Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
1
1.4.3. Analiza cantitativ 58
1.5. SPECTROMETRIA DE ABSORBIE ATOMIC 59
1.5.1. Absorbia radiaiilor de ctre atomi 60
1.5.2. Principiul aparaturii 63
1.5.3. Analiza cantitativ 65
1.6. SPECTROMETRIA DE RAZE X 67
1.6.1. Principiul aparaturii 68
1.6.2. Metode directe de analiz cu raze X 71
1.6.3. Analiza prin fluorescen de raze X 72
1.7. METODE SPECTROMETRICE DE ABSORBIE
MOLECULAR N DOMENIUL VIZIBIL I
ULTRAVIOLET 74
1.7.1. Legea fundamental a absorbiei radiaiei 74
1.7.2. Eroarea fotometric. Condiii pentru o eroare minim la
determinarea absorbanei 79
1.7.3. Corelarea spectrelor electronice de absorbie cu structura
molecular 82
1.7.4. Analiza cantitativ 87
1.7.5. Titrri spectrometrice 89
1.8. SPECTROMETRIA DE FLUORESCEN I
FOSFORESCEN MOLECULAR 90
1.8.1. Relaia ntre intensitatea radiaiei de fluorescen (sau
fosforescen) i concentraie 91
1.8.2. Principiul aparaturii 92
1.8.3. Factorii structurali care determin fluorescena 93
1.8.4. Analiza cantitativ 93
1.9. SPECTROMETRIA DE ABSORBIE N INFRAROU I
RAMAN 99
1.9.1. Pregtirea probelor n vederea nregistrrii spectrului n
IR 99
1.9.2. Corelarea spectrelor n IR cu structura molecular 101
1.9.3. Spectrometria Raman 104
1.10. SPECTROMETRIA DE MAS 109
1.10.1. Principiul aparaturii utilizate n spectrometria de mas 110
1.10.1.1. Metode de ionizare 110
1.10.1.2. Metode de separare a ionilor. Analizorul de ioni 117
2
1.10.1.3. Detectorul de ioni. Schema unui spectrometru de mas.
Rezoluia 124
1.10.2. Spectrul de mas, aplicaii analitice 125
1.10.3. Cuplarea cromatografiei cu spectrometria de mas 133
1.11. SPECTROMETRIA DE REZONAN MAGNETIC
NUCLEAR 135
1.11.1. Proprietile magnetice ale nucleului 135
1.11.2. Interaciunea momentului de spin al nucleului cu un
cmp magnetic 137
1.11.3. Principiul aparaturii RMN 142
1.11.4. Poziia semnalelor n spectrul RMN. Deplasarea
chimic 144
1.11.5. Cuplarea spin-spin 151
1.11.6. Spectrometria RMN cu iradiere n pulsuri i
transformat Fourier 155
BIBLIOGRAFIE 157
RESURSE INTERNET N DOMENIUL METODELOR
SPECTROMETRICE DE ANALIZ 158
Capitolul 2 - Metode electroanalitice 161
2.1. INTRODUCERE N METODELE ELECTROANALITICE 1
2.1.1. Electrozi utilizai n celulele electrochimice 162
2.1.2. Celule electrochimice 164
2.1.2.1. Energia liber i fora electromotoare a unei celule
electrochimice 168
2.1.2.2. Efectul concentraiilor asupra forei electromotoare a unei
celule. Ecuaia Nernst 169
2.1.3. Potenialul de electrod 170
2.1.3.1. Potenialul standard de electrod 172
2.1.3.2. Potenialele de electrod n prezena unor reactivi de
precipitare sau de complexare 173
2.1.3.3. Limitri n utilizarea potenialelor standard de electrod 175
2.1.4. Poteniale de jonciune lichid 177
2.1.5. Efectul curentului asupra forei electromotoare a unei
celule. Cinetica proceselor de electrod. Curbe curent-
potenial 178
2.1.5.1. Cderea de potenial datorit rezistenei ohmice a celulei
electrochimice 179
2.1.5.2. Polarizarea electrozilor 179
3
2.1.5.3. Cinetica transferului de sarcin la electrozi 182
2.1.5.4 Curbele curent-potenial pentru o concentraie constant a
speciilor care particip la reacia de electrod. Limitarea
curentului datorit transferului de sarcin 185
2.1.5.5. Curbele curent-potenial pentru concentraii variabile ale
speciilor care particip la reacia electrod. Limitarea
curentului datorit transferului de mas 187
2.1.5.5.a. Forma curbelor curent-potenial (voltamograme) pentru
curenii de difuzie 190
2.1.5.5.b. Ecuaiile curbelor curent-potenial pentru curenii de
difuzie 192
2.1.6. Clasificarea metodelor electroanalitice 195
2.2. METODE POTENIOMETRICE DE ANALIZ 198
2.2.1 Metode poteniometrice directe 198
2.2.1.1. Electrozi de spea I-a 198
2.2.1.2. Electrozi de spea a II-a 202
2.2.1.3. Electrozi de spea a III-a 204
2.2.1.4. Electrozi redox 205
2.2.1.5. Electrozi cu membran 206
2.2.1.5.a. Clasificarea electrozilor cu membran 206
2.2.1.5.b. Celule electrochimice folosite la efectuarea de
determinri cu electrozi ion-selectivi cu membran.
Coeficientul de selectivitate al elec-trozilor ion-selectivi 208
2.2.1.5.c. Electrozi ion-selectivi cu membran solid 211
2.1.5.5.d. Electrozi cu membran lichid i polimeric 216
2.2.1.5.e. Electrozi cu membran sensibili pentru gaze 220
2.2.1.6. Electrozi cu semiconductori 222
2.2.1.6.a. Tranzistori cu efect de cmp sensibili chimic 227
2.2.1.7. Electrozi chimic modificai 232
2.2.1.8. Biosenzori poteniometrici 238
2.2.1.9. Microelectrozi ion-selectivi i determinri
poteniometrice in vivo 243
2.2.1.10. Practica determinrii poteniometrice directe 245
2.2.1.10.a. Determinarea poteniometric a pH-ului cu electrodul
de sticl 247
2.2.2. Titrri poteniometrice 252
2.2.2.1. Deducerea formei curbelor de titrare poteniometric cu
ajutorul curbelor curent-potenial (voltamograme) 253
2.2.2.2. Titratoare poteniometrice automate 258
4
2.3. METODE CONDUCTOMETRICE DE ANALIZ 260
2.3.1. Conductana electrolitic 260
2.3.2. Practica determinrilor conductometrice 263
2.3.3. Titrri conductometrice 266
2.4. METODE VOLTAMETRICE I POLAROGRAFICE DE
ANALIZ 270
2.4.1. Componente ale celulelor electrochimice i aparatura
utilizat n voltametrie 271
2.4.2. Polarografia convenional (n curent continuu) 278
2.4.2.1. Principii ale polarografiei convenionale 278
2.4.2.2. Aspecte teoretice privind polarografia convenional 280
2.4.2.3. Ecuaiile undelor polarografice 284
2.4.2.4. Curentul rezidual n polarografie 287
2.4.2.5. Maximele curenilor polarografici 290
2.4.2.6. Cureni catalitici ai hidrogenului 292
2.4.2.7. Cureni limit datorit unor procese de suprafa 293
2.4.2.8. Efectul reaciilor chimice 295
2.4.2.9. Efectul cineticii transferului de sarcin la electrod 297
2.4.2.10. Aspecte ale practicii polarografiei convenionale 298
2.4.3. Metode polarografice avansate (neconvenionale) 303
2.4.3.1. Metode polarografice avansate, n curent continuu 306
2.4.3.1.a. Polarografia rapid n curent continuu 306
2.4.3.1.b. Tast-polarografia (polarografia cu msurarea intermitent
a curentului) 306
2.4.3.1.c. Polarografia substractiv n curent continuu 308
2.4.3.1.d. Polarografia derivat n curent continuu 308
2.4.3.1.e. Polarografia cu baleiaj liniar, rapid de potenial 309
2.4.3.1.f. Polarografia cu pulsuri (pulspolarografia) 311
2.4.3.2. Metode polarografice n curent alternativ 319
2.4.3.2.a. Polarografia n curent alternativ sinusoidal 319
2.4.3.2.b. Polarografia n curent alternativ cu unde ptrate 325
2.4.3.2.c. Polarografia oscilografic n curent alternativ 328
2.4.4. Voltametrie hidrodinamic 331
2.4.4.1. Voltametria hidrodinamic cu electrozi rotitori 332
2.4.4.2. Voltametrie cu ali electrozi hidrodinamici 334
2.4.4.3. Electrodul de oxigen 335
2.4.4.4. Biosenzori amperometrici 337
2.4.4.5. Titrri amperometrice 339
2.4.5. Voltametrie n soluie staionar 342
2.4.5.1. Voltametria ciclic 343
5
2.4.5.2. Voltametrie cu trepte de potenial 348
2.4.5.3. Voltametria cu pulsuri de potenial 351
2.4.5.4. Cronopoteniometrie 353
2.4.5.5. Voltametrie de stripping (cu redizolvare) 358
2.5. METODE COULOMETRICE DE ANALIZ 364
2.5.1. Relaii de baz n coulometrie 365
2.5.2. Metode coulometrice la potenial controlat 367
2.5.3. Metode coulometrice la curent constant 369
BIBLIOGRAFIE 372
RESURSE INTERNET N DOMENIUL METODELOR
ELECTROANALITICE 373
BIBLIOGRAFIE GENERAL 374
RESURSE INTERNET N NUMEROASE DOMENII ALE
CHIMIEI ANALITICE 376
6
Capitolul 1
Metode spectrometrice de analiz
7
care trec printr-un anumit punct, n unitatea de timp. Frecvena se exprim n hertzi
(Hz), cicli pe secund sau s-1. Lungimea de und i frecvena sunt raportate la
viteza luminii prin relaia:
= c/n (1.1)
unde c este viteza luminii n vid (2,9976 1010 cm/s) i n este indicele de refracie
(raportul vitezei luminii n vid i al vitezei sale n mediul respectiv). n unele cazuri
este mai avantajos de a folosi numrul de und, ,,, care reprezint numrul de
o
-1
lungimi de und pe 1 cm. Se exprim n cm .
1 n
~ (1.2)
c
A2 c
I (1.3)
8
unde A este amplitudinea undei electromagnetice.
Proprieti de particul. Pentru a descrie modul n care interacioneaz
radiaia electromagnetic cu materia, este util de a imagina fasciculul de radiaii ca
o succesiune de fotoni (un tren de fotoni). Energia fiecrui foton este proporional
cu frecvena radiaiei i este dat de relaia:
E = h = hc / n (1.4)
Spectrul electromagnetic
Radiaiile electromagnetice care sunt de interes pentru chimie variaz de la
radiaiile care au energie foarte mare, la undele radio ce au energie foarte mic.
Prin spectru electromagnetic se neleg radiaiile de toate lungimile de und
cuprinse n acest interval.
n tabelul 1.1 se prezint, n funcie de lungimile de und, frecvene i
energie, radiaiile ce constituie spectrul electromagnetic, tipurile de tranziii ce pot
avea loc i metodele de analiz corespunztoare. Diferitele regiuni ale spectrului
constituie domeniile spectrale, pentru fiecare domeniu utilizndu-se un anumit tip
8
de aparat pentru a genera sau detecta radiaii, de exemplu: infrarou, raze X, vizibil
etc. ntre domeniile spectrale nu sunt limite nete, ci limite difuze, fiind, de fapt, o
ntreptrundere a acestora. Fiecrui domeniu spectral i corespund interacii
specifice ale radiaiei cu proba de analizat.
9
Tabelul 1.1.
Domeniile spectrului electromagnetic, tipuri de tranziii ce pot avea loc i
metodele de analiz corespunztoare [22].
log (m)
log (cm )
-1
log (s )
-1
logE
logE
h
E (1.5)
2
unde E este variaia de energie ntre dou stri, iar este durata de via a
strii excitate. Aceasta determin o lire natural a liniei spectrale, dat de relaia:
1
N (1.6)
2
10
Lirea va fi cu att mai mare cu ct va
fi mai mic. Lirea natural n cazul gazelor va
fi dependent de presiune. Liniile spectrale vor
fi cu att mai nguste cu ct presiunea este mai
mic, datorit reducerii numrului de ciocniri.
Ciocnirile reduc durata de via a strii excitate,
ceea ce determin o lire a liniilor spectrale.
Ali factori importani care determin
lirea liniilor spectrale sunt:
- viteza relativ de micare a
particulei, v, n raport cu radiaia emis, Fig. 1.2. Profilul unei linii
ceea ce determin o lire prin efect spectrale
Doppler:
v 3kT
D (1.7)
c c m
unde m este masa particulei.
- lirea datorit structurii fine nerezolvate F
- lirea datorit aparatului ntrebuinat, n primul rnd a
monocromatorul i a sistemul de nregistrare, A
Limea unei linii spectrale observate experimental va fi deci dat de relaia:
exp. = N + D + F + A (1.8)
Intensitatea unei linii spectrale depinde de densitile de ocupare ale
nivelurilor de energie considerate (de populaiile nivelurilor respective) i de
probabilitatea tranziiilor ntre ele. Probabilitatea tranziiilor este dat de regulile de
selecie. Raportul densitilor de ocupare ale nivelurilor energetice este dat de o
repartiie de tip Boltzmann:
N1 g1 E E0
exp 1 (1.9)
N0 g0 kT
unde:
N1 i N0 sunt numrul de particule din strile energetice E1 respectiv E0, la
temperatura T; g1 i g0 reprezint ponderile statistice ale nivelurilor respective; k
este constanta lui Boltzmann. Pentru strile energetice nedegenerate, g1/g0 = 1.
