidele), nglobarea unor bacteriocine i absorbia unor fagi; - particip la procesul de cretere i diviziune celular prin procese de biosintez localizat n zona septurilor transversale; - este sediul enzimelor autolitice capabile s atace structura glicopeptidului n cazul sporulrii, al eliberrii sporului prin liza sporangelui, al germinrii sporului etc. 2.2.2 Structurile externe ale peretelui celular Bacteriile au o mare varietate de structuri dispuse la exteriorul peretelui celular. Acestea joac un rol de protecie, de fixare pe diverse suprafee i de mobilitate. 2.2.2.1 Structurile externe polizaharidice Unele specii de bacterii au la exteriorul peretelui celular un strat suplimentar mai mult sau mai puin organizat, compact i vscos de natur glucidic. Capsula este cea mai veche structur polizaharidic de suprafa descris la bacterii (fig. 1.1a i 2.7). Ea este un strat mucos de natur

Fig. 2.7 - Capsula bacterian la Mycobacterium avium (microscopie electronic, dup Leclerc, 1995)

polizaharidic, cu un contur bine definit, observat la unele bacterii patogene cum ar fi pneumococii. Mult timp s-a considerat c asemenea structuri polizaharidice situate la exteriorul celulei sunt ntlnite rar, numai la un numr restrns de bacterii cu o patogenitate accentuat. n 1981 Costerton, efectund numeroase cercetri cu ajutorul microscopului electronic, a demonstrat c de fapt, cea mai mare parte a bacteriilor sunt nconjurate de un asemenea strat. El a numit acest strat glicocalix (fig. 2.8). n 1982 Costerton evideniaz de asemenea, compui legai de suprafaa membranei externe a bacteriilor gram- i a peptidoglicanului bacteriilor gram+, care formeaz complexe de polizaharide capsulare i glicoproteine cu aspect de reea. Pe acetia, el i numete Stratul S.

Fig. 2.8 - Glicocalix bacterian (gly) cu aspect pslos; imagine la microscopul electronic (dup Prescott, Harley, Klein, 1990)

52

O definire mai prudent a tuturor acestor materiale extracelulare cu greutate molecular mare este ns aceea fcut n 1982 de ctre Geesey, care le numete Extracellular Polymeric Substances (EPS). Aceste structuri sunt extrem de greu de evideniat, chiar prin microscopie electronic, ca urmare a structurii lor foarte hidratate (peste 99% ap) i a fragilitii lor texturale ce ngreuneaz deshidratarea eantionului pentru examinare. n prezent, folosirea unor reactivi specifici sau a lectinelor, face posibil pstrarea integritii structurale a acestor straturi n timpul pregtirii eantionului, facilitnd examinarea. S-au fcut de asemenea, progrese remarcabile n studierea acestor structuri prin utilizarea tehnicilor recente de microscopie confocal (Confocal Scanning Laser Microscopy - CSLM) care utilizeaz raze laser pentru observarea becteriilor n stare vie. Glicocalixul, de exemplu, se poate evidenia cel mai bine n mediul natural al bacteriilor, examinndu-le pe suprafeele pe care acestea ader, pe mucoase sau n cursul unor infecii. nc din perioada cercetrilor lui Pasteur, bacteriile au fost sustrase din mediul lor natural i crescute n condiii de laborator, n condiii de suprasaturare n factori necesari dezvoltrii. Din aceast cauz ele s-au dezvoltat cu un minimum de efort, eliminnd din structura lor elementele de care aveau nevoie n mediul natural pentru a supravieui. Glicocalixul este o asemenea structur important n mediul natural pentru fixare i protecie. O parte din constituenii polizaharidici excretai de ctre celula bacterian sunt eliminai n mediul extern i nu constituie entiti morfologice. Acestea sunt reunite sub numele de strat mucos sau slime. n alte cazuri, aceti constitueni formeaz veritabile "carapace" sau "teci" n jurul celulelor, care adesea se asociaz n lanuri. O acumulare abundent de substante mucoide duce la formarea asa-numitei zooglee (fig. 2.9). Structura polizaharidelor de suprafa Polizaharidele de suprafa sunt n contact intim cu peretele celular al bacteriilor pe care l mbrac la o distan de numai civa microni. Acestea constituie un ciment care unete bacteriile ntre ele n conglomerate sau microcolonii, facilitnd fixarea lor pe un anumit substrat i fcnd vizibil astfel prezena lor n unele medii cum ar fi: mediul acvatic, suprafeele umede, rumenul bovinelor etc. Stratul de

Fig. 2.9 - Zooglee la bacterii (coloraie negativ cu tu de China).

bacterii care devine astfel sesizabil chiar cu ochiul liber se numete biofilm bacterian. Constituenii organici care fac posibil formarea biofilmului sunt polimeri (homo sau hetero) lineari sau ramificai de natur zaharidic, deci polizaharide tipice, dar care pot fi asociate cu proteine. Extrem de hidratai i foarte flexibili, ei pleac de la peretele celular sau membrana extern, dar nu formeaz legturi stabile (covalente) ntre ei. Aceti constitueni se localizeaz n jurul acizilor teichoici la bacteriile gram-f sau n jurul lipopolizaharidelor la cele gram-. Legturile dintre moleculele de LPS i fibrele oligozaharidice sunt de natur ionic. Lanurile polizaharidice se leag ntre ele prin legturi electrostatice stabilite graie unor ioni metalici bivaleni ca aceia de Mg2+ sau Ca2+. Aceti ioni care au particularitatea de a se nconjura de o "teac" stabil, foarte legat de molecule de ap, explic structura foarte hidratat a polizaharidelor. Structura polizaharidelor a fost n mod particular studiat la bacteriile responsabile de diverse maladii umane. La pneumococii 54

capsulai, constituenii polizaharidici formeaz un lan lung de acizi aldobioniei (oz + acid uronic). Natura acestor structuri externe peretelui celular stau la baza clasificrii speciilor de pneumococi i a numeroaselor tipuri antigenice sau serotipuri (peste 70). Streptococcus pyogenes elaboreaz o capsul polizaharidic doar la nceputul fazei exponeniale de cretere i este constituita din acid hialuronie. La Clostridium perfringens polizaharida constituent este format din dou hexoze (manoz i glucoz). De asemenea, la numeroase bacterii gram-, capsula este tot de natur polizaharidic. Este cazul, spre exemplu, al speciilor Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli etc. La unele bacterii gram+, cum ar fi Bacillus anthracis, Bacillus megatherium; Bacillus subtilis, substanele capsulare sunt polipeptide constituite dintr-un singur tip de acid aminat (acidul D-glutamic). La mycobacterii (Mycobacterium avium) capsula este peptidoglicolipidic. (Leclerc,1995) (fig.2.7). Capsula - factor al virulenei la bacterii Capsula nu joac un rol vital n existena bacteriilor. O bacterie lipsit de capsul poate crete i se poate multiplica normal. Elaborarea substanelor capsulare poate fi favorizat de mediul de via i n unele cazuri ea necesit prezena unor precursori biochimici (spre exemplu zaharoza pentru dextran). n absena acestui element, bacteria nu formeaz capsul, dar ea conserv toate celelalte caractere. Transferat pe un mediu convenabil, ea rencepe s i sintetizeze capsula. De asemenea, eliberarea constituenilor capsulari ai unei bacterii prin hidroliz enzimatic nu mpiedic bacteria s se reproduc. Prin mutaie, aceast putere de sintez se poate pierde fr a se pierde viabilitatea celulei. Substanele capsulare reprezint suportul unor proprieti fiziopatologice i imunologice. Ele joac un rol important n asigurarea puterii patogene a bacteriei. Pneumococii capsulai sunt patogeni. Injectai la oareci ei declanaz n 24 ore o septicemie mortal. Aceleai celule decapsulate pierd n acelai timp puterea lor patogen. Substanele capsulate sunt deci, veritabili factori de virulen. Ele mpiedic aprarea organismului gazd s se
manifeste, protejnd bacteria mpotriva fagocitozei datorit

chimiotactismului negativ manifestat fa de leucocite i macrofage. n infeciile grave, cum ar fi meningitele noilor nscui, septicemii .a., au fost izolate sue de E.coli aparinnd serotipului K1 (capsulat).

"mucoase" de tip M (purttoare de strat mucoiaj proauc am abunden un polizaharid extracelular, acidul alginic, care formeaz o veritabil capsul. Suele "mucoase" sunt izolate din secreiile bronice ale copiilor bolnavi de fibroz chistic. Alginatul capsular le confer proprieti antifagocitare reprezentnd o veritabil barier fizic mpotriva aciunii macrofagelor (Goldberg, 1992). n funcie de structur i raporturile sale cu celula bacterian, substana mucoid poate fi prezent sub urmtoarele forme (dup 2'arnea, 1983): - Microcapsula - un strat cu grosimea de sub 0,2|am, detectabil doar prin metode imunologice, nu i microscopice. - Macrocapsula - un strat mai mare de 0,2jLim, detectabil prin metode citologice. - Stratul mucos - o mas amorf neorganizat situat n jurul celulei bacteriene. - Zooglea sau masa zoogleic - o mas gelatinoas care reunete mai multe celule bacteriene n colonii mucilaginoase detectabile n medii lichide chiar cu ochiul liber prin flocoanele macroscopice formate, care plutesc liber sau se lipesc pe diferite suprafee. ntruct despre capsul s-a vorbit la paragraful anterior, vom aborda n continuare cteva aspecte referitoare la stratul mucos i zooglee, n lumina celor mai recente cercetri. Stratul mucos sau "slime" Polizaharidele de suprafa pot fi eliberate de ctre bacterii sub forma unui strat mucos sau "slime" n mediul n care bacteria se multiplic. n laborator aceast secreie este stimulat prin agitarea culturii i omogenizarea ei ntr-o camer de cultivare prevzut cu agitator. Aceti constitueni vscoi, detaabili cu uurin, pot fi sintetizai din abunden de ctre unele microorganisme n prezena unor precursori. Un exemplu bine cunoscut este acela al bacteriei lactice Leuconostoc mesenteroides, care contamineaz adesea rafinriile de zahr i care transform foarte rapid soluiile de zaharoz ntr-un jeleu gros de dextran. Aceast conversie are loc la suprafaa celulei i este catalizat de o transferaz numit dextran-zaharaz. Dextranul poate fi produs pe cale industrial graie proprietilor sale gelifiante. El este utilizat ca substitut de plasm, ca agent gelifiant n numeroase preparate alimentare etc. 56

Numeroi polimeri zaharidici de origine microbian sunt produi pe cale industrial prin diferite procedee biotehnologice. Ei reprezint o alternativ la gumele de origine vegetal sau la materialele plastice. De exemplu, alginatele din Azotobacter vinelandii, emulsifianii produi prin folosirea speciei Acinetobacter calcoaceticus, xantanul produs de ctre Xantomonas campestris, heteroglicanii produi de ctre bacterii din genul Rhizobium etc. Producia de "slime" este frecvent la bacteriile acvatice. Ea este n mod particular mult mai intens la unele bacterii din apele poluate, n cazul unei secreii foarte intense de "slime" spunem c bacteriile formeaz o zooglee. Aceast excreie "patologic" formeaz, dup cum am mai artat, o mas gelatinoas la care agreg uor particulele aflate n suspensie, dnd natere unor flocoane. Acest fenomen poate fi reprodus "in vitro" cultivnd bacteriile n medii lichide convenabile. Ele formeaz pe suprafa o pelicul care floculeaz dup un timp i se depune. La microscop se observ n anumite cazuri aglomerri bacteriene arborescente sau "n degete de mnu", iar celulele sunt aglomerate n masa vscoas comun. n alte cazuri, masa gelatinoas este amorf i ine n suspensie celulele bacteriene. Substanele care formeaz zooglea sunt exopolimeri polizaharidici de natur necunoscut, insolubili n ap (Leclerc, 1995). Polizaharidele i adeziunea bacterian Polizaharidele reprezint liantul care determin apariia tuturor asociaiilor bacteriene sau aderarea bacteriilor la o suprafa dintr-un mediu. Moleculele polizaharidice anionice (exemplu: acidul uronic) sunt de fapt reprezentanii moleculelor fibroase tipice care favorizeaz interaciuni de suprafa i cimenteaz celulele pe diferite suporturi inerte sau vii. n cazul adeziunilor specifice a bacteriilor la esuturile animale sau vegetale se pun n joc molecule de lectin. Receptorul care intervine n adeziune este o molecul glucidic extern celulei animale sau vegetale. Totodat, o molecul glucidic a unei bacterii poate fi legat la un compus al unei celule gazd i poate juca rolul de receptor (lectino-f agocitoz). Formarea complexelor polizaharidice elaborate ntr-un mediu n care triesc mai multe specii bacteriene ntre care exist diferite relaii concureniale, este o adaptare a acestora care dispare imediat ce aceste bacterii sunt crescute n medii artificiale de laborator. Aceast

mediu prin transformri profunde n structura i metabolismul lor. Sinteza de polizaharide este o cheltuial semnificativ de energie care nu este indispensabil ntr-un mediu bogat n nutrieni, ntr-o cultur monospecific. Rolul ei n nutriie i n protecie nu este esenial. Invers, bacteriile provenind dintr-o cultur se confrunt ntr-un mediu natural cu o serie de greuti care le determin s sintetizeze acest substrat polizaharidic fibros pentru a se proteja. Glicocalixul este o mas de filamente polizaharidice ataate lipopolizaharidelor de pe suprafaa bacteriilor formnd o psl la suprafaa celulei i care i asigur acesteia aderarea specific la diferite suporturi inerte, dar i la suprafaa unor celule vii. n acest strat pslos are loc diviziunea celulelor bacteriene integrate aici i n acest fel iau natere microcolonii acoperite de un glicocalix comun. Glicocalixul este absent la bacteriile crescute n laborator, n culturi pure, el fiind caracteristic doar bacteriilor aflate n condiii naturale. Modul de formare al acestui strat polizaharidic extracelular a fost studiat la Streptococcus mutans, specie bacterian implicat n formarea cariilor dentare. La suprafaa acestei bacterii acioneaz trei enzime implicate n metabolismul zaharozei: invertaza, glucoziltransferaza i fructoziltransferaza, dup cum se va vedea n continuare. Invertaza descompune zaharoza n glucoz i fructoz, puse la dispoziia celulei ca surs de energie. Glucoziltransferaza scindeaz zaharoza la fructoz (util n hrana bacteriei) i glucoz (polimerizat sub forma unui lan lung de glucan). Glucanul are caracteristica de a nu fi solubil n ap. Din aceast cauz el ader de smalul dentar, iar biosinteza lui continu datorit prezenei glucoziltransferazei n reeaua glicocalixului, care se dezvolt n continuare, capturnd noi i noi celule bacteriene din aceeai specie sau din specii diferite, dnd natere unui depozit glbui pe suprafaa dinilor, denumit plac bacterian, punctul de plecare al cariei dentare. Cea de a treia enzim este fructoziltransferaza, care elibereaz glucoza pentru a fi folosit ca aliment i leag fructoz ntr-un polizaharid similar glucanului, dar hidrosolubil, deci inofensiv pentru dantur (dup Zarnea, 1983).

58

Rolul glicocalixului - sistem de fixare a bacteriilor n mediile naturale pe diferite substraturi inerte, vegetale sau animale; - formarea de microcolonii bacteriene care determin un mediu favorizant pentru nutriie prin: concentrarea de enzime degradative active, legarea diferiilor ioni i molecule care provin din mediul nconjurtor sau sunt eliberate prin nsi digestia enzimatic a celulelor moarte (surs de hran pentru bacteriile supravieuitoare); - sistem de protecie a bacteriilor n mediile naturale mpotriva bacteriofagilor, a bacteriilor prdtoare i a protozoarelor; - sistem de protecie a bacteriilor patogene n organismele infectate prin mpiedicarea fagocitozei de ctre leucocitele polimorfonucleare i a fixrii anticorpilor protectori din aceste organisme; 2.2.2.2 Proteinele de suprafa sau stratul S Straturile S sunt formate din proteine de suprafa evideniate relativ recent, ca urmare a progreselor nregistrate n microscopia electronic, singura n msur de a le evidenia. Ele formeaz o reea cristalin bidimensional constituit din subuniti proteice sau glicoproteice. Straturile S au fost recunoscute la unele specii bacteriene distincte i apar ca o caracteristic universal a nveliului celular de la Arheobacterii. Ultrastructura i tipurile de straturi S Varietatea i complexitatea acestor straturi este mare. Se pot distinge totui 3 tipuri principale. Unele nveliuri sunt formate exclusiv dintr-un strat cristalin S la periferia membranei citoplasmatice. Acestea se regsesc la arheobacteriile halofile, termofile, acidofile. La bacteriile metanogene aparinnd genurilor Methanospirilum i Methanotrix, stratul S este protejat de o carcas situat peste acesta. Un al doilea grup este acela al eubacteriilor gram-h ce posed un strat peptidoglicanic mai mult sau mai puin strns n jurul peretelui celular.

v^ci u e - a i u c n c a . g r u p u u p i m u c s u a i u i o c a i a u L c n b u c

cuuacicruiur

gram- care este asociat membranei externe. Utiliznd microscopia electronic poate fi reconstituit prin tehnici informatice, cu un grad de exactitate de ordinul a 2nm, ultrastructura acestor straturi S (fig. 2.10).

Fig. 2.10 - Reele cristaline de Staturi S. Imagini la microscopul electronic dup congelare-umbrire (a), criofracturare (b), coloraie negativ (c,d), (dup Leclerc, 1995)

Straturile S sunt alctuite din subuniti proteice sau glicoproteice identice aliniate dup o simetrie oblic. Ele posed pori cu morfologie i talie identice. Date precise acumulate prin cercetarea acestor straturi S la diferite specii ale genului Bacillus, arat c ele nu permit
p t r u n d e r e a n celul a u n o r molecule cu g r e u t a t e molecular de 20

000 - 45 000 daltoni, ceea ce corespunde unor pori cu diametrul de aproximativ 4 - 5nm.

60

Rolul acestor straturi este n principal protector (barier molecular sau ionic). Pe de alt parte, ele sunt implicate n fenomenele de adeziune sau de recunoatere celular. La Arheobacteriile care posed un strat S n jurul membranei plasmatice n locul peretelui celular, acesta este n acelai timp scheletul de meninere a formei celulei. O atenie deosebit s-a acordat studiului straturilor S ale bacteriilor patogene din genurile Chlamydia, Treponema, Helicobacter, Rickettsia, Bacteriodes, Bordetella etc. Straturile S ale acestor genuri bacteriene joac un rol important n exprimarea puterii lor patogene i n fenomenul de adeziune la esuturile infectate, ceea ce impune aplicarea unor tratamente specifice pentru tratarea infeciilor determinate de acestea (Massner i Sleyter, 1992, citai de Leclerc, 1995). 2.2.3 Membrana plasmatic (citoplasmic) i spaiul periplasmic Membrana citoplasmic acoper citoplasma celulelor procariote ca i pe aceea a celulelor eucariote, foarte asemntoare din punct de vedere funcional i structural. Aceast structur anatomic extrem de important reprezint principalul punct de contact cu mediul celular i de asemenea, elementul de legtur cu mediul exterior. Astfel, interaciunea celulei cu mediul trebuie s fie selectiv, fie c aceasta se afl n interiorul unui organism, fie c se afl n mediul extern natural, mult mai variat i fr nici o protecie. Celula nu trebuie doar s se hrneasc i s elimine deeurile rezultate din activitatea metabolic, ci ea trebuie s-i poat menine totodat mediul intern ntr-o stare de organizare perfect, n ciuda modificrilor exterioare permanente ce intervin. Membrana citoplasmic este perfect vizibil la microscopul electronic n seciuni ultrafine de celule tratate cu tetraoxid de osmiu. Ea cuprinde dou foie dense, opace, cu o grosime de 2-3nm. Aceste foie sunt poziionate de o parte i de alta a unei alte foie interne transparente de 4-5nm. Membrana poate fi izolat plecnd de la protoplati supui unui oc osmotic n ap distilat urmat de o centrifugare. Se obin astfel vezicule i fragmente de membran, aanurnite "fantome" (Leclerc, 1995). Arhitectura acestei membrane, observat la microscopul electronic, este trilamelar sau triplustrat.

viemDrana citopiasmic bacerian este organizat dup un model foarte unitar i conine proteine i lipide n proporie variabil. Majoritatea lipidelor membranei sunt din punct de vedere structural asimetrice, cu o parte polar si una nepolar, aa-numita zon amfifil sau amfipatic. Aceasta nseamn c extremitile polare interacioneaz cu apa i deci sunt hidrofle, iar cele nepolare sunt insolubile n ap i au tendina de asociere, fiind hidrofobe. Aceast caracteristic permite lipidelor s formeze un dublu strat n membrane. Suprafaa extern este astfel hidrofil, zona hidrofob fiind situat n interior, la adpost de ap. Majoritatea acestor lipide amfipatice sunt nite fosfolipide (fig. 2.11). Ele reprezint 55% din totalul constituenilor.
nh; i Etanolamin
CH,

CH, ~0-P = 0
1 O I

Extremitate polar i hidrofil

Glicerol

ch2. C HC H

O
Acizi grai C= 0
1 R

0 1 I

c=o
R

Lungi iruri de acizi grai nepolari, hidrofobi

Fig. 2.11 - Structura unui lipid membranar polar

Dei, n general, se aseamn foarte mult unele cu altele, membrana plasmatic a procariotelor are o particularitate aparte fa de aceea a eucariotelor i anume, absena sterolilor (exemplu: colesterolul) din compoziia ei. Totui exist unele specii de bacterii la care s-au putut evidenia mici cantiti de steroli. Este cazul
c i a n o b a c t e r i i l o r i al u n o r m y c o p l a s m e .

Fosfolipidele prezente n membrana plasmatic sunt reprezentate n principal de fosfatidil etanolamin (PE), fosfatidilglicerol (PG) i difosfatidilglicerol (DPG). PE joac un rol important n meninerea 62

integritii membranei. Mutanii deficitari n PE devin hipersensibili la o gam foarte larg de antibiotice. La bacteriile gram-f apar i ali componeni: glicolipidd, lipopolizaHaride i acizi lipoteichoici. Experienele i e marcaj cu ajutorul acidului trinitrobenzensulfonic efectuate la specia Bacillus megaterium au demonstrat ca membrana plasmatic a acesteia este srac n PG, iar faa intern a acestei membrane conine de 2 ori mai mult PE dect cea extern. La Arheobacterii membrana citoplasmatic este cu totul diferit de aceea a altor bacterii, pentru c ea are un singur strat lipidic, iar moleculele lipidice traverseaz ntreaga membran (Leclerc, 1995). Tehnicile moderne de microscopie electronic (criodeeapajul) au fcut posibil evidenierea complexitii membranei citoplasmatice i evidenierea tuturor componenilor structurali ai acesteia, fiind posibil observarea deosebirilor dintre diferite specii sau grupe mai largi de bacterii. Ali componeni ai membranei plasmatice evideniai au fost: glicolipidele i o cantitate mic de acizi grai. Membrana plasmatic cuprinde de asemenea, i dou categorii de proteine. Unele dintre acestea sunt hidrosolubile i sunt legate de moleculele lipidice prin interaciuni de tip hidrofil. Acetea sunt situate la peri|ria ansamblului trilamelar i se numesc proteine periferice. Ele reprezint 20-30% din totalul proteinelor mejpbranare. Altele, amfifile, sunt legate profund n stratul lipidic prin partea lor hidrofob. Partea hidrofil iese la suprafa fie la nivel extracelular, fie nspre citoplasm (spre interiorul celulei). Ele pot de asemenea traversa complet cele dou: straturi lipidice. Din aceste motive ele sunt denumite proteine intrinsece sau integrate. Aceste proteine membranare integrate n straturile lipidice dau un aspect mozaicat membranei citoplasmice. Din aceast cauz, spunem c. modelul molecular dup care este construit membrana citoplasmatic este "modelul mozaicului fluid" (Jonathan Singer i Garth Nicholson, citai de Prescot, 1995), (fig. 2.12a). O parte dintre proteinele integrate formeaz nite canale ce traverseaz stratul fosfolipidic. Acestea se numesc porine i prin acestea trec nutrienii hidrofili de talie mic traversnd membrana plasmatic (fig. 2.12b). Deseori, la suprafaa extern a membranei plasmatice sunt ataate glucide. n concluzie, membrana citoplasmic este o structur foarte organizat i cu o arhitectur asimetric, flexibil i dinamic.

Protein extrinsec (de suprafa)

Lipopolizaharide Porine

Proteine Fosfolipide Peptidoglicon ^

Fig. 2.12 - Reprezentarea schematic a structurii moleculare a membranei plasmatice - "modelul mozaicului fluid"(a); detaliu asupra structurii moleculare a membranei plasmatice, cu evidenierea structurii porinelor (b).

64

22.32 Rolul membranei citoplasmice barier osmotic; In general, citoplasma bacterian este mult mai concentrat dect mediul extern, cel mai des hipotonic. Prin osmoz, apa traverseaz selectiv membranele semipermeabile, cum este cazul membranei citoplasmice i trece de la soluia diluat (mai bogat n ap) spre cea concentrat (cu un coninut mai redus n ap). Prin urmare, apa tinde n mod normal s intre n celula bacterian, iar presiunea osmotic poate atinge valori de pn la 20atm. Dac nu ar avea membran citoplasmic, celula s-ar liza, dar aceasta o protejaz dndu-i elasticitate i rezisten la gonflare. Un mediu extern hipertonic, deci mai concentrat dect acela intracelular, duce la pierderea apei din celula bacterian i implicit la plasmoliz (concentrarea citoplasmei, desprinderea ei de peretele celular i n final, distrugerea celulei) (fig. 2.13) Aplicaii practice ale acestui fenomen n conservarea alimentelor sunt suprasrarea, deshidratarea etc.

Fig. 2.13 - Plasmoliza unei celule de E. coli (1 = membrana citoplasmic, 2operetele celular al bacteriei) (dup o fotografie realizat de J.P, Gourret la microscopul electronic)

controleaz sctiimburile celulare; Membrana citoplasmic controleaz schimburile ntre mediul extern i celul. Astfel, se asigur aprovizionarea celulei cu hran i eliminarea deeurilor rezultate din activitatea metabolic a acesteia Membrana citoplasmic nu se las traversat spontan nici de ioni i nici

majoritate de molecule organice voluminoase trebuie s fie transportate prin procese fiziologice particulare. Schimburile ntre mediul intern i extern se efectueaz prin membrana citoplasmic prin unul din urmtoarele moduri: - direct, prin difuziune, cnd substanele sunt solubile n lipide (membrana citoplasmic este chiar ea bogat n substane lipidice); Pentru a difuza n celul aceti compui trebuie s existe n mediul extern n concentraie superioar concentraiei mediului interior. - prin porii existeni n reeaua molecular a membranei citoplasmice, dac aceti compui au masa molecular mica i puin sau de loc solubili n lipide. - prin transport activ, cu ajutorul unor enzime (permeaze) i a unor transportori. Acest proces permite transportul moleculelor independent de gradientul de concentraie, dar se realizeaz cu un anumit consum de energie specific. n acest fel sunt transportai ioni, cum ar fi aceia de sodiu sau de potasiu i de asemenea, unele substane cum ar fi lactoza i alte oze i ozide, acizii aminai etc. De fapt, numeroase substane de importan vital pentru funcionarea celulei sunt absorbite n acest fel. S-au evaluat pete 60 transportori diferii prezeni n membrana citoplasmic i care asigur trecerea moleculelor ctre citoplasm sediul endocitozei celiilare Membrana citoplasmic este sediul unui alt proces care asigur aprovizionarea celulei -endocitoza. Pornind de la o invaginare a membranei citoplasmice (fig. 2.14), se formeaz o vezicul prin care sunt ingerate de ctre celul lichide (pinocitoz) sau solide (fagocitoz). sediul mior procese metabolice n compoziia chimic a membranei citoplasmice, fiecare categorie de molecule particip la un tip particular de activitate. Pe de o parte, are loc sinteza de constitueni ai peretelui celular, iar pe de alta, ele sunt locul de aciune al unor enzime care intervin n respiraia celular, n cursul creia e. produce energia necesar activitii celulei. Aceste enzime sunt direct fixate pe exteriorul membranei citoplasmice 66

p . w Farticula
0

Membran citoplasmic

Vezicul endocitotic

Lizozom

Fig. 2.14 - Principiul endocitozei, proces prin care o celul ingereaz o pictur de lichid sau o particul solid prin formarea de vezicule, n urma fenomenului de invaginare progresiv a membranei citoplasmice.

sau sunt situate la suprafaa intern a acesteia. Totodat membrana citoplasmic este inta unor dezinfectani, antibiotice etc. Acestea perturb funciile vitale ale celulei. De exemplu, colicinele (antibiotice secretate chiar de unele bacterii), mpiedic utilizarea energiei necesare realizrii transportului activ i blocheaz absorbia unor acizi aminai sau a unor glucide. Polimixinele se concentreaz n membrana citoplasmic i distruge stratul de fosfolipide. Nemaiputndu-se asigura reglarea presiunii osmotice, celula moare. Acest fenomen a fost observat la Pseudomonas aeruginosa (Regnault, 1990). Alte procese metabolice < care i au sediul de desfurare n membrana citoplasmic sunt fotosinteza (acolo unde este cazul), sinteza de lipide i de constitueni specifici ai peretelui celular. locul de fixare a structurilor specializate n deplasarea bacteriilor - flagelii. locul de recepionare a mesajelor chimice sau fizice prin intermediul unor molecule receptoare specializate. Acestea asigur intervenia celulei n fenomenele de chimiotaxie (detectarea i rspunsul specific al celulei bacteriene la prezena n mediul de via al unor substane chimice utile sau nocive).

Bacteriile Gram+ sintetizeaz diverse enzime capabile s fragmenteze constituenii macromoleculari i s i fac accesibili metabolismului celular (de exemplu proteaze), s denatureze anumite antibiotice (de exemplu penicilinaze) sau s produc un efect nociv (de exemplu exotoxine). Opus acestei categorii de bacterii, la cele gram-, marea majoritate a proteinelor elaborate de ctre acestea sunt reinute n spaiul periplasmic, cuprins ntre membrana intern (membrana citoplasmic) i membrana extern. Aceste proteine pot fi eliberate prin transformarea celulelor n sferoplati (protoplast tipic bacteriilor gram- care pstreaz resturi de perete celular) sau prin oc osmotic. Periplasma reine unele enzime de degradare potenial, cum ar fi fosfatazele, ribonucleazele, b-lactamazele. Numeroase molecule (galactoza, maltoza, glutamina) se fixeaz pe unele proteine periferice pentru a strbate bariera membranar. Aceste proteine specifice de legtur ("binding protein") vor fi chiar ele asociate la o alt protein de membran care asigur cuplajul cu o surs de energie. Ele pot fi, spre exemplu, inta unor antibiotice cum ar fi penicilinele ("penicillin binding protein" - pbp) (Leclerc, 1995). 2.2.4 Sistemul membranar intern (intratitoplasmic) Citoplasma bacterian nu conine organite celulare complexe (mitocondrii, cloroplaste etc.) ca i citoplasma eucariotelor. Totui pot fi observate unele structuri membranare caracteristice. 2.2.4.1 Mezozomii Acetia sunt printre cele mai studiate structuri de acest tip. Ei apar ca nite formaiuni rezultate din invaginarea membranei citoplasmice i care au form de vezicule, tuburi, lamele (fig.2.1; 2.15a i b).

