UNIVERSITATEA “OVIDIUS” CONSTANȚA

STAGIUL DE CONTROLUL MEDICAMENTULUI

SPECIALIZAREA “FARMACIE GENERALĂ”

R E F E R AT

Identificarea substanțelor medicamentoase

ca atare și din forme farmaceutice prin reacții
chimice

COORDONATOR ȘTIINȚIFIC
Conf. Univ. Dr. Farm. ADRIAN COSMIN ROȘCA

REZIDENT
NAZIF BERNA

CONSTANȚA
2021
 Cuprins

Introducere ............................................................................................................................... 2
Activități antimicrobiene și antioxidante ale cumarinelor halogenate substituite............. 2
Identificarea medicamentelor de origine anorganică ........................................................... 7
Identificarea preparatelor organice ....................................................................................... 8
a. Clasele de bază ale compuşilor organici......................................................................... 8
b. Analiza substanţelor medicamentoase după grupele funcţionale................................ 9
b.1. Grupa hidroxilică ...................................................................................................... 9
b.2. Gruparea aminică aromatică primară .................................................................. 10
c. Identificarea substanţelor medicamentoase după fragmente structurale ................. 11
Concluzii ................................................................................................................................. 12
Bibliografie ............................................................................................................................. 13

1
 Introducere

Identificarea substanței este procesul prin care se stabilește identitatea unei substanțe.
Identificarea exactă a unei substanțe este o condiție prealabilă pentru majoritatea
proceselor REACH, CLP și BPR. Concret, aceasta asigură realizarea eficientă și corectă a
înregistrării în comun conform REACH si utilizarea unor date de testare adecvate pentru
substanța înregistrată în baza acestui regulament. Toate acestea duc la o evaluare riguroasă a
pericolelor și a riscurilor asociate substanței înregistrate.
Identificarea corectă a substanței va aduce și alte beneficii:
➢ Schimbul de informații pentru evitarea testelor inutile pe animale și a costurilor
aferente;
➢ Utilizarea de către mai multe întreprinderi a datelor provenite din teste și
realizarea de extrapolari în cadrul unui grup de substanțe;
➢ Verificarea prezenței substanței în lista de autorizare sau în lista restricțiilor sau a
existenței unei clasificări și etichetări armonizate.
De regulă, identitatea unei substanțe poate fi descrisă prin:
➢ O denumire chimică – de exemplu benzen;
➢ Un număr- de exemplu, numărul CE 200-753-7; și
➢ O compoziție chimică – de exemplu, > 99% benzen și < 1% toluen.
Compoziția se determină prin analiza chimică.[1]

Activități antimicrobiene și antioxidante ale cumarinelor

halogenate substituite

Sinteza cumarinelor și a derivaților acestora a atras o atenție considerabilă din partea

chimiștilor (Gacche și Jadhav, 2012; Paramjeet și colab., 2012) datorită sferei posibilelor
efecte benefice asupra sănătății umane. Dezvoltarea polimorfismului concomitent în 3-acetil
cumarină a atras atenția chimiștilor, datorită potențialelor aplicații în diferite studii cu raze X
cu un singur cristal.
Cumarinele fac parte dintr-o clasă mare de substanțe fenolice găsite în plante și sunt
formate din benzen fuzionat și inele α pironice, așa cum este reprezentat în Figura 1.

2
Cumarinele au fost sintetizate pentru prima dată în 1868 prin reacția Perkin și multe cumarine
simple sunt pregătite pentru a trece prin această metodă. La începutul anului 1900, reacția
Knoevenagel a apărut ca o metodă de sinteză importantă, ce a constat în sintetizarea
derivaților cumarinici cu acid carboxilic în poziția 3. În prezent, au fost raportate diferite
metode de sinteză a cumarinei, inclusiv reacțiile Pechmann, Reformatsky și Wittig.