Raportul densitilor de ocupare a unor niveluri energetice pentru o anumit
temperatur va fi influenat de diferena E = E1 E0, ntre energiile
corespunztoare acestora. La temperatur obinuit starea fundamental (starea cu
energia cea mai mic) este n general mult mai populat dect celelalte stri
energetice.
11
Interacii elastice (cvasielastice)
n urma interaciilor elastice ale radiaiei electromagnetice i corpusculare cu
particulele probei de analizat, nu au loc modificri ale energiei cinetice a radiaiei
i deci a frecvenei sale, ci numai o schimbare a direciei de propagare, care este
funcie de natura probei. Energia intern i structura probei nu se modific n urma
acestor interacii. Interaciile elastice pot fi descrise pe baza proprietilor de und
ale radiaiei electromagnetice. Din interaciile elastice fac parte reflexia, refracia,
difuzia, difracia etc.
n tabelul 1.2 sunt date unele interacii elastice ce pot avea loc ntre radiaia
electromagnetic i corpuscular i particulele probei de analizat i metodele de
analiz corespunztoare:
12
1.1.3. Emisia i absorbia atomic a radiaiei
1.1.3.1. Emisia i absorbia atomic a radiaiei n domeniul ultraviolet i
vizibil
L = + 1 i J = 0, + 1 (tranziia 0 0 interzis)
13
n fig. 1.3 este prezentat mult simplificat diagrama Grotrian pentru
magneziu. Pe vertical este reprezentat energia. Nivelurile energetice sunt figurate
sub forma unor linii orizontale. n partea superioar sunt trecute simbolurile prin
care sunt notate strile energetice ale termenilor spectrali. Literele S, P i D
corespund lui L = 0, 1 i 2. n partea din stnga sus a literelor este trecut valoarea
2S + 1 numit multiplicitatea liniei spectrale, iar n dreapta jos valoarea lui J.
Emisia unei linii spectrale se datoreaz
unei tranziii de la un nivel de energie
mai mare la unul cu energie mai mic.
Absorbia reprezint fenomenul invers.
Liniile spectrale pentru care unul
din nivelurile energetice este starea
fundamental se numesc linii de
rezonan. Din punct de vedere analitic,
de mare importan sunt liniile de
rezonan ce apar n urma tranziiilor
ntre starea fundamental i primul nivel
excitat, ele fiind, n general, cele mai
intense. Pentru excitarea liniilor de
rezonan este nevoie de o energie destul
de mare, astfel c numai puini atomi ce
au electroni de valen labili pot emite
sau absorbi n domeniul vizibil, cum este
cazul metalelor alcaline.
Pentru majoritatea metalelor este
Fig. 1.3. Diagrama Grotrian pentru
ns nevoie de o energie mai mare pentru
magneziu. Lungimile de und ale
a excita liniile de rezonan, linii radiaiilor emise sau absorbite sunt
caracteristice unor energii ce corespund date n nm.
domeniului UV al spectrului. Pentru
metale este nevoie de energii i mai mari, corespunznd domeniului UV de vid, <
200 nm, domeniu spectral mai greu accesibil. Din acest motiv, spectrometria de
emisie sau absorbie atomic se aplic n special pentru analiza elementelor cu
caracter metalic.
Numrul de linii spectrale pentru un element depinde de numrul tranziiilor
electronice, care evident este dat de numrul i aezarea electronilor periferici (de
valen). Atomii cu un numr redus de electroni periferici, de exemplu metalele
alcaline, prezint spectre cu un numr redus de linii, elementele cu structur
complex a nveliului de electroni exterior, de exemplu metalele tranziionale, vor
prezenta spectre bogate n linii.
Un atom nu poate absorbi dect radiaiile pe care, n anumite condiii, le
poate emite. Emisia atomic se datoreaz atomilor aflai n stare excitat. Acetia,
prin revenire la stri cu energie mai mic, emit radiaii caracteristice. Aceleai
radiaii pot fi absorbite de ctre aceleai specii atomice aflate n stri cu energie
14
mai mic, acestea trecnd astfel n stri excitate.
Emisia atomic n vizibil i UV st la baza spectrometriei de emisie n
flacr i plasm, precum i la baza spectrometriei de emisie n arc i scnteie
electric, iar absorbia radiaiei st la baza spectrometriei de absorbie atomic.
Nivelurile N
Nivelurile M
Nivelurile L
Fig. 1.4. Diagrama nivelurilor energetice ale cadmiului pentru tranziii de raze X.
(a) emisie de raze X; (b) absorbie de raze X.
15
dat de Moseley:
2 1 1
RZ 2 2 (1.11)
n1 n2
I I 0e l (1.12)
unde:
I este intensitatea radiaiei transmise printr-o prob omogen de grosime l,
exprimat n cm, I0 este intensitatea radiaiei incidente, iar este coeficientul liniar
de absorbie exprimat n cm-1. Coeficientul liniar de absorbie depinde de lungimea
de und a razelor X i de atomii ce absorb radiaia.
Coeficientul de absorbie de mas, m, se obine prin mprirea lui la ,
care este densitatea materialului respectiv:
16
m = (1.13)
CNZ 4 3
m (1.14)
A
unde mt reprezint coeficientul de absorbie de mas total, m1, m2, ... coeficieni
de absorbie pentru componenii individuali, iar w1, w2 etc. sunt fraciile
corespunztoare de greutate. Reprezentnd log m funcie de lg nu vom obine o
dreapt, ci o serie de segmente de dreapt cu aceeai pant, legate prin
discontinuitile caracteristice, dup cum se vede n fig. 1.5.
log m
log
17
elemente cu numr atomic mare ntr-o matrice ce conine elemente uoare. Astfel,
poate fi determinat plumbul prezent sub form de tetraetil plumb sau bromul
prezent sub form de derivai bromurai n benzine.
18
absorbia radiaiei electromagnetice de ctre molecule, aceasta interacioneaz prin
componenta sa electric. Pentru ca radiaia s poat fi absorbit, ea trebuie s aib
energia egal cu diferena ntre dou niveluri energetice ale moleculei i n plus,
tranziia molecular trebuie s fie nsoit de o modificare a poziiei centrului ei
electric, a momentului de dipol. Numai astfel, molecula poate interaciona cu
componenta electric a radiaiei electromagnetice.
Energiile necesare pentru a provoca tranziii ntre stri energetice ale
electronilor din orbitalii moleculari sunt cele mai mari i corespund domeniului
vizibil, 400-800 nm i UV 100-400 nm. Pentru a putea provoca tranziii ntre stri
energetice de vibraie sunt necesare energii mai mici, deci vor fi absorbite radiaii
cu lungimi de und mai mari, corespunznd domeniului IR. Tranziiile ntre stri
energetice de rotaie vor fi excitate de radiaii cu energie mai mic,
corespunztoare domeniului IR ndeprtat i microundelor. Spectrele pure de
rotaie au aplicaii analitice reduse i din acest motiv nu vor fi discutate n
continuare.
1.1.4.1.a. Tranziii electronice moleculare
Atunci cnd doi atomi formeaz o legtur covalent, electronii ce particip
la legatura dintre cei doi atomi ocup un nou orbital, un orbital molecular. Are loc
o combinare a doi orbitali atomici pentru a forma un orbital molecular de
legtur de energie mic i un orbital molecular de antilegtur cu energie
mult mai mare. Astfel, conform teoriei orbitalilor moleculari, fiecare orbital de
legtur trebuie s aib un orbital corespunztor de antilegtur * i fiecare orbital
de legtur trebuie s aib un orbital corespunztor de antilegtur *.
Electronii de valen care nu particip la legturi chimice n molecul sunt
numii electroni de nelegtur n. Electronii n se gsesc de exemplu n orbitalii
atomici ai azotului, oxigenului, sulfului etc.
Tranziiile electronice pentru molecule au loc la absorbia radiaiei din
domeniul vizibil sau ultraviolet de ctre electroni aflai n orbitali n, sau .
Acetia sunt trecui n orbitali de antilegtur care au energii mai mari. Pot s aib
loc urmtoarele tranziii: *, n *, n * i * (fig. 1.6). Valorile
E pentru aceste tranziii cresc n
ordinea: n * < * < n * <<
*. Energiile necesare pentru
tranziii * sunt cele mai mari.
Compui ca de exemplu hidrocarburile
saturate care nu au electroni n i numai
legturi nu absorb radiaia dect n UV
ndeprtat (de vid). Astfel, propanul
absoarbe radiaie la 135 nm.
Dintre compuii care prezint
Fig. 1.6. Nivelurile de energie ale tranziii de tipul n * putem
orbitalilor moleculari meniona clorura de metil (max = 173
nm) i trimetilamina (max = 227 nm).
19
Tranziiile cu energia cea mai mic sunt n *. De exemplu cetonele i
aldehidele saturate prezint absorbie datorit unei tranziii n * la aproximativ
285 nm.
Este de reinut ns faptul c tranziiile electronice sunt nsoite n cele mai
multe cazuri de tranziii ntre stri energetice de vibraie i rotaie (fig. 1.7) ceea ce
confer o structur fin benzilor de absorbie electronic. Aceast structur nu se
poate observa dect pentru anumite tipuri de molecule. Frecvent, benzile de
absorbie datorit vibraiei i rotaiei (ce nsoesc o tranziie electronic) se
contopesc, dnd natere unei benzi de absorbie late. Tranziia electronic
determin poziia acestei benzi n spectru, iar tranziiile de vibraie i rotaie
limea ei.
20
electronic pot fi considerate imediat dup tranziie ntr-o geometrie practic identic
cu a strii lor fundamentale. Din acest motiv, tranziiile electronice pot fi
reprezentate sub forma unor linii verticale ntr-o diagram energetic (fig. 1.8).
Principiul Frank-Condon ne indic probabilitile tranziiilor de vibraie care
nsoesc tranziiile electronice. Tranziiile sunt cele mai probabile n momentele n
care molecula adopt n cursul vibraiilor o geometrie comun strii fundamentale
i a celei excitate.
S considerm o molecul n stare fundamental. Deoarece aceasta vibreaz
chiar cnd se afl pe nivelul de vibraie cel mai cobort, trebuie considerat un
domeniu al distanei internucleare. Se poate considera c cea mai probabil
distan internuclear va fi ns cea corespunztoare poziiei de echilibru,
amplitudinea vibraiilor fiind mic. Pentru stri vibraionale cu energie mai mare,
cea mai probabil poziie a nucleelor este la sfritul vibraiilor, cnd atomii se
opresc i i schimb direcia.
Dup cum se vede n fig. 1.8b, atunci cnd nu se modific distana ntre
nuclee n urma excitrii electronice (nu se modific tria legturii) sunt mai
21
probabile tranziiile pe nivelul de vibraie fundamental. n cazul slbirii legturii n
urma excitrii electronice, fig. 1.8a, vor fi mai probabile tranziiile pe niveluri de
vibraie mai nalte.
Fig. 1.9. Vibraii de ntindere (a) i (b) i de deformare (c), (d), (e) i (f).
22
Vibraiile pe care le execut o molecul n ansamblul ei cu pstrarea imobil
a centrului su de mas se numesc vibraii normale sau fundamentale. O molecul
neliniar, avnd n atomi, are un numr de 3n-6 vibraii normale. O molecul liniar
cu n atomi are 3n-5 vibraii normale. Numrul real de benzi de absorbie din
spectru poate fi mai mare sau mai mic (de obicei este mai mic) dect cel rezultat
din relaia de mai sus. Creterea numrului de benzi fa de cel teoretic se
datoreaz armonicelor, benzilor de combinare sau rezonanei Fermi. Armonicele
sunt benzi de intensitate mic ce apar la un numr de und dublu, triplu etc. fa de
banda fundamental. Benzile de combinare sunt benzi de intensitate mic care apar
la numere de und egale cu diferena sau cu suma a dou vibraii fundamentale.
Rezonana Fermi const n scindarea unei benzi fundamentale atunci cnd n
imediata ei vecintate se gsete o armonic sau o band de combinare.
Frecvena corespunztoare unui sistem format din doi atomi care vibreaz n
cadrul legturii poate fi calculat pe baza legii micrii armonice simple i este
dat de relaia:
1 f (1.16)
=
2
1 h f 1 f 1
E v h v
1
v ; ~ v (1.17)
2 2 2 2c 2
a) b)
Fig. 1.10. Curbe de energie potenial pentru un oscilator armonic, (a), i
nearmonic, (b). D energia de disociere; r0 distana de echilibru ntre atomi.
23
n cazul moleculelor nu este ndeplinit o condiie esenial a unui oscilator
armonic: valoarea lui f nu este constant n raport cu elongaia iar energia de
vibraie a unei legturi este dat de relaia:
1 h2 2
2
1
E v h v v (1.18)
2 4D 2
Fluorescena i fosforescena
Fluorescena i fosforescena molecular constau n emisia de radiaii de
ctre o molecul, n urma unui fenomen de absorbie. Absorbia este o condiie
necesar dar nu suficient pentru a avea loc acest fenomen. Excitarea se face cu
radiaii de o energie mai mare, folosind, de exemplu, radiaii din domeniul UV al
spectrului iar emisia are loc de obicei n domeniul vizibil. Pentru a explica
fluorescena i fosforescena, s considerm o parte din strile energetice ale unei
24
molecule, prezentate schematic n fig. 1.11(I) (diagrama Jablonski):
Fig. 1.11. (I) Diagrama nivelurilor de energie electronic i de vibraie ale unei
molecule cu o stare fundamental de singlet So i stri excitate de singlet, S1 i
triplet T1. Tranziiile neradiative sunt figurate prin linii ondulate: (a) absorbia
radiaiei, (b, b) relaxare vibraional i conversie intern, (c) fluorescen, (d)
fosforescen. (II) (a) spectru de absorbie; (c) spectru de fluorescen; (d)
spectru de fosforescen (la temperatur joas).