Fig. 2.15- Mezozom cu structur vezicular (a); mezozom cu structur lamelar (b); (mezozom - 1, membran citoplasmic - 2, septum - 3) (microscopie electronic, J.P.Gourret).

68

Mezozomii se ntlnesc n egal msur la bacteriile Gram+ i Gram-, dar cu unele caracteristici specifice fiecrui grup. De exemplu, volumul lor este mult mai mare la bacteriile Gram-b fa de acela al celor Gram-. Referitor la structura i volumul lor, au fost lansate o serie de speculaii. Astfel, faptul c ei apar n vecintatea septurilor n timpul diviziunii bacteriene, sunt adesea ataai cromozomului bacterian sau chiar aparatului nuclear, au condus la concluzia c mezozomii pot avea un rol n replicarea cromozomal (fig. 2.16 a, b, c).

Fig'. 2.16a- Seciune printr-o celul de Bacilus subtilisn care se pot vedea "nucleul" (n) i un mezozom (m) situat n imediata vecintate a septului ce tocmai se formeaz n timpul diviziunii transversale a bacteriei (dup Senez, 1968)

Observaiile cele mai recente ale unor cercettori sugereaz c aceste formaiuni ar fi nite artefacte care apar la microscop ca urmare a tehnicilor de fixare aplicate n microscopia electronic (Leclerc, 1995). Mezozomii constituie probabil, o parte din membrana

Fig. 2.16b - Seciune prmtr-o celul de Bacillus subtilisn care se poate observa poziia mezozomului (m) n contact cu "nucleul" (n), peretele celular (pc), i membrana plasmatic (mp)

70

1968): cromozomii sunt figurai prin bucle, mezozomii prin mici triunghiuri, iar zonele de neosintez ale membranei plasmatice prin linii mai ngroate, se observ c mezozomii sunt prezeni att n zona de duplicaie a cromozomului, ct i n zonele de genez a membranei plasmatice, respectiv septare-diviziune celular, suferind ei nii un proces de diviziune.

plasmatic diferit chimic i mult mai fragil la fixare dect restul acesteia. Totui, mezozomii sunt observai la unele bacterii dup criodecapaj, ceea ce indic faptul c ele existau ca formaiuni bine definite, n celulele vivante i nu puteau fi simple artefacte datorate tehnicilor de lucru. Cercetrile ulterioare vor lmuri, probabil, aceste controverse. Numeroase bacterii au un sistem membranar intern foarte diferit de acela al mezozomilor (fig. 2.17). Astfel, pliurile interne ale membranei citoplasmice pot fi foarte complexe la bacteriile fotosintetice cum ar fi Cyanobacteriile i bacteriile purpurii sau la bacteriile cu o activitate respiratorie foarte intens, cum ar fi bacteriile nitrificatoare. Funcia lor esenial este aceea de a mri suprafaa membranar, extrem de important pentru desfurarea a numeroase procese metabolice.

a Fig. 2.17 - Sistem membranar intern la Nitrocystis oceanus (a) i la Ectothiorhodospira mobilis (b) (dup Prescott, Harley i Klein, 1995)

2,2.4,2 Aparatul fotosintetic Dup Kondratieva (1992), se pot distinge mai multe tipuri morfologice de structuri interne membranare cu rol n realizarea proceselor fotosintetice ale bacteriilor. La bacteriile purpurii sulfuroase, componentele aparatului fotosintetic iau natere din membrana citoplasmic, puternic invaginat i ptrund mult n citoplasm. Ele pot avea form vezicular, tubular sau lamelar, situate n pachete sau n fascicule (fig. 2.18).

Fig. 2.18 - Aparatul fotosintetic Ia bacterii (a=vezicular, b=tubular, c=lamelar pachete, d=lamelar - fascicule)

72

La Cyanobacterii, cele mai reprezentative bacterii purttoare ale acestor formaiuni, aparatul fotosintetic se prezint n majoritatea cazurilor ca un sistem de saci membranoi turtii - tilacoizi, separai de membrana celular, care conin centrii de reacie i sistemul transportor de electroni. "Antena" care capteaz lumina este reprezentat deficobiHproteine,prezente ca un ir regulat de granule, numite ficobilisomi, ataai la suprafaa membranei externe a tilacoizilor. La aceste bacterii, se presupune c membrana plasmatic nu conine nici un component al aparatului fotosintetic (Zarnea, 1983). La bacteriile filamentoase (cu excepia genului Heliothrix) i la cele sulfuroase, receptorii pigmentri sunt localizai n nite structuri ovoidale, lenticulare ce sunt ataate suprafeei interne a membranei i se numesc clorosomi. 2.2.5 Citoplasma, ribozomii i incluziunile celulare Citoplasma bacterian reprezint cea mai mare parte a protoplastului. Ea este nconjurat de o membran denumit membran citoplasmic sau plasmatic, despre care am vorbit anterior. Muli ani s-a crezut c aceasta este o soluie omogen coninnd diveri constitueni proteici. Microscopia electronic i dezvoltarea tehnicilor de citochimie au evideniat faptul c ea este de fapt un hidrogel coloidal permanent, format dintr-o faz dispers (proteine, sruri minerale n soluie) i o faz dispersat (ribozomi i diferite incluziuni). Ea este traversat de diferite structuri rezultate din invaginri ale membranei citoplasmice. Astfel, prin tehnici de ultracentrifugare specifice se ppt separa dou fraciuni: una solubil, coninnd enzime n soluie i acid ribonucleic, iar alta, format din particule n suspensie, coninnd ribozomi i material membranar. Coninutul n ap al acesteia este de 70% din masa celular bacterian. 2.2.5.1 ARN i ribozomii Ribozomii sunt mici granulaii sferice de 20 - 30nm diametru care par a umple n totalitate masa citoplasmei, exceptnd regiunea nuclear. Folosind un grosisment redus, se pot observa la microscopul electronic ribozomii, ca nite particule uniforme care dau aspectul granulat specific al citoplasmei (fig. 1.1a i fig. 2.19).

Fig. 2.19 - Ribozomi bacterieni (microelectronografie)

Totui, dei par att de simpli, ei sunt elemente foarte complexe, constituite din proteine i acid ribonucleic (ARN). Ei pot fi izolai plecnd de la extracte bacteriene, prin ultracentrifugare n gradient de zaharoz. Ca i toate particulele, ei sunt caracterizai prin coeficientul (constanta) lor de sedimentare, exprimat n uniti Svedberg (S). Acesta msoar viteza de sedimentare la ultracentrifugare. Coeficientul de sedimentare depinde de masa molecular a particulei, de volumul i de forma sa. Particulele grele i compacte au n mod normal valori Svedberg mari, deci sedimenteaz mai repede. Notm c aceti coeficieni nu sunt direct proporionali cu masa molecular: masa unui ribozom 70S este egal cu suma maselor subunitilor SOS i 30S, chiar dac suma 50+30 este 80 i nu 70. Toi ribozomii bacterieni sunt identici. Ei au o constant de sedimentare de 70S, n timp ce ribozomii celulelor eucariote sunt caracterizai de o constant de sedimentare de 80S. Ei pot fi disociai n dou subuniti, una de dou ori mai mare dect cealalt. Subunitatea mic (30S) este format din ARN 16S i 21 proteine, iar cea mare (SOS), din ARN 23S, ARN 5S i 31 proteine (fig. 2.20).

74

Fig. 2.20 - Ribozom 70S (S = subunitate mic, L = subunitate mare)

2.2.5.2 Substanele de rezerv i alte incluziuni citoplasmice Bacteriile pot acumula materiale organice sau anorganice care servesc drept substane de rezerv. Acestea se formeaz atunci cnd creterea nceteaz sau este inhibat ca urmare a epuizrii unui anumit factor limitativ sau din cauza prezenei unui agent inhibitor. Aceste condiii sunt frecvente n mediile srace n elemente nutritive. Substanele de rezerv sunt inerte, insolubile n ap, iar cnd ajung la anumite dimensiuni formeaz granule vizibile chiar la microscopul optic. Acestea sunt cunoscute i sub numele de corpi de incluziune. Polizaharidele ntr-un mediu deficient n proteine (azot organic) i cu exces de substane carbonate (glucoz, lactat), unele specii bacteriene devin incapabile de a sintetiza proteine, transform compuii carbonai n substane de rezerv. Este vorba despre amidon i cel mai adesea glicogen (fig. 2.21a i b). Putem pune n eviden prezena lor cu ajutorul unei soluii iodo-iodurate care coloreaz amidonul n albastru nchis i glicogenul n brun roietic. Acumularea de amidon sau de
c o m p u i a s e m n t o r i , a f o s t e v i d e n i a t la: Acetobacter,

Neisseria i

Clostridium butyricum. Glicogenul este un compus frecvent ntlnit ca granule n citoplasma unor genuri de bacterii ca Bacillus, Micrococcus, Arthrobacter etc,

Fig. 2.21a - Acumularea de glicogen ntr-o cultur de Acetobacter aerogenes, n condiiile carenei n azot i a excesului de glucoz (dup Senez, 1968)

L nucleoid, 2. corpi poliedrici (carboxiboni), 3. citoplasma celular legat, n ribozomi, 4. tilacoizi, 5. granule de glicogen, 6. globule de polifosfat, 7. nveliuri celulare, 8. mas mucilaginoas ce nconjoar celula

Fig. 2.21b- Seciune printr-o Cyanobacterie; alturi de celelalte elemente morfologice se pot observa corpi de incluziune (granule de glicogen, de polifosfat, carboxizomi) (fotografie realizat la microscopul electronic de J.P.Gourret). (vezi Anexa 4).

76

Lipidele i compuii asemntori Unele lipide neutre (trigliceride) se formeaz frecvent la ciuperci, Candida fiind capabil s acumuleze pn la 90% din greutatea lor uscat. Actinomycetele i Mycobacteriile {gen Nocardia), stocheaz de asemenea lipide n vacuole. La Mycobacterii sunt prezente nite ceruri, adic nite esteri ai unor acizi grai i ai unor alcooli. PoH-b-M<koxibutiratul (PHB) este un polimer linear sintetizat i stocat ca substan de rezerv de ctre numeroase specii de Micrococcus, Pseudomonas, Vibrio, Sphaerotilus, la bacteriile fotosintetizante etc. (fig. 2.22)

speciei Sphaerotilus natans (fo\

Bacteriile purpurii (a PPPoxSospirillum rubrum) formeaz poli-b-hidroxibutir^^i^compui omologi numii polihiclroxicalcanoai. Toate aceste substane acumulate n celul sub form de granule sau de mici vezicule, au proprietatea de a se colora cu acei colorani care pot fi ncadrai n grupa lipofililor, cum ar fi negru de Sudan (fig. 2.23). Ele se vd bine la microscopul optic i fr coloraii speciale, graie puterii lor mrite de refracie.

Fig, 2.23 - Granule lipidice la Bacillus megaterium colorate cu negru de Sudan

Polifosfaii i sulful Numeroase bacterii pot acumula fosfai anorganici sub form de polifosfai - granule metacromatice sau corpi metacromatici. Ei au primit aceast denumire pentru c se coloreaz diferit de culoarea pe care o are colorantul folosit. De exemplu, folosind bleu de toluidin, ei se coloreaz n rou-purpuriu. Mai sunt cunoscui i sub numele de volutin pentru c au fost descrii prima dat la Spirillum yolutan0(ig. 2.21b i 2.24). Prezena lor la anumite specii patogeiie cum ar fi Corynebacterium diphteriae a fcut posibil diagnosticarea bolnavilor ce posedau acest agent patogen, utiliznd tehnici de colorare.

Fig. 2.24 - Granule de volutin sau corpi metacromatici (polifosfai) la Spirillum volutans

Bacteriile care oxideaz compuii redui ai sulfului acumuleaz sulf elementar sub form de globule extrem de refringente (fig. 2.25). 78

Acesta poate fi stocat n interiorul celulei sau excretat la exteriorul ei. Sulful poate constitui o surs de energie pentru bacteriile aerobe care oxideaz hidrogenul sulfurat, cum ar fi cele din genurile Beggiatoa, Thiotrix etc. El poate fi totodat o surs de electroni la bacteriile fototrofe naerobe. /

Fig. 2.25 - Granule de sulf la Chromatium okenii (dup Senez, 1968)

Vacuolele cu gaz Trei tipuri principale de procariote fotosintetice prezint asemenea vacuole care sunt nite vezicule pline cu gaz. Aceste grupuri sunt: algele albastre-verzi (cynobacteriile), bacteriile purpurii, halobacteriile (gen Halobacterium). De asemenea, ele apar la bacteriile din genul Clostridium. Vacuolele cu gaz sunt agregate formate dintr-un numr mare de structuri cilindrice (fig. 2.26a). Membrana exterioar a acestor structuri veziculare nu conine lipide i este format dintr-o singur protein mic. Subunitile proteice se asambleaz pentru a constitui un cilindru rigid, gol pe dinuntru i impermeabil la ap, dar permeabil pentru gazul atmosferic. Bacteriile purttoare de asemenea vacuole cu gaz pot pluti la diferite adncimi n mediul acvatic, pentru a capta lumina, oxigenul (sau pentru a-1 evita dac sunt anaerobe), i hrana. Atunci cnd ele trebuie s coboare spre adncime nu fac altceva dect s-i dezumfle din veziculele cu gaz, formnd altele noi atunci cnd trebuie s urce (fig. 2.26b).

flos-aque); prin criodecapaj la microscopul electronic se observ seciuni transversale i longitudinale prin acestea (dup Prescott, Harley, Klein, 1995)

Fig. 2.26a - Vezicule gazoase evideniate ntr-o cyanobacterie (Anabaena

Fig* 2.26b - Fenomenul de flotaie la cyanobacterii,

graie vacuolelor gazoase; n flaconul din stnga, datorit suprapresiunii create ca urmare a nchiderii forate cu un dop, vacuolele plesnesc, iar bacteriile se depun la fundul acestuia; n flaconul martor, neacoperit (dreapta), bacteriile plutesc la suprafaa lichidului (dup Prescott, Harley, Klein, 1995),

80

mp - membran plasmatic ml-m4 = straturi ale peretelui celular m = strat mucos t = tilacoizi n =: material nuclear f = zon fibrilar gc = granule de cianoficin cp - corp poliedric 1 = incluziuni lipidice Fig. 2.27 - Granule de cianoficin (gc) evideniate ntr-o cyanobacterie (microelectronografie pe seciune ultrafin, dup Zarnea, 1983). (vezi Anexa 5)

Granulele de cianoficin i carboxizomii Cyanobacteriile posed incluziuni cu totul speciale. Unele dintre acestea sunt granulele de cianoficin, alctuite din molecule polipeptidice mari. Ele pot fi observate la microscopul optic i servesc drept rezerve de azot pentru bacterii, (fig. 2.27). Carboxizomii sunt prezeni att la cyanobacterii ct i la bacteriile nitrifiante i thiobacili (fig. 2.21b). Ei sunt poliedrici, au n jur de lOOnm diametru i conin ribuloz-l,5~bis-fosfatcarboxilaz ntr-un aranjament paracristalin. Aceste rezerve de enzime pot fi sediul de fixare al C0 2 . 2.2.6 Aparatul nuclear (Nucleoidul) Timp de muli ani ncercrile de punere n eviden a "nucleului" la bacterii au fost fr succes. Prezena acidului ribonucleic din citoplasm (ribozomi) n cantitate mare, mascheaz acidul dezoxiribonucleic din nucleu, chiar i atunci cnd se folosesc colorani bazici. Tehnicile citologice moderne au fcut posibil observarea faptului c bacteriile conin corpi intracelulari complet diferii de ribozomi i care posed proprieti chimice specifice nucleului celular.

aceast cauz el nici nu poate fi denumit n mod propriu nucleu, ci nncleoid. Meninerea compact, condensat a materialului nuclear n citoplasma bacterian este posibil n aceste condiii ca urmare a consistenei citoplasmei care este un gel permanent, fr cureni citoplasmatici (fig. 1.1a, 2.21b). La bacterii aparatul nuclear este constituit din fibre de ADN bieatenar care formeaz un cromozom unic, circular (fig. 2.28).
Superhelixare

Fig. 2.28 - Cromozomul unic bacterian circular si puternic pliat ("mpachetat"), format din fibre de ADN bieatenar

Cromozomul bacterian are o lungime ce poate atinge lnm. El se afl condensat puternic n celula bacterian care nu depete n mod normal 4-5|am. Cromozomul bacterian prezint n jur de 2-3% din greutatea celular i ocup mai puin de 10% din volumul celular. Aceste constatri au fost posibile prin supunerea celulei bacteriene la ocuri osmotice urmate de plesnirea celulei i derularea cromozomului (Regnault, 1990). La microscopul optic, aparatul nuclear se poate evidenia folosind colorantul Feulgen, tehnic pus la punct pentru prima dat de Stille i Piekarski. Folosind microscopia electronic, se observ numeroase detalii: o reea neregulat de cromatin format din fibre de ADN. Foarte adesea, filamentul de ADN este fixat la mezozomi sau la membrana citoplasmic. Totui, aceast reea cromatinic nu formeaz niciodat o structur bine definit i nu este asemntoare cu cromozomii eucariotelor din timpul diviziunii celulare. Din acest motiv, expresia de cromozom bacterian trebuie s fie utilizat cu o oarecare pruden, el nefiind sinonim cu acela care desemneaz cromozomul eucariotelor (Regnault, 1990). S-a evaluat c aparatul nuclear bacterian conine aproximativ 2000 gene. 82

Plasmidele Multe bacterii conin n plus fa de nucleu, un mic filament de AND circular dublu catenar denumit plasmid.Aceast structur genetic accesorie posed o alt informaie genetic i se poate replica autonom sau sincron cu cromozomul bacterian, transmindu-se la descendeni. Genele plasmidiale dau bacteriei rezisten la medicamente, asigur alte ci metabolice acesteia i proprieti de patogenitate, dar i alte trsturi specifice. 2.2.7 Aparatul locomotor Exist multe specii bacteriene capabile s se deplaseze n mediu lichid sau sernilichid, graie unui aparat locomotor. Prezena mobilitii de un anumit tip, constituie un argument taxonomic util pentru departajarea unor grupuri de bacterii, familii, genuri sau chiar specii. Din acest punct de vedere, cocii sunt mai rar mobili fa de bacili. La bacterii au fost descrise mai multe tipuri de mobilitate. Primul tip este nnotul, care se realizeaz cu ajutorul flagelilor. Altele se deplaseaz prin alunecare pe suprafee solide cum ar fi geloza, sticla, plasticul sau substraturi naturale din mediul lor caracteristic de via. Mecanismul micrii nu este cunoscut. Unii cercettori (Lapidus i Berg, 1982) arat c exist bacterii care avanseaz ca i cnd s-ar deplasa pe nite fire. Ali autori (Pate i Chang, 1979) evideniaz prezena unor organe de rotaie sau a unor fibre contractile (Burchard, 1984). Micri specifice de alunecare au fost observate doar la bacteriile gram-. Unele specii de Proteus i de Vibrio au un mod aparte de deplasare ce este denumit "roire" (swarming) i care a fost descris de Willians n 1978. Celulele iau n mediu lichid o form cocoid-i noat cu ajutorul unor flageli. Pe un mediu nutritiv gelozat aceste
bacterii "roiesc" prin glisare, f o r m n d colonii c u aspect d e valuri

concentrice (fig. 2.29). Aceast adaptare este de fapt, un mod de deplasare spre zone mai bogate n nutrieni, prsind zonele unde acetia s-au epuizat.

culturii

Punct de nsmriare

Fig. 2.29 - Dezvoltarea unei culturi de Proteus n urma unei nsmnri punctuale pe suprafaa unui mediu solid

Henrichsen (1983) a descris la coccobacili i coci (gen Neisseria, Moraxella, Acinetobacter), micri particulare de "convulsie" (twiching) pentru care nu s-au gsit nici n prezent explicaii adecvate. 2.2.7.1 Flagelii i mobilitatea Flagelii bacterieni sunt organe care servesc la micarea (propulsarea) celulei. Ei nu trebuie confundai cu flagelii celulelor eucariote care sunt foarte diferii att ca structur ct i ca surs de energie i mecanism de aciune. Flagelii bacteriilor sunt vizibili la microscopul optic prin tratamente simple aplicate celulei. Numai prin metode specifice (metoda clasic Leifson, cu fuxin bazic sau Fontana - Triboudeau, prin impregnare cu argint), aceste structuri pot fi evideniate, n urma aplicrii alternative a unui mordant i a unei soluii coloidale ce se depune pe suprafaa lor. Descrierea detaliat a formei lor, a modului de inserie i a dimensiunilor acestora este posibil numai n urma examinrii la microscopul electronic. Ei sunt filamente foarte fine de 20nm diametru, cu o lungime ce poate atinge lOmm (de 10 ori lungimea bacteriei). Filamentul flagelar nu este nici rectiliniu, nici curbat la ntmplare, ci el prezint o form ondulat regulat, ca o elice perfect. Aceast elice este acionat de un motor bazai inserat la nivelul membranei citoplasmice i care determin mobilitatea (fig. 1.1a). Flagelii majoritii speciilor se pot roti fie n sensul acelor de 84

ceasornic ("clockwise"), fie n sens contrar acestora (" coun terclockwise"). Speciile bacteriene se disting adesea prin modul de distribuie al flagelilor. De 1a nceput trebuie artat c toate bacteriile care nu au flageli se numesc atriche (trikhos, gr. = pr). Cele care prezint flageli pot fi la rndul lor: monotriche, cu un singur flagel, situat de regul la unul din capete (polar). Bacteriile care prezint 2 flageli situai la cte un capt al bacteriei se numesc amfitriche. Acele bacterii care au la unul din capete un mnunchi ntreg de flageli (lophos, gr.=smoc, mnunchi). Exist i bacterii la care flagelii sunt mprtiai pe toat suprafaa celulei, ele numindu-se peritriche (fig. 2.30 i 2.31).

Fig. 2.30 - Tipuri de distribuie a flagelilor existente la bacterii: monotriche (a), lofotriche (b), peritriche (c).

Fig. 2.31 - Evidenierea la microscop a tipurilor de distribuie a flagelilor: monotrich (a), la Pseudomonas, lofotric (b), la Spirillum, peritrich (c), la Pro teu s vulgaris.

2.2,7.2 Ultrastractura flagelilor bacterieni Microscopul electronic cu transmisie permite observarea faptului c flagelul bacterian este format din trei pri: - partea cea mai lung i mai evident este filamentul flagelar care apare la suprafaa celulei; - corpul bazai este ngropat n celul; - crligul leag filamentul la corpul bazai; Filamentul este de fapt un cilindru gol, format dintr-un singur tip de proteine, numit flagelin, cu masa molecular variabil (30.000 60.000).

Crligul i corpul bazai sunt foarte diferite de filament. Primul este un pic mai larg dect filamentul i este constituit din diferite subuniti proteice. Corpul bazai este cel mai complex (fig. 2.32). La E.coli i la cea mai mare parte a bacteriilor Gram-, corpul bazai are 4 inele ataate la un ax central. Inelele exterioare L i P se asociaz cu lipopolizaharidele i respectiv cu peptidoglicanul. Inelul M, intern, este ataat membranei plasmatice. Bacteriile Gram+ au doar 2 inele n corpul bazai, un inel intern conectat la membrana plasmatic i un altul, probabil ataat la peptidoglican.

22 nm a

plasmatic b

Fig. 2.32 - Ultrastructura flagelilor bacterieni la bacteria Gram-(a) i la bacteria Gram+(b)

86

2.2.73 Geneza flagelilor Aceasta este un proces foarte complicat care necesit aciunea a 20 - 30 gene. O gen codeaz flagelina, 10 gene codeaz proteinele prezente n crlig i n corpul bazai Alte gene codeaz sinteza i funciile flagelului. Subunitile flagelinei sunt probabil, transportate traversnd tubul gol al filamentului. Cnd ele ajung la extremitatea filamentului se asambleaz spontan, n aa fel nct filamentul crete, mai degrab la capt dect la baza lui (fig. 2.33). Sinteza filamentului este un exemplu excelent de autoasamblare. Prin acest proces se formeaz spontan mai multe structuri, fr ajutorul unor enzime specifice sau al altor factori.

Membran extern Peptiloglican Membran plasmatic

Ribozomi

*^

Fig. 2.33 - Creterea filamentului flagelar (unitile de flageiin se asambleaz la

extremiti)

Flagelii procariotelor au form de elice rigid, iar bacteria se deplaseaz cnd elicea se nvrte la fel ca i elicea unui vapor. Exist forme mutante cu flageli rigizi sau cu un crlig, n mod particular, foarte lung. Acestea nu se pot deplasa. Sensul de rotaie al flagelului determin tipul de micare al bacteriei. Flagelul monotrichelor se mic n sens invers acelor de ceasornic. Celula este propulsat nainte, iar flagelul treneaz spre spatele ei. Peritrichele se deplaseaz de o manier similar (fig. 2.34). Deci, pentru a avansa, flagelii se rotesc n sens contrar celui al acelor de ceasornic. Dac flagelii se nvrt n sensul acelor de ceasornic, celula se rotete n jurul ei nsi (se rostogolete), schimbndu-i brusc sensul de deplasare. Observarea direciei de deplasare a bacteriilor este posibil utiliznd un microscop special "de urmrire" adaptat special acestui scop. Astfel s-a constatat c, n absena unui stimul special, celula parcurge un drum n linie dreapt timp de 1 secund, dup care are loc o schimbare brusc de direcie echivalent unei rostogoliri i din nou o micare n linie dreapt .a.m.d. Cercettorii au lansat ipoteza c flagelii se rotesc din cauza interaciunilor dintre inelele S i M. La bacteriile Gram+ se presupune c inelul S, fiind ataat de peretele celular nu poate participa la realizarea rotirii. Inelele P i L de la bacteriile Gram- acioneaz ca nite rulmeni cu bile fa de o ax de rotaie. De asemenea, se consider c piesa pasiv a ansamblului este corpul bazai. Mecanismul realizrii micrii nu este nc pe deplin elucidat. Flagelul este un sistem foarte eficient pentru deplasarea bacteriei n mediul acvatic. S-a constatat c bacteriile se deplaseaz cu ajutorul flagelilor (prin nnot) cu o vitez de 20-90 mm/sec., ceea ce este comparabil cu deplasarea unui om de l,8m care strbate ntr-o secund de 5 ori lungimea propriului su corp, ceea ce este practic imposibil. La spirili i la spirochete s-au semnalat tipuri de micare cu totul diferite de ale altor bacterii. Trsturile morfologice specifice, determinante n realizarea deplasrii la aceste categorii de bacterii vor fi abordate n detaliu la capitolul 3.4. Spirillum volutans este o bacterie n form de helix, cu spirele rsucite invers sensului de rotaie a acelor de ceasornic. Ea posed dou seturi de fibrile de-a lungul celulei, sub o teac ce mbrac bacteria i fixate la cei doi poli ai celulei. Aceste fibre sunt responsabile de realizarea mobilitii. 88

Schimbare brusc a sensului de deplasare

Micare nainte

Schimbare brusc a sensului de deplasare

Fig. 2.34- Relaia dintre sensul de rotire al flagelilor i sensul de deplasare al bacteriei

Spirochetele au de asemenea, un aparat flagelar original care cuprinde doi flageli localizai n spaiul cuprins ntre membrana extern i cilindrul protoplasmic. Unul dintre flageli este inserat la un pol al cilindrului protoplasmic, iar celalalt este inserat la polul opus. Cei doi flageli, contrar altor flageli bacterieni, sunt flageli periplasmiei, rsucii n permanen n jurul corpului celular. Ei sunt n totalitate endocelulari. La aceast categorie de bacterii s-au observat 3 tipuri de micare: de translaie, de rotaie n jurul axei longitudinale i de flexiune. 2.2.7.5 Chimiotaxia Principalul motiv pentru care bacteriile se deplaseaz spre o direcie sau alta este prezena unor factori care le atrag sau le resping.

