Compendiu International pentru Analize si Metode – OIV

Acidul Scorbic- Electroforeza Capilara

Metoda OIV-MA-AS313-18 Tipul IV

Determinarea acidului scorbic in vinuri prin Electroforeza capilara

1. Scopul
Metoda se foloseste pentru determinarea acidului scorbic in vinuri cu o concentratie
cuprinsa intre o si 300 mg/L.

2. Principiul
Ionul sorbat incarcat negativ permite in mod natural separarea usoara prin electroforeza
capilara. La iesirea capilara detectarea se efectueaza in spectrul ultraviolet la 254 Nm.

3. Reactivi si produse
3.1 Reactivi
3.1.1 Dihidrogenofosfat de sodiu [10049-21-5] puritate> 96%
3.1.2 Hidrogenofosfat de sodiu [10028-24-7] puritate> 99%
3.1.3 Hidroxid de sodiu [1310-73-2] puritate > 97%
3.1.4 Hipurat de sodiu [532-94-5] puritate > 99%
3.1.5 Apa dimineralizata (< 15 MOHMS) sau apa bidistilata

3.2 Migrarea solutiei tampon

Migrarea solutiei tampon este alcatuita din:

Hidrogenat de sodiu (3.1.1) : 5 mM

Hidrogenofosfat de sodiu (3.1.2) : 5 mM

3.3 Standard intern

Hipurat de sodiu (3.1.4) in solutie apoasa 0.5g.L -1

3.4 Solutii de clatire

3.4.1 Hidroxid de sodiu (3.1.3) N/10
3.4.2 Hidroxid de sodiu (3.1.3) N

OIV-MA-AS313-18:R2006
 Compendiu International pentru Analize si Metode – OIV
Acidul Scorbic- Electroforeza Capilara

4. Pregatirea probei
Esantioanele de vin se prepara astfel, ceea ce implica o dilutie de 1/20:

 Vinul care va fi analizat : 0.5 mL

 Hidroxid de sodiu (3.1.3) : 0.5 mL
 Standard intern (3.1.4) cu 0.5 g.L-1 : 0.5 mL
 Osp 10 mL cu apa dimineralizata (3.1.5)

5. Conditii de operare
5.1 Conditionarea capilarei

Inainte de prima utilizare si de indata ce timpul de migrare creste , capilara trebuie

conditionata in conformitate cu urmatorul proces:

5.1.1 Se clateste cu solutie de hidroxid de sodiu 1 N (3.4.2) la 20 psi (140 kPA) pentru 8
minute
5.1.2 Se clateste cu solutie de hidroxid de sodiu 0.1 N (3.4.1) la 20 psi (140 kPA) pentru
12 minute
5.1.3 Se clateste cu apa (3.1.5) la 20 psi (140 kPA) pentru 10 minute
5.1.4 Se clateste cu migrarea solutiei tampon (3.2) la 20 psi (140 kPA) pentru 30 minute

5.2 Conditii de migrare

Aceste conditii pot fi usor modificate in functie de echipamentul utilizat.

5.2.1 Capilara din silicea topita are lungimea de 31 cm, cu diametrul de 50 microni.
5.2.2 Temperatura de migratie : 25°C
5.2.3 Lungimea de unda: 254 Nm
5.2.4 Citirea semnalului in mod direct ( acidul ascorbic absoarbe in spectrul UV)
5.2.5 Prima preclatire sub presiunea de 30 psi (210 kPA) cu solutie de hidroxid de sodiu
0.1 N (3.4.1) pentru 30 de secunde
5.2.6 A doua preclatire sub presiunea de 30 psi (210 kPA) cu migrarea solutiei tampon
(3.2) pentru 30 de secunde
5.2.7 Injectia este gata sub presiunea de 0.3 psi (2.1kPA) pentru 10 secunde
5.2.8 Migrarea dureaza aproximativ 1.5-2 secunde sub o diferenta de potential de
+25kV , cu polaritatea normala (catod la iesire)

OIV-MA-AS313-18:R2006
 Compendiu International pentru Analize si Metode – OIV
Acidul Scorbic- Electroforeza Capilara

5.2.9 Anumite aparate de electroforeza capilara propun flacoane mari pentru solutii
tampon de migrare. Acest lucru este de preferat atunci cand mai multe analize
sunt efectuale in serie deoarece proprietatile electrolitice sunt mentinute mai
mult.
5.3 Citirea rezultatelor

Varfurile de absorbtie pentru etalonul intern si acidul scorbic se obtin in medie la 1-1.5
minute dupa inceperea fazei de migrare. Timpul de migrare este destul de constant, dar
poate varia usor in functie de starea capilara. Daca timpul de migrare se degradeaza, este
necesara reconditionarea capilarei si daca conditiile nominale nu sunt restabilite, capilara
trebuie inlocuita.

6. Caracteristicile metodei
Diferitele etape de validare decrise au fost efectuate in conformitate cu rezolutia OIV OENO
10/2005

6.1 Repetabilitatea intralaborator

Repetabilitatea deviatiei standard Sr 1.6 mg/ L-1

Repetabilitatea r 4.6 mg/ L-1

6.2 Liniaritatea

Linia de regresie Y = 0,99491 X + 2,52727

Coeficientul de corelatie r 0,9997
Deviatia standard reziduala Sxy 1,6 mg.L-1
Panta deviatiei standard Sb 0,008 mg.L-1

6.3 Reproductibilitatea intralaborator

Deviatia standard a reproductibilitatii Sr 2.1 mg/ L-1

Reproductibilitatea R 5.8 mg/ L-1

6.4 Limitele de detectare si de cuantificare

Limita de detective Ld 1.8 mg/ L-1

Limita de cuantificare Lq 4.8 mg/ L-1

OIV-MA-AS313-18:R2006
 Compendiu International pentru Analize si Metode – OIV
Acidul Scorbic- Electroforeza Capilara

6.5 Robustitatea
6.5.1 Determinarea

Deoarece metoda este relativa , orice usoara variatie a conditiilor de analiza nu va avea
niciun efect asupra rezultatului final, ci va influenta in primul rand timpul de migrare.

6.6 Specificitatea metodei

Au fost testate posibilele influente ale aditivilor oenologici de principiu. Niciunul dintre ei nu
modifica rezultatele obtinute.

6.7 Corelarea metodei cu metoda de referinta OIV

Metoda de referinta OIV este determinarea prin spectrometrie de absorbtie ultravioleta.

Acidul scorbic, extras prin distilare cu vapori, se determina in distilatul de vin prin
spectrometrie de absorbtie in ultraviolet la 256 Nm.

6.7.1 Compararea repetabilitailor

Electroforeza Metoda de
capilara referinta OIV
Deviatia standard a repetabilitatii Sr 1.6 mg/l 2.5 mg/ L-1
Repetabilitatea r 4.6 mg/l 7.0 mg/ L-1

6.7.2 Precizia metodei obisnuite in raport cu metoda de referinta

Coeficientul de corelatie r 0.999

Eroarea medie Md 0.03 mg L-1
Eroarea medie a devitatiei standard Sd 3.1 mg L-1
Z-score (Md/Sd) 0.01

OIV-MA-AS313-18:R2006