Soxhlet extracia de acrilamid din chipsuri Problema de extracie complet a acrilamidei de la chipsuri de cartofi a fost investigat.

O metod a fost dezvoltat bazate pe tehnica de extracie Soxhlet. Un degresate eantion a fost extras n mod continuu cu metanol, timp de 10 de zile, ntr-un extractor Soxhlet. Dup aproximativ 7 zile, o constant concentraia de acrilamid a fost atins. Acest lucru indic c toate acrilamid, care ar putea fi eliminat din eantion au fost extrase. Acrilamid a fost identificat n extractul folosind GC-MS i modul de scanare. Concentraia total a fost 14500 micrograme kg21 folosind GC-FID i completrile standard. Determinri suplimentare, folosind un standard extern (GC-FID i GC-MS), precum i un standard intern (GC-FID), au avut rezultate n termen de 5%. Un studiu publicat anterior, utiliznd o metod de extracie static i GC-MS i LC-MSMS, au indicat concentraii de 2287 i 1993 micrograme kg21, , respectiv. Rezultatele sunt discutate n legtur cu un recent model i experimente similare. Cantitatea extras de acrilamid este afectat de mai muli parametri: proprieti solvent, volumul de solvent, timp de extracie, temperatura, de particule mrime, i microstructura a probei. Prezentare Cu trei ani n urm, Tareke et al.1 raportat formarea semnificativ a acrilamid, probabil cancerigene, 2 la concentraii de aproximativ 150 micrograme kg21 n alimente prajite. Recent, concentraii ridicate de acrilamid ,3-6, probabil, format din amino-acizi mai ales asparagina ,6-8 au fost gsite n cuptor mai multe fierte si prajite produse alimentare. Un brand special de chipsuri au artat foarte mare concentraii, 2287 i 1993 micrograme kg21, respectiv, utilizarea a dou chipsuri diferite methods.4 Rezultatele sunt prezentate ca fiind "c de cartofi" ntr-o lucrare de Rosen i Hellens4 n tabelul 2 de la pagina 882. a publicat methods3 analitice, 4 au fost foarte asemntoare. Amandoi coninea o parte static de extracie, cu o durat total de aproximativ 1 h, urmat de detectare a acrilamidei cu un GC-MS i LCMS MS procedurii, respectiv. O parte de extracie a metoda utilizat de ctre Rosen i Hellens4 implicate cinci etape majore: de extracie ntr-o homogeniser, centrifugare, filtrare SPE, filtrare ntr-o sering i filtrarea printr-o rotire de centrifugare filter.4 Aceste metode publicate anterior au fost utilizate la nivel mondial, cu mici modificri, pentru multe investigaii detaliate de acrilamid n produsele alimentare. Frecvent, msurat concentraia de acrilamid arat variaii foarte mare, chiar i utiliznd acelai tip de prob. Acest lucru a fost explicat de ctre

variaii n metodele de gtit chiar i cu privire la analize ale obinute industrial chipsuri. Cu toate acestea, credem c msoar variaiile de concentrare poate indica, de asemenea, serioase Metoda de probleme n special n ceea ce privete de extracie. Scopul cu lucrarea de fa a fost s dezvolte o metod potrivit pentru a determina cantitatea total de acrilamid n produsele alimentare. n primul rnd, de ctre degresarea probe, interferenele de analiz de la compui nonpolar au fost minimizate. n al doilea rnd, utilizarea metanol ca un solvent de extracie a eliminat formare de gel, , care este o problem grav atunci cnd se lucreaz cu eantioane de cartofi. n al treilea rnd, de extracie continu folosind un Soxhlet modificate extractor, principala referin utilizat pentru verificarea extracie alte metode, 9 a dus la extragerea unor cantiti mari de acrilamid. n al patrulea rnd, metoda de analiza cantitativ a permis utiliznd cromatografia de gaz de detectare