1 / M . w u w w A i i . v A v

uv/xivv

V / W 1 V J I I U v y V ^ U I U J I V /

pentru bacterii, ndeprtndu-le. Micarea bacteriilor orientat ctre substanele atractante sau n sens opus fa de substanele repulsive poart denumirea de chimiotaxie (pozitiv, respectiv negativ). O experien simpl poate fi improvizat la microscop pentru demonstrarea acestui fenomen. Examinnd un preparat microscopic bacterian proaspt constatm c bacteriile se mic mai mult sau mai puin ordonat. Dac ntr-un capt al lamelei picurm o substan atractant (de exemplu, un glucid) care se va prelinge uor pe sub aceasta printr-un capt al ei, vom constata c bacteriile i opresc micarea spre sensul iniial, ndreptndu-se spre direcia din care acioneaz factorul atractant. Aceast reacie se numete chimiotaxie pozitiv. n mod similar, s-a observat i efectul repulsiv al unei substane care determin o chimiotaxie negativ, adic ndeprtarea de punctul n care se nregistreaz o cretere a concentraiei substanei repulsive. Rspunsurile chimiotactice sunt observate la toate bacteriile mobile i n general la toate microorganismele mobile, indiferent de complexitatea lor. Bacteriile rspund la concentraii foarte sczute de substane atractante (10~8M pentru unele glucide), iar amploarea rspunsului lor crete odat cu mrirea concentraiei substanei. Substanele repulsive trebuie s fie n concentraie mare pentru a fi detectate de bacterii. Dac ntr-un mediu sunt prezente simultan att substane repulsive ct i substane atractante, bacteria rspunde la substana aflat n concentraia cea mai eficient. Att substanele atractante ct i cele repulsive sunt detectate graie unor chimioreceptori, proteine specifice care se leag la substanele chimice i transmit nite semnale altor componente ale sistemului chimiosenzitiv. Pn n prezent s-au evideniat n jur de 20 chimioreceptori de substane atractante i 10 de substane repulsive. Acetia sunt situai n spaiul periplasmic sau n membrana citoplasmic. Unii receptori particip la primele etape ale transportului glucidelor n celul. Componentul chimiotactic al bacteriilor a fost studiat la bacteria E.coli ce se deplaseaz iniial spre o direcie la ntmplare n cmpul 90

microscopic. Acest traiect se numete curs. La scurt timp, are loc o schimbare de sens - ntoarcere. Aceste dou etape alterneaz, aa cum se vede n figura 2.35. n prezena unui gradient de substane atractante, ntoarcerile se reduc, iar cursele devin mai lungi, bacteria ndreptndu-se spre concentraia cea mai mare a substanelor atractante.
ntoarcere Meranainte

Fig. 2.35 - Sensul micrii dirijate la bacterii: micarea la ntmplare n absena unei substane atractante (a); micarea dirijat ctre un gradient de substane atractante (b) (numrul de ntoarceri este mai redus)

2.2.7.6 Mecanismul chimiotactic Bacteriile au un sistem chimiosenzorial compus din proteine receptoare specifice care sunt repartizate pe toat suprafaa membranei citoplasmatice n numr mare de exemplare, ele determinnd rspunsul chimiotactic (Armitage, 1992). Pentru c ele sunt metilate n cursul acestui rspuns, au fost numite proteine metilabile ale chimiotaxiei (Methylaccepting Chemotaxis Proteins MCP). Aceste proteine care au o greutate molecular de, aproximativ 60kDa formeaz o vast familia. Ele fixeaz nite substane chimice care sunt de fapt nite compui efectori de chimiotaxie,, pe faa periplasmic a membranei. Aceste legturi pot fi directe, de exemplu cu acizii aminai sau indirecte, prin intermediul proteinelor periferice de legtur, n cazul unor zaharuri. MCP iniiaz o serie de reacii de fosforilare citoplasmic. Acestea conduc la modificarea sensului de rotaie a motorului flagelar. Exist 5 clase de MCP codate de genele trs, tar, trg, tap, tip, fiecare dintre ele fiind responsabil de rspunsul taxiei n raport cu grupul de chimioefectori. Semnalul trimis de efectorul chimic i captat de moleculele receptoare de MCP trebuie s fie trasmise pn la motorul flagelar. Exist 6 proteine citoplasmice care

2.2.7.7 Alte forme de taxie Chimiotaxia poate fi considerat de importan secundar fa de alte tipuri de taxii care rspund la oxigen sau la lumin. Aerotaxia Observaiile lui Engelmann, 1883 (citat de Leclerc, 1995) au artat c bacteriile de ap dintr-un heleteu, examinate n preparate fixe ntre lam i lamel, pot s se orienteze diferit astfel: unele, aerobe obligate, se aglutineaz n jurul unei bule de aer, n timp ce altele, anaerobe obligate, se ndeprteaz ct mai mult posibil de aceasta, iar o a treia categorie, adic microaerofilele, care prefer oxigen mai puin, fiind intermediare ntre primele dou, rmn ntre acestea i ca poziie n spaiul lamei. n mediul acvatic natural, n care se multiplic abundent cyanobacteriile (fotosintetice), oxigenul produs n cursul fotosintezei atrage n aceast zon bacteriile mobile iubitoare de oxigen. Rspunsul aerotactic pune n joc interaciunea oxigenului cu citocromul terminal i activitatea lanului de transport electronic. Fototaxia La bacterii exist mai multe tipuri de foto-rspunsuri Printre ele, fototaxia este schimbul de orientare al unei bacterii ca rspuns la un gradient luminos. Nu este surprinztor c bacteriile fotosintetice care depind de energia luminoas pentru cretere, manifest un comportament fototactic. Dac se orienteaz un fascicul luminos ctre o suspensie de chromatium, pe o lam port-obiect, aceasta fiind anterior plasat n obscuritate, bacteriile se regrupeaz n zona luminat. Ele par a fi prizonierele acestei zone pe care nu o pot prsi. Magnetotaxia Blakemore (1982) a examinat la microscop populaii bacteriene provenind din zona marginal a mareelor i a remarcat unele specii care se deplaseaz n mod constant n aceeai direcie, aceea a cmpului magnetic terestru. Aceste bacterii sunt denumite magnetotactice i posed un lan de particule opace de electroni ("buzunare negre") aliniate paralel cu axa mare a celulei i care pot fi vzute la microscopul electronic. Aceste particule numite 92

magnetosomi, sunt constituite dintr-un oxid de fier numit magnetit (Fe 3 0 4 ). Acest lan s-ar putea asemna cu acele unei busole care permit bacteriei s se orienteze paralel cu liniile de for ale cmpului magnetic terestru. Comportamentul magnetotactic este cu totul deosebit de fenomenele tactice precedente. El acioneaz ca un rspuns la un cmp geomagnetic ce determin orientarea corpului celular i nu reprezint o deviere de direcie a micrii bacteriei ca rezultat al inversrii micrii flagelare.Bacteriile magnetotactice din emisfera nordic tind s se orienteze spre nord i cele din emisfera sudic tind s se orienteze spre sud. De la descoperirea lui Blakemore, bacterii magnetotactice au fost izolate dintr-un mare numr de medii. Ele aparin diferitelor grupe morfologice: bacili, vibrioni, bacterii spiralate. Recent au fost izolate noi specii de bacterii magnetotactice care conin sulf (Mann, 1990, citat de Leclerc, 1995). 2.2.7.8 Efectul comportamentului chimiotactic n lumea bacterian Rspunsurile bacteriilor la diferii stimuli depind de habitatul lor specific i sunt extrem de variate. Bacteriile fotosintetice, ca de exemplu acele din genul Chromatium, sunt atrase de hidrogenul sulfurat (donor de electroni) care este o substan repulsiv pentru marea majoritate a speciilor bacteriene. Benzoatul,care este un compus repulsiv pentru enterobacterii, este, din contr, cutat i metabolizat de specia Rhodopseudomonas putida. Vibrio fumissii este o bacterie marin care exercit o atracie foarte puternic pentru chitin, chiar la concentraii sczute. Ea nu are nici o atracie pentru un alt compus extrem de cutat de ctre enterobacterii, i anume aspartamul. n consecin, dac mecanismele de percepie tactic sunt n ansamblu aceleai lund n considerare diferite familii de bacterii, receptorii sau cile metabolice implicate au evoluat n timp rspunznd specific exigenelor fiecrei specii. Puterea invaziv Cu toate c n prezent nu exist date suficiente, iar interpretrile care se dau sunt deseori controversate, este evident c fenomenul de chimiotaxie joac un rol important n procesele de invazie bacterian. n sprijinul acestei idei menionm faptul c numeroase cercetri au

oaimoneua zypni), m ump ce sueie oacienene moone nu suni capaone de o asemenea invazie. De asemenea, sueie mutante imobile de Pseudomonas aeruginosa sunt incapabile de a invada plgile de arsuri n modelele experimentale cu anticorpi (Leclerc, 1995). Asocierea simbiotic Fenomenele de interaciune bacterian cu rizosfera au fost extrem de studiate de ctre diveri cercettori. Exist n sol o competiie intens pentru nutrieni i numeroase bacterii uzeaz de chimiotaxie pentru obinerea unor compui chimici specifici. Bacteriile din genul Agrobacterium i Rhizobium sunt exemple foarte bine cunoscute. n sol, unde aceste bacterii se afl n numr mare, infectarea plantei ia natere la extremitile radicelelor. Aici se elibereaz nite compui care exercit atracie asupra bacteriilor. Formarea nodozitilor i implicit stabilirea simbiozei bacterie - plant leguminoas st la baza fixrii azotului atmosferic de ctre aceast categorie de plante superioare. Dispersia microorganismelor n mediul acvatic, srac n nutrieni organici, unde bacteriile au o rat de cretere mic, mobilitatea i chimiotaxia pot favoriza dispersia bacteriilor permindu-le s fie mai competitive n lupta pentru existen. Atracia precede fenomenele de adeziune bacterin la diverse substraturi: plancton, materii vegetale sau animale n descompunere. Unele bacterii care triesc n stare liber (Pseudomonasy Spirochetele) au un comportament chimiotactic foarte activ, mai ales dup o perioad de caren n nutrieni. 2.2,8. Pilii i fimbriile Numeroase bacterii Gram - posed apendici scuri, filiformi, mult mai fini dect flagelii i care nu sunt implicai n micare. Aceti apendici au putut fi evideniai graie microscopiei electronice i s-au numit fimbrii sau pili. Duguid (1955) a propuse numele de fimbrii care n limba latin nseamn filament sau fibr. Puin mai trziu, n 1959, Brinton 94

introduce termenul de pili care n limba latin nseamn pr. In realitate ele sunt dou categorii morfologice i funcionale distincte. Prima categorie, fimbriile, reprezint filamente distribuite n numr mare (de ordinul sutelor) n jurul bacteriei. Ele sunt scurte (n jur de un micron lungime), rigide i casante. Prezena lor este n raport direct cu prioritile hemaglutinante ale bacteriei i cu puterea lor de adeziune la suprafaa altor celule. A doua categorie, pilii, sunt filamente mult mai lungi, de ordinul a 10 microni i n numr mai mic per celul (1-10). Ei sunt implicai n transferul ADN ntre bacteriile mascule i femele, deci sunt apendici cu funcii sexuale. De asemenea, unele virusuri bacteriene (bacteriofagi) se fixeaz specific la nceputul ciclului lor de reproducere la nite receptori prezeni pe pilii de sex. f Aa cum am artat anterior, fimbriile au un important rol n adeziunea celular graie unor adezine filamentoase. Alturi de acestea exist i adezine aa-numite amorfe sau afimbriare - amorfinele. Acest tip de adeziune este un fenomen de lipire specific. Ea pune n joc o adezin, molecul capabil s recunoasc o molecul a unei alte celule care se numete receptor i pe care se fixeaz. Exist dou tipuri morfologice de fimbrii. Unele au forma unor bastonae rigide de 5-7nm diametru i sunt cele mai frecvente. Altele apar ca nite fibre flexibile de 2-3nm diametru, sunt mult mai fine dect flagelii (20nm diametru) i se aseamn foarte mult cu pilii sexuali (8nm diametru). Ele sunt aezate n jurul ntregii suprafee celulare, de o manier peritrich, iar numrul lor variaz ntre 100 i 1000 per celul. La unele specii de Pseudomonasple pot fi polari sau bipolari. Dac la bacteriile Gram - apariia fimbriilor este un fenomen constant, bacteriile Gram + au foarte rar asemenea formaiuni. Ele au fost observate la unele specii de Corynebacterium i Actinomyces. De asemenea, au fost descrise la bacteriile patogene aparinnd Enterobacteriaceaelor, la Neisseria i Bordetella. n fig. 2.36 se pot observa fimbriile de la E.coli, cele mai studiate fimbrii bacteriene, datorit rolului pe care l au aceste structuri n exprimarea puterii patogene i a marii diversiti morfologice care face posibil chiar departajarea unor sue patogene ntre ele. Prin urmare, n exprimarea puterii patogene a acestor sue, fimbriile joac un rol important. Cu ajutorul acestora bacteriile se ataaz la celulele epiteliale ale mucoasei intestinale. Are loc totodat producerea de toxine denumite enterotoxine. Asemenea sue de E.coli produc boli

Fig. 2.36 - Celule de E.coli prezentnd flageli (firele mai lungi) i fimbrii (firele mai scurte); imagine la microscopul electronic (tehnica prin umbrire metalic) (dup Senez, 1968)

Adeziunea i adezinele Fimbriile sunt cele mai vechi organite cunoscute, capabile s adere la o celul graie adezinelor prezente la extremitatea filamentelor sau uneori pe una din feele acestora. Adezinele fimbrilare sunt lectine,adic molecule proteice care nu sunt de origine imunitar i care fixeaz unele glucide. La bacterii exist numeroase alte tipuri de adezine, altele dect cele fimbrilare i care sunt tot lectine.

Compartimentele membranare purttoare de structuri sau polimeri responsabili de adeziunea celular sunt: membrana extern, membrana citoplasmic, peptidoglicanul i polimerii extracelulari de suprafa. Receptorii de adeziune Acetia sunt molecule care recunosc adezinele. Exist dou mari categorii de receptori. Prima categorie cuprinde molecule de glucide purtate de ctre glicolipidele i glicoproteinele celulelor eucariote sau de lipopolizaharidele i polizaharidele capsulare ale celulelor bacteriene. A doua categorie include molecule proteice ale matricei extracelulare din esutul gazd. 2.2.9. Forme de rezisten i spori Unele bacterii triesc ntr-un habitat relativ stabil care nu este expus unor modificri profunde. Este cazul bacteriilor patogene, al parazitelor intracelulare sau extracelulare din organismul uman i care beneficiaz de un mediu perfect stabil, permind optimizarea creterii bacteriilor n condiiile date. Alte bacterii trebuie s se adapteze unor habitate cu condiii contrastante, cu oscilaii de pH i de temperatur, cu diverse carene nutriionale etc. (de exemplu bacteriile care populeaz tubul digestiv). Aqestea trebuie s-i elaboreze strategii diferite n funcie de caz pentru a putea supravieui. Ele pot s se multiplice foarte rapid atta timp ct condiiile sunt optime i foarte lent n circumstane nejfavorabile, cnd creterea nu mai este posibil. Supravieuirea poate si se realizeze prin adoptarea unei forme latente n ateptarea unor condiii favorabile de via. Astfel, exist bacterii care alterneaz stadiile de cretere vegetativ cu acelea de rezisten - spori. Unele specii bacteriene prezint o difereniere alternativ form fix - form mobil. Exist, de asemenea, bacterii care au adevrate cicluri de via foarte complexe, cu forme sesile, mobile, latente, multicelulare. Sporii nu sunt altceva dect forme latente de evoluie pe care anumite bacterii le-au adoptat pentru supravieuirea ntr-un mediu ostil, ateptnd condiii mai propice de via activ.

tfacteniie poseda o mare diversitate de spori. A strei, exista unu endospori, extrem de rezisteni la condiiile nefavorabile de mediu, iar alii, spori fragili, mobili, zoospori. Principalele categorii de spori sunt urmtoarele: Endosporul - este forma cea mai comun de spor bacterian care apare n interiorul celulei vegetative denumite sporangiu. Sporii de origine hifal (fig. 2.37) - sunt caracteristici actinomycetelor i poart denumiri mprumutate din micologie, urmare a asemnrilor morfologice dintre aceast categorie de bacterii i mycete. Din aceast grup, n funcie de specie, fac parte urmtoarele categorii de spori: Axtropom - se mai numesc impropriu conidii i se formeaz prin segmentarea hifelor ca urmare a formrii unor septuri transversale. Ei sunt meninui n lanuri acoperite de o teac extern subire, fie neted ( Streptomyces venezuelae), fie acoperit de apendici asemntori unor epi (Streptomyces viridochromogenes). Sporii rezultai prin fragmentare (oidiospori) - se formeaz prin fragmentarea miceliului, mai precis prin dezarticularea elementelor hifale la nivelul septurilor transversale. Aceti spori se ntlnesc la genul Nocardia. Aleuriosporii - sunt spori solitari care iau natere apical sau lateral pe sporofori scuri, iar apoi sunt eliberai prin liza hifei care i menine. Sporii meninui n vezicule - se formeaz prin septarea hifelor existente n interiorul unui nveli care le nconjoar ca o vezicul sporal. Ei pot fi mobili - zoospori sau imobili - aplanosporL Chitii - sunt caracteristici bacteriilor din genul Azotobacter i iau natere prin transformarea unei celule vegetative n ntregime, prin ngroarea peretelui ei celular. Totui rezistena lor este inferioar
endosporilor.

Gonidiile - se formeaz prin condensarea i fragmentarea protoplasmei unei celule vegetative numitegonidangiu. Dup ruperea peretelui celular al gonidangiului are loc eliberarea n mediu a 98

gonidiilor din interior, ele putnd fi mai multe. Nu au o rezisten caracteristic sporilor. Mixosporii, heterochitii i akineii sunt alte forme particulare de spori.

Fig. 2.37 - Diferite tipuri de spori de origine hifal: Artrospori (1 i 2), Spori de fragmentare (3), Aleuriospori (4), Spori formai n vezicule sporale i un zoospor flagelat n dreapta (5), Aplanospori (6), Zoospori (7).

2,2.9.2. Strategii de rezisten Alternana a dou stadii Forme vegetative - Forme latente Exemplele cele mai cunoscute sunt acelea ale genurilor Bacillus i Clostridium. De altfel, sporul apare n special la bacili, dar exist, n

In condiii de deficien nutriional, celulele vegetative, in plina activitate, nceteaz s se mai multiplice prin diviziune binar, simetric i adopt un gen de diviziune asimetric, rezultnd n final aa-numitul spor intern sau endospor. El este o celul rezistent la agenii fizicochimici nefavorabili i n particular la temperatur, radiaii U.V., dezinfectani chimici i uscciune, avnd o via latent - stare criptobiotic. Exist dovezi care arat c sporii pot rmne viabili timp foarte ndelungat, chiar 500 ani. Spori de Actinomycetae au fost gsii vii n depozite cu vechime de 7 500 ani. Unii spori dintr-o categorie mai special, prezeni la anumite specii microbiene, sunt nconjurai de o membran mult mai ngroat dect n mod obinuit. Este cazul unor specii aparinnd genului Azotobacter (bacterii fixatoare de azot) la care se formeaz un tip particular de spor denumit chist Unele bacterii metilotrofe (Methylosinus trichosporium) dau natere unor exospori, celule dorminde de un tip mai puin obinuit. Ei apar la sfritul fazei staionare de cretere cnd unele celule se alungesc n form de fus dnd un mugure care dobndete o refringen deosebit n mod progresiv. Acetia sunt rezisteni la uscciune i temperaturi nefavorabile. Forme sesie - Forme mobile Acest tip de alternan este prezent la Caulobacter crescentus, cel mai tipic exemplu, manifestat prin prezena unor celule mobile care nnoat, incapabile de diviziune i a unor celule cu tij (bacterii prostecate) capabile de reproducere. Tija (apendicele sau prosteca) permite ataarea celulei mam la un anumit substrat, (fig. 2.38). La Sphaerotilus i Leptotrix apar structuri foarte asemntoare celor de la Caulobacter. Forma sesil de la Sphaerotilus este o "carapace" filamentoas care ncorseteaz celulele i care se fixeaz la un substrat printr-un crampon adeziv aflat la unul dintre extremiti. n cursul diviziunii celulare se formeaz un flagel polar, iar "carapacea" este prsit. Atunci cnd celulele flagelate ajung ntr-un loc nou unde se pot fixa, ele se divid din nou. 100

Fig. 2.38 - Ciclul de dezvoltare - dimorGsm - la Caulobacter crescentus

Actinoplanele prezint un alt fel de ciclu de multiplicare. La acestea, organismele n form sesil sunt reprezentate de un miceliu vegetativ, iar forma mobil este un spor flagelat ce se formeaz n interiorul unui sporange. Forme infecioase - Forme reproductoare Cazul apare la genul Bdellovibrio care cuprinde specii bacteriene parazite obligat intracelulare n alte specii bacteriene. Aceste specii parazite prezint o alternan ntre forma mobil cu cil polar, extracelular - form nereproductoare i aceea aflagelat - reproductoare, localizat n spaiul periplasmic al bacteriei parazitate. Partea anterioar a bacteriei parazite se dilat, dnd natere unei structuri asemntoare unui crampon care servete la fixarea ei pe celula parazitat. Chlamydiile sunt parazite obligate la om i la unele animale. Ele prezint de asemenea o alternan ntre stadiul extracelular - corpi elementari i stadiul intracelular - corpi reticulai Primul stadiu reprezint forma dormind, rezistent, incapabil de diviziune i foarte infecioas, iar al doilea, reprezint forma metabolic activ i reproductoare. Cicluri complexe Numeroase studii s-au efectuat asupra mixobacteriilor, bacterii Gram - prezente n mod normal n sol i care au unele proprieti unice:

Specia Myxococcus xanthus face parte din aceast categorie de bacterii. n cursul ciclului lor de dezvoltare, celulele vegetative pot forma corpi de fructificaie transformndu-se apoi n myxospori (fig. 2.39).
Cap fructifer Mixospor matur Germinare

Cretere vegetativ Fig. 2.39 - Ciclul de. dezvolt are la Myxococcus xanthus

Specii ale genului Streptomyces, bacterii actinomycete, reprezint un exemplu de complexitate n privina ciclului de dezvoltare. Ea este caracterizat prin formarea a dou tipuri de miceliu, subteran i aerian, prin alternana ntre o form celular vegetativ i o form sporulat, prin autoliza unei fraciuni importante a miceliuluL Etapele formrii sporilor sunt prezentate n fig. 2.40.

coeicolor; cretere vegetativ (1), hif sporulant n faza de ondulare a extremitii (2), formarea septurilor de sporulaie (3), apariia unor gtuituri ntre sporii tineri, urmat de o ngroare a pereilor acestora (4), maturarea sporilor (5) imagine de ansamblu (6)

Fig. 2.40 - Schema transformrii hifelor aeriene n spori la

Streptomyces

102

Un alt exemplu ar putea fi acela al speciei Rhodomicrobium vannielii, o bacterie fototrof cu apendici celulari n form de muguri. Ciclul ei de dezvoltare este extrem de complex, cuprinznd forme vegetative care alterneaz cu acelea latente i forme sesile, reproductoare, care alterneaz cu acelea ce roiesc. ntr-o cultur de R. vannielii este posibil s observm n acelai timp 3 tipuri celulare: bacterii peritriche, celule ovoidale reunite ntre ele prin ramificaii tip micelian i exospori angulari rezisteni la cldur. Celulele flagelate sunt asemeni celulelor mobile ale genului Caulobacter, incapabile de diviziune. Formarea lor este indus de condiiile de intensitate luminoas sczut i de coninutul n C0 2 sporit. Celulele care nmuguresc provin din celule flagelate i au 3 opiuni de dezvoltare n funcie de condiiile de intensitate luminoas, de presiunea parial de C0 2 i de concentraia n nutrieni. Dac intensitatea luminoas este puternic i presiunea C0 2 sczut, celulele se dezvolt prin apariia formelor nmugurite (cu apendici) i miceliene. n situaia invers (lumin slab i presiune C0 2 crescut), celulele cu apendici mugurali se ntorc spre forma roitoare (mobil). n fine, atunci cnd elementele nutritive se epuizeaz i ajung sub un anumit prag, celulele cu apendici mugurali dau forme latente care se pot compara cu exosporii metilotrofelor. Diferenierea celular Cyanobacteriile sunt foarte reprezentative n acest sens, prezentnd o difereniere celular veritabil. n cursul ciclului lor de dezvoltare apar mai multe tipuri de celule specializate n reproducie. Unele dintre ele se numesc baeocite i sunt sferice, dezvoltndu-se n interiorul celulelor vegetative. Ele cresc i se divid, apoi sunt eliberate la exterior prin distrugerea nveliului exterior. Altele se numesc homogonii i provin din fragmentarea filamentului sau trichomului. Mai exist o categorie care se numesc akinei i care deriv din celule vegetative. Ei se caracterizeaz prin proprietatea de rezisten i un metabolism latent (redus ca intensitate), la fel ca i cel al sporilor. n fine, heterochitii sunt celule mai mari dect celulele vegetative adiacente lor. Ei au o membran extern multistrat i conin un sistem enzimatic foarte apropiat aceluia al fixrii azotului atmosferic (nitrogenez). Formarea heterochitilor este un fenomen de difereniere celular de acelai fel ca i acelea observate la organismele animale i vegetale. n tabelul 2.6 sunt prezentate principalele forme de rezisten existente la bacterii i caracteristicile acestora.

Forme de rezisten la bacterii

Caracteristici Rezisten la deshidratare Termorezisten Structur Genuri sau grupe de bacterii Endospori
++ ++

Tabelul 2.6

Exospori
++
+4-

Mixospori (Microchiti)
+4-

Chiti
++

Artro spori
++ +

cortex tunic (exosporium)*

Bacillus Clostridium Desulfatomaculum Sporosarcina Thermo actinomyces Methanotrophes Methylosinus

nveli sporal sau capsul

Myxobacteria Myxococcus Archangium Stigmatella

exocystonium exin
Azotobacter Metanotrophes Methylobacter Methylococcus Methylomonas

Carapace fibroasi hifei

Streptomyces

++ foarte mare + moderat

- slab * prezen posibil

2.2.9.3. Endosporul i sporularea (sporogeneza) Endosporul este cea mai cunoscut i mai frecvent form de rezisten la bacterii.El prezint o importan practic deosebit att pentru microbiologia industrial ct i pentru cea medical datorit rezistenei acestei forme la diferite tratamente chimice i fizice de dezinfecie. Numeroase bacterii pot fi mai greu de nlturat din diferite medii sau produse, simpla dezinfecie fiind ineficient. Doar sterilizarea complet (autoclavarea, tindalizarea) reuete s distrug sporii. Endosporul prezint i un interes teoretic considerabil. Cum bacteriile genereaz aceste entiti de o manier foarte organizat n numai cteva ore, formarea endosporului este un bun subiect de cercetare asupra sintezei unor structuri biologice complexe. Endosporul poate fi studiat cu ajutorul microscopului optic. Acesta apare ca o zon incolor la bacteriile colorate cu albastru de metilen sau cu ali colorani simpli, sporul fiind o formaiune refringent impermeabil la cea mai mare parte a coloranilor. Exist totui i tehnici specifice de colorare a sporilor. Poziia sporilor n celula mam denumit sporange, difer frecvent n funcie de specie, lucru foarte util pentru identificarea taxonomic. Astfel exist spori terminali, subterminali i centrali (fig. 2.41).

(c)

Fig. 2.41 - Exemple de localizri ale endosporului n celula bacterian: localizare central (a), localizare subterminal (b), localizare terminal (c), localizare terminal i gonflare a sporangelui (;ti).

Deseori;sporul este gonflat i tot att de mare ca i celula mam. n fig. 2.42a se pot vedea prile componente ale endosporului nainte

mpermeaona i responsaona de rezistena sporului la produse chimice. Cortexul, care poate ocupa mai mult de T din volumul sporului, este localizat sub tunic. El este constituit din peptidoglican. Membrana sporala este de fapt n cortex i nconjoar protoplastul sporal. Acesta din urm posed toate structurile celulare, cum ar fi: ribozomi, nucleoid. La maturitate, odat cu eliberarea sporului din sporange, are loc formarea deasupra cortexului a unui nveli fin, numit exosporium, care devine stratul extern al sporului (fig. 2.42b). nc nu se tie foarte exact care sunt adaptrile specifice care fac din spori structuri att de rezistente la cldur i ali ageni letali. Se cunoate faptul c mai mult de 15% din greutatea uscat a unor spori este constituit din acid dipicolinic complexat cu ioni de calciu. Mult timp s-a crezut c acidul dipicolinic este responsabil de rezistena la cldur a sporului. Totui au fost izolai mutani rezisteni la cldur i lipsii de acid dipicolinic. n unele cazuri, complexul acid dipicoliniccalciu stabilizeaz acizii nucleici ai sporilor. Deshidratarea protoplatilor pare foarte important pentru rezistena la cldur. Cortexul poate scoate apa din protoplast prin osmoz, protejndu-1 astfel de cldur i radiaii. n rezumat, rezistena sporilor la cldur este dat de mai muli factori: stabilizarea unor componente ca ADN graie complexului acid dipicolinic-calciu, deshidratarea protoplastului, stabilitatea crescut a unor proteine celulare la bacteriile adaptate la o cretere mare a temperaturii.

Fig. 2.42a - Structura sporului nainte de eliberarea lui din sporange (.Bacillus megatherium): interiorul sporului (1), membran sporal (ntre sgei) (2), cortex (3), tunic (4), nucleoidul sporangelui (5), citoplasma sporangelui (6), peretele celular al sporangelui (7) (microscopie electronic J.P.Gourret).

106

Fig, 2.42b - Structura endosporului matur, liber, la Bacillus anthracis: exosporium (EX), tunic (T), cortex (CX), membran sporal (MS), nucleoidul din protoplastul sporal (N), ribozomi (R). Sporularea (sporogeneza) Formarea sporului ncepe n momentul n care creterea celular nceteaz din cauza lipsei elementelor nutritive. Este vorba despre un proces complex care se deruleaz n 7 faze. n fig. 2.43 sunt prezentate fazele sporulrii la o bacterie sporulant.