Fig.1 Structura chimică a 2-cromen-2-onă

Deoarece pot apărea substituții în oricare dintre cele șase situri disponibile ale
porțiunii lor moleculare de bază (1, 2-benzopironă), acești compuși au o structură excepțional
de variabilă. Această varietate structurală duce la compuși care prezintă multiple proprietăți
farmacologice și biologice, cum ar fi activități antibacteriene, antifungice, antiinflamator și
antioxidante.[2]

Materiale și metode
Toate substanțele chimice au fost obținute de la compania chimică Aldrich și Merck și
au fost utilizate fără purificare ulterioară. Reacțiile au fost monitorizate prin cromatografie în
strat subțire (CSS). CSS a fost efectuată pe plăci de gel de siliciu Merck 60 F-254 cu acetat
de etil și n-hexan (7: 3) ca sistem de solvent și vizualizare cu cameră ultravioletă (UV) cu
lumină sau iod. Cromatografia lichidă - spectrometria de masă (LC-MS) a fost efectuată pe
un instrument din seria Agilent Technologies 1200. Randamentele se referă la produse
izolate. Sinteza compușilor din titlu CMRN1 - CMRN7 este ilustrată în Figura 2.[3],[4]

3-acetil-6-substituit-2H-cromen-2-onă (CMRN1 și CMRN2)

Un amestec de salicilaldehidă 5-substituită (0,1 mol) și etilacetoacetat (0,11 mol) au
fost introduse într-un balon conic, agitate și mai apoi răcite. La acest amestec, s-au adăugat 1
g de piperidină însoțită de agitare. Amestecul obținut a fost pus la temperatura de congelare
timp de 2 până la 3 ore, apoi s-a separat o masă solidă de culoare galbenă. Bucățile au fost
sparte în etanol rece, iar mai apoi filtrate. Solidul a fost spălat cu etanol rece și supus uscării,

3
ceea ce a dat randamente satisfăcătoare de CMRN1 și CMRN2. Produsele au fost
recristalizate din acid acetic glacial fierbinte și formarea produselor a fost confirmată de
diferența punctului de topire și a valorilor Rf pe cromatografie în strat subțire (Chopra și
colab., 2006).

3- (2-Bromoacetil) -2H-cromen-2-onă (CMRN3), (CMRN4), (CMRN5)

La o soluție de 3-acetil-6-substituit-2H-cromen-2-onă (0,1 mol) în 20 ml de cloroform
fără alcool, s-a adăugat brom (0,1 mol) la 5 ml de cloroform, cu agitare intermitentă.
Amestecul a fost încălzit timp de 15 minute pe o baie de apă pentru a expulza cea mai mare
parte a bromurii de hidrogen, urmat de răcire și filtrare. Solidul la spălarea cu eter a dat un
rezultat satisfăcător al produsului aproape pur. Formarea compușilor a fost confirmată de
diferența dintre punctul de topire și valorile Rf pe cromatografie în strat subțire (Chopra și
colab., 2007).

3- (2,2-Dibromoacetil) -2H-cromen-2-onă (CMRN6)

La o soluție de 3- (2-monobromoacetil) -2H-cromen-2-onă (0,1 mol) în 20 ml
cloroform fără alcool, s-a adăugat brom (0,1 mol) la 5 ml cloroform, cu agitare intermitentă.
Amestecul a fost încălzit timp de 15 minute pe o baie de apă pentru a expulza cea mai mare
parte a bromurii de hidrogen, urmat de răcire și filtrare. Solidul la spălarea cu eter a dat
rezultate satisfăcătoare ale produsului aproape pur. Formarea compusului a fost confirmată de
diferența dintre punctul de topire și valorile Rf pe cromatografie în strat subțire (Chopra și
colab., 2007).

3- (2-Aminotiazol-4-il) -6-brom-2H-cromen-2-onă (CMRN7)

Suspendarea 6-bromo-3- (2-bromoacetil) -2H-cromen-2-onei (0,1 mol) în 17,5 ml
etanol fierbinte a fost tratată cu tiouree, (0,11 mol) ce a avut loc o reacție exotermă ușoară,
ducând la o claritate a soluție care s-a depus curând sub formă de cristale. Depozitul a fost
îndepărtat, spălat cu etanol și apoi fiert cu apă conținând acetat de sodiu care a dat (80%) 3-
(2-aminotiazol-4-il) -6-brom-2H-cromen-2-onă și produsul obținut a fost recristalizat
dinetanol absolut. Formarea compusului a fost confirmată de diferența dintre punctul de
topire și valorile Rf pe cromatografie în strat subțire (Chopra și colab., 2009).[5],[6]

