UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN

VETERINAR BUCURETI

FACULTATEA DE BIOTEHNOLOGII

Master: Biotehnologii farmaceutice

LUCRARE DE DISERTAIE
STUDIUL FARMACOGNOSTIC AL PRODUSELOR VEGETALE
OBINUTE DE LA SPECIA INDIGEN ANETHUM GRAVEOLENS

COORDONATOR TIINIFIC:

Confereniar dr. ALINA ORAN

ABSOLVENT:

Gogoaa Camelia Georgiana

0
 Bucuresti
2017
Cuprins

Introducere 2

CAPITOLUL 1:DATE GENERALE PRIVIND ULEIURILE VOLATILE 4

1.1 Introducere 4

1.2 Scurt istoric 4

1.3 Rspndire i localizare 5

1.4. Obinerea uleiurilor volatile 5

1.5. Compoziie chimic 6

1.6. Factori determinani ai calitii uleiurilor volatile 7

1.7. Aciune 7

1.8. Utilizri actuale ale uleiurilor volatile 8

CAPITOLUL 2: DATE GENERALE PRIVIND SPECIA ANETHUM GRAVEOLENS (mrar) 9

2.1. Scurt istoric 9

2.2. ncadrare sistematic 9

2.3. Etimologie 9

2.4. Descrierea speciei 10

2.5. Cultivare i recoltare 11

2.6. Compoziie chimic 12

2.7. Aciune farmacologic 13

2.8. Utilizri 14

CAPITOLUL 3: STADIUL ACTUAL AL CERCETRILOR PRIVIND ANETHI AETHEROLEUM (uleiul 15

volatil de Anethum graveolens)

3.1. Caracteristici fizico-chimice. 15

3.2. Metode de extracie 15

3.3. Cercetri fitochimice anterioare 16

3.4. Factori determinani ai calitii uleiurilor volatile 18

3.5. Compui care influeneaz aroma 19

3.6. Standarde i indici de calitate 19

3.7. Aciune 19

3.8. Efecte adverse 21

3.9. ntrebuinri 21

CAPITOLUL 4: CERCETRI PRIVIND CARACTERIZAREA SPECIEI ANETHUM GRAVEOLENS I A 22

ULEIULUI VOLATIL ANETHI AETHEROLEUM - MATERIALE I METODE

1
4.1 Verificarea identitii i calitii produselor vegetale Anethi flores, Anethi fructus i Anethi folium 22

4.1.1. Verificarea identitii 22

4.1.2. Determinarea puritii 30

4.1.3. Verificarea calitii 31

4.2. Analiza cromatografic 34

4.2.1. Separarea i identificarea prin cromatografie n strat subire (CSS) a unor constitueni chimici 34

4.2.2. Studiul prin CSS al flavonelor i ODP-urilor 34

4.2.3. Studiul prin CSS al cumarinelor 35

4.2.4. Studiul prin CSS al sterolilor i triterpenelor 36

CAPITOLUL 5: REZULTATE I DISCUII PRIVIND STUDIUL FARMACOGNOSTIC AL 37

PRODUSELOR ANETHI FRUCTUS, ANETHI FLORES, ANETHI FOLIUM I ANETHI AETHEROLEUM

5.1. Verificarea identitii 37

5.2. Determinarea puritii 50

5.3. Verificarea calitii 51

5.4. Separarea i identificarea prin cromatografie n strat subire (CSS) a unor constitueni chimici 57

CAPITOLUL 6: CONCLUZII 62

BIBLIOGRAFIE 63

Introducere

Plantele constituie surse bogate pentru toate clasele de compui chimici i n acelai timp
posed numeroase proprietti farmacologice ce sunt larg exploatate n terapeutic, datorit
eficacitii i toxicitii minime. Medicina bazat pe plante a fost larg practicat pn la nceputul
secolului 20, cnd a fost rapid abandonat, datorit introducerii noilor medicamente sintetice, ce
puteau fi produse cu costuri mai sczute i ale cror beneficii asupra sntii umane puteau fi
cuantificate mai rapid. n ultimii ani totui, apariia microorganismelor rezistente la medicamente
i riscul pe care acestea l reprezint pentru sntate au rennoit interesul pentru extractele din
plante.
Schimbarea cerinelor consumatorilor, creterea interesului public, contientizarea
cerinelor de sntate i, nu n ultimul rnd, posibilitatea utilizrii uleiurilor volatile n
biotehnologie au deschis o nou pagin n fitomedicina modern. Aceste tendine au condus la
ncurajarea cultivrii, procesrii i distribuiei plantelor aromatice i medicinale.
Mrarul (Anethum graveolens) este o planta anual din familia Apiacee, originar din sud
vestul Asiei sau sud estul Europei.
Ca plant medicinal, mrarul are o istorie de peste 2000 de ani. Fructele constituie un
remediu casnic comun i foarte folositor ntr-un domeniu larg de probleme digestive. Sub form
de infuzie, sunt deosebit de eficiente n tratarea colicilor la bebelui i flatulenei la copii.
Fructele au proprieti carminative (reduc flatulena i favorizeaz diminuarea gazelor din
intestine), uor diuretice (acioneaz asupra rinichilor), galactogene (poteneaz secreia de lapte
la luze), stimulante (grbesc procesele fiziologice; acioneaz mai rapid ca un tonic, dar diferit

2
fa de narcotice, n sensul c nu creeaz falsa senzaia de bine), stomahice (stimuleaz secreia
gastric). Prin mestecarea fructelor se mbuntete respiraia urt mirositoare. De asemenea,
mrarul poteneaz aciunea remediilor clasice pentru tuse, rceli i gripe i poate fi utilizat
mpreun cu antispastice pentru a ameliora durerile menstruale.
Termenul plant de mrar se refer n general la frunze i uneori la tulpin, iar cel de
semine este impropriu i se refer la fructe. Att frunzele, ct i fructele, conin un ulei volatil
de care depinde actiunea acestora.
Uleiurile volatile (aetherolea) sunt produi ai metabolismului secundar vegetal secretai
de celule specializate n acest scop, repartizai n diferite organe i depozitai n vacuole, pungi
sau canale secretorii sau n peri glandulari, sub form de lichide uleioase, volatile, cu miros
plcut, aromat. Ele sunt amestecuri de diveri constitueni chimici, dotai cu interesante
proprieti terapeutice.
Numeroase studii au demonstrat c uleiurile volatile din plante sunt mai eficiente dect
extractele n ceea ce privete tratamentul patologiilor infecioase ale sistemului respirator,
tractului urinar, gastrointestinal, sistemului biliar sau pielii. Au fost desfurate nenumrate
cercetri care s demonstreze proprietile antibacteriene, antifungice, antivirale,
antiinflamatoare, antioxidante i altele ale uleiurilor eseniale n general i uleiului volatil de
mrar n particular.
Dei uleiurile volatile pot fi produse de o populaie endemic, totui exist suficiente
motive pentru ca s existe o variaie considerabil a compoziiei i ca urmare a calitii uleiurilor
provenite din plante aromatice. Factori genetici, fiziologici i de mediu pot juca un rol important.
Avnd n vedere aceste considerente, scopul principal al acestei lucrri a fost
determinarea identitii, puritii i calitii produselor vegetale Anethi flores, Anethi fructus i
Anethi folium i a uleiului volatil Anethi aetheroleum obinute de la specia indigen Anethum
graveolens, condiie necesar avizrii acestora pentru ntrebuinri terapeutice.
Pentru atingerea scopului propus s-au avut n vedere mai multe obiective:
verificarea calitii prin stabilirea compoziiei chimice, sub aspect cantitativ, a produselor
vegetale utilizate.
dozarea principiilor active (flavone, odp-uri i ulei volatil)
separarea i identificarea prin cromatografie n strat subire a unor constitueni chimici
din clasele de principii active implicate n aciunea terapeutic a acestor produse vegetale

3
 CAPITOLUL 1 DATE GENERALE PRIVIND ULEIURILE VOLATILE

1.1. INTRODUCERE

Definiie. Uleiurile volatile (aetherolea) sunt produi ai metabolismului secundar vegetal

secretai de celule specializate n acest scop, repartizai n diferite organe i depozitai n vacuole,
pungi sau canale secretorii sau n peri glandulari, sub form de lichide uleioase, volatile, cu
miros plcut, aromat. Ele sunt amestecuri de diveri constitueni chimici, dotai cu interesante
proprieti terapeutice.
Exist mai multe denumiri pentru uleiurile volatile, cum ar fi uleiuri eseniale, eterice,
esene. Dintre toate, cea de uleiuri volatile este cea mai adecvat, deoarece definete volatilitatea
acestora la temperatura ambiant, datorit tensiunii de vapori crescute. Celelalte denumiri sunt
considerate improprii: termenul uleiuri eterice ar trebui s caracterizeze amestecurile de eteri,
ori uleiurile volatile au n compoziia lor i muli ali constitueni care nu sunt eteri, iar termenul
de uleiuri eseniale sau esene se aplic tuturor principiilor mirositoare degajate de
substanele naturale, chiar i acelora care au rezultat n urma unui proces fizic, chimic sau
enzimatic.
Utilizarea plantelor cu uleiuri volatile (numite i plante aromatice) sau numai a uleiurilor
volatile n lupta contra maladiilor infecioase sau psihice poart denumirea de aromaterapie. Mai
recent, termenul se aplic numai pentru terapia cu uleiuri volatile.

1.2. SCURT ISTORIC

Materia prim pentru producia de uleiuri volatile provine n general din zonele cu clim
temperat sau mediteraneean. Importana economic a plantelor aromatice poate fi gsit chiar
din lumea antic, atunci cnd esenele i parfumurile erau considerate bunuri valoroase.
Descoperirile arheologice au artat c producia de uleiuri eseniale prin distilare este cunoscut
de peste 4000 de ani. Esenele provenite din Orient, rile arabe i sudul Asiei erau considerate
comori i erau vndute pe pieele europene din Grecia Antic i Roma Veche. Alchimitii
perioadei renascentiste au nceput s studieze plantele indigene ale Europei centrale, fiind
interesai nu numai de parfumul i proprietile aromatizante ale acestora, dar mai ales de
atributele lor medicale. Apariia tiparniei n secolul al 15-lea a condus la publicarea
cunotinelor despre plante n numeroase lucrri ntre anii 1450 i 1650.
Revoluia Industrial a mers mn n mna cu revoluia tiinific n ceea ce privete
nlocuirea alchimiei cu chimia modern, bazat pe deducii logice i metode analitice. La
nceputul secolului 20, medicina bazat pe plante medicinale i aromatice a pierdut mult din
importana ei, datorit apariiei industriei farmaceutice, ce a introdus nlocuitori sintetici ai
compuilor bioactivi naturali.
Introducerea uleiurilor volatile n fitofarmacia modern s-a datorat punerii bazelor
aplicaiilor aromaterapeutice n Frana i Anglia, n anii 1920. Fiind o surs de aplicaii medicale,
au aprut n numeroase ri i comuniti monografii i farmacopee, n care se reglementeaz
cerinele de calitate ale uleiurilor volatile (AFNOR, 1996, Farmacopeea European V, 1).

4
 Schimbarea cerinelor consumatorilor, creterea interesului public, contientizarea
cerinelor de sntate i, nu n ultimul rnd, posibilitatea utilizrii uleiurilor volatile n
biotehnologie au deschis o nou pagin n fitomedicina modern. Aceste tendine a condus la
ncurajarea cultivrii, procesrii i distribuiei plantelor aromatice i medicinale.

1.3 RSPNDIRE I LOCALIZARE

Uleiurile volatile se gsesc n aproximativ 2000 de specii de plante, din 60 de familii

diferite, n plante superioare aparinnd unor ordine ale angiospermelor (Asterales, Apiales,
Arales, Laurales, Lamiales, Magnoliales, Poales, Rutales, Sapindales, Zingiberales) sau
gimnospermelor (Pinales) (2). Dintre plantele aromatice, condimentele, provenite n principal din
specii tropicale, sunt cunoscute a conine concentraii ridicate de uleiuri volatile, de pn la 20%
(3). Dei compuii terpenici sunt caracteristici regnului vegetal, s-au semnalat cteva
monoterpene biosintetizate de bacterii din sol (acetat de bornil, geosmina), de insecte (probabil
feromoni), precum i sesqui- i diterpene de origine animal (Celentere, Spongiere) (4).
Sinteza i acumularea de uleiuri volatile au loc fie n exteriorul plantei, n peri glandulari
(Asteraceae, Geraniaceae, Lamiaceae, Moraceae) i n papile (Rosa sp), fie n interiorul ei, n
celule secretorii (Araceae, Lauraceae, Magnoliaceae, Piperaceae, Zingiberaceae), n spaii
intercelulare de origine schizogen sau schizolizigen), respectiv n canale secretorii
(Abietaceae, Apiaceae, Asteraceae, Euphorbiaceae, Geraniaceae, Papilionaceae, Rubiaceae,
Rosaceae) sau n pungi secretorii (Anacardiaceae, Burseraceae, Dipterocarpaceae,
Hypericaceae, Lauraceae, Myrtaceae, Rutaceae, Santalaceae).
Uleiurile volatile se pot acumula n toate organele plantei, ns n cantiti diferite. Astfel,
le ntlnim n rdcini, rizomi, frunze, fructe, semine, n lemnul tulpinilor sau n scoar, n toat
partea supraterestr. Dei toate organele unei specii pot conine ulei volatil, compoziia acestuia
variaz n funcie de organul n care se gsete. n plante uleiurile volatile se gsesc ca atare
(uleiuri preformate) sau pot lua natere n urma unor reacii enzimatice (uleiuri nepreformate).
Este cazul geozidei din Gei rhizoma, din care se formeaz eugenolul, constituentul principal din
Caryophylli aetheroleum i al senevolilor volatili rezultai prin hidroliza glucosinatelor
respective, n prezena mirozinazei.

1.4. OBINEREA ULEIURILOR VOLATILE

La baza metodelor de extracie a uleiurilor volatile din produsele vegetale stau

proprietile lor fizico-chimice, n special tensiunea mare de vapori i solubilitatea n solveni
volatili neapoi i n substane grase. Principalele procedee de extracie sunt prezentate n tabelul
1.1. Produsele supuse extraciei pot fi att proaspete, ct i uscate, ntregi sau fragmentate
(frunze, ierburi), concasate (organe subterane) sau sub form de rumegu (lemnul).
Alegerea metodei adecvate de extracie se face n funcie de cantitatea de ulei din
produsul vegetal, de localizarea i de proprietile lui fizico-chimice. De exemplu, produsele
vegetale avnd un coninut ridicat de ulei volatil se pot supune presrii, cele cu coninut mediu se
prefer distilarea sau antrenarea cu vapori de ap, iar cele cu coninut mic extracia cu solvent
volatil sau cu substane lipofile (5).
Tabelul 1.1
Table 1.1

5
 Tehnici clasice pentru producia de uleiuri volatile Classical
methods for volatile olis productions

Tehnic
Distilare cu vapori de ap n circuit deschis
Distilare n circuit nchis
Antrenarea cu vapori de ap
Presare la cald
Presare la rece
Extracie cu solveni volatili apolari
Observaii
prezint dezavantaje: hidroliza esterilor datorit
temperaturii ridicate, antrenarea cumarinelor, oxidarea
alcoolilor, aldehidelor i cetonelor
obinere direct a uleiului volatil
ulei superior calitativ celui obinut prin distilare
produse vegetale proaspete cu un continut ridicat in ulei
volatil
produse vegetale proaspete cu un continut sczut in ulei
volatil ulei volatil uor alterabil

Extracie cu solveni nevolatili la cald sau la rece; se obine pomad floral

Extracie cu gaze supercritice se utilizeaz n general dioxid de carbon lichid; se
obin extracte cu o compoziie foarte apropiat de
produsele naturale

1.5. COMPOZIIE CHIMIC

Numeroase publicaii au prezentat date despre compoziia diferitelor uleiuri volatile,

obinut prin gaz cromatografie i spectrometrie de mas (6,7, 8, 9, 10, 11). Uleiurile volatile
sunt amestecuri naturale foarte complexe, ce cuprind chiar i peste 60 de componente, n diferite
concentraii (12, 13). Componenii majori pot ajunge pn la 85% din uleiul volatil, n timp ce
ceilali sunt prezeni doar n urme (13, 14). De exemplu, carvacrolul (30%) i timolul (27%) sunt
componentele majoritate n uleiul esenial de Origanum compactum, linalolul (68%) n
Coriandrum sativum, - i -tuiona (57%) i camfora (24%) n uleiul esenial de Artemisia alba,
-felandrenul (36%), limonenul (31%) i carvona (58%), limonenul (37%) n uleiul volatil de
Anethum graveolens din frunze, respectiv fructe, mentolul (59%) i mentona (19%) din uleiul
volatil de Mentha piperita. n general, aceste componente majore determin proprietile
biologice ale uleiurilor volatile.
Constituenii predominani n uleiurile volatile sunt terpenele i terpenoidele, dar exist i
compui aromatici sau ali compui de origine divers, cum ar fi diveri compui alifatici, cu
mas molecular mic (15, 16, 17, 18).
Terpenele pot fi definite ca un grup de molecule a cror structur este bazat pe un
numr variabil, dar bine definit de uniti de izopren (C 5). O terpen ce conine oxigen se
numete terpenoid (pot fi alcooli, aldehide, cetone). n funcie de numrul de grupri izopren
prezente, terpenele se mpart n: monoterpene (2 uniti izopren, C10), sesquiterpene (C15),
diterpene (C20), triterpene (C30), tetraterpene sau carotenoizi (C40). Monoterpenele i
sesquiterpenele sunt cele mai reprezentative molecule, constituind 90% din uleiurile eseniale
(figura 1.1). Ele au o mare varietate de structuri, ca de exemplu: hidrocarburi, alcooli, aldehide,
cetone, esteri, eteri, peroxizi i fenoli.

6
 Monoterpene
aciclice monociclice biciclice triciclice

mircen -terpinene pinen triciclen

Sesquiterpene
aciclice monociclice biciclice triciclice tetraciclice

(E,E)--farnesen germacren D -cadinen -burbonen nortetrapatchulen

Fig. 1.1. - Clasificarea monoterpenelor i sesquiterpenelor

Fig. 1.1 - Clasification of monoterpenes and sesquiterpenes

Compuii aromatici. Mult mai puin rspndii dect terpenoidele, derivaii aromatici
sunt alil- sau propenil-fenoli. Ei cuprind: aldehide (cinamaldehida), alcooli (alcoolul cinamic),
fenoli (eugenol), derivai metoxi (anetol, metileugenol,astragol, elemicin), compui dioxi
metilen (apiol, miristicin, safrol). Principalele surse din plante pentru aceti compui sunt:
anason, scorioar, cuioare, fenel, nucoar, ptrujel, sasafras, taragon i cteva familii botanice
(Apiaceae, Lamiaceae, Mirtaceae, Rutaceae).

1.6. FACTORI DETERMINANI AI CALITII ULEIURILOR

VOLATILE

Dei uleiurile volatile pot fi produse de o populaie endemic, totui exist suficiente
motive pentru ca s existe o variaie considerabil a compoziiei i ca urmare a calitii uleiurilor
provenite din plante aromatice. Factori genetici, fiziologici i de mediu, care sunt prezentai n
tabelul 1.2, pot juca un rol important (4, 19, 20, 21, 22, 23). Astfel, pentru a obine uleiuri
volatile cu o compoziie constant, ele trebuie s fie extrase n aceleai condiii, din acelai organ
al plantei care a crescut n acelai tip de sol, n acelai climat i a fost recoltat n acelai sezon.
Majoritatea uleiurilor eseniale comercializate sunt standardizate prin analize cromatografice i
de spectrometrie de mas.

