Sunteți pe pagina 1din 37

Ministerul Sntii i Proteciei Sociale

UNIVERSITATEA DE STAT DE MEDICIN I FARMACIE NICOLAE TESTEMIANU

CATEDRA CHIMIE FARMACEUTIC I TOXICOLOGIC

Metode fizico-chimice de dozare n controlul medicamentelor

Indicaii metodice pentru studenii anului V la Controlul medicamentului

CHIINU 2006

Determinarea cantitativ a coninutului de substan activ ntr-o form medicamentoas este o etap extrem de important n controlul medicamentelor. Utilizarea metodelor fizicochimice n analiza i controlul medicamentelor este foarte actual, aceste metode fiind accesibile exacte i sensibile, permit determinarea cantitativ dup partea activ a moleculei de substan, pot fi automatizate i nu sunt distructive. Scop: A se forma deprinderi practice pentru petrecerea analizei i controlului medicamentelor conform exigenelor contemporane. Planul de lucru Pentru studierea temei este prevzut dou lucrri de laborator. Planul lucrrii: Pregtirea teoretic pentru ndeplinirea scopurilor propuse; Lucrarea practic de laborator; Controlul general.

ntrebri pentru pregtirea individual 1. Importana metodelor fizico-chimice n analiza farmaceutic. 2. Clasificarea metodelor fizico-chimice de analiz. 3. Exigenele atribuite metodelor fizico-chimice n vederea utilizrii lor pentru analiza formelor farmaceutice. 4. Domeniile de aplicare a metodelor fizico-chimice de analiz. 5. Metode optice de analiz: Refractometria, Polarimetria, Interferometria, 6. Metode, bazate pe absorbia radiaiei electromagnetice (metode de absorbie): Colorimetria, Fotocolorimetria, Spectrofotometria, Fototurbidimetria, Fotonefelometria, 7. Metode, bazate pe emisie de raze:Spectrofotometria flcrii, Spectrofluorimetria, Metoda radiochimic, 8. Metode magnetice: Rezonana magnetic nuclear (RMN), Spectrometria de mas, 9. Metode electrochimice: Poteniometria, Polarografia, 10. Metode termice de analiz: Termogravimetria 11. Metode de separare (cromatografia): Cromatografia cu schimb ionic, de absorbie, de repartiie, de precipitare; cromatografia n coloan, pe strat subire, pe hrtie; cromatografia de gaze, de lichide, gaz-lichid 12. Domenii de utilizare a metodelor fizico-chimice n controlul medicamentelor. Material informativ Cerinele crescnde fa de calitatea medicamentelor n conformitate cu exigenele contemporane fa de metodele de analiz i control determin o direcie aparte de valorificare a unor metode de analiz, care corespund ntocmai principalelor criterii ale analizei farmaceutice, i anume a metodelor fizico-chimice de analiz. Particularitile de baz a metodelor fizico-chimice de analiz sunt: Selectivitatea analizei Express analiza Automatizarea procedurii de determinare Analiza de la distan

Analiza nedistructiv Sensibilitate maxim Specificitate nalt De rnd cu posibilitatea utilizrii metodelor fizico-chimice de analiz pentru identificare i determinarea puritii, acestea capt o utilizare mult mai larg n analiza cantitativ. Metodele fizico-chimice utilizate n analiza farmaceutic pot fi clasificate n felul urmtor: I. Metode optice de analiz: Refractometria, bazat pe determinarea indicelul de refracie a luminii n soluia de substan analizat; Polarimetria, bazat pe posibilitatea unei soluii de substan cu atom de carbon chiralic n molecul de a roti planul unui flux de lumin polarizat. Interferometria, bazat pe msurarea interferenei luminii. II. Metode, bazate pe absorbia radiaiei electromagnetice (metode de absorbie): Colorimetria, bazat pe msurarea vizual a intensitii luminii trecute prin soluia analizat; Fotocolorimetria, bazat pe determinarea intensitii luminii cu ajutorul fotoelementelor; Spectrofotometria, bazat pe proprietatea substanelor de a absorbi radiaia electromagnetic; Fototurbidimetria, bazat pe msurarea intensitii luminii absorbite de ctre o suspensie microdispers; Fotonefelometria, bazat pe msurarea intensitii luminii dispersate de particulele substanei analizate. III. Metode, bazate pe emisie de raze: Spectrofotometria flcrii, bazat pe determinarea concentraiei elementului n soluie dup intensitatea radiaiei caracteristice emise de flacr; Spectrofluorimetria, bazat pe msurarea fuorescenei n regiunea UV; Metoda radiochimic, bazat pe msurarea radiaiei sau cu ajutorul spectrometrelor. IV. Metode magnetice: Rezonana magnetic nuclear (RMN), bazat pe nregistrarea interaciunilor spinului nuclear cu un cmp magnetic; Spectrometria de mas, bazat pe fragmentarea moleculelor de substane organice sub aciunea unor energii mari. V. Metode electrochimice Poteniometria, bazat pe msurarea potenialului dintre soluia analizat i electrodul introdus n ea; Polarografia, bazat pe msurarea puterii curentului electric aprut la electrooxidarea sau electroreducerea substanelor analizate. VI. Metode termice de analiz Termogravimetria, bazat pe msurarea modificrilor masei substanelor n funcie de temperatur sau de timp; VII. Metode de separare (cromatografia): Metodele cromatografice se bazeaz pe separarea substanelor ntre dou faze mobil i staionar. Metodele cromatografice pot fi clasificate dup: o Mecanismul procesului de separare: Cu schimb ionic De absorbie De repartiie

De precipitare De oxido-reducere; Tehnica procesului de cromatografiere: n coloan Pe strat subire Pe hrtie Capilar; Starea de agregare De gaze De lichide Gaz-lichid I. Metode optice de analiz:

Refractometria Refractometria este o metod optic nespectral care se bazeaz pe determinarea indicelui de refracie n a unei raze de lumin care trece dintr-un mediu cu densitatea d1 ntr-un alt mediu cu densitatea d2, diferit de d1 (dj d2). Viteza de propagare a luminii n vid este egal cu c 0 = 300.000 km/sec (sau 3 10 5 km/s). La trecerea prin orice mediu transparent (aer, solveni, sticl etc.), viteza de propagare a luminii scade, dar rmne totui de acelai ordin de mrime. Ca urmare, la intrarea unei raze de lumin, care vine dintr-un mediu mai puin dens, ntr-un mediu mai dens, are loc o modificare a direciei de propagare a luminii cu un unghi r", numit unghi de refracie i se apropie de normal (linia punctat pe suprafaa de separare a celor dou medii), aa cum se observ din figura 1. Aceast abatere a razei de lumin inciden de la direcia iniial de propagare se datoreaz diferenei dintre vitezele luminii c1, n mediul mai puin dens din care vine raza inciden i c2 n mediul mai dens n care intr raza de lumin. Prin urmare, n mediul mai dens (cu d 2), viteza c2 a luminii este mai mic dect viteza c1 a razei incidente (c1 > c2). La ieirea razei de lumin din mediul mai dens (d 2) i intrarea n mediul mai puin dens (d 2), unghiul de refracie se mrete, raza deprtndu-se de normal (figura 1b):