4
 Fig.2 Schemă care ilustrează calea pentru sinteza cumarinelor halogenate substituite

Activitatea antimocrobiană
Dezvoltarea rezistenței antimicrobiene de către multe organisme necesită compuși noi
din industria farmaceutică, care sunt ieftini și care au o activitate cu spectru larg. Activitatea
antimicrobiană și concentrația minimă inhibitoare (MIC) a compușilor au fost efectuate
folosind metoda Cos și colab. (2006) folosind metoda de difuzie a discului agar. Escherichia
coli, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, Streptococcus faecalis, Bacillus cereus,
Bacillus coagulans, Bacillus stearothermophilus, Citrobacter freundii, Staphylococcus aureus
și Micrococcus luteus au fost utilizate în acest studiu.
Culturile au fost acoperite și verificate. Culturile de stoc au fost depozitate în flacoane
micro-bancare folosind 50% glicerol. Mai departe, au fost așezate pe plăci de Agar Nutrient
și crescute în bulion de nutrienți timp de 24 de ore la 37 ° C. Concentrațiile de celule
bacteriene au fost ajustate la standardul MacFarland de 0,5 absorbanță care a corespuns la
108 cfu / ml. O suspensie (100 pl de 108 cfu / ml) a bacteriilor testate a fost răspândită pe
plăcile Mueller Hinton Agar (Fluka, Biochemika). Discurile de filtrare au fost preparate prin
tăierea acestora de 5 mm din hârtia de filtru Whatman nr. 1 și au fost uscate în cutii Petri
sterile deschise într-un dulap de siguranță biologică. Acestea au fost inoculate cu 10 μl de

5
probă la o concentrație de 3 mg / ml și plasate pe plăci de agar inoculate și incubate la 37 ° C
timp de 24 de ore.
Fiecare concentrație a fost testată de trei ori. Sulfoxid de dimetil 100% (DMSO) (10
μl) a fost utilizat ca martor negativ și ciprofloxacină 3 mg / ml a fost utilizat ca martor
pozitiv.
Testele preliminare de difuzie a discului au fost efectuate pentru a determina nivelul
de inhibare a tuturor compușilor (CMRN1 până la CMRN7) pe specia bacteriană. În cazul în
care zonele de inhibare au egalat sau au depășit 8 mm, aceste rezultate au fost înregistrate și
s-a efectuat o analiză ulterioară prin testul MIC. Determinarea concentrației minime
inhibitorii (MIC) a compușilor testați a fost investigată cu ciprofloxacină ca martor pozitiv.
Diluțiile compușilor de testat (CMRN3, CMRN5 și CMRN6) au fost preparate în DMSO la
următoarele concentrații 3 mg / ml, 1,5; 0,75; 0,37; 0,18 și 0,09 mg / ml. Ciprofloxacina a
fost utilizată ca martor pozitiv, testată la o concentrație de 3 mg / ml împotriva tuturor
speciilor bacteriene. Toate concentrațiile au fost testate împotriva speciilor bacteriene B.
cereus, B. coagulans, S. faecalis, E. coli și M. luteus.
Activitatea antifungică a fost evaluată pe trei culturi de drojdie, Candida albicans,
Candida utilis, Saccharomyces cerevisiae și două specii fungice, Aspergillus flavus și
Aspergillus niger. Culturile de drojdie au fost cultivate în bulion de dextroză Sabouraud timp
de 24 de ore la 37 ° C. Ciupercile au fost incubate la 28 ° C timp de 4 până la 7 zile în
Sabouraud Dextrose Agar până la sporulare. Sporii au fost colectați în 10 ml apă distilată
sterilă. Apa distilată sterilă conținând sporii fungici (106 spori / ml) a fost turnată peste
plăcile de bază de agar dextroză Sabouraud. Discurile de filtrare au fost preparate prin tăierea
acestora de 5 mm din hârtia de filtru Whatman nr. 1 și au fost uscate în cutii Petri sterile
deschise într-un dulap de siguranță biologică. Acestea au fost inoculate cu 10 μl de probă la o
concentrație de 3 mg / ml și plasate pe plăci de agar inoculate și incubate la 25 ° C timp de 24
de ore. Fiecare concentrație a fost testată de trei ori. 100% DMSO (10 μl) a fost utilizat ca
martor negativ și în timp ce amfotericina B, 3 mg / ml (Fluka, Biochemika) a fost utilizată ca
martor pozitiv.[7],[8]