Timpi ' Stadiu

Aspect citologic
**

Definirea Cretere stadiului

Filament Septum de cromatidic axial sporulaie

Prespor

Formare cortex

Rezistent

Spor matur urmat tunic de liza sporangelui Octanol Cldur Formare

^CQ 5

Fig. 2.43 - Prezentarea schematic a fazelor sporulrii

ntinde pe toat lungimea celulei; are loc i iniierea procesului de septare, motiv pentru care deseori se vorbete despre o faz de preseptare; Faza 2 - materialul nuclear se fragmenteaz i se condenseaz la cele dou extremiti ale celulei i totodat membrana citoplasmic se invagineaz ntr-o poziie celular asimetric. Spre interiorul celulei are loc unirea sau fuziunea celor dou zone de invaginare, astfel nct se formeaz un septum subpolar care mparte celula n dou pri inegale. Modul de formare a septului la sporulare se aseamn ntru totul cu acela al formrii acestei structuri n cazul diviziunii celulei vegetative; Faza 3 - n zona de dimensiune mai mic a celulei se autonomizeaz o zon lis, transparent, coninnd citoplasma, aparatul nuclear i o membran dubl continu (o parte este membrana citoplasmic, iar cealalt parte este viitorul nveli sporal); apare sporul imatur numit i prespor.; acest stadiu este determinant pentru c apare membrana dubl, dubla polaritate i conturarea funciilor de transport; procesul de sporulare este definitiv angajat, fiind ireversibil; Faza 4 - celula mam continu s produc compartimente ale nveliurilor sporale; acestea se aseamn cu acelea ale peptidoglicanului care se amplaseaz ntre straturile dublei membrane celulare; se constat acumularea de acid dipicolinic i de calciu n core; se formeaz stratul monomorf numit cortex; Faza 5 - se sintetizeaz nveliurile proteice sau tunica; la Bacillus subtilis exist n jur de 10 proteine de nveli care sunt codate de gene cot din care 7 sunt cunoscute; aceste proteine bogate n legturi disulfurice de tip keratin, se amplaseaz la periferia presporului; la unele specii se sintetizeaz un alt strat proteic numit exosporium (tunic extern); Au fost observate mai multe variante la nivelul acestor nveliuri, n funcie de specie. Ele pot explica unele proprieti de rezisten (altele dect termorezistena), observate de asemenea n procesul de germinaie sporai. n timpul sporulrii sunt produse numeroase proteaze de acelai fel ca i n cazul creterii celulei vegetative. Au fost identificate 6 proteaze externe i 3 principale intracelulare. Studiul unor forme mutante sugereaz existena i a altor asemenea proteaze. 108

Faza 6 sporul este deja matur dobndind proprieti de rezisten la cldur i la o mare gam de solveni organici; Faza 7 - urmare a secreiei de enzime litice, celula mam se lizeaz, elibernd sporul; Proprietile sporului matur Sporii, dup maturarea lor lent sunt eliberai, aa cum am artat, prin autoliz,din celula vegetativ. Ei nu manifest nici o activitate metabolic decelabil i care poate da rezistena de excepie a acestei formaiuni la cldur., ageni chimici i radiaii. Termorezistena este proprietatea cea mai remarcabil i mai studiat. Sporii rezist la 80C timp de 10 minute, n timp ce formele vegetative ale bacteriilor sunt distruse imediat la aceast temperatur. Unii spori pot rezista i la fierbere timp de cteva ore. Aceast rezisten este n raport cu prezena unui constituent chimic specific, absent la formele vegetative - acidul dipicolinie (acidul piridin 2-6dicarboxilic). Acest compus forMat exclusiv n cursul sporulrii este un produs care pornete de la acidul diamino-pimelic. El se gsete sub form de dipicolinat de calciu. El reprezint 10-15% din greutatea uscat a sporului. Dac n locul calciului din structura compusului apare stroniul, se obine un spor defectiv, termosensibil. Un alt constituent este acidul L+N-succinil-glutamic, sintetizat din primele stadii ale sporulrii i n egal msur susceptibil de a avea un rol important n termorezistena sporului. Coninutul n ap al sporului este foarte sczut, ntre 15-20% din greutate, fa de coninutul celulei vegetative de 80%. Deshidratarea progresiv a sporului n cursul maturrii lui este un factor la fel de important pentru rezistena acestuia la temperatur. Prezena numeroaselor nveliuri sporale i n principal a cortexului, garanteaz pstrarea acestui coninut redus n ap. Cercetrile au artat c sporul este rezistent i la ali factori cum ar fi: radiaiile, ultrapresiunea, agenii chimici biocizi i biostatici. Supravieuirea sporilor este cu totul remarcabil, numeroase cercetri efectuate la Institutul Pasteur din Paris artnd extraordinara longevitate a acestei forme de rezisten bacterian. S-au gsit astfel spori n eantioane de esut uman prelevate de la mumiile egiptene datnd de mii de ani. n 1966, Bartholomeu i Paik

Germinarea sporului Dac plasm sporul n condiii favorabile de via pentru cretere, multiplicare, apar o serie de transformri progresive, el trecnd din starea criptobiotic (de via latent) n starea vegetativ (de via activ). Se parcurg n acest sens 3 stadii: a) Activarea sporului Chiar dac sporul este plasat ntr-un mediu propice pentru germinaie (spre exemplu, un mediu bogat n elemente nutritive),sporul nu va germina dect dac va fi "activat" cu ajutorul unui agent capabil de a leza tunica sa extern. Acest agent activator poate fi: mecanic(oc, abraziune), fizic (cldur), chimic (acizi, compui cu grupri sulfhidrice libere). Activarea termic este ns cea mai cunoscut. nclzirea sporilor ntre 65-95C activeaz sporul, grbind germinarea. Pe acest efect se bazeaz procedeul tehnic de sterilizare prin tindalizare. Aceast faz poate fi ns reversibil, dac nu sunt meninute condiii optime de via. b) Iniierea germinaiei Germinarea nu se va desvri dect n condiiile unei bune hidratri, a prezenei unor metabolii ca: alanina, adenozina, ionii anorganici cum ar fi magneziul, care penetreaz tunica, declannd procesul autolitic. Astfel, peptidoglicanul este distrus n cteva minute, iar dipicolinatul de calciul este eliberat. Numeroi constitueni ai sporului sunt degradai de ctre enzime hidrolitice. Dup eliminarea barierei corticale, sporul este mbibat cu ap i se umfl. El devine mai permeabil pierzndu-i refringena i rezistena la cldur i la colorani. Cea mai mare parte a energiei stocate n acid fosfogliceric este transformat n ATP. Procesul este ireversibil. Desfurarea acestei faze nu este inhibat de antibioticele care inhib sinteza proteinelor i a acizilor nucleici, ceea ce demonstreaz c enzimele rspunztoare de germinare sunt preexistente n spor. c) Emergena (germinarea propriu-zis) (fig. 2.44) 110

Fg. 2,44- Emergena endosporului la specia bacterian Clostridiumpectinovorumn timpul procesului de germinaie (dup Prescott, Harley, Klein, 1995)

Alterarea cortexului i a tegumentelor externe, face s apar noua celul vegetativ coninnd protoplastul sporal nconjurat de membrana sporal. Urmeaz imediat o faz foarte activ de biosintez i de reluare a creterii vegetative n mod progresiv. Sporete activ totodat i activitatea de sintez proteic, nveliul sporal devenind perete celular i rencepnd sinteza de ADN. Celula i dubleaz volumul su iniial, iar tunica sporal este eliminat. Faza este influenat de antibioticele care pot inhiba sinteza peretelui celular, a proteinelor i a acizilor tiucleici.

3. CARACTERISTICI ALE UNOR CATEGORII PARTICULARE DE BACTERII

3.1. Arheobacteriile (gr. archaios = vechi) Acest grup de bacterii este foarte variat att n plan morfologic ct i fiziologic. Din punct de vedere al coloraiei Gram, exist specii de-o potriv Gram+ i Gram-. Ca tip morfologic sunt prezente n aceast categorie bacterii sferice, bacilare, spiralate, lobate, aplatizate. Unele dintre ele sunt izolate, iar altele formeaz filamente sau aglomerri celulare. Diametrul lor poate fi cuprins ntre 0,1 i 15fxm. Filamentele lor pot ajunge chiar la 200|Ltm lungime. Se multiplic prin sciziparitate, nmugurire, fragmentare i prin alte mecanisme. n plan fiziologic ele pot fi aerobe, facultative sau strict anaerobe. Nutriional, sunt chimiolitoautotrofe pn la organotrofe. Unele sunt mezofile n timp ce altele sunt termofile extreme, putndu-se dezvolta la peste 100C. Arheobacteriile prefer habitatele acvatice i terestre restrictive sau chiar extreme. Se pot gsi adesea n medii anaerobe hipersaline sau la temperaturi foarte ridicate. Unele sunt simbionte n aparatul digestiv al animalelor. Peretele celular al arheobcteriilor se deosebete de acela al eubacteriilor. Unele eubacterii au: perete celular format dintr-un strat unic, subire, omogen ca i eubacteriile Gram+ (fig.3.1) Arheobacteriile Gram- sunt lipsite de membran extern i peptidoglican complex aa cum este cazul eubacteriilor Gram-. Ele prezint n locul peptidoglicanului un strat superficial format din subuniti proteice sau lipoproteice . Din punct de vedere chimic, peretele celular al arheobacteriilor este foarte diferit de acela al eubacteriilor. Nici o arheobacterie nu prezint peptidoglican caracteristic coninnd acid muramic i acizi aminai D. Nu este deci surprinztor c toate arheobacteriile rezist la atacul lizozimelor (lizoenzime) i al antibioticelor cu nucleu b-lactam ca acela al penicilinelor.

'W4 a O J jim

WM 'b "

Fig. 3.1 - nveliurile celulare ale arheobacteriilor (reprezentare schematic i imiagini la microscopul electronic); a) Methanobacterium formicicum (Gram+) i b) Termoproteus tenax (Gram-); PC = perete celular, SS = strat superficial, MP = membran plasmatic, C = citoplasm.

Arheobacteriile Gram+ pot avea n peretele celular o varietate de polimeri compleci. Spre exemplu, Methanobacterium i unele specii de bacterii metanogene au perete celular pseudomureinic format dintr-un polimer asemntor peptidoglicanului. Arheobacteriile Gram- au un strat proteic sau glicoproteic extern membranei plasmatice. Acest strat poate atinge 20-40 nm grosime. Unele metanogene ( Methanolobus ) i unele termofile extreme ( Sulfolobus, Thermoproteus, Pyrodictium) posed glicoproteine n peretele lor celular. Alte specii din aceeai categorie au peretele celular format din proteine. Este cazul genurilor Methanococcus, Methanogenium, Desulfurococcus. Lipidele membranare reprezint elementul cel mai puternic distinctiv al arheobacteriilor. Ele se deosebesc destul de bine de acelea ale eubacteriilor. 3.1.1 Metabolismul arheobacteriilor Dat fiind varietatea modului de via al acestui grup de microorganisme, arheobacteriile prezint un metabolism foarte diferit de alte microorganisme i chiar de la un grup la altul. n fig. 3.2 i 3.3 sunt prezentate cteva specii de arheobacterii, pentru familiarizarea cu tipurile morfologice caracteristice acestui grup particular de bacterii, iar n tabelele 3.1 i 3.2 putem observa principalele grupe ale acestei categorii de microorganisme i 114

caracteristicile lor, respectiv detalii referitoare la bacteriile metanogene.

d Fig. 3.2 - Bacterii metanogene: a) Methanospirillum humgatei (microscopie cu contrast de faz), b) Methanobrevibacter smithii (microscopie electronic cu baleiaj), c) Methanosarcina mazei (microscopie electronic cu baleiaj), d) Methanobacterium bryantii (microscopie cu contrast de faz) (dup Prescott, Klein, Harley, 1995)

: - ' ' - b s - "~ ' Fig. 3.3 - Bacterii halofile: a) Halobacterium salinarium, b) Haococcus morrhuae (microscopie electronic cu baleiaj), (dup Prescott, Klein, Harley, 1995)

rrmcipaieie grupe ne araeuuacteni i caracteristicile acestora Grupul de arheobacterii Metanogene Caracteristici generale Metabolitul final mjor este metanul. Sulful poate fi redus la hidrogen sulfurat fr producere de energie. Celulele posed coenzime M, factori 420 i 430 i metanopterin. Hidrogenul sulfurat se formeaz prin reducere catabolic a sulfatului. Se produc urme de metan. Bacterii termofile extreme i strict anaerobe. Ele posed factorul 420 i metanopterin, dar nu coenzima M i nici factorul 430. Bacili i celule de la regulate la foarte neregulate. Celule Gram- sau +, aerobe sau anaerobe facultative, chimioorganotrofe. Necesit concentraii crescute de cloruri sodice pentru dezvoltare (>l,5m). Neutrofile saualcalofile. Mezofile sau uor termofile. Unele specii conin bacteriorodopsin i utilizeaz lumina pentru a sintetiza ATP. ' Celule cocoide faip nveli celular Bacili Gram-, filamente sau coci. Termofile obligate (se dezvolt bine la 70- 105C). Aerobe, aerobe facultativ, anaerobe strict. Acidofile sau neutrofile, autotrofe sau heterotrofe, majoritatea mctabolizrid sulful. Genuri reprezentative Methanobacterium, Methanococcus, Methanomicrobium, Methanosarcina

Reductoare de sulfai

Archaeoglobus

Halofile extreme

Halobacterium, Halococcus, Natronobacterium

Fr membran Termofile extreme care metabolizeaz sulful

Thermoplasma Desulfurococcus Methanopyrus Pyrodictium Sulfolobus Thermococcus Thermoproteus

116

 Tabelul 3,2 Cteva caracteristici ale unor genuri reprezentative de bacterii metanogene Genul Morfologie G+C moli % Bacili lungi sau filamente Methambciclerium Meharwthermus Bacili drepi sau curbai 32-61 33 29-34 45-49 52-61 45 - 50 36-43 pseudomurein pseudo-mureina cu un strat proteic S extern +
+
-

Compoziia menibraiei

Gram

Mobilitate

Substratul metanoge-nezei H2+CO2, format H2+CO2 H2+CO2, format H2+CO2, format H2+CO2, format H2+CG2, formai H2+C02. metanol,

f -f T

Methatococcus coci Meihanomicrobmm bacili scuri Methamgenhm coci Bacili curbai, spirili Methahospiritlum coci Melhmosarcim

proteine proteine proteine sau glicoproteine proteine heteropolizaharide sau proteine

+ .

metifamin, acetat

/-VUlillUlliy UClCiC & U U I uawiuiu vjiauxiT uvivuv v. filamente ramificate sau hife filamentoase i spori asexuai, fapt ce le face s se asemene foarte mult cu ciupercile microscopice. 3.2.1 Proprieti generale Crescute pe un mediu solid cum este geloza, reeaua ramificat de hife a acestor bacterii se dezvolt la nceput la suprafaa substratului, apoi la interiorul acestuia i formeaz un miceliu vegetativ. Hifele miceliului de peste 20|im sunt mprite de-a lungul lor de nite septuri. Deseori masa micelian se aseamn cu o estur i poart numele de tal. Numeroase actinomycete au un miceliu aerian care se mprtie la suprafaa substratului pe care se dezvolt i care formeaz conidii. Sporii asexuai au un nveli fin i se numesc conidii sau conidiospori. Ei se afl la extremitile filamentelor (fig. 3.4).
Lanuri de conidiospori Suprafaa mediului gelozat

Fig. 3.4 - O colonie de actinomicete (seciune transversal); se observ miceliul "subteran" (de substrat) i aerian cu lanuri de conidiospori la capetele hifelor.

Dac sporii sunt localizai ntr-un sporange, el se numete sporangiospor. Sporii pot avea forme foarte variate (fig. 3.5). Ei se dezvolt prin separarea unor extremiti ale filamentelor ca replic la apariia unor condiii nefavorabile de via, n principal lipsa nutrienilor. Majoritatea sporilor nu au o rezisten deosebit la 118

cldur, dar suport bine deshidratarea i au prin aceasta o valoare adaptativ deosebit.

120

microscop): 1. Hif i conidii ia Nocardia asteroides, schem (a) i imagine la microscopul optic (b); 2. Hif.i conidii la Faenia rectivirgua, schem (a) .i imagine la microscopul optic (b); 3., Hife, sporangii i spori la Frankia (microscopie de interferen); 4. Hif, sporangiospori, zoospor la Actinoplanes, schem (a) i imagine la microscopul electronic cu baleiaj (b); 5. Conidii inserate pe hif la Streptomices, schem (a), imagine la microscopul optic (b); 6. Lanuri de spori la Streptoverticillium, schem (a), imagine la microscopul electronic (b); 7. Lan de spori la Actinomadura madurae, (a - schem, imagine la microscop) 8, Endospori de Thermoactinomycetes (imagine la microscopul electronic cu baleiaj), 9. Spori la Micromonospora (imagine la microscopul electronic cu baleiaj) (dup Prescott, klein, Harley, 1995).

Fig. 3.5 - Tipuri de spori la actinomicete (reprezentri schematice i imagini la

Actinomycetele nu sunt n general mobile. Dac este prezent mobilitatea, ea se concretizeaz prin prezena unor spori flagelai (zoospori). Compoziia peretelui celular al actinomycetelor variaz foarte mult de la grup la grup, fiind un element taxonomic important. Se pot distinge 4 tipuri principale de perete celular pe baza a trei caracteristici ale compoziiei i structurii peptidoglicanului: acid aminat n poziia 3 a tetrapeptidei, prezena glicinei n punile interpeptidice i coninutul n zahr al peptidoglicanului (tabelul 3.3).
Tabelul 3.3 Clasificarea tipurilor de perete celular al actinomycetelor pe baza compoziiei acestora Tip de perete celular I II Izomeri ai acidului diaminopimelic L.L Meso Prezena glicinei n puntea interpeptidic + + Glucide caracteristice Genuri reprezentative Streptomyces Streptoverticii um Micromonospor a, Piimeiia Actinoplanes Thermoactinomyces Actinomadura Frankia Faenia Nocardia

III

Meso

IV

Meso

arabinoz galactoz

Exist ns i alte multe proprieti extrem de utile n taxonomia actinomycetelor. Dintre acestea, mai importante sunt: morfologia i culoarea miceliului i a sporangilor, caracterele de suprafa i dispoziia conidiosporilor, % G+C din ADN, secvena de ARNf 16s,

dintre actmomycete i lungi. l otui exist eteva elemente care mpiedic aceast confuzie, aa cum vom vedea n cele ce urmeaz. Caracteristici discriminatorii ale actinomicetelor fa de fungi organizarea celular este tipic procariot ca i aceea a bacteriilor: perete celular mureinic, fr celuloz sau chitin, steroli abseni, mitocondrii i reticul endopiasmic abseni, flageli de tip procariot, nucleoid; structura hifelor i dimensiunile acestora diferite de acelea ale fungilor prezena formelor strict anaerobe i a celor chimioautotrofe, inexistente la fungi sensibilitate la bacteriofagi (actinofagi) rezisten fa de antifungice i sensibilitate fa de antibiotice elemente genetice caracteristice 3.2.2 Importana practic a actinomycetelor numeroase specii prezente n sol sunt saprofite, participnd la procesele de degradare biologic i mineralizare a substanelor organice, iar altele se regsesc n simbioze (actinorize) cu specii de plante superioare participnd la procesul de fixare biologic a azotului; exist i specii parazite care produc boli grave la om i animale; dintre acestea amintim: Mycobacterium tuberculosis (agentul patogen al tuberculozei), Mycobacterium leprae (responsabil de producerea leprei), Actinomyces i Nocardia (infecii ale cavitii bucale, organelor interne), Dermatophylus, Micromonospora (infecii cutanate); unele specii sunt fitopatogene, producnd boli ale plantelor; 50% dintre speciile de actinomicete izolate din natur i n principal reprezentani ai genului Streptomyces sunt implicai n producia de antibiotice, fiind cei mai activi productori de asemenea substane; preteniile nutritive reduse i echipamentul lor enzimatic complex le fac utile n numeroase biotehnologii moderne: pentru degradarea unor resturi vegetale (deeuri) din industriile alimentare, de prelucrare a lemnului, a cerealelor i chiar din industria chimic (pot crete pe substraturi cu fenoli, lipide, parafine, cauciuc), n biosinteza unor vitamine la scar industrial etc. 122

3.3. Bacteriile fotosintentizante Exist trei grupuri de bacterii fotosiatetizante: bacterii purpurii, bacterii verzi i cyanobacterii care pot fi la rndul lor grupate astfel: bacteriile purpurii i cele verzi, n categoria -bacteriilor fotosintetizan te anoxigenice, iar cyanobacteriile, n categoria bacteriilor fotosintetizante oxigenice. Bacteriile fotosintetizante anoxigenice sunt incapabile s foloseasc apa ca surs de electroni. Ele transform, pentru a forma NADH i NADPH, molecule reduse ca acelea de hidrogen sulfurat, sulf, hidrogen sau materii organice. n consecin, bacteriile purpurii i verzi nu produc oxigen i formeaz granule de sulf care se acumuleaz n interiorul celulelor (n cazul bacteriilor sulfuroase purpurii) sau la suprafaa celulelor (n cazul bacteriilor sulfuroase verzi). Bacteriile purpurii nesulfuroase utilizeaz de asemenea molecule organice ca surs de electroni. Bacteriile fotosintetizante oxigenice utilizeaz apa ca donor de electroni i produc oxigen n cursul fotosintezei. Exist de asemenea numeroase diferene ntre diferite grupe de bacterii din aceast categorie, n ceea ce privete natura pigmenilor fotosintetici, organizarea membranelor fotosintetice, nevoile nutriionale i relaiile cu oxigenul. Toate acestea sunt prezentate sintetic n tabelul 3.4 pentru fiecare grup de bacterii fotosintetizante. Cteva aspecte viznd morfologia acestor categorii de bacterii fotosintetizante sunt prezentate n fig. 3.6 i 3.7.

Fig. 3.6 ~ Bacterii purpurii: a) sulfuroase (Chromatium vinosum); se vd granulele de sulf intracelulare - microscopie electronic; b) nesulfuroase (Rhodospirillum rubrum) - microscopie n contrast de faz.

Fig. 3.7 - Bacterii verzi sulfuroase nsoite de granule de sulf extracelular (a) Chlorobium limicola i bacterii fotosintetizante oxigenice - cianobacterii (b) Nostoc.

3.3.1 Cyanobacteriile Acestea formeaz un grup vast, extrem de divers i foarte reprezentativ de bacterii fotosintetizante oxigenice. n aceast categorie pot fi incluse n jur de 62 specii i 24 genuri. Cu toate c acestea sunt procariote adevrate, sistemul lor fotosintetic se aseamn foarte mult cu acela al eucariotelor prin aceea c el conine clorofil a i fotosistem Ui pentru c procesul de fotosintez este oxigenic. La fel ca i algele roii, cyanobacteriile au ficobiliproteine ca pigmeni accesorii. Pigmenii fotosintetici i compuii lanurilor transportoare de electroni sunt situate n nite membrane tylacoide, bordate de nite particule numite ficobilisomi (fig. 3.8).

Fig. 3.8 - Tylacoizii i ficobilisomii cyanobacteriilor (Syncchococcus ividus); se vd ficobilisomii ca nite granule care bordeaz membranele tylacoide (sgeata)

124

4Aceste particule conin nite ficobiline, n particular - ficocianine i ele transport energia la fotosistemul II. Dioxidul de carbon este asimilat dup Ciclul Calvin i zahrul de rezerv este glicogenul. Uneori, aceste particule conserv surplusul de azot sub form de polimeri ai argininei sau ai acidului aspartic, n granule de cyanoficin. Cum cyanobacteriile sunt lipsite de oe-cetoglutarat dehidrogenaz, ele nu posed ciclul citratului complet funcional. Ciclul fosfat-pentozei joac un rol central n metabolismul glucidic. Cu toate c multe cyanobacterii sunt fotolitoautotrofe obligate, unele pot s se dezvolte lent i n obscuritate n mod chimioheterotrof, oxidnd glucoza i cteva alte glucide. n condiii de anaerobioz, Oscillatoria limnetica oxideaz hidrogenul sulfurat n locul apei i realizeaz o fotosintez anoxigenic, cum este aceea ntlnit la bacteriile verzi fotosintetice. Cyanobacteriile au o variabilitate considerabil n privina metabolismului, dar i n privina morfologiei lor. Diametrul celular al acestora variaz ntre 1 i 10|nm. Ele pot fi unicelulare, coloniale, pot forma trichoame. Culoarea cyanobacteriilor este albastr-verde din care cauz se mai numesc i bacterii albastre-verzi sau impropriu, alge albastre-verzi. Cea care d acestora culoarea caracteristic este ficocianina. Unele bacterii sunt roii sau brune din cauza unui pigment - ficoeritina. Cu toat variabilitatea acestora, cyanobacteriile au o structur celular tipic procariot i un perete celular de tip Gram (fig.2.21b i 3,9). Adesea, peste peretele celular al cyanobacteriilor este prezent o teac gelatinoas, polizaharidic sau fibroas care atrage i blocheaz n jurul celulei cyanobacteriene numeroase bacterii aparinnd altor specii, prezente n habitatul natural. ndeprtarea lor pentru izolarea n culturi pure a cyanobacteriilor este din aceast cauz extrem de dificil. Cyanobacteriile prezint adesea vezicule gazoase pentru deplasarea vertical n ap (fig. 3.10). Unele specii filamentoase se deplaseaz prin alunecare. Flagelii lipsesc la aceast categorie particular de bacterii, dar numeroase sue ale genului Synechococcus sunt capabile de a se deplasa cu o vitez ce atinge 25|am/sec. printr-un mecanism necunoscut.
'

Fig. 3.9 - Detaliu asupra nveliurilor celulare (tipic Gram-) ale cyanobacteriilor: 1. Membrana citoplasmic triplu strat, 2. Peretele celular, 3. Membrana extern (microscopie electronic) (dup J.P.Gourret).

Carboxsom

- Nucleoplasm

Vacuole cu gaze

Fig. 3.10 - Schema unei seciuni longitudinale prin celula vegetativ a unei cyanobacterii. Sunt evideniate principalele elemente morfologice i dou imagini de detaliu: a) nveliul celular; b) o poriune dintr-un tylacoid cu ficobilisomii ataai (dup Stanier, 1.977)

126

Formele filamentoase de cyanobacterii sunt cele mai complexe, deoarece pot prezenta dou tipuri adiionale de celule - akineii i heterochitii - rezultate n urma unor procese de difereniere a celulelor vegetative. Heterochitii apar ca urmare a unor modificri profunde ale structurii i funciilor celulelor vegetative. Ei pot avea o localizare terminal i/sau intercalar n cazul cyanobacteriilor filamentoase crora le sunt caracteristici, aa cum am artat. La microscop se pot distinge prin nveliul lor extern mai gros, cu aspect de celule goale, glbui i bogate n granulaii refj ingente (fig. 3.11a). Prin microscopie electror ic se poate evidenia nveliul extern gros, triplustrat i un strat fibros suplimentar. Zona adiacent celulei vegetative nvecinate de care < * epinde n mod indisolubil heerochistul, prezint o gtuitur i un por, aa numit "por septal" (fig. 3.11b). n plan fiziologic, heterochitii sunt structuri difereniate care confer capacitate de fixare a azotului molecular. Ca urmare, ntre aceste structuri i celulele v ecine din cadrul filamentului bacterian are loc o relaie simbiotic, n sensul c heterochitii furnizeaz celulelor vegetative compui cu azot, iar acestea din urm furnizeaz heterochitilor metabolii organici i ATP).

Fig. 3.11 - Heterochiti integrai n structura filamontoas a cyanobactcrici Anabena (a); Imagine detaliat a unui heterochist de la aceeai specie microscopie electronic (b); PC = perete celular, = nveli celular suplimentar, M = sistem membranar, P - por de legtur cu celula adiacent.

cyaiiooacierme cu neierocniu, rormanau-se am ceiuie vegetative adiacente acestora. Ei rezult din ngroarea peretelui celular prin acumulri succesive de material granular (fig. 3.12). Akineii au o rezisten deosebit la temperaturi ridicate, meninndu-se n stare latent, adesea vreme ndelungat.

Fig. 3.12 - Cyanobacterii din genul Cylindrospermim, H = heterochit terminali, A = = akinei subterminali.

Cyanobacteriile se reproduc prin sciziune binar, nmugurire, fragmentare i sciziune multipl. n acest ultim caz, o celul crete, apoi se divide de mai multe ori producnd mai multe celule mai mici care sunt eliberate pierzndu-se de celula parental. Acest tip de celul a fost denumit "beocit" (baeocyte gr. = celul mic). O celul parental poate produce ntre 4 i 1000 asemenea beocite. Fragmentarea cyanobacteriilor filamentoase (trihoame) poate genera mici filamente reproductive mobile numite hormogonii, o cale de reproducere realizat prin ruperea trihomului atunci cnd el ajunge la maturitate. Clasificarea cyanobacteriilor este mereu schimbtoare datorit, n bun parte, imposibilitii de a se lucra pe culturi pure. Actualmente toate schemele de clasificare sunt considerate provizorii. Tabelul 3.5 realizeaz o asemenea clasificare, avnd la baz Manualul Bergey. Aspecte ecologice i importan Habitatul caracteristic al cyanobacteriilor este cel acvatic. Ele se pot ntlni n natur n ape dulci i marine, n lacuri srate, izvoare termale (specii termofile). Unele specii triesc n fisurile din roci i 128

chiar n sol. Speciile prezente n regiunile deertice sunt termodure, ceea ce nseamn c ele au o cretere diurn limitat la nceputul dimineii, ca apoi s stagneze atta timp ct temperatura crete mult n timpul zilei.
Tabelul 3.5 Clasificarea i caracterizarea principalelor cyanobacterii (dup Manualul Bergey)
Ordinul Chroococcaies Aspecte morfologice bacilis coci unicelulare filamente sau agegate bacili, coci unicelulare sau agegate filamente, trihoame neramificate filamente, trihoame neramificate Reproducere i cretere sciziune binar, nmugurire Heterochiti Abseni G+C

4049

Alte proprieti Imobile, n general

Genuri Gloeobacter Goeotece Gloeocapsa Synechococccus Pleurocapsa Dermocarpa

Pleurocapsales

sciziune multipl cu formare de beocite fragmentare

Abseni

40-46

Imobile, unele beocite mobile Mobile, n general Mobile, produc akinei

Oscillatoriales

Abseni

40-67

Nostocales

fragmentare cu formare de hormogonii

Prezeni

38-47

Spiruina OstiUatoria Pseudoanabaena Anabaena Cylindrospermum Nostoc Calothrix Fischerella Stgonema Geitleria

Stigonematales

filamente, trihoame ramificate

fragmentare cu formare de hormogonii

Prezeni

42-46

Cea mai avansat difereniere, produc . akinei

n habitatele lacustre bogate n substane nutritive, exist specii de cyanobacterii care mpnzesc n totalitate suprafaa apei. Acestea sunt importante surse de biomas proteic neconvenional, astzi produs pe scar industrial n diferite ri. Numeroase specii acvatice (de ap dulce) pot produce intoxicaii mortale la animale (vite, peti, psri de ap), i la-om (dac apa este folosit n alimentaie sau la but), datorit unor toxine pe care le secret. Exist i specii care triesc n simbioz cu organisme eucariote (muchi, ferigi, licheni, corali, cicade etc). Speciile capabile de a fixa azotul triesc n simbioz cu fungi, alge verzi, plante superioare (ferigi).

Aceste microoanisme se deosebesc de eubacterii prin cteva caractere eseniale: flexibilitatea celulei lor, determinat de lipsa unui perete celular rigid, modul de locomoie asemntor cu acela al cyanobacteriilor i al bacteriilor filamentoase, prezena unui cilu de via care implic morfogeneza celular i colonial. Celulele vegetative sunt imobile n suspensie apoas, dar se pot deplasa lent, prin alunecare, pe un suport solid. Micarea lor se realizeaz cu o vitez de 0,l-0,2|am pe secund, deci foarte lent i nu este acompaniat de nici un fel de ondulare sau vibraie vizibil a corpului bacterian. La microscopul electronic nu s-au putut evidenia nici un fel de structuri care ar putea fi considerate organe de locomoie specializate (cili sau alte tipuri de apendici exocelulari). Nu este nc elucidat mecanismul de deplasare al mixobacteriilor, dei adesea, n urma acestor deplasri pe un mediu gelifiat rmn adevrate urme ale traseului parcurs. Din punct de vedere morfologic, celulele vegetative au forma unor bacili mici, cilindrici sau cu extremitile ascuite. Structura lor celular este tipic Gram-. Pe medii agarizate formeaz colonii plate care i schimb perimetrul n mod radiar. Adesea celulele situate la periferia coloniei se deplaseaz prin alunecare n afara coloniei, revenind apoi n interiorul ei dup scurt timp, fenomen denumit "roire". Diferitele grupe de Mixobacterii se deosebesc ntre ele prin forma celulelor vegetative, prin activitatea lor biochimic i prin modul de multiplicare. Astfel, celulele vegetative de Cytophaga sunt lungi i subiri, flexibile, curbate i adesea subiate la extremitate. Acest grup, relativ simplu, nu formeaz spori i nici fructificaii, celulele divizndu-se simplu prin fisiune transversal. Celulele unui grup nrudit (Sporocytophaga) sunt nglobate ntr-o zooglee vscoas i formeaz forme de rezisten - microchiti. Acetia rezist la deshidratare i i pstreaz timp ndelungat viabilitatea. n cazul n care condiiile de via devin favorabile, fiecare microchist germineaz dnd natere la o singur celul vegetativ. Exist Mixomycete care prezint un ciclu de reproducere complex. Ca i n cazul precedent, dintr-o celul vegetativ se formeaz un microchist, dar aceast transformare se produce ntr-un numr mare de celule nvecinate care se grupeaz la un loc, se nconjoar de o 130

membran comun, lund natere fructificaii sau corpi fructiferi caracteristici cu aspect morfologic foarte divers (fig. 3.13). Corpii de fructificaie sunt structuri rudimentare multicelulare, macroscopice, cu form, mrime i culoare caracteristice pentru fiecare specie, rezultate din agregarea unor celule nedifereniate care se transform prin morfogenez i difereniere, n mjrospori sau microchiti. Adugarea n mediul de cultur a unuia din urmtorii compui: glicerolul^eritritolui , izopropanolul ' , etilenglicolul t, favorizeaz inducerea acestor tipuri de spori. Microsporii sunt celule n general rotunde, n stare de laten, refringente, capabile s germineze dup transplantare n medii adecvate. Exist specii de mixobacterii la care microsporii au form de sfere sau de bacili acoperii cu un strat dens de mucus tare (capsul). Ei se numesc microchiti. Ei sunt foarte refringeni i au o mare rezisten la deshidratare. i pstreaz viabilitatea chiar i 10 ani. Unele specii de mixobacterii ( Chondromyces ) prezint macrochiti (celule vegetative nvelite ntr-un sac comun), care dup germinare elibereaz celule vegetative capabile s "roiasc" pe suprafaa mediului. La specii ale acestui gen, organele de fructificare formeaz structuri arborescente avnd un trunchi principal (peduncul) i ramuri alctuite din produi de secreie ntrii. La extremitile acestor ramificaii se gsesc chiti mari, colorai strlucitor, adpostind mii de celule vegetative (fig. 3.14).