Figura 1. Refracia unei raze de lumin la trecerea ei dintr-un mediu mai puin

dens ntr-unul mai dens (a) i invers (b) n conformitate cu legile refraciei, raza inciden, raza refractat i normala se gsesc n acelai plan, deci sunt coplanare. Pentru evaluarea refraciei se utilizeaz i se calculeaz indicele de refracie ,,n care se exprim prin raportul dintre sinusurile unghiurilor de inciden i de refracie: n = sini / sinr = c0 / c1 n care: c0 viteza luminii n vid; c1 viteza luminii ntr-un mediu anumit. Consideraiile de mai sus sunt valabile numai pentru cazurile n care raza incident cade oblic pe interfaa dintre cele dou medii. Dac raza inciden cade perpendicular pe interfaa de separare dintre cele dou medii, unghiurile de inciden i de refracie sunt egale cu zero, iar raportul lor este de asemenea egal cu zero, fiind vorba deci de nedeterminare care nu ofer nici o informaie referitoare la indicele de refracie. Mai mult chiar, indicele de refracie nu se poate determina nici pentru unghiuri foarte mici, de exemplu, pentru un unghi de inciden apropiat de 90, i 90, raza inciden intr n mediul mai dens aproape tangent la suprafaa de separare a celor dou medii, ca n figura 2; n acest caz, unghiul de refracie atinge o valoare maxim, se noteaz cu r1 i se numete unghi limit". La unghiuri de inciden mai mari dect cele care corespund unghiurilor limit de refracie, raza inciden nu poate prsi mediul mai dens i nu poate intra n mediul mai puin dens, i se reflect n mediul mai dens la suprafaa de separare a celor dou medii (deci revine n mediul mai dens), ca n figura 2 b.

Figura 2. Unghiul limit de refracie (a), i reflexia total (b).

Pentru determinarea practic a indicelui de refracie se utilizeaz refractometrul, pentru care se d, n figura 3, o schem constructiv de principiu.

Figura 3. Schema de principiu a unui refractometru Cel mai utilizat tip de refractometru este cel conceput de Abbe, numit refractometru Abbe", care poate fi utilizat n toate tipurile de msurtori, n figura 4 este prezentat o schem constructiv a acestui aparat, care trebuie s fie etalonat naintea utilizrii lui astfel: cu soluii etalon cu indice de refracie cunoscut, cum sunt toluenul, tetraclorura de carbon, monobromnaftalina, nD =1,6588 sau apa pur cu nD=l,333; - etalonarea trebuie s fie fcut pentru fiecare produs nscris n farmacopei cu etalonul dat n monografie; - etalonarea se face de regul cu o precizie aproape de a patra zecimal, de aceea etalonarea este o operaie esenial; - uneori este greu s se gseasc un etalon (substan de referin), care s aib indice de refracie apropiat de acela al substanei de analizat; - msurtoarea propriu-zis se face numai dup curirea atent (ngrijirea minuioas) a prismei, utiliznd o estur curat i uscat (ex.: ifon), care poate fi umectat ntr-un col cu o pictur de lichid potrivit; aceast estur nu ti s lase scame pe prism; - trebuie s se in seama de faptul, c o curire incorect i insuficient (inclusiv dup etalonare), ca i reglajul defectuos al temperaturii, conduce la date experimentale false, compromind analiza.

Figura 4. Refractometrul Abbe - schema constructiv Pentru determinri cantitative se selecteaz intervalul dependenelor liniare ntre concentraie i indice de refracie. n acest interval concentraia X% se calculeaz conform relaiei: X% = (n n) / F n care: n indicele de refracie a soluiei analizate; n 0 indicele de refracie a solventului, F factor, care determin creterea mrimii indicelui de refracie la majorarea concentraiei cu 1%. Polarimetria Polarimetria este metoda bazat pe posibilitatea unei soluii de substan cu atom de carbon chiralic n molecul de a roti planul unui flux de lumin polarizat. Valoarea devierii planului de polarizare de la poziia iniial se exprim n grade. Aceast mrime este numit unghi de rotaie (). Compuii cu atomi chiralici pot roti planul de polarizare n stnga se numesc levogiri (-) i n dreapta dextrogiri (+). Pentru soluii mrimea unghiului de rotaie este dependent de natura solventului, concentraia soluiei i lungimea cuvei cu soluie. Pentru identificare i determinarea puritii se utilizeaz valoarea puterii rotatorii specifice []D20, msurate la 20 i la lungimea de und D a spectrului natriului. Mrimea [] D20 pentru soluii de substane se calculeaz conform relaiei: []
20 D

100 = ----------lC

n care unghiul de rotaie msurat la polarimetru, n grade; l lungimea cuvei, n decimetri; concentraia soluiei de substan (g/100 ml). Coninutul de substan optic activ n soluie (n %) se calculeaz conform relaiei: . 100 C = ----------[]D20 l Valoarea lui se msoar la polarimetre cu precizie de 0,02.

Metodele fotometrice n analiza farmaceutic


Metodele de analiz bazate pe absorbia radiaiei electromagnetice de ctre atomii i moleculele substanelor de analizat, cuprinde n sine o vast grup de metode optice, care au o foarte larg ntrebuinare att n ntreprinderile de producie ct i n laboratoarele de cercetri tiinifice. Fotocolorimetria i spectrofotometria, ca de obicei, sunt unite ntr-o singur grup, numit metode fotometrice de analiz. Din metodele moleculare de absorbie cea mai larg ntrebuinare o au cele fotometrice. Turbidimetria i nefelometria au o ntrebuinare mai puin nsemnat, de obicei numai n cazurile

cnd pentru substana de analizat nu se gsesc reageni fotometrici reuii. Analiza fluorimetric deasemeni poseda o ntrebuinare limitat, reeind din aceea c numai o puin parte din legturile substanei de analizat fluoresceaz cu o intensitate indestultoare. n dependen de aparatura folosit n ananliza fotometric, deosebim, metoda spectrofotometric de analiz bazat pe absorbia luminii monocromatice i metoda fotocolorimetric de analiz bazate pe absorbia luminii policromatice. Ambele metode au la baz principiul de existen a unei dependene proporionale, dintre absorbia luminii i concentraia substanei de analizat. Metodele fotocolorimetrice, care folosesc o aparatur simplist, indestuleaz o exactitate relativ de apreciere, ce reprezint 1 3% abatere, des utilizat pentru determinarea concentraiei soluiilor. Pentru metodele spectrofotometrice se utilizeaz o aparatur mult mai complicat spectrofotometre, care permit determinarea compuilor att colorai, ct i incolori, n spectrul de absorbie vizibil, UV i IR. Metodele spectrofotometrice sunt caracterizate printr-o exactitate nalt (abaterile corespund 1 - 0,5%). Nectnd la dezvoltarea intens i a altor metode de analiz, pn n prezent metodele fotometrice au o larg i efectiv ntrebuinare. Aceasta este determinat de urmtoarele: 1. Existena diferitor metode fotometrice de analiza practic la toate elementele sistemului periodic i o numeroaselor substane de natur organic. 2. Posibilitatea folosirii aparaturii accesibile i relativ ieftine pentru petrecerea metodelor fotometrice cu o exactitate foarte nalt. 3. Alegerea multitudinilor de metode i metodici fotometrice ce permit determinarea elementelor n intervalul de la 100 pn la 10-6%, incluznd totodat i analiza substanelor cu un nalt grad de puritate. Orientrile eseniale a perfecionrii metodelor fotometrice de analiz de ultim or rmn aceleai: mrirea sensibilitii, selectivitii i obinerea rezultatelor cu o exactitate nalt. O atenie deosebit, se atribuie automatizrii complexelor spectrofotometrice dotate cu programe computerizate ce permit expres de analizat i determinat sistemele multicomponente i disperse, determinarea urmelor de substan, deeurilor .a. La etapa actual n literatura de specialitate se evideniaz 4 direcii de baz referitoare la metodele fotometrice: - metrologia msurrii i determinrii fotometrice - dezvoltarea metodelor fotometrice de extraie expres cu o mare sensibilitate i selectivitate. - Obinerea diferitor tipuri de spectrofotometre dotate cu computatoare i microprocesoare ce permit automatizarea metodelor fotometrice i mai larg de introdus n practic, metodele precise i selective spectrofotometrice. - Obinerea noilor tipuri de aparatur: spectrofotometre fotoacustice i ulterior a spectrofotometriei fotoacustice, care permite micorarea intervalului de detecie cu dou msuri. METODE SPECTROMETRICE DE ABSORBIE N ULTRAVIOET l VIZIBIL N CONTURUL MEDICAMENTELOR Aspecte generale Metodele spectrale se bazeaz pe determinarea i interpretarea spectrelor, constituite din totalitatea frecvenelor radiaiilor simple, componente ale unei radiaii electromagnetice compuse, la trecerea ei printr-un instrument optic adecvat. Spectrele pot fi studiate n absorbie sau emisie. Spectrele de absorbie se obin la trecerea unei radiaii continue, provenit de la o surs luminoas, prin substana de cercetat, care absoarbe din spectru linii sau benzi (absorbie selectiv) sau poriuni mai mari (absorbie continu). Spectrele de emisie se obin numai dac se aplic moleculei o anumit energie, sub aciunea creia substanele solide i lichide n stare incandescent emit spectre continue, iar gazele incandescente, spectre discontinue. Atomii i

