Titlul: SALMEN®- Reactiv de complexare pentru Cr(III).

Autori: Gladiola Ţântaru, Cătălina Daniela San, Florina Crivoi.

Revistă: Revista Farmacia

Anul publicării: 2011

Numărul și paginile: 7: 265-271

Rezumat

Activitatea biologică a cromului (oligoelement esenţial) depinde de valenţa sa şi de structura

chimică a combinaţiilor complexe formate. Pentru determinarea cantitativă a cromului s-a
elaborat o metodă spectrofotometrică ce constă în complexarea lui cu N,N–bis (saliciliden)-
metilendiamina (notat Salmen®) cu formarea unui complex stabil ce prezintă un maxim de
absorbţie la 326 nm. Metoda propusă a fost validată şi prezintă o bună liniaritate în domeniul
0,5–5,0 µg/mL (coeficientul de corelaţie r = 0,9999). Limita de detecţie găsită este 0,066 µg/mL
şi limita de cuantificare 0,22 µg/mL. S-au determinat precizia metodei (RDS = 1,63%) şi
exactitatea (regăsirea medie fiind de 100,17% pe domeniul 98,0–102,3%). Metoda propusă şi
validată, a fost aplicată la determinarea Cr(III) din suplimentul alimentar ce conţine sarea
picolinat de crom cu bune rezultate.

Introducere

Cromul este un biometal cunoscut ca si catalizator redox, transportator de oxigen si ca agent

esential nutritiv. In cazul in care pacientii cu diabet insulino-dependent au observat u metabolism
anormal Cr(III) in timp ce ionii Cr(VI)c e rezulta din diferite procese industriale cum ar fi
industria colorantelor sunt toxice, mutagene si cancerigene.

Cr(III) poate fi determinat cantitativ direct prin metoda UV spectofotometrica. Noi am

determinat cele mai bune conditii in care complexul de reactie are loc ca reactiv Schiff bis baza
tip ONNO (Salmen®)[1]: pH optim, timp de formare, complex stabil in timp, raport de
combinare M/L, stabilitate constanta (βn) si interferenti.

Aceasta lucrare se refera la validarea metodei spectofotometrice UV pentru determinarea ionilor

Cr(III) si aplicarea sa asupra determinării Cr (III) din suplimentul alimentar Crom Forte® 200 μg
comprimate produse de Walmark (Republica Cehă). Validarea metodei spectrofotometrice a fost
efectuată în conformitate cu International Conference on Harmonization guidelines (ICH).

Materiale si metoda

Principiul metodei: Ionii Cr(III) in prezenta N,N’–di (saliciliden)-metilendiamina (Salmen®) la

pH=4,6 formeaza un complex cu un maximum la 326 nm proportional cu ionul analizat. Au fost
stabilite lungimi de undă optime pentru detectare și condiții de lucru optime: pH optim, timp de
formare, complex stabil in timp, raport de combinare M/L, , stabilitate constanta (βn) si
interferenti. Pentru a evalua performanta parametrilor pentru metodă (liniaritate, precizie,
precizie și standard calibration) s-au folosit soluții în intervalul de concentrație 0,5-5,0 μg / ml
Cr (III).

Reactivi si aparatura

- soluție stoc de Cr (III) 0,1 mg / ml: 0,04753g Cr (CH3COO) 3 · H20 (Carlo Erba) au fost
dizolvate în 100 ml de apă distilată;

- soluții de lucru cu concentrații cuprinse între 0,5-5,0 μg / ml Cr (III) obținut prin diluarea
soluției stoc cu apă distilată;

- N, N'-bis (saliciliden) -metilendiamină (Salmen®) - soluție 0,01% (greutate / volum) preparată

utilizând soluție de metanol pur (Merck) - reactiv;

- acid tampon acetat de sodiu (Merck) - acetat de sodiu (Merck) 0,2 M (pH=4,6)

- tablete Crom Forte® 200 μg produse de Walmark (Republica Cehă);

- spectrofotometru UV-VIS - HEWLETT-PACKARD 8453.

Stabilirea lungimii de unda optime pentru detectare.

Principiu:

1 ml soluție de analizat ce conține 0,5-5,0 μg / ml Cr (III) a fost tratata cu 1 ml soluție tampon

(pH = 4,6), 2 ml metanol absolut și soluție de reactiv de 1 ml 0,01% (g / v) în metanol. După 10
Minute, extincția a fost măsurată la 326 nm și a fost comparată cu proba martor, preparată
utilizând 3 ml metanol, 1 ml soluție tampon (PH = 4,6) și 1 ml de soluție de reactiv. Au fost
stabilite condiții optime de lucru.