Fig. 3.13 - Fructificaii prezente la diferite specii de Mixobacterii: a) Myxococcus, b) i c) Chondrococcus, d) Myxococcus, e) Sorangium, f) fructificaii sesile de Sorangium coninnd numeroi microchiti <

Fig. 3.14 Corpi fructiferi compleci la

Chondromyces

n condiii nutriionale i de mediu favorabile mixosporii sau microchitii germineaz dnd natere unor celule active metabolic, de form cilindric. Acestea "roiesc". Ciclul vital al mixomycetelor prezint anumite asemnri cu unele specii de mucegaiuri, de care se disting totui prin organizarea de tip procariot. Aspecte ecologice i importan Mixobaeteriile se gsesc n sol, pe gunoiul de grajd, pe materiile vegetale n descompunere. Ele se caracterizeaz prin proprietatea metabolic de a hidroliza macromoleculele insolubile. Unele sunt bacteriotrofe, omornd i liznd diferite specii de bacterii, dar i mucegaiuri, drojdii, alge, nainte de a face hidroliza constituenilor lor. Numeroase specii sunt patogene, producnd mbolnviri masive la pstrvi. 3.4. Bacteriile helicoidale (Spirochete i Spirili) Acest grup de bacterii se caracterizeaz printr-o anatomie celular particular i printr-o mobilitate fr echivalent n lumea procariotelor. Astfel, s-a constatat c unele specii de spirochete pot traversa cmpul microscopic ntr-o fraciune de secund, ceea ce face dificil examinarea lor n preparate proaspete. Violena cu care se deplaseaz face s antreneze brusc n drumul lor i alte celule bacteriene sau chiar particule cu o mas superioar aceleia a propriului lor corp, de exemlu hematii. Aceast particularitate este utilizat pentru decelarea prezenei lor n snge, la bolnavii infectai cu unele specii patogene aparinnd acestui grup. Deplasarea lor este acompaniat de o rotaie rapid a celulei pe axul su longitudinal i, la unele specii, de o flexare i o deformare 132

sinusoidal care se repercuteaz asupra spirelor pe care le posed celula. Spirochetele nu posed flageli polari sau laterali. Detaliile viznd structura morfologic a unei celule de spirochete xlht n msur de a ajuta nelegerea modului n care se realizeaz deplasarea la acest tip de bacterii. Astfel, celula are o form cilindric, helicat, principalul element structural fiind cilindrul protoplasmic (protoplast helical) (fig. 3.15). El este constituit din componentele specifice oricrei bacterii. Dimensiunile celulei variaz n funcie de specie. Spre exemplu, Spirochaeta plicatilis msoar de la 30 la 500|am lungime i de la 0,25 la 0,7)tim grosime, formnd spire regulate, adesea foarte strnse, meninute n aceast stare de strat de peptidoglican al peretelui celular. Capetele celulei spirochetelor pot fi rotunjite, conice, ascuite. n jurul cilindrului protoplasmic n form de helix sunt ncolcite nite structuri filamentoase, cunoscute sub denumirea de filamente axiale. Ele se gsesc n numr de 2 pn la 100 per celul i sunt elementele de baz implicate n realizarea mobilitii spirochetelor. De altfel, chiar structura lor este asemntoare flagelilor bacterieni, singura deosebire fiind poziia lor endocelular. Filamentele axiale sunt adpostite de o membran subire, triplustrat, denumit teac sau nveli celular extern. Se presupune c aceasta este echivalentul membranei externe a peretelui celular a bacteriilor Gram-, fiind o membran semipermeabil. Spirochetele au ntotdeauna dou seturi de filamente axiale care au fiecare cte un capt ancorat aproape de un pol al celulei, iar cellalt capt liber. Ele se ntind de-a lungul celulei n jurul creia sunt ncolcite. La unele specii, extremitile distale ale seturilor de filamente depesc extremitile cilindrului celulei, dnd impresia unor flageli externi (fig. 3.16). 7

Fig. 3.15 - Spirillum volutans (1 800x); celule cilindrice helicate.

F A C P

FA* Filamente axiale qps Cilindru protopiasmic ME= Mantaua externa

^^^^extem

Manta (tunic) Filamente axiale

Cilindru protopiasmic

Fig. 3.16 - Spirochete: A = extremitile distale ale filamentelor axiale depesc lungimea cilindrului celulei spirochetelor; B - microfotografie electronic a unei spirochete; C = Reprezentarea schematic a structurii unei spirochete; fibrele axiale - F.A., punctul de inserie al acestora - P.L, membrana (teac) extern M.E. i cilindrul protopiasmic - C.P.(a), seciune transversal care evideniaz modul ipotectic de realizare a deplasrii; filamentele axiale se rotesc n sens orar determinnd rotirea corpului celular n sens opus; n acelai timp, teaca se rotete n sens invers acelor de ceasornic; din nsumarea acestor rotaii rezult deplasarea specific a celulei (b).

Aspecte ecologice i importan n ceea ce privete categoria spirochetelor nepatogene, numeroase specii triesc liber n natur, n lacuri, ruri, oceane, mri i zone nmoloase. Exist de asemenea specii care fac parte din flora indigen a unor gazde eucariote, trind n simbioz cu acestea. Ele se gsesc pe suprafaa corpului unor protozoare, n intestinul termitelor i al larvelor xilofagelor, n aparatul digestiv al molutclor, n rumenul unor rumegtoare, n anul gingival i n colonul mamiferelor.

134

Speciile patogene produc boli la om i animale: sifilisul (Treponema pallidum), leptospiroze (Leptospira sp.), febra recurent (Borrelia recurrentis) etc. 3.5. Rickettsiile i Chlamidiile Seciunea a 9-a a Manualului de identificare a bacteriilor "Bergey's Manual" conine dou ordine: Rickettsialesi Chlamydiales. n ciuda marii lor diversiti, aproape toate aceste bacterii Gram- sunt parazite obligat intracelulare. Ele nu se pot dezvolta sau reproduce dect n interiorul celulei gazde. Toate bacteriile din aceast categorie sunt aproape de aceeai talie ca i poxvirusurile. De altfel, ele se aseamn cu virusurile prin existena lor intracelular. Ele se deosebesc ns n mod evident de virusuri prin mai multe trsturi: posed att ADN ct i ARN, o membran citoplasmic, ribozomi, un echipament enzimatic propriu, independent de acela al gazdei parazitate, diviziune prin sciziparitate i alte trsturi tipic bacteriene. Rickettsiile sunt bacterii baciliforme, cocoidale sau pleomorfe, cu perete celular tipic Gram- i fr flageli. Majoritatea speciilor sunt parazite sau simbionte. Formele parazite se dezvolt la vertebrate n eritrocite i n celulele endoteliale, dar i la artropodele hematofage (purici, pduchi, cpue) care pot fi vectori sau gazde primare pentru aceste microorganisme. Bolile produse de ctre rickettsii la mamiferele domestice si slbatice precum i la om se numesc rickettsioze i ajung n corpul acestora prin intermediul vectorilor - artropodele despre care am amintit anterior. Dintre rickettisiozele cele mai cunoscute amintim: tifosul exantematic produs de Rickettsia prowazekii (vector pduchele), tifosul murin produs de Rickettsia mooserii (vector puricele). Artropodele au un important rol n transmiterea natural de la o gazd vertebrat la alta a agentului patogen, dar constituie totodat i rezervoarele principale n infecie. n natur exist i specii nepatogene pentru mamifere. Acestea sunt prezente n organismul artropodelor, la care joac n principal rolul de simbioni. Puine specii pot fi cultivate pe medii de cultur complexe cum ar fi agar-snge. O asemenea specie este Rickettsia quintana (produce boala traneelor, transmis prin intermediul pduchelui de corp).

(cobai, oareci albi etc), la fel ca i virusurile. La acestea din urm, rickettsiile produc infecii mortale, putnd fi izolate n cantiti mari din snge i din diferite organe interne (splin, ficat, creier etc.). Un comportament cu totul special a fost semnalat la specia Coxiella bumetii. Aceasta are o mare rezisten fa de agenii fizici sau chimici de dezinfecie (dup Zarnea, 1983). Chlamidiile Ordinul Chlamydiales are o singur familie (Chlamidiaceae) i un singur gen (Chlamydia). Chlamidiile sunt bacterii cocoidale lipsite de mobilitate, Gram-, cu o talie variind ntre 0,2 i l,5|iim. Dei peretele celular este foarte asemntor aceluia al bacteriilor Gram-, totui el este lipsit de acid muramic i peptidoglican. Fiind parazite obligat intracelulare, aceste bacterii foarte mici au fost mult timp considerate n mod eronat virusuri, ns n afar de aceste dou trsturi, nu exist alte elemente care s fac posibil o eventual apartenen la categoria virusurilor. Totui, metabolismul lor este extrem de limitat, pstrndu-i ns autonomia. Chlamidiile nu se pot reproduce dect n vacuolele din citoplasma celulei gazd. Ciclul de via al chlamidiilor ncepe cu faza de corpi elementari, formele de laten ale acestora. Acetia, dup ce intr n citoplasma celulei gazd, dau natere unor structuri vegetative (active) care se numesc corpi reticulai. Din ei se formeaz noi corpi elementari i n acest fel ciclul se reia. n detaliu, reproducerea chlamidiilor debuteaz prin ataarea unui corp elementar (CE) la suprafaa celular (fig.3.17). Celula gazd fagociteaz CE, iar acetia mpiedic fuziunea lizozomi -fagosomi i ncep s se reorganizeze pentru a forma corpii reticulai (CR), adaptai pentru reproducie i nu pentru infecie. Dup numai 10 ore de la infecie, CR ncep s se divid. Aceast reproducere continu pn la moartea celulei gazd. Acumularea de chlamidii n vacuolele celulei le fac pe acestea mai mari i vizibile chiar la microscopul optic. Adesea chiar i citoplasma este plin de chlamidii. Dup 24 ore, CR se transform n CE infecioi, iar procesul se reia pn n momentul lizei celulei gazd (48-72 ore dup infecie). 136

-j

12

18

24

30

t,

36

42

48

Fig. 3.17 - Ciclul infecios al unei chlamidii, (reprezentare schematic dup Prescott, Klein, Harley, 1995).

Cteva dintre puinele specii de chlamidii sunt importani ageni patogeni la om i animalele cu snge cald. Spre exemplu, C. trachomatis produce uretrite negonococice, trahoame, conjunctivite etc. la om, dar i animale cum ar fi: papagalii, curcanii, oile, pisicile, invadnd tractusul lor intestinal, respirator sau genital, placenta ftului i chiar ftul n viaa intrauterin. Recent a fost descoperit o nou specie - C. pneumoniae, responsabil de forme de pneumonie uman. 3,6* Mcoplasmele Acestea sunt bacterii care fac parte din Clasa Molicutes. Ele sunt lipsite de perete celular i nu pot sintetiza precursori ai peptidoglicanului. Sunt rezistente la peniciline, dar sensibile la liza printr-un oc osmotic. Datorit lipsei membranei plasmatice, aceste microorganisme se caracterizeaz printr-un pleomorfism accentuat, forma lor variind de la cea sferic sau cea de par, cu diametrul de 0,3 - 0,8|im, pn la aceea de filamente ramificate sau helicoidale (fig. 3.18). Sunt cele mai mici bacterii capabile s se autoreproduc. Majoritatea nu sunt mobile, dar unele pot s se deplaseze prin alunecare pe suprafeele umede. Sunt n general anaerobe facultative, doar cteva sunt anaerobe obligate. Pe mediu de cultur gelozat, majoritatea se dezvolt formnd colonii caracteristice cu form de "ou, ochiuri" (fig. 3.19), Micoplasmele pot fi saprofite, comensale sau parazite. Pot fi patogene pentru plante, animale i insecte. La animale, micoplasmele colonizeaz muchii i articulaiile. Sunt deseori asociate cu maladii ale organelor respiratorii i urogenitale. n cresctoriile de animale apar adesea maladii care au drept cauz infecia cu micoplasme. Este vorba despre: pleuropneumonia contagioas a bovinelor ( M.mycoides),

spiralate au fost izolate dm insecte (albine) i din unele plante la care produc maladii grave (citrice, varz, brocoli, porumb etc.). Se crede c albinele ar fi vectori importani n transmiterea bolilor datorate molicutelor. Micoplasmele pot fi la rndul lor parazitate de unele virusuri.

Fig. 3.18 - A - Micoplasme filamentoase (forme aa-zis micoide) (1) si sferice

(cocoide) (2); B - Micoplasm n form de par, cu evidenierea ctorva elemente anatomice: nucleoid (1), ribosomi (2), membran citoplasmic (3) (microscopie electronic, J.P.Gourret).

138

Fig. 319 - Colonie de Micoplasma orale cu aspect tipic de "ou ochiuri"

4. MICROORGANISME EUCARIOTE
Microorganismele eucariote formeaz o lume imens i foarte divers. Ele au o organizare celular comun, complexitatea structural a acesteia fiind legat de apariia a numeroase organite in tracitoplasmice. Organitele sunt structuri intracelulare care ndeplinesc diferite funcii specializate. Numele lor (organite = organe mici) sugereaz asemnarea acestora cu organele unui organism superior. Majoritatea microorganismelor eucariote sunt unicelulare. Cele care sunt pluricelulare prezint un grad de complexitate caracterizat printr-o specializare celular i o difereniere extrem de limitate. O privire de ansamblu asupra organizrii celulei eucariote evideniaz faptul c aceasta este mult mai complex dect aceea a celulei procariote. Tabelul 4.1 face posibil trecerea sumar n revist a principalelor elemente structurale ale celulei eucariote i a funciilor acestora, precum i compararea cu elementele structurale ale celulei procariote prezentate n tabelul 2.2. Aceste elemente sunt descrise detaliat n acest capitol i se pot observa n fig. 1.1b. 4.1. nveliurile celulare Microorganismele eucariote difer de cele procariote prin structurile lor de protecie i susinere prezente la exteriorul membranei lor plasmatice. Multe microorganisme eucariote tind spre organizarea eucariot specific celulei animale. Este cazul protozoarelor. Acestea sunt lipsite de perete celular. Microorganismele care tind spre organizarea celular caracteristic lumii vegetale (algele), au un perete celular rigid, bogat n polizaharide de tipul celulozei, al pectinei. De asemenea, exist specii la care pot fi prezente n peretele celular substane anorganice de tipul silicelor (diatomeele) sau a carbonatului de calciu (algele roii). Peretele celular este de regul foarte rigid. Compoziia lui variaz n funcie de organism, dar

i funciile acestora
Elementul structural Funcia

Sediul organitelor celulare i al numeroaselor procese metabolice Microfilamentele, filamentele Citoscheletul celulei intermediare i microtubulii Reticulul endoplasmic Transportul de materiale, sinteza lipidelor i a proteinelor Ribozomii Sinteza proteic Aparatul Golgi Rezervorul i locul unde se realizeaz secreia de substane, sediul genezei lizozomilor Lizozomii Digestia intracelular Eliberarea de energie, transport de electroni, Mitocondriile fosforilarea oxidativ etc. Fotosinteza - producere de glucide plecnd de la C0 2 Cloroplastele i ap cu ajutorul energiei luminoase Nucleul Sediul informaiei genetice, centrul de control al celulei Nucleolul Sinteza ARN ribozomal nveliurile celulare Arhitectura (forma) celulei i rigiditatea caracteristice Cilii i flagelii Mobilitatea celular n categoria eucariotelor se ncadreaz urmtoarele microorganisme: algele unicelulare, protozoarele i mycetele sau fungii (drojdiile i mucegaiurile).

Citoplasma

n general, este prezent celuloza, chitina i glucanul (un polimer al glucozei diferit de celuloz). n general, polizaharidele din peretele celular al eucariotelor sunt, din punct de vedere chimic, mai simple dect peptidoglicanul procariotelor. Membrana celular de la eucariote conine steroli spre deosebire de aceea a bacteriilor. Altfel, ea nu se deosebete fundamental de aceea a procariotelor. S-a observat c membrana citoplasmic a eucariotelor are aceleai funcii pentru celul ca i aceea a procariotelor: barier osmotic, schimb mediu extern-mediu intern prin difuziune sau prin transport activ. Totui, trebuie menionat c membrana citoplasmic a eucariotelor nu intervine n procesul producerii de energie cum se
ntmpl n cazul procariotelor.

Majoritatea protozoarelor i unele alge, au un nveli extern foarte diferit, numit euticul. Aceasta este un strat relativ rigid de 142

elemente localizate deasupra membranei plasmatice. Uneori membrana plasmatic este considerat ca fcnd parte i ea din cuticul. Cuticula poate fi extrem de simpl din punct de vedere structural De exemplu, Euglena spirogyra posed o reea de benzi care se acoper reciproc. Contrar acestora, cuticula protozoarelor ciliate este foarte complex, fiind constituit din dou membrane i dintr-o varietate de structuri asociate. Cuticula nu este o structur tot att de solid i rigid ca i peretele celular, dar cu toate acestea, ea d celulelor o form caracteristic. 4.2. Citoplasma, microfilamentele, filamentele, filamentele intermediare i microtubulii Examinnd celula eucariot la microscopul electronic, se vd organitele citoplasmice gravitnd n substana omogen care este citoplasma. Matricea citoplasmic este o parte foarte important a celulei pentru c ea este, prin intermediul organitelor celulare, sediul a numeroase procese biochimice. Spre deosebire de citoplasma procariotelor, aceea a eucariotelor se caracterizeaz prin stri alternative sol-gel i prin prezena unor cureni citoplasmatici. Dac la procariote meninerea materialului nuclear n stare compact este dat de pstrarea neschimbat a strii de gel a citoplasmei, la eucariote nucleul este delimitat de o membran proprie, iar citoplasma este un sistem coloidal complex care i schimb starea (sol, gel) n funcie de starea fiziologic a celulei. Apa reprezint 70-85% din greutatea unei celule eucariote. O mare parte a citoplasmei este deci constituit din ap. Apa celular poate exista sub dou forme: ca ap liber {osmotic activ) sau ca ap legat (apa de hidratare). Aceasta din urm este legat la suprafaa unor proteine i a altor molecule. Ea este osmotic inactiv i mai bine direcional dect apa liber. Aceasta nseamn c o mare parte a metabolismului se realizeaz n apa legat. Coninutul n proteine a unor celule este foarte ridicat, aa nct la acestea, citoplasma poate adesea s fie semicristalin. n general pH-ul citoplasmei este aproape de neutralitate (6,8 - 7,1), dar el poate varia. De exemplu, vacuolele digestive ale protozoarelor ating un pH de 3-4. Celulele eucariote prezint n matricea citoplasmatic nite formaiuni denumite microfilamente. Acestea sunt nite filamente proteice cu diametrul cuprins ntre 4 i 7nm, care pot fi mprtiate n

scmmoarea rormei. Micarea granulelor de pigmeni, deplasarea amibelor, prin schimbarea formei lor, proprietile de mpnzire a unui spaiu de ctre mucegaiuri, sunt cteva exemple de micri celulare asociate activitii microfilamentelor. Demonstrarea micrilor celulare graie acestor structuri s~a realizat prin utilizarea citochalazinei B, o substan care perturb structura microfilamentelor i inhib totodat micrile celulare. Proteina coninut de microfilamente a fost izolat i analizat chimic. Aceasta este o actin foarte asemntoare cu proteinele responsabile de contraciile musculare. Iat un argument indirect al rolului acestor microfilamente n micarea celular. Citoplasma mai gzduiete i un al doilea tip de structuri asemntoare: microtubulii. Acetia sunt n form de cilindrii de 25nm diametru, sunt structuri complexe constituite din 2 subuniti proteice sferice, puin diferite, numite tubuline i care au un diametru cuprins ntre 4 i 5nm. Aceste subuniti sunt asamblate n form de spiral sau helix i formeaz un cilindru. Fiecare tur a spiralei este format din aproximativ 13 subuniti (fig .4.1).

Fig. 4.1 - Structura unui microtubul caracteristic celulei eucariote: cilindrul spiralat este constituit din dou tipuri de subuniti de tubulin (a i b)

144

Rolul microubulilor: -menin forma celulei; -sunt implicai mpreun cu microfilamentele n micrile celulare; -particip la transportul intracelular de substane i organite. Rolul lor a fost pus n eviden prin nsi examinarea localizrii lor intracelulare i prin studierea efectului eolchicinei. Microtubulii sunt localizai n nite structuri celulare lungi i subiri necesitnd un suport ca i axopodele protozoarelor (lungi pseudopode rigide i fine). Atunci cnd unele celule embrionare nervoase i cardiace sunt tratate cu colchicin, ele i pierd simultan microtubulii i forma caracteristic. Microfilamentele lor sunt ntotdeauna intacte, dar disocierea microtubulilor de ctre colchicin le d un comportament anormal. Microtubulii sunt prezeni n anumite structuri ce particip la micarea celulei sau a unor organite. De exemplu, dac distrugem fusul mitotic constituit din microtubuli, cromozomii se mprtie n citoplasm i se ntrerupe separarea lor, deci nu se mai deplaseaz n direcia normal, caracteristic fazei de diviziune. Micrile cililor i ale flagelilor unor eucariote sunt datorate tot prezenei microtubulilor. Filamentele intermediare au un diametru de 8~10nm i reprezint ali componeni filamentoi ai celulei eucariote prezeni n citoplasm. Filamentele intermediare alturi de microfilamente i microtubuli sunt constitueni ai unei reele intracelulare denumite citoschelet (fig. 4.2). Acesta confer celulei forma sa caracteristic i joac un rol n micarea celular. El este absent la procariote.

Fig. 4.2 - Citoscheletul celulei eucariote (coloraie cu anticorpi n celule de mamifere; a) mrire de 400x; b) mrire de lOOOx)

n unele celule eucariote au fost observate cu ajutorul microscopului electronic, anumite reele de microtubuli asemntoare unor esturi sau grilaje, care menin ntre ochiurile acestora organitele celulare, comunicnd cu acestea (fig. 4.3).

Fig. 4.3 - Reea de microtubuli caracteristic celulei eucariote (T = traseul legturilor cu organitele celulare; RE = reticulul endoplasmic; MT = microtubulii; M = miocondriile; MP = membrana plasmatic; R = ribozomi liberi sau poliribozomi) (dup Presco, Harley, Klein, 1995)

43. Reticulul endoplasmic n afar de citoscheletul celulei eucariote, citoplasm acesteia este traversat de un sistem neregulat de tubuli membranari ramificai de 40-70nm diametru i coninnd numeroi saci plai numii cisterne. Aceast reea de tubuli i vezicule se numete reticul endoplasmic (RE) (fig. 4.3 i 4.4). Natura reticulului endoplasmic variaz n funcie de starea funcional i fiziologic a celulei. n celulele care sintetizeaz, spre exemplu, mari cantiti de proteine destinate funciilor de secreie, o parte important a suprafeei exterioare a reticulului endoplasmic este "tapisat" cu ribozomi. n acest caz reticulul endoplasmatic se numete reticul endoplasmic rugos (RER Alte celule, de exemplu cele care produc multe lipide, au cea mai mare parte a RE lipsit de ribozomi. Acest RE fr ribozonii, nu este rugos i se numete reticul endoplasmic lis sau neted (REL), Funciile i geneza reticulului endoplasmic Acestea sunt extrem de variate. El este sistemul de transport graie cruia proteinele, lipidele i probabil alte substane sunt 146

Fig. 4.4 - Reticulul endopiasmic (imagine la microscopul electronic cu transmisie); se observ RER - reticulul endopiasmic rugos i REL reticulul endopiasmic lis

excretate. n sinteza lipidelor i a proteinelor, un rol important l au enzimele i ribozomii asociai RE. Lanurile polipeptidice sintetizate pornind de la ribozomii legai de RE pot fi inserate n membrana RE sau secretate n spaiul luminai al RE. Reticulul endopiasmic este de asemenea, sediul principal al sintezei membranei celulare. Noii reticuli endoplasmici iau natere din extensia celor deja existeni. Numeroi biologi arat c RER sintetizeaz proteinele i lipidele noilor RE. RER mai vechi pierd imediat ribozomii asociai lor i se transform n REL. Exist i alte posibiliti de formare a RE, mecanisme care sunt nc n studiu. 4.4. Aparatul Golgi (AG) (fig. 4.5) Acesta este format din organite cuprinznd serii de 4-8 saci
aplatizai (cisterne) la extremitile crora se difereniaz nite vezicule

mai mult sau mai puin voluminoase, cu diametrul de 20-100nm. Aceti saci sau cisterne au 15~20nm grosime i sunt separate unele de altele prin poriuni de 2G~30nm.

(b)

Fig. 4.5 - Structura aparatului Golgi la Euglena gracilis, imagine la microscopul electronic (a), schem (by

Gruparea cisternelor are o polaritate definit, determinat de prezena a dou fee foarte diferite una de cealalt. Cisternele sunt frecvent asociate pe feele cis cu RE. Faa cis difer de faa trans prin grosime, prin coninutul n enzime i gradul de formare al veziculelor. Transportul de materiale se realizeaz de la cisternele cis spre cele trans, prin intermediul unor vezicule care se detaaz de extremitile unei cisterne i se deplaseaz spre cisterna urmtoare. Aparatul Golgi este prezent la cea mai mare parte a celulelor eucariote, dar multe micete i protozoare ciliate nu au structuri golgiene bine formate. Uneori exist cazuri n care, la unele celule, apare doar un singur grup de cisterne, n timp ce numeroase celule conin pn la 20 i chiar mai multe. Aceast grupare de cisterne poart numele de dictiozomi i pot fi concentrai ntr-o regiune anume sau mprtiai n toat celula. Aparatul Golgi este implicat n acumularea i secreia de substane, dar rolul su este variabil n funcie de organism. nveliul extern al unor alge flagelate i al unor protozoare radiolare se pare c este sintetizat de aparatul Golgi i ajunge la suprafaa celulei prin intermediul unor vezicule transportoare. Tot n aceeai manier are loc i geneza membranei externe a diatomeelor. Aparatul Golgi particip i la sinteza membranelor celulare. Creterea unor hife fungice este legat tot de activitatea aparatului Golgi. n toate aceste procese, produii secretarii sunt transferai din RE la AG. Cel mai adesea, unele vezicule se detaaz de RE, se deplaseaz ctre AG i fuzioneaz cu cisternele "cis". Aparatul Golgi este astfel 148

ntr-o foarte strns relaie cu RE din punct de vedere att structural ct i funcional. Cea mai mare parte a proteinelor care provin de la RE i intr n AG sunt glicoproteine care posed un scurt lan glucidic. Proteinele secretorii sunt foarte adesea modificate n AG prin adiia unor grupri specifice i sunt imediat dirijate ctre localizarea lor proprie (exemplu, n cazul unor proteine lizozomale se produce adiia unui grup fosfat la manoz). 4.5. Lizozomii i endocitoza Una din funciile cele mai importante ale AG i ale RE este sinteza de ctre acetia a unei alte organite - lizozomul Lizozomii se gsesc n numeroase microorganisme protozoare, unele alge i micete, dar tot att de bine i n celulele plantelor i ale animalelor. Lizozomii sunt mai mult sau mai puin sferici i sunt nconjurai de o membran unic. Diametrul lor mediu este de aproximativ 500nm, dar talia lor variaz ntre 50nm i civa \xm. Ei sunt sedii ale digestiei intracelulare. Conin enzimele necesare digestiei tuturor tipurilor de molecule. Aceste enzime, numite hidrolaze, catalizeaz hidroliza unor molecule i sunt mai eficiente n condiii de uoar aciditate (pH 3,5-5). Lizozomii menin un mediu intern acid pompnd protoni exteriori. Enzimele digestive sintetizate de ctre RER sunt acumulate n AG i formeaz lizozomi. Un segment de REL foarte apropiat de AG poate de asemenea s se detaeze i s formeze lizozomi. Lizozomii sunt foarte importani la protozoare care se hrnesc prin endocitoz, proces graie cruia o celul capteaz particule i le nconjoar n vacuole sau vezicule rezultate prin invaginarea membranei lor plasmatice. Cavitile mai largi sunt numite deseori vacuole fagocitare, iar cele mai mici, vezicule. Exist dou forme principale de endocitoz: fagocitoza i pinocitoza. Fagocitoza - particule mari sau chiar microorganisme sunt nchise (nglobate i captate) n vacuole fagocitare sau fagosomi i ingurgitate (fig. 4.6).