Activitate antioxidantă
Activitatea de eliminare a radicalilor compuși a fost măsurată utilizând eliminarea
radicalilor liberi stabili, DPPH (2, 2 difenil-2-picril hidrat), test de decolorare descris de

6
(Choi și colab., 2002). Soluțiile stoc ale analogilor cumarine substituite au fost realizate în
metanol și au fost diluate la concentrații finale de 1000, 500, 250, 100, 80, 60, 40, 20 și 1 pg /
ml în metanol. Rezultatele au fost comparate cu Qeucertin-3-rutinosida, care este un puternic
antioxidant. Eliminarea radicalului a fost măsurată ca procent de decolorare a probei de
testare folosind următoarea formulă[9]:

100−(𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛ț𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑒𝑖−𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛ț𝑎 𝑚𝑎𝑟𝑡𝑜𝑟𝑢𝑙𝑢𝑖)

Capacitatea de curățare (%) = x 100
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛ț𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑢𝑙𝑢𝑖 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑣

Concluziile studiului

Investigația datelor de screening antimicrobian relevă faptul că acești compușii

sintetizați, în special CRMN3 și CRMN6, au prezentat activitate antibacteriană atât împotriva
bacteriilor Gram pozitive, cât și a celor Gram-negative. Pe baza rezultatelor, substituțiile
funcționale pe inelul benzenic măresc sau scad selectiv inhibarea activității cumarinei și
bromul pe gruparea acetil la nivelul carbonului trei de pe nucleul cumarinei pare a fi un factor
extrem de semnificativ în influențarea activității biologice a compusului. Compușii CMRN4,
CMRN7 și CMRN1 au prezentat o activitate antioxidantă considerabilă, 86, 61 și respectiv
56%.

Identificarea medicamentelor de origine anorganică

Mai multe medicamente de origine anorganică sunt electroliţi, fapt care determină
identificarea lor în soluţii după ionii (cationi sau anioni), în care acestea se descompun.
Multe preparate medicamentoase conţin unul şi acelaşi ion sau una şi aceiaşi grupă funcţională.
Aceasta a permis de a crea tehnici unificate pentru identificarea lor cu ajutorul reacţiilor
chimice.

Amoniu. La încălzirea sărurilor de amoniu cu soluţia de hidroxid de sodiu se degajă

amoniac, care poate fi identificat după miros sau prin albăstrirea hârtiei de indicator.
NH4+ + OH- → NH3↓ + H2O

Bromurile. Bromurile se identifică prin reacţia de degajare a bromului în rezultatul

reacţiei de oxido-reducere dintre bromură şi clorură în mediu acid. Bromul degajat în

7
rezultatul reacţiei se extrage cu cloroform în care el se dizolvă mai bine, colorîndu-l în
galben-brun.

Na
SO2 - N + HCl SO2 - NH2 + Cl2
Cl

2 NaBr + Cl2 Br2 + 2 NaCl

Soluţiile bromurilor cu soluţia de nitrat de argint formează precipitat gălbui cazeinos de

bromură de argint, insolubil în acid azotic şi greu solubil în soluţia de amoniac.
Br- + Ag+ → AgBr↓
AgBr + 2NH3+2H2O → [Ag(NH3)2]Br + 2H2O

Calciu. Soluţiile sărurilor de calciu cu ionul oxalat formează precipitat alb, insolubil în
acid acetic, solubil în acizi minerali diluaţi.
CaCl2 +(NH4)2C2O4 CaC2O4  + 2NH4Cl

Sarea de calciu, umezită cu acid clorhidric, colorează flacăra incoloră în roşu-cărămiziu.