25
exemplu, molecula ce se afl pe un nivel de vibraie excitat al strii electronice
excitate poate reveni la starea fundamental emind o cuant de energie egal cu
diferena ntre cele dou stri energetice. n soluie, acest proces este foarte puin
probabil n comparaie cu procesul competitiv de relaxare vibraional (n fig.
1.11(I) notat cu (b)) care este un proces neradiativ. ntr-un timp de ordinul 10-12 s,
molecula ajunge pe nivelul de vibraie cel mai cobort al strii electronice excitate,
fie prin cedarea energiei vibraionale altor molecule, prin ciocniri, fie prin excitarea
altor moduri posibile de vibraie sau rotaie ale moleculei excitate. n faza gazoas,
relaxarea vibraional este mai puin eficient, frecvent avnd loc emisia de radiaii
cu energie egal cu cea absorbit. Acest proces se numete fluorescen de
rezonan i este important n cazul fluorescenei atomice.
Datorit vitezei mari a procesului de relaxare vibraional, cele mai multe
molecule excitate n soluie vor ajunge la nivelul de vibraie cel mai cobort al
strii excitate de singlet. Din aceast stare, molecula poate reveni la starea
fundamental n mai multe moduri, printre care este i emisia de energie radiant.
Pierderea radiativ de energie prin revenirea pe diferite niveluri de vibraie ale
strii electronice fundamentale se numete fluorescen. Acest proces decurge ntr-
un timp foarte scurt, 10-7 pn la 10-9 s. ntruct revenirea la starea fundamental se
face de pe cel mai cobort nivel de vibraie al strii electronice excitate, forma
benzii de fluorescen nu va depinde practic de lungimea de und a radiaiei
excitatoare, dei intensitatea radiaiei de fluorescen este determinat de
intensitatea radiaiei excitatoare.
O serie de alte forme de pierdere de energie pot fi competitive cu
fluorescena i din acest motiv este necesar s folosim un factor de corecie numit
randament cuantic de fluorescen.
Deoarece fluorescena aproape ntotdeauna apare dup o anumit pierdere de
energie, lungimile de und ale radiaiilor de fluorescen vor fi mai mari dect ale
radiaiilor absorbite, dup cum se vede din fig. 1.11(II)(c). Pentru un mare numr
de molecule, banda de fluorescen este imaginea n oglind a benzii de absorbie,
curbele (II)(c) i (II)(a) din fig. 1.11. Intensitatea radiaiilor absorbite sau emise
depinde de probabilitatea tranziiilor ntre nivelurile energetice ale moleculei. Din
fig. 1.8b se poate constata c atunci cnd la excitarea electronic nu are loc o
modificare a triei legturii, probabilitatea tranziiilor de absorbie din starea
fundamental scade n ordinea: 0 0 > 0 1 > 0 2 > 0 3. Probabilitatea
pentru tranziiile de fluorescen care au loc de pe cel mai cobort nivel de vibraie
al strii electronice excitate de singlet 0, pe diferite niveluri de vibraie a strii
electronice fundamentale, va descrete n ordinea: 0 0 > 0 1 > 0 2 > 0
3. Aceasta va determina un aspect al benzilor de absorbie i emisie ca cel
prezentat n fig. 1.11(II)(c) i (II)(a), pentru care maximele de absorbie i de
emisie sunt la aceeai lungime de und.
Dac ns n urma excitrii electronice se modific tria legturii, deci i
distana ntre nuclee, atunci cea mai probabil tranziie de absorbie va fi cea din
starea fundamental (v=0) pe un anumit nivel de vibraie (de exemplu v = 3) al
26
strii electronice excitate, dup cum se vede din fig.1.8a, toate celelalte tranziii
avnd o probabilitate mai mic.
Tranziia de fluorescen cea mai probabil, deci cu intensitatea cea mai
mare, va avea loc de pe nivelul v = 0 a strii electronice excitate, pe un anumit
nivel de vibraie cu numrul cuantic v = v al strii electronice fundamentale, dat
de intersecia verticalei ce unete mijlocul segmentului ce ne indic valoarea
energiei pentru v = 0 i curba de energie potenial pentru starea electronic
fundamental.
Toate celelalte tranziii vor avea o probabilitate mai mic. Notnd cu a
respectiv cu a nivelurile de vibraie ale strii electronice excitate i fundamentale,
putem spune c tranziiile de absorbie 0 a vor avea aceeai probabilitate cu
tranziiile de emisie 0 a, ceea ce va face ca spectrul de emisie s fie imaginea n
oglind a spectrului de fluorescen. Maximul benzii de fluorescen va fi ns
deplasat la lungimi de und mai mari fa de cel de absorbie.
Din starea excitat de singlet, molecula poate reveni la starea fundamental i
prin conversia intern a energiei n energie termic, proces neradiativ, sau prin
conversia intersistem, prin schimbarea spinului unui electron din starea excitat de
singlet, ducnd la o alt stare excitat, de triplet, T1. n starea de triplet, relaxarea
vibraional va fi, de asemenea, foarte rapid. Deoarece conversia intersistem este
un proces de spin interzis, deci relativ puin probabil, va fi competitiv cu
fluorescena i conversia intern, numai pentru anumite molecule. Orice tranziie
din starea de triplet T1 la starea fundamental este de asemenea, un proces de spin
interzis. Din acest motiv, durata de via a strii de triplet este relativ lung, 10-6
10 s.
Dac pierderea de energie se face n continuare radiativ, molecula revenind
la starea fundamental pe diferite niveluri de vibraie ale strii electronice
corespunztoare acestei stri, are loc fenomenul de fosforescen. Fosforescena se
studiaz la temperaturi foarte joase de ex. la temperatura azotului lichid, la aceste
temperaturi crescnd probabilitatea tranziiilor radiative. Revenirea la starea
fundamental se poate face i neradiativ, prin conversie intern. Din cauza
caracterului de spin interzis, fosforescena are loc ntr-un timp mai lung, egal cu
timpul de via al strii de triplet.
Lungimile de und ale radiaiilor emise n urma fenomenului de
fosforescen vor fi mai mari dect cele ale radiaiilor de fluorescen (fig.
1.11(II)(d)) deoarece starea de triplet are o energie mai mic dect starea de
singlet.
Pentru anumite tipuri de molecule se poate reveni din starea de triplet T1 pe
nivelul S1 (prin ocuri termice) emindu-se apoi cu ntrziere spectrul de
fluorescen. Radiaiile de fosforescen emise n acest mod vor avea aceeai
lungime de und ca cele de fluorescen. i n cazul fosforescenei putem vorbi de
un randament cuantic de fosforescen care, n general, este cu att mai mare cu ct
temperatura este mai mic. Din acest motiv, probele de analizat se rcesc frecvent
la temperatura azotului lichid.
27
1.1.4.3. Difuzia radiaiei, efectul Raman
Spre deosebire de absorbie i emisie, difuzia radiaiei nu implic tranziii
ntre stri cu energie cuantificat ale unei particule.
Dac un fascicul de radiaii electromagnetice vine n contact cu o particul
(atom, ion sau molecul) care este mic n comparaie cu lungimea de und a
radiaiei, aceasta va fi supus unei perturbaii puternice, determinat de cmpurile
oscilante, magnetic i electric ale radiaiei. In timp ce radiaia trece, particula se va
gsi ntr-un cmp puternic a crui polaritate alterneaz cu frecvena oscilaiei. Dac
particula este polarizabil, sarcina indus va oscila de asemenea. Dipolul oscilant
indus n particul va produce un cmp propriu care oscileaz cu aceeai frecven
cu cea a radiaiei incidente. Acest cmp acioneaz el nsui ca o surs de radiaii,
astfel c o radiaie de aceeai lungime de und ca a celei incidente este emis ntr-o
direcie aleatoare (radiaiile difuzate fiind emise n toate direciile posibile). Acest
tip de mprtiere se numete difuzie (mprtiere) Rayleigh i este caracteristic
pentru particule de dimensiuni mici, ca de exemplu atomi i molecule.
Pentru ca o radiaie s fie difuzat prin efect Rayleigh este necesar ca
polarizabilitatea particulei s rmn constant. Dac polarizabilitatea particulei
variaz n timpul difuziei radiaiei frecvena radiaiei difuzate se va modifica.
S presupunem c o molecul sufer o schimbare de polarizabilitate n
timpul unei vibraii normale. Un asemenea mod de vibraie constituie baza pentru
efectul Raman, iar vibraia respectiv este Raman activ. De exemplu, la vibraia
simetric de ntindere a legturilor n molecula de CO2 nu va fi nici o variaie a
momentului de dipol, deci molecula nu va putea absorbi radiaii n domeniul IR.
Totui, norul de electroni din jurul moleculei se ntinde i contract alternativ ceea
ce determin o variaie a polarizabilitii.
Dac radiaia incident este monocromatic radiaia mprtiat prin efect
Raman i pierde acest caracter, aprnd n plus o serie de linii (linii Raman) de o
parte i de alta a liniei corespunztoare lungimii de und a radiaiei incidente.
S considerm o molecul aflat iniial n starea fundamental de vibraie, v0,
dup cum se vede din fig. 1.12. La interacia cu radiaia electromagnetic,
molecula va fi polarizat, intrnd n oscilaie. Energia primit suplimentar este E0,
energia radiaiei incidente. Molecula nu va fi ns ntr-o stare excitat n sensul
convenional, dei energia ei a crescut n urma interaciei cu radiaia incident.
Molecula nu a fost excitat pe nici un nivel cuantificat de energie i rmne cu
energia suplimentar numai atta timp ct trece unda electromagnetic. Dup
trecerea undei, molecula polarizat revine pe un nivel cuantificat de energie
vibraional, ncetnd s oscileze. Dac nivelul cuantificat este altul dect cel
ocupat iniial de molecul, v0, pierderea de energie ER va fi mai mic dect energia
primit, E0. Dup cum se vede din fig. 1.12A, diferena E0 ER este egal cu
diferena de energie ntre starea de vibraie fundamental i starea de vibraie
excitat. Ev este extras din radiaia incident, astfel nct radiaia difuzat va
conine o component cu frecvena R egal cu diferena ntre frecvena 0 a
28
radiaiei incidente i v a vibraiei moleculare active n Raman.
E0
29
tipuri de spectre n cazul moleculelor cu un centru de simetrie. n spectrul Raman
vor fi active vibraiile simetrice (variaie a polarizabilitii) iar n spectrul IR,
vibraiile antisimetrice (variaie a momentului de dipol).
30
1.2. APARATURA UTILIZAT N SPECTROMETRIA DE
ABSORBIE N DOMENIILE ULTRAVIOLET,
VIZIBIL I INFRAROU
31
Fig. 1.14. Schema bloc a unui spectrometru de absorbie.
-1
(c m )
CsI
Filtre
32
1.2.2. Surse de radiaii
n spectrometria de absorbie atomic n domeniul UV i vizibil se
utilizeaz drept surse de radiaii lmpi cu catod cavitar i lmpi cu descrcare fr
electrozi. n fig. 1.16 se prezint schema unei lmpi cu catod cavitar. Ea este
constituit dintr-un tub de sticl cu o fereastr transparent pentru radiaiile emise.
n interior se gsesc catodul, prevzut cu o cavitate i anodul, constituit, de
exemplu, dintr-un fir metalic, plasat alturi de catod.
33
electrozi pentru realizarea descrcrii.
Lmpile cu descrcare fr electrozi sunt realizate n special pentru
elementele mai volatile: arsen, plumb, cadmiu, staniu etc. Ele sunt mai scumpe
dect cele cu catod cavitar, dar intensitatea radiaiilor emise i timpul de via al
acestora sunt mai mari.
Surse de radiaii utilizate n spectrometria de absorbie molecular
Aceste surse constau dintr-un material care este excitat la stri cu energie
ridicat printr-o descrcare electric la tensiune mare sau prin nclzire electric.
Prin revenirea materialului la stri cu energie mai mic sau la starea fundamental
are loc o emisie de radiaie electromagnetic. Unele materiale au niveluri
energetice att de numeroase i care sunt att de apropiate unele de altele nct
radiaia emis se prezint ca o radiaie continu ntr-un anumit domeniu de lungimi
de und.
Pentru domeniul UV al spectrului, cele mai utilizate surse sunt lmpile de
hidrogen sau deuteriu. Ele sunt lmpi cu descrcare n gaze i emit o radiaie
continu n domeniul 180-350 nm.
Pentru domeniul vizibil i infrarou apropiat se utilizeaz lmpi cu filament
de wolfram, filament care este alimentat de o surs stabilizat de curent continuu.
Radiaia continu emis este n domeniul 350-2500 nm.
Pentru domeniul infrarou al spectrului sunt utilizate: sursa Globar, o baghet
de carbur de siliciu (6-8 mm diametru i aproximativ 5 cm lungime), sursa Nernst
constituit dintr-un amestec de oxizi de zirconiu, ytriu i toriu sinterizai sub forma
unei baghete (1-3 mm diametru i 2-5 cm lungime) goal n interior i avnd un fir
de platin pentru amorsare, sursa Nicrom realizat sub forma unor spire foarte
apropiate din srm de aliaj nichel-crom.
n toate aceste surse, emisia are loc datorit efectului termic produs la
trecerea curentului electric prin materialul din care sunt constituite. Ele emit
radiaii utilizabile n anumite zone caracteristice ale domeniului IR (fig. 1.15).