moleculele substanelor pot absorbi o cantitate de energie dependent de structura i de numrul moleculelor care interacioneaz cu radiaia electromagnetic. Studiul acestor relaii constituie obiectul spectroscopiei de absorbie. Acest studiu a fost valorificat n domeniul analizei medicamentelor, prin elaborarea unor metode rapide, simple, specifice. i sensibile de determinare calitativ i cantitativ. O radiaie electromagnetic se caracterizeaz prin lungime de und A, frecven v (numrul de A pe secund), numr de und v" (inversul lungimii de und). Lungimea de und se exprim n cm, , nm sau pim (factorii de transformare a unitilor de msur snt redai n tabelul 1). Frecvena se exprim prin numrul de unde pe unitatea de timp, n cicli/ sec (eps) ori hertzi (Hz). Numrul de und se exprim n cm-1. Spectrul electromagnetic al luminii albe este format din totalitatea regiunilor spectrale indicate n tabelul 2. Domeniile spectrale de interes analitic snt redate n tabelul 3. Tabelul 1. Spectrul electromagnetic al luminii

Tabelul 2.

Tabelul 3. Domeniile spectrale de interes analitic

Regiunea Ultraviolet ndeprtat Ultraviolet Vizibil Infrarou mediu Infrarou ndeprtat Legea fundamental a absorbiei

100-200 nm 200-400 nm 400-750 nm 225 cm-1 -1 25-4000 cm

La trecerea unui fascicul luminos printr-o substan, intensitatea lui scade datorit absorbiei, reflexiei i difuziunii. n cazul cnd reflexia i difuziunea snt neglijabile, cauza principal a scderii intensitii este absorbia. Msura cantitativ a efectului produs de acest proces (absorbie) este absorbana sau transmitan. Absorbanta se determin plecnd de la o alt mrime, intensitatea (I) radiaiei incidente care a traversat mediul respectiv (intensitatea radiaiei transmise). Absorbanta depinde de natura mediului, adic de compoziia sa (K), de grosimea stratului strbtut (b) i de numrul centrelor absorbante (c = concentraie), i se definete prin expresia matematic a legii lui Lambert-Beer, care leag absorbana cu grosimea stratului substanei ce absoarbe i se exprima prin relaia: I/I0=10-kb ; lgIo/I = kb ; n care: I0 intensitatea iradierii, ce cade pe subsatn; I intensitatea iradierii, ce a trecut prin substan; b grosimea stratului de substan n cm; k mrimea absorbanei mrime invers acelei grosimi a stratului de substan, trecnd prin care fascicolul de iradiere slbete de 10 ori. Legea lui Beer, leag absorbana de concentraie substanei ce absoarbe i de obicei se folosete pentru soluii: k = HC, unde: C concentraia soluiei H mrimea absorbanei soluiei, concentraia creia este egal cu unitate. De obicei n practica aceste dou legi se folosesc combinate - legea Bougher-LambertBeer: lgIo/I = H C b Mrimea lg I0/I poart denumirea de absorban i se noteaz prin A. Mrimea H este constant fizica specific pentru fiecare substan i poate servi n scop de determinare. Cunoaterea mrimii se permite determinarea coninutului substanei date n soluii cu concentraia necunoscut pe baza determinrii absorbanei. O constant spectrofotometric este mrimea absorbiei specifice (1%1), care se calculeaz conform relaiei: 1%1 = ----------l 1% Absorbia specific 1 prezint mrimea absorbanei soluiei cu concentraia 1% msurat ntr-o cuv cu grosimea 1 cm. Aceast valoare se calculeaz n urma determinrii experimentale a absorbanei unei soluii standarde. Cunoscnd valoarea lui 1%1 poate fi calculat concentraia:

= ----------1%1 l Legea Bougher-Lambert-Beer este veridic numai pentru iradierea monocromatic de aceia se folosete strict n spectrofotometrie. Spectrofotometria se folosete pentru identificarea compusilor, cercetarea componenei, structurii i analize cantitative a substanelor individuale i sistemelor policomponente. Curba dependenei absorbanei de lungimea de und se numete spectru de absorbie a substanei i este caracteristica specifica a substanei date. Natura benzilor de absorbie n regiunea ultraviolet i vizibil a spectrului este legat de diferite transferuri (treceri) electronice n moleculele i ionii ce absorb (spectre electronice); n regiunea infraroie este legat cu treceri vibraionale i schimbarea strilor vibraionale a nucleelor, ce intr n moleculele substanei ce absoarbe (spectre armonioase). Analiza spectrofotometric dup determinarea absorbanei poate fi efectuat pentru substane ce posed anumite particulariti structurale (compui cromatici, compui cu legturi duble, compui a unui ir de metale, etc.). Unele substane analizate trebuie preventiv de transformat n compui, ce absorb radiaia. n unele cazuri chiar cnd folosim iradiere monocromatic pot fi observate devieri de la legea Bougher-Lambert-Beer ce se datoreaz proceselor de disociere, asocierea i formarea complexonilor. La prezena de astfel de devieri trebuie s ne folosim de dependena experimental a absorbanei de concentrate. ntr-un ir de cazuri pentru identificare i determinare cantitativ a substanelor prin metoda spectrofotometric se cere compararea cu exemplare chimice standarde. Exemplu de utilizare a metodei spectrofotometrice n dozarea medicamenelor:
Dozarea difeturului i profeturului Pentru elaborarea metodei spectrofotometrice de dozare a difeturului i profeturului au fost nregistrate spectrele UV ale substanelor n ap i alcool etilic 95% (fig.5.).
0.80

0.7

0.6

difetur; profetur;