1.7. ACIUNE

Aciunea uleiurilor volatile variaz n limite foarte largi, n funcie de ansamblul

constituentilor chimici i de proporiile lor n amestec (24).
Proprietile antiinfecioase se datoresc capacitii unor constitueni de a distruge
germenii infecioi (bacterii, virusuri, fungi, parazii) i de a se opune proliferrii lor n
7
organismele vii sau n mediul nconjurtor. n funcie de modul n care actioneaz, se deosebesc
uleiuri volatile cu aciune antiseptic (principalele componenete responsabile de aceast aciune
sunt: carvacrol, timol, eugenol) (25, 26, 27), antibacterian (cineol, estragol, anetol)(28, 29,
30), antiviral (cuplul 1,8-cineol-linalol, cuplul linaloloxid-linalol, estragol)(31, 32, 33),
antifungic (carvona, spatulenolul, estragolul, verbenona)(34,35, 36), antiparazitar (ascaridol,
piperiton-oxid,carvacrol, timol, eugenol)(37, 38). Proprietile insecticide i insectifuge sunt
imprimate de citronelal, camfor, eugenol i aldehid cinamic (39). Proprieti cicatrizante, pe
esuturile cutanate i mucoase, au ndeosebi uleiurile volatile cu cetone.
Tabelul 1.2
Table 1.2
Factori care influeneaz compoziia uleiurilor eseniale Factors
influencing the composition of the essential oils

Factor Descriere

Genetic Taxonic clon, hibrid, varietate, populaie

Infraspecific chemotipuri

Fiziologic Ontogenetic schimbri de dezvoltare

organul plantei diferene morfologice

De mediu Climat lumin, temperatur, factori edafici

Origine latitudine, ar, continent

Agronomic cultivare,fertilizani,irigaii,timp de recoltare

De procesare Extracie distilare, macerare, presare

Depozitare efecte de mbtrnire

Standardizare direct n uleiul esential

1.8. UTILIZRI ACTUALE ALE ULEIURILOR VOLATILE

n Uniunea European, principalele ntrebuinri ale uleiurilor volatile sunt n industria

alimentar (aromatizani), industria parfumurilor (parfumuri i aftershave-uri) i in industria
farmaceutic (pentru proprietile lor funcionale) (40, 41, 42). Binecunoscuta utilizare a
uleiurilor volatile n aromaterapie constitie puin mai mult de 2% din ntreaga pia (42). n
industria alimentar se folosesc de asemenea compui individuali ai uleiurilor eseniale, fie
extrai direct din plant, fie de sintez (43).
Proprietile antibacterine ale uleiurilor volatile i ale componentelor lor sunt exploatate
n diverse produse comerciale, ca de exemplu sigilatoare de canale dentare (44), antiseptice (40,
45), suplimente alimentare (46, 47). Cteva conservante alimentare ce conin uleiuri eseniale
sunt deja comercializate (de exemplu, DMC Base Natural (este un conservant produs de
DOMCA S.A., Alhendn, Granada, Spania i conine 50% uleiuri volatile din rozmarin i lmie
i 50% glicerol) (48). Efectele fiziologice ale uleiurilor volatile sunt folosite ntr-o varietate lag
de produse, cum ar fi inhibitorul de ncolire a cartofului sau insecticide (49).
8
 CAPITOLUL 2 DATE GENERALE PRIVIND SPECIA ANETHUM
GRAVEOLENS (mrar)

2.1. SCURT ISTORIC

Mrarul este o plant anual originar din regiunea mediteraneean i sudul Rusiei. Dei
numeroase crengue de mrar au fost gsite in mormntul Faraonului egiptean Amenhotep II
(1427-1400 C), totui se pare c evidene arheologice ale cultivrii mrarului au fost gsite chiar
din Neoliticul trziu, n aezminte de pe malul lacurilor din Elveia de astzi. Urme au fost
reperate de asemenea i n ruinele romane din Marea Britanie. Certificri ale folosirii acestei
plante apar att n Talmud (acesta cere ca zeciuiala s fie pltit n semine, frunze i tulpini de
mrar), ct i n Biblie (fariseii plteau zeciuiala n mrar, ment i chimen).

2.2. NCADRARE SISTEMATIC

Regn: Plantae
ncrengtur: Magnoliophyta
Clas: Magnoliopsida
Ordin: Apiales
Familie: Apiaceae
Gen: Anethum
Specie: graveolens
Familia Apiaceae conine 300 - 400 de genuri i 3000 - 3750 de specii, distribuite n
special n emisfera nordic (50, 51). Acestea includ legume importante din punct de vedere
economic (ca de exemplu morcov, pstrnac, elin) i condimente (coriandru, anason, chimen,
chimion, ptrunjel, mrar). Speciile de apiacee au o arom caracteristic, datorat n principal
diverilor compui volatili din fructe i frunze, ce le confer att o larg ntrebuinare n
domeniul culinar, ct i numeroase aplicaii n medicina tradiional.

2.3. ETIMOLOGIE

n romn, denumirea de mrar apare, probabil, prin confuzie cu feniculul, ale crui
frunze sunt asemntoare, i care era numit n greaca veche maratho.
Denumirea englez dill este nrudit cu cea din limbile nordice vechi dilla (care
nseamna calmant) ce era folosit la calmarea crampelor stomacale la copiii mici. n german,
mrarul se numeste dille, n finlandez tilli, n lituanian dilles, n estonian till i n
galez dile.
Cele mai multe limbi slave au i ele o denumire comun pentru mrar: kopur n
bulgar, krip n ucrainian, ukrop n rus, kopor n slovac, koper n polonez i
kopr n ceh. Aceste denumiri deriv din rdcina slav kapr, care nseamn mrar i care
ar putea fi legat de lituanianul kvapas, care nseamn miros sau arom.

9
 Denumirea botanic amomum vine de la grecescul aneton, din care deriv i numele
anasonului. Specia graveolensis nseamn puternic aromat (din latinescul gravis, adica greu
i olens ce nseamn mirositor).
Denumirile n limbile romanice deriv din latinescul anethum, aneto n italian i
aneth n francez. Denumirea iberic sau cea portughez endro a fost transferat i n unele
limbi orientale: ender n maleez, inondo n japonez i inondu n coreean.

2.4. DESCRIEREA SPECIEI

Mrarul este o plant anual (Anethi herba) ce atinge n mod obinuit o nlime de
0,61m. Frunzele sunt subiri, lungi i dispuse n form de pan (tripenat-sectate), aezate pe o
tulpin cilindric, neted, fistuloas. Planta se aseamn cu feniculul, dar spre deosebire de
acesta, mrarul prezint adesea mai multe tulpini, iar rdcina sa lung, cu form de pivot, este
doar anual. Inflorescena (Anethi flores) este o umbel compus, iar florile de culoare
galbenverzuie au petale mici, rulate ctre interior (figura 2.1). Florile parfumate sunt
hermafrodite, planta fiind autofertilizant. Mrarul are un gust dulce i aromatic, intermediar
ntre anason i chimen.

Fig. 2.1: Anethum graveolens

Fructul (Anethi fructus) este eliptic, cu o lungime de 3,5 mm; este o diachen, care la
maturitate se transform n dou mericarpe libere, de dimensiuni mici (figura 2.2). Gustul
fructului se aseamn oarecum cu cel al chimenului, fiind aromatic i puin amrui.

10
 Fig. 2.2: Anethi fructus

Termenul plant de mrar se refer n general la frunze i uneori la tulpin, iar cel de
semine este impropriu i se refer la fructe. Att frunzele, ct i fructele, conin un ulei volatil
de care depinde actiunea acestora.
Variabilitatea speciei. Pentru mrar exist mai multe varieti (52), ca de exemplu
Superdukat Aros Umbrela, Armenesc, Bravo sau planta selecionat de origine
american Bouquet (53), care are o producie nsemnat de fructe. Specia nrudita Anethum
sowa din India are frunze mai mari i o arom uor diferit de celelalte varieti (53).
Produse folosite: partea aeriana (Anethi herba), fructele (Anethi fructus), uleiul volatil
obinut prin distilarea fructelor sau prilor aeriene, fructificate (Anisi aetheroleum).

2.5. CULTIVARE I RECOLTARE

2.5.1.Cultivare. Mrarul este o plant comun de cultur, ntlnit n special n zonele cu

o clim cald i tropical. Se cultiv n special datorit comestibilitii frunzelor i fructelor, dar
i datorit ntrebuinrilor medicale. Se poate cultiva bine mpreun cu porumbul i varza, cu
moderaie mpreun cu elina i inhib creterea morcovilor (54, 55, 56).
Planta prefer solurile uoare (nisipoase) i medii (argiloase), bine drenate, dar umede.
Pentru cultivare n condiii optime, solul trebuie s aib un pH ntre 5,3 i 7,8. O plant viguroas
necesit locaii nsorite, ferite de umbr, chiar i umbra parial reducnd substanial producia;
este sensibil la schimbrile de mediu, de tipul umiditate sczut, temperaturi foarte ridicate,
vnturi i ploi puternice n timpul nfloririi i maturrii seminelor (57). Mrarul este intolerant la
disturbarea rdcinilor, de aceea nu poate fi transplantat.
Pe scar industrial, nsmnarea se face n martie sau aprilie, n rnduri situate la o
distan de 0,30 - 0,60m, 0,25 m distan ntre plante, la o adncime de 2 - 2,5cm. Se folosesc 9 -
11 kg de semine la hectar (58). O cantitate regulat de frunze poate fi obinut prin nsmnare
succesiv (de 4 ori), la un interval de 20 de zile. Uneori, mrarul se planteaz i toamna, dar
nsmnarea de primvar este totui recomandat. Germinarea apare n dou sptmni, n
condiii de clim cald. Cultura rmne n stare vegetativ timp de 40-67 de zile, iar nflorirea /
apariia fructelor n urmtoarele 85 90 de zile.
2.5.2 Fertilizare. Mrarul rspunde bine la nivele ridicate de fertilizante. n general, sunt
necesare 60 kg / ha de azot i 33 kg / ha de fosfor. Dac solul este srac n potasiu, o aplicare de
33 44 kg / ha poate fi necesar. Fertilizantele nu trebuie aplicate direct pe plant.

11
 2.5.3. Recoltare. Recoltarea industrial pentru fructe se face cnd acestea ncep s se
coac. n perioadele uscate, este bine ca tierea plantelor s se fac dimineaa devreme cnd
cultura este umed, avndu-se grij la manipulare pentru a evita pierderea seminelor. Recoltarea
pentru uleiul volatil trebuie fcut cnd primele fructe devin maronii, n aceast perioad
calitatea i cantitatea uleiului volatil fiind optime. Snopii formai se aeaz n grmezi de cte 20
de buci i se leag mpreun. Cnd vremea este cald, treieratul se poate face direct n cmp,
prin aezarea snopilor legai pe o pnza tare i baterea lor. Producia este n general de 560 - 900
kg de semine la hectar (58). Seminele obinute se mprtie apoi n tvi i se usuc la soare sau
prin nclzire ntr-un cuptor o perioada scurt de timp.
Recoltarea neindustrial pentru semine se face prin tierea umbelelor de flori de pe
tulpin cnd acestea ncep s se coac. Umbelele astfel obinute se introduc in pungi de hrtie cu
inflorescena n jos i se las ntr-un loc cald i uscat timp de o sptmn. Seminele se separ
apoi uor i se depoziteaz n recipiente ermetice.
Momentul de recoltare este foarte important n creterea produciei de semine, deoarece
acestea tind s se coac la momente diferite, scuturarea lor fiind o potenial problem. n
general, recoltarea pentru frunze i uleiul volatil din frunze se face nainte ca planta s
nfloreasc, iar recoltarea pentru semine atunci cnd majoritatea sunt mature din punct de vedere
fiziologic. Plantele folosite pentru obinerea de ulei esenial sunt supuse distilrii chiar n ziua
recoltrii, pentru a minimiza pierderile de compusi volatili.
Principale zone de producie sunt India i Pakistan, dar exist zone de producie
comercial i n Egipt, Fiji, Mexic, Olanda, Statele Unite, Anglia, Ungaria, Germania i
Romnia.

2.6. COMPOZIIE CHIMIC

Frunzele i fructele au compoziii chimice diferite i de aceea i ntrebuinrile lor

culinare i aplicaiile medicale sunt diferite. n tabelul 2.1 sunt prezentate principalele
caracteristici chimice pentru frunz i fruct, ca valori medii pe 100 g de produs (59).
n ceea ce privete compoziia fitochimic n funcie de produsul folosit, literatura de
specialitate menioneaz:
Anethi fructus conine 2,5-8% ulei volatil, flavonozide (mai ales 3-O-beta-Dglucuronida
kempferolului), cumarine simple (umbeliferon), furanocumarine (bergapten, xantotoxin),
ftalide, acizi polifenolcarboxilici
Anethi herba conine 0,2-2,3% ulei volatil, flavonozide (3-O-beta-D-
glucuronidacvercetolului i 3-ramnoglucozida-izoramnetolului, cvecetol, izoramnetol), cumarine
(scopoletol, cumarin) i furanocumarine, ftalide.
Tabelul 2.1
Table 2.1

Compoziia chimic medie pentru frunze i fructe de Anethum graveolens

Average chemical composition for leaves and fruits of Anethum graveolens

12
 Nutrient: Frunz Fruct
Cantitate medie in 100g Cantitate medie n 100g
produs: produs

Apa 7.3 g 7.7g

Energie 253 kcal 305kcal
Proteine 20 g -
Total lipide (grasimi) 4.4 g 14.5 g
Cenusa 12.6 g 6.7 g
Carbohidrati, prin diferenta 55.8 g 55.2 g
Fibre alimentare 11.9 g 21 g
Calciu, Ca 1784 mg 1516 mg
Fier, Fe 48.8 mg 16.3 mg
Magneziu, Mg 451 mg 256 mg
Fosfor, P 543 mg 277 g
Potasiu, K 3308 mg 1186 mg
Sodiu, Na 208 mg 20 mg
Zinc, Zn 3.3 mg 5.2 mg
Tiamina, Vitamina B1 0.42 mg 0.42 mg

Riboflavina (Vitamina B2) 0.28 mg 0.28

Vitamina A (UI) 5850.000 IU 53 IU
Vitamina A, RAE 293.000 mg RAE -
Retinol - -
Acizi grasi, total saturati 0.234 g 0.73 g
Colesterol - -

2.7. ACIUNE FARMACOLOGIC

Ca plant medicinal, mrarul are o istorie de peste 2000 de ani. Fructele constituie un
remediu casnic comun i foarte folositor ntr-un domeniu larg de probleme digestive. Sub form
de infuzie, sunt deosebit de eficiente n tratarea colicilor la bebelui i flatulenei la copii.
Fructele au proprieti carminative (reduc flatulena i favorizeaz diminuarea gazelor din
intestine), uor diuretice (acioneaz asupra rinichilor), galactogene (poteneaz secreia de lapte
la luze), stimulante (grbesc procesele fiziologice; acioneaz mai rapid ca un tonic, dar diferit
fa de narcotice, n sensul c nu creeaz falsa senzaia de bine), stomahice (stimuleaz sectreia
gastric)(58, 61, 62, 63). Prin mestecarea fructelor se mbuntete respiraia urt mirositoare
(64). De asemenea, mrarul poteneaz aciunea remediilor clasice pentru tuse, rceli i gripe i
poate fi utilizat mpreun cu antispastice pentru a ameliora durerile menstruale (64).

13
2.8. UTILIZRI

a. Utilizri terapeutice.
Anethi herba et fructus se utilizeaz n tulburri digestive nsoite de meteorism,
flatulen i uoare spasme gastro-intestinale, unele afeciuni urinare, insomnii, hiposecreie
lactat.
Reactii adverse. Pe lng toate aceste beneficii pe care le poate aduce planta (fructe i
frunze), totui exist studii care demonstreaz ca mrarul poate cauza fotosensibilitate i / sau
dermatite de contact la unii subieci umani (59). Aceste efecte secundare pot fi explicate prin
prezena furanocumarinelor.
Toxicitate. Cetonele imprim uleiului volatil proprieti neurotoxice i abortive. n
organismul uman, dilapiolul (eter-oxid arilic metoxilat) s-ar putea biotransforma n precursori
amfetaminici.
Contraindicaii. La copii i femei gravide (uleiul, datorit cetonelor.
Forme farmaceutice. Infuzie, tinctur Preparate farmaceutice:
- Nutrinatal (o capsul conine 0,030 g Anethi herba, 0,020 g Anisi fructus, 0,015 g lptior
de matc)
- Tonic feminin (conine mrar, lemn dulce, salvie, elin, creioar, traista ciobanului,
ceap)
- Tinctura de mrar
Posologie. Doza medie zilnic este de 3 g fructe sau 0,1-0,3g ulei volatil.

b. Utilizri culinare. Mrarul este foarte popular n Europa i Asia occidental, central i
sudic. n Europa este folosit ndeosebi la murturi, alturi de legume, pete i oeturi aromate cu
plante. n Europa de nord, mrarul este folosit frecvent ca element decorativ pentru salate i
legume. Frunzele proaspete de mrar sunt un condiment naional n rile scandinave, unde
petele i scoicile sunt aromate cu mrar i servite alturi de sosuri coninnd mrar. n
Germania, mrarul este folosit la supele de pete i la tocane. n Armenia, mrarul este un
ingredient n amestecul picant khmeli-suneli. n Iran, este de asemenea foarte popular i de
nenlocuit pentru mncrurile de fasole. n India, semintele de mrar uscate sunt folosite
ocazional la aromatizarea lintei i fasolei. De asemenea, att frunzele, ct i din seminele se pot
utiliza la ceaiuri (60).

c. Alte utilizri. Att fructele, ct i frunzele, conin o cantitate suficient de uleiuri volatile
i datorit acestui fapt mrarul se poate utiliza n industria parfumurilor (58). Miristicina,
carvona i camforul de mrar prezente n uleiul volatil de mrar i confer acestuia caliti de
insecticid natural (59).

CAPITOLUL 3 STADIUL ACTUAL AL CERCETRILOR PRIVIND

ANETHI AETHEROLEUM (uleiul volatil de Anethum graveolens)

14
 Definiie. Anethi aetheroleum este uleiul volatil obinut prin distilarea sau antrenarea cu
vapori de ap a frunzelor, fructelor sau inflorescenelor speciei Anethum graveolens, mrar,
(Apiacee).
Producia mondial de ulei volatil de Anethum graveolens din fructe este estimat la 80
de tone, iar cea din frunze la 70 de tone, principalii furnizori fiind India, Rusia i Polonia (65),
dar Centrul Internaional de Comer arat o cerere n continu cretere. Frana produce o cantitate
mic de ulei de mrar i import din Egipt, Israel Olanda i Maroc; Olanda i Germania sunt
mari productori, dar import materie prim i din Ungaria; USA import ntre 500 100 kg
anual, n principal din Ungaria. India export ntre 500 i 800 de tone de fructe anual n rile
din vestul Asiei i o cantitate mic de ulei n vestul Europei.

3.1. CARACTERISTICI FIZICO-CHIMICE.

Anethi aetheroleum are o culoare galben deschis, cu un miros asemntor cu al fructelor

i un gust acru, picant. Prin pstrare, culoarea se nchide, iar mirosul devine neptor. Uleiurile
eseniale de mrar difer totui uor la arom i miros, depinznd de partea din plant din care au
fost extrase. Frunzele uscate produc un ulei volatil cu un miros mult mai puin pregnant.
Frunzele au un coninut de 0,4 - 0,8% ulei volatil, n timp ce n fructe cantitatea este semnificativ
mai mare, de aproximativ 2,3 8 % (66). Pentru inflorescene nu exist date n literatura de
specialitate.
Densitatea relativ a uleiului volatil de mrar variaz n general ntre 0,895 0,915, uleiul
de mrar din Anglia avnd o valoare puin mai mare de 0,910 0,916. Uleiurile de mrar din
Japonia i India difer de cel european, avnd o densitate relativ mai mare (0,948 0,968),
valoare ce este atribuit prezenei camforului de mrar i unui coninut mult mai mic n carvon.
Indicele de refracie al uleiului volatil de mrar este la 25C de 1,483 1,488.
Este solubil n trei pri de alcool de 90%.

3.2. METODE DE EXTRACIE

Uleiul volatil de mrar se obine prin metodele clasice de extracie (distilare, antrenare cu
vapori de ap sau extracie cu dioxid de carbon lichid la temperatur sczut i presiune
ridicat), att din frunze, ct i din fructe sau flori. n general, metoda folosit este cea de
antrenare cu abur.
Antrenarea cu vapori de ap este un proces de separare pentru produsele sensibile la
temperatur de tipul compuilor naturali aromatici. Deoarece aceti compui se descompun la
temperaturi ridicate, se introduce n aparatul de distilare ap sau abur, pentru a scdea
temperatura punctului de fierbere. Astfel, evaporarea va avea loc la temperaturi mai sczute, sub
temperatura la care deteriorarea produilor este apreciabil. Atunci cnd un amestec de dou
lichide practic nemiscibile este nclzit i agitat astfel nct suprafeele ambelor lichide s fie
expuse la faza de vapori, fiecare constituent exercit n mod independent o presiune de vapori
funcie de temperatur, ca i cum cellalt constituent nu ar fi prezent. Din aceast cauz,
presiunea de vapori a ntregului sistem crete. Fierberea ncepe cnd suma dintre presiunile
pariale ale componentelor sistemului depaete presiunea atmosferic. Dup distilare vaporii
sunt condensai n mod obinuit, rezultnd un sistem cu dou faze: ap compus organic i
permind o separare uoar
15
 Epuizarea complet a produsului dureaz 2,5 4 ore pentru frunze, respectiv 8 10 ore
pentru fructe; fructele sunt mai nti zdrobite i transformate n pudr pentru a facilita extracia
uleiului. n timpul primelor 2 ore, uleiul distilat are un coninut ridicat de carvon, raportul
maxim carvon : limonen fiind 80(88) : 12(19); deoarece carvona este mai solubil n ap i
reprezint o fracie de fierbere mai ridicat, este distilat mai uor. Acest raport scade ns n
timp.