Fig. 4.6 - Schema formrii i funcionrii lizozomilor (dup Prescot, Harley, Klein, 1995)

Pinocitoza - anumii compui extracelulari solubili sunt captai n mici vezicule pinocitice sau pinosomi. Adesea fagosomii i pinosomii se numesc endosomi, cci ei sunt formai prin endocitoz. Endoctoza este i mecanismul ce st la baza ptrunderii unui virus animal n celula gazd. Lizozomii nou formai sau lizozomii primari, fuzioneaz cu veziculele fagocitare pentru a da natere unor lizozomi secundari care conin produii n curs de digestie. Lizozomii secundari sau veziculele fagocitare sunt denumii adesea i vacuole digestive. Produii de digestie sunt eliberai n citoplasm. Cnd lizozomii acumuleaz cantiti mari de materiale indigeste se numesc corpi reziduali (fig. 4.6). Lizozomii fuzioneaz cu veziculele fagocitare i ntr-un scop defensiv (de aprare), nu numai pentru nutriie. Bacteriile care invadeaz un organism sunt distruse prin fuzionarea lizozomilor cu 150

fagosomii. Acest proces a fost observat la leucocitele (globulele albe) vertebratelor. Celulele pot digera n mod selectiv i poriuni ale propriei citoplasme ntr-un tip de lizozomi secundari numii vacuole autofagice. Autozomia joaca probabil un rol important n reciclarea sau renoirea (fireasc) a unor constitueni celulari. O celul poate supravieui astfel unei lipse de nutrieni digernd ntr-o manier selectiv nite poriuni din propria sa substan. Dup moartea unei celule, lizozomii ajut la digestia i eliminarea resturilor celulare. Este remarcabil un aspect, acela c lizozomii i ndeplinesc toate funciile fr s elibereze n citoplasm enzimele produse de ei, fapt care ar reprezenta o adevrat catastrof, determinnd distrugerea celulei (liza celular). Complexul format din: AG, lizozomi, endozomi i structurile asociate lor, se pare c opereaz ca un ansamblu coordonat asigurnd transportul de materiale n celul (fig. 4.7).

Fig. 4.7 - Fluxul de substane ntre organitele celulare prin intermediul sistemului membranar: 1. Schimbul ntre RE i AG; 2. Schimburile secretorii ntre AG i membrana plasmic; 3. Schimbul ntre AG i lizozomi; 4. Micarea n timpul endocitozei; 5. Reciclarea membranei plasmatice printr-un endosom, lizozom i prin AG; 6. Micarea endosom - lizozom; 7. Autofagia printr-un lizozom

Sunt formaiuni intrcitoplasmice prevzute cu o membran periferic ce provine probabil, din RE. Vacuolele eucariotelor au form sferic i sunt pline cu: ap, glucide, lipide, sruri minerale, baze purinice, aminoacizi (lizin, arginin, histidin, ornitin),polifosfi, acid uric. Acestea sunt importante rezerve nutritive pentru situaii n care celula are nevoie de hran. Vacuolele asigur reglarea presiunii osmotice din celula eucariot. Numeroase enzime hidrolitice (fosfataza acid, b-glicozidaza, b-glicofosfataza, proteazele, ribonucleazele, sunt dominante, ceea ce justific includerea vacuolelor n sistemul lizozomal. Cercetrile de bochimie efectuate n culturi sincrone de celule eucariote (drojdii), au demonstrat c producia de aminoacizi din celul este mult superioar capacitii acesteia de a-i utiliza n sinteza de polipeptide. Acest lucru determin acumularea unor rezerve de aminoacizi solubili, adevrate depozite. Etapa de producie a aminoacizilor este ntotdeauna succedat de o alta n care proteosinteza depete cu mult rata de sintez a aminoacizilor, moment n care se apeleaz n primul rnd la rezerve. Astfel, are loc o succesiune sintez - consum de aminoacizi, fapt ce determin i schimbri ale numrului i dimensiunilor vacuolelor care sunt de asemenea, alternative. Pe lng funcia de rezervor de substane nutritive, vacuolele ndeplinesc i alte funcii n celul: -digestia intracelular a unor substane; -diferenierea biochimic a celulei eucariote; -funcia lizozomal; -fagocitarea globulelor lipidice, mod n care lipidele nglobate n oleosomi sunt redate circuitului metabolic; -funcia de reglare a metabolismului celular pentru anihilarea efectelor nefavorabile ale mediului ambiant; 4.7. Ribozomii Ribozomii eucariotelor pot fi asociai cu RE sau pot exista liberi n citoplasm. Ei sunt mai mari dect ribozomii bacterieni i sunt constituii din dimeri formai din dou subuniti denumite 60s i 40s, cu diametrul de 22nm. Coeficientul de sedimentare al ribozomilor celulei eucariote este de 80s. Subunitatea care face legtura cu RE este 152

aceea de 60s. Ribozomii liberi sau legai la RER sintetizeaz proteine care, fie ajung n spaiul luminai pentru a fi secretate, fie sunt inserate n membrana RE ca proteine membranare intrinsece. Ribozomii liberi sunt sediile sintezei proteice nesecretorii i nemembrnare. Mai muli ribozomi sunt legai n general la un singur ARNm i traduc simultan mesajul su n proteine. Aceste complexe ARNm-ribozomi sunt numite poliribozomi sau polisomi. 48. Mitocondriile Prezente n majoritatea celulelor eucariotelor, mitocondriile sunt adesea denumite i "uzinele energetice" ale celulei. Ele sunt sediul activitii ciclului acizilor tricarboxiliei, al genezei ATP pentru transportul de electroni i al fosforilrii oxidative. Aceste organite au cel mai adesea o form cilindric aa cum se constat la microscopul electronic cu transmisie i msoar ntre 0,3-ljnm i 5-10jim (cam aceeai tali ca a unei bacterii). n unele celule vii, colorate cu ajutorul unui colorant fluorescent, ele apar foarte alungite. Marea majoritate a celulelor conin un numr foarte mare de mitocondrii. Totui unele specii de microorganisme eucariote (levurile, algele unicelulare i tripanosomele) au o singur mitocondrie gigantic , tubular, ce traverseaz citoplasma celular. Mitocondria este nconjurat de dou membrane: una extern separat de cea intern printr-un spaiu intermembranar de 6-8nm (fig.4.8).
Membran extern

Fig. 4.8 - Ultrastructura unei mitocondrii i un detaliu al particulelor pe suprafaa intern a cristelor

localizate

j^X

V / J V 1 1I . C 4 .

U i l V / X

WVOIV,

lil V U^UIUI J

illVlIIUlUUUlA/

V U i.\JXlilV

Y ; U i l U L V

U V I U

specie la specie, cunoscute sub numele de criste. Micetele au adesea criste asemntoare unor plcue mpachetate., Flagelatele pot avea criste n form de discuri. Exist i criste tubulare, prezente la unele micete i la marea majoritate a protozoarelor. Mitocondriile amibelor au creste de form vezicular. Membrana intern delimiteaz matricea mitocondrial, un fluid dens coninnd ribozomi, ADN i adesea granule de fosfat de calciu. Ribozomii mitocondriali sunt mai mici dect cei citoplasmici i se aseamn cu aceia ai bacteriilor, prin talia acestora i compoziia subunitilor lor. ADNmt este circular, la fel ca i ADN bacterian. Fiecare compartiment mitocondrial difer prin compoziia sa chimic i enzimatic. Membranele mitocondriale interne posed o alt caracteristic structural distinct n relaie cu funcia sa. Suprafaa intern este tapisat cu numeroase sfere mici de 8,5nm diametru, punctate de nite tije. Aceste sfere se numesc factori Ft i sunt responsabili de sinteza ATP n timpul respiraiei celulare, Mitocondriile sintetizeaz unele dintre aceste proteine proprii, graie ADNmt (propriu) i a ADNr (ribozomal). Cea mai mare parte a altor proteine mitocondriale sunt totui sintetizate graie informaiei genetice din nucleu. Mitocondriile se divid prin sciziparitate. Un sistem de reproducere parial independent posed i cloroplastele. Astfel, cele dou tipuri de organite celulare ale eucariotelor se pot asemui cu bacterii, aa cum arat i teoriile tiinifice conform crora mitocondriile i cloroplastele provin din asociaii simbiotice ntre bacterii i celule de talie mai mare. 4.9. Cloroplastele Plastidele sunt organite dtoplasmatice specifice algelor i plantelor superioare. Ele posed pigmeni cum sunt clorofila i carotenoizii, constituind sediul de sintez i de stocare al unor rezerve alimentare. Tipul cel mai important de plastide este acela al cloroplastelor,coninnd clorofile i care utilizeaz energia luminoas pentru transformarea C0 2 i a apei n glucide i 0 2 . Ele reprezint sediul fotosintezei. Cloroplastele diferitelor specii prezint talie i forme extrem de variate. Totui ele sunt din punct de vedere structural foarte asemntoare. Ele sunt cel mai des ovale, cu dimensiuni 154

cuprinse ntre 2-4 i 5-lOjam. Unele alge au un numr enorm de cloroplaste care, practic sunt mprtiate n toat celula. La exteriorul cloroplastelor se afl o membran dubl ca i aceea a mitocondriilor (fig. 4.9). Matricea interioar a acestora se numete stroma i este delimitat de o membran intern. Stroma conine ADN, ribozomi, picturi lipidice, granule de amidon i un sistem membranar foarte complex, compus din saci aplatizai nconjurai de o membran, denumii tilacoizL, n stroma celor mai multe cloroplaste de alge sunt dispersate grupuri de doi sau mai muli tilacoizi. La unele categorii de alge exist mai muli tilacoizi n form de disc, suprapui ca i monedele n fiicuri. Acestea formeaz grana (granum).

Fig. 4.9 - Reprezentarea schematic a structurii unei cloroplaste

Cloroplastele reprezint sediul reaciilor de fotosintez. Formarea de glucide plecnd de la C0 2 i ap - reacii ale fazei obscure, au sediul n stroma. Captarea energiei luminoase pentru generarea de ATP, NADPH i 0 2 - reacii ale fazei luminoase, i au localizarea n membranele tilacoizilor ctre conin clorofil i transportori de electroni. Cloroplastele majoritii algelor conin un pironoid, o regiune dens n proteine nconjurate de amidon sau de alte polizaharide. 4.10. Nucleul T

La eucariote, nucleul este un organit celular cu organizare complex, bine separat de citoplasm i cel mai vizibil. El a fost descoperit de Robert Brown n 1831 i conine toat informaia genetic a celulei, fiind centrul de control al acesteia.

Nucleul este un corp sferic cu diametrul de 5-7|im, delimitat de un nveli aa cum se vede n fig. 4.10. Prezena membranei nucleare este o caracteristic fundamental a celulei eucariote, care o deosebete fundamental de aceea procariot. nveliul nuclear are o structur complex, coninnd dou membrane (una intern i una extern), separate printr-un spaiu perinuclear de 15 - 75nm. Aceast membran se continu cu RE prin mai multe puncte. Membrana extern este acoperit de ribozomi. Spre interiorul nucleului, membrana intern este cptuit cu o reea de filamente intermediare, numit lamina nuclear. Lamina nuclear este o reea de proteine fibroase, multiplu conexat cu membrana intern a nveliului nuclear cruia i confer o anumit rigiditate, contribuind astfel la inducerea formei nucleare. Rolul esenial al laminei este ns n organizarea cromozomilor n spaiul nuclear prin legarea acestora la sitisuri specifice ale nveliului nuclear. Organizarea i funcionarea complexelor porale se datoreaz tot laminei nucleare. Pc - perete celular Mc - membran citoplasmatic N - nucleu c - centriol NI - nucleol V - vacuol
r

L - incluziuni lipidice M - mitocondrii C - citoplasm Cm - cicatrice mugurat

Fig. 4.10 - Schema organizrii celulei de drojdii cu observarea structurii nucleului

nveliul nuclear conine numeroi pori nucleari (fig. 4.10) formai prin fuziunea membranei interne i externe a nveliului nuclear. Porii au un diametru de 70nm i ocup n jur de 10-25% din 156

suprafaa nveliului nuclear. Ei sunt bordai de un sistem complex n form de inel, constituit din material granular i fibros. Aceti pori permit schimburi ntre citoplasm i nucleu. S-a observat pasajul unor particule prin pori ctre interiorul nucleului. Nu se cunoate modul de funcionare al granulelor din zona porilor, dar probabil c ele controleaz sau faciliteaz transportul materialelor care trec prin pori. Numeroase substane traverseaz de asemenea, n mod direct nveliul nuclear prin mecanisme nc necunoscute. n interiorul nucleului se gsete cromatina nuclear ce poate fi observat prin coloraii specifice. Aceast poriune a nucleului conine ADN. Cnd celula nu se afl n stare de diviziune, cromatina este dispersata n nucleu, urmnd a se condensa i a lua forma de cromozomi, vizibili la microscop i n timpul diviziunii celulare. O parte din cromatina nuclear - eucromatina, este mai puin condensat, coninnd gene active. Heterocromatina este mai condensat; ea apare mai puternic colorat la microscopul electronic i nu este genetic activ. Nucleolul este o structur vizibil a nucleului. Exist specii de eucariote care au 1 sau mai muli nucleoli n nucleu. Cu toate c este lipsit de o membran, nucleolul este un organit complex, constituind o regiune granular i fibroas a nucleului. El dispare n timpul mitozei, reformndu-se dup ncheierea acestui proces n jurul unei structuri denumite organizator nucleolar. Nucleolul joac un rol major n sinteza ribozomilor, ADN organizator nucleolar dirijeaz transcripia ARN ribozomal (ARNr). Granulele observate n nucleol sunt probabil subuniti ribozomale imature. Ele prsesc n scurt timp nucleul, ieind prin porii nucleari, desvrindu-i maturarea n citoplasm. 4.11. Cilii i flagelii Numeroase microorganisme eucariote se deplaseaz graie unor organite locomotorii: cili i flageli, n funcie de specie. Aceste formaiuni se deosebesc ntre ele prin cteva elemente. Astfel, cilii sunt mai scuri, de numai 5-20[im, n timp ce flagelii sunt de 100-200jim. Micarea flagelilor este ondulatorie, fiind generat de unde plane sau helicoidale ce vin dinspre baza sau dinspre vrful flagelului. Dac undele vin dinspre baz ctre vrf, celula este tras, iar o btaie a vrfului spre baz, duce la mpingerea celulei, (fig. 4.11).

dinspre baza ctre vrful flagelului; b) btaia dinspre vrful flagelului ctre baza lui determin mpingerea celulei.

Flagelul eucariotelor este format din numeroi periori laterali fini, numii mastigoneme (fig. 4.12), importani n transmiterea undei pentru orientarea sensului micrii.

Fig. 4.12 - Imagine la microscopul electronic, evideniind mastigonemele

Cilii au o micare n dou faze. n micarea efectiv, cilul se deplaseaz n lichid ca o vsl n ap. Cilul se repliaz, apoi revine n poziia sa iniial i aa mai departe. n timpul deplasrii unui microorganism eucariot ciliat, cilii nu sunt n aceeai faz, n acelai timp, adic nu efectueaz btaia apei deodat n aceeai direcie. Un microorganism ciliat se prezint ca n figura 4.13. 158

Fig. 4.13 Paramecium - microorganism eucariot ciliat; imagine la microscopul electronic n baleiaj; se observ orientarea cililor la suprafaa protozoarului n valuri, ceea ce imprim sensul de deplasare al microorganismului

Ultrastructura eililor este foarte asemntoare cu a flagelilor. Acetia sunt cilindri de 0,2|um diametru, legai la membrana celular, n matricea acestei organite se gsete un complex axonem, constituit din 9 perechi de microtubuli dispui n cerc, n jurul a dou tuburi centrale (fig. 4.14). Aceste seturi de tuburi sunt formate din polimeri de tubulin de dou tipuri - a i b, cu o compoziie asemntoare cu actina (protein contractil din flagelul bacterian).

Fig. 4.14 - Ultrastructura unui cil la un microorganism eucariot (seciune transversal, mrire de 160 000 x); se observ doi microtubuli centrali nconjurai de nou dublete de ali microtubuli

hazal (fig. 4.5). Corpusculul bazai dirijaz biosinteza organitului locomotor care se dezvolt prin adiia de noi subuniti microtubulare preformate la extremitate. Micarea ondulatorie a cililor i flagelilor este dat de alunecarea dubleilor microtubulari adiaceni unii peste alii. Braele unui dublet sunt lungi de 15nm i sunt formate din dinein. Pentru micare este necesar energia furnizat de ATP. Braele de dinein interacioneaz ntre ele determinnd alunecarea lor. Tijele centrale particip i ele la aceast micare. Cilii i flagelii bat apa cu o vitez de 10-40 bti pe secund i propulseaz microorganismul foarte rapid. Recordul a fost atins de flagelata Monas stigmatica. Aceasta nnoat cu o vitez de 260|iim/secund (de 40 de ori lungimea ei proprie)., Euglena gracilis se deplaseaz cu 170(im/secund (de 3 ori lungimea celulei). Paramecium caudatum, un ciliat comun, nnoat cu 2 700|im/secund (de 12 ori lungimea celulei).

Fig. 4.15 - Seciune longitudinal printr-un cil cu evidenierea corpusculului bazai (b), i a fasciculelor de microtubuli, adic a nsui cilului (cl)

4.12, Principalele grupe de microorganisme cu organizare celular eucariot n aceast categorie pot fi ncadrate 3 grupe distincte de microorganisme: algele, protozoarele i micetele (fungii). 4.12,1. Algele Algele prezint caracteristici anatomice i morfologice asemntoare acelora ale regnului vegetai. Ele posed o membran celulozic i sunt capabile de fotosintez. Acestea sunt organismele 160

fotosintetice cele mai abundente de pe suprafaa Terrei, jucnd i un rol economic considerabil. Pe de o parte, ele sunt cele mai importante productoare de oxigen de pe planet, iar pe de alt parte, n cursul fotosintezei algele fixeaz carbonul din C0 2 provenind din aer i elaboreaz compui organici folosii de ctre organismele heterotrofe. Astfel, algele reprezint n natur, ca i plantele, productori primari ai lanului trofic. In plan economic, algele joac un rol important n industriile productoare de produse cosmetice i farmaceutice, a ngrmintelor, a unor materiale filtrante, n industria alimentar etc. Exist totui i cteva specii patogene. Ele pot determina infecii sistemice, alergii respiratorii i intoxicaii alimentare. Unele specii (de exemplu Prototheca wickerhami) poate cauza infecii subcutanate i articulare. Specii ale genului Gonyalaux secret o toxin foarte puternic ce se concentreaz n glandele digestive ale unor molute folosite n alimentaia uman i care pot n acest fel s determine la consumatori forme grave de intoxicaii finalizate chiar cu paralizii. tiina care studiaz algele se numete algologie sau phycologie (gr. phycos = alg). Acest grup de organisme sunt descrise ca fiind eucariote lipsite de rdcin, tulpin i frunze, dar posednd clorofil i realiznd procesul de fotosintez la fel ca i plantele, graie pigmenilor clorofilieni sau de alt natur. Marea parte a algelor fac parte din regnul Protista, acestea fcnd obiectul de studiu al microbiologici.
V /

Habitat Habitatul algelor este, cel mai frecvent, mediul acvatic: apele dulci, marine, submerse etc, n care ele se afl n suspensie (alge planctonice) sau ataate i vivante pe fundul acestora (alge bentice). Cteva specii triesc la interfaa ap-aer, numindu-se neustonice. Termenul de plancton (gr. plangktos = rtcitor) reunete acele organisme acvatice care plutesc liber, marea parte a acestora fiind microscopice. Acesta are dou componente: fitoplanctonul, care cuprinde algele i plantele de talie mic i zooplanctonul, care cuprinde animale i protiste non-fotosintetice. Exist i specii de alge care se dezvolt pe roci umede, pe suprafee lemnoase, pe arbori sau pe soluri bogate n ap. Numeroase specii de alge triesc n simbioz cu plante, molute, corali, protozoare sau fungi. Aa cum am artat, unele specii sunt parazite pe diverse gazde.

clasificate dup urmtoarele criterii: -organizarea celular sau a talului (corpului algei); -prezena, numrul sau absena flagelilor; -natura constituenilor chimici asociai peretelui celular i morfologia acestuia; -natura pigmenilor celulari; -compoziia chimic a elementelor nutritive de rezerv; -modul de reproducere i ciclul biologic; -habitatul; Sistemul cu 5 regnuri al lui Whitaker mprea algele n 7 ramuri, parte dintre ele aparinnd regnului Protista i parte dintre ele regnului Plantae, aa cum putem observa n tabelul 4.2. Tabelul 4.2 aasifcarea algelor n 7 ramuri
Chrysophyta -alge verzi-galbene -alge brun-galbene -diatomee Euglenophyta -flagelate euglenoide fotosintetizante Pyrrhophyta (dinoflagelate) Chlorophyta Charophyta (alge verzi) Phaeophyta (alge brune) Rhodophyta (alge roii)

Ramura

Protista (Eucariote unicelulare) Protista Protista Protista Protista Plantae (multicelulare eucariote) Plantae

Regnul

Avnd n vedere cele 7 criterii enumerate anterior, principalele grupe de alge se pot caracteriza sumar n felul urmtor (tabelul 4.3). Ultrastructura celulei algelor Celula algelor unicelulare este nconjurat de un perete celular rigid, dar subire. Unele alge prezint o membran extern simpl i gelatinoas la exterior, care se poate asemui cu o capsul bacterian. Atunci cnd ei exist, flagelii sunt organe tipice locomotorii cu structur specific eucariotelor. Nucleul este acoperit de o membran nuclear tipic, poroas, iar n interior sunt prezeni un nucleol, 162

Tabelul 4.3 Caracteristicile distinctive ale diferitelor grupe de alge (dup Regnault 1990 i Prescott i colab., 1995)
Ramuri Caracteristici

Chlorophyta Alge verzi

Charophyta

Euglenophyta Alge euglenoide

Chrysophyta Alge verzi galbene, brun galbene, diatomee 6 000 Clorofile a, b, Carotine a , p, Xantofile, Fucoxantine Crisolaminarine, uleiuri 1-2 flageli apicali sau far flageli Celuloz, silice, CaC03, chitine, sau absent Unicelulare

Phaeophyta Alge brune

Rhodophyta Alge roii

Pivrophyta?? Dinoflagelate

Denumire comun Nr. specii Pigmeni fotosintetici

7 500 Clorofile a, b, Carotine a, J3, Xantofile Amidon, Fructan Fr flageli sau cu 1, 2, 8 flageli la speciile mobile Celuloz, manan, proteine, CaC0 3 Unicelular sau pluricelular, filamentoase sau coloniale Ape dulci, submerse, srate, terestru

250 Clorofile a, b,

700 Clorofile a, b,

1 500 < Clorofile a, b, Xantofile, Fucoxantine Laminarine, manitdl, uleiuri 2 flageli laterali

Produi de rezerv Aparat locomotor Perete celular Organizare celular Habitat

Amidon 2 flageli subapicali Celuloz CaC0 3 Unicelulare

Paramidon, uleiuri, zaharuri 1-3 flageli apicali Absent

3 900 Clorofile a, b, Xantofile, Ficoeritine, Ficocianine, Carotine Amidon, : glicogen Absent

1 100 Clorofile a, b, Carotine, Fucoxantine, Peridinine, Dinoxantine Amidon, glicani, uleiuri 1 flagel ,. posterior i 1 flagel ecuatorial Celuloz sau absert ? . Unicelulare

Celuloz, xilan, Celuloz, acid alginie . i galactan, CaC03 Pluricelulare Pluricelulare

Unicelulare

Ape dulci, submerse

Ape dulci, submerse, srate, terestru

Ape dulci, submerse, terestru

Ape submerse, srate

Ape dulci, submerse, srate,

Ape dulci, submerse, srate,

Cloroplastele pot eonine zone proteice dense - pyrenoide - asociate sintezei i acumulrii de amidon, n fig. 4.16 este prezentat morfologia unei alge cu organitele i elementele cele mai caracteristice majoritii ramurilor acestei categorii de eucariote.
Flagel

Membran

Vacuol pulsatil

Amidon Nucleu Reticul endoplasmic Aparat Golgi Mitocondrie Vacuol Pirenoid

Cloroplast A Membran \ plasmatic

Fig. 4.16 - Morfologia unei alge unicelulare (reprezentare schematic)

Nutriia algelor Algele pot fi autotrofe sau heterotrofe. Majoritatea sunt fotoautotrofe, avnd nevoie doar de lumin i C0 2 ca surse principale de energie i de carbon. Exist i alge chimioheterotrofe care folosesc compui organici drept surs de carbon i energie. Structura talului Talul reprezint forma vegetativ de existen a algelor. Algele pot fi unicelulare solitare, de talia unor bacterii sau uriae pn la 75m lungime. Exist i forme coloniale, coenocitice sau filamentoase. Algele pluricelulare pot avea o structur lamelar, membranoas, dar 164

, fr esut vascular specific plantelor. Unele specii unicelulare sunt figura 4.17.
mobile (flagelate), iar altele non-mobile, aa cum se poate observa n

Fig. 4.17 - Reprezentri schematice i imagini microscopice ale formelor posibile de tal ale algelor microscopice: 1. alg unicelular mobil, 2. alg unicelular nonmobil, 3. alge unicelulare adunate n colonii, 4. colonie coenobiotic de alge unicelulare, 5. Chlorella, alg unicelular verde, non-mobil, 6. Volvox, alg unicelular verde, tipic colonial, 7. Acetabularia - "cupa de vin a sirenei"

Reproducerea Unele alge unicelulare se reproduc asexuat. La acest tip de reproducere nu este prezent fuziunea de gamei pentru formarea unui zigot. La alge apar 3 feluri de reproducere asexuat: Fragmentarea talului - acesta se rupe n fragmente care vor constitui fiecare un nou tal. Spori care pot fi formai n celule vegetative obinuite sau n structuri specializate numite sporangi (gr. spora = smn; angeion = recipient); sporii pot fi mobili, flagelai numindu-se zoospori sau imobili, aplanospori La unele alge unicelulare apare frecvent ca modalitate de reproducere sciziunea binar (diviziunea succesiv nucleu- citoplasm, cu formarea a dou celule fiice). Multe alge prezint un mod de reproducere sexual n interiorul celulelor vegetative puin modificate numite oogonii (ovogonii), funcionnd ca structuri femele, se formeaz celule sexuale de tipul ovulelor. n structuri specializate de tip mascul (anteridii) se

iuna natere un zigot cupioia. Alternana tipurilor de reproducere (sexuat i asexuat) precum i a fazelor haploide i diploide, formeaz cicluri specifice diferitelor specii de alge unicelulare. n fig. 4.18 este prezentat alternana ciclurilor de reproducere la unul dintre genurile de alge reprezentative - Chlamydomonas.

Celule productoare de zoospori

Sing

Meioz

Fig. 4.18 - Ciclul de via al algei verzi mobile Chlamydomonas (n afar de zigot care este diploid ~ 2n, restul formelor ce se succed n cadrul ciclului sunt haploide - In.

Importana practic Algele unicelulare sunt importante din punct de vedere ecologic. Unele specii fiind n msur de a realiza biodegradarea unor deeuri organice din ape sau din sol Este cazul speciei Chlorella. Aceeai specie este n prezent studiat n vederea producerii de zahr i de protein industrial pentru alimentaia animalelor i, eventual, n viitor i a omului. Industria chimic i farmaceutic utilizeaz n prezent o serie de alge microscopice pe care le cultiv n bioreactoare n scopul producerii unor compui utili acestor domenii. Agarul folosit ca ingredient de solidificare a mediilor de cultur este obinut tot dintr-o alg marin comun, Gelidium. n unele habitate naturale exist i specii toxice, periculoase pentru om. 166

UJ Toxinele dinoQagelatelor Mareele roii otrvitoare ce se produc adesea n zonele de coast oceanic sunt asociate cu "flori de ap" - nite explozii ale populaiei de alge dinoflagelate (specii ale genurilor Gymnodinium i Gonyaulax). Pigmenii celulari ai dinoflagelatelor sunt responsabili de culoarea roie a apei. In aceste condiii de nflorire, dinoflagelatele produc o neurotoxin puternic numit saxitoxin. Toxina paralizeaz muchii respiratori striai ai multor vertebrate, inhibnd transportul de sodiu, esenial n funcionarea celulelor nervoase. Toxina nu este periculoas pentru molute i crustacee, care se hrnesc cu dinoflagelat In acest timp, acestea acumuleaz toxina i devin otrvitoare pentru om, consumator al fructelor de mare. Se produce o otrvire paralizant sau neurotoxic, caracterizat printr-o inflamaie a gurii, a buzelor, a feei i a extremitilor. Boala dureaz de la cteva ore pn la cteva zile i nu este n general fatal. Un alt tip de otrvire care are efect asupra omului se numete ciguatera. Ea rezult dintr~un consum de peti marini (macrou gri spaniol, anguil) care se hrnesc cu dinoflagelate aparinnd speciei Gambierdiscus toxicus. Toxina algei, numit ciguatoxin, se acumuleaz n pielea petelui. Este vorba despre una dintre cele mai ofensive toxine, ce poate rezista chiar dup gtirea petelui. Din pcate, toxina nu poate fi detectat la pete deoarece acetia nu prezint nici un semn c ar fi afectai. La om, aceast toxin poate cauza afeciuni gastrointestinale, diaree puternic, o confuzie la nivelul sistemului nervos central i dereglri respiratorii. Pentu acest tip de otrvire nu exist nici un tratament.
, A
( (

4.12.2. Protozoarele Termenul de protozoare provine din limba greac (protos = primar sau primitiv i zoon = animal). Disciplina care studiaz aceste protiste se numete protozoologie. Un protozoar este deci o protist unicelular eucariot, cel mai adesea mobil. Nu exist protozoare multicelulare. Ele nu au perete celular. Pot fi parazite, dar exist i specii care triesc libere. Habitatul protozoarelor i importana lor Aceste microorganisme ocup o larg palet de biotopuri. Umiditatea este absolut indispensabil pentru existen, iar rezistena lor la deshidratare este excesiv de sczut. Numeroase protozoare

j ^ C .U L Uiiitw A t tC t A J X .A X i .d i WO U U IU J ^ A C l A A t V ^ .