34
valoarea maxim. Filtrele colorate permit transmiterea radiaiilor cu o lime a
benzii spectrale efective cuprins n mod obinuit ntre 20 i 50 nm.
Filtrele interfereniale constau din unul sau mai multe straturi alturate de
dielectric transparent acoperite pe ambele fee cu un film metalic semitransparent
i parial reflectant de obicei argint. Grosimea stratului de dielectric este bine
determinat, fiind de , 1 sau 3/2 din lungimea de und a radiaiei transmise; o
parte din radiaie va trece prin filtru neafectat, iar o alt parte va suferi mai nti o
reflecie ntre cele dou straturi de film metalic ce acoper dielectricul. Cele dou
radiaii vor interfera constructiv sau distructiv. Va fi transmis numai radiaia cu
lungimea de und ce permite o interferen constructiv. Lrgimea efectiv a benzii
spectrale transmise de filtrele interfereniale este de ordinul 5-10 nm iar pentru cele
cu un numr mare de straturi poate ajunge chiar la fraciuni de nm.
Monocromatoarele separ radiaiile policromatice n funcie de lungimea de
und permind obinerea unor radiaii cu o band spectral foarte ngust, practic
monocromatic. Componentele unui monocromator sunt: 1) o fant de intrare prin
care ptrunde radiaia monocromatic de la surs, 2) un colimator cu una sau mai
multe lentile, sau cu o oglind concav, 3) un sistem de dispersie, prism sau reea
de difracie care separ radiaiile n funcie de lungimea de und, 4) un sistem de
focalizare alctuit din una sau mai multe lentile, sau o oglind concav i 5) o fant
de ieire care izoleaz banda spectral dorit blocnd toate celelalte radiaii. n fig.
1.17 se prezint schemele unor monocromatoare cu prism i reea.
35
satisfctoare att din punct de vedere al lrgimii benzii spectrale ct i a
funcionrii n bune condiii a detectorului. Un optim se obine la egalitatea celor
dou fante.
Sistemele de dispersie sunt caracterizate de: dispersia unghiular, dispersia
liniar i puterea de rezoluie.
Dispersia unghiular este dat de raportul d/d, d fiind unghiul pe care l
fac ntre ele dou radiaii ce prsesc sistemul de dispersie i d fiind diferena de
lungime de und dintre ele.
Dispersia liniar se definete n planul de focalizare al spectrului fiind dat
de raportul dl/d, dl fiind distana ntre dou linii spectrale i d diferena de
lungime de und dintre ele.
Puterea de rezoluie este dat de raportul /d, fiind lungimea de und
medie a dou linii spectrale plasate alturat i pentru care se mai obine o imagine
distinct i d diferena dintre lungimile de und ale acestor linii.
Drept elemente de dispersie se utilizeaz prisme i reele de difracie.
Prisme. Dispersia n prism se realizeaz datorit variaiei indicelui de
refracie al radiaiilor n funcie de lungimea de und. Frecvent, indicele de
refracie scade cu lungimea de und, deci unghiul de deviere al radiaiei este mai
mare la lungimi de und mai mici.
n fig. 1.18 se prezint modul n care se realizeaz separarea unei radiaii
policromatice colimate, cu ajutorul unor prisme.
Suprafa
aluminizat
(oglind)
36
dn
(1.19)
Rp = =t
d d
unde t este baza prismei, iar dn/d este dispersia indicelui de refracie.
Puterea de rezoluie este limitat de lungimea bazei prismei i de puterea de
dispersie a materialului dn/d care nu este constant, fiind funcie de lungimea de
und.
Utilizarea unei prisme ntr-un montaj de tip Littrow (fig. 1.19B) prezint
avantajul unui grad mai mare de dispersie, i n plus, este evitat dubla refracie
atunci cnd se folosete un material anizotropic, cum este cuarul. Oglinda din
montajul de tip Littrow poate fi constituit dintr-un material metalic dispus chiar
pe prism (dup cum se vede din fig. 1.19B).
Materialele din care sunt realizate prismele depind de domeniul spectral n
care acestea se utilizeaz. Ele trebuie s fie transparente i s aib o dispersie
suficient de mare.
Pentru domeniul UV se utilizeaz prisme din cuar sau dioxid de siliciu topit,
care sunt transparente pn la aproximativ 200 nm. Fluoritul (CaF2) este
transparent pn la 125 nm putnd fi utilizat n ultravioletul de vid. Pentru
domeniul vizibil i IR apropiat prismele se fac din sticl de diferite caliti.
n domeniul infrarou se utilizeaz materiale cristaline ionice. n fig. 1.15
sunt prezentate cteva dintre aceste materiale i domeniile de numere de und (cu
aproximaie) n care acestea pot fi utilizate cu cele mai bune rezultate: fluoritul,
CaF2, ntre 1600 i 1250 cm-1, clorura de sodiu ntre 625 i 4000 cm-1, bromura de
potasiu ntre 700 i 400 cm-1, KRS-5 (un cristal mixt de bromur i iodur de taliu)
i bromura de cesiu n domeniul 425-280 cm-1, iodura de cesiu este utilizabil pn
la 180 cm-1. Sub aceast valoare de obicei se folosesc reele de difracie ca sisteme
de dispersie.
Reele de difracie. Reelele de difracie pot fi prin transmisie sau prin
reflexie. n fig. 1.20 se prezint drumul parcurs de radiaii n cazul unei reele de
difracie prin reflexie.
Suprafaa reelei este puternic reflectorizant i prezint un mare numr de
anuri (zgrieturi) echidistante, n mod obinuit 600-2000 pe mm, n funcie de
domeniul spectral n care se utilizeaz.Radiaiile reflectate de reeaua de difracie
sufer un fenomen de interferen pozitiv sau negativ n funcie de lungimea de
und a acestora i de diferena de drum strbtut. Diferena de drum este dat de
diferena BC AD = d(sin i sin ). Totui, este considerat un unghi negativ
astfel c diferena de drum este d(sin i + sin ).
37
Fig. 1.19. Drumul parcurs de radiaii pentru o reea de difracie prin reflexie.
unde n este un numr ntreg. O radiaie de o anumit lungime de und care este
reflectat de o reea de difracie pentru un unghi de inciden i, poate suferi o
interferen constructiv pentru mai multe unghiuri , formndu-se astfel spectre
de diferite ordine. Cele mai intense radiaii aparin ordinului nti, intensitatea
radiaiilor scznd cu ordinul spectrului.
Separarea radiaiilor se face prin rotirea reelei de difracie. n faa fantei de
ieire a monocromatorului fiind aduse radiaiile de diferite lungimi de und ce
aparin spectrului de ordinul 1.
Reelele de difracie prezint, spre deosebire de prisme, o dispersie
unghiular liniar pe ntreg domeniul de lungimi de und utilizat, ceea ce constituie
un avantaj.
39
Fig.1.20. Schema unui tub fotomultiplicator.
40
ajutorul unui poteniometru), fie pe cale optic (cu ajutorul unei pene optice sau a
unei diafragme reglabile); n acest caz, mrimea se msoar n uniti de
compensare pe scala poteniometrului sau a sistemului optic.
n aparatele moderne sistemul de evaluare se bazeaz n mare msur pe
utilizarea calculatoarelor care pot prelua semnalul de la amplificator, l compar cu
semnalele corespunztoare ale unor probe etalon, stocate n memorie, iar apoi ne
dau direct datele analitice.
41
Fig. 1.21. Schema unui spectrometru cu dou fascicule.
42
1.3. SPECTROMETRIA DE EMISIE ATOMIC N ARC,
SCNTEIE ELECTRIC I PLASM
43
a reproductibilitii excitrii. n arc electric se obin spectrele atomilor i n mai
mic msur spectrele ionilor. Datorit instabilitii lor, ele se folosesc mai ales la
analiza cantitativ i semicantitativ.
Intensitatea emisiei atomice n arcul electric depinde de matricea probei (de
prezena celorlali componeni ai probei). Din acest motiv, probele de analizat i
standardele trebuie s fie ct mai asemntoare nu numai n privina compoziiei
chimice ct i a constituiei fizice. Acest lucru este valabil i pentru alte surse de
vaporizare i excitare.
Dac arcul este produs ntre electrozi de carbon, n aer, se formeaz i
molecule de dician care sunt excitate de arc, emind radiaii sub forma unor benzi
moleculare n domeniul 360-420 nm care se suprapun peste spectrul probei.
Scnteia electric
Este o descrcare scurt i oscilant ntre doi electrozi aflai la o mare
diferen de potenial (10.000-50.000 V). Temperatura scnteii electrice este de
ordinul 10.000-30.000 oC. Scnteia electric se poate realiza cu un montaj
prezentat n fig. 1. 22.
1 1
(1.21)
2 LC
44
volatilizare fracionat a diferitelor elemente va fi mult mai redus comparativ cu
arcul electric.
Pentru a asigura o mai mare stabilitate a emisiei spectrale, Feussner a
introdus n circuit un ntreruptor mecanic acionat de un motor sincron. Circuitul
este nchis numai pentru scurt timp la valoarea maxim a intensitii curentului
pentru fiecare semiperioad. Condensatorul se va descrca la aceeai tensiune de
ncrcare, iar scnteia va avea un caracter mult mai reproductibil.
Energia mare a scnteii determin o populare i a nivelurilor energetice cu
energie nalt ale atomilor. Din acest motiv, n scnteie se obin att spectrele
atomilor ct i ale ionilor, spectrele fiind mai complexe dect cele obinute n arc
electric.
Scnteia electric este o surs de excitare care ne d o mai mare precizie i
stabilitate dect arcul electric, putnd fi folosit cu rezultate bune n analiza
cantitativ.
Electrozii ntre care are loc arcul sau scnteia electric sunt constituii chiar
din proba de analizat atunci cnd aceasta este bun conductoare de electricitate
(fig. 1.23a i 123b). Pentru analiza unor soluii se pot utiliza electrozi de forma
celor prezentai n fig. 1.23c i 1.23d. Dac proba nu este bun conductoare de
electricitate, ea este transformat n pulbere, apoi este amestecat cu un liant i este
introdus n cavitatea unui electrod de grafit (fig. 1.23e). Grafitul are avantajul c
are un spectru simplu i creeaz o atmosfer reductoare ce nu permite formarea
oxizilor.
Fig. 1.23. Tipuri de electrozi folosii la utilizarea arcului sau scnteii electrice ca
surs de vaporizare i excitare. (a) i (b) analiza unor probe bune conductoare de
electricitate; (c) i (d) analiza unor probe lichide; (e) analiza unor probe care au
conductibilitate electric mic.
Un fascicul laser
Poate fi folosit la analiza unor zone foarte mici de pe suprafaa unei probe.
Fasciculul laser, focalizat cu ajutorul unui microscop n zona de analizat,
vaporizez o cantitate mic de prob, dnd natere unui crater semisferic cu
45
diametrul de ordinul 50 m. Atomii din vaporii rezultai sunt apoi excitai cu
ajutorul unei scntei electrice produs ntre doi electroni plasai deasupra probei.
Aceast tehnic poart numele de microanaliz spectral cu laser. Metoda permite
analiza interiorului celulelor individuale chiar n organismele vii. Se pot analiza de
asemenea incluziuni n metale i minereuri.
Plasma
Ca surs de excitare a atomilor probei, plasma prezint avantaje fa de arcul
sau scnteia electric. Temperatura plasmei este de ordinul 9000 K. Spectrul
obinut este foarte bogat n linii deoarece tranziiile electronice ce pot avea loc sunt
foarte numeroase. Aceasta ns face s creasc posibilitatea interferenelor
spectrale. Din acest motiv, spectrometrul utilizat trebuie s aib o rezoluie nalt.
Sensibilitatea i exactitatea sunt foarte bune. Intensitatea radiaiei emise de un
element este funcie liniar de concentraie ntr-un interval larg (4 sau mai multe
ordine de mrime). Pot fi analizate probe gazoase sau lichide (n unele cazuri i
probe solide pulverulente).
Tora de plasm de argon cuplat inductiv
Este un tip special de plasm care este alimentat cu energie prin inducie de
la un cmp magnetic de nalt frecven (radiofrecven). Plasma care este un gaz
parial ionizat este format electromagnetic, n urma cuplrii prin inducie a
argonului ionizat cu un cmp de nalt frecven.
n fig. 1.24 se prezint schematic o tor de plasm de argon cuplat inductiv.
Ea este constituit din trei tuburi concentrice de cuar, tuburile interioare fiind mai
scurte. n jurul tubului exterior n partea superioar, sunt dou spire de inducie
(rcite cu ap) ale unui generator de radiofrecvena (pn la 2 kW i n jur de 25
MHz). Prin tubul central se introduce proba sub form de aerosol.
Pentru a pune n funciune tora se introduce un flux de argon ntre tuburile
concentrice. Apoi se iniiaz ionizarea argonului cu ajutorul unor scntei electrice.
Ionii i electronii rezultai vor interaciona cu cmpul magnetic oscilant (notat cu
H) produs de spirele de inducie. Plasma de argon conine muli electroni liberi, ea
este un conductor electric bun i va interaciona uor cu cmpul magnetic. Aceasta
va induce circulaia unor cureni electrici turbionari n plasma format, ceea ce va
avea ca rezultat creterea temperaturii. Transferul energetic ntre spirele de inducie
i plasm este asemntor cu transferul de energie dintr-un transformator electric,
cele dou spire de inducie corespunznd nfurrii primare iar curenii turbionari
din plasm corespunznd unei singure spire a secundarului.