0.5

0.4

A
0.3 0.2

0.1

0.00 190.0 200 220 240 260 280 300 320 330.0

nm

Figura 5. Spectrul UV de absorbie al difeturului i profeturului Not: 1 soluii apoase; 2 soluii alcoolice Dup cum se vede din figur, o absorban mai mare se observ n mediu apos, care a i fost folosit mai departe n calitate de solvent. Cercetnd spectrul UV al soluiilor apoase de difetur i profetur, observm dou maxime de absorbie, n regiunea 197-203 nm i 219-221 nm. Reieind din faptul, c la 200 nm absorb lumina foarte multe substane,

inclusiv i impuritile posibile, sensibilitatea aparatului este relativ mic, s-a ales n calitate de lungime de und analitic =221nm, deoarece acest maxim este comun pentru ambele substane Pentru elaborarea metodei de dozare mai nti s-au determinat intervalele de concentraii ale difeturului i profeturului, n care se observ respectarea legii Bougher-Lambert-Beer ). Pentru aceasta 0,05g substan (mas exact) s-au dizolvat n 50ml de ap purificat i am adus pn la cot (sol. A). 5ml soluie A s-au trecut n balon cotat de 50ml i s-au adus pn la cot cu ap purificat (sol. B). n ase epruvete am introdus cte 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0ml sol. B i am adugat cantiti corespunztoare de ap purificat pn la 10ml. Am determinat absorbana soluiilor obinute la 221nm n cuve cu grosimea de 1cm. n calitate de soluie de referin am folosit apa purificat. Conform rezultatelor obinute am construit graficul dependenei absorbanei difeturului i profeturului de concentraie (fig.6.).
A

0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 1,9 4,01 5,9 7,8 9,9

Difetur Profetur
11,8 14,01 C, g/ml

Figura 6. Dependena absorbantei Difeturului i Profeturului de concentraie Din figur se vede, c respectarea legii fundamentale a absorbiei se observ n intervalul concentraiilor 1,014 g/ml. n baza cercetrilor efectuate a fost elaborat metoda spectrofotometric de dozare a difeturului i profeturului: 0,05g (mas exact) difetur s-au profetur se dizolv n ap purificat ntr-un balon cotat de 50ml i se aduce pn la cot (sol. A). 1ml soluie A se dilueaz cu ap purificat ntr-un balon cotat de 50ml (soluia B). Se determin absorbana soluiei B la 221nm la spectrofotometru n cuv cu grosimea 1cm. Paralel se determin absorbana soluiei etalon difetur s-au profetur cu concentraia 20 g/ml (soluia-etalon D ). n calitate de soluie de referin a servit apa purificat. Coninutul difeturului i profeturului n substan s-a calculat conform formulei : Ac, 221 ac 100 C= Ae, 221 ac n care: c concentraia difeturului n proba de analizat (%); A c, 221 absorbana soluiei cercetate la 221nm; Ae, 221 absorbana soluiei etalon la 221nm; ae masa etalonului luat n lucru, g; ac masa probei cercetate, g. Pregtirea soluiei etalon. 0,05 g ( mas exact ) mostr standard de difetur sau profetur se dizolv n ap purificat ntr-un balon cotat cu capacitatea de 50 ml ( soluie-etalon C ). 1 ml soluie obinut se dilueaz cu ap purificat pn la 50 ml ntr-un balon cotat (soluie-etalon D ). Soluia se folosete proaspt pregtit. Determinrile au fost repetate i supuse evalurii statistice. Rezultatele determinrilor sunt redate n tab.4. Tabelul 4. Rezultatele evalurii statistice a dozrii difeturului i profeturului prin metoda spectrofotometric X% 99,99 99,98 99,95 100,00 99,97 99,99 99,98 100,02 DIFETUR X 99,98 F 3 T 3,18 S 0,23 S2 0,054 Sx 0,116 x 0,4 0,4

PROFETUR

99,97

3,18

0,23

0,054

0,115

0,4

0,4

n concluzii putem meniona, c metoda elaborat este exact i reproductiv. Eroarea relativ este de 0,4% . Aceast metod de dozare este inclus n MFT Difetur i proiectul de MFT Profetur pentru determinarea cantitativ .

Fotocolorimetria se deosebete de spectrofotometrie prin faptul, c substana analizat este trecut sub aciunea diferitor reageni ntr-o forma colorat (obinerea unui compus colorat n urma unei reacii chimice). Determinarea absorbanei se realizeaz la fotocolorimetre. Coninutul cantitativ de substan poate fi determinat n baza unei curbe de calibrare, construite pentru o soluie standard de substan, sau dup formul, innd cont de relaia:
Cx = Ax Ast Cst din care Cx = Ax Cst Ast

Metoda spectrofotometric i fotocolorimetric difereniat se bazeaz pe determinarea absorbanei soluiei analizate n raport cu o soluie de referin cu coninut anumit de substan standard, ceea ce majoreaz exactitatea i specificitatea metodei. Spectrofotometria derivat este o varetate a spectrofotometriei difereniate. Dac n spectrofotometria difereniat se utilizeaz diferena absorbanelor la aceiai lungime de und, n spectrofotometria derivat se msoar absorbana la dou lungimi de und diferite. Aceast variaie permite selectarea unor benzi de absorbie individuale n regiunea UV, care se preznt sub forma unor benzi sumare suprapuse, care nu au un maxim bine pronunat. Astfel pot fi identificate substanele cu o structur asemntoare, pot fi dozate componentele unui amestec, mrind selectivitatea metodei.

Fotocolorimetria pe baz de extracie Proprietile fizico-chimice a compuilor colorai. n analiza fotometric coninutul de substan (element) se redetermin dup gradul de absorbie a luminii, compusului colorat. n dependen de tipul reaciei chimice utilizate pentru obinerea compusului ce absoarbe lumina, metodele fotometrice ce mpart n: directe i indirecte. [3] n metodele directe ionul M cu ajutorul reagentului R trec ntr-un compus colorat MR, dup care se determin absorbana soluiei compusului dat. Pentru determinrile indirecte, se folosesc adugtor compui colorai M 1R, care la interaciunea cu ionul cercetatori se distrug, ori formeaz noi compui ce absorb lumina. n acest sens avem urmtoarele metode: 1. Formarea compusului colorat dup reacia de schimb cationic. 2. Distrugerea compusului colorat dup reacia de schimb cationic sau anionic. 3. Obinerea ionului de determinat n form de compus puin solubil i determinarea ulterioar a cantitii echivalente a precipitantului n form de compus colorat. 4. Obinerea compusului colorat a ionului de determinat dup reacia de oxido-reducere. 5. Formarea compuilor colorai n rezultatul sintezei sau distrugerii compuilor organici, n lipsa sau prezena ionului de determinat.