Protozoarele joac un rol imporant n economia naturii. De exemplu, ele constituie o parte important a planctonului: mici organisme care plutesc libere i care sunt implicate n diverse reele i lanuri trofice ale mediului acvatic. Protozoarele sunt de asemenea importante i pentru cercetrile de biologie molecular, biochimie etc. Numeroase ci biochimice utilizate de protozoare sunt la fel la toate eucariotele. Totodat nu trebuie neglijat importana lor n diagnosticarea unor maladii umane i animale produse de protozoare. Aspecte morfologice (Fig. 4.19) Protozoarele prezint talii forme foarte diferite. Astfel, ele pot msura ntre 1 i 200Q|am. Organizarea lor celular este tipic eucariot, fiind prezente aceleai elemente anatomice. Totui, numeroase funcii vitale sun ndeplinite la protozoare de ctre anumite structuri caracteristice lor. Forma vegetativ a protozoarelor, denumit trofozoit sau trofont, prezint o citoplasm nconjurat de o membran plasmatic. La unele specii (de exemplu, amibele), zona citoplasmei aflat mediat sub aceast membran este semisolid sau gelatinoas, dnd o anumit rigiditate corpului celular. Aceast zon este denumit ectoplasm. Baza flagelilor este ancorat n aceast ectoplasm. Pelicula uni sau multimembranar care se afl n zona adiacent ectoplasmei se numete cortex. Spre interiorul celulei, dup ectoplasm, se afl endoplasma, mai fluid, cu o compoziie granular i care conine cea mai mare parte a organitelor celulare. Majoritatea protozoarelor au un nucleu, dar exist i specii cu doi sau mai muli nudei identici. Altele, posed' dou tipuri diferite de nuclee: un macronucleu i mai multe micronuclee. Macroncleul, atunci cnd este prezent, este mult mai mare, asociat activitilor trofice i proceselor de regenerare. Micronucleul este diploid i implicat n recombinarea genetic (n timpul reproducerii) i n regenerarea macronucleului. Se disting n mod obinuit n citoplasm unul sau mai multe vacuole. Ele sunt difereniate n vacuole pulsatile, secretorii i alimentare (fagocitare sau digestive). Vacuolele pulsatile (contractile) sunt organite osmoregulatoare la protozoarele care triesc n mediu hipotonic cum ar fi un lac cu ap dulce. Echilibrul osmotic este meninut prin expulsia continu a apei. Cea mai mare parte a protozoarelor marine i a speciilor parazite sunt izotonice n raport cu 168

mediul lor de via i sunt lipsite de asemenea vacuole. Vacuolele fagocitare sunt denumite i vacuole digestive. Vacuolele secretorii conin de regul enzime specifice care pot ndeplini funcii foarte variate (de exemplu, dechistarea, adic trecerea de la forma chistic la cea yegetativ). Cea mai mare parte a protozoarelor anaerobe(exemplu, Trichonimpha) care triesc n intestinul termitelor, sunt lipsite de mitocondrii, de citocrom i nu au un ciclu Krebs. Unele au totui nite organite simple, limitate la o membran, numite hidrogenosomi. Acetia posed o cale particular de transfer de electroni n care hidrogenaza transfer electronii ctre acceptorii acestora pentru formarea de hidrogen molecular. Nutriia Majoritatea protozoarelor sunt chimioheterotrofe. La protozoare exist dou tipuri de nutriie heterotrof: - nutriia holozoic- alimentele (exemplu, bacterii) sunt ingerate prin fagocitoz; unele protozoare ciliate (exemplu, Parameciul) au o structur specializat pentru aceast funcie fagocitar ce se numete citostoma (gur celular). - nutriia saprozoic (osmotrof) - nutrienii (acizii aminai, zaharurile etc) traverseaz membrana plasmatic prin pinocitoz, prin difuziune (transport pasiv) sau prin transport cu ajutorul unui transportor (transport activ sau facilitat). nchistarea i dechistarea la protozoare Nmeroase protozoare trec print-o faz de nchistare, chistul format fiind o faz de laten constnd n formarea unei membrane externe chistice i prin reducerea activitii metabolice la maximum, nchistarea este frecvent n special la formele acvatice, la cele libere i la cele parazite. Formele chistice ndeplinesc 3 funcii: - asigur rezistena la schimbrile defavorabile de mediu (uscciune, carene alimentare, variaii ale pH, lips de O^); - reprezint sediile reorganizrii nucleare i ale diviziunii celulare (chiti specializai n reproducie); - servesc drept mijloace de transmitere (diseminare) de la o gazd la alta, n cazul speciilor parazite. Dechistarea este trecerea la forma vegetativ a chistului sau ieirea din laten a acestuia prin distrugerea pe cale enzimatic a membranei protectoare. Nu se cunoate cu exactitate natura stimulului decisiv n declanarea dechistrii, dar aceasta este asociat n general

Reticul

endoplasmic

, Ectoplasm

Vacuol Vacuol fagocltar

putsatil

Extremitatea anterioar

<b)

Silon oral Micronucleu

Vacuol contractil anterioar

Vestibul oral Vacuole fagocitare Citostoma Citoproct

Mitocondrie

Extremitate posterioar Inel posterior (c) Nucleu Vacuol pulsatil Teac Vacuoie fagocitare

(d)

Deschiderea tecii Pseudopode

Fig. 4.19 - Aspecte morfologice asupra celor mai reprezentative protozoare: a) structura unui flagelat (Trypanosoma brucei rhodesiense); b) Structura unui protozoar tip amiba (.Amoeba proteus); c) Structura unui sporozoar; d) Structura unui protozoar ciliat (Paramecium caudatum); e) Structura protozoarului Arcella.

restabilirii condiiilor de mediu favorabile. La formele parazite, dup ingerarea chitilor de ctre gazd, ei se dechisteaz. Organitele locomotorii Numai cteva specii de protozoare sunt imobile, majoritatea lor fiind mobile. Fa de alte categorii de microorganisme, protozoarele se 170

bucur de o mai mare varietate de-organite locomotorii: pseudopodele, flagelii i clii. Pseudopodele (picioarele false) sunt extensii ale citoplasmei observate la amibe. Ele sunt responsabile att de micarea celulei ct i de captarea alimentelor (fig. 4,19). Flagelii i cilii sunt asemntori cu aceia ai microorganismelor eucariote n general, att ca structur ct i ca mod de funcionare. Reproducerea Majoritatea protozoarelor se reproduc pe cale asexuat, doar unele utiliznd i calea sexuat. Reproducerea asexuat se realizeaz prin sciziune binar. n timpul acestui fenomen, nucleul sufer la nceput o mitoz, apoi se divide citoplasma (cariokinez + citokinez), rezultnd dou celule fiice identice (fig. 4.20).

Fig. 4.20 - Reproducerea asexuat la protozoare (Paramecium caudatum) prin sciziune binar

Reproducerea sexuat const n conjugarea ntre cele dou tipuri sexuale diferite, concretizat prin schimbarea nucleelor ntre acestea (fig. 4.21). Conjugarea este tipic protozoarelor ciliate, cel mai cunoscut reprezentant al acestora fiind Paramecium caudatum. La nceputul conjugrii, cele dou ciliate se unesc, iar membranele lor fuzioneaz n punctul de contact. Macronucleul se degradeaz n fiecare celul. Fiecare micronucleu suport o dubl'diviziune prin meioz pentru a forma 4 prenuelei haploizi din care trei sunt dezintegrai. Pronucleul rmas se divide din nou prin meioz, formnd ,, doi nuclei genetici: unul staionar i unul migrator. Nucleii migratori ai celor dou celule se schimb ntre ei. Dup aceasta, conjuganii se

se; tunipui ia uc u uicLui&La ayai ic iicv/ctic. ujuujl csio icimui uci micronucleu, 3 sunt distrui i ultimii 4 formeaz macronucleu!. Fiecare dintre ex-conjugani suport imediat o diviziune celular. n final, se formeaz celule fiice dotate cu un macronucleu i un micronucleu.
Macronucleu Conjugare Degenerescena macronucleelor i meioza rnicronucleelor Migrarea rnicronucleelor i fertilizarea

Micronucleu Multiplicarea rnicronucleelor

Nucleu zigot diploid

Separarea protozoarelor i fuziunea nucleelor gametice1

nceputul modificrii nucleare

Fig. 4.21 - Schema conjugrii la Paramecium caudatum.

Alte protozoare elibereaz gamei adevrai care fuzioneaz pentru formarea zigoilor. Este cazul sporozoarelor (Apicomplexa) la care alterneaz o reproducere sexuat i una asexuat. Clasificarea protozoarelor Pn n prezent s-au identicat n jur de 30 000 specii de protozoare. Specialitii n protozoologie consider c protozoarele 172

reprezint un subregn constituit din 8 ncrengturi. Clasificarea protozoarelor ine seama n principal de anumite caracteristici cum ar fi: tipul de organite de locomoie existent, numrul de nuclee i modul de reproducere. Civa reprezentani ai acestui grup de protiste se pot vedea n fig. 4.19. I. ncrengtura Sarcomastigophora 1. Suhncrengtura Mastigophora a)Clasa Zoomastigophora (ZooQageate) - forme amoeboide cu sau fr flageli; - sexualitate prezent la unii reprezentani; - reproducere asexuat prin sciziune binar; - un singur tip de nucleu. Reprezentant (genuri): Trypanosoma, Giardia, Trichomonas, Leishmania, Trichonimpha (Anexa 3). Importan - pot tri libere n natur (solitare sau n colonii); - unele sunt implicate n relaii de simbioz (Triconimpha triete n intestinul termitelor unde produc enzime ce le ajut pe acestea din urm s digere lemnul); - unele specii sunt patogene: Giardia triete n intestinul uman producnd diaree grav; se transmite prin intermediul apei contaminate cu materii fecale; Trichomonadele (Trichomonas vaginalis) triesc n vaginul femeilor, n prostat, testicule i uretr, determinnd boli cu transmitere sexual; Tripanosomele (hemoflagelate) sunt germeni prezeni n sngele uman i animal, caracteristici unor anumite zone geografice (Africa); boala somnului este una dintre bolile produse de un protozoar hemoflagelat din aceast categorie. 2. Sub fncrengtura Sarcodina a)Clasa Rhizopoda - forme ameboide cu pseudopode sau cu deplasare prin fluxul citoplasmatic, avnd pseudopode slab marcate;
- reproducere asexuat prin sciziune;

- via liber cel mai adesea. Reprezentani (genuri): Amoeba, Elphidium, Coccodiscus.

- unele sunt parazite la mamifere: Entamoeba hisolytica este parazit n intestinul uman, determinnd boli grave de tipul dizenteriilor, iar Naegelia i Acan thamoeba triesc libere i pot fi patogene pentru om sau mamifere; - unele dintre acelea triesc libere n mri (Arcella) i produc nite teci protectoare (Foraminiferele fac parte din aceast categorie); - exist i specii simbionte n interiorul unor animale; JT. ncrengtura Actinopoda - filopode (pseudopode fine), schelet de spiculi silicioi (radiolari); - pot tri libere n plancton sau simbionte cu algele. m. ncrengtura Labyrmtbomorpha - celule fusiforme care las urme mucoide, non-ameboide; - saprofite sau parazite la alge; - unele specii distrug anumite monocotile specifice coastei Atlanticului american, lsnd fr hran psrile slbatice i impurificnd apa. IV. ncrengtura Apicomplexa - se mai cunosc i sub denumirea de Sporozoare; - au stadii sporogene n cursul ciclului lor de multiplicare, reproducere sexuat prin singamie; - toate speciile sunt parazite, formeaz adesea chiti; -nu au cili. Reprezentani (genuri): Plasmodium, Toxoplasma, Eimeria, Cryptosporium, Pneumocystis, Importan -Plasmodium malariae - agentul patogen al malariei, Toxoplasma - agentul patogen responsabil de producerea toxoplasmozelor, Eimeria - responsabile de pneumonii grave, n principal la bolnavii de SIDA. V. ncrengtura Microspora - parazite obligat intracelulare; - sunt implicate n unele infecii la bolnavii de SIDA.

174

Reprezentani (genuri): - Nosema, Encephalitozoon, Pleistophora, Enterocytozoon. VX ncrengtura Acetospora - parazite la nevertebrate; - genul Haplosporium cuprinde specii parazite intracelulare n esuturile i cavitile corpului molutelor. VII. ncrengtura Myxozoa - cuprinde specii aparinnd genului Haplosporium care formeaz spori multicelulari i capsule polare; - majoritatea sunt parazite la petii de mare i de ape dulci (Myxosoma cerebralis infecteaz sistemul nervos al somonilor i pstrvilor, determinnd pagube substaniale n plan economic). VII. ncrengtura Cliopbora - sunt caracterizai de cili simpli sau organite ciliate complexe, dou tipuri de nucleu, vacuole pulsatile la formele de ap dulce; - nmulire prin sciziune binar, conjugare; Reprezentani (genuri): Tetrahymena, Paramecium, Balantidium, Ichtiophtirius etc. Importan , . - majoritatea speciilor triesc libere, n simbioze sau n comensalism, fiind inofensive; (Entodinium se multiplic n rumenul animalelor domestice, iar Nyctotherus n colonul broatelor); - exist i specii parazite cum ar fi: Balantidium coli, parazit n intestinul mamiferelor i al omului unde produc dizenterii, Ichthyophtirius, care produce maladii branhiale i cutanate la petii de ap dulce ( aa - numita "boal a petelor albe"). 4.12.3. Mycetele (Fungii) Mycetele reprezint un grup extrem de vast de organisme ncadrate n regnul Fungi, conform sistemului cu 5 regnuri propus de Whitaker. n microbiologie se studiaz micetele unicelulare sau coenocitice care se caracterizeaz prin faptul c au o organizare celular de tip eucariot, sunt purttoare de spori, se hrnesc prin absorbie, sunt lipsite de clorofil i se reproduc sexuat i asexuat. tiina care studiaz mycetele se numete micologie (gr. mycos =

numete micotoxicologie. Bolile produse de mycete se numesc micoze, respectiv micotoxicoze (atunci cnd bolile sunt rezultatul toxinelor secretate de ciuperci) (tabelul 4.4). Distribuia mycetelor i importana lor Ciupercile unicelulare sunt n general microorgansme terestre, dar exist i unele marine i dulcicole. Multe sunt patogene, producnd infecii la plante i animale. Exist i specii de fungi care se gsesc n relaii benefice cu diferite alte organisme. De exemplu, cu rdcinile unor plante superioare (vasculare), micetele formeaz asociaii numite micorize. Lichenii sunt de asemenea, diferii acizi organici (acidul citric, acidul galic), unele medicamente (ergometrinele, cortizonii), numeroase antibiotice (penicilinele, griseofulvinele) i ciclosporina (o substan imunosupresiv). Tabelul 4.5 prezint n mod rezumativ cteva exemple privind implicaiile mycetelor n economie. Tabelul 44 Micotoxicoze caracteristice animalelor domestice Specia de fungi Micotoxina Boala Alimente Animale contaminate afectate Aflatoxicoz Aspergillus flavus Aflatoxin Ergotism Alcaloizi Claviceps purpurea
/

Otrviri cu Amanita verna* ciuperci Sindrom Aspergillus flavus hemoragie al .a. psrilor Rhizoctonia Maladia "baveuse" cremonium Toxioza coenophialum festucii

Amanitine Aflatoxine

Orez, gru, sorg, 1 cereale, arahide, soia, Condimente din specii de graminee, boabe de cereale Ciuperci din natur Boabe de cereale toxice, nutreuri
>

Psri, porci, vite, oi, cini Vite, cai, porci, psri Vite Psri Oi, vite Vite

Alcaloidul Trifoi rou slaframin Necunoscut Festuca sp.

* Nu fac obiectul microbiologiei

176

Tabelul 4.5 Produse obinute prin utilizarea mycetelor n bioindustrii Domeniul

Alimente i buturi Pine, vin, bere Sake Sos de soia Brnzeturi Camembert, Brie Brnza Roquefort Produse industriale Etanol Tempeh chimice Acid lactic Acid fumrie Acid citric Glicerol Proteine Proteine microbiene din neconvenionale de deeuri rezultate din la o singur celul* industria celulozei, hrtiei Proteine microbiene din alcani i petrol Vitamine Riboflavine Vitamina B3 Vitamina B ? Amilaze Enzime Glucoamilaze Celulaze Invertaze Lipaze Aureomicin Produse Streptomicin farmaceutice Cloramfenicol Peniciline
Cefalosporine

Produsul
:

Microorganismul
Saccharomyces cerevisiae (levuri) S. cerevisiae var. ellipsoideus (levuri) S. rouxii (levuri) Penicillium camambertii (mucegai) Oospora lactis (mucegai) Penicillium roqueforti (mucegai) Rhizopus (mucegai) S. cerevisiae Helminthosporium geniculatum Rhizopus japonicus Rhizopus nigricans Aspergils niger S. cerevisiae var ellipsoideus Candida utilis Saccharomycopsis lypolitica Eremothecium ashbyi Saccharomyces cerevisiae Torulopsis kefyr Aspergillus orizae Aspergillus niger Trichoderma reesii Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces lypolytica. Streptomyces aureofaciens Strep tomyces grise us Streptomyces venesuelae Penicillium chryogenum
CephalosporiuM acremonium

Steroizi modificai

Rhizopus nigricans *

* Biomas proteic neconvenional de origine microbioan

hernia mngic este alctuit dm elementele anatomice specifice oricrei celule eucariote, adic: unul sau mai muli nuclei limitai de o membran nuclear care nchide mai muli cromozomi, citoplasma cu organitele caracteristice (mitocondrii, ribozomi, incluziuni de glicogen sau trehaloz, o vacuol voluminoas prezent n principal la celulele btrne, reticulul endoplasmic i aparatul Golgi), membrana plasmic i peretele celular la exterior - o formaiune rigid, constituit din alte componente dect acelea caracteristice peretelui celular bacterian. Astfel, peretele celular al fungilor este bogat n chitin, n celuloz i n caloz. Acestea dau rezisten sporit peretelui celular, dar i flexibilitate. La unii fungi au putut fi identificate chitosanul (la genul Mucor) i mananii (la levuri). Exist unele fungi lipsite de perete celular, caz n care celula se numete plasmod. Este cazul Myxomycetelor. Levurile sunt micete unicelulare care posed un singur nucleu i se reproduc fie asexuat, prin nmugurire sau diviziune transversal, fie sexuat, prin formarea de spori care se unesc prin conjugare (Anexa 3). Celula levurian este de talie mai mare dect cea bacterian, msurnd ntre 20 i 200|J,m. Ea poate fi: sferic, ovoidal sau alungit (fig. 4.22). Levurile nu sunt mobile, deci nu au cili sau flageli, dar n privina celorlaltor pri componente ale celulei, ele sunt aceleai ca i n cazul marii majoriti a eucariotelor (fig. 4.10). Nucleul este vizibil chiar la microscopul optic, iar peretele celular se caracterizeaz printr-un coninut bogat n chitin, component care i asigur o rigiditate sporit. Vacuolele sunt de asemenea elemente celulare uor de vzu la microscop, fiind de regul, de talie mare la drojdii.

178

Saccharomyeesr: c e r e v i s i a e (5-10) x (5-12) iun' ( 3 - 9 , 5 ) x (4,5-21) \m OC SOS

sea o

Schvzosaccharomyces pombe (3-5) X (5-24) um

Asc (ascospori)

Asc (ascospori)

fgosaccharomycls b a i l l i , 5 - 7 ) x (5,5-14) \m O

aeoharomycodes l u d w i g i i Hansenula artomala (4-7) x (8-23) m ( 1 , 9 - 4 , 1 ) x ( 2 , 1 - 6 , 1 ) ]m

Asc (ascospori)

<e

Hanseniaspora uvaruro (1/5-5) x (2,5-11,5) m

Rloeckera apiculata ( 2 - 7 , 5 ) x (4-14,5) m

Pichia membranaefaeiens 1 8 - 4 , 5 ) x (2,5-17) um

Candida valida (1,4-3,6) x (3,6-14,4) y

a
Form L Form M

Candida v i n i (2,9-4,3) X (5,8-10,1)

candida s t e l l a t a (2-3) x ( 5 , 8 - 1 0 , 1 )

Torulaspora delbrueckii ( 2 , 5 - 6 , 5 ) x ( 2 , 5 - 7 ) \m j

jfc

Form; L

Form M

Fig. 4.22 - Aspecte viznd talia drojdiilor - microscopie electronic (a); forma i mrimea caracteristice unor specii de levuri (b, c, d, e, f, g, h, i, I, m) i fungi imperfeci (j, k); n imaginea de la punctul a) se poate observa diferena de talie dintre drojdii - celulele mai mari i bacterii - celulele mici care le nconjoar.

Mucegaiurile nu au talul format dintr-o celul unic ci dintr-un filament lung, fin, ramificat, format prin nlnuirea mai multor celule. Acest filament se numete hif (gr. hyphe = esut). Hifele se ramific i formeaz o reea numit miceliu. La fungi exist mai multe tipuri de hife miceliene, dup cum nucleele sunt desprite de septuri sau se afl ntr-o citoplasm comun. Aceste tipuri de micelii sun prezente n fig. 4.23. Dup cum se observ, exist Hife coenocitice sau neseptate i hife septate la care septul poate avea un singur por de comunicare plasmodesm sau poate fi multi-perforat, n unele lucrri de specialitate fiind denumite hife cu septuri incomplete. Hifele au un diametru de aproximativ 5-lOjim. Ele au un perete celular cilindric care adpostete n interior protoplasma i organitele celulare. Membrana plasmatic nconjoar protoplasma i se afl imediat sub peretele celular chitinos. Exist specii de fungi care produc micoze la om i animale i care se caracterizeaz printr-o trstur numit dimorfism, adic se prezint sub dou forme: form de levur (L) n organismul infectat i form de mucegai (M), cu miceliu destul de bine dezvoltat la trecerea n mediul extern, ca rspuns la schimbrile din mediul de via (elemente nutritive, presiune de C0 2 , potenial redox, temperatur). Aceast modificare se numete tranziie L-M (fig. 4.22). Aceste specii se mai cunosc sub numele de fungi imperfeci Unele mice te asociate plantelor prezint un dimorfism de tip opus: form de miceliu n plant i form de levur n mediul extern. Mucegaiurile, ca i levurile, se nmulesc att pe cale sexuat ct i pe cale asexuat. Habitat i mod de via Fungii se dezvolt peste tot unde habitatul este umed, ntunecos i unde materiile organice sunt disponibile. Ca i bacteriile, micetele dispun de un echipament enzimatic (enzime hidrolitice) care le ajut s digere substanele externe. Ele absorb prin difuziune sau pe alt cale produii solufiilizai din mediul extern. Fungii utilizeaz materia organic drept surs de carbon, electroni i energie. Principala surs de hran pentru micete este reprezentata de glicogen i polizaharide. Cea mai. mare parte dintre fungi utilizeaz anumite glucide (glucoza, maltoza) i unii compui azotai pentru sinteza propriilor acizi aminai i a proteinelor.

Incluziuni

Membran citoplasmic

__ perete celular Vacuol gigantic

<

Plasmodesm
Nucleu

Fig. 4.23 - Tipuri de hife ntlnite la fungi: a) Hife neseptate sau coenocitice; b) Hife septate; c) Celula fungic dintr-un miceliu septat care prezint un por plasmodesm; d) Sept multiperforat.

182

_ Micetele sunt n general aerobe. Unele levuri sunt toui facultativ anaerobe, obinnd energia prin feriiientaie, cnd glucoza, spre exemplu, este transformat n alcool etilic. Acestea pot totui tri aerob, atunci cnd oxigenul este prezent n mediu, metabolismul lor fiind de tip respirator. Exist i mycete strict anaerobe. Este cazul acelora care triesc n rumenul animalelor rumegtoare. Unele caracteristici ale mycetelor le fac pe acestea s poat suporta i s se dezvolte n condiii care sunt pentru alte microorganisme (protozoare, bacterii) improprii. De exemplu, pH-ul optim de cretere al micetelor se situeaz ntre 3,8 i 5,6, iar cel al bacteriilor depete rareori intervalul cuprins ntre 6,5 i 7,5. Micetele au de asemenea capacitatea de a crete n mediu foarte hipertonic, cu concentraii n zahr sau sare foarte ridicate. Din aceast cauz, foarte frecvent dulceurile sunt contaminate cu mucegaiuri i nu cu bacterii, n fine, mycetele rezist la cea mai mare parte a antibioticelor la care bacteriile sunt sensibile. J Reproducerea Mycetele se pot reproduce pe catfe sexuat sau asexuat.

Reproducerea asexuat Aceasta se realizeaz pe trei ci: Fisiunea binar sau sciziunea transversal O celul parental se divide n dou celule fiice prin constricia central i formarea unui nou perete celular pornind de la un sept. Dintr-o celul mam rezult dou celule fiice (fig. 4.24). Procesul ncepe cu alungirea celulei, dup care nucleul se divide, cei doi nuclei formai migrnd spre extremitile celulei. Prin formarea unui sept transversal n mijlocul celulei mam se petrece separarea celor dou celule-fiice care se vor desprinde n final una de cealalt. Exist cazuri tipice unor anumite specii, n care celulele fiice rezultate n urma unor diviziuni directe repetate, rmn nlnuite i nu se desprind, rezultnd un aa-numit pseudomiceliu (fig. 4.25). nmugurirea Celula vegetativ somatic nmugurete, dnd natere Ia o nou celul fiic. Dintr-o celul mam rezult o celul mam i o celul fiic (fig.4.25).

prin formarea unui septum care devine perete celular

a
Fig. 4.24 - Reproducerea asexuat prin sciziune transversal la fungi

a Fig. 4.25 - Imagine la microscopul electronic cu baleiaj, reprezentnd celule de drojdii nmugurite aparinnd speciei Saccharomyces cerevisiae (a); celule de Saccharomyces n plin nmulire; se observ stadii diferite ale nmuguririi, vacuolele mari i picturi lipidice; tendin de formarea a unui pseudomiceliu (b)

$ Spori asexuai Acetia rezult la micete prin mitoz urmat de o diviziune celular. Exist mai multe tipuri de spori asexuai dup modul n care
iau natere (tabelul 4.6) i fig. 4.26.

184

Modul de formare al sporilor Transformarea direct a unui filament

Tabelul 4.6 Tipuri de spori asexuai la mycete (fig. 4.26) Reprezentani Caracteristici Categoria de spori Artrospori (Talospori)

Formerea unui organ caracteristic purttor de spori la exterior

Formerea unui organ caracteristic purttor de spori la interior

-miceliul se oprete din cretere, iar celulele terminale se difereniaz, se divid i se separ; -fragmentarea unei hife miceliene; Blastospori -spori produi la unele levuri sub forma unor grupe de muguri la captul sau n lateralul hifelor; Clamidospori -spori formai la capetele hifelor sau intercalat, n nite formaiuni caracteristice; -o celul fungic se Conidiospori difereniaz, formnd o celula particular conidiofor, pe care se fixeaz conidiosporii; acetia se elibereaz la maturitate; Sporangiospori , -o celul fungic de la extremitatea unei hife se transform ntr-un sac sporange, n interiorul cruia se formeaz sporangiospori; acetia se elibereaz la maturitate;

Trichophyton

Geotrichum Candida Candida

Aspergillus Penicillium

Mucor Rhizopus solonifer

Clamidospori ntr-o hi!

Conidiofor

Sporange (sporangiospori) Columela Membrana sporangelui Spor

Sporangiofor ^ ^

Sporangifc

g Fig. 4.26 - Spori asexuai la mycete: a) artrospori; b) blastospori; c) clamidospori; d) conidiospori de Aspergillus; e) conidiospori de Penicillium; f) sporangiospori. de Mucor; g) eliberarea sporangiosporilor ajuni la maturitate prin spargerea membranei sporangelui.

186

Sporii asexuai iau natere n organe fructifere cu structur mai mult sau mai puin complex i variabil ca aspect, de la o specie la alta, constituind un bun criteriu de identificare taxonomic. Unele organe fructifere, cum este cazul sporangilor, adpostesc milioane de spori. Odat maturai, sporii sunt expulzai n mediul extern, n acest fel avnd loc diseminarea ciupercii. Fiecare spor este de fapt o mic celul careN conine un nucleu i o citoplasm deshidratat. Membrana citoplasmic a acesteia este protejat de un nveli extern datorit cruia sporii pot rezista la condiii nefavorabile timp ndelungat. Cnd acetia ajung n condiii favorabile de via (temperatur, umiditate, nutrieni), ei germineaz i dau natere unor noi micelii care vor forma din nou spori. n acest fel se poate explica i marea capacitate de nmulire a fungilor i de mpnzire rapid a unor habitate. Sporii micelieni sunt diseminai n natur prin diferite ci: cureni de aer, ap, excremente etc. Reproducerea sexuat Micetele pot face apel i la reproducerea sexuat. Aceasta este totui o modalitate mai rar de nmulire, ea aprnd doar n anumite condiii particulare. Reproducerea sexuat nu se produce dect ntre sue genetic distincte, dar compatibile, la care are loc unirea celor dou nuclee. Unele specii de fungi formeaz pe acelai miceliu gamei compatibili. Acestea sunt specii autofertilizante. n funcie de specie, fuziunea sexuat se poate face ntre hife sau ntre gamei haploizi, corpii productori de gamei numindu-se gametangii Uneori, citoplasma i nucleul haploid fuzioneaz imediat pentru a forma zigotul diploid. n majoritatea cazurilor, exist totui un decalaj ntre fuziunea citoplasmelor i a nucleelor. Are loc parcurgerea unui stadiu denumit dicariotic (dicarion), n care celulele conin doi nuclei haploizi separai, provenind de la fiecare printe (fig. 4.27), Reproducerea sexuat poate duce la formarea de spori sexuai, denumii zygospori, ascospori, bazidiospori i oospori, n funcie de categoria sistematic din care fac parte fungii (tabelul 4.7) i fig. 4.28.

Fig. 4.27 - Ciclul biologic la micete, cu prezentarea alternanei celor dou stadii, haploid i diploid; numai unele specii prezint stadiul de dicarion indicat n schem; stadiul diploid (2n) reprezentat de zigot, asigur rezistena speciei la condiii nefavorabile de mediu (uscciune, frig, cldur excesiv).

(a)

" "

(b)

formarea progametangiiior

formarea gametangiiior zigospor

Asc cu 4 ascospori Apotecie

Fig. 4.28 - Reprezentarea schematic a unor spori sexuai la fungi: geneza zigosporilor (a - f); apotecie purttoare de asce (g); bazidie purttoare de bazidiospori (h).

188

Spori sexuai ntlnii la micete

Tipul de spori Zygospori

Tabelul 4.7

Caracteristici Exemple Spori voluminoi, multinucleai, formai din Mucor mucedo unirea a dou hife provenind de la dou sue Rhizopus diferite, compatibile, prin intermediul a dou stolonifer ramificaii laterale - progametangii ce se transform n gametangii. Apar la
Phycomycetes.

Ascospori

Spori de talie mic, unicelulari, cu origine endocelular. Se formeaz ntr-o celul particular numit asc. Aceasta rezult prin transformarea unei hife dup parcurgerea stadiului de.dicaryon. n asc intervine meioza, unde iau natere de regul 4 - 8 ascospori. Ascele apar ele nsele n formaiuni specifice discoidale - apotecii cum este la levuri. Sunt caracteristici
Ascomycetelor. sau sferice - peritecii. Ele pot fi i izolate,

Neurospra crassa Claviceps purpurea Majoritatea levurilor

Basidiospori

Spori de talie mic, unicelulari i formai n bazidii (origine exocelular) care iau natere la rndul lor la extremitile unor hife i care au form de mciuc. Sunt binucleate (dicaryon) i rezult din fuziunea unor hife aparinnd a dou sue complementare. ntro bazidie se formeaz 4 bazidiospori. Apar la
Basidiomycetes.