Plasma format are aspectul unei flcri n partea superioar a tubului de
cuar. Deoarece temperatura acesteia este foarte ridicat, aprox. 9000 K, este
necesar ca ea s fie izolat de tubul de cuar. Aceasta se realizeaz printr-un curent
de argon care circul tangenial ntre tuburile concentrice (fig. 1.24) ceea ce
determin totodat o modificare a formei sferice a plasmei prin aplatizarea bazei
sale.
46
Fig. 1.24. Schema unei tore de plasm cuplat inductiv.
Io 1
D log log (1.22)
I T
47
n care:
I este intensitatea unui fascicul luminos incident produs de o surs (lumin
0
alb produs de un bec cu incandescen) iar I este intensitatea aceluiai fascicul
dup trecerea prin regiunea plcii pe care s-a nregistrat radiaia. Densitatea de
nnegrire se msoar cu ajutorul unor dispozitive optice numite microfotometre.
Produsul dintre intensitatea radiaiei ce determin formarea unei imagini
fotografice i timpul ct aceasta acioneaz se numete expunere, notat cu E:
E = It (1.23)
D log E g (1.24)
Domeniu de
Densitatea de nnegrire D
supraexpunere
Domeniu de
lucru
Domeniu de
subexpunere
log E
48
Fig. 1.26. Schema unui spectrograf cu prism.
Analiza calitativ
Se face pe baza faptului c radiaiile emise la anumite lungimi de und i
ansamblul de radiaii ce constituie spectrul sunt caracteristice pentru un anumit
element.
La utilizarea plcii fotografice drept detector de radiaii, spectrul nregistrat
este format dintr-o multitudine de linii, fiecrei linii corespunzndu-i o radiaie de
o anumit lungime de und, emis de un anumit element din proba de analizat.
Cea mai simpl metod de a face o analiz calitativ const n compararea
spectrului probei de analizat cu un spectru cunoscut, ambele nregistrate alturat,
pe o plac fotografic. Drept spectru fa de care se determin liniile elementelor
de analizat se folosete spectrul fierului, care este foarte bogat n linii i constituie
un bun etalon pentru lungimile de und.
Cu ajutorul unui dispozitiv optic numit spectroproiector se obine pe un ecran
imaginea mrit a spectrelor nregistrate. n continuare, cu ajutorul unor atlase n
care este figurat spectrul fierului i poziiile liniilor diferitelor elemente intercalate
49
ntre liniile fierului se pot atribui liniile spectrale ce apar n proba necunoscut.
O a doua metod de efectuare a unei analize calitative se bazeaz pe
determinarea exact a lungimilor de und ale radiaiilor emise de elementele din
proba de analizat. n acest scop se ntrebuineaz un microscop mobil cuplat cu o
scal micrometric (sau un microscop fix i o plac mobil cuplat cu un urub
micrometric) care permite observarea direct a spectrului probei i a spectrului
cunoscut. Acest instrument se numete microscop comparator. Lungimile de und
ale radiaiilor determinate astfel vor fi atribuite elementelor de analizat folosind
atlase de spectre.
Analiza semicantitativ
Permite determinarea ordinului de mrime al concentraiilor unor elemente.
La utilizarea plcii fotografice ca receptor de radiaii se poate face o analiz
semicantitativ prin compararea vizual a spectrului probei cu o serie de spectre
etalon, obinute de la probe sintetice de concentraie cunoscut i cu o compoziie
asemntoare cu a probei de analizat. Prezentm n continuare urmtoarele metode
de analiz semicantitativ:
- Metoda spectrelor de comparaie: se nregistreaz pe aceeai plac
fotografic mai multe spectre ale unor probe etalon alturi de spectrul probei de
analizat i se compar vizual. Concentraia unui element n proba necunoscut va fi
aproximativ egal cu concentraia unui element din etalon, pentru care liniile
elementului de analizat prezint nnegriri asemntoare.
- Metoda diluiei: se nregistreaz spectrul probei de analizat diluat cu praf
de grafit n raport cunoscut (de exemplu 1/10, 1/100, 1/1000) i se compar cu
spectrele obinute pentru anumite probe etalon.
- Metoda sectorului logaritmic: se nregistreaz spectrul probei n condiiile
n care un disc dintr-un material opac ce are marginea tiat dup o curb
logaritmic se rotete n faa fantei de intrare a spectrografului (fig. 1.27).
Deoarece densitatea de nnegrire a plcii fotografice este funcie logaritmic de
intensitatea radiaiei (relaiile (1.23) i (1.24)), liniile spectrale vor aprea n acest
caz sub forma unor pene a cror nlime va fi proporional cu concentraia
elementului de analizat. Comparnd nlimea liniilor spectrale astfel nregistrate
pentru un etalon i proba de analizat, se poate evalua semicantitativ concentraia n
proba necunoscut.
50
Fig. 1.27. Sectorul logaritmic (a), i aspectul unei linii nregistrate pentru
diferite concentraii (b).
unde I este intensitatea radiaiei emise, c este concentraia elementului care emite
radiaiile, a este un factor legat de natura elementului i condiiile de excitare iar b
este un factor datorat autoabsorbiei liniei spectrale (b < 1). Cu ct autoabsorbia
unei linii spectrale este mai mare cu att b ia valori mai mici. Autoabsorbia unei
linii spectrale crete cu concentraia elementului din vaporii atomici care emit linia
spectral respectiv.
Deoarece intensitatea radiaiilor emise este funcie de o serie de parametri ai
surselor de excitare, greu de reprodus i de controlat, intensitatea unei linii
spectrale se msoar fa de intensitatea liniei unui element numit standard sau
etalon intern, coninut de proba de analizat. Condiiile de excitare fiind aceleai
pentru ambele elemente, ele nu vor influena valoarea raportului ntre intensitile
celor dou linii.
Elementul de analizat ales drept standard intern trebuie s ndeplineasc o
serie de condiii. Astfel, este necesar s fie n concentraie constant (de obicei
mare) att n etaloane, ce conin cantiti cunoscute din elementul de analizat, ct i
n probele de analizat. Linia standardului intern trebuie s fie n vecintatea celei a
elementului de analizat, pentru a evita erorile ce pot aprea datorit variaiei
sensibilitii detectorului n funcie de lungimea de und. Standardul intern trebuie
s aib volatilitate i condiii de excitare ct mai apropiate de ale elementului de
analizat.
Raportul dintre intensitatea unei radiaii emise la o anumit lungime de und
51
de ctre elementul de analizat, Ix, i a radiaiei emise de standardul intern, Ist, va fi
dat de relaia:
b
Ix axcx x
= b
(1.26)
I st a st c st st
Ix
log bx log cx k (1.27)
I st
unde k = log A bst log cst
Relaia (1.27) ne arat c ntre log Ix/Ist i log cx este o dependen liniar.
Lucrnd cu probe etalon ce au concentraii cunoscute n elementul de analizat, vom
putea trasa un grafic de calibrare reprezentnd log Ix/Ist funcie de log cx pe baza
cruia vom putea determina concentraiile elementului de analizat din probe
necunoscute.
La utilizarea sistemelor de detecie fotoelectrice, radiaiile emise la anumite
lungimi de und de elementul de analizat i standardul intern sunt convertite n
curent electric care ncarc un circuit de integrare format dintr-un condensator i o
rezisten. Tensiunea la care ajunge condensatorul dup un anumit timp (sau
cantitatea de electricitate nmagazinat) va fi funcie de intensitatea radiaiei.
n cazul spectrometrelor performante, prin aceast metod se msoar
simultan intensitile corespunztoare radiaiilor emise de un mare numr de
elemente. Aceste intensiti sunt apoi convertite n concentraii pe baza unor curbe
de etalonare de ctre un calculator, rezultatul fiind dat ntr-un timp foarte scurt.
Precizia determinrilor este bun, eroarea relativ fiind de ordinul 0,5%.
La utilizarea plcii fotografice ca receptor de radiaii, se msoar densitatea
de nnegrire D a liniilor spectrale cu ajutorul microfotometrelor. Dac ne vom
plasa pe domeniul liniar al curbei caracteristice de nnegrire a plcii fotografice
(fig. 1.25) vom putea scrie:
Dx log Ex g (1.28)
Ex
Dx Dst D log (1.30)
Est
52
Ix
D Dx Dst log (1.31)
I st
D
bx log cx k (1.32)
53
n fig. 1.28 se prezint schemele unor arztoare bazate pe cele dou
modaliti de lucru; n tabelul 1.3 se prezint civa dintre carburanii i
comburanii folosii pentru obinerea flcrilor utilizate n spectrometrie i
temperaturile acestora.
Prob netransfor-
mat n aerosol
Prob
Prob
54
[M+X-]solid [M+X-]lichid (topire)
[M+X-]lichid [M+X-]gaz (vaporizare)
+ - o o
[M X ]gaz M gaz + X gaz (disociere)
Procesele care pot avea loc pentru atomii Mo n faza gazoas sunt:
Mo + h Mo* (absorbie)
Mo + energie M+ + e (ionizare)
Mo + Oo MO (oxidare)
Mo* Mo + h (emisie)
Mo + Yo MY (combinare)
55
Spectrele de absorbie atomic sunt mai simple dect cele de emisie, iar
aceasta face ca i interferenele spectrale s fie mai reduse.
Absorbia de fond apare n spectrometria de absorbie atomic, drept urmare
a absorbiei moleculare i a difuziei radiaiei de ctre particulele solide
nevaporizate prezente n flacr, care provin din proba de analizat.
Absorbia molecular se datoreaz unor compui ce constituie matricea
chimic a probei i care sunt vaporizai mpreun cu elementul de analizat. O parte
din radiaia dat de lampa cu catod cavitar va fi absorbit nespecific de aceti
compui.
Se poate face o corecie a absorbiei de fond i datorit difuziei radiaiei
msurnd semnalul total de absorbie i scznd din el valoarea care nu se
datoreaz absorbiei de ctre atomi. Aceasta este posibil deoarece atomii absorb
radiaii ce corespund unor benzi spectrale mult mai nguste dect benzile de
absorbie molecular. De asemenea, difuzia radiaiei este practic constant pentru
radiaii din benzi spectrale mult mai largi dect cele pe care le absorb atomii.
Rezult deci c la lungimi de und apropiate de cele absorbite de atomi, absorbia
radiaiei de ctre acetia va fi practic zero, n timp ce scderea intensitii radiaiei
datorit absorbiei moleculare sau difuziei va fi aceeai cu cea de la lungimea de
und absorbit de atomi.
n spectrometria de emisie atomic poate aprea o radiaie de fond ce
nsoete radiaia emis de atomii de analizat. Radiaia de fond se poate datora
flcrii sau celorlali componeni ai probei de analizat. Pentru a determina
intensitatea radiaiei emise numai de atomii de analizat, din intensitatea total
emis la o lungime de und de o specie atomic se scade valoarea fondului msurat
n apropierea liniei spectrale respective.
Efecte de ionizare. n flacr poate s aib loc i o ionizare a atomilor unor
elemente. Metalele alcaline sunt n mod deosebit ionizate. Ionizarea reduce
populaia de atomi neutri aflai att n stare fundamental ct i n stare excitat i
deci va reduce sensibilitatea determinrilor.
Pentru a reduce ionizarea atomilor n flacr se adaug probelor un exces de
element uor ionizabil, ca de exemplu potasiu sau cesiu.
Interferene datorit vaporizrii. O serie de fosfai, silicai i aluminai ai
unor elemente sunt termic stabili. Pentru a aduce la stare de vapori atomici
elementul respectiv trebuie utilizate flcri suficient de calde, de exemplu o flacr
protoxid de azot/acetilen. Variaii ale temperaturii flcrii vor determina deplasri
ale echilibrului de disociere. Aceasta duce la o variaie a populaiei de atomi i a
sensibilitii att n cazul spectrometriei de emisie, ct i de absorbie atomic.
Metale ca: aluminiul, titanul i lantanul formeaz oxizi refractari care sunt foarte
stabili. Pentru a obine o populaie de atomi suficient de mare n cazul acestor
elemente este necesar s lucrm n flcri calde n exces de carburant, cu scopul de
a crea o atmosfer reductoare. Pentru a reduce interferenele datorit vaporizrii,
la probele de analizat se adaug elemente care se pot combina uor cu anionii ce
formeaz compui puin volatili.
56
Dezavantajele atomizrii i excitrii n flacr
Flacra ca sistem de atomizare i excitare prezint unele dezavantaje pe care
le prezentm n continuare:
La utilizarea unui arztor pentru care gazele sunt preamestecate nainte de a
ajunge n flacr, numai o mic parte din proba de analizat (aproximativ 10%)
ajunge n flacr sub form de aerosol, restul de prob separndu-se sub form
lichid.
Timpul n care atomii se gsesc efectiv n drumul optic al spectrometrului
este deosebit de scurt (aproximativ 10-3 s), depinznd de viteza gazelor n flacr.
Are loc o diluare a vaporilor atomici formai, de ctre gazele transportoare.
Instabilitatea flcrii duce la un zgomot de fond destul de mare ce limiteaz
determinarea elementelor la concentraii mici.
n flacr se formeaz radicali liberi care se pot combina cu atomii, reducnd
numrul acestora.
57
1.4.3. Analiza cantitativ
n condiii de echilibru termic, raportul ntre numrul de atomi aflai n stare
excitat, N*, i numrul de atomi aflai n stare fundamental, No, este dat de
relaia:
E
N * g * kT
e (1.33)
No go
unde:
g* i go sunt ponderile statistice ale nivelurilor respective, E, diferena de
energie ntre cele dou stri, k, constanta lui Boltzmann i T, temperatura absolut.
n tabelul 1.4 se dau valorile unor raporturi N*/No pentru liniile de rezonan
ale unor elemente:
Tabelul 1.4. Valorile N*/No pentru liniile de rezonan ale unor elemente
58
Fig. 1.30. Aspectul unei curbe de calibrare obinute n spectrometria de emisie
atomic.