ionizare cu flacr (GC-FID) completate cu cromatografia de gaze-spectrometria de mas (GCMS). Experimental Materiale i probe Produse chimice acrilamid 99 +%, electroforez grad, 1,2-propandiol + 99.5%, pentan 98% (GC) i metanol 99,3% (purge i gradul capcan) au fost furnizate de Sigma Aldrich (Stockholm, Suedia). Soluii concentrate de externe, i standardele interne au fost pregtite n metanol de ctre de cntrire. Soluiile standard de lucru au fost pregtite de ctre diluarea n metanol prin cntrire. Fulgi de cartofi, chipsuri (cartofi c n conformitate cu tabelul 2, n studiul prin Rosen i Hellens4) (chips-uri Lttsaltade, OLW), 5 de cntrire 20 g i cu coninut de grsime 33%, conform declaraiei, au fost pmnt. Eantionul a fost degresat cu pentan, timp de 3 ore ntr-un Extractor Soxhlet (Quickfit 40 RASX, Sigma-Aldrich). scdere n greutate a fost 33,5%. Prin procedura de degresarea interferenele analitice de la compui nonpolar s-au redus n mod drastic. Acrilamid pe de alt parte, nu are aproape nici solubilitate n pentan, care a fost confirmat prin GC-FID de analiz. Exemplu de extracie n timpul de dezvoltare a metodei, mai multe probe au fost extrase utiliznd condiii uor diferite i cu diverse mai multe detalii. Mai jos vom da condiiile i rezultatele detaliate pentru una din probe, care a fost studiat dup metoda a fost dezvoltate. Un eantion degresat, 6.20 g, a fost plasat ntr-un degetar, greutate de 1,1 g, precum i extrase cu 120 g de metanol n acelai Extractor Soxhlet aa cum este descris mai sus. Volumul a fost mort minimizate de la 61 ml pn la 16 ml, cu mrgele de sticl dezactivat,

conducnd la o extracie aproape continu. Un nclzit de 250 ml Balon Erlenmeyer, cu un agitator magnetic, coninute de extragere de cu solvent, la o temperatur de 65 C. Balonul a fost cntrit zi cu zi i o prob de 1 ml a fost luat n vederea analizei chimice. Metanol a fost adugat, dup prelevarea de probe pentru a menine greutatea de solvent la aproximativ 120 g n timpul extraciei. Pentru comparaie, mostre , de asemenea, au fost extrase static, de ctre refluxing n metanol la 65 C, 250 nclzit ntr-un balon Erlenmeyer ml, dotat cu agitator magnetic i condensator. De analiz GC-FID i GC-MS Extracte au fost analizate cu ajutorul unui HP 5890 II, GC-FID echipat cu un 6890 HP sampler automat / injector. A CP 5890 II / HP 5989A GC-MS, cu sursa de electroni ionizare pstrate la 200 C i quadrupole la 100 C, a fost folosit ca un completeaz. Cromatografe de gaz au fost echipate cu un Sistemul de presiune electronice de control. Extracte i soluii standard au fost cromatografiaz pe BP capilar 21 coloane (0,25 mm id, 0.25 de film m). Lungimi de coloane au fost de 15 m i 30 m pentru GC-FID i GC-MS, respectiv. Dezactivat dual-garnituri conice de admisie de la SGE pierderi minimizate. operator de transport de gaze a fost de hidrogen (99.99999% pur), la un debit coloan rata de 1,0 ml min21. De gaz a fost livrat de ctre o baz de hidrogen generator de model de 75-34 (Whatman, Maidstone, Anglia). HP 6890 sampler automat / injector a fost folosit pentru a face 2.5 l preparate injectabile ntr-un mod splitless. Injectorului i detectorului Temperaturile au fost 200 i 250 C, respectiv. Un temperaturii Programul a fost folosita incepand cu o dein 2 min la 75 C; urmat ramp de o rat de 10 C min21 la 230 C. De aer au fost furnizate de la un compresor mai puin de ulei-2000-25M (iunie-Air, Danemarca) printr-o 75-60 Unul Aer Usctor (Balston, Anglia). Rezultatele n timpul de extracie Soxhlet concentraiile de acrilamid n