Metoda de validare

Liniaritatea: Pentru a determina liniaritatea metodei, preparam soluții Cr (III) prin diluarea
soluției stoc cu apă distilată in intervalul de concentrații 0,5-5,0 μg / ml. Datele obținute au fost
analizate prin regresie liniară și a fost obținută curba de calibrare.

Limitele de detecție și de cuantificare au fost calculate utilizând formulele:

LOD = 3 · Eroare standard / panta; LOQ = 10 · Eroare standard / panta

Precizia: au fost folosite trei soluții de ioni Cr (III) de 1,5, 2,0, 2,5 μg / ml. Au fost efectuate trei
teste pentru fiecare concentrație. Au fost efectuate în zile diferite două seturi de teste pentru a
evalua precizia medie.
Acuratetea: pentru a stabili acuratețea metodei pentru determinarea Cr (III) s-au utilizat
următoarele trei soluții 1,5, 2,0, 2,5 pg / ml. Pentru fiecare soluție s-au efectuat trei determinări.

Rezultate

Spectrul de absorbție al complexului Salmen®-Cr (III)(Figura 1) prezintă un maxim de absorbție

la 326 nm, comparativ cu Salmen® care are o absorbție maximă localizată la 299 nm.

Valoarea pH-ului influenteaza reactia de complexare

Constanta globala de formare a complexului (βn) a fost stabilita cu formula:

βn = (log CM · CL) / (log A-n · logV) [7],

CM = concentrația molară a metalului (ioni Cr (III));

CL = concentrația ligandului molar (Salmen®);

A = absorbanța complexului metal-ligand măsurată la 326 nm(Complex Salmen®-Cr (III));

N = raport molar M / R (raport de combinație Cr (III) / Salmen®);

V = volumul soluției (ml);

Ε = 1,4; 104 mol-1 coeficientul de extincție molar L cm-1

Conform datelor colectate, valoarea obținută a fost βn =7,17 · 106

Liniaritatea

Pentru studiul liniarității metodei, am pregătit patru serii(I-IV) de soluții de Cr (III) în intervalul
de concentrații 0,5-5,0 μg / ml. Datele obținute au fost evaluate statistic (tabelul I) și curba de
calibrare (figura 5).

Limita de detecție (LOD) și limita de cuantificare (LOQ)

LOD = 3 x 0,00275 / 0,1244 = 0,066 μg / ml

LOQ = 10 x 0,00275 / 0,1244 = 0,22 pg / ml.

Precizie

Am calculat concentrația probei utilizând curba de calibrare (Tabelul I). Am observat că pentru
fiecare set de date deviatia standard a fost mai mică de 2% (RSD = 1,63%). Toate aceste valori
au confirmat că metoda propusă este precisă.

Acuratetea

Concentrația probei a fost calculată din valoarea experimentală a absorbanței, utilizând ecuația
curbei de regresie(Tabelul II). Am observat că recuperarea a fost de 100,17% pentru studiul
concentratiei.

Intervalul de concentrație, media (minimul a fost de 98,00% și maximul a fost 102,03%) și

deviația standard relativă a fost sub 2% (RSD = 1,23%).Aceste valori au demonstrat că metoda
de determinare Cr (III) este exactă.

Metoda validată a fost aplicată la analiza spectrofotometrica UV a Cr (III) din tabletele Crom
Forte® 200 μg produse de Walmark (Republica Cehă). S-a calculat conținutul (pg) de Cr (III) pe
tabletă folosind formula:

(Cr) (III) / tabletă = [(A - 0,1336) / 0,1244] V MW / a,

Unde: A = absorbția probei măsurată la 326 nm;

V = capacitatea balonului volumetric (ml);

MW = greutatea medie a tabletelor (g);

A = greutatea probei prelucrate (g).

Rezultatele obținute sunt prezentate în tabelul III.

Concluzii

O nouă metodă spectrofotometrică pentru determinarea Cr (III) a fost dezvoltat, bazat pe reacția
de complexare cu Cr (III) cu Salmen®.

Complexul prezintă un maxim de absorbție la 326 nm.

Analiza a fost validată, stabilind lungimea de undă optimă, detecția (326 nm), liniaritatea (în
intervalul de 0,5-5,0 μg / ml, coeficientul de corelație fiind r = 0.9999), limita de detecție (LOD
= 0.066 Μg / ml), limita de cuantificare (LOQ = 0,22 μg / ml), precizia (RSD = 1,63%) și
precizia (recuperare medie = 100,17%). În concluzie, metoda propusă este liniară, precisă,
prezinta acuratete, simplă și rapidă și a fost folosită, cu rezultate bune, pentru analiza cantitativă
de Cr (III) din tablete Crom forte® 200 μg produse de Walmark (Republica Cehă).