I I o e k l (1.34)
60
Fig. 1.31. Profilul de absorbie al unei linii spectrale.
e
2
k d = mc N f (1.35)
unde N este numrul de atomi pe cm3 care pot absorbi n domeniul de frecven
corespunztor liniei spectrale, f este tria oscilatorului (numrul mediu de
electroni pe atom ce pot fi excitai de radiaia incident), e este sarcina unui
electron, c este viteza luminii i m masa unui electron.
Limea natural a unei linii spectrale este de ordinul 10-5 nm. n realitate
limea unei linii spectrale de absorbie a atomilor aflai ntr-o flacr sau alt sistem
de atomizare este mai mare, ajungnd la 0,01-0,001 nm. Lirea liniei apare
datorit autoabsorbiei, efectului Doppler i proceselor de coliziune, lire Lorentz
(capitolul 1.1.2).
n majoritatea cazurilor, cel mai important factor ce contribuie la lirea
liniilor spectrale se datoreaz ciocnirii atomilor de analizat cu atomii gazelor
strine.
Spre deosebire de linia de absorbie a atomilor ntr-o surs de atomizare, care
funcioneaz la presiunea atmosferic, linia de emisie a unei lmpi cu catod cavitar
este mult mai ngust, presiunea n interiorul acesteia fiind de ordinul 1 torr i deci
numrul de ciocniri este mult mai redus.
n fig. 1.32 se prezint, pentru acelai element, profilul unei linii de absorbie
n flacr i respectiv al unei linii de emisie provenite de la o lamp cu catod
cavitar:
61
Fig. 1.32. Profilul unei linii de
absorbie (1) n flacr i al unei
linii de emisie (2) de la o lamp cu
catod cavitar.
k o KN (1.36)
deci absorbana:
I o o KN l
A log K' c (1.37)
I o log 10
62
1.5.2. Principiul aparaturii
n fig. 1.33 este prezentat schema bloc i principiul de funcionare al unui
spectrometru de absorbie atomic. Pentru simplificarea reprezentrii s-a
considerat c linia de emisie a lmpii cu catod cavitar i linia de absorbie a
radiaiei de ctre atomi au aceeai lime a benzii spectrale.
Prin msurarea intensitii radiaiei transmise I = (1 x)Io, se poate
determina absorbana ce are valoarea A =log Io/I i este proporional cu
concentraia speciei atomice n sistemul de atomizare (relaia (1.37)).
Cel mai utilizat sistem de atomizare este flacra, fiind uor de folosit. Acest
sistem de atomizare precum i interferenele care pot aprea la utilizarea lui au fost
discutate n cadrul cap. 1.4.1. Pentru evitarea unora dintre deficienele flcrilor ca
sisteme de atomizare, s-au propus sistemele de atomizare electrotermice. Dintre
acestea menionm cuptoarele de grafit tip Lvov i Massmann i filamentul de
crbune tip West.
La utilizarea unui sistem de atomizare electrotermic toi atomii de analizat
dintr-o prob sunt transformai n vapori atomici practic n acelai timp i rmn n
sistemul de atomizare putndu-se msura absorbia de ctre acetia a radiaiei date
de ctre lampa cu catod cavitar. Din acest motiv, sensibilitatea determinrilor este
mare (10-8 10-11 g). Pentru efectuarea unei determinri sunt necesare probe
lichide cu volum foarte mic (5-10 L) sau se pot analiza chiar probe solide.
63
Efectele de matrice sunt ns mai importante dect n flacr, iar eroarea relativ a
determinrilor este de 5-10% (mai mare dect n flacr).
Cel mai utilizat sistem de atomizare electrotermic este cuptorul de tip
Massmann, prezentat n fig. 1.34.
64
n prima etap, proba este nclzit la 110-125 oC, timp de 20-30 s pentru
evaporarea solventului i a componentelor mai volatile ale matricei.
n etapa a doua, temperatura este mrit, avnd loc volatilizarea unor
compui i piroliza componenilor ce constituie matricea probei, ca de exemplu,
compuii organici.
n etapa a treia, proba este nclzit la temperaturi nalte (2000-3000 oC),
cnd are loc transformarea n vapori atomici a elementului de analizat. n aceast
etap se nregistreaz absorbia radiaiei emise de lampa cu catod cavitar de ctre
vaporii atomici, n funcie de timp.
Durata total a atomizrii este de ordinul 4-8 s. Semnalul nregistrat este sub
forma unui maxim de absorbie a crui nlime (sau suprafa pentru determinri
mai precise) este proporional cu cantitatea din elementul de analizat.
Limita de detecie pentru absorbia atomic fr flacr este cu 2-3 ordine de
mrime mai cobort (deci concentraiile determinate sunt mai mici) dect pentru
absorbia atomic n flacr, atomii volatilizai rmnnd un timp mult mai lung n
drumul optic al radiaiei provenite de la lampa cu catod cavitar.
65
Aceasta determin existena unei absorbii de fond.
Legea Lambert-Beer este respectat pentru o radiaie cu o band spectral
foarte ngust practic monocromatic, dac ns monocromatorul nu separ o
radiaie practic monocromatic, va rezulta o curb de calibrare nelinear (curbele B
i D). Radiaia poate fi nemonocromatic datorit faptului c prin monocromator
trec mai multe linii cu coeficieni de absorbie diferii (multiplei nerezolvai sau
linii care nu sunt absorbite). De asemenea, se obine o curb de calibrare de tip D
atunci cnd limea liniei de emisie este egal sau mai mare dect a liniei de
absorbie (aceasta datorit variaiei lui k cu frecvena.
Procesele de ionizare n sursa de atomizare determin o curbare a dreptei de
calibrare spre axa absorbanelor (curba C). Aceasta deoarece ionizarea atomilor
crete la concentraii mici i descrete la concentraii mari.
Interferenele care pot avea loc la atomizarea probelor n flacr au fost
discutate n capitolul 1.4.1. Din cauza limii reduse a liniilor atomice de absorbie
ale elementelor, numai n puine cazuri apare o suprapunere a acestora.
Interferenele datorit blocrii atomilor de analizat n compui care nu sunt
volatilizai i descompui n atomi (interferene chimice) i interferenele datorit
ionizrii pot fi eliminate prin introducerea n proba de analizat a unui element ce se
combin cu specia ce formeaz compusul greu disociabil i/sau a unui element
uor ionizabil.
Prin absorbie atomic se pot determina aproximativ 60 elemente.
Sensibilitatea i limita de detecie
Prin sensibilitate n cazul acestei metode de analiz se nelege concentraia
unui element n g/mL (sau ppm) care produce un semnal cu valoarea de 99% n
transmitan, deci o scdere a transmitanei cu 1% (la care corespunde o valoare a
absorbanei de 0,0044, A = log (1/0.99)).
Limita de detecie se definete drept concentraia elementului care produce
un semnal de dou ori (sau de trei ori) mai mare dect deviaia standard a
zgomotului de fond al aparatului. Limita de detecie este mai cobort dect
sensibilitatea, dar la aceste concentraii nu se pot face determinri cantitative.
n tabelul 1.5 se prezint sensibilitatea determinrii unor elemente prin
absorbie atomic n flacr i cu atomizare electrotermic.
Valorile prezentate n tabelul 1.5 nu trebuie luate n mod absolut, ele
depinznd de o serie de factori cum ar fi limea benzii spectrale a
monocromatorului, temperatura sursei de atomizare, sensibilitatea detectorului
aparatului etc.
La utilizarea cuptorului de grafit drept sistem de atomizare, att sensibilitatea
ct i limita de detecie sunt n general cu aproximativ dou-trei ordine de mrime
mai coborte (deci sensibilitatea determinrilor este mai mare) dect la utilizarea
flcrii.
66
Tabelul 1.5. Sensibilitatea determinrii unor elemente prin absorbie atomic
n flacr i cu atomizare electrotermic
67
atomului (capitolul 1.1.3.2). Pe baza poziiei acestor discontinuiti se poate face
analiza calitativ. Prin msurarea coeficientului de absorbie de mas se poate face
analiza cantitativ.
Spectrele de emisie i absorbie a razelor X pentru un anumit element sunt
mult mai simple dect cele de emisie i absorbie n domeniul vizibil i ultraviolet.
Aceasta deoarece spectrele de raze X apar n urma unor tranziii ntre stri
energetice ale electronilor din straturile interne ale atomului, numrul de electroni,
de stri energetice i de tranziii permise fiind mai redus pentru aceste straturi.
Cea de a treia categorie de metode se bazeaz pe difracia razelor X de ctre
planurile de atomi ale unor cristale. Aceast metod se utilizeaz n special pentru
analize de structur i pentru determinarea fazelor cristaline, dar poate fi utilizat i
pentru determinri cantitative. Difracia razelor X nu aparine metodelor
spectrometrice de analiz i va fi discutat ntr-un capitol separat.
fascicul de electroni
68
Fig. 1.37. Spectrul emis de un tub de raze X.
n 2d sin (1.38)
unde:
69
d este distana dintre planurile cristalului, este unghiul de inciden iar n este un
numr ntreg reprezentnd ordinul de difracie.
Din fig. 1.38 se vede c radiaia reflectat de ctre al doilea plan al cristalului
analizor parcurge o distan CBD n plus fa de radiaia reflectat de primul plan.
Unghiurile CAB i BAD sunt egale cu . Deci CB BD AB sin , iar AB
este distana interplanar d. CBD 2d sin va trebui s fie un multiplu ntreg
al lungimii de und a razelor X reflectate pentru ca acestea s fie n faz i s
interfere constructiv. Radiaiile cu alte lungimi de und vor suferi o interferen
distructiv.
Unghiul ntre prelungirea direciei fasciculului incident i a celui reflectat este
de 2. Pentru a separa razele X emise de prob n funcie de lungimea de und,
cristalul analizor este montat pe un gonimetru (instrument ce msoar unghiuri) i
este rotit aa cum se prezint n fig. 1.40. n tabelul 1.6 se prezint mai multe
cristale analizoare i caracteristicile acestora.
70
Grafit pirolitic 0,671 1,296 0,0936
Mic 0,996 1,925 0,139
Palmitat de 4,560 7,830 0,639
plumb
71
Fig. 1.39. Schema unei microsonde electronice.
72
Fig. 1.40. Schema unui spectrometru de fluorescen de raze X.
73
1.7. METODE SPECTROMETRICE DE ABSORBIE
MOLECULAR N DOMENIUL VIZIBIL I
ULTRAVIOLET
dI = kIdl (1.39)
dI
= kdl (1.40)
I
It 1
dI
I0
I
k dl
0
(1.41)
obinem:
74
I0
ln kl sau I t I 0e kl (1.42)
It
I0 I
2,303 log kl sau log 0 k ' l (1.43)
It It
k' ac (1.44)
I0
log acl (1.45)
I
care este expresia legii Lambert-Beer. Dac grosimea probei este exprimat n cm
i concentraia n grame de substan pe litru de soluie, constanta a este numit
absorbtivitate specific i se exprim n L g-1cm-1. Frecvent c se exprim n moli/L
iar l n cm, n aceste condiii constanta a se noteaz cu , care se numete
absorbtivitate molar sau coeficient molar de absorbie. Ecuaia (1.45) devine:
75
I0
log cl A (1.46)
I
I0
log T log cl A (1.47)
I
76
Sisteme multicomponente
Pentru sisteme cu mai multe componente absorbante se poate considera c, n
procesul de absorbie, acestea acioneaz independent una de alta i absorbanele
lor sunt aditive. O asemenea situaie este prezentat n fig. 1.44:
77
speciei de analizat trebuie s fie mai mic de 10-2M.
Abaterile instrumentale se datoreaz n primul rnd faptului c nu se
utilizeaz o radiaie strict monocromatic pentru efectuarea msurtorilor, aa cum
s-a avut n vedere la deducerea legii Lambert-Beer. Este practic imposibil de a
separa o radiaie perfect monocromatic dintr-o surs continu. Se obine o band a
crei lime depinde de elementul dispersiv i de limea fantelor.
Cu excepia cazului cnd absorbtivitatea molar este aceeai pentru diferitele
lungimi de und din cadrul benzii spectrale utilizate, absorbana msurat ar trebui
s fie o medie a absorbanelor din cadrul benzii spectrale. Datorit ns naturii
logaritmice a absorbanei, aceasta nu este o adevrat medie. Vor aprea erori
atunci cnd absorbtivitile molare variaz semnificativ pentru radiaiile de diferite
lungimi de und din cadrul benzii spectrale, deci atunci cnd determinrile nu se
fac la un maxim de absorbie ci pe poriunea nclinat a curbei de absorbie (fig.
1.45).
c/2
Fig. 1.45. Efectul utilizrii unei benzi spectrale. (a) Un component la dou
concentraii, (b) Curb de calibrare liniar la 1 ,(c) Curb de calibrare
nelinear la 2
Este de dorit s lucrm cu benzi spectrale nguste pentru exactitate mare, dar
pe msur ce banda se ngusteaz, la detector ajunge o energie din ce n ce mai
redus, ceea ce face mai dificile determinrile. Abaterile de la legea Lambert-Beer
sunt mai mari pentru benzi spectrale largi dect pentru benzi spectrale nguste.