Identificarea preparatelor organice

Analiza compuşilor organici de cele mai dese ori este determinată de proprietăţile
grupelor funcţionale, spre deosebire de analiza substanţelor medicamentoase anorganice.
Prezenţa mai multor grupe funcţionale influenţează efectele unor reacţii comune de identificare
şi a proprietăţilor produselor ce rezultă în urma acestora.

a. Clasele de bază ale compuşilor organici

Grupa funcţională Clasa Formula comună a clasei

-F, -Cl, -Br, -I (Hal)

Halogenoderivaţi R - Hal
Halogeni

- OH Hidroxilică Alcoolii, fenolii R - OH

-OR Eterică Eterii R -OR

8
 -SH Tiolică Tiolii (tioalcoolii, R-SH
mercaptanii)

-SR Alchiltiolică Tioeteri R-SR

-SO3H Sulfonică Sulfoacizii R-SO3H

-NH2 Aminică primară R -NH2

Aminele primare,
Aminică secundară R2 NH
NH secundare, terţiare
N Aminică terţiară R3 N

-NO2 Legăturile nitro R -NO2

Nitro Nitriţi

-C N R-C N
Ciano
Aldehide O
C O R -C H
R-C-R
Ceto Cetone
O
O O
-C OH R -C
Carboxilică Acizi carbonici OH

O O
-C R-C OR
OR Esterică Esterii

O O
-C R -C
NH2 Carboxamidă Amide NH2

b. Analiza substanţelor medicamentoase după grupele funcţionale

b.1. Grupa hidroxilică
Grupa hidroxilică intră în componenţa următoarelor grupe funcţionale – hidroxil
alcoolic, hidroxil fenolic, hidroxil enolic şi cel acid, ce intră în componenţa grupei carboxilice.
Comun pentru aceste grupe este manifestarea proprietăţilor acide de la foarte slabe (hidroxile
alcoolic) pînă la proprietăţi puternic acide (grupa carboxilică). Gradul de aciditate poate fi
influenţat nu numai de alte grupe funcţionale, prezente în compuşii cercetaţi, dar şi de radicalul
hidrocarbonic.

9
 ➢ Hidroxil alcoolic
Pentru analiza substanţelor medicamentoase după hidroxilul alcoolic se utilizează
următoarele reacţii:
• de esterificare (formarea esterilor);
• de oxidare până la aldehide, iar în unele cazuri şi pînă la acizi;
• de formare a compuşilor complecşi cu ionii de cupru (II) în mediu bazic.

Reacţiile de esterificare se efectuează în prezenţa remediilor hidrofile, cu acizi atît

anorganici, cît şi organici sau cu anhidridele lor.

Esterul acetoetilic
Reacţiile de oxidare se bazează pe proprietatea alcoolilor primari de a se oxida pînă
la aldehide, care se determină după miros. În calitate de oxidanţi se folosesc diferiţi compuşi:
permanganat de potasiu, bicromat de potasiu, hexacianoferat (III) de potasiu şi alţii.

[O] O
C2H5 - OH CH3 - C
- H2SO4 H

Reacţii de formare a compuşilor complecşi, bazate pe particularităţile alcoolilor

poliatomici pentru legăturile ce conţin în afară de hidroxil alcoolic şi grupa aminică
secundară, se obţine o coloraţie a compuşilor complecși cu sulfat de cupru (II) în mediul
alcalin.
CH2-OH CH2-O
CuSO4
Cu
CH-OH CH-O
2 NaOH
CH2-OH CH2-O

b.2. Gruparea aminică aromatică primară

Reacţia de condensare cu 2,4-dinitroclorbenzen. Aminele aromatice (şi alifatice)
primare, secundare, terţiare se condensează cu 2,4-dinitroclorbenzen, cu formare de produşi de
culoare galbenă. Aminele primare formează produşi de condensare, care reprezintă chinoni:
CUSO4
2 CH - CH - CH3 CH - CH - CH3
OH NH - CH3 2 NaOH
O NH - CH3

Cu

O NH - CH3
CH - CH - CH3
10
 Reacţia de formare a brom-derivaţilor. Aminele aromatice la interacţiunea cu

bromul, uşor substituie atomul de hidrogen al inelului benzenic în poziţia orto- şi para- la
halogen, formînd compuşi insolubili:

c. Identificarea substanţelor medicamentoase după fragmente

structurale

Acetatul. Acetatul se determină prin reacţia de formare a etilacetatului, care are miros
caracteristic de mere. În condiţiile de efectuare a reacţiei se identifică ionul-acetat şi radicalul
acetil din compuşii organici.
2CH3COOK + 2C2H5OH + H2SO4 2CH3COOC2H5 + 2H2O + K2SO4
În soluţiile neutre, acetaţii cu clorura de fier (III) formează coloraţie roşu-brună.
Acetatul de fier (III) obţinut se hidrolizează uşor.
Fe3+ + 3CH3COO- + 2H2O → Fe(CH3COO)(OH)2 + 2CH3COOH
La adăugarea acizilor minerali diluaţi culoarea dispare.