3.3. CERCETRI FITOCHIMICE ANTERIOARE

Numeroase publicaii au prezentat date asupra compoziiei uleiului volatil de mrar,

extras din frunze sau fructe, dar nu exist studii despre compoziia chimic a uleiului extras din
flori de mrar. Schreier et al (70) au fcut studii aprofundate asupra compoziiei chimice i
concentraiilor componentelor aromatice ale frunzelor de mrar, iar Lawrence (71) asupra
compozitiei chimice a uleiului volatil din fructe.
Uleiul volatil din frunze conine: pinen (0.9%), -pinen (0.1%), mircen (0.4%),
felandren (30.2%), limonen (22.5%), -felandren (3.8%), p-cimen (1.0%), terpinolen (0.1%),
p-dimentilstiren (0.1%), 3,9-epoxy-p-menten (5.6%), cis-p-menta-2,8-, trans-dihidrocarvon
(0.5%), cis-dihidrocarvon (1.2%), carvon (31.6%), dihidrocarveol (0.1%), cis-carvil acetat
(0.1%), trans-carveol (0.1%), cis-carvilacetat (0.1%), trans-carveol (0.1%), dihidrolimonen-10ol
(0.1%), dihidrolimonen-10-hexanoat (0.1%), p-menta-l, 3-dien-10-il-hexanoat (0.1%), pmenta-
1(7), 2-dien-10-l butirat (0.1%) i ali compui n urme.
Uleiul volatil din fructe conine: limonen (44.0%), d-dimetilstiren (0.2%),
transhidrocarvon (0.4%), cis-dihidrocarvon (2.1%), neodihidrocarveol (0.2%), carvon
(51.5%), dihidrocarveol (0.1%), isodihidrocarveol (0.4%), trans-anetol (0.1%), trans-carveol
(0.1%), ciscarveol (0.2%) i urme de muli ali compui.
Numeroase studii au fost ntreprinse pentru stabilirea configuraiei absolute, calitii
organoleptice i stabilitii compuilor chimici identificai (72).
n concluzie, Anethi aetheroleum obinut din fructe se caracterizeaz prin prezena
carvonei (18 81%, cantiti dependente de sol, varietate i mod de obinere), dihidrocarvonei
(0,1-62%), limonenului (10 50%) i altor compui prezeni n cantiti foarte mici (alfa-
betafelandren, carveol, terpinen, dilapiol), n timp ce n uleiul volatil extras din frunze
componentele sunt carvona (15 40%), limonenul (3 55%), alfa-felandrenul (25 65%),
dilapiolul (5-32%) i anetofuranul (eter de mrar), care este caracteristic frunzelor i care se
gasete n medie ntre 2 - 10%. Structurile chimice ale principalelor componente ale uleiului
volatil sunt prezentate n figurile 3.1, 3.2, 3.3, 3.4.
O O

S-carvona R-carvona

Fig.3.1 Structura chimic a enantiomerilor carvonei

16
 Fig.3.1 Chemical structure of the carvone enantiomers

Fig.3.2 Structura chimic a limonenului

Fig.3.2 Chemical structure of limonene

alfa-felandren beta-felandren

Fig 3.3 Structura chimic a i felandrenului

Fig.3.3 Chemical structure of i felandrene

Fig. 3.4 Structura chimic a anetofuranului

Fig.3.4 Chemical structure of dillether

Maarse and Visscher (77) au sintetizat datele din literatura de specialitate cu privire la
compoziia procentual a uleiului volatil de Anethum graveolens din fructe i frunze (tabelul
3.1).
Tabelul 3.1
Table 3.1

Compoziia chimic medie cantitativ a uleiurilor volatile de Anethum graveolens

Avarage chemical composition of volatile oil of Anethum graveolens
Grupele de constitueni Ulei volatil din frunze Ulei volatil din fructe
Hidrocarburi 37 10
Alcooli 27 9
Derivai carbonilici 30 5
Acizi - 11
Fenoli i derivai 8 7
17
 Furani i pirani 5 -

3.4. FACTORI DETERMINANI AI CALITII ULEIURILOR

VOLATILE

Uleiurile volatile care circul pe pia, destinate aromaterapiei, industriei produselor

igienice i cosmetice, parfumeriei i industriei agroalimentare difer calitativ prin coninutul n
componentele majore n funcie de mai muli factori, cum ar fi: zona geografic, timpul de
recoltare, condiiile de cretere i procedeul de izolare (73, 74, 75).
Originea botanic. Importana denumirii corecte a uleiurilor volatile folosite n
aromaterapie, prin precizarea exact a originii botanice i varietii chimice, previne eventualele
reacii adverse sau fenomene toxice ce ar putea surveni n cazul unor ambiguiti. De exemplu,
sub denumirea de Anethi aetheroleum se ntlnesc uleiurile volatile provenite de la Anethum
graveolens i de la Anethum sowa (mrar indian), ce prezint un coninut semnificativ diferit n
cetone monoterpenice, care se tie c au aciune neurotoxic i abortiv.
Ciclul vegetativ. Influeneaz foarte mult cantitatea i calitatea uleiului volatil, ele
crescnd sau scznd n timpul dezvoltrii plantei. Pino et al (76) au artat c exist diferene n
compoziia uleiurilor eseniale de Anethum graveolens recoltat n diferite stadii de dezvoltare ale
plantei. S-a artat c frunzele vetede, uscate, au un coninut mai sczut n carvon dect cele
proaspete n orice stadiu de cretere pn la nflorire, ceea ce nu se ntmpla la fructe, care au
artat un coninut n carvona mai mare pentru seminele uscate i pstrate. Fructele mature
depozitate i pierd o parte din terpine prin pstrare i de aceea producia de carvon este mai
mare. Coninutul de carvon crete de la 12 % n stadiul vegetativ, la 22 % n timpul nfloririi
maxime i ajunge la 35 % n fructele imature.
Factorii extrinseci (de mediu sau de cultura plantelor aromatice) contribuie, de
asemenea, la determinarea calitii uleiurilor volatile. Temperatura, umiditatea relativ, durata
timpului nsorit, curenii de aer influeneaz calitatea uleiul volatil.
Zona geografic. Influeneaz biosinteza uleiului volatil prin regimul de radiaii.
Enzimele fiind sensibile la radiaiile luminoase, induc modificri n biosinteza constituenilor
chimici ai uleiurilor volatile. De exemplu, felandrenul este prezent n uleiurile de mrar din
Anglia i Spania, fiind ns n cantitate neglijabil n uleiul de mrar din Germania; mrarul
african are un coninut mai mare de ulei dect cel produs n Anglia (67, 68, 69).
Aportul ngrmintelor, regimul hibrid, tipul solului determin n egal msur cu
ceilali factori calitatea uleiului volatil.

3.5. COMPUI CARE INFLUENEAZ AROMA

n formele comerciale, s-a constatat c uleiurile care conin maxim 20 % carvon au cea
mai bun arom (78), de aceea sunt preferate atunci cnd sunt folosite n calitate de aromatizant.
Aroma tipic a uleiului de mrar extras din frunze este dat de felandren (terpen), acesta
pstrnd caracteristicile plantei. Haupalehti (1986) a determinat c felandrenul, limonenul,
miristicina i anetofuranul sunt principalii contributori ai aromei de mrar (79). Mai trziu, Blank
et al (1991) au determinat c aroma plantei este direct legat de concentraia a cinci componente:
anetofuran, felandren, limonen, miristicin i p-menta- dienbutirat (80).
Uleiul volatil de mrar extras din fructe conine cantiti mari de carvon, ce este
principalul constituent rspunztor de arom, dar 4-vinil-2-metoxifenol (care i confer o arom
18
de carne condimentat), 4-hidroxi-3-metil-6l-metiletil ciclohexanol (responsabil de nota dulce)
i anetofuranul contribuie i ei puternic la aroma caracteristic a acestuia.

3.6. STANDARDE I INDICI DE CALITATE

Prezena unui minim de 5 % de 3,9,epoxi-p-menten n uleiul de mrar este un bun
indicator n ceea ce privete puritatea acestuia. Deoarece nu exist o surs comercial pentru
acest compus, nu se poate reconstitui compoziia uleiului. Lawrance (1981) a opinat c
examinarea raportului -felandren : limonen : -felandren constituie un alt test pentru
determinarea calitii; raportul acceptabil a fost gsit a fi 20 : 25 : 3 pentru uleiul de mrar extras
din frunze.
Uleiul de mrar se deosebete uor de cel de chimen, coninutul de carvon al celui din
urm fiind de 47,3 59,5 %. Mai mult, pinenul i felandrenul se gsesc n uleiul de chimen doar
n cantiti foarte mici (0,1%), n timp ce acestea sunt de 0,1-0,2%, respectiv 1,0-2,3% n uleiul
de mrar extras din frunze, respectiv fructe.
Spre deosebire de Anethum graveolens, uleiul de mrar din specia Anethum sowa conine
o cantitate mare de dilapiol (20%)
Prezena unui coninut ridicat de carvacrol este n general un indicator pentru un ulei
extras din fructe vechi i parial oxidat.

3.7. ACIUNE
Au fost desfurate nenumrate cercetri care s demonstreze proprietile antibacteriene,
antifungice, antivirale, antiinflamatoare, antioxidante i altele ale uleiurilor eseniale n general i
uleiului volatil de mrar n particular.

3.7.1. Aciune antimicrobian (antibacterian i antifungic)

Aciunea Anethi aetheroleum a fost demonstrat pentru o larg categorie de
microorganisme, incluznd bacterii gram-pozitive i gram-negative. Aceast activitate a fost
atribuit compuilor terpenici i fenolici (81, 82, 83, 84) i corelat cu proporiile n care se
gsesc diferiii constitueni chimici (85). Au fost observate de asemenea efecte cumulative,
antagonice i sinergice ntre componentele uleiurilor volatile (86). Totui, exist adeseori
diferene semnificative n ceea ce privete activitatea antimicrobian raportat pentru acelai tip
de ulei volatil. Aceast variabilitate poate fi datorat zonelor geografice, momentului de
recoltare, genotipului, climei, prii de plant recoltat; toi aceti factori pot influena
compoziia chimic i proporiile relative ale componenilor uleiului volatil al plantei (87, 88, 89,
90, 91, 92). De asemenea, unii constitueni ai uleiurilor eseniale au artat o activitate
antimicrobian mai mare atunci cnd au fost testai individual (93, 94, 95). Astfel, Delaquis et al
(96) au examinat activitatea antimicrobian a uleiului volatil brut i a unor fracii distilate de
Anethum graveolens mpotriva bacteriilor Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes,
Staphylococcus aureus, Serratia grimesii, Enterobacter agglomerans, Yersinia enterocolitica,
Bacillus cereus). Rezultatele au artat c uleiul volatil de mrar brut a avut o activitate
antimicrobian slab, n timp ce fraciile de distilare ce conin concentraii ridicate ale
principalelor componente chimice, d-limonenul i carvona, au dezvoltat o activitate
antimicrobian ridicat.

19
 Sing et al (98) au investigat potenialul antifungic i antibacterian al uleiului esenial de
Anethum graveolens i au constatat c acesta a inhibat complet creterea Fusarium graminearum
la o doz de 6 L. Mai mult, acesta a fost gsit a avea efect ridicat n controlarea creterii
Penicillium citrinum and Aspergillus niger i o activitate bun mpotriva Pseudomonas
aeruginosa.
Uleiul esenial extras din fructe de mrar din Bulgaria, pstrate peste 35 de ani, a artat o
activitate antimicrobian ridicat mpotriva fungilor Aspergillus niger, Candida albicans i a
drojdiei Saccharomyces cerevisia (99).
n ceea ce privete componentul principal al Anethi aetheroleum, carvona, aceasta
prezint att activitate antibacterian, ct i antifungic. S-a demonstrat efectul antifungic asupra
Fusarium sulphureum, Phoma exigua var. foveata i Helminthosporium solani (100, 101). n
plus, unii cercettori consider c d-carvona natural are avantajul de a nu prezenta toxicitate
asupra omului, spre deosebire de cea oninut prin sintez (102).
ntr-un studiu fcut de Aggarwal et al (104), s-a demonstrat c amndoi enantiomerii
carvonei, izolai din ulei, prezentau bioactivitate in vitro mpotriva unui spectru larg de bacterii i
fungi patogeni. Friedman et al (105) au artat ca d-carvona a prezentat activitate mpotriva
Listeria monocytogenes. ntr-un studiu de inhibare a creterii Escherichia coli O157:H7,
Salmonella typhimurium and Photobacterium leiognathi, d- carvona a avut o activitate mai mic
dect carvacrolul, timolul i trans-cinamaldehida (106). Carvacrolul i timolul au dezintegrat
membrana exterioar, lucru ce nu s-a ntmplat n cazul carvonei i trans-cinamaldehidei.
Pol i Smid (107) au artat c o combinare a compuilor carvon, nizin i lizozim poate fi
o metod eficace de scdere a numrului de colonii de patogeni aprui n alimente.
Un studiu fcut pe Candida albicans, utiliznd carvona ca agent de inhibare, a artat c
aceasta a mpiedicat transformarea fungului din forma sferic n cea filamentoas (transformare
ce este asociat cu patogenicitatea lui), calificnd astfel carvona ca un bun agent terapeutic
mpotriva infeciilor cauzate de acest fung (108).

3.7.2. Aciune antitumoral

ntr-un studiu n care o serie de compui legai de carvon au fost testai n ceea ce
privete capacitatea de a induce creterea activitii glutation S-transferazei n mai multe esuturi
de oarece (109) s-a artat c d-carvona a avut cea mai mare activitate pentru toate probele
analizate. Carvona i compuii legai de aceasta s-au dovedit a fi o clas de compui cu
potential activitate anticarcinogenic, de vreme ce aceast activitate este corelat cu abilitatea
de a induce creterea activitii enzimelor detoxifiante. D-limonenul i d-carvona au redus la
femelele de oarece formarea tumorilor stomacale cu aproape 60% i formarea de adenoame
pulmonare cu aproape 35%, datorit capacitii lor de a inhiba N-nitrosodietilamina-inductoare
de carcinom (110).

3.7.3. Alte aciuni (aciune asupra ncolirii cartofilor, aciune insecticid)

Studiile fcute de Hartmans i Diepenhorst (100) au artat c, n comparaie cu
isopropilfenilcarbamatul i isopropil-3-clorofenilcarbamatul, d-carvona este un inhibitor mai
bun al ncolirii cartofilor pentru o durat lung de depozitare. Carvona este deja comercializat
n Olanda, sub numele Talent, ca un regulator de combatere a ncolirii (103).

20
 Carvona poate fi de asemenea folosit ca insecticid mpotriva Drosophila melanogaster,
dei componente ale uleiului volatil de ment au artat o activitate genotoxic i insecidal mai
mare (111).

3.8. EFECTE ADVERSE

Parametrul DL50 (doza letal) pentru uleiul de mrar extras din fructe este 300 mg/kg corp
(testat pe oareci).
Anethi aetheroleum poate cauza fotosensibilitate i / sau dermatite de contact la unii
subieci umani, deoarece furanocumarinele fiind distilabile i antrenabile cu vapori de ap se
gsesc n compoziia uleiului volatil. n organismul uman dilapiolul (eter-oxid arilic metoxilat)
sar putea biotransforma n precursori amfetaminici.

3.9. NTREBUINRI
Datorit tuturor proprietilor prezentate anterior, uleiul volatil de Anethum graveolens se
ntrebuineaz n multe domenii de activitate: aromaterapie, industria cosmetic si a
parfumurilor, industria alimentar, arta culinar, etc
Aromaterapia folosete Anethi aetheroleum n afeciuni respiratorii (bronite catarale
acute), cardio-vasculare (risc de infarct) i digestive (dispepsii, insuficiene hepato-biliare).
n farmacie, uleiul volatil izolat poate servi la obinerea de hidrosoli sau ape aromate
(Aqua Anethum), liposoli (diluat in uleiuri grase), aerosoli (fin pulverizate n aer sau gaz
propulsor), n diferite preparate farmaceutice, imprimndu-le acestora, pe lng mirosul i gustul
plcut, aromat, i proprietile lor terapeutice.
Produse farmaceutice: Superbust (conine ulei volatil de mrar, ulei volatil de fenicul i
ulei de msline); Anetofug (soluie de uz extern cu 1% Anethi aetheroleum)
n industria cosmetic i a parfumurilor se ntrebuineaz la prepararea de produse
igienico-sanitare, creme, emulsii, loiuni, geluri, etc, produse cu rol preventiv i curativ n
dermatofarmacie.
n industria alimentar i n arta culinar se utilizeaza ca aromatizant.
n alte domenii: deoarece Anethi aetheroleum conine terpinen i pinen, se poate
utiliza pentru obinerea produilor sintetici: terpin-hidratul, -terpineolului, linalolului,
borneolului. Datorit prezenei anetolului n uleiul volatil de Anethum graveolens, acesta se poate
folosi la sinteza sintofolinului.
CAPITOLUL 4 CERCETRI PRIVIND CARACTERIZAREA SPECIEI
INDIGENE ANETHUM GRAVEOLENS I A ULEIULUI VOLATIL ANETHI
AETHEROLEUM - MATERIALE I METODE

4.1 VERIFICAREA IDENTITII I CALITII PRODUSELOR

VEGETALE ANETHI FLORES, ANETHI FRUCTUS I ANETHI FOLIUM

n acest scop s-a aplicat analiza farmacognostic.

Analiza farmacognostic reprezint un ansamblu de metode calitative i cantitative
efectuate cu scopul determinrii identitii, puritii i calitii unui produs vegetal (112).

21
 Produsele vegetale Anethi flores, Anethi fructus i Anethi folium reprezint
inflorescenele, fructele i frunzele uscate dup recoltare de la specia Anethum graveolens, mrar,
familia Apiaceae.
Recoltarea s-a efectuat n lunile mai iunie (pentru frunze), iunie-iulie (pentru
inflorescene) i august (pentru fructe), n trei ani consecutivi, de la plante cultivate n localitatea
Finta, judeul Dmbovia (~500 m altitudine).

4.1.1 VERIFICAREA IDENTITII

Verificarea identitii s-a realizat prin aplicarea metodelor calitative de analiz: examen
macroscopic, examen microscopic, examen microchimic i examen chimic calitativ.

4.1.1.1 Examen macroscopic

Parametrii urmrii n cadrul examenului macroscopic au fost: aspectul, dimensiunile,
culoarea, mirosul i gustul. Examenul macroscopic al produsului vegetal in toto este de cele mai
multe ori suficient pentru determinarea identitii acestuia.
Caracterele organoleptice mai ofer i unele orientri asupra compoziiei chimice a
produselor analizate prin culoare, gust, miros, etc.
Pentru produsele fragmentate sau pulverizate, examenul macroscopic d unele informaii
care, adeseori, nu sunt suficiente pentru identificare i n acest caz se continu investigarea cu
examinarea microscopic (112, 113).

4.1.1.2 Examen microscopic

Acest examen, ce reprezint o faz mai avansat a analizei calitative a produselor
vegetale, urmrete stabilirea esuturilor i elementelor anatomice caracteristice ale seciunilor i
preparatelor clarificate din pulberi sau produse fragmentate.
Un produs vegetal poate fi supus examenului microscopic n urma unei anumite
prelucrri n vederea obinerii unor preparate ce pot fi analizate la microscop.
Preparatele microscopice se realizeaz prin metode diferite n funcie de natura, starea
produsului (ntreg, fragmentat sau pulverizat), consistena i chiar compoziia chimic (112, 113).
Examenul microscopic al produselor vegetale pulverizate
Produsele vegetale se pulverizeaz prin zdrobire sau mcinare, urmat de omogenizare
prin cernerea pulberii (sita cu 30 ochiuri/cm).
Preparatul microscopic se obine utilizndu-se un reactiv sau o soluie de clarificare, a
crei alegere se face fie pentru clarificarea pulberii vegetale, fie pentru obinerea unor reacii
caracteristice compuilor chimici ai pereilor celulari sau ai coninutului celulelor. Examenul
microscopic a fost realizat cu un microscop optic Zeiss, cu obiective x10 i x40, la care este
ataat un aparat de fotografiat Canon, care trasmite fotografiile direct la calculator.
Examenul microscopic al unei pulberi vegetale are ca scop precizarea organului din care
este constituit produsul vegetal respectiv, prin identificarea elementelor anatomice comune
organului i stabilirea elementelor caracteristice produsului (112, 113).