Alte cauze de natur instrumental ce determin abateri de la legea Lambert-
Beer includ: 1) variaia n sensibilitatea detectorului; 2) variaia n timp a
intensitii radiaiei emise de surs; 3) radiaia parazit a aparatului care ajunge la
detector.
Celulele n care se fac determinrile de absorban trebuie s fie perfect
78
calibrate i foarte curate, de asemenea, soluiile utilizate nu trebuie s conin
suspensii, care ar conduce la scderea intensitii fasciculului incident prin difuzia
radiaiei.
Abateri chimice. Sunt determinate de deplasarea unui echilibru chimic n
care sunt implicate speciile absorbante.
S considerm cazul unui acid slab HA care, n soluie apoas poate disocia.
Absorbana soluiei la o anumit lungime de und va fi dat de relaia:
A HA 1 cl A cl
c este egal cu [HA] + [A-], A- HA, iar este gradul de disociere. La diluarea
soluiei acidului respectiv, va varia, fiind funcie de concentraie, ceea ce face s
nu fie o dependen liniar ntre absorban i concentraie, deci s nu se respecte
legea Lambert-Beer.
O soluie apoas de bicromat ne ofer un alt exemplu de nerespectare a legii
Lambert-Beer. n acest sistem sunt prezente speciile CrO -, HCrO -, Cr O - care,
2 2
4 4 2 7
toate absorb radiaii, avnd ns absorbtiviti molare diferite la o anumit lungime
de und. Concentraia relativ a celor trei specii depinde de concentraia total a
Cr(VI) i de pH. n soluie sunt prezente echilibrele:
-
2CrO42- + 2H3O+ 2HCrO4 + 2H2O Cr2O72- + 3H2O
79
radiaiilor incidente i transmise sunt foarte apropiate, din acest motiv va fi o
eroare relativ mare n determinarea absorbanei pe care instrumentul o determin
ca logaritmul raportului celor dou intensiti (relaia 1.46)). Pe de alt parte, la
valori mari ale absorbanei, intensitatea radiaiei ce ajunge la detector este prea
mic pentru a putea fi msurat exact.
Pentru instrumentele moderne, factorul principal care limiteaz precizia
determinrilor cantitative este zgomotul de fond al aparatului, aceasta chiar n
condiiile unui mod de operare foarte atent. Zgomotul de fond reprezentnd de fapt
fluctuaiile aleatoare ale semnalului ce ajunge la detector i ale rspunsului
detectorului.
S discutm influena zgomotului de fond al rspunsului detectorului asupra
preciziei determinrilor. Zgomotul de fond al rspunsului detectorului poate fi
independent de intensitatea radiaiei ce ajunge la el, cum este cazul detectorilor
termici (termocuple, bolometre, celule pneumatice Golay) sau s fie proporional
cu rdcina ptrat a intensitii radiaiei ce ajunge la el, cum este n cazul
detectorilor fotoemisivi (fotocelule, tuburi fotomultiplicatoare).
S considerm cazul n care zgomotul de fond n rspunsul detectorului este
independent de intensitatea radiaiei ce ajunge la el. Eroarea relativ n
determinarea unei concentraii c, este c/c, unde c reprezint eroarea absolut i
va fi determinat de fluctuaiile n rspunsul detectorului. Din legea Lambert-Beer
obinem:
1 I
c log o (1.49)
l I
1 dI
dc (1.50)
2,3l I
sau:
c I
(1.51)
c 2,3 AI
1 2
d c I d I I I I
I log 0 I log 0 log 0 0,4343 0 (1.52)
dI c 2,3 dI I 2,3 I I
80
Aceast condiie va fi satisfcut dac:
Io
A = lg = 0,4343
I
I 1
respectiv: T= = = 0,3679 = 36,8%
Io e
1
c k 2 I
1
I log 0 (1.53)
c
2,3 I
Difereniind:
2
d c k d 2 I0 1 2
0
1 1 1
I0
I log I log I 2 0,4343I 1 (1.54)
dI c 2,3 dI I 2 I
I0
A log 2 0,4343 0,8686
I
I
T 0,135 13,5%
I0
81
Fig. 1.46. Eroarea relativ, c/c, n procente, n funcie de absorban, pentru care
eroarea n evaluarea transmitanei este constant, de 1% ([21] p. 74.
Din fig. 1.46 se poate vedea c domeniul de absorbane pentru care eroarea
relativ n determinarea concentraiei este mic este mult mai larg n cazul
detectorilor fotoemisivi fa de cei termici.
82
n *.
Termenii uzuali folosii la discutarea spectrelor electronice sunt: cromofor,
auxocrom; efecte: batocromic, hipsocromic, hipercromic i hipocromic.
Cromoforii sunt grupri de atomi care absorb radiaii din ultravioletul
apropiat, > 200 nm sau din domeniul vizibil, atunci cnd ei sunt legai de un
schelet neabsorbant saturat care nu posed electroni neparticipani (de exemplu un
lan de hidrocarbur). Cei mai muli cromofori au legturi duble sau triple.
Auxocromii sunt grupri de atomi, ca de exemplu -OH, -NH2, -Cl etc., care
au electroni de valen de nelegtur (neparticipani) i care nu absorb radiaii la
> 200 nm (prezint ns absorban intens n UV ndeprtat, prin tranziii
n *).
Atunci cnd un auxocrom este ataat la un cromofor, banda de absorbie a
cromoforului se deplaseaz de obicei la lungimi de und mai mari (efect
batocromic) i are loc o intensificare a absorbiei, efect hipercromic (crete
valoarea absorbtivitii molare , la max).
Efectul auxocromic este determinat aparent de interacia electronilor de
nelegtur, electroni liberi de valen, cu norul de electroni delocalizai, ca
urmare stabilizndu-se starea excitat *.
Efectul hipsocromic const n deplasarea benzilor de absorbie la lungimi de
und mai mici, iar efectul hipocromic n micorarea absorbiei radiaiei (micorarea
lui , la o anumit lungime de und).
n tabelul 1.7 se prezint maximele de absorbie pentru unii cromofori.
Benzile de absorbie mai intense corespund unor tranziii cu probabilitate mai
mare, *, iar benzile de intensitate mai mic sunt datorare unor tranziii cu
probabilitate mai redus.
Moleculele cu doi sau mai muli cromofori izolai, de acelai tip, separai
prin mai multe legturi simple, vor absorbi radiaia practic la aceeai lungime de
und ca i moleculele cu un singur cromofor. Intensitatea absorbiei va fi ns
proporional cu numrul cromoforilor.
Cnd doi cromofori sunt separai printr-o legtur simpl, apare conjugarea
electronilor, ceea ce duce la o schimbare important a spectrului de absorbie.
83
Tabelul 1.7. Benzi caracteristice pentru unii cromofori comuni
Cromofor Tipul de Exemplu Solvent Benzi de absorbie
compus
max (nm) max (L mol-1cm-1)
0 1 2 3 4 5
R
Carbonil C=O Aceton Hexan 189 900
R
O
Carbonil 180 10000
RC Acetaldehid Hexan
(aldehid) 290 17
H
O
Carboxil RC Acid acetic Etanol 95% 208 32
OH
O
Amido RC Acetamid Ap 220 63
NH2
84
spectrul de absorbie al trans--carotenului sunt prezentate n fig. 1.47.
85
intensitate redus.
Fig. 1.49. Spectrele de absorbie ale legturii peptidice n poli L-lizin pentru
diferite conformaii: A) lanul peptidic distribuit ntmpltor, B) structur ,
C) -elice.
NH
86
biochimie.
87
Fig. 1.52. Spectrul de absorbie al complexului format de cupru cu proteine
(reacia biuretului).
88
Multe reacii enzimatice pot fi urmrite pe baza unor determinri de
absorban, acestea vor fi ns discutate la capitolul de metode enzimatice de
analiz.
Metodele spectrometrice n vizibil i UV i gsesc largi aplicaii i la studiul
unor echilibre de extracie sau de complexare ale unor ioni metalici cu o
multitudine de reactivi.
A+TC
89
Fig. 1.54. Curbe de titrare spectrometric pentru reacia A + T C. (a) absoarbe
numai A; (b) absoarbe numai T; (c) absoarbe numai C; (d) A nu absoarbe dar
absorbtivitatea molar a lui C este mai mare dect a lui T; (e) A nu absoarbe dar
absorbtivitatea molar a lui T este mai mare dect cea a lui C; (f) C nu absoarbe
dar absorbtivitatea molar a lui T este aproximativ aceeai cu cea a lui A.
Pentru a obine corect cele dou segmente de dreapt dintr-o curb de titrare,
este necesar ca legea Lambert-Beer s se respecte. Pentru exactitatea mai mare a
determinrilor se poate face o corecie a absorbanei msurate, innd seama de
diluarea probei n cursul procesului de titrare.
90
Metodele fluorimetrice de analiz sunt utilizate mai mult n practic dect
cele fosforimetrice, necesitnd o aparatur mai simpl.
Ie = Ia (1.55)
I a I 0 1 10cl (1.56)
I a I o 2,303cl
2,303cl
2
2,303cl
3
...
2,303cl
n
(1.57)
2! 3! n!
Pentru soluii foarte diluate i pentru care termenul cl este mai mic de 0,05
(n cazul fluorescenei) sau 0,01 (n cazul fosforescenei) putem scrie:
Deoarece termenii superiori pot fi neglijai, avnd valori foarte mici, valoarea
lui Ie va fi dat de relaia:
91
(pentru a nu ajunge la detector i radiaia excitatoare mult mai intens dect cea de
fluorescen).
Valabilitatea relaiei (1.59) se pstreaz, dar l trebuie nlocuit cu l' ce
reprezint grosimea stratului de soluie n direcia detectorului de radiaii.
Relaia (1.59) ne indic faptul c pentru concentraii mici, intensitatea
radiaiei de fluorescen este direct proporional cu concentraia substanei de
analizat. Deoarece valoarea intensitii radiaiei provenite de la surs, Io, se poate
modifica n timp, intensitatea radiaiei de fluorescen nu este msurat n mod
absolut, ci relativ. Determinrile se fac fa de un standard de fluorescen de
concentraie cunoscut. Curba de calibrare se construiete reprezentnd
fluorescena relativ funcie de concentraie.
Relaia (1.59) este valabil pentru concentraii mici, pn la cteva pri per
milion, depinznd de substana analizat. La concentraii mai mari, intensitatea
radiaiei de fluorescen descrete cu creterea concentraiei.
92
Pentru majoritatea aparatelor msurarea radiaiei de fluorescen se face la un
unghi de 90o fa de direcia radiaiei excitatoare, n aceste condiii obinndu-se
cel mai redus fond dat de radiaia excitatoare.
Un fosforimetru este asemntor cu un fluorimetru ns are n plus un
dispozitiv optic care permite alternativ excitarea probei la anumite intervale de
timp, excitri urmate de msurarea radiaiei de fosforescen. Pentru efectuarea
determinrilor, proba de analizat este rcit frecvent la temperatura azotului lichid.
93
1.8.4. Analiza cantitativ
Metodele fluorimetrice i gsesc aplicaii deosebite n analiza biochimic, n
cercetri biomedicale i pentru analizele chimice obinuite ale unor probe de
origine biologic. Aceste metode prezint avantajul c pot fi aplicate frecvent fr
o separare prealabil a compuilor analizai din matricea n care se gsesc (separare
care poate fi destul de dificil).
De asemenea, metodele fluorimetrice pot fi utilizate cu rezultate foarte bune
pentru cercetarea proceselor celulare la nivel molecular ca i n studiul compuilor
activi biologic, ca acizii nucleici sau n studiul structurii i funciilor proteinelor.
Un mare numr de compui de interes biochimic pot fi determinai
fluorimetric, cum ar fi: aminoacizi, vitamine, steroizi, clorofile, medicamente,
droguri etc. Metoda se aplic i la determinarea unor insecticide, poluani i a altor
compui organici.
Unii compui prezint o fluorescen proprie i pot fi determinai direct, alii,
care nu prezint fluorescen, pot fi transformai folosind reactivi adecvai, n
compui fluoresceni. n acest mod pot fi analizai numeroi ioni metalici pe baza
unor compui fluoresceni pe care i formeaz.
Aminoacizi ca: fenilalanina, tirozina i triptofanul prezint fluorescen
proprie ce permite determinarea lor direct. n fig. 1.56 se prezint spectrele de
absorbie, de fluorescen i fosforescen ale triptofanului.
Unele vitamine, ca de exemplu vitamina A, pot fi determinate fluorimetric
direct, la concentraii de ordinul ppm i fraciuni de ppm.
94
Alte vitamine, ca de exemplu vitamina A i riboflavina, ce nu prezint
fluorescen proprie, pot fi convertite la fluorofori (compui ce prezint
fluorescen intens) printr-o reacie simpl, ceea ce permite determinarea lor cu o
mai mare sensibilitate. Astfel,
95
fluorescen. Porfirinele sunt excitate n vizibil i emit radiaii de fluorescen la
lungimi de und mari ale spectrului vizibil i n IR. Din cadrul porfirinelor naturale
fac parte hemoglobina, mioglobina, citocromii, clorofilele precum i ali pigmeni.
Fluorescena a fost folosit cu rezultate foarte bune pentru determinarea
mecanismului fotosintezei, deoarece diferitele clorofile: a, b, c, d etc.,
protoclorofila i ali produi implicai n fotosintez sunt fluoresceni la anumite
lungimi de und.
Metodele fluorimetrice sunt aplicate la analiza unor medicamente sau droguri
(tabelul 1.8).