6. Efecutarea reaciei catalice cu indicator (cu utilizarea ionului de determinat n calitate de catalizator) ntre dou substane, una dintre care este colorata sau poate fi transformat n compus colorat. 7. Metodele indirecte bazate pe distrugerea compuilor colorai, se folosesc pentru determinarea halogen i sulfat ionilor, i ctorva ali ioni. Pentru determinarea anionilor se folosesc i alte metode. n analiza fotometric se utilizeaz diferite tipuri de compui colorai. Din acestia au o ntrebuinare mai eficient compuii compleci i chelai a ionilor de metale cu reageni organici. Pentru un ir de metale se ntlnete o larg ntrebuinare utilizarea acidocomplexelor cu liganzi neorganici (SCN- Cl-, Br-, I-), compleci peroxidici i heteropolicompui (As, Ge, Mo, P, Si, V, W). Absorbia luminii de ctre soluiile compuilor colorai depinde de natura compuilor ce absorb lumina, condiiile de obinere a lor, i de componena mediului. Duritatea legturii compuilor colorai Caracteristica cantitativ a stabilitii oricrui compus complex MRn i revine constanei termodinamice de stabilitate. Gradul de stabilitate a compusului colorat n soluiile apoase crete odat cu mrirea constanei de stabilitate. Cu ct mai bine ionul de determinat M se leag cu regentul fotometric R ntr-un compus colorat cu att precizia i sensibilitatea metodei fotometrice va fi mai mare. De aceea reagenii n analiza fotometric se cer de a fi alei n aa mod, ca compusul colorat a ionului de determinat s fie destul de stabil i cu mult mai trainic, dect posibilitatea unirii acestui reagent cu ali ioni, care se conin n soluia de analizat. Compusul colorat poate fi socotit comod pentru utilizarea n analiza fotometric, dac posed o componen stabil, care corespunde unei anumite formule chimice. Componena stabil a compusului colorat adeseori este urmat i de o stabilitate a intensitii coloraiei compusului n soluie i este unul din factorii de baz, care influeneaz precizia determinrii fotometrice. ns n practic adeseori se ntlnete o instabilitate a compusului cmplex cobrat. Cauzele principale sunt urmtoarele: o schimbarea componenei compusului complex colorat n legtur cu obinerea lui pe etape sau a disocierii; o descompunerea compusului complex colorat n timp; o prezena altor compui n soluie, care pot interaciona cu ionul de determinat M sau ce reagentul R, ales pentru fotometrare. Influena pH ului la formarea complexului colorat Influena pH-ului asupra complecsilor colorai, se exprim n diferite forme, ns n majoritatea cazurilor se reduce la distrugerea sau schimbarea componenei complexului colorat. Cteodat, pH-ul poate contribui la formarea compuilor colorai, cu ioni strini, prezeni n soluie, predispune la schimbarea solubilitii compusului colorat i influeneaz la starea de oxido reducere de interaciune. Obinerea compuilor colorai cu reagenii, care manifest proprieti de indicator. Muli reageni colorai, care se comport ca acizi slabi organici, manifest proprieti de indicator (alizarina, ditizona, arsenazo, toron .a.). Aceti reageni i pot schimba coloraia odat cu schimbarea concentraiei ionilor de H+. Aceasta este condiionat de starea de echilibru n care forma acid a reagentului indicator HR se deosebete dup structur i coloraie de forma bazic R - a aceluiai reagent. Odat cu mrirea pH-ului soluiei se petrece o transformare rapid din forma acid n cea bazic. Micorarea pH-ului soluiei duce la mrirea concentraiei acidului slab. n aa fel, nerespectarea stabilitii pH-ului mediului va duce la schimbarea nu numai a intensitii coloraiei, dar i a nsi culorii. Pentru ca nu s se ntmple aceasta este necesar ca reacie de formare a compusului complex colorat s se petreac la un Ph bine determinat.

Cantitatea reagentului fotometric Reacia de obinere a compusului colorat MRn cere un exces de reagent fotometric. n unele cazuri pentru legarea deplin a ionului n compus colorat este deajuns de adugat puin exces de reagent (20 30%) n comparaie cu calculele ce au fost efectuate steheometric. Aceasta se ntmpl cnd compuii colorai posed o stabilitate nalt (1MRn CMn > 102(n+1) /Nn) i insoluie lipsese componenii, care pot reaciona att cu ionii ct i cu reagenii. n alte cazuri cnd stabilitatea compusului colorat este micorat (1MRn CMn < 102(n+1) /Nn) i n urma unei disociaii eseniale sau sau o concuren altui compus complex colorat, o oarecare cantitate de ion de determinat rmne n stare liber. n aa situaie se recurge la adaosul unul exces de reagent, care poate ntrece cu mult cantitatea steheometric calculat de 10 ori. Alegerea domeniului spectral pentru determinrile fotometrice. Sensibilitatea i corectitudinea determinrilor fotometrice depind n mare msur de intervalul ales al lungimii de und ai luminii absorbite. Domeniul spectral optim pentru care se petrece fotometrarea este determinat de spectrele de absorbie al complexului ct i a regentului utilizat. Reeind din acestea, putem ntlni urmtoarele variante: 1. n regiunea spectrului analizat reagentul fotometric nu absoarbe lumina (spectrele de absorbie nu se acoper). n aa situaie msurrile densitii optice a soluie fotometrate este de dorit de le efectuat n acea regiune a spectrului; n care absorbia luminii de ctre compusul complex este maxim. Aceasta d posibilitate de a efectua determinrile calitative cu rensibilitate i corectitudine mai nalt. 2. Spectrele de absorbie al compusului fotometrat i a reagentului se acoper. Msurarea densitii optice o soluie cercetate n regiunea maximului de absorbie a compusului complex MRn, n acest caz nu ne permite de a obine rezultate satisfctoare, deoarece la aceast lungime de und lumina este absorbit i de ctre reagentul fotometrat, concentraia cruia semnificativ este mai mare de ct a complexului (deoarece pentru determinarea calitativ a fost necesar de adugat exces de regent.) Astfel, precizia i sensibilitatea determinrilor cu mult se micoreaz. 3. n soluie ce formeaz doi compui colorai, diferii dup componena, ai compusului de determinat cu reagentul. Pentru excluderea erorilor mari, determinarea fotometric a elementului analizat n acest caz, este necesar de efectuat la lungimea de und a punctului izobestic a formelor fotometrate egal, unde absorbia luminii de ctre aceste forme este aceeai. Filtrele de lumin Pentru mrirea sensibilitii i preciziei determinrilor fotometrice este important de a utiliza nu lumina cu diferite lungimi de und (incolor), ci acea care maximal poate fi absorbit de ctre compusul colorat. Deaceea, pentru ca din tot spectrul vizibil de lumin de a evidenia numai acele lungimi de und, care sunt necesare, n faa fescicolului de lumin se instaleaz aa numitele filtre de lumin. Filtrele de lumin permit ptrunderea luminii numai ntr-un anumit interval de lungime de und i practic absorb complet celelalte lungimi de und. Cu ct este mai mic regiunea maxim de ptrundere a razelor ( 1/2max 1/2 max diferena maximelor de ptrundere) prin filtrul utilizat, cu att el este mai corect ales. n calitate de filtre de lumini sunt utilizate sticlele colorate, pelicule, soluii colorate i filtre interfereniale. Filtrele de lumin sunt alese reeind din spectrul de absorbie al compusului analizat, aa nct domeniul de absorbie a luminii de ctre soluiile colorate i regiunea maxim de ptrundere a luminii prin filtre s fie una i aceeai. Adic maximumul de absorbie al soluiei trebuie s corespund cu maximurile de ptrundre (minimului de absorbie) ale filtrului de lumin. Reageni organici Reagenii organici sunt folosii din ce n ce mai mult n practica analitic pentru determinrile att a substanelor organice ct i a celor neorganice. Au fost cercetai i recomandai pentru analiza o sumedenie de diferii compui organici. Regenii organici pot fi clasificai n: 1) specifici; 2) selectivi; 3) de grup. La cei selectivi se refer aa compui, care