extracte au fost determinate de zi cu zi cu ajutorul GC-FID i un extern standard (fig. 1). Dup aproximativ 7 zile, o concentraie constant de acrilamid a fost atins n extras. Aceasta indic faptul c toate prezent acrilamid n eantion a fost extras. concentraia n extractul de final (dup 10 zile), cu ajutorul GC-FID precum i un standard extern, corespuns la 13850 micrograme kg21 n proba original. Folosind GC-FID i de 1,2-propandiol ca o standard intern, ntr-un eantion de extract de final, o concentrare corespunztoare 15020 kg21was micrograme determinate. Noi, de asemenea, folosit metoda adaosurilor standard pentru cantitative determinarea acrilamid. Pornind de la un eantion de extract, 6 soluii cu o concentraie liniar tot mai mare de

acrilamid au fost pregtite i analizate. Retenie de ori 10.01 min pentru presupuse de acrilamid n extract i acrilamid n soluiile standard au fost toate constant n termen de 0.3 s. Rezultatele au artat o concentraie corespunztoare 14500 micrograme kg21, cu un coeficient de regresie 0.9997, n original mostr. Fiecare punct a fost analizat de trei ori oferind un eroare de concentrare standard de aproximativ 6%. Folosind GC-MS i modul de scanare (10-250 uam) acrilamid a fost identificate prin program pentru calculator, ntr-un concentrat de 10 ori eantion de extract de final, folosind biblioteca Wiley cu m majore ionii / z 71, 55, 44 i 27, la pstrarea corect de timp n termen de o parte a unei secunde. Nr semnale semnificative de ioni de care nu au legtur pentru a acrilamid s-au gsit n intervalul 10-250 uam scanare. Pentru de identificare, Mod scanare este prima alegere n cazul n care semnalul este puternic destul. Ca o completare, am folosit, de asemenea, unic de monitorizare de ioni (SIM) modul de ioni majore. Mod SIM este cu mult mai sensibil dect modul de scanare, prin msurarea doar cteva dintre principalele ioni. GC-MS, n modul SIM la m / z 71, cu un acrilamid extern standard, a dus la o concentraie de aproximativ 15 000 de micrograme kg21. Dup aproximativ 2 zile de extracie static, utilizat ca o completare de extracie Soxhlet de mai sus, o concentrare aproape constant de acrilamid a fost atins n extras. Bazeaz pe utilizarea GC-FID raporturile externe, precum i o greutate standard de 5.0 i 9.5 din metanol la chips-uri a dus la concentraii de 2700 i 3200 micrograme kg21, respectiv. Simitor, valorile publicate pentru condiii statice de la dou laboratoare diferite sunt 2287 i 1993 micrograme kg21 folosind GC-MS i LC-MS-MS, .4 On baza, desigur, dovezi experimentale limitat acum sunt disponibile, aceste rezultate subestima acrilamid n total prezente ntr-un eantion. Ca o continuare a verifica, de asemenea, am adugat cteva experimental experimente care ilustreaz efectul de temperatura, prob pentru a raportul de solvent de greutate i de dimensiunea particulelor. Dou experimente statice cu un factor de 10 diferenta de volum de solvent s-au efectuat , la o temperatur de 25 C. Acrilamid extras a fost msurat de zi cu zi n timpul experimentului volum sczut. Iniial, nivelul de concentrare n soluie mai mare parte a fost foarte sczut. Treptat, de concentrare a crescut liniar atingnd un nivel de 2000 micrograme kg21 dup 10 de zile. Dup 10 zile am msurat o concentraia de 3000 de micrograme kg21 ntr-un experiment volum ridicat. Experimentul a sczut de volum a fost repetat cu ajutorul unui eantion care a fost motiv pentru a doua oar, dup degresarea. Cea de a doua mcinare a crescut nivelul de concentrare de ctre un factor de dou, dup 24 de H.