Datorit sensibilitii i specificitii, metodele fluorimetrice i gsesc largi
aplicaii n enzimologie. Pentru determinarea activitii unei enzime, se msoar
fluorimetric viteza reaciei catalizate de aceasta. De exemplu, NADH i NADPH,
formele reduse ale nicotinamidadenin dinucleotidului (NAD+) i
+
nicotinamidadenin dinucleotidfosfatului (NADP ), au o fluorescen intens.
Astfel, toate reaciile depinznd de NAD+ i NADP+ implicate n analiza
enzimatic pot fi studiate fluorimetric. Sensibilitatea este ns cu dou-trei ordine
de mrime mai mare dect n cazul metodelor de analiz bazate pe absorbia
radiaiei.
96
dehidrogenarea hidroxicompuilor n prezena unui acceptor de hidrogen, pot fi
determinate fluorimetric. Se msoar viteza iniial de formare sau de
descompunere a NADH i aceasta este corelat cu concentraia dehidrogenazei,
substratului sau coenzimei.
De exemplu, lactatul este transformat n piruvat la pH = 9 de ctre lactat
+
dehidrogenaza (LDH) n prezen de NAD . Reacia invers se efectueaz la
pH = 7.
LDH
+ +
L-lactat + NAD piruvat + NADH + H
97
Tabelul 1.9. Metode fluorimetrice pentru determinarea unor elemente.
Elementul Reactiv Sensibilitate (ppm)
Al Saliciliden-o-aminofenol 0,0003
Au Rodamin B 0,02
B Dibenzoil metan 0,0005
Ca Calcein 0,20
Cr Triazinilstilbexon 0,004
Mg 8-hidroxichinolin 0,01
Mo Acid carminic 0,9
Zn 2,2'-metilen 0,002
dibenzotiazol
98
fotochimice.
Metodele fluorimetrice nu sunt indicate pentru determinarea unor
constitueni majori ai probelor, deoarece la concentraii mari exactitatea este destul
de redus. Frecvent poate s apar fenomenul de stingere a fluorescenei, datorit
temperaturii, oxigenului dizolvat, prezenei unor impuriti etc.
99
absorbie datorate numai vibraiei legturilor C-C i C-F. El poate fi utilizat cu
bune rezultate pentru obinerea ferestrelor, dac proba nu are benzi de absorbie n
zonele n care absoarbe acesta. Pentru ~ < 600 cm-1 se poate utiliza o celul de
polietilen. n tabelul 1.9 se prezint domeniile de lungimi de und n care diverse
materiale sunt transparente n IR:
100
0,005-5 mm cu ajutorul unui urub micrometric.
Probelor solide li se poate trasa spectrul fie dup dizolvare ntr-un solvent
adecvat, fie n urmtoarele moduri:
- se obine o past din proba fin mojarat i un mediu lichid cum ar fi ulei de
parafin (nujol), hexaclorobutadien, perfluorokerosen. Pasta se ntinde pe
o fereastr transparent i i se traseaz spectrul. Mediile lichide utilizate
avnd un numr redus de benzi de absorbie, deseori nu ngreuneaz
interpretarea spectrului de absorbie al probei. Metoda este rapid, dar este
indicat n special pentru o analiz calitativ.
- proba fin mojarat este amestecat cu pulbere de bromur de potasiu (sau
alt halogenur alcalin) i este presat la vid pn cnd se obine o pastil
transparent, pentru care este trasat spectrul. Prin aceast metod se pot
efectua uor analize cantitative deoarece se pot determina cu precizie
cantitile de prob i eventual de standard intern introduse ntr-o pastil.
Pentru analiza gazelor se ntrebuineaz celule cu grosime mare (10 cm).
Pentru determinarea unor componeni n cantitate mic drumul radiaiei prin celul
poate fi multiplicat utiliznd un sistem de oglinzi, drumul efectiv parcurs de
fasciculul de radiaii putnd ajunge la zeci de metri.
Deoarece spectrul de absorbie pentru aceeai substan poate fi diferit
funcie de modul n care a fost pregtit proba i de parametrii de lucru ai
aparatului, este necesar ca aceste date s fie totdeauna menionate.
101
n intervalul 4000-2500 cm-1 (2,5-4,0 m) benzile de absorbie sunt
caracteristice vibraiilor de ntindere ale legturilor formate de hidrogen cu
elemente cu masa < 19.
Regiunea 2500-1540 cm-1 (4,0-6,5 m) corespunde vibraiei unor legturi
triple (2500-2000 cm-1) sau duble (2000-1540 cm-1) (C=O, C=C, C=N, S=O).
n regiunea de amprent a spectrului (1300-650 cm-1) radiaia este
absorbit datorit vibraiilor de ntindere a unor legturi simple i a vibraiilor de
deformare ale sistemelor poliatomice (vibraii de schelet). Spectrul de absorbie n
acest domeniu este caracteristic ntregii molecule.
n regiunea 667- 50 cm-1 (15-200 m) absorbia radiaiei se datoreaz
vibraiilor de deformare ale legturilor formate de carbon, azot, oxigen i fluor cu
atomi cu masa mai mare de 19 i unor moduri suplimentare de deformare a unor
sisteme ciclice sau nesaturate. Aceast regiune este deosebit de indicat pentru
studiul unor compui organometalici i anorganici.
n fig. 1.58 se prezint schematic zonele din spectrul IR n care au loc
vibraiile unor grupri de atomi n molecul.
Pe baza unui mare numr de spectre nregistrate (cteva mii) Colthup a
obinut grafice de corelare a frecvenelor de vibraie cu natura atomilor ce vibreaz
n cadrul legturii pentru un numr nsemnat de grupri de atomi.
Fig. 1.58. Corelaii simple ale vibraiilor de grup cu regiuni ale domeniului IR.
102
n acest scop se utilizeaz colecii de spectre sau sisteme de refacere a
spectrelor. n cazul sistemelor de refacere a spectrelor se folosete un aranjament n
cod binar, care divide spectrul ntr-un numr de intervale de lime uniform (de
exemplu 0,1 m sau 100 cm-1). Prezena sau absena unor benzi de absorbie, a
grupurilor chimice sau alte informaii pot fi codificate n acest mod. Nu se codific
toate benzile de absorbie, ci numai cele ce depesc o anumit intensitate.
S-au realizat biblioteci de spectre care conin n memoria unui calculator
spectrele n IR a mii sau chiar zeci de mii de compui chimici i care uureaz mult
identificarea structurii unor compui de analizat.
n cazul unor amestecuri, spectrometria n IR ne permite determinarea
gruprilor de atomi prezente n proba de analizat, dar identificaea componenilor
individuali este destul de greu de fcut. n acest scop, datele obinute prin
spectrometria n IR sunt corelate cu date furnizate de analiza chimic,
spectrometria de rezonan magnetic nuclear, spectrometria de mas etc.
n general, se poate spune c interpretarea unui spectru n IR este destul de
dificil. Dei unele benzi de absorbie pot fi imediat corelate cu natura probei,
totui foarte multe spectre conin o cantitate de informaii att de mare, nct numai
o parte din aceasta este utilizabil chiar de un chimist experimentat.
Faptul c poziia maximelor de absorbie caracteristice pentru anumite
grupri nu este constant atunci cnd acestea sunt prezente n molecule diferite
poate fi considerat un dezavantaj. Aceasta face ns ca spectrele de absorbie n IR
s fie unice pentru diferitele molecule i astfel ele furnizeaz mai multe informaii
privind structura molecular dect dac poziia maximelor de absorbie ar fi
invariant.
Un dezavantaj al spectrometriei n IR la aplicarea n biochimie l constituie
faptul c apa prezint benzi de absorbie late i intense n acest domeniu spectral.
Foarte multe sisteme naturale au un mare coninut de ap, ceea ce limiteaz
aplicarea metodei numai la anumite zone spectrale n care apa nu absoarbe.
Au fost obinute spectrele n IR pentru membrane, esuturi, bacterii. Benzile
de absorbie pot fi corelate cu compoziia sistemului, indicnd prezena apei, a
proteinelor, lipidelor etc. i este posibil de a diferenia esuturile provenite din
diverse surse.
Prin spectrometrie n IR a fost studiat conformaia unor proteine,
polipeptide i acizi nucleici. Cele mai importante benzi de absorbie n IR ale
legturii peptidice sunt n jur de 1600 cm-1 i se datoresc n principal ntinderii
legturii C=O i deformrii legturii N-H. Schimbri n structura secundar
determin deplasri mici (dar detectabile), variaii ale intensitii sau despicarea
benzilor care pot sugera structura.
Spectrometria n IR poate fi aplicat pentru studiul structurii secundare a
acizilor nucleici, absorbia de la 1700 cm-1 putnd fi corelat cu structura
secundar a polimerului.
Spectrometria n IR se aplic n biochimie, mai ales pentru analiza unor
molecule relativ mici, cum ar fi cele de monozaharide i derivaii lor, steroizi,
103
lipide, baze nucleotidice etc. Pentru aceste molecule, spectrul n IR rmne
suficient de simplu pentru a putea fi utilizat la determinarea structurii.
Analiza prin reflecie n IR apropiat este aplicat pentru analize clinice
deoarece n acest domeniu spectral radiaia ptrunde n esuturile umane suficient
de adnc. n acest mod se pot face determinri spectrometrice in vivo. Dei benzile
de absorbie n IR apropiat sunt destul de slabe, ele sunt utile analitic deoarece
aproape toate moleculele de interes biologic au benzi de absorbie distincte n acest
domeniu. Aparatura modern permite msurarea unor absorbane foarte slabe fa
de un fond de radiaii mprtiate foarte mare, iar prin utilizarea unor tehnici
statistice pot fi interpretate benzile multiple care se suprapun.
104
Drept detector de radiaii poate fi utilizat o plac fotografic, ns n
spectrometrele moderne ea a fost aproape total nlocuit cu detectori fotoelectrici.
Spectrul Raman se obine cel mai bine pentru probe lichide. Utilizarea
laserului ca surs de excitare permite ns obinerea spectrului Raman pentru
aproape orice stare a probei: lichid, soluie, solid transparent, pulbere, gaz etc. i
cu un volum foarte mic, de domeniul microlitrilor sau chiar nanolitrilor. Utilizarea
lmpii cu vapori de mercur drept surs de excitare necesit volume mult mai mari
de prob, de ordinul mililitrilor.
Cele mai intense linii n spectrul Raman corespund vibraiei unor atomi
legai prin legturi relativ nepolare, cu o distribuie simetric a sarcinii. n aceste
cazuri, se produc cele mai mari variaii de polarizabilitate n cursul vibraiei. Astfel
de grupri sunt:
105
C=O
Infraro u
C=O
106
Procentul nucleotidelor ARN n conformaie A poate fi determinat prin
msurarea intensitii benzii Raman de la 810 cm-1 folosind banda de la 1100 cm-1
ca standard intern.
n regiunea corespunztoare vibraiilor de ntindere a legturii C = O (1750-
1650 cm-1) reziduul de uracil d dou benzi Raman intense. Reziduurile de citozin
i guanin dau dou benzi Raman foarte slabe.
n conformaia dubl elice a ADN sau ARN, reziduurile de baz sunt
aranjate cu planurile aproape perpendiculare pe axa elicei i paralele una cu alta,
astfel nct distana ntre planurile adiacente de baz este de 3,4 . O astfel de
mpachetare determin o reducere a intensitii benzii de absorbie n UV de la
260 nm, avnd loc de asemenea o micorare a intensitii unor benzi Raman
corespunztoare reziduului de baz.
O protein purificat d aproximativ 30 benzi Raman intense n regiunea
spectral 300-1700 cm-1. Lanul principal polipeptidic d natere urmtoarelor
benzi: amid I (1645-1680 cm-1), amid II (1235-1300 cm-1), ntindere C C (900-
960 cm-1). Aceste trei benzi sunt utile pentru estimarea procentului de protein ce
se gsete sub form de -elice, form , sau are o orientare ntmpltoare a
lanului peptidic.
Conformaia de -elice d o band Raman intens corespunztoare amidei I
n regiunea 1650-1655 cm-1, o band Raman slab corespunztoare amidei III n
regiunea 1260-1295 cm-1 i o band medie corespunztoare ntinderii legturii
C C n domeniul 900-945 cm-1. Celelalte structuri dau benzi Raman diferite.
Pe lng efectul Raman obinuit, n care nu au loc tranziii ntre stri
energetice electronice ale moleculelor, n anumite condiii experimentale, poate
aprea efectul Raman de rezonan.
Acest efect const n trecerea unui electron din starea fundamental pe un
nivel excitat de vibraie al unei stri electronice excitate, fenomen urmat de o
tranziie pe un nivel de vibraie al strii electronice fundamentale (fig. 1.61).
107
n cazul fluorescenei. Emisia radiaiei este instantanee iar spectrul obinut este sub
forma unor benzi nguste.
Pentru a obine spectrul Raman de rezonan se folosete o radiaie laser a
crei frecven este egal sau apropiat de frecvena corespunztoare unei tranziii
electronice.
Avantajul efectului Raman de rezonan const n marea sensibilitate i
selectivitate cu care poate fi studiat structura cromoforilor. Liniile Raman de
rezonan pot avea intensiti de 102-106 ori mai mari dect liniile Raman
obinuite, iar spectrul obinut este mai simplu, deoarece sunt intensificate numai
liniile corespunztoare vibraiilor cromoforilor. Se pot obine astfel informaii
detaliate privind modurile de vibraie ale cromoforilor ce au benzi de absorbie n
apropierea lungimii de und a radiaiei excitatoare. Aceast selectivitate apare, de
exemplu, n cazul proteinelor hemului, unde benzile Raman de rezonan se
datoresc numai vibraiilor cromoforului tetrapirolic.
108