4.1.1.3 Examen microchimic Reactivi

necesari:
acid clorhidric 10%;
22
 hidroxid de sodium 10%.
Aparatura folosit: lamp UV (Camag).
Examenul microchimic are dou etape: microsublimarea i examenul histochimic.
n aceste experimente am apelat numai la microsublimare, cea de a doua etap -
examinarea histochimic - nefiind necesar n cazul speciei Anethum graveolens, deoarece
aceast specie nu este descris n literatura de specialitate ca surs de mucilagii sau
antracenozide (exemplele clasice de grupe de principii active evideniate prin examen
histochimic).
n cazul produsului vegetal studiat, prin tehnica microsublimrii se poate realiza o
separare a cumarinelor de flavone. Este posibil astfel identificarea celor dou clase de principii
active, fr a mai exista pericolul interferenei reaciilor de identificare i a fluorescenei.
Tehnica de lucru: produsul vegetal se umecteaz cu HCl 10% i se supune
microsublimrii ntre dou lame de microscop. Microsublimatul se reia cu alcool i soluia se
mparte n dou fraciuni. Peste prob se adaug 1-2 picturi NaOH 10%. In cazul unei reacii
pozitive se observ o intensificare a fluorescenei probei fa de martor.

4.1.1.4 Examen chimic calitativ

Examenul chimic calitativ are ca scop identificarea principiilor active din produsul
vegetal (114).

Metoda
Separarea principalelor grupe de principii active se face prin extracie succesiv i
selectiv a produsului vegetal cu solveni de polariti diferite, ncepnd cu solventul apolar i
terminnd cu un solvent polar.
Primul solvent care s-a utilizat a fost eterul etilic. Soluia extractiv eteric a fost
analizat. Produsul vegetal epuizat cu eter s-a supus extraciei cu metanol. Soluia extractiv
metanolic obinut s-a analizat. Produsul vegetal epuizat cu eter i metanol s-a supus extraciei
cu ap. Soluia extractiv apoas obinut s-a analizat.
Pentru identificarea principalelor clase de principii active de natur vegetal s-au folosit
reaciile chimice descrise n literatura de specialitate (114).
Reacii de precipitare

Principiul metodei
Toi alcaloizii, cu mici excepii, dau cu reactivii precipitate albe, galbene, portocalii,
brune i, mai rar, de alte culori.

Reactivi necesari:
acid clorhidric 2%;
reactiv Mayer (soluie apoas de tetraiodomercurat de potasiu);
reactiv Bertrand (soluie apoas de acid silicotungstic).

Tehnica de lucru: 10 ml extract eteric se evapor ntr-o capsul de porelan pe baia de

nisip. Reziduul se dizolv n 1,5 ml acid clorhidric 2% prin amestecare cu o mica baghet de
sticl, la cald (pe baia de ap). Soluia decantat se mparte n trei eprubete, n volume egale. La
una din probe (eprubete) se adug 2-3 picturi de reactiv Mayer (R), la a doua prob se adaug

23
2-3 picturi de reactiv Bertrand (R). Ultima eprubet servete ca prob martor. Dac n probele
tratate cu reactivi apar opalescene sau precipitate evidente (de culoare alb-glbuie), alcaloizii
sunt prezeni.

Identificarea carotenoidelor

Carotenoidele sunt compui vegetali, lipofili, colorai n galben, portocaliu, rou sau
violet.

Reacia cu reactivul Carr-Price

Principiul metodei
Carotenoidele dau cu reactivul Carr-Price o reacie de culoare, caracteristic.

Reactivi necesari:
reactiv Carr-Price (triclorura de stibiu, soluie saturata n cloroform);
soluie H2SO4 concentrat.

Tehnica de lucru: 0,5 ml soluie extractiv eteric se evapor la sicitate ntr-o capsul de
porelan (pe baia de nisip). Reziduul se trateaz cu 1-2 picturi reactiv Carr-Price sau cu 1 -2
picturi H2SO4 concentrat. n cazul unei reacii pozitive, apare o coloraie albastr intens n
prezena H2SO4 concentrat, sau o coloraie albastr care trece n rou-purpuriu, apoi n rou-brun
n prezena reactivului Carr-Price.

Identificarea cumarinelor

Reacia de modificare a fluorescenei n mediu alcalin

Principiul metodei
Heterozidele i agliconii emit radiaii n lumina UV, prezentnd fluorescena
caracteristic: albastr, albastr-verzuie, violet care se modific n mediu alcalin.

Reactivi necesari:
soluie NaOH 10%;
lumina UV.

Tehnica de lucru: 2-3 ml soluie extractiv apoas concentrat se mpart n dou poriuni
egale. Prima poriune reprezint proba martor, iar cealalt se amestec cu 1 ml soluie NaOH
10%.
Ambele probe se analizeaz n lumina UV, iar apariia unei fluorescene albastru-violete
n proba cu NaOH 10%, indic prezena cumarinelor n soluia de analizat.

Identificarea emodolilor

Emodolii (agliconii antracenozidelor) sunt substane cristalizate, solubile n solveni

apolar i n soluii apoase alcaline (se formeaz emodinai colorai n rou).

24
 Reacia Borntrger

Principiul metodei
Se bazeaz pe proprietatea agliconilor forme oxidate (antrachinone) de a trece din
emodoli n fenoxizi (emodinati) de culoare roie-viinie, n prezena soluiilor alcaline.
Sensibilitatea reaciei este de 10-5.
Reacia poate fi efectuat direct pe produsul vegetal, pe microsublimat sau n soluie
apolar de agliconi. Agliconii cu funcie carboxilic formeaz fenoxizi chiar n prezena
carbonatului acid de sodiu.

Reactivi necesari:

soluie NaOH 10% sau NH4OH 10%.

Tehnica de lucru: ntr-o eprubet se pun 3-4 ml soluie eteric i se adaug 0,5-1 ml
soluie NaOH 10%. n cazul unei reacii pozitive, stratul inferior apos se coloreaz n rou, iar cel
superior, apolar, se decoloreaz .

Identificarea flavonelor

a) Reacia Shibata (cianidolului)

Principiul metodei
Reacia are la baz reducerea gruprii cetonice a flavonelor n prezena hidrogenului,
rezultat n reacia dintre magneziu i acid clorhidric concentrat. Se formeaz clorura de oxoniu
colorat n rou.

Reactivi necesari:

acid clorhidric concentrat;

magneziu metalic.

Tehnica de lucru: 1 ml soluie se introduce ntr-o eprubet cu cteva fragmente de

magneziu metalic (span). La adugarea de 4-6 picturi de acid clorhidric concentrat apare o
coloraie roie sau portocalie.

b) Reacia cu hidroxidul de sodiu (NaOH)

Principiul metodei

Flavonozidele se dizolv n alcali cu obinerea unor fenolai (flavoxizi) colorai n galben

intens.

Reactivi necesari:
25
 soluie hidroxid de sodiu 5%.

Tehnica de lucru: la 1 ml soluie de analizat se adug 1 ml soluie hidroxid de sodiu

5%. n cazul unei reacii pozitive, coloraia galben a soluiei de analizat se intensific
comparativ cu cea a martorului n care nu s-a adugat soluie de NaOH 5%.

c) Reacia cu clorur de aluminiu (AlCl3)

Principiul metodei
Are la baz chelatarea cu sruri ale metalelor bi- i trivalente.
Chelaii obinui sunt de culoare galben intens i au o fluorescent galben-verzuie sau
albastr n UV.

Reactivi necesari:

soluie de acetat de sodiu 10%;

soluie de clorur de aluminiu 2,5%.

Tehnica de lucru: la 1 ml soluie de analizat de adug 0,5 ml acetat de sodiu (R) i 1 ml

clorur de aluminiu 2,5%. Coloraia galben a soluiei de analizat se intensific.

Identificarea compuilor polihidroxifenolici (numii i ODP-uri sau orto-

dihidroxifenoli)
Reacia cu reactiv Arnow

Principiul metodei
Reacia const n proprietatea fenolilor de a forma cu acidul azotos nitrozoderivai ce se
izomerizeaz spontan n izonitrozoderivai sau oxime care, datorit caracterului lor slab acid, se
dizolv n soluii alcaline dnd coloraii roii.

Reactivi necesari:

soluie HC1 0,1 N;

reactiv Arnow;
soluie NaOH 0,1 N.

Tehnica de lucru: la 0,5 ml soluie de analizat se adug 1 ml HC1 0,1N, l ml reactiv

Arnow i 1 ml soluie NaOH 0,1N. n cazul unei reacii pozitive se obine o coloraie roie.

Identificarea compuilor reductori

Compuii reductori de natur vegetal pot fi polifenoli sau oze.

Evidenierea caracterului reductor

26
 Principiul metodei
Se bazeaz pe proprietatea lor de a reduce soluia de reactiv Fehling la oxid cupros,
precipitat de culoare roie.

Reactivi necesari:
soluie Fehling I (soluie apoas de sulfat de cupru);
soluie Fehling II ((soluie apoas de tartrat de sodiu i potasiu n hidroxid de sodiu).

Tehnica de lucru: peste 3 ml soluie se adaug un amestec constituit din prti egale de
soluie Fehling I i II i se nclzete pe baia de ap. Apariia unui precipitat rou-brun care se
depune n timp indic prezena compuilor reductori.

Identificarea ozelor i poliholozidelor

Ozele simple se identific datorit caracterului reductor prin reacia cu reactivii Fehling
sau Tollens i prin cuplarea cu o-toluidina sau fenilhidrazinele.
Poliholozidele se identific prin reacia de culoare cu hematoxilina sau prin precipitare n
alcool.

a) Reacia Molish

Este comun pentru ozele simple i pentru poliholozide.

Principiul metodei
Are la baz condensarea furfuralului cu timol, cu formarea unui compus de culoare roie.
n cazul poliozelor reacia are loc dup depolimerizarea acestora cu H2SO4 concentrat.

Reactivi necesari:
H2SO4 concentrat;
timol.

Tehnica de lucru: 10ml soluie extractiv apoas se concentreaz la sec ntr-o capsul de
porelan. Peste reziduu se aduc 1-2 picturi de H2SO4 concentrat i dup 3-5 minute se adaug o
picatur de timol. n cazul unei reacii pozitive apare o coloraie roie.

b) Precipitarea n alcool i colorarea cu hematoxilin

Principiul metodei
Se bazeaz pe precipitarea poliholozidelor cu alcool i colorarea precipitatului n violet,
cu hematoxilin.

Reactivi necesari:
metanol conc.;
hematoxilin.

27
 Tehnica de lucru: 10-15 ml soluie extractiv apoas se concentreaz la 2 ml ntr-o
capsul de porelan. Dup rcire, soluia concentrat se toarn n fir subire peste 20 ml metanol.
n cazul prezenei poliholozidelor se va obine un precipitat care, n prezena hematoxilinei, se va
colora n violet datorit formrii hemateinei.

Identificarea saponozidelor

Saponozidele triterpenice precipit cu acetatul neutru de plumb. Solubilitatea n ap a

saponozidelor cu grupri carboxilice poate fi mrit prin alcalinizarea soluiei (cu
hidrogenocarbonati, carbonai, fosfai). Se formeaz sruri mai solubile.

a) Proba de spumefiere: se execut asupra soluiei extractive apoase care se agit timp de
15 sec ntr-o eprubet cu diametrul de 16 mm. Se formeaz o coloan de spum care persist cel
puin 15 minute.

b) Reacia cu acetatul de plumb: saponozidele triterpenice reacioneaz cu acetatul de

plumb 5% cnd se formeaz un precipitat alb.

c) Reacia cu hidroxidul de bariu: saponozidele formeaz cu hidroxidul de bariu un

precipitat alb .

Identificarea sterolilor i agliconilor triterpenici

Reacia Liebermann-Burchard

Principiul metodei
n prezena H2SO4 concentrat i a anhidridei acetice, sterolii/triterpenele formeaz un
dimer colorat n violet sau verde .

Reactivi necesari:
H2SO4 concentrat;
anhidrid acetic.

Tehnica de lucru: din soluiile hidrolizate, extrase cu eter, se iau 3-4 ml, se evapor la
sicitate, pe baia de ap, iar reziduul se dizolv cu 1 -2 ml soluie anhidrid acetic; 0,5-1 ml
servesc ca martor i restul se toarn cu grij peste un volum egal de H 2SO4 concentrat. Apariia
unei coloraii violete indic o reacie pozitiv.

Identificarea taninurilor

Taninurile sunt substane solide, amorfe. Combinatiile cu mas molecular mic pot
cristaliza, fiind incolore. Taninurile se dizolv n ap la cald, mai greu la rece, formnd soluii
coloidale (solubilitatea variaz cu gradul de condensare) n alcool, aceton, acetat de etil. Sunt
insolubile n eter, cloroform, benzen, eter de petrol, sulfur de carbon i n ali solveni organici
apolari.

28
 Reacia cu FeCl3

Principiul metodei
Se bazeaz pe proprietatea taninurilor de a determina coloraii albastre (taninuri galice)
sau verzi (taninuri catehice) n prezena srurilor de Fe3+ . Pentru decelarea exact a tipului de
tanin existent se precipit taninurile catehice sub form de flobafene (precipitat rou) cu reactiv
Styassny. Dup separarea precipitatului, n filtrat se execut reacia cu Fe3+ n scopul identificrii
taninurilor galice. O coloraie albastr-negricioas indic o reacie pozitiv.

Reactivi necesari:
reactiv Styassny (amestec HC1 : CH2O =1:2); soluie FeCl3
1% sau alaun feric 1%;
soluie de acetat de sodiu 10%.

Tehnica de lucru: peste 2 ml soluie apoas de adaug 0,5 ml soluie FeCl 3 1%. Se
formeaz o coloraie verde-brun datorit prezenei taninurilor catehice. Separat se nclzete la
fierbere pe baia de ap, timp de 30 minute, o prob de 4 ml soluie apoas i o cantitate
echivalent de reactiv Styassny. Se formeaz un precipitat rou care se filtreaz prin hrtie de
filtru. Filtratul se neutralizeaz cu soluie de acetat de sodiu 10% i se adaug 2-4 picturi soluie
FeCl3 1%. Colorarea n albastru a soluiei indic prezena taninurilor galice.

Identificarea proantocianilor

Reacia Bath-Smith

Principiul metodei
Identificarea proantocianilor se face pe baza reaciei de transformare n antociani, n
mediu de acid clorhidric 2%, urmat de extracie n butanol.

Reactivi necesari:
HCl 2%;
Butanol

Tehnica de lucru: 2 ml soluie se aduc la reziduu, acesta se reia cu 2 ml HCl i soluia

obinut se mparte n doua: 1 ml. se folosete ca martor iar celalalt ml. se ine pe baie de apa 30
min. pentru transformarea proantocianului n antocian. Se extrage cu butanol, iar soluia
butanolic trebuie s fie mai roie ca martorul, n cazul prezenei proantocianilor.

Identificarea antocianilor

Reacia virajului de culoare

Principiul metodei
Identificarea antocianilor se bazeaz pe proprietatea acestora de a-i modifica culoarea n
funcie de pH.
29
 Reactivi necesari:
HCl 10%;
NaOH 10%.

Tehnica de lucru: peste 1 ml soluie apoas de adaug 0,3 ml soluie HCl 10%, apoi
NaOH 10%, pictur cu pictur. Se observ virajul culorii de la rou (pH=1-3), la violetcenuiu,
apoi albastru i n final galben (pH=12).

4.1.2. DETERMINAREA PURITII

Dup identificarea produselor vegetale prin metodele prezentate anterior urmeaz

stabilirea puritii acestora.
Determinarea puritii se face conform normelor prevzute de farmacopee, de standarde
sau norme interne, sau de fie tehnice, urmrind stabilirea impuritilor din plant i a corpurilor
strine.

4.1.2.1 Determinarea impuritilor din plant

Aceste impuriti pot fi constituite din pri ale altor organe ale plantei productoare sau
din produse degradate.
Tot n aceast categorie intr produsele alterate (atacate de boli, insecte) sau degradate
(exemplu: frunze zdrobite, frunze brunificate etc).
Normele de calitate prevzute pentru fiecare produs vegetal se refer la anumite
procentaje din aceste impuriti sau exclud prezena lor.

4.1.2.2 Determinarea corpurilor strine

Aceleai norme prevd sau exclud prezena n produsele vegetale a unor corpuri strine
(pri din alte plante, substane minerale, pmnt, nisip etc).

Tehnic de lucru: impuritile din plant sau prile din alte plante i substanele
minerale (pmnt, praf, nisip, pietricele), indicate n monografia produsului vegetal respectiv, se
aleg cu o penset, se cntresc separat, iar rezultatele se exprim n procente la 100 g de produs
(112, 113).

4.1.3. VERIFICAREA CALITII

Determinarea calitii produselor vegetale este o condiie absolut necesar pentru avizarea
folosirii acestora n terapeutic sau ca materie prima n laboratoarele galenice sau n industria
farmaceutic..
Pentru a stabili calitatea produselor vegetale de tip flores, fructus i folium, obinute de la
specia Anethum graveloens, mrar (Apiaceae) s-au efectuat:
- determinri preliminare (determinarea umiditii i a factorului de mbibare) i -
dozri de principii active (flavone, ODP-uri, ulei volatil).

30
 4.1.3.1 Determinri preliminare

n acest grup sunt incluse metodele de stabilire a apei de constituie (umiditatea) i a

capacitii de gonflare (factorul de mbibare) (112, 113).

Determinarea umiditii

Gradul de umiditate al produselor vegetale trebuie s se ncadreze n anumite limite care

permit asigurarea conservrii lor.

Metoda
Procedeele de determinare a coninutului de ap din produsele vegetale sunt diferite:
- uscare la etuv;
- uscare la vid;
- uscare la exicator;
- antrenare cu solveni organici.

Dintre aceste procedee s-a ales uscarea la etuv.

Tehnica de lucru: ntr-o fiol de cntrire adus la greutate constant prin nclzire la
etuv, la aceeai temperatur la care urmeaz s se fac uscarea i rcit la exicator, se introduc
1-2 grame din proba de analizat. Diametrul fiolei se alege astfel nct cantitatea de material
vegetal luat n lucru s nu formeze un strat mai gros de 5 mm. Fiola cu produsul vegetal se
menine 4 ore la etuv, la 105 C, se rcete la exicator i se cntrete. Se continu uscarea cte
60 minute, rcirea n exicator i cntrirea pn la greutate constant.

Determinarea factorului de mbibare

Factorul de mbibare reprezint volumul ocupat de 1g de produs vegetal i mucilagul

aderent dup mbibarea cu ap (112, 113).

Metoda
n FR X se precizeaz un repaos de 4 ore i folosirea de cilindrii gradai de 25ml. Se pune
n contact produsul vegetal mrunit cu un volum corespunztor de ap, se las n repaos timp de
4 ore, apoi se citete volumul.

4.1.3.2 Dozarea principiilor active

Dozarea flavonelor

Metoda
n acest studiu s-a folosit metoda spectrofotometric bazat pe complexarea cu AlCl 3,
metod prevzut i n FR X (Farmacopeea romana editia X), la monografia Cynarae folium,
anghinare (112, 113).

31
 Principiul metodei
Flavonele care au grupe -OH libere n poziiile orto, para sau peri, extrase n solveni
hidrofili, formeaz la tratare cu clorur de Al(III) compleci (chelai) de culoare galben intens,
colorimetrabil.

Reactivi i solveni necesari:

ap;
metanol;
soluie de clorur de aluminiu 2,5%; soluie de acetat de sodiu 10%;
rutozid (s.r., Fluka).

Prepararea soluiei de analizat

Peste probe de 0,3000 g de Anethi flores i Anethi folium, respectiv 1,0000 g Anethi
fructus, produse vegetale uscate dup recoltare, s-au adus 25 ml metanol 50% i s-a refluxat 30
de minute, n baloane prevzute cu refrigerent ascendent. S-a filtrat prin vat i hrtie de filtru n
balon cotat de 25 ml i s-a completat la semn cu acelai solvent.

Tehnica de lucru: din soluia de analizat s-au luat volume de 0,5-1,0 ml i s-au dus n
baloane cotate de 10 ml. S-au adugat cte 1ml soluie de acetat de sodiu 10% i 0,6 ml soluie
de A1C13 2,5%. S-a completat la semn cu metanol 50%, s-a agitat i s-a lsat n repaus 45
minute.
Paralel cu probele de dozat, s-au preparat probele martor corespunztoare, obinute din
0,5-1,0 ml soluie filtrat prin diluare cu metanol 50% pn la 10 ml (la balon cotat).
S-au citit extinciile (absorbanele) probelor de analizat fa de martor la
spectrofotometru UV-VIS PERKIN ELMER 2, la = 427 nm, n cuve de 1cm.

Dozarea ODP-urilor

Pentru determinarea cantitativ a acestora s-a folosit metoda spectrofotometric prevzut

n Farmacopeea European, ed. a 5-a, monografia Ash leaf (Fraxini folium, frunze de frasin)
(115).
Principiul metodei
Fenolii formeaz n prezena acidului azotos nitrozoderivai care izomerizeaz spontan,
atunci cnd se afl n mediu alcalin, n derivai izonitrozo sau n oxime. Acestea, avnd caracter
slab acid, se dizolv n soluii alcaline, dnd coloraii roii.