reacioneaz numai cu o grup bine determinat de metale. Reagentul selectiv poate fi numit specific, dac el interacioneaz numai cu un singur ion (metal). ns n marea sa parte reagenii organici sunt de grup, care interacioneaz cu diferite elemente ale sistemului periodic. Dintre principalele grupe de reageni organici, care a cpta o vast ntrebuinare pentru determinarea individual a elementelor, putem enumera: ditizona, 8-oxichinolina, dietilditiocarbaminat de natriu, piridilazonaftal, piridilazorezorcina, xilen oranj, arsenazo III, metiltimol albastru, sulfoclorfenol C, diantipirilmetan .a. Dizolvani organici Dizolvanii organici n analiza fotometric se utilizeaz pentru mrirea solubilitii unor reageni i a compuilor colorai, pentru mrirea sensibilitii i preciziei determinrii fotometrice. Foarte larg ntrebuinare au primit dezolvanii organici n scopul separrii ionilor supui analizei fotometrice n faza organic. Pentru separarea ionilor se utilizeaz solveni nepolari, adic insolubili n ap (benzen, cloroform tetraclorcarbon), cu ajutorul crora compuii compleci se extrag din faza apoas n faza dezolvantului organic. Dizolvanii organici polari, bine se amestec cu apa (acetona, dioxan, alcool etilic .a.) i se utilizeaz de obicei pentru mrirea stabilitii relative a compuilor colorai. Influena dizolvanilor, care conin grupe hidrofile, (acetona, dioxon, alcooli), asupra solubilitii unor complexe in sistemele apoase, se poate uor de neles, dac se ia n consideraii capacitatea acestor grupe de a se comporta n calitate de donori de electroni i de a nlocui molecula de ap din sfera coordinativ a complexului. Pe de alt parte adugarea dizolvantului polar n ap, duce la micorarea permiabilitii dielectrice a mediului, deaceea dizolvanii care uor se amestec cu apa se utilizeaz n principal pentru determinrile fotometrice a compuilor colorai puin stabili, care n soluii apoase, n mare msur disociaz n ioni. Dizolvanii neapoi micoreaz gradul de disociaie a compuilor colorai i produc condiii favorabile pentru utilizarea compuilor mai puin stabili n analiza fotometric. Sensibilitatea i precizia determinrilor fotometrice n dizolvanii polari, ca de obicei, este mai mare n comparaie cu soluiile apoase, unde n marea sa parte ionul de determinat rmne nelegat, neformnd un compus colorat - CeL mai apreciabil n aa caz poate fi acetona, care se amestec cu apa n orice proporie i disociaia majoritii electroliilor n aceton, foarte mult se micoreaz. Extracia compuilor colorai Extracia compuilor colorai cu ajutorul dizolvanilor organici reprezint una din metodele cel mai des ntlnite n analiza fotometric de extracie pentru determinrile nemijlocite n faze organice. n multe cazuri extracia permite semnificativ de a majora sensibilitatea determinrilor fotometrice dnd posibilitate de a concentra micile cantiti de substan de analizat aflat n faza organic. n multe cazuri nsi extracia nu este altceva dect metoda, bazat pe distribuirea compusului dizolvat ntre 2 faze lichide nemiscibile. Ca atare n practic sunt utilizate sistemele, n care una dintre faze este apoas, iar cealalt dizolvantul organic. Pentru eficiena separrii, este necesar ca coeficientul de separare (S = P 1 / P2) s fie diferit pentru compusul de determinat i a substanei de balast. n cazul cnd unul din coeficienii de distribuire este foarte mic, iar altul este mare, separarea se petrece uor i repede. ns cnd factorul de separare este mrit i coeficietul de distribuire cel mai mic este la fel mrit, se petrece extracia ambelor componente, adic, n aa caz este necesar de a stopa extracia elementului nedorit. Extracia permite selectiv de separat nu numai majoritatea diferitor elemente, dar i de a ndeprta urmele unor elemente de microcantitile altor i de a le concentra n volumul mic al dezolvantului organic, care este insolubil n ap.

n timpurile de fa intensiv se perfecioneaz metodele extractiv-fotometrice, care permit de a uni etapele de separare i a determinrilor fotometrice a elementelor ntr-o singur operaie, deoarece muli ioni ai metalelor formeaz compui colorai, care pot fi separai cu dizolvanii corespunztori. Deseori se utilizeaz i reextracia, adic trecerea prin unul sau alt mod a componentului de analizat din faza organic din nou n soluia apoas i dup aceeai tratare ulterioar, se fotometreaz. Metoda fotometric de extracien dozarea medicamentelor Metoda fotometric de extracie este bazat pe mbinarea extraciei compusului de determinat cu fotometrarea ulterioar a lui. Aceast metod este utilizat n analiza amestecurilor compuse, cnd este necesar de a determina cantiti mici se substan n prezena unor cantiti mai mari de alt substan, pentru determinarea impuritilor n prezena componenilor de baz. La extracia micilor cantiti de impuriti se petrece nu numai extracia, dar i concentrarea lor. Deaceea metodele extractivfotometrice capt importan major n legtur cu determinrile micilor cantiti de impuriti n compui cu nalt grad de puritate, bine utilizate n tehnologia atomar i de semiconducere. Metodele extractiv-fotometrice sunt foarte sensibile avnd un temp accelerat de dezvoltare i cu perspectiv. n metodele extractiv-fotometrice se utilizeaz diferite sisteme de extracie diferite tipuri, alegerea crora depinde de natura chimic a compusului analizat, componenei substanelor dizolvate i condiiilor de petrecere a extraciei. Pentru evaluarea metodei extractiv fotometrice sunt naintate un ir de cerine: - determinarea concentraiei optime a substanei de analizat n soluie i supunerea acesteia legii Lambert-Beer. - Alegerea corect a reagentului. n calitate de reagent pot fi utilizai diferii compui chimici: bromtinol albastru, bromfenol albastru, bromcrezol verde, tropeolin 00, eozin .a. Astfel trebuie de obinut un aa asociat, dintre substana de analizat i reagent, ca s posede o anumit intensitate a culorii, s se supuie legii Lambert-Beer, s fie stabil i de dorit s se extrag la o singur extracie; - Alegerea corect a dizolvanilor. Cei mai utilizai n practic ca extrageni sunt dizolvanii organici neoxigenai cloroformul, dicloretanul, clorura de metil, benzen .a. care dup cum se tie duc la obinerea unor compui nedisociabili. - Determinarea absorbiei maxime a ionului asociat, ce va corespunde unei anumite lungimi de und (max); - Unul din factorii de baz, care influeneaz asupra procesului de obinere a ionului asociat este determinarea precis a pH-ului soluiei de analizat. n acest sens se aleg soluii tampon corespunztoare, care vor menine un pH stabil. - Timpul petrecerii extraciei. Se ndeplinesc un ir de extracii, dup care se alege timpul optimal de extracie, n care a fost maximal extras, ionul asociat. - Alegerea corect a raporturilor de volume dintre soluia substanei de analizat: reagent, solvent sisol. tampon. Spectrofotometria IR Absorbana n regiunea infrarou (IR) posed moleculele, momentele dipole ale crora se schimba la iritarea micrilor vibraionale a nucleelor. Spectrele IR pot fi primite n diferite stri agregative ale substanei i servesc pentru identificarea, analiza cantitativ i de asemenea pentru determinarea structurii moleculelor. Determinrile se efectuiaz la spectrofotometre IR monocromatice i bicromatice, dotate cu sisteme de dispersie n form de prisme i reele de difracie.