Pentru a ilustra efectul de microstructure, de asemenea, am efectuat complementar experimente statice folosind un crispbread de secar (Original, Ryvita, Anglia). n comparaie cu chipsuri de extracie a fost mult mai repede cum era de ateptat. La 65 C i 25 C de extracie a ajuns la un platou dup un an i trei zile, , respectiv. Interesant, concentraia final de msurat acrilamid la 25 C a ajuns la aproape acelai nivel ca i msurat la 65 C. n cele din urm, dou experimente statice cu un factor de 10 diferenta de volum s-au efectuat la temperatura camerei, 25 C, pe parcursul a 10 zile. Experimentul de volum mare a dus la cu privire la o concentraie de 50% mai mare dect volumul redus experiment. Discutii Un model relativ simplu de extracie, prezentat recent de ctre Bai et al., Pot explica results.10 noastre Bai et al. discutat procesul de extracie a substanelor dizolvate din esuturi plant la soluie. Potrivit studiului lor, condiiile de extracie i dimensiunilor particulelor i microstructura afecta procesul. Am schiat extragerea de acrilamid din particule de alimente prin utilizarea metanol modelul lor treptat. Acrilamid este extras de la o particul n metanol de solvent n 5 etape majore: (1) de intrare al Redistribuirea solvent n particulei, (2) din solvent i de expansiune a matricei solide, (3) dizolvarea de acrilamid n funcie de proprietile de solvent i de temperatur, (4) de difuzie de acrilamid spre exterior a particulei, i (5) de migraie a acrilamid extrase din suprafaa de particule n vrac soluie de metanol cu solvent. Soxhlet i statice de extracie au pai (1) - (3) de mai sus n comun. De extracie Soxhlet crete rata de control-diffusion i migraia de acrilamid n comparaie cu extracie static. Distilat de solvent pur continuu spala pe departe acrilamid suprafaa de particule. Treptat solventul n interiorul particulelor va conine substanelor dizolvate mai puin creterea capacitii sale de dizolvare a acrilamid i alte molecule. Dup un anumit timp toate extractibile molecule va fi gsit n balonul de colectare. Pe de alt parte, n timpul extracie static de concentrare de acrilamid i alte molecule va crete n vrac soluie. Acest lucru va incetini de difuzie i, eventual, de asemenea, dizolvare de acrilamid i alte substane. Concentraie de acrilamid i alte substane extractibile va ajunge la un nivel constant pseudo-soluie de echilibru n vrac. De timp pentru a ajunge la un nivel constant poate s difere substanial pentru diferite substane. Modele de acrilamid n partea amida lant de asparagina i a

glutamin i pot forma legturi de hidrogen cu alte molecule. 11 numeroase substane, a gsit n interiorul unei particule alimentare, au un potenialul de a forma legturi de hidrogen, de exemplu, aminoacizi, proteine, amidon i zaharuri. Acest fenomen ar putea, uneori, s fie o parte din rata de limitare de extracie. Interesant, acrilamid n soluie poate s dispar repede ca o funcie de timp, n prezena anumitor esuturi vegetale n special beans.12 De asemenea, statice i extracia un lot de aminoacizi, posibil legate de dizolvarea acrilamid, de la cartofi poate fi lent i complexe processes.13 Din pcate, exist o lips de investigaii experimentale de extracie a probelor alimentare folosind tehnici moderne. Cu toate acestea, exist investigaii similare de protecie a mediului probe. De exemplu, de Lucas et al. investigat de extracie a fraciunii solubile organice de particule diesel matter.14 Ultrasonication, cuptor cu microunde i supercritic de extracie a dus la 30% sau mai puin substanelor dizolvate extras, comparativ cu De extracie Soxhlet. Un complet de extracie Soxhlet a avut aproximativ 3 zile, cu diferite ori de extracie pentru substane diferite. n concluzie, experimentele noastre indic faptul c extrase suma de acrilamid este afectat de mai muli parametri, pentru a de exemplu: proprieti de solvent, volumul de solvent, extracie de timp, temperatura, dimensiunea particulelor, precum i microstructura a probei. Aparent, a extragerii de acrilamid din probe alimentare este o foarte proces complicat. Metodele utilizate trebuie s fie verificate bine pe fiecare alimentare specifice pentru care acestea urmeaz s fie used.13 de verificare ar trebui s includ variaii semnificative de parametri cheie, de exemplu: dimensiunea particulelor, de volum cu solvent la greutatea probei, temperatura i timpul de extracie.