Reactivi i solveni necesari:

acid clorhidric soluie 0,5 mol/l;
reactiv Arnow (soluie apoas de azotit de sodiu i molibdat de sodiu);
hidroxid de sodiu soluie apoas 10%;
metanol 50%;
ap distilat.

Prepararea soluiei de analizat

32
 1,0000 g de produs vegetal uscat (Anethi flores, Anethi fructus i Anethi folium) se
refluxeaz pe sit n 25 ml metanol 50%. Se rcete, se filtreaz i se spal filtrul cu 5ml de
metanol 50%. Soluia se aduce n balon cotat de 25 de ml i se completeaz la semn cu acelai
solvent.

Tehnica de lucru: n baloane cotate de 10 ml s-au adus volume de 1 ml soluie

extractiv, s-au adugat 2 ml soluie HC1 0,5 mol/l, 2 ml soluie preparat prin dizolvarea a 10 g
nitrit de sodiu i 10 g molibdat de sodiu n 100 ml de ap, apoi 2ml soluie NaOH 10% i s-a
completat la semn cu ap. Dup agitare, s-a determinat absorbana probelor respective la
spectrofotometrul Cecil series 2000, la = 525 nm, n cuve de 1 cm, fa de probele martor n
care reactivul Arnow a fost nlocuit cu ap distilat.
Dozarea uleiului volatil
n acest scop s-a folosit metoda prevzut n Farmacopeea Romn (113)..

Principiul metodei
Dozarea uleiurilor volatile din produse vegetale se efectueaz prin distilare cu vapori de
ap cu ajutorul aparatului Neoclevenger.
Acesta funcioneaz pe principiul vaselor comunicante, n care apa se recircul. Aparatul
este prevzut cu un tub gradat care permite citirea direct a cantitii de ulei volatil obinut.

Tehnica de lucru: 50g de Anethi flores, Anethi fructus i Anethi folium (produse vegetal
tip concissum) i volumul de ap corespunztor se introduc in balonul cu fund rotund, care se
adapteaz la un dispozitiv de distilare. Tubul gradat n diviziuni de 0.02 ml i partea inferioar a
separatorului se umplu cu ap prin tubul care se nchide apoi cu un dop strbtut de un canal. Se
las s circule apa n refrigerent i se nclzete balonul pn ce apa ncepe s fiarb i s distile
cu o vitez moderat. Dup terminarea distilrii se oprete circuitul apei din refrigerent i se las
s circule vaporii timp de cteva minute pentru a spla refrigerentul de urmele de ulei aderent.
Cnd refrigerentul s-a nclzit pe toat lungimea sa se las s circule din nou apa i se oprete
sursa de caldur. Dup 30 de minute se coboar ncet stratul de ulei n tubul gradat prin
deschiderea robinetului. Se citete volumul de ulei n ml i se raporteaz la 100g produs vegetal.

4.2. ANALIZA CROMATOGRAFIC

4.2.1. SEPARAREA I IDENTIFICAREA PRIN CROMATOGRAFIE N STRAT

SUBIRE (CSS) A UNOR CONSTITUENI CHIMICI

CSS se bazeaz pe distribuia diferit a componentelor unui amestec ntre dou faze,
dintre care una staionar constituit din cromatoplaca cu un strat adsorbant i una mobil
constituit dintr-un solvent sau un amestec de solveni ce se developeaz pe cromatoplac.
Rezultatele examenului chimic calitativ i cantitativ au impus aprofundarea studiului
flavonelor, acizilor fenolici, cumarinelor, sterolilor i triterpenelor prin acest tip de metod
cromatografic.

4.2.2. STUDIUL PRIN CSS AL FLAVONELOR I ODP-URILOR

33
 Ca material de studiu s-au folosit produsele vegetale Anethi flores, Anethi fructus i
Anethi folium obinute n iunie-august, n trei ani consecutivi, de la specia Anethum graveolens,
mrar, cultivat n localitatea Finta (jude Dmbovia). Materiile vegetale au fost uscate i
pstrate n condiii de laborator.

Prepararea soluiilor de analizat

1 g produs vegetal (Anethi flores, Anethi fructus i Anethi folium) s-a refluxat cu 10 ml
metanol concentrat, timp de 30 min. (n baloane prevzute cu refrigerent ascendent). Probele
rezultate au fost concentrate la volum mic (~1 ml) pe baie de nisip.
Condiii de analiz
S-au folosit condiiile prevzute n literatura de specialitate (116, 117).
Faza staionar: plci de silicagel 60 F254, Merck (10 x 20 cm), activate prin meninere
timp de 1 or, la etuv, la 105 C.
Faza mobil (developant): s-a folosit faza superioar rezultat prin amestecarea
solvenilor acetat de etil : acid formic : ap, n raport 80 : 8 : 12 (V/V/V) i agitarea ntr-o plnie
de separare.
Substane de referin: rutozid (Fluka), cvercetol, acid cafeic i acid clorogenic (Merck) -
soluii metanolice 0,1%.
Ageni de revelare:
lumina UV (folosind o lamp de UV Camag);
difenilboriloxietilamin (DFBOEA) soluie alcoolic 1% i propilenglicol soluie
alcoolic 5% .
Tehnica de lucru: cte 0,1 ml din probele de analizat i din amestecul soluiile
substanelor de referin s-au adus pe linia de start, prin depunere n band, folosind o
micropipet. Cromatoplaca respectiv a fost apoi introdus n bacul de cromatografiere, a crui
atmosfer a fost saturat n prealabil cu vaporii fazei mobile. Examinarea cromatoplcii s-a
efectuat n vizibil i n UV la = 254 i 366 nm (folosind un aparat Camag Reprostar 3, care
permite fotografierea cromatoplcilor), nainte i dup pulverizarea cu agenii de revelare.

4.2.3. STUDIUL PRIN CSS AL CUMARINELOR

Ca material de studiu s-au folosit produsele vegetale Anethi flores, Anethi fructus i
Anethi folium obinute de la specia Anethum graveolens, mrar, cultivat n localitatea Finta
(jude Arge). Materiile vegetale au fost uscate i pstrate n condiii de laborator.

Prepararea soluiilor de analizat

1g produs vegetal (Anethi flores, Anethi fructus i Anethi folium) s-a refluxat cu 10 ml
metanol conc., timp de 30 min. (n baloane prevzute cu refrigerent ascendent). Probele rezultate
au fost concentrate la volum mic (~1 ml) pe baie de nisip.

Condiii de analiz
S-au folosit condiiile prevzute n Farmacopeea European, monografia Ortie (Urticae
folium, frunze de urzic) (17).
Faza staionar: plci de silicagel 60, Merck (10 x 20 cm), activate prin meninere timp
de 1 or, la etuv, la 105 C.

34
 Faza mobil (developant): s-a folosit sistemul de solveni acid formic anhidru : ap :
metanol : acetat de etil, n raport 2,5 : 4 : 4 : 40 (V/V/V/V).
Substane de referin: scopoletol (Merck), soluie metanolic 0,1%.
Ageni de revelare:
lumina UV (folosind o lamp de UV Camag);
difenilboriloxietilamin (DFBOEA) soluie alcoolic 1%.
Tehnica de lucru: cte 0,1 ml din probele de analizat i din soluia substanei de referin
s-au adus pe linia de start, prin depunere n band, folosind o micropipet. Cromatoplaca
respectiv a fost apoi introdus n bacul de cromatografiere, a crui atmosfer a fost saturat n
prealabil cu vaporii fazei mobile. Examinarea s-a efectuat n lumina UV la = 254 i 366 nm
(folosind un aparat Camag Reprostar 3, care permite fotografierea cromatoplcilor), nainte i
dup pulverizarea cu agentul de revelare menionat a cromatoplcii nclzite 5 min, n etuv.

4.2.4. STUDIUL PRIN CSS AL STEROLILOR I TRITERPENELOR

Ca material de studiu s-au folosit produsele vegetale Anethi flores, Anethi fructus i
Anethi folium obinute n iunie-august 2008, de la specia Anethum graveolens, mrar, cultivat n
localitatea Morreti (jude Dmbovia). Materiile vegetale au fost uscate i pstrate n condiii
de laborator.

Prepararea soluiilor de analizat

1 g produs vegetal (Anethi flores, Anethi fructus i Anethi folium) s-a refluxat cu 10 ml
cloroform, timp de 30 min. (n baloane prevzute cu refrigerent ascendent). Probele rezultate au
fost concentrate la volum mic (~1 ml) pe baie de nisip.

Condiii de analiz
S-au folosit condiiile prevzute n literatura de specialitate (117, 119).

Faza staionar: plci de silicagel 60, Merck (10 x 20 cm), activate prin meninere timp
de 1 or, la etuv, la 105 C.
Faza mobil (developant): s-a folosit sistemul de solveni cloroform : aceton, n raport
80 : 20 (V/V).
Substane de referin: acid oleanolic, acid ursolic, stigmasterol i betasitosterol (Sigma) -
soluii metanolice 0,1%.
Ageni de revelare:
lumina UV (folosind o lamp de UV Camag);
anhidrid acetic;
amestec de H2SO4 conc. i etanol (l:1, V/V).

Tehnica de lucru: cte 0,1 ml din probele de analizat i din amestecul soluiile
substanelor de referin s-au adus pe linia de start, prin depunere n band, folosind o
micropipet. Cromatoplaca respectiv a fost apoi introdus n bacul de cromatografiere, a crui
atmosfer a fost saturat n prealabil cu vaporii fazei mobile. Examinarea cromatoplcii s-a
efectuat n vizibil i n UV la = 254 i 366 nm (folosind un aparat Camag Reprostar 3, care

35
permite fotografierea cromatoplcilor), nainte i dup pulverizarea succesiv cu agenii de
revelare menionai, urmat de meninere 5 min. la etuv, la 105 C.

CAPITOLUL 5 REZULTATE I DISCUII PRIVIND STUDIUL

FARMACOGNOSTIC AL
PRODUSELOR ANETHI FRUCTUS, ANETHI FLORES, ANETHI FOLIUM
I ANETHI AETHEROLEM

Produsele vegetale Anethi flores, Anethi fructus i Anethi folium reprezint

inflorescenele, fructele i frunzele uscate dup recoltare de la specia Anethum graveolens, mrar,
familia Apiaceae.

5.1. VERIFICAREA IDENTITII

Prin aplicarea metodelor calitative de analiz: examen macroscopic, examen microscopic,

examen microchimic i examen chimic calitativ am verificat identitatea produselor vegetale
propuse.

5.1.1. EXAMEN MACROSCOPIC

Prin acest examen, care reprezint primul stadiu de investigare al produselor noi sau
cunoscute, se urmrete stabilirea caracterelor morfologice observate cu ochiul liber sau cu lupa
i a caracterelor organoleptice care se refer la culoare, miros i gust. n acest mod este analizat
ntreaga varietate de produse vegetale ale cror caracteristici sunt determinate de natura
organelor din care sunt constitute, de poziia taxonomic a plantelor de la care provin i de forma
lor de prezentare: produse ntregi (in toto), fragmentate (concissum) sau pulverizate
(pulveratum).
Parametrii urmrii n cadrul examenului macroscopic sunt descrii n continuare.
Aspectul, prin care se stabilesc:
- forma produsului (ntreg sau fragmentat);
- particularitile feelor;
- fractura;
- consistena;
- tipul seciunii transversale i raportul dintre esuturi (la lup).
Dimensiunile se apreciaz n:
- centimetri - pentru majoritatea produselor, folosind rigla;
- milimetri - pentru fructele i seminele mici, folosind hrtia milimetric.
Culoarea se observ cu ochiul liber, la exterior i la interior. Culoarea galben, roie, albastr,
portocalie a florilor i fructelor presupune prezena pigmenilor flavonoidici sau
carotenoidici, culoarea portocalie la scoare, codie i organe subterane indic prezena
derivailor antrachinonici; culoarea brun la frunze, organe subterane i unele cotiledoane
este explicat de coninutul n taninuri catehice ale acestor produse.
Mirosul se percepe pe produsul ca atare zdrobit ntre degete (frunze, flori) sau pulverizat.
Mirosul aromat este corelat cu prezena uleiurilor volatile i/sau a cumarinelor.
36
 Gustul se determin pe produsul ca atare sau pe decoct
care nu se nghite, ci se arunc, iar apoi se
cltete gura cu ap. Gustul amar al produselor
se poate datora prezenei substanelor
amare, heterozidelor cardiotonice sau unor
alcaloizi, gustul astringent se datoreaz
taninurilor, gustul aromat e dat de prezena
uleiurilor volatile sau a rezinelor, iar gustul
dulce este atribuit glucidelor
Examenul macroscopic al produsului vegetal in
toto este de cele mai multe ori suficient pentru
determinarea identitii acestuia. Caracterele
organoleptice mai ofer i unele orientri asupra
compoziiei chimice a produselor analizate prin culoare,
gust, miros, etc.
n urma examinrii macroscopice a produselor
vegetale (figurile 5.1, 5.2, 5.3) s-a constatat c acestea
corespund descrierii din literatura de specialitate:
- inflorescene de tip umbel (specific
reprezentanilor familiei Apiaceae), cu flori mici,
galbene-verzui, hermafrodite;
- fructe de tip diachen care la maturitate se
transform n dou mericarpe libere, denumite
impropriu semine (datorit dimensiunilor mici);
- frunze tripenat-sectate (foliole filiforme, peiolate)
(120, 121, 122).

Fig. 5.1: Anethi flores

(in toto)

37
 Fig. 5.2: Anethi fructus
(in toto)

Fig. 5.3: Anethi folium (concissum)

5.1.2 EXAMEN MICROSCOPIC

Prin acest examen am urmrit precizarea organului din care este constituit produsul
vegetal respectiv, prin identificarea elementelor anatomice comune organului i stabilirea
elementelor caracteristice produsului.
Un produs vegetal poate fi supus examenului microscopic n urma unei anumite
prelucrri n vederea obinerii unor preparate ce pot fi analizate la microscop. n aceast etap a
cercetrilor am efectuat examenul microscopic al produselor vegetale pulverizate. Produsele
vegetale se pulverizeaz prin zdrobire sau mcinare, urmat de omogenizare prin cernerea
pulberii (sita cu 30 ochiuri/cm).
Preparatul microscopic se obine utilizndu-se un reactiv sau o soluie de clarificare, a
crei alegere se face fie pentru clarificarea pulberii vegetale, fie pentru obinerea unor reacii
caracteristice compuilor chimici ai pereilor celulari sau ai coninutului celulelor.
Tehnica de lucru, adaptat produselor provenite de la Anethum graveolens, a constat n
aducerea pe o lam de microscop a 2-3 picturi din soluia de cloralhidrat (R, 800 g/L), n care se
presar pulberea vegetal luat cu un ac spatulat. Preparatul astfel obinut se nclzete uor
deasupra unei flcri, pn cnd se percepe un uor miros de reactiv, iar dup rcire se acoper
cu o lamel. Dac este necesar prelungirea nclzirii, se mai adaug 1-2 picturi din soluia de
cloralhidrat. Pentru punerea n eviden a elementelor lignificate, se adaug n preparat nainte de
a-l acoperi cu lamela, 1-2 picturi de floroglucin n acid clorhidric (R).

38
 La fel ca n cazul seciunilor i pulberile pot fi examinate la microscop ntr-o varietate de
soluii i reactivi, ncepnd cu apa i terminnd cu reactivul Steimetz.
Elementele anatomice observate prin vizualizarea microscopic a pulberilor obinute din
cele 3 produse vegetale, clarificate cu cloralhidrat, sunt prezentate n figurile 5.4 5.15.

Astfel, n Anethi flores am evideniat:

- gruncioare de polen cu form alungit, cuticul neted sau fin ornamentat i
unul sau doi pori germinativi (figura 5.4);
- endoteciu cu aspect caracteristic (figura 5.5);
- papile cu cuticul neted sau uor verucoas (figurile 5.6, 5.7); - vase de lemn
inelate sau spiralate, aleuron (figura 5.8).

n Anethi fructus am identificat:

- fragmente de parenchim cu perei ngroai celulozic (figura 5.9);
- parenchim cu druze de oxalat de calciu (figura 5.10);
- fibre i esut pigmentar (figura 5.11);
- vase de lemn inelate (figura 5.12);
- endosperm cu picturi de ulei gras (figura 5.13), embrion.

n Anethi folium am stabilit prezena elementelor comune pulberilor produselor vegetale

de tip folium:
- parenchim clorofilian cu vase de lemn de calibru mic (figura 5.14);
- epiderm cu stomate de tip diacitic sau anomocitic (figura 5.15). Nu s-au observat
peri tectori sau glandulari.

Fig. 5.4 - Gruncioare de polen (ob. 40x) Fig. 5.5 - Endoteciu (ob. 40x)
Fig. 5.4 - Ovoids pollen grains (ob. 40x) Fig. 5.5 - Endothecium (ob. 40x)

39
Fig. 5.6: Papile cu cuticula neted, vase de lemn (ob. Fig. 5.7: Papile cu cuticula uor verucoas (ob.
40x) 40x)
Fig. 5.6: Papillae with smooth cuticule, small vessels Fig. 5.7: Papillae with warty cuticule (ob. 40x)
(ob. 40x)

Fig. 5.8: Vase de lemn; aleuron (ob. 40x) Fig.5.9: Parenchim cu perei ngroai celulozic Fig. 5.8:
Small vessels, aleurone (ob. 40x) Fig.5.9: Parenchyma with cellulosic vessels

Fig. 5.10: Parenchim cu druze de oxalat de calciu Fig. 5.11: Fibre i esut pigmentar Fig. 5.10:
Parenchyma with druses of calcium oxalate Fig. 5.11: Fibers and pigmented tissue

40
 Fig. 5.12: Vas de lemn inelat (ob. 100x) Fig. 5.13: Endosperm cu picturi de ulei gras (ob.
Fig. 5.12: Curly vessels (ob. 100x) 40x)
Fig. 5.13: Endosperm containing oil droplets (ob.
40x)

Fig.5.14: Parenchim clorofilian cu vase de lemn de Fig. 5.15: Stomate de tip diacitic i anomocitic
calibru mic (ob. 40x) (ob. 40x)
Fig.5.14: Chlorophilian Parenchyma with small Fig. 5.15: Diacytic and anomoytic stomata (ob.
vessels (ob. 40x) 40x)

Concluzii: elementele anatomice specifice pentru specia Anethum graveolens sunt

reprezentate de:
- caracteristicele gruncioarelor de polen;
- forma de cristalizare a oxalatului de calciu (druze);
- natura substanei de rezerv din semine (ulei gras).
Prin acest studiu am adus o contribuie la stabilirea caracterelor microscopice ale
produselor vegetale de tip flores, fructus i folium obinute de la specia Anethum graveolens,
deoarece literatura de specialitate nu ofer astfel de date.

5.1.3 EXAMEN MICROCHIMIC

41
 n acest studiu am urmrit cumarinele.
Aa cum am precizat n capitolul 4, Materiale i metode, am ales pentru examenul
microchimic microsublimarea, care permite identificarea principiilor active ce prin nclzire trec
direct din stare solid n stare de vapori (sublim). Prin tehnica microsublimrii se poate realiza o
separare a cumarinelor de flavone. Este posibil astfel identificarea celor dou clase de principii
active, fr a mai exista pericolul interferenei reaciilor de identificare i al fluorescenei.
Cumarinele sunt compui sublimabili, cu fluorescen albastr, care prin alcalinizare
devine mai intens sau se modific n albastru-verzui.
Microsublimatele obinute prin tehnica descris n capitolul 4, din toate cele trei produse
vegetale luate n studiu, au prezentat fluorescen albastr, care prin alcalinizarea soluiei s-a
intensificat sau a devenit albastr-verzuie.
n concluzie, reacia cu NaOH pe microsublimat a pus n eviden existena cumarinelor.
Conform datelor oferite de literatura de specialitate acest grup de principii active este
prezent i n alte specii din familia Apiaceae, ca de exemplu:
- Ammi majus Lam. - efectul fotosensibilizant imprimat de furanocumarine fructelor acestei
specii a fost folosit de egipteni din cele mai vechi timpuri, n vitiligo (pentru ameliorarea
aspectului epidermei depigmentate); n secolul trecut, Ammi majoris fructus constituia materie
prim pentru obinerea de xantotoxin -medicament utilizat n PUVA-terapia unor afeciuni
dermice, n special psoriazis i vitiligo (mai nti se administreaz oral furanocumarina, apoi
tegumentul afectat este expus la radiaii UV din domeniul 320-380 nm);
- Angelica archangelica L., angelic, buccini - frunzele i tulpinile tinere sunt cunoscute
n arta culinar european, iar uleiul volatil i diferite extracte din fructe i rdcini pentru
obinerea unor lichioruri (Eaux des Carmes, Chartreuse, Vermouth);
- Angelica sinensis Diels., angelica chinezeasc - n China este considerat legum, dar i
plant medicinal;
- Pastinaca sativa L., pstrnac i Petroselinum sativum Hoffm., ptrunjel - rdcina
acestor specii este utilizat n alimentaie, dar i n fitoterapia litiazei renale (123, 124, 125).

5.1.4 EXAMEN CHIMIC CALITATIV

Prin acest examen am urmrit identificarea principiilor active din produsul vegetal. prin
extracie succesiv i selectiv a produsului vegetal cu solveni de polariti diferite, ncepnd cu
solventul apolar i terminnd cu un solvent polar, am reuit separarea principalelor grupe de
principii active, conform schemelor prezentate n capitolul 4.
n aceasta etap am urmrit identificarea principalelor clase de principii active de natur
vegetal, adic alcaloizi, carotenoide, cumarine, emodoli, flavone, compui polihidroxifenolici
(ODP-uri), compui reductori, oze i poliholozide, saponozide, taninuri, proantociani, antociani,
utiliznd reaciile chimice descrise n literatura de specialitate (114).

Identificarea alcaloizilor
Alcaloizii sunt substane organice cu caracter bazic ce conin n molecul un atom de N
heterociclic i au activitate farmacodinamic specific i toxicitate ridicat.
Am identificat alcaloizii prin reaciile de precipitare efectuate pe srurile acestora. Dac
n probele tratate cu reactivi (prin tehnica descris n capitolul 4) apar opalescene sau precipitate
evidente (de culoare alb-glbuie), alcaloizii sunt prezeni.
42
 Identificarea carotenoidelor
Carotenoidele sunt compui vegetali, lipofili, colorai n galben, portocaliu, rou sau
violet. Constituie principala surs de vitamin A pentru regnul animal i nsoesc permanent
clorofila.
Datorit faptului c aceste carotenoide dau cu reactivul Carr-Price o reacie de culoare,
caracteristic, am reuit identificarea carotenoidelor prin culoarea rou brun aprut.

Identificarea cumarinelor
Heterozidele i agliconii cumarinici sunt substane solide, cristalizate, incolore sau slab
colorate n galben, cu miros aromat caracteristic. Cumarinele sunt lipsite de gust i sublimeaz,
fiind solubile n solveni polari (ap, metanol, etanol i aceton) i insolubile n solveni organici
apolari.
Heterozidele hidrolizeaz n prezena acizilor minerali diluai cu eliberarea agliconului.
Agliconii sunt solubili n solveni apolari (eter etilic) i insolubili n ap.
Am verificat prezena cumarinelor prin reacia de modificare a fluorescenei n mediu
alcalin, tiind c heterozidele i agliconii emit radiaii n lumina UV, prezentnd fluorescena
caracteristic: albastr, albastr-verzuie, violet care se modific ntr-un astfel de mediu.

Identificarea emodolilor
Emodolii (agliconii antracenozidelor) sunt substane cristalizate, solubile n solveni
apolar i n soluii apoase alcaline (se formeaz emodinai colorai n rou).
Am verificat prezena emodolilor prin reacia Borntrger. Principiul metodei se bazeaz
pe proprietatea agliconilor forme oxidate (antrachinone) de a trece din emodoli n fenoxizi
(emodinati) de culoare roie-viinie, n prezena soluiilor alcaline.
H +
O O O NH
4

HO CH
3

OH O OH O

+NH OH
4 + H
HO CH NH4 O O O
3
O
emodol
HO CH
3
O
emodinat de amoniu

Identificarea flavonelor
Flavonele sunt substane solide, cristalizate, colorate n galben de diferite intensiti.
Heterozidele flavonice sunt solubile n ap, alcool diluat i concentrat, solubile specific n acetat
de etil, aceton, insolubile n solveni apolari.

43
 Agliconii sunt solubili n alcool, acetat de etil, aceton, insolubili n solveni apolari.
Heterozidele hidrolizeaz numai n prezena acizilor minerali (nu hidrolizeaz enzimatic). n
condiii diferite, n funcie de atomul de legtur dintre aglicon i partea glucidic, Oheterozidele
hidrolizeaz uor, iar C-heterozidele hidrolizeaz n prezena unor concentraii mari de acid, ntr-
un timp mai ndelungat, la presiune ridicat i n prezena unor catalizatori.
Datorit gruprii cetonice de la C, flavonele se pot reduce cu hidrogen nscnd n mediu
hidroalcoolic cnd se formeaz antocianidoli (reacia Shibata). Culoarea acestora poate fi roie
(flavonoli) sau portocalie (flavone).
Prezena gruprilor oxidril fenolice permite transformarea, n mediu alcalin, a flavonelor
n fenoxizi de culoare galben mai intens dect flavona iniial.. Gruprile oxidril alcoolice din
vecintatea gruprii ceto permit formarea de chelati cu metale bi- i trivalente, colorai n galben
mai intens dect flavona iniial.

d) Reacia Shibata (cianidolului)

Reacia are la baz reducerea gruprii cetonice a flavonelor n prezen de hidrogen,
rezultat n reacia dintre magneziu i acid clorhidric concentrat). Se formeaz clorura de oxoniu
colorat n rou.
OH OH
+ -
HO O HO O Cl
OH OH
+ Mg + HCl conc.

OH OH
OH O OH

cvercetol clorura de cianidol

e) Reacia cu hidroxidul de sodiu (NaOH)

Flavonozidele se dizolv n alcali cu obinerea unor fenolai (flavoxizi) colorai n galben
intens.
OH ONa
HO O HO O
OH ONa
+ 2 NaOH
- 2 H2O OH
OH
OH O OH O

cvercetol fenoxidul cvercetolului

f) Reacia cu clorur de aluminiu (AlCl3)
Are la baz chelatarea cu sruri ale metalelor bi- i trivalente.

44
 HO OH

O O Al

OH
OH 3

complexul cvercetolului cu Al (III)

Flavonele cu grupri libere de C3 sau C5 formeaz mpreun cu gruparea ceto de la C4
chelai n poziia orto (I) sau n para (II). Aceti compui se pot obine i atunci cnd pe nucleu
exist dou grupri -OH vicinale, iar mediul de reacie este alcalin, pentru c n aceste condiii
gruparea -OH din 4 se transform n grupare cetonic prin tautomerie poziie para (III).
Chelaii obinui sunt de culoare galben intens i au o fluorescent galben-verzuie sau albastr
n UV.
Identificarea compuilor polihidroxifenolici (numii i ODP-uri sau ortodihidroxifenoli).
ODP-urile sunt compui cristalizai, incolori sau cafenii, lipsii de miros i gust, solubili
n ap i alcool.
Am verificat prezena ODP urilor prin reacia cu reactiv Arnow. Reacia const n
proprietatea fenolilor de a forma cu acidul azotos nitrozoderivai ce se izomerizeaz spontan n
izonitrozoderivai sau oxime care, datorit caracterului lor slab acid, se dizolv n soluii alcaline
dnd coloraii roii.
OH O
OH
+ HONO HO N=O HO N-OH
HO
- HO
2
CH=CH-COOH CH=CH-COOH
CH=CH-COOH

acid cafeic nitrozoderivat oxima acidului cafeic

Identificarea compuilor reductori

Compuii reductori de natur vegetal pot fi polifenoli sau oze. Evidenierea caracterului
reductor se bazeaz pe proprietatea lor de a reduce soluia de reactiv Fehling la oxid cupros,
precipitat de culoare roie.

Identificarea ozelor i poliholozidelor

Datorit caracterului reductor, am putut identifica ozele simple prin reacia cu reactivii
Fehling sau Tollens i prin cuplarea cu o-toluidina sau fenilhidrazinele. Poliholozidele se
identific prin reacia de culoare cu hematoxilina sau prin precipitare n alcool.

45
 b) Reacia Molish are la baz condensarea furfuralului cu timol, cu formarea unui compus de
culoare roie. n cazul poliozelor reacia are loc dup depolimerizarea acestora cu
H2SO4 concentrat.
c) Precipitarea n alcool i colorarea cu hematoxilin se bazeaz pe precipitarea
poliholozidelor cu alcool i colorarea precipitatului n violet, cu hematoxilin.

Identificarea saponozidelor
Saponozidele triterpenice precipit cu acetatul neutru de plumb. Solubilitatea n ap a
saponozidelor cu grupri carboxilice poate fi mrit prin alcalinizarea soluiei (cu
hidrogenocarbonati, carbonai, fosfai). Se formeaz sruri mai solubile.
Saponozidele triterpenice hidrolizeaz enzimatic, treptat, mai uor dect cele sterolice, cu
formare de heterozide secundare sau prosapogenoli i oze. La nceput se scindeaz hexozele apoi
pentozele i, n final, acizii uronici. Hidroliza acid, dei total, este nespecific, n mediul de
reacie regsindu-se agliconii, ozele i eventual acizii uronici sau acizii organici care particip la
structura saponozidei respective.
d) Proba de spumefiere: se execut asupra soluiei extractive apoase care se agit timp de 15
sec ntr-o eprubet cu diametrul de 16 mm. Se formeaz o coloan de spum care persist cel
puin 15 minute.
e) Reacia cu acetatul de plumb: saponozidele triterpenice reacioneaz cu acetatul de
plumb 5% cnd se formeaz un precipitat alb.
f) Reacia cu hidroxidul de bariu: saponozidele formeaz cu hidroxidul de bariu un
precipitat alb .

Identificarea sterolilor i agliconilor triterpenici

La identificarea compuilor a stat la baz reacia Liebermann-Burchard: H2SO4 concentrat
i a anhidridei acetice, sterolii/triterpenele formeaz un dimer colorat n violet sau verde .

Identificarea taninurilor
Taninurile sunt substane solide, amorfe. Combinatiile cu mas molecular mic pot
cristaliza, fiind incolore. Taninurile se dizolv n ap la cald, mai greu la rece, formnd soluii
coloidale (solubilitatea variaz cu gradul de condensare) n alcool, aceton, acetat de etil. Sunt
insolubile n eter, cloroform, benzen, eter de petrol, sulfur de carbon i n ali solveni organici
apolari.
Au gust astringent, fiind lipsite de miros. Au activitate optic i sunt higroscopice. Sunt
absorbite de pulberea de piele, crbune, vat, oxid de aluminiu, caolin. Acizii i srurile minerale
precipit taninurile din soluii coloidale. Fiind fenoli cu caracter reductor (reduc reactivii
Tollens, Fehling i KMnO4, H2O2, I2), dau coloraii caracteristice cu srurile de Fe (III):
verdenegricioas n cazul taninurilor catehice i albastr-negricioas n prezena taninurilor
galice. Caracterul acid se datoreaz gruprilor -COOH i -OH fenolice libere. Cu proteinele
(substane amidice) formeaz combinaii macromoleculare tridimensionale, impermeabile i
imputrescibile (se stabilesc puni de hidrogen cu gruprile polare ale proteinelor).
Pentru verificarea prezenei taninurilor a stat la baz reacia cu FeCl 3. Metoda se bazeaz
pe proprietatea taninurilor de a determina coloraii albastre (taninuri galice) sau verzi (taninuri
catehice) n prezena srurilor de Fe3+.

46
 Identificarea proantocianilor
Proantocianii sunt substane amorfe, albe sau cafenii, solubile n ap, alcool i acetat de
etil.
Am verificat prezena proantocianilor prin reacia Bath-Smith, reacie de transformare n
antociani, n mediu de acid clorhidric 2%, urmat de extracie n butanol.

Identificarea antocianilor
Antocianii sunt substane cristalizate, de culoare roie, violet sau albastr, n funcie de
pH i de microelementele existente; sunt solubile n ap, alcool i acetat de etil.
Identificarea antocianilor s-a bazat pe proprietatea acestora de a-i modifica culoarea n
funcie de pH, numit reacia virajului de culoare.
Rezultatele analizei soluiilor extractive: eteric, alcoolic, apoas i apoas hidrolizat
sunt cuprinse n tabelele nr. 5.1, 5.2, 5.3 i 5.4.
Tabelul 5.1
Table 5.1
Analiza soluiilor extractive eterice obinute din produsele vegetale Anethi flores, fructus i folium
The analysis of extractive ether solutions from vegetal products Anethi flores, fructus i folium

Tabelul 5.2
Table 5.2
Analiza soluiilor extractive alcoolice obinute din produsele vegetale Anethi flores, fructus i folium The
analysis of extractive alcoholic solutions from vegetal products Anethi flores, fructus i folium

47
 Tabelul 5.3
Table 5.3
Analiza soluiilor extractive apoase obinute din produsele vegetale Anethi flores, fructus i folium
The analysis of extractive aqueous solutions from vegetal products Anethi flores, fructus i folium

48
 Table 5.4
Analiza soluiilor extractive apoase hidrolizate obinute din produsele vegetale Anethi flores, fructus i folium
The analysis of extractive aqueous hydrolyzed solutions from vegetal products Anethi flores, fructus i folium
Intensitatea reaciei
Reacia de Culoarea
Compus cutat Anethi Anethi Anethi Concluzie
identificare obinut
flores fructus folium
Emodoli Borntrger Galben - - - Compui abseni
Flavone Shibata Portocalie ++ + ++
(agliconi) NaOH Galben ++ + ++ Compui prezeni
AlCl3 Galben ++ + ++
R. Liebermann-
Sapogenoli inel rou-violet + + + Compui prezeni
Burchard
Agliconi fluorescena n
fluorescen verde + + + Compui prezeni
cumarinici mediu alcalin
Legend: ++ reacie intens pozitiv, + reacie pozitiv, - reacie negativ.

49
 CONCLUZII

Corobornd rezultatele obinute la analiza soluiilor extractive eterice, alcoolice i apoase

(iniiale i hidrolizate) se poate afirma c produsele vegetale Anethi flores, fructus i folium
conin:
flavone (libere i heterozidate);
acizi polifenolcarboxilici;
cumarine (libere i glicozidate);
steroli/triterpene;
carotenoide;
substane azotate nealcaloidice;
oze i poliuronide.
Nu s-au identificat emodoli, proantociani, antociani, taninuri, compui azotai
alcaloidici.
Literatura de specialitate consultat citeaz prezena cumarinelor (furanocumarine) i
flavonelor (120, 21, 122).
Absena alcaloizilor sugereaz c produsele nu sunt toxice, dar se reine riscul de
reacii alergice imprimat de cumarine (posibil furanocumarine).
Flavonele pot imprima florilor, fructelor i frunzelor de mrar efecte terapeutice,
deoarece acest grup de principii active poate avea rol de:
- factor P (sau de permeabilitate; scade permeabilitatea i crete rezistena
capilarelor);
- diuretic;
- antioxidant, antiinflamator etc. (126, 127, 128).
Prezena acizilor polifenolcarboxilici (sau ODP-urile) n produsele vegetale este
corelat cu efectul:
- coleretic-colagog (majoritatea reprezentanilor);
- antibacterian, antimutagenic, antitumoral i antiviral (studii pe acidul clorogenic) (126-
129)
Cumarinele au aciuni terapeutice diferite, n funcie de structura chimic: -
venoton i vasoprotectoare (esculozida);
- coleretic (izofraxozida, scopoletolul);
- diuretic (fraxozida);
- ecranant mpotriva radiailor solare (cumarina simpl i derivaii si) etc. (126, 128).
Sterolii i triterpenele sunt principii active recunoscute pentru potenialul lor
antiinflamator, iar carotenoidele ca surs de vitamin A (124).
Substanele azotate nealcaloidice (aminoacizi, proteine), ozele i poliuronidele sunt
compui frecvent rspndii n regnul vegetal.

5.2. DETERMINAREA PURITII

Am determinat puritatea produselor vegetale conform normelor prevzute de farmacopee,

urmrind stabilirea impuritilor din plant i a corpurilor strine.

50
 5.2.1 DETERMINAREA IMPURITILOR DIN PLANT

Aceste impuriti pot fi constituite din pri ale altor organe ale plantei productoare sau
din produse degradate. Adeseori, odat cu recoltarea diverselor organe de plante care constituie
produsele vegetale sunt recoltate i alte organe care nu conin principii active.
Tot n aceast categorie intr produsele alterate (atacate de boli, insecte) sau degradate
(exemplu: frunze zdrobite, frunze brunificate etc).
Normele de calitate prevzute pentru fiecare produs vegetal se refer la anumite
procentaje din aceste impuriti sau exclud prezena lor.

5.2.2 DETERMINAREA CORPURILOR STRINE

Aceleai norme prevd sau exclud prezena n produsele vegetale a unor corpuri strine
(pri din alte plante, substane minerale, pmnt, nisip etc).
Normele existente prevd prelevarea pentru determinarea impuritilor i a corpurilor
strine din produsele vegetale a urmtoarelor cantiti de probe de analizat:
- pentru semine i fructe foarte mici (mutar) 2-5 g;
- pentru alte semine i fructe mici (anason, fenicul) 20 g;
- pentru produse vegetale fragmentate 50 g;
- pentru flori, frunze, ierburi, scoare 100 g.
Produsele vegetale luate n studiu nu conineau impuriti sau corpuri strine, fiind
recoltate personal, uscate i meninute n condiii de laborator.

5.3. VERIFICAREA CALITII

Determinarea calitii produselor vegetale este o condiie absolut necesar pentru avizarea
folosirii acestora n terapeutic sau ca materie prima n laboratoarele galenice sau n industria
farmaceutic.
Stabilirea compoziiei chimice, sub aspect calitativ i cantitativ, a unui produs vegetal este
precedat de efectuarea unor probe preliminare care prezint valoare orientativ pentru
investigaiile chimice ce urmeaz a fi aplicate.
Pentru a stabili calitatea produselor vegetale de tip flores, fructus i folium, obinute de la
specia Anethum graveloens, mrar (Apiaceae) am efectuat att determinri preliminare, ct i
dozri de principii active.

5.3.1 DETERMINRI PRELIMINARE

Aceste determinri constau n stabilirea apei de constituie (umiditate) i a capacitii de
gonflare (factor de mbibare).

Determinarea umiditii
Cantitatea de ap din produsele vegetale este influenat de gradul de uscare, de mediul
ambiant i de compoziia chimic a acestora.Procedeele de determinare a coninutului de ap din
produsele vegetale pot fi: uscare la etuv, uscare la vid, uscare la exicator, antrenare cu solveni
organici. Pentru aceste determinri am ales uscarea la etuv.

51
 n urma aplicrii acestei metode am stabilit pentru produsele vegetale luate n studiu
valori ale umiditii cuprinse n intervalul:
- 9,24 8, 87 % pentru Anethi flores;
- 8,75 9, 14 % pentru Anethi fructus; - 9,58 10, 18 % pentru Anethi folium.
Deoarece literatura de specialitate (112) indic o pierdere prin uscare de:
- 10 -13 % pentru produsul de tip flores;
- 12 - 20 % pentru produsul de tip fructus i - 5-14 0% pentru produsul de tip folium,
considerm c acest parametru este respectat i astfel se asigur conservabilitatea.

Determinarea factorului de mbibare

Factorul de mbibare reprezint volumul ocupat de 1g de produs vegetal i mucilagul
aderent dup mbibarea cu ap.
Determinarea factorului de mbibare s-a fcut dup metoda descris n capitolul 4.
n urma aplicrii acestei metode am stabilit pentru produsele vegetale luate n studiu
valori ale factorului de mbibare de:
- 10,2 - 10,7 pentru Anethi flores;
- 6,8 7,2 pentru Anethi fructus;
- 10,1 10,8 pentru Anethi folium.
Aceste valori, relativ ridicate, pot fi corelate cu prezena poliholozidelor de tip mucilagii.