Ciuperci superioare* Cryptococus neoformans

Oospori

Spori formai dup fuzionarea oosferelor produse n interiorul unor organe de reproducere femele - oogonii, cu celulele sexuale mascule formae n anteridii. Apar la Oomycetes. Mecanismul de producere a oosporilor este foarte apropiat de acela al producerii zigoporilor. Diferena const n faptul c celulele care fuzioneaz sunt diferite din punct de vedere morfologic. *Nu fac obiectul microbiologiei

Phytophtora infestans Plasmopara viticola

Apariia celor dou tipuri de reprodcere la mycete determin existena unor cicluri biologice caracterizate prin alternana fazei haploide i dploide i a mai multor stadii de dezvoltare. Un exemplu de ciclu biologic la mycete este prezentat n fig. 4.29, la specia Rhizopus stolonifer.

Meioz

Zigot

Germinaie

Progametangii

Germinaia unui spor

4 Faz % asexuat

Germinaia unui spor Rizoid

Fig. 4.29 - Ilustrarea ciclului biologic al speciei Rhizopus stolonifer, cu alternana celor dou faze: sexuat i asexuat.

Pentru nelegerea i nsuirea unor termeni, acetia sunt definii n tabelul 4.8.
Tabelul 4.8 Definirea unor termeni importani n cunoaterea reproducerii sexuate Ia micete (dup Regnault, 1990) Termenul

Gametangiu Anteridie Oogonie Plasmogamie Caryogamie

Asc Bazidie

Organ n form de sac n care se produc sporii sexuai ai Ascomycetelor n urma meiozei. Ascosporii sunt haploizi. Structur n form de mciuc n care se realizeaz producerea de spori sexuai haploizi i care poart la extremiti bazidiospori.

Basidiomycetelor.

Celul sau organ n care sunt produi gamei Organ n care iau natere grneii masculi (anteroizi) Organ n care iau natere grneii femeii (oosfere) Unirea citoplasmelor n timpul fuziunii grneilor Unirea nucleelor n timpul fuziunii grneilor; se produce odat cu plasmogamia sau n momente diferite, lund natere nti un dicaryon (hife binucleate), tipice Ascomycetelor i

Definiie

190

Caracteristicile principalelor grupe de fungi Grupul Zygomycetes (600 specii) Marea majoritate a acestora triesc n sol, pe materiale vegetale i animale n descompunere. Unele sunt parazite la plante, insecte, animale i om. Hifele lor sunt coenocitice, cu numeroase nuclee haploide. Sporii asexuai dispersai de regul prin vnt, se dezvolt n sporangi la extremitatea unor hife aeriene. Reproducerea sexuat d natere unor zigoi protejai de un nveli dur i care se numesc zigospori. Ei rmn dorminzi n condiii nefavorabile de via. Un reprezentant cunoscut al acestui grup de mycete este Rhizopus stolonifer, un fung ce agreeaz alimentele umede, bogate n glucide, cum ar fi pinea, fructele i legumele. Hifele sale cresc n profunzimea materiilor pe care se dezvolt, absorbind nutrienii. Aceste hife se numesc i rizoizi (fig. 4.29). Alte hife se mai numesc i stoloni i mpnzesc substratul. Cele care se ridic la suprafa, poart la extremiti sporangi asexuai cu spori negri. Acetia dau mucegaiului culoarea neagr. De obicei, Rhizopus se nmulete pe cale asexuat, prin spori, dar atunci cnd hrana devine insuficient sau condiiile de mediu sunt defavorabile, intervine reproducerea sexuat. Aceasta presupune existena a dou sue de tip sexuat diferit (+ i -), care s fie compatibile. Cnd cele dou sue sunt n apropiere, are loc producerea unor feromoni specifici care determin apariia unor protuberane n zona de contact. Acetia se numesc progametangii. Dup fuziunea grneilor nucleele celor doi gamei fuzioneaz i ei i se formeaz zigotul. Acesta este protejat de o tunic dur, neagr i devine zigospor dormind (latent). n momentul germinaiei, deci atunci cnd condiiile de viaa devin optime, se produce o diviziune meiotic, zigosporul se deschide i se formeaz un sporange asexuat. Astfel rencepe un nou ciclu. Exist i Zygomycete utile. De exemplu, n Indonezia, o specie de Rhizopus este folosit pentru a produce un aliment numit tempeh, pornind de la boabe de soia decorticate i fierte. Alte specii se folosesc n Orient pentru producerea unei brnze numite sufu. Altele sunt folosite n obinerea unor preparate anestezice, a unor contraceptive, a alcoolului industrial, a coloranilor galbeni alimentari folosii la fabricarea margarinei etc. Grupul Ascomycota (35 OOOspecii) Fungii din acest grup se numesc ascomycete. Multe specii sunt importante din punct de vedere economic (levurile fermentative).

atac numeroase plante de cultur i decorative. Dei nedor.it, mucegaiul roz al pinii (.Neurosporacrassa) este o ascomycet care a fost mult studiat de ctre geneticieni i biochimiti, fiind un bun obiect de cercetare. Unele grupe de ascomycete provin de la structurile de reproducere caracteristice denumite asce (gr. askos = sac)? care au form de sac. Miceliul ascomicetelor este compus din hife septate. Reproducerea asexuat se face prin intermediul conidiosporilor (fig. 4.30a). Reproducerea sexuat la ascomycete const n formarea unei asce care conine ascospori haploizi. La ascomycetele cele mai complexe formarea ascelor este precedat de dezvoltarea unor hife ascogene speciale n care migreaz perechi de nuclei. n fiecare pereche, un nucleu provine de la un miceliu sau de la o celul mascul (anteridie) i cellalt de la un organ sau o celul femel (ascogonie) care fuzioneaz cu primul. n timp ce hifele ascogene se dezvolt, nucleele se divid i trece n fiecare celul cte o pereche. Dup maturarea hifelor ascogene se produce fuziunea nucleelor la extremitile hifelor n celulele mam. n aceast categorie se includ i unele specii de drojdii sau levuri, micete unicelulare avnd o reproducere asexuat caracteristic ~ nmugurirea sau sciziunea binar, dar si una sexuat. Schema din fig. 4.30b evideniaz ciclul de via al levurilor cu alternana caracteristic dintre cele dou modaliti de reproducere, n funcie de condiiile de via. Grupul Basidiomycota (30 OOOspecii) Acesta conine basidiomycete cunoscute sub numele de ciuperci cu plrie care nu fac obiectul microbiologiei, dar i unele specii de ciuperci microscopice. Dintre acestea, aminim specia patogen la om Cryptococus neoformans. Ea produce infecii sistemice implicnd n principal plmnii i sistemul nervos central. Alte Basidiomycete sunt fitopatogene: "ruginile" i "mlurile" cerealelor. Acestea produc anual pagube de milioane de dolari pe tot globul. Ele se caracterizeaz prin prezena unor bazidii ieind din hifele care mpnzesc suprafaa plantei atacate. Miceliul se dezvolt fie de o manier intracelular, fie extracelular, n esutul vegetal. Bazidiile adpostesc bazidiospori (fig. 4.31). 192

Ascocarp

Nucleu zigotic

Asce

Himenium

Hife ascogene Hife sterile Anteridie Ascogon

Miceliu

Spor Spor + .

Anteride

Hife ascogene

Ascospor Septare Celul mam a ascei

zi

Nucleu

gtc <2n>

Asc

Cariogamie

Meioz I

Meioz II

Mitoz Formarea sporilor

Fig. 4.30a - Ciclul de via al unor ascomicete: I, - producerea ascosporilor i

reproducerea sexuat; II. - detaiii viznd reproducerea sexuat In hifele ascogene,

>a c i u i a u i f J i w t u a

care separ mugurele de celula mam

Cele 4 celule sexuale a i a libere care pot i ele nmuguri

Migrarea cromozomilor ctre polii celulei nmugurirea celulei diploide formate Migrarea ctre istm a materialului genetic a! celulei nceputul nucleelor convergenei viitoarei celule

Fig. 4.30b - Reprezentarea schematic a ciclurilor levuriene: I. - posibilitatea levurilor de a exista ca organism haploid i diploid; II. - Reproducerea asexuat prin nmugurire (n condiii optime de hran); III. - Formarea sporilor de reproducere sexuat - ascospori tip a i a ; IV. - Fuziunea dintre dou celule sporale haploide diferite (a i a) i formarea de celule diploide.

194

Fig. 4.31 - Reprezentarea schematic a unei forme posibile de bazidiospori prezeni la Basidiomycete

Grupul Deuteromycota (30 OOOspeeii) Majoritatea speciilor de fungi se caracterizeaz prin faptul c prezint o reproducere sexuat. Cnd o rnycet este lipsit de faza sexuat (stadiul perfect de dezvoltare a ei) sau dac aceast faz nu a fost observat, ea poate fi ncadrat n grupul Deuteromycetelor (Deutero-mycot = fungi imperfeci). Mycetele imperfecte sunt majoritatea lor terestre, doar unele dintre ele trind n mediul acvatic (ape dulci sau marine). Majoritatea lor sunt saprofite sau parazite (la plante), dar exist specii care paraziteaz alte specii de fungi. Numeroase Deuteromycete afecteaz sntatea omului, producnd histoplasmoze, intertrigo interdigital i alte tipuri de eriteme veziculopustulare. Proprietile metabolice ale multor mycete imperfecte sunt importante n plan industrial. De exemplu, unele specii de Penicillium sintetizeaz nite antibiotice bine cunoscute, penicilinele i griseofulvinele. Alte specii parfumeaz n mod caracteristic unele brnzeturi cum ar fi: gorgonzola, camambert, roquefort. Diferite specii de Aspergillus sunt utilizate pentru fermentaia sosului de soia i la fabricarea acidului citric, acidului gluconic i galic. Aspergillus Qavus i Aspergillus parasiticus produc nite metabolii secundari, aflatoxine, cu o mare toxicitate i chiar cancerigene pentru om i animale. Un alt grup de toxine fungice, trichotecenele, sunt inhibitori puternici ai sintezei proteice la celulele eucariote. Mucegaiurile vscoase i mucegaiurile acvatice Mucegaiurile vscoase i cele acvatice se aseamn cu fungii prin aspectul i modul lor de via. Grupul Mixomycota Se mai numesc mucegaiuri vscoase plasmodiale. Ele sunt adesea colorate, invadeaz materialele n putrefacie, frunzele i materialele

conine numeroase nuclee. Cele diploide se divid repetat. La maturitate sau cnd nutrienii i sau umiditatea sunt deficitare, plasmoda se deplaseaz spre un loc mai luminos i dezvolt fructificaii delicate, ornamentale (fig. 4.32). Fructificaiiie dau spori nconjurai de un nveli foarte rezistent la condiii extreme de mediu. n prezena unei umiditi convenabile, sporii germineaz i elibereaz mixamibe non-flagelate. La nceput, mixamibele i celulele de roire se hrnesc i rmn haploide (fig. 4.32). Ele pot fuziona pentru a forma un zigot Zigotul se hrnete, crete i nucleul su se multiplic prin mitoze sincrone pentru a reforma plasmode multinucleate.
Spor Mixamib

Celul reproductoarte

Plasmod mbtrnit

Fig. 4.32 - Ciclul de reproducere la Myxomycete

Grupul Acrasiomycota
Stadiul vegetativ al mucegaiurilor vscoase celulare care

reprezint acest grup const n celule individuale, neregulate, amiboide, numite mixamibe. Ele se hrnesc cu bacterii i cu levuri prin fagocitoz. Cnd hrana este abundent ele se divid n mod repetat prin 196

mitoz i citodierez, producnd noi mixamibe fiice. Atunci cnd alimentele se epuizeaz, mixamibele ncep s secrete adenozinmonofosfat ciclic (AMPc). Acesta ajunge la alte mixamibe care se deplaseaz prin chimiotactism spre sursa de AMPc i care vor secreta apoi i ele AMPc. Cnd mixamibele individuale se aglomereaz, ele se nconjoar de o carapace vscoas i formeaz pseudopode asemntoare unui melc (fig. 4.33). Dup un anumit timp, pseudoplasmoda este capabil s se deplaseze ca o entitate distinct, lsnd o urm vscoas dup ea. Aceasta poate s rmn i sedentar. Punctul culminant al dezvoltrii este faza sexuat. Celulele pseudoplasmodei ncep s se diferenieze n celule presporale. Se formeaz o structur numit sporocarp ce evolueaz apoi ntr-un sporange productor de spori. Acetia se elibereaz n mediu, iar cnd condiiile redevin favorabile, germineaz, dnd nite forme ameboide, iar ciclul rencepe.
Viitoare celule cu picior Viitoare celule cu tij

Pseudopod

Fructificaie

Tij a Picior

Fig. 4.33 - Geneza fructificaiilor la Acrasiomycota (schem - a), imaginea la microscopul electronic al unui sporange purttor de spori ~ b.

sau mucegaiuri acvatice. Ele au un aspect general asemntor cu acela al mycetelor, formnd filamente fine, ramificate, numite hife. Totodat oomycetele au un nveli celular chitinos ca i majoritatea mycetelor. Oomycetele sunt de fapt aa-numitele "ciuperci cu ou, datorit modului lor de reproducere. O celul ou relativ mare este fertilizat de o celul spermatic sau anteridie (mic). Numeroase oomycete produc zoospori asexuai cu doi flageli. Dintre mucegaiurile acvatice amintim genurile: Saprolegnia i Achlya care sunt saprofite i se dezvolt sub forma unei mase vtoase pe algele moarte sau pe animale mici, ndeosebi n apele dulci. Ele sunt reprezentani importani ai ecosistemelor acvatice. Unele dintre acestea sunt parazite la peti. De asemenea specia Peronospora hyoscyami este actualmente responsabil n lumea ntreag de boli ale tutunului, determinnd pagube de milioane de dolari n ntreaga lume. Exist specii de oomycete responsabile de boli ale culturilor de cartof i via de vie. Este vorba despre specii de Phytophtora infestans, respectiv Plasmopara viticola.

198

Bibliografie
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26.

selectiv

AnghelJ. i coiab. - Genetica microorganismelor.Principii i tehnici de laborator., Univ. Bucureti, 1989. AigleMErbs,D., Moll,M. - Some molecular structures in the genome of lager brewing yeast. Am. Soc. Brew. Chem., 1984,42, 1-7. Beiin,J.M. - Contribution a Petude des levures des chain. Taxonomie, repartition des levures, Mycopath, 1979, 67, 2, 67-81. Banwart,G.J- Basic food microbiology, 2-e ed, New York, Van Nostrand Reinhold Co., 1989. Board,RG. - A modern introduction to food microbiology, London, Blackweil Scientific Publications, 1983. Binning,G.,Rohrer,H., - Le microscope a baleyage a effet tunnel, Pour la science 96, 22-29,1985. Biol, H. et collab. - L'higiene en oenologie de la vendage a ia mise en bouteilles, ITV Paris, 1985 BensonJ.,H., -Microbiological Applications, A Laboratoiy Manual in General Microbiology, Pasadena City College, WCB Publishers, 1990. BobeJ., - Atlas de fitopatologie i protecia agroecosi stemei or, Ed. Ceres, 1983. BoldoryO., Caloianu, Iordachel, M, Raicu,P., Strungarii,Gr- Tehnici de laborator n biologie, EDP, Bucureti, 1978. Bourgeois,C.f Le Parc,O., Abgrall,B., Cleret,J.J., ~ Membrane filtration of milk for counting spores of Chlostridium tyrohutyricum, J. Dairy Sci., 1984, 67, 2493-2499. Bourgeois, CM,, LeveauJ.Y., - Techniques d'analyse et de controle dans Ies industries agro-alimentaires, voi. 1-3, Ed. Lavoisier Tec&Doc, Paris, 1991. Bourion,F., - Exemples de validation de Faptitude au nettoyage ou a la desinfection de surfaces ouvertes ou de surfaces fermees, ASEPT-LAVAL, 1998. Brison, J.,E, - Les bacteries marines, Ed. Masson, Paris, 1980. Bugnicourt, Max, - Dictionnaire de microbiologie generale, Ed. Ellipses, Paris, 1995. Bularda, Drgan, Mihai, - Curs de microbiologie general, Univ. Babe Bolyai Cluj Napoca, 1978. Burcea, Mirela - Microbiologie general. Manual de laborator, Ed. Piatra Craiului, Bucureti, 2001. Burcea, Mirela - Cercetri privind variabilitatea natural i indus Ia levuri n vederea detectrii unor sue valoroase pentru vinificatie, Tez de doctorat, U. S A M . V. Bucureti, 1998. Barnett., J. A., Payne, R. W., Yarrow, D. - A guid to identifyng and classifying yeasts, Cambridge Univ. Press., Cambridge, 1979. Barnett, J. A, Payne, R. W., Yarrow, D. - Yeasts:Characteristics and Identification, Cambridge Univ. Press., Cambridge, 1983. Brtescu, Gh. i colab. - Personaliti ale tiinei. Mic dicionar, Ed. tiinific i enciclopedic,, Bucureti, 1997. Coonrod, J.,D, - The Direct Detection of Microorganisms in Clinical Samples,New York, Academic Press, 1983. Crciun, T., Crciun, Luana, Leonora, - Dicionar de biologie, Ed. Albatros, Bucureti, 1989. Dimitriu Elena i colab., - Ultrasunetele-posibiliti de utilizare In industria alimentar i biologie, Ed. Ceres, Bucureti, 1990. Doholici, V., eptilici, Georgeta, - Testarea tehnologic, fizico-chimic i microbiologic a vinurilor, Ed. Ceres, Bucureti, 1981. Ferron Azele - Bacteriologie medicale, 10-em edition, Ed. Crouan & Roques, Lille,

1980.

29. GuiraudJ.P- Microbiologic Alimentaire, Ed. Dunod, Paris, 1998 30. Hemy,JKirsop,BCryopreservation of yeasts in polypropilene straws, 1990, 6, 447-449. 31. Hojfinann,P.y - Cryopreservation of fungi, World Journal of Microbiology and Biotechnologiy, 1992, 7, 92-94. 32. JayJ.Mr Modern food microbiology, 4-e ed., New York, Van Nostrand Reinhold Co., 1991. 33. Joffin, Jean-Noel, Joffin,Christiane - Microbiologie alimentaire, 3e edition - Centre regionale de Documentation Pedagogique, Bordeaux, 1992. 34. Joffin,J.,N., Leyral,Guy, - Microbiologie technique. Dictionnaire des techniques, Centre de Documentation Pedagogique de V Academie de Bordeaux, Aquitaine, 1997. 35. Koneman,E.,W., Roberts,G.D., - Practicai Laboratory Mycoiogy, 3-rd ed. Baltimore, Md. W&W, 1985. 36. Konuma,H., Suzuki,A., Kurata, H\, - Improved Stomacher 400 bag applicable to the Spiral Plate System for counting bacteria. Applied and Environmental Microbiology, 1982, 44, 765-769. 37. Komemushi, S., Fujita, K., Yamagata, K. ~ Methode de classification par comptage de la flore levuriforme dans Ies mouts, 6-e Sympos. Internat, sur Ies levures, Montpellier-France, 1984. 38. Koneman, E.W., Allen, S.D., Dowele, V.R, Sommers, HM. - Collor Atlas and Texbook of Diagnostic Microbologiy, ed. II, J.B. Lippincot Company, 1983, 507556,650-665. 39. Lafon-Lafourcade,S., Joyeux,A- Techniques simplifiees pour le denombrement et 1'identificat!on des microorganismes dans Ies mouts et Ies vins. Connaissance de la vigne et du vin, 1979, 4, 295-309. 40. Lafon-Lafourcade, S., Ribereau-Gayon, P. - In Progress in Industrial Microbio; Modern application of traditional biotechnologies, ed. Bushell M.E., voi. 19, Oxford E.P. Co., 1984, 1-49. 41. Larpent, X, P., Larpent, Monique Gourgaud, - Memento technique de microbiologie, 3e edition, Ed. Tec&Doc, Paris, 1997. 42. Lecierc, H., Gaiiard, J., K, Simonet, M., - Microbiologie generale. La bacterie et le monde bacterien, Ed. Doin, Paris, 1995. 43. Lecierc, C, Buttiaux, R.f Gidllaume, J., Wattre, P. - Microbiologie appliquee, 2-eme ed., Paris Doin, 1977, 228. 44. Lodder, J. - The yeasts; A Taxonomic study, North Holland Publishing Co., Amsterdam, 1974. 45. Mafart,P., CleretJ.,1, Bourgeois,C., - Cinetique de la croissance de Escherichia coli et Saccharomyces cerevisiae en culture sur membranes filtrantes, Ann. Inst. Pasteur, 1985, 136 A, 256- 259. 46. Manolescu,N., Ciocnitu,V., Dimitriu,C., - Ultrastructura unor celule sanguine n microscopia electronic de baleiaj, Ed. tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1979. 47. Mohan,Gh, - Fotografierea la microscop, Ed. Tehnic, Bucureti, 1982. 48. Neidhardt, K, C, Ingraaham, L, J., Schaechter, M -Physiologie de la cellule bacterienne. Une approche mol6culaire, Ed. Masson, Paris, 1994. 49. Popa,LA,, Teodoreseu,St., C., - Mi crobiologia vinului, Ed. Ceres, Bucureti,1990. 50. Prescott, Harley, Klein, - Microbiologie, DeBoeck-Wesmael S.A., Bruxelles, 1995. 51. Regnault,PJ - Microbiologie generale, Ed. Decarie, Paris, 1990

200

52. Rives, M - T.P.-Prise de contact avec Ies microorganismes de notre environnement, Centre de documentation ENITIAA - Nantes, 1997 53. Russel, A.D. - Bacterial spores and chemical sporicidal agents, Clin. Microbiol. Rev.,
1990, Rev. 3(2), 99-119.

54. 55. 56. 57. 58. 59. 60. 61. 62.

63.

Schaffler,A., Altekruger,!., - Microbiologie medical i imunologie. Manual prescurtat i index pe obiecte, Ed. ALL, bucureti, 1994. Scherrer,R. - Gram's straining reaction, Gram types and cell walls of bacteria. Trends Biochem. Sci., 9, 242,1984. Schlegel,G.,H., - General Microbiology, Cambridge Univ. Press, 6-ed, 1990. Senez,J.C, - Microbiologie generale, Ed. Doin, Paris, 1968 Singleton, P., Sainsbury, Diana - Dictionary of Microbiology, Ed. John Wiley and Sons, Toronto, 1978. Skinner,F.,ALovelock,D.,W- Identification Methods for Microbi ol ogists, 2-nd ed., New York, Academic Press, 1980. Staley,J.,T. et al., - Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, voi. 3, 4, Baltimore, Md. W&W, 1989. Stevenson,RE, JongS.C- Application of good laboratory practice (GLP) to culture collections of microbial and cell cultures, World Journal of Microbiology and Biotechnology, 1992, 8, 229-235. Subden, RE., Corneli, RE: - Noble, A.C. Evaluation of API-20C clinical yeast identification system for must and wine yeast identificaion; Am. J. Enol. Vitic., 31, 1980, 364-366. Zarnea, G. - Tratat de microbiologie general; voi. 2, Ed. Acad. Rom., Bucureti,

1984. 64. Zarnea,G-, Mihilescu,Gr., Velehorschi, Viorica, - Principii i tehnici de microbiologie general, Voi. I, Facultatea de Biologie, Bucureti, 1992. 65. Walt, van der J.P. - The Yeast. A Taxonomic study, Sub red. J. Lodder, ed. n, North HoIlandPubi. Co., Amsterdam, 1970. 66. Wali van der, J.PYarrow, D. - Methods for the isolation, maintenance, classification and identification of yeasts; in N.J.W. Hreger van Rij ed., The Yeasts, a Taxonomyc study, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, 1984, 45-104. 67. *Travaux Pratiques de Microbiologie, IUT Angers, Dept. Biologie, 1995. 68. *Notice d'utilisation Bio-Impactor 100-08, Air strategie, 1997. 69. *Manuel de Travaux Pratiques de Microbiologie, Univ. De Bourgogne, 1995 70. *Choix et emploi des microorganismes en oenologie, ITV ~ France, 1994. 71. *Mic dicionar enciclopedic, Ed, Enciclopedic romn, Bucureti, 1972. 72. *Le petit larousse en couleurs, Dictionnaire encyclopedique, Ed. Larousse, 1995.

CUPRINS
Prefa

1. INTRODUCERE N STUDIUL MICROBIOLOGIEI

..

2. MICROORGANISME PROCARIOIE - ANATOMIA CELULEI BACTERIENE . 31

2.1 Talia, forma i gruparea bacteriilor . 2.1.1 Talia bacteriilor 2.1.2 Principalele tipuri morfologice de bacterii 2.1.3 Morfologia bacterian, o strategie de adaptare 2.2 Organizarea celulei bacteriene 2.2.1 Peretele celular 2.2.1.1 Peretele celular al bacteriilor Gram+.;..... 2.1.2 Peretele celular al bacteriilor Gram2.2.1.3 Mecanismul coloraiei Gram 2.2.1.4 Compui,chimici particulari ai peretelui celular bacterian . 2.2.1.5 Bacterii lipsite de perete celular 2.2.1.6 Rolul peretelui celular 2.2.2 Structurile externe ale peretelui celular . 2.2.2.1 Structurile externe polizaharidice 2.2.2.2 Proteinele de suprafa sau stratul S 2.2.3 Membrana plasmatic (citoplasmic) i spaiul periplasmic 2.2.3.1 Compoziie i proprieti 2.2.3.2 Rolul membranei citoplasmice 2.2.4 Sistemul membranar intern (intracitoplasmic) 2.2.4.1 Mezozomii 2.2.4.2 Aparatul fotosintetic
2.2.3.3 Spaiul periplasmic (Periplasm)

1.1 Obiectul microbiologiei 1.2 Istoria dezvoltrii microbiologiei ca tiin 1.3 Contribuia cercettorilor romni la dezvoltarea microbiologiei ca tiin 1.4 Importana microbiologiei pentru omenire 1.5 Domeniile microbiologiei 1.6 Caracteristicile fundamentale ale microorganismelor.... 1.6.1 Organizarea celular 1.6.2 Unicelularitatea i invizibilitatea 1.6.3 Talia i volumul celular 1.6.4 Potenialul metabolic i de reproducere 1.6.5 Omniprezena i abundena 1.6.6 Diversitatea lumii microbiene 1.6.7 Locul virusurilor n lumea microbian

7
7 8

10 12 14 15 15 19 19 20 21 21 28

31 31 31 36 37 37 41 42 43

47 48 49 51 51 59 61 "62 65 68 68 72
68

3. CARACTERISTICI ALE UNOR CATEGORII PARTICULARE DE BACTERII 113

3.1. Arheobacteriile 3.1.1 Metabolismul arheobacteriilor 3.2. Actinomycetele . 3.2.1 Proprieti generale......... 3.2.2 Importana actinomycetelor 3.3. Bacteriile fotosintentizante 3.3.1 Cyanobacteriile 3.3. Mixobacteriile , 3.4. Bacteriile helicoidale (Spirochete i Spirili) 3.5. Rickettsiile i Chlamidiile 3.6. Micoplasmele ...... 113 114 118 118 122 123 124 130 132 135 137

Z.Z.^.Zr C>UD5iailJ.ClC U C XCZCI VCi I iute; ^jitwpiaoxjLJuv^ 2.2.6 Aparatul nuclear (Nucleoidul) 2.2.7 Aparatul locomotor 2.2.7.1 Flagelii i mobilitatea .. 2.2.7.2 Ultrastructura flagelilor bacterieni 2.2.7.3 Geneza flagelilor 2.2.7.4 Mecanismul micrii flagelare 2.2.7.5 Chimiotaxia . . 2.2.7.6 Mecanismul chimiotactic 2.2.7.7 Alte forme de taxie 2.2.7.8 Efectul comportamentului chimiotactic n lumea bacterian 2.2.8. Pilii i fimbriile 2.2.9. Forme de rezisten i spori 2.2.9.1 Diversitatea sporilor bacterieni 2.2.9.2. Strategii de rezisten 2.2.9.3. Endosporul i sporularea (sporogeneza)

/^

81 83 84 86 87 88 89 91 92 93 94 97 98 99 105

4. MICROORGANISME EUCARIOTE

4.1. nveliurile celulare 4.2. Citoplasma, microfilamentele intermediare i microtubulii 4.3. Reticulul endoplasmatic 4.4. Aparatul Golgi (AG) . J 4.5. Lizozomii i endocitoz . 4.6. Vacuomul 4.7. Ribozomii 4.8. Mitocondriile 4.9. Cloroplastele 4.10. Nucleul 4.11.Cilii i flagelii 4.12. Principalele grupe de microorganisme cu organizare celular eucariot .C. 4.12.1. Algele 4.12.2. Protozoarele 4.12.3. Mycetele (Fungii)

141

141 143 146 147 149 152 152 153 154 155 155

160 160 167 175

204

ANEXA1(continuare)

Micrococ

Dipiococi

Streptococi

Stafilococi

Tetracoci

.iilliilil!::: llllll
Micrococcus aureus Strepococcus agaiactiae Diplococus pneumoniae Sarcina ventriculis

ii I

Dipiococi semiformi

Dipiococi flacr de lumnare"

Lampropedia

iiiililiiiiS

Bacili Izolai

Streptobacili

Bacili fusiformi

Streptobacili (Baciilus megaterium)

Diplobacili (E. coli)

ANEXA 1 (continuare)
i i i i i i i l

Vibrio choferae

Spirillum volutans

Cristispira sp (Spirocheta)

Treponema paiiidium

Leptospira (nterrogans

Trihom la Caryophanon latum

Bacterii cu trihoame gen. Leptotrix

Bacterii cu apendice celular (crampoane) gen. Caulobacter

Bacterie cu apendice acelular Gailionella feruginosa

ANEXA1(continuare)

lipit de epiteliul intestinal printr-o ventuz (microscopie electronic n baleiaj) (dup Prescott, Harley, Klein, 1995)

Giardia lambiia

Trichomonas vaginalis (microscopie electronic n baleiaj) (dup Prescott, Harley, Klein, 1995).

Reproducere sexuat la Saccharomyces guttulata A - Contactul dintre 2 celule a i a B - Celule coninnd cte doi ascospori fiecare C - Asc cu 4 ascospori

Seciune prntr-o Cyanobacterie; alturi de celelalte elemente morfologice se pot observa corpi de incluziune (granule de glicogen, de polifosfat, carboxizomi) (fotografie realizat la microscopul electronic de J.P.Gourret) 1 f nucleoid, 2. corpi poliedrici (carboxizoni), 3. citoplasma celular bogat, n ribozomi, 4. tilacoizi, 5. granule de glicogen, 6. globule de polifosfat, 7. nveliuri celulare, 8. mas mucilaginoas ce nconjoar celula

Granule de cianoficin (gc) evideniate ntr-o cyanobacterie (microelectronografie pe seGiune ultrafin, dup Zarnea, 1983). mp = membran plasmatic m1-m4 = straturi ale peretelui celular m = strat mucos t = tiiacoizi n = material nuclear f = zon fibrilar gc = granule de cianoficin cp = corp poliedric I = incluziuni lpfdice