Cel mai des se folosete regiunea spectral de la 2,5 pn la 20mcm (4000 -500cm1). Fiecare spectru infrarou se caracterizeaz printr-o serie de benzi de absorbie, maximele crora se determin cu numrul de und sau lungimea undei , i intensitatea maximelor de absorbie. Numarul de unda , masurat n cm-1, se determinp din relaia =104/ , unde - lungimea de und n micrometri (mcm). De obicei, la nregistrarea spectrului pe axa abciselor se depune n scara liniar valoarea numrului de unda (cm-1), pe axa ordonatelor - mrimea (n %). Folosirea spectrelor IR pentru determinarea structurii substanelor se bazeaz pe benzile caracteristice de absorbie (benzile legate de vibraia grupelor funcionale sau legturilor in molecule). Astfel de benzi de absorbie caracteristice au grupele OH; -NH2; - NO2; =CO; - N; etc. Identificarea substanei medicamentoase poate fi efectuat prin compararea spectrului IR a substanei de analizat cu spectrul analog al exemplarului standard sau cu spectrul lui standard. n primul caz spectrele IR se scot la acelai aparat n aceleai condiii (starea de agregare a substanei concentraia substanei, viteza de nregistrare, etc.). n cazul doi ne conducem strict de condiiile aduse pentru spectrul standard. De obicei, se folosesc spectrele IR, scoase de pe comprimate de KBr sau din paste n ulei de vazelin. Suprapunerea spectrelor IR se recomand de nceput de la analiza benzelor caracteristice, care de obicei se vd bine pe spectre, i doar la corespunderea lor se suprapun cu regiunea joas. Pentru regiunea joas n intervalul 1350-400cm-1 sunt caracteristice un set de benzi specifice, numite regiunea "amprentelor degetare". Corespunderea complet a benzilor de absorbie n spectrul IR denot despre identitatea substanei. Modificrile polimorfe ale unei i aceleai substane pot da spectre diferite. n cazul dat pentru controlul identitii se suprapun spectrele soluiilor lor sau dizolvnd fiecare substan n acelai solvent, se evapor solventul i se compar spectrele rezidurilor solide. De rnd cu aranjarea benzilor de absorbie, caracteristica esenial a substanei este intensitatea benzilor de absorbie, care poate fi caracterizata n spectre de mrimea indecelui de absorbie (H) sau marimea intensitii integrate de absorbie (A), care este egal cu suprafaa nconjurat a curbei de absorbie. Intensitatea de absorbie poate fi folosit pentru determinarea structurii substanei i analizei cantitative. Exemplu de analiz spectral IR:
Spectrele IR ale difeturului i profeturului, determinate la spectrofotometrul Specord 75, prin metoda suspensiei n ulei de vaselin (circa 0,02 g de substane s-au triturat cu ulei de vazelin). Domeniul studiat este cuprins ntre 4000 i 400 cm-1 (fig. 7, 8.).

Figura 7. Spectrul IR al profeturului

Figura 8. Spectrul IR al difeturului Caracteristica spectrelor IR determinate s-a efectuat n baza datelor bibliografice. Pentru analiz a fost aleas preponderent, aa numita zon a amprentelor degetale, unde substanele manifest o caracteristic spectral individual i caracterul spectrului se schimb chiar i la modificri ne eseniale ale structurii. Comune pentru ambele substane sunt benzile de absorbie de intensitate slab sub forma unor coturi la 1280 900 cm-1 , caracteristice vibraiilor de valen a gruprii P O C. Benzile de absorbie n jurul la 1050 cm -1 se datoreaz vibraiilor de valen autonome a unor fragmente din aceast grupare ( P O i C O ). Gruparea C O pentru difetur are dou benzi de absorbie la 10401050 cm -1, iar profeturul numai una la 1050 cm -1. Prezena benzilor simetrice i asimetrice n regiunea 1035 cm -1 este condiionat de prezena gruprii O (P = O) O. Pentru difetur este caracteristic o band de intensitate medie la 1165 cm -1 i un cot la 1260 cm-1, care sunt atribuite gruprii P O C2H5. Pentru profetur este caracteristic o band de intensitate medie la 1130 cm -1, cauzat de gruparea CH O P . Ambele substane n regiunea 975 1250 cm -1 manifest benzi puternice de absorbie, condiionate de gruparea P OH. n ambele spectre la 3220 cm-1 apar benzi de intensitate slab, care sunt caracteristice vibraiilor de valen a gruprii N H. Vibraiei C C la difetur i este caracteristic o band intens de absorbie la 1000 cm -1, iar la profetur o band de o intensitate mai slab la1010 cm-1. Vibraiile de deformare a grupelor NH2 se manifest n regiunea 1680 1500 cm-1. Benzile de absorbie a vibraiilor de valen pentru grupa C N se afl la 1040 cm -1 n spectrul difeturului i la 1050 cm-1 pentru profetur. Prezena benzilor de absorbie la 900 670 cm -1 de o intensitate slab este generat de vibraiile de deformare i de valen a gruprii C-H. Benzile de intensitate slab de la 550 580 cm -1 le atribuim vibraiilor de valena a gruprii C-S, iar benzile slab intensive de la 1430 1480 cm -1, se datoreaz vibraiilor de deformaie a grupei CH3 . Benzile de absorbie din regiunea 580 490 cm -1 sunt atribuite schimbrii unghiurilor legturilor C S C i N C N . Frecvenele caracteristice pentru difetur i profetur n spectrele IR sunt redate n tab.5. Tabelul 5 Frecvenele caracteristice pentru difetur i profetur n spectrele IR Maxime, cauzate de grupele, cm-1 Substana P-O-C; P-O; POH 1202, 1165, 1240, 1105, 1280, 1035 1105, 1130 1260, 975,1035 NH2+ NH 3220 1680 3220 1680 C=N C-C, C=O 1040 1050, 1000 1395 1050 1010, 1380 - CH - CH3 900, 670, 1430 950, 600, 1450 C-S 550, 580 560, 570

S-etilizotiuroniu dietilfosfat Izopropilfosfit izopropilizotiuroniu

Fototurbidimetria este o metod bazat pe msurarea intensitii luminii absorbite de ctre o suspensie microdispers i Fotonefelometria este bazat pe msurarea intensitii luminii dispersate de particulele substanei analizate. Ambele metode se utilizeaz pentru dozarea

amestecurilor medicamentoase, care formeaz cu diferii reageni suspensii fine. Preventiv se determin dependena intensitii absorbiei (sau dispersiei) luminii de concentraie n soluia analizat. Metodele de calcul sunt ca i n metoda fotocolorimetric.

Metode bazate pe emisie de raze


Spectrometria atomic de absorbie se bazeaz pe absorbia de ctre atomi a radiaiei cu frcven egal cu cea a tranzaciei de rezonan. Emisia provine de la o lamp cu catod gol, trece prin flacr n care este pulverizat proba, trece prin fisura monocromatorului. Linia de rezonan emis din spectrul elementului determinat se msoar prin metode fotoelectric. Se stabilete dependena dintre micorarea intensitii de emisie i concentraia substanei. Metodele de fluorescen se bazeaz pe proprietatea substanelor de a poseda fluorescen proprie sau n urma unor reacii chimice, a proceselor de solvoliz, disociere. Fluorimetria se utilizeaz nu numai pentru identificare, dar i pentru determinarea unor cantiti mici de substan, deoarece intensitatea fluorescenei este n dependen liniar de concentraie. Aceast dependen se pstreaz la pentru excitaii cuantice stabile i intensitatea luminii de excitare pentru concentraii mici de substan. n cazul concentraiilor mari aceast dependen nu se respect. Identificarea se petrece dup intensitatea culorii luminii, specifice pentru substanele fluorescente. Spectrul este format din benzi late de emisie (de la 100 la 200 nm). Dozarea se petrece la spectrofluorimetre. Calcularea concentraiei se face dup curba de calibrare. Metoda este foarte sensibil.