5.3.2 DOZAREA PRINCIPIILOR ACTIVE

Dozarea flavonelor
Pentru determinarea cantitativ a flavonelor se pot utiliza:
metode fizico-chimice (colorimetrice, spectrofotometrice,
densitometrice, HPLC);
biologice (msurarea rezistenei capilare pentru determinarea timpului de apariie a
peteiilor pe cobai sau testarea permeabilitii capilare pe iepure, folosind metoda difuziei
unui colorant nchis).
n acest studiu am utilizat metoda spectrofotometric descris la capitolul 4. Soluia de
analizat (prepararea este descris n capitolul 4), ct i soluia martor s-au citit spectrofotometric
la = 427 nm.
Stabilirea curbei etalon pentru rutozid (s.r.)
n 4 baloane cotate de 10 ml s-au pipetat 1, 2, 3 i, respectiv, 4 ml de soluie de rutozid
0,01 g% n metanol. Peste aceasta s-au adugat cte 1 ml soluie acetat de sodiu, 0,6 ml A1C1 3
2,5% i s-a completat la semn cu metanol 50%. S-a agitat fiecare prob, s-a lsat n repaus timp
de 45 minute i s-au citit absorbanele la = 427 nm, n cuve de 1 cm, fa de martorii preparai
n aceleai condiii, dar nlocuind clorura de aluminiu cu metanol. Cu valorile absorbanelor i
ale concentraiilor corespunztoare, s-a trasat curba etalon (112, 113)
Tabelul 5.5
Table 5.5
Absorbanele soluiilor necesare pentru stabilirea curbei etalon de rutozid
Solutions absorbance for rutozide standard curve

52
 g rutozid/ml A
1 0,137
2 0,354
3 0,584
4 0,799

Coninutul n flavone al probelor a fost calculat prin interpolarea extinciilor citite, pe

curba etalon a rutozidei i raportarea la 100 g produs vegetal (substan uscat).
Astfel s-a determinat pentru fiecare din produsele vegetale Anethi flores, Anethi fructus i
Anethi folium cantitatea de flavone exprimat n rutozid. n tabelul 5.6 sunt prezentate
rezultatele determinrilor pentru produse vegetale recoltate n cei trei ani consecutivi, iar n
figura 5.16 este prezentat coninutul mediu n flavone.
Tabelul 5.6
Table 5.6
Coninutul n flavone din produsele vegetale Anethi flores, fructus i folium
Content of flavones from vegetal products Anethi flores, fructus i folium
Produsul vegetal Flavone
(g %, exprimare n rutozid)
Anul Anul Anul
1 2 3
Anethi flores 0,226 0,235 0,243
Anethi fructus 0,022 0,024 0,025
Anethi folium 0,196 0,205 0,218

Din analiza rezultatelor prezentate n tabel se remarc, n primul rnd, valori apropiate
pentru cele trei recoltri la toate produsele vegetale analizate. De asemenea, se remarc faptul c
inflorescenele de mrar au coninutul cel mai ridicat n flavone, fiind urmate de frunze. n
fructele de mrar cantitatea de flavone este relativ sczut.
Valorile obinute sunt mai mici dect cele descrise n literatur pentru alte produse
vegetale al cror coninut de flavone a fost stabilit n acelai condiii experimentale. De exemplu,
pentru frunza de anghinare, FR X prevede cel puin 0,35% flavone exprimate n rutozid.

Dozarea ODP-urilor
Pentru determinarea cantitativ a acestora am folosit metoda spectrofotometric
prevzut n Farmacopeea European, ed. a 5-a, monografia Ash leaf (Fraxini folium, frunze de
frasin), prezentat n capitolul 4.
Procentul de ODP-uri din prob exprimat n acid clorogenic se calculeaz dup formula:

unde: A - absorbana la 525 nm

m - masa de prob luat n lucru.
Se consider c pentru acidul clorogenic A = 188.

53
 Coninutul n ODP-uri al produselor vegetale Anethi flores, Anethi fructus i Anethi
folium , recolatat n cei trei ani, este prezentat n tabelul 5.7. n graficul din figura 5.17 sunt
reprezentate valorile medii ale ODP-urilor, pentru toate cele trei produse vegetale.

0,25

0,2

0,15
flavone (g%)

0,1

0,05

0
Anethi flores Anethi fructus Anethi folium

Fig.5.16 : Coninutul mediu de flavone din produsele vegetale Anethi flores, fructus i folium
Fig.5.16 : Medium content of flavones from vegetal products Anethi flores, fructus i folium

Tabelul 5.7
Table 5.7
Coninutul n ODP-uri n produsele vegetale Anethi flores, fructus i folium ODP
content from vegetal products Anethi flores, fructus i folium
Produsul vegetal ODP-uri (g %, exprimare n acid
clorogenic)
Anul Anul Anul
1 2 3
Anethi flores 1,758 1,828 1.905
Anethi fructus 0,135 0,137 0,141
Anethi folium 1,107 1,223 1,317

Din analiza acestor rezultate reiese c inflorescenele de mrar au coninutul apreciabil n

ODP-uri, fiind urmate de frunze. n fructele de mrar cantitatea de ODP-uri este relativ sczut.

54
 1,8

1,6

1,4

1,2

1
ODP-uri (g%)
0, 8

0,6

0, 4

0,2

0
Anethi flores Anethi fructus Anethi folium

Fig. 5.17: Reprezentarea grafic a coninutului n flavone din produsele vegetale Anethi flores, fructus i
folium medie pe trei ani
Fig. 5.17: Graphical representation of ODP content from vegetal products Anethi flores, fructus i folium
three years average

Valorile obinute sunt ns mai mici dect cele descrise n literatur pentru alte produse
vegetale al cror coninut de acizi fenolici a fost stabilit n acelai condiii experimentale.
De exemplu, pentru frunza de frasin, FE 5 prevede cel puin 2,5% derivai ai acidului
hidrocinamic, exprimai n acid clorogenic (130).

Dozarea uleiului volatil

Dozarea s-a realizat prin distilare cu vapori de ap, metod descris n capitolul 4.
Cantitatea de ulei volatil obinut, pentru cei trei ani n care s-a fcut recoltarea, este
nscris n tabelul 5.8.
Tabelul 5.8
Table 5.8
Coninutul n ulei volatil n produsele vegetale Anethi flores, fructus i folium
Volatile oil content from vegetal products Anethi flores, fructus i folium
Produsul vegetal Ulei volatil (ml/100g)
Anul 1 Anul 2 Anul 3
Anethi flores 2,9 3,4 3,5
Anethi fructus 3,1 3,5 3,7
Anethi folium 1,1 1,2 1,4

Rezultatele sunt exprimate la mas uscat de produs vegetal, iar valoarea medie este
reprezentat n graficul din figura 5.18.

55
 Din analiza acestor rezultate se poate afirma c inflorescenele i fructele de mrar sunt
produse vegetale cu un coninut apreciabil de ulei volatil.
Valorile obinute se ncadreaz n limitele prevzute n literatura de specialitate consultat
pentru aceste tipuri de produse vegetale obinute de la specia Anethum graveolens (121, 122).

3,5

2,5

2
ml %
ulei volatil
1,5

0,5

0
Anethi flores Anethi fructus Anethi folium

Fig. 5.18: Reprezentarea grafic a coninutului n ulei volatil din produsele vegetale Anethi flores, fructus i
folium medie pe trei ani
Fig. 5.18: Graphical representation of volatile oil content from vegetal products Anethi flores, fructus i
folium three years average

De altfel, familia Apiaceae este recunoscut pentru reprezentanii si folosii n

terapeutic sau n alimentaie, proprietile farmacologice, respectiv valoarea condimentar fiind
datorate constituenilor uleiului volatil.
FR X prevede pentru unele produse obinute de la specii ncadrate n aceast familie
botanic cel puin:
- 2 % ulei volatil pentru Anisi vulgaris fructus, fructe de anason;
- 3 % ulei volatil pentru Carvi fructus, fructe de chimen;
- 3,5 % ulei volatil pentru Foeniculi fructus, fructe de fenicul.
n acest context, frunzele de mrar pot fi considerate o surs modest de ulei volatil (dei
pentru multe produse vegetale, obinute de la specii din alte familii botanice, coninutul de ulei
volatil este de ~1%), dar inflorescenele si fructele au un coninut ridicat n acest metabolit
secundar.
5.4. SEPARAREA I IDENTIFICAREA PRIN CROMATOGRAFIE N STRAT
SUBIRE (CSS) A UNOR CONSTITUENI CHIMICI

56
 Rezultatele examenului chimic calitativ i cantitativ au impus aprofundarea studiului
flavonelor, acizilor fenolici, cumarinelor, sterolilor i triterpenelor prin acest tip de metod
cromatografic.
Se are n vedere urmtoarea succesiune de operaii:
- prepararea soluiilor de analizat;
- pregtirea cromatoplcii;
- aplicarea spoturilor;
- developarea;
- revelarea;
- calcularea Rf-urilor i identificarea spoturilor.

5.4.1 STUDIUL PRIN CSS AL FLAVONELOR I ODP-URILOR

n aceast etap a cercetrilor experimentale, studiile s-a realizat pe produsele vegetale

Anethi flores, Anethi fructus i Anethi folium. Metoda este descris n capitolul 4.
Cromatoplcile obinute prin studiul CSS al polifenolilor de tip flavne i ODP-uri sunt
prezentate n figura 5.19.

1 2 3 4
A

57
 1 2 3 4 1 2 3
B 4

Fig. 5.19: Cromatograma obinut prin studiul CSS al flavonelor i ODP-urilor din Anethum
graveolens
Fig. 5.19: CSS chromatogram of flavones and ODP from Anethum graveolens
1 = soluie metanolic de Anethum flores,2 = soluie metanolic de Anethum fructus,3 = soluie
metanolic de Anethum folium,4 = amestec de etaloane: rutozida (Rf = 0,24), acid cafeic (Rf
=0,32), acid clorogenic (Rf =0,91) i cvercetol (Rf = 0,92). A nainte de revelare, la 366
nm, B dup revelare, la 254 nm, C - dup revelare, la 366 nm.

Din analiza acestora se constat prezena a numeroase spoturi corespunztoare unor

compui cu comportament de flavon (fluorescen galben sau galben-brun, dup revelare cu
difenilboriloxietilamin) sau de ODP-uri (fluorescen albastr sau albastr-verzuie, dup
revelare cu reactivul menionat).
Dintre acestea, rutozida (Rf = 0,24), acidul cafeic (Rf =0,32), acidul clorogenic (Rf
=0,91) i cvercetolul (Rf = 0,92) au fost identificate n toate cele trei produse vegetale analizate.
Literatura de specialitate consultat citeaz prezena flavonozidelor (heterozide ale
cvercetolului i izoramnetolului n Anethi herba, respectiv ale kempferolului n Anethi fructus
(121, 122, 125).

5.4.2 STUDIUL PRIN CSS AL CUMARINELOR

n aceste experimente, au folosit ca material de studiu produsele vegetale Anethi flores

Anethi fructus i Anethi folium Materiile vegetale au fost uscate i pstrate n condiii de
laborator.
Cromatoplcile obinute prin studiul CSS al cumarinelor sunt prezentate n figura
5.20.
58
Din analiza acestora se constat prezena mai multor spoturi corespunztoare unor
cumarine (compui cu fluorescen albastr, mai intens dup revelare cu
difenilboriloxietilamin).
 1 2 3
4
B

1 2 3
4
1 2 3
A
4
C

59
 Fig. 5.20: Cromatograma obinut prin studiul CSS al cumarinelor din
Anethum graveolens
Fig. 5.20: CSS chromatogram of cumarines from Anethum graveolens
1 = soluie metanolic de Anethum flores, 2 = soluie metanolic de Anethum fructus, 3 =
soluie metanolic de Anethum folium, 4 = scopoletol (substan de referin). A nainte de
revelare, la 254 nm, B dup revelare, la 254 nm, C - dup revelare, la 366 nm.
Pe baza etalonului folosit, dintre aceti compui cu comportament de cumarin,
scopoletolul (Rf = 0,92) a fost identificat n toate cele trei produse vegetale analizate.
Literatura de specialitate consultat citeaz prezena n Anethi herba a cumarinelor
simple (scopoletol, cumarin), respectiv a unor cumarine (umbeliferon) i furanocumarine
(bergapten, xantotoxin) n Anethi fructus (121, 122, 125)

5.4.3 STUDIUL PRIN CSS AL STEROLILOR I TRITERPENELOR

Ca material de studiu s-au folosit produsele vegetale Anethi flores, Anethi fructus i
Anethi folium Materiile vegetale au fost uscate i pstrate n condiii de laborator.
Cromatoplcile obinute prin studiul CSS al sterolilor / triterpenelor sunt prezentate n
figura 5.21.

1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7
A B

60
 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7
C D
Fig. 5.21: Cromatograma obinut prin studiul CSS al sterolilor/triterpenelor din Anethum
graveolens
1 = soluie cloroformic de Anethum flores, 2 = soluie cloroformic de Anethum
fructus, 3 = soluie cloroformic de Anethum folium, 4 = acid oleanolic (substan de
referin), 5 = acid ursolic (substan de referin),6 = beta-sitosterol (substan de referin),7
= stigmasitosterol (substan de referin). A nainte de revelare, la 366 nm, B dup
revelare, n vizibil, C dup revelare, la 254 nm, D - dup revelare, la 366 nm.
Din analiza acestor cromatograme se constat prezena mai multor spoturi
corespunztoare unor steroli / triterpene (compui care dup revelare cu anhidrid acetic i acid
sulfuric prezint fluorescen galben, n lumina UV i coloraie violet, n vizibil).
Dintre acestea, betasitosterolul i/sau stigmasterolul (Rf=0,76) au fost identificate n
toate cele trei produse vegetale analizate. De remarcat c aceti compui sunt exemple clasice de
steroli vegetali.
Separarea betasitosterolului de stigmasterol prin CSS este dificil; nici alte sisteme de
solveni utilizate (toluen / eter etilic, 40 / 40, V/V sau benzen / aceton, 90 / 10, V/V) nu au
condus la obinerea de Rf-uri diferite pentru aceste substane.
Cei doi agliconi triterpenici, folosii ca substane de referin, acidul oleanolic (Rf=0,73)
i acidul ursolic (Rf=0,72) nu au fost identificai, n aceste condiii CSS, n inflorescenele,
fructele i frunzele de mrar.
Menionm c literatura de specialitate consultat nu precizeaz prezena
sterolilor/triterpenelor n Anethum graveolens (121, 122, 125).

61
 CAPITOLUL 6 CONCLUZII

n urma experimentelor efectuate n cadrul tezei de doctorat se pot despride urmtoarele

concluzii generale:

Prin studiul microscopic ntreprins n cadrul experimentelor de verificare i identificare a

produsului vegetal, am adus o contribuie la stabilirea caracterelor microscopice ale produselor
vegetale de tip flores, fructus i folium obinute de la specia indigen Anethum graveolens,
deoarece literatura de specialitate nu ofer astfel de date.
Screening-ul farmacognostic realizat pentru produsele vegetale Anethi flores, Anethi
fructus i Anethi folium a evideniat prezena urmtoarelor clase de pricipii active: flavone (libere
i heterozidate), acizi polifenolcarboxilici, cumarine (libere i glicozidate), steroli/triterpene,
carotenoide, substane azotate nealcaloidice, oze i poliuronide. Nu s-au identificat emodoli,
proantociani, antociani, taninuri, compui azotai alcaloidici. Absena alcaloizilor sugereaz c
produsele nu sunt toxice, dar se reine riscul de reacii alergice imprimat de cumarine (posibil
furanocumarine).
Determinarea calitii produselor vegetale (o condiie absolut necesar pentru avizarea
folosirii acestora n terapeutic) a condus la urmtoarele concluzii:
inflorescenele de mrar au coninutul cel mai ridicat n flavone, fiind urmate de
frunze. n fructele de mrar cantitatea de flavone este relativ sczut. Valorile obinute sunt
mai mici dect cele descrise n literatur pentru alte produse vegetale al cror coninut de
flavone a fost stabilit n acelai condiii experimentale.
inflorescenele de mrar au coninutul apreciabil n ODP-uri, fiind urmate de
frunze. n fructele de mrar cantitatea de ODP-uri este relativ sczut
studiile ntrprinse n vederea dozrii catitii de ulei volatil au artat c frunzele de mrar
pot fi considerate o surs modest de ulei volatil (aproximativ 1,2 ml/100g produs vegetal, dei
pentru multe produse vegetale, obinute de la specii din alte familii botanice, coninutul de ulei
volatil este de ~1%), dar inflorescenele si fructele au un coninut ridicat n acest metabolit
secundar (aproximativ 3.2, respectiv 3.4 ml/100g).
Analiza calitativ i cantitativ a uleiurilor volatile extrase din Anethi flores, Anethi
fructus i Anethi folium, a condus la urmtoarele concluzii:
uleiurile volatile analizate sunt un amestec de mono- i sesquiterpene, ultimele
fiind i cei mai importani compui implicai n activitatea farmacologic.
datele obinute coincid cu cele gsite n literatura de specialitate, regsindu-se
principalele componente specifice uleiului de mrar (carvon, limonene, felandren,
anetofuran)
se remarc existena unor diferene majore att n compoziia, ct i n coninutul
componentelor celor trei uleiuri volatile studiate, n ciuda faptului c toate provin de la
aceeai specie, Anethum graveolens.
BIBLIOGRAFIE

1. Martindale, W. and Sweetman, S.C. (eds.) - Martindale: The complete drug reference.
33rd edition, 2002. Pharmaceutical Press, London, 2483pp.

62
2. Lawless, J. - Die illustrierte Enzyklopdie der Aromale Das umfassende Standardwerk
der heilenden le und Pflanzen. Scherz Verlag, Bern, 1996, 255pp.
3. Richards, H.M.J - Spices and condiments I. In Volatile compounds in foods and
beverages, Maarse H. (ed.), Marcel Dekker Inc., New York, 1991, p. 411-447.
4. Hay, R.K.M. and Svoboda, K.P. - Botany. In Volatile oil crops: their biology,
biochemistry and production, Hay, R.K.M. and Waterman, P.G. (eds.), Longman
Scientific & Technical, Harlow, 1993, p. 5-22.
5. Lawrence, B.M. Commercial essential oils: Truths and consequences. In Advances in
flavours and fragrances: From the sensation to the synthesis. Swift, K.A.D. (ed.), Royal
Society of Chemistry RSC, Cambridge, 2002, p.57-83.
6. M. Oussalah, S. Caillet, L. Saucier, M Lacroix - Inhibitory effects of selected plant
essential oils on the growth of four pathogenic bacteria: E. coli O157:H7, Salmonella
Typhimurium, Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes. 2007, Food Control,
18, 414-420.
7. Salzer, U.-J., - The analysis of essential oils and extracts (oleoresins) from seasoningsa
critical review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 1977. 9 (4), 345 373.
8. Scheffer, J.J.C., Baerheim Svendsen, A. - Zur Analytik atherische Ole: Zehn Jahre A
therische-O le-Forschung 1969 bis 1979. Riechstoffe, Aromen, Kosmetica, 1981. 31 (2),
3941.
9. Wilkins, C., Madsen, J.O. - Oregano headspace constituents. Zeitschrift fu r
Lebensmittel-Untersuchung und Forschung, 1991. 192, 214 219.
10. Daferera, D.J., Ziogas, B.N., Polissiou, M.G. - GC-MS analysis of essential oils from
some Greek aromatic plants and their fungitoxicity on Penicillium digitatum. Journal of
Agricultural and Food Chemistry, 2000. 48, 25762581.
11. Jerkovic, I., Mastelic, J., Milos, M. - The impact of both the season of collection and
drying on the volatile constituents of Origanum vulgare L. ssp. hirtum grown wild in
Croatia. International Journal of Food Science & Technology, 2001. 36, 649 654.
12. Russo, M., Galletti, G.C., Bocchini, P., Carnacini, A. - Essential oil chemical
composition of wild populations of Italian oregano spice (Origanum vulgare ssp. hirtum
(Link) Ietswaart): A preliminary evaluation of their use in chemotaxonomy by cluster
analysis: 1. Inflorescences. Journal of Agricultural and Food Chemistry 1998, 46, 3741
3746.
13. Senatore, F. - Influence of harvesting time on yield and composition of the essential oil of
a thyme (Thymus pulegioides L.) growing wild in Campania (Southern Italy). Journal of
Agricultural and Food Chemistry 1996, 44, 1327 1332.
14. Bauer, K., Garbe, D., Surburg, H. - Common Fragrance and Flavor Materials:
Preparation, Properties and Uses. Wiley-VCH, Weinheim, 2001, p. 293.
15. Croteau, R., Kutchan, T.M., Lewis, N.G. - Natural products (secondary metabolites). In:
Buchanan, B., Gruissem, W., Jones, R. (Eds.), Biochemistry and Molecular Biology of
Plants. American Society of Plant Physiologists, 2000.
16. Betts, T.J. - Chemical characterisation of the different types of volatile oil constituents by
various solute retention ratios with the use of conventional and novel commercial gas
chromatographic stationary phases. J. Chromatogr. 2001, A 936, 3346.

63
17. Bowles, E.J. - Chemistry of Aromatherapeutic Oils. Allen & Unwin, ISBN 174114051X,
2003.
18. Pichersky, E., Noel, J.P., Dudareva, N. - Biosynthesis of plant volatiles: natures diversity
and ingenuity. Science 2006, 311, 808811.
19. Hay, R.K.M. - Physiology. In Volatile oil crops: their biology, biochemistry and
production, Hay, R.K.M. and Waterman, P.G. (eds.), Longman Scientific & Technical,
Harlow, 1993, p. 23-46.
20. Rohloff, J. - Monoterpene composition of essential oil from peppermint (Mentha x
piperita L.) with regard to leaf position using solid-phase microextraction and gas
chromatography/mass spectrometry analysis. J.Agric. Food Chem. 1999, 47: 3782-3786.
21. Rohloff, J. - Essential oil composition of sachalinmint from Norway detected by
solidphase microextraction and gas chromatography-mass spectrometry analysis. J.Agric.
Food Chem. 2002a, 50: 1543-1547.
22. Rohloff, J., Hagen, S.F. and Iversen, T.-H. - The effect of plant biochemical regulators on
strawberry production in field trials under drip irrigation management at 5 locations in
Norway. Act.Hort. 2002a, 567: 463-466.
23. Rohloff, J., Rakvg, G. and Dragland, S. - Aroma volatiles of rhizomes and roots of
cultivated Rhodiola rosea L. from Norway. Poster presentation at ISEO 2002, 2002c,
Lisboa, Portugal
24. Hirasa, K. and Takemasa, M. - Spice science and technology. Marcel Dekker Inc., New
York, 1998, 219pp.
25. Cowan, M.M - Plant products as antimicrobial agents. Clin.Microbiol.Rev. 1999, 12: 564-
582.
26. Stashenko, E.E., Puertas, M.A. and Martinez, J.R. - SPME determination of volatile
aldehydes for evaluation of in-vitro antioxidant activity. Anal.Bioanal.Chem., 2002, 373:
70-74.
27. Harrewijn, P., Van Oosten, A.M. and Piron, P.G.M. - Natural terpenoids as messengers: A
multidisciplinary study of their production, biological functions and practical
applications. Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, 2001, 440pp.
28. Isman, M.B. - Plant essential oils for pest and disease management. Crop Prot. 2000,
19:603-608.
29. Quintanilla, P. - Biological control in potato and tomato to enhance resistance to plant
pathogens especially against Phytophtora infestans in potato. Doctoral thesis at the
Swedish University of Agricultural Sciences, 2002, Uppsala, Sweden.
30. Quintanilla, P., Rohloff, J. and Iversen, T.-H. - Influence of essential oils on Phytophtora
infestans. Potato Res. 2002, 45, 13 pp.
31. Cantrell, C.L., Franzblau, S.G. and Fischer, N.H. - Antimycobacterial plant terpenoids.
Planta Med. 2001, 67: 685-694.
32. Loza-Tavera, H. - Monoterpenes in essential oils - Biosynthesis and properties.
Adv.Exp.Med.Biol. 1999, 464: 49-62.
33. Deans, S.G. and Svoboda, K.P. - Biotechnology of aromatic and medicinal plants. In
Volatile oil crops: their biology, biochemistry and production, Hay, R.K.M. and
Waterman, P.G. (eds.), Longman Scientific & Technical, Harlow, 1993, p.113-136.

64
34. Hsu, H.-F. and Yang, J.-S. - Production of volatile compounds in suspension cell cultures
of Coriandrum sativum L. and Levisticum officinale Koch. In Biotechnology for
improved foods and flavors. Takeoka, G.R., Teranishi, R., Williams, P.J. and Kobayashi
A. (eds.), ACS Symp.Ser. 1996, 637: 97-108.
35. Nishimura, H. and Noma, Y. - Microbial transformation of monoterpenes: Flavor and
biological activity. In Biotechnology for improved foods and flavors. Takeoka,
G.R.,Teranishi, R., Williams, P.J. and Kobayashi A. (eds.), ACS Symp.Ser. 1996, 637.
36. Kribii, R., Soustre, I. and Karst, F. - Isoprenoids biosynthesis. Act.Bot.Gallica 1999, 146:
5-24
37. Barkovich, R. and Liao, J.C. - Metabolic engineering of isoprenoids. Metabolic
Engineering 2001, 3: 27-39.
38. Nagata, T. and Ebizuka, Y. (eds.) - Medicinal and aromatic plants XII. In Biotechnology
in agriculture and forestry Vol. 51. Springer Verlag, Heidelberg, 2002, 348pp.
39. Gautschi, M., Bajgrowicz, J.A. and Kraft, P. - Fragrance chemistry - Milestones and
perspectives. Chimia 2001, 55: 379-387.
40. Bauer, K., Garbe, D. - Common Fragrance and Flavor Materials. Preparation, Properties
and Uses. VCH Verlagsgesellschaft, Weinheim, 1985, p. 213.
41. Van Welie, R.T.H. - Alle cosmetica ingredienten en hun functies. Nederlandse Cosmetica
Vereniging, Nieuwegein, 1997, p. 126.
42. Van de Braak, S.A.A.J., Leijten, G.C.J.J. - Essential Oils and Oleoresins: A Survey in the
Netherlands and other Major Markets in the European Union. CBI, Centre for the
Promotion of Imports from Developing Countries, Rotterdam, 1999, p. 116.
43. Oosterhaven, K., Poolman, B., Smid, E.J. - S-carvone as a natural potato sprout
inhibiting, fungistatic and bacteristatic compound. Industrial Crops and Products 1995, 4,
2331.
44. Manabe, A., Nakayama, S., Sakamoto, K. - Effects of essential oils on erythrocytes and
hepatocytes from rats and dipalitoyl phophatidylcholine-liposomes. Japanese Journal of
Pharmacology 1987, 44, 7784.
45. Cox, S.D., Mann, C.M., Markham, J.L., Bell, H.C., Gustafson, J.E., Warmington, J.R.,
Wyllie, S.G. - The mode of antimicrobial action of essential oil of Melaleuca alternifola
(tea tree oil). Journal of Applied Microbiology 2000, 88, 170175.
46. Van Krimpen, M.M., Binnendijk, G.P. - RopadiarR as alternative for antimicrobial growth
promoter in diets of weanling pigs. Lelystad, Praktijkonderzoek Veehouderij, May 2001.
ISSN 0169-3689, p. 14.
47. Ilsley, S., Miller, H., Greathead, H., Kamel, C. - Herbal sow diets boost pre-weaning
growth. Pig Progress 2002, 18 (4), 8 10.
48. Mendoza-Yepes, M.J., Sanchez-Hidalgo, L.E., Maertens, G., Marin-Iniesta, F. - Inhibition
of Listeria monocytogenes and other bacteria by a plant essential oil (DMC) en Spanish
soft cheese. Journal of Food Safety 1997, 17, 47 55.
49. Carson, C.F., Riley, T.V. - Antimicrobial activity of the essential oil of Melaleuca
alternifolia. Letters in Applied Microbiology 1993, 16, 49 55.
50. V. H. Heywood The biology and chemistry of the Apiaceae, The Linnean Society of
London, London, 1971, p232.
51. G. M. Plunkett, S.R. Downie Amer. J. Bot. 86, 1999, 1014.

65
52. Brouk, B.- Plants consumed by man. Academic Press 1975
53. Bown, D Encyclopaedia of herbs and their uses. Dorling Kindersley, London, 1995 54.
J. Holtom, W. Hylton Complete guide to herbs. Rodale Press, 1979
55. H. Philbrick, R.B.Gregg Companion Plants. Watkins, 1979.
56. L. Riotte Companion planting for successful gardening. Garden way, Vermont, USA,
1978
57. A. Huxley The new RHS dictionary of gardening. MacMillan Press, 1992
58. M. Grieve A modern herbal, vol. 1. Dover Publications, N.Y, 1995
59. Duke J.A. and Ayensu E.S. Medicinal plants of China, 1985, 20, 4
60. Facciola, S. Cornucopia A source book of edible plants. Kampong Publications 1990,
ISBN 0-9628087-0-9
61. J. Lust The herb book. Bantam books, 1983.
62. J. C.Th.Uphof Dictionary of economic plants. Weinheim, 1959.
63. S.Y.Mills The dictionary of modern herbalism.
64. A.Chevallier The Encyclopedia of medicinal plants. Dorling Kindersley. London, 1996
65. Varshney, S.C. Essential oil industry in India. Indian Perfum., 2000, 44(3), 101.
66. C.C.R. de Carvalho, M. M. R. da Fonseca Carvone: why and how should one bother to
produce this terpene. J. of Food Chemistry, 95, 2006, p 413-422
67. V. Masotti, F. Juteau, J.M.Bessiere, J. Viano Seasonal and phenological variations of the
essential oil from the narrow endemic species Artemisia molinieri and its biological
activities. J. Agric. Food Chem, 51, 2003, 7115-7121.
68. A. Angioni, A.Barra, V. Coroneo, S.Dessi, P.Cabras Chemical composition, seasonal
variability and antifungal activity of Lavandula stoechas L. Ssp. Stoechas essential oil
from stem/leaves and flowers. J. Agric. Food Chem, 54, 2006, 4364-4370.
69. A. Koedam, N. Margaris, D. Vokou Aromatic plants: basic and applied aspects. Kluwer
Acedemic publisher, 1995, 135.
70. P.Schreier Biogeneration of plant aromas. Developments in food flavours, Elsevier,
New York, 1986, 89-106
71. B.M.Lawrence A review of the world production of esssential oils. Perfum. Flavor., 10,
1985, 1-16.
72. B.M.Lawrence New trends in essential oils. Perfum. Flavor., 5, 1980, 6-16.
73. H.Maarse Volatile copounds in food and beverages, CRC Press, 1991, 463-464
74. A Koedam, J. J. C. Scheffer and A. Baerheim Svendsen - Essential Oil Of Dill Herb.
Chem. Mikrobiol. Technol. Lebensm.,. 6, 1 1979, 125.
75. Huopalahti R., Linko R. R., 1983, Composition and content of aroma compounds in dill,
Anethum graveolens L., at three different growth stages. J. Agric. Food Chem., 31,
331333.
76. J. Pino, A. Rosado, I. Goire, E. Roncal Evaluation of flavour characteristics compounds
in dill herb essential oil by sensory analysis and gas chromatography. J Agric. Food
Chem, 1995, 43, 1307 1309.
77. H.Maarse, C.A.Visscher Volatile compounds in food qualitative and quantitative data.
Food Analysis Institute, Olanda, 1989.
78. E. Guenther - The Essential Oils. Van Nostrand Co, New York, 1950, pp. 61934.

66
79. R. Haupalehti - Gas chromatographic and sensory analysis in the evaluation of dill herb
(Anethum graveolons L.) Lebensmitt. Wiss. Technol., 1986, 19, 2730.
80. I. Blank, W. Grosch - Evaluation of potent odorants in dill seed and dill herb Anethum
graveolens L.) by aroma extract dilution analysis. J. Food Sci. 1991, 56(1), 637.
81. Greathead, H., 2003. Plant and plant extract for improving animal productivity. Proc.
Nutr. Soc. 62, 279290.
82. Panizzi, L., Flamini, G., Cioni, P.L., Moreli, I., 1993. Composition and antimicrobial
properties of essential oils of four Mediterranean Lamiaceae. J. Ethnopharmacol. 39,
167170.
83. Helander, I.M., Alakomi, H.-L., Latva-Kala, K., Mattila-Sandholm, T., Pol, L., Smid, E.J.,
Gorris, L.G.M., von Wright, A., 1998. Characterization of the action of selected essential
oil components on Gram negative bacteria.. J. Agric. Food Chem. 46, 3590 3595.
84. Chao, S.C., Young, D.G., Oberg, C.J., 2000. Screening for inhibitory activity of essential
oils on selected bacteria, fungi and viruses. J. Essent. Oil Res. 12, 639649.
85. Dorman, H.J.D., Deans, S.G., 2000. Antimicrobial agents from plants: antibacterial
activity of plant volatile oils. J. Appl. Microbiol. 88, 308316.
86. Burt, S., 2004. Essential oils: Their antibacterial properties and potential applications in
foodsa review. Int. J. Food Microb. 94, 223253.
87. Arrebola, M. L., Navarro, M. C., Jimenez, J., & Ocana, F. A. - Yield and composition of
the essential oil of Thymus serpylloides subspserpylloides. Phytochemistry, 1994, 1, 67
72.
88. Rhyu, H. Y. - Gas chromatographic characterization of sages of various geographic
origins. Journal of Food Science, 1979, 44,758762.
89. Salgueiro, L. R., Vila, R., Tomi, F., Figueiredo, A. C., Barroso, J. G., Canigueral, S., et al.
- Variability of essential oils of Thymus caespititius from Portugal. Phytochemistry,
1997, 45, 307311.
90. Venskutonis, P. R. - Effect of drying on the volatile constituents of thyme (Thymus
vulgaris L.) and sage (Salvia officinalis L.). Food Chemistry, 1996, 2, 219227.
91. Juliano, C., Mattana, A., & Usai, M. - Composition and in vitro antimicrobial activity of
the essential oils of Thymus herba-barona Loisel growing wild in Sardinia. Journal of
Essential Oil Research, 2000, 12, 516522.
92. McGimpsey, J. A., & Douglas, M. H. - Seasonal variation in essential oil yield and
composition from naturalized Thymus vulgaris L. in New Zealand. Flavour Flagrance
Journal, 1994, 9, 347352.
93. Kim, J., Marshall, M. R., & Vei, C. - Antimicrobial activity of some essential oil
components against five foodborne pathogens. Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 1995, 43, 28392845.
94. Lambert, R. J. W., Skandamis, P. N., Coote, P., & Nychas, G.-J. E. - A study of the
minimum inhibitory concentration and mode of action of oregano essential oil, thymol
and carvacrol. Journal of Applied Microbiology, 2001, 91, 453462.
95. Suresh, P., Ingle, V. K., & Vijayalakshmi, V. - Antibacterial activity of eugenol in
comparison with other antibiotics. Journal of Food Science and Technology, 1992, 29,
254256.

67
96. Delaquis, R.J., Stanich, K., Girard, B., Massa, G. - Antimicrobial activity of individual
and mixed fractions of dill, cilantro, coriander and eucalyptus essential oils. Int. J. Food
Microbiol. 2002, 74, 101109.
97. M.C.S. Cruz, P.O. Santos, A.M. Barbosa Jr., D.L.F.M. de Melo, C.S. Alviano, A.R.
Antoniolli, D.S. Alviano, R.C. Trindade - Antifungal activity of Brazilian medicinal
plants involved in popular treatment of mycoses. Journal of Ethnopharmacology 111,
2007, 409412
98. G. Singh , S. Maurya, M.P. de Lampasona, C. Catalan - Chemical Constituents,
Antimicrobial Investigations, and Antioxidative Potentials of Anethum graveolens L.
Essential Oil and Acetone Extract.
99. Jirovetz, L., Buchbauer, G., Stoyanova, A. S., Georgiev, E. V., & Damianova, S. T. -
Composition, quality control, and antimicrobial activity of the essential oil of long-time
stored dill (Anethum graveolens L.) seeds from Bulgaria. Journal of Agricultural and
Food Chemistry, 2003, 51, 38543857.
100. Hartmans, K. J., & Diepenhorst, P. - The use of carvone as a sprout inhibitor for potatoes.
Potato Research, 1994, 37, 445446.
101. Hartmans, K. J., Diepenhorst, P., Bakker, W., & Gorris, L. G. M. - The use of carvone in
agriculture sprout suppression of potatoes and antifungal activity against potato-tuber
and other plant-diseases. Industrial Crops and Products, 1995, 4, 313.
102. Kerstholt, R. P. V., Ree, C. M., & Moll, H. C. - Environmental life cycle analysis of
potato sprout inhibitors. Industrial Crops and Products, 1997, 6, 187194.
103. Hartmans, K. J., Lenssen, J. M., & de Vries, R. G. Use of talent (carvone) as a sprout
growth regulator of seed potatoes and the effect on stem and tuber number. Potato
Research, 1998, 41, 190191.
104. Aggarwal, K. K., Khanuja, S. P. S., Ahmad, A., Kumar, T. R. S., Gupta, V. K., & Kumar,
S. - Antimicrobial activity profiles of the two enantiomers of limonene and carvone
isolated from the oils of Mentha spicata and Anethum sowa. Flavour and Fragrance
Journal, 2002, 17, 5963.
105. Friedman, M., Henika, P. R., & Mandrell, R. E. - Bactericidal activities of plant essential
oils and some of their isolated constituents against Campylobacter jejuni, Escherichia
coli, Listeria monocytogenes, and Salmonella enterica. Journal of Food Protection, 2002,
65, 15451560.
106. Helander, I. M., Alakomi, H. L., Latva-Kala, K., Mattila-Sandholm, T., Pol, I., Smid, E.
J., et al. - Characterization of the action of selected essential oil components on
gramnegative bacteria. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1998, 46, 3590
3595.
107. Pol, I. E., & Smid, E. J. - Combined action of nisin and carvacrol on Bacillus cereus and
Listeria monocytogenes. Letters in Applied Microbiology, 1999, 29, 166170.
108. McGeady, P., Wansley, D. L., & Logan, D. A. Carvone and perillaldehyde interfere with
the serum-induced formation of filamentous structures in Candida albicans at
substantially lower concentrations than those causing significant inhibition of growth.
Journal of Natural Products, 2002, 65, 953955.

68
109. Zheng, G., Kenney, P. M., & Lam, L. K. T. - Effects of Carvone compounds on
glutathione-S-transferase activity in A/J Mice. Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 1992a, 40, 751755.
110. Wattenberg, L. W., Sparnins, V. L., & Barany, G. - Inhibition of N-nitrosodiethylamine
carcinogenesis in mice by naturally occurring organosulfur compounds and
monoterpenes. Cancer Research, 1989, 49, 26892694.
111. Franzios, G., Mirotsou, M., Hatziapostolou, E., Kral, J., Scouras, Z. G., &
MavraganiTsipidou, P. - Insecticidal and genotoxic activities of mint essential oils.
Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1997, 45, 26902694.
112. Grd C.E., Duu L.E., Popescu M.L., Pavel M., Iordache A.T., Tudor I. - Bazele teoretice
i practice ale analizei farmacognostice, vol. I, Ed. Curtea Veche, Bucureti, 2008, 10-41,
104-105, 114-115, 134-137, 228-230
113. xxx - Farmacopeea Romn ediia a X-a. Ed. Medical, Bucureti, 1993, 335, 1016,
1051-1058
114. Popescu M.L. Condimente, valoare terapeutic, Ed. Tehnoplast Company SRL,
Bucureti, 2008, pag. 78-79
115. Popescu M.L., Dinu M., Ancuceanu R., Ristache M. - Contributions to the
pharmacognostical and phytobiological study on Genista sagittalis L. (Fabaceae)/
CDrom of 13-th Pan-Hellenic Pharmaceutical Congress, Atena, Grecia, 12-14 mai 2007
116. xxx - European Pharmacopoeia, 5 th edition, supliment 6, Council of Europe,
Strassbourg, 2006, 4929
117. Popescu M.L., Dinu M. - Contributions to the pharmacognostical and phytobiological
study on Cerasi stipites, Farmacia, 2007, 55(5), 545 50
118. Popescu M.L., Dinu M. - Contributions to the pharmacognostical and phytobiological
study on Cerasi stipites, Farmacia, 2007, 55(5), 545 50
119. Prvu C. - Universul plantelor, Ed. Asab, Bucureti, 2006, pag. 456-458
120. Teuscher E., Anton R., Lobstein A. - Plantes aromatiques, epices, aromates, condiments et
huiles essentialles, TEC&DOC, Paris, 2005, pag. 105-109
121. x x x - PDR for herbal medicines, ed. Thomson, Montvale, 2004, third edition, pag. 258
122. Bruneton J. - Plantes toxiques, ed. TEC&DOC, Lavoisier, 2005, 3 e edition, pag.
507-508
123. Istudor V. - Farmacognozie. Fitochimie. Fitoterapie, Ed. Medical, Bucureti, 2001, vol.
II, pag. 208-209
124. Grd C.E., Duu L.E., Popescu M.L., Pavel M. - Farmacognozie. Baze practice, vol. II,
Ed. Universitar Carol Davila, Bucureti, 2006, 274-278
125. Istudor V. - Farmacognozie. Fitochimie. Fitoterapie, Ed. Medical, Bucureti, 1998, vol.
I, pag. 113, 125, 155-156
126. xxx - Phytochemical Dictionary, ed. CRC Press, 1999, second edition, pag. 452, 523
127. Wichtl M., Anton R. - Plantes therapeutiques, TEC&DOC, Paris, 2003, 2 e edition , pag.
251-254, 523-525, 587-589
128. Bruneton J. - Pharmacognosie, Phytochimie, Plantes medicinales, TEC&DOC, Paris,
1999, 3e edition, pag. 249-250, 540-541
129. xxx - European Pharmacopoeia, 5 th edition, Council of Europe, Strassbourg, 2006, 2063

69
130. Popescu M.L., Dinu M. - Contributions to the pharmacognostical and phytobiological
study on Forsythia viridissima L. (Oleaceae), Farmacia, 2008, 56(3), 267 274 \
131. Gheorghe Valentin Roman,Lenuta Iuliana Iepure,Maria Toader,Viorel Ion,Alina Maria
Ionescu-Tehnologia obtinerii produselor vegetale,Editura universitara,2014,pag126-
127,214-216
132. https://www.scribd.com
133. http://www.floropedia.ro
134. http://www.horticultorul.ro

70