Salicilaţi. Salicililaţii care au proprietăţi acide, care sînt condiţionate de prezenţa grupei
carboxil şi a fenolului hidroxilic, formează cu clorura de fier (III) în mediu neutru săruri,
colorate în roşu-violet sau în albastru-violet. Compoziţia şi corespunzător culoarea sării
depinde de raportul cantităţii reactivului şi a ionului salicilat ( gradul de aciditate diferit a
carboxilului şi a fenolului hidroxilic). Acizii minerali substituie acidul salicilic din sărurile ei
cu ionul de fier (III), culoarea dispare, se formează un precipitat alb de acid salicilic.

O O
C C
ONa O + NaCl
+ FeCl3
FeCl
OH O

11
 Concluzii

Substanțele medicamentoase pot fi identificate prin reacții chimice în felul următor:

➢ Identificarea ionilor anorganici pe baza reacţiilor de identificare specifice
➢ Identificarea nucleului benzenic
➢ Reacţii de identificare generale ale grupărilor organice
➢ Reacţii de identificare specifice
Cu toate că substanțele medicamentoase pot fi identificate prin reacții chimice, în
ziua de azi, identificarea unei substanţe medicamentoase, necunoscute sau chiar şi parţial
cunoscute, presupune obligatoriu realizarea unui spectru UV-Vis, IR, MS, RMN, RES şi a
unor analize cromatografice. Abia după compararea spectrelor şi al comportamentului
cromatografic cu a unor etaloane se va putea conclude clar identitatea substanţei analizate.[10]

12
 Bibliografie

1. http://echa.europa.eu/ro/regulations/reach/substance-identity

2. Abdel-Wahab BF, Awad GE, Badria FA (2011). Synthesis, antimicrobial, antioxidant,

anti-hemolytic and cytotoxic evaluation of new imidazolebased heterocycles. Eur. J. Med.
Chem. 46(5):1505-1511.

3. Basanagouda M, Shivashankar K, Kulkarni MV, Rasal VP, Patel H, Mutha SS, Mohite AA
(2010). Synthesis and antimicrobial studies on novel sulfonamides containing 4-azidomethyl
coumarin. Eur. J. Med. Chem. 45(3):1151-1157.

4. Choi CW, Kim SC, Hwang SS, Choi BK, Ahn HJ, Lee MY, Park SH, Kim SK (2002).
Antioxidant activity and free radical scavenging capacity between korean medicinal plants
and flavonoids by assay-guided comparison. Plant Sci. 163(6):1161-1168.

5. Chopra D, Choudhury AR, Venugopala KN, Govender T, Kruger HG, Maguire GEM,
Row TNG (2009). 3-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-6- bromo-2h-chromen-2-one. Acta
Crystallogr. E. 65(12):3047-3048.

6. Gacche RN, Jadhav SG (2012). Antioxidant activities and cytotoxicity of selected

coumarin derivatives: Preliminary results of a structure– activity relationship study using
computational tools. J. Exp. Clin. Med. 4(3):165-169.

7. Munshi P, Venugopala KN, Jayashree BS, Row TNG (2004). Concomitant polymorphism
in 3-acetylcoumarin: Role of weak CH...O and C-H...pi Interactions. Crys. Growth Des.
4:1105-1107.

8. Smyth T, Ramachandran VN, Smyth WF (2009). A study of the antimicrobial activity of

selected naturally occurring and synthetic coumarins. Int. J. Antimicrob. Age 33(5):421-426.

9. Venugopala KN, Rashmi V, Odhav B (2013). Review on natural coumarin lead

compounds for their pharmacological activity. BioMed. Res. Int. Article ID 963248.

10. https://www.academia.edu/13139547/Identificarea_prin_reac%C8%9Bii_chimice_a_SM

13