Metode magnetice
Rezonana magnetic nuclear( RMN) Metoda rezonanei magnetice nucleare (RMN) este o metod de analiz, bazat pe proprietile magnetice ale nucleelor atomilor. Modul de manifestare a acestei nsuiri este influenat de ambiana chimic, n care se afl atomii respectivi, putnd oferi informaii cu privire la structura compusului n care snt nglobai atomii, ale cror nuclee snt implicate n fenomenele de magnetizare. RMN ofer informaii de o inestimabil valoare analitic cu privire la atomii acestor elemente, punnd la dispoziie date complexe i directe cu privire la alctuirea scheletului de atomi de carbon, hidrogen, fosfor, azot, oxigen i influena reciproc a lor. Spectrul RMN prezint o totalitate de semnale, nregistrate pe spectrogram. Spectroscopia de mas este o metod, ce permite determinarea masei ionilor, moleculelor ionizate sau a fragmentelor de molecule dup devierile n cmpurile magnetice sau electrice, sau dup energia cinetic. Ionizarea moleculelor are loc n rzultatul aciunii unui flux de electroni. Intensitatea picului n spectrul de mas este proporional numrului de ion formai. Componena i numerele de mas a ionilor caracteristici permit determinarea apartenenei compusului studiat ctre o clas anumit de compui, permite identificarea acestuia. Spectroscopia de mas este o metod informativ i sensibil. Metode electrochimice Poteniometria este o metod bazat pe msurarea potenialului aprut ntre soluia analizat i electrodul scufundat n ea. n analiza farmaceutic se utilizeaz pe larg titrarea poteniometric. Aceasta se bazeaz pe determinarea volumului echivalent de soluie titrant prin msurarea forei electromotoare aprute n urma diferenei de potenial ntre electrodul indicator i cel de comparare, scufundai n soluia analizat. Metoda poteniometric este folosit la determinarea pH-ului soluiilor i la determinarea concentraiilor unor ioni. Avantajele determinrii pH-ului soluiilor prin metoda poteniometric

n comparaie cu cea colorimetric se lmuresc prin posibilitatea titrrii unor soluii colorate, a amestecurilor de mai multe substane n solveni apoi i anhidri. Metoda poteniometric poate fi folosit n procese de titrare cu diferite mecanisme: oxido-reducere, neutralizare, sedimentare. Msurarea forei electromotoare se execut la poteniometre. Titrantul este adugat uniform n cantiti egale. n punctul de echivalen se petrece o variaie brusc de potenial. Rezultatel titrrii se prezint grafic prin indicarea punctului de echivalen pe curba de titrare, sau prin calcule. Ionometria se bazeaz pe determinarea depenenei dintre fora electromotoare a unei pile galvanice ionselective i concentraia ionului analizat. Metoda este sensibil, reproductiv, nu necesit utilaj i reageni speciali. Se utilizeaz la determinarea ionilor de sodiu, potasiu, halogeni n amestecuri complexe, inclusiv n forme farmaceutice. Polarografia este bazat pe msurarea puterii curentului electric aprut la electrooxidarea sau electroreducerea substanelor analizate. Dizolvantul este apa, solvenii organici sau mixti. Electroliza se petrece n celula polarografic, ce const din electrolizer, punte salin i doi microelectrozi: electrod pictur de mercur i un electrod indicator. Pentru identificare se utilizeaz valoarea potenialului semiundei, iar pentru dozare nlimea undei (msurarea intensitii curentului de difizie limit). Analiza cantitativ se face n baza curbelor de calibrare cu utilizarea soluiilor standard de referin. Metode termice de analiz Metodel termice se bazeaz pe schimbrile aprute la nclzire substanei n funcie de natura substanei, temperatur, condiii de nclzire. In procesul de inclzire se petrec schimbri polimorfe, nlturarea apei absorbite i a celei de cristalizare, sublimarea, topirea, fierberea, descompunerea. Procesul de descompunere este urmat de transformri chimice, n urma crora se petrec variaii termice i eliminri de gaze. Aceste procese stau la baza termografiei aprecierea stabilitii termice dup temperatura efectului termic rezultat din destrucia substanei. Analiza termic presupune nregistrarea exact a strii de echilibru dintre faza cristalin i lichid a substanei la nclzire sau rcire lent. O interpretare mai reuit manifest analiza termic difereniat, bazat pe nregistrarea variaiei energiei n funcie de temperatur. Derivatografia prezint o variaie a acestei metode i const n nregistrare variaiilor de temperatur n urma descompunerii, topirii, dehidratrii i a altor procese ce se petrec la nclzire. Metodele termice au o ntrebuinare destul de larg, n special la studierea stabilitii substanelor. Metode de separare n analiza farmaceuticc a amestecurilor multicomponente se utilizeaz extracia, metodele cromatografice, electroforezul. Extracia este o metod de separare, bazat pe folosirea unui extragent ce nu se amestec cu faza iniial, se separ uor de ea i de componentele extrase. Deosebim extracii din faza solid i din faza lichid. Extracia poate fi unic i multipl i este folosit pe larg n analiza formelor farmaceutice multicomponente. n cuplaj cu fotometria este folosit n metoda fotocolorimetric pe baz de extracie. Metode cromatografice de analiz Cromatografia este o parte distinct, un domeniu vast al metodelor de analiz. Metodele cromatografice se numr printre cele mai eficiente, mai selective i mai sensibile metode de separare i de detecie. Prin cuplarea lor cu detectori automatizai, metodele cromatografice pot fi utilizate i la determinarea cantitativ a analiilor separai. Cromatografia pe strat subire Aparatur Plci cromatografice din sticl sau din alte materiale, de dimensiuni diferite, cu lungimea, de obicei, de 20 cm i limea variabil, pe care se aplic un strat subire de adsorbant de puritate cromatogra-fic (silicagel, kieselgur, celuloz microcristalin, oxid de

aluminiu etc), la care se pot aduga liani (sulfat de calciu, amidon, carboximetilce-luloz etc.) sau ageni fluoresceni. Vase cromatografice din sticl, cu posibilitatea de nchidere etan, de dimensiuni convenabile, pentru a asigura meninerea plcilor n poziie aproape vertical. Micropipete, microseringi sau alte dispozitive. Prepararea plcilor cromatografice. Se prepar o suspensie omogen din adsorbant i ap n proporie de 1:2 m/V, dac nu se prevede altfel n monografia respectiv sau de ctre productorul adsorbantului. Suspensia obinut se aplic pe plci, n prealabil bine curate, cu ajutorul unui dispozitiv, ntr-un strat uniform de 0,25 mm grosime. Plcile cromatografice se usuc la aer timp de 30 min (silicagel G, silicagel GF254 i kieselgur G) sau cel puin timp de 2 h (silicagel H i silicagel HF^), apoi, n etuv, la 105 110 Q (silicagel G, silicagel GF 2g4 i kieselgur G) sau la 120 0 (silicagel H i silicagel HF 254) timp de 1 h. Se recomand ndeprtarea unei fii de 2 5 mm adsorbant de-a lungul marginilor verticale ale plcii. Plcile cromatografice se pstreaz n exsicator cu clorur de calciu anhidr. Dac snt folosite dup mai mult de 3 zile de la preparare, plcile cromatografice se reactiveaz n etuv, conform prevederilor anterioare, sau, dup caz, conform prevederilor din monografia respectiv. Se pot folosi i plci realizate industrial. Tehnica de lucru. Dac nu se prevede altfel, naintea determinrii cromatografice respective, vasul cromatografie se satureaz cu vaporii velopantului prin urmtorul procedeu: se cptuesc cu hrtie de filtru trei perei ai vasului i se introduce developantul, astfel nct acesta s formeze, de obicei, un strat cu grosimea de 10 mm, se acoper vasul i se las, dac nu se prevede altfel, timp de 30 min pentru saturare. Saturarea vasului cromatografic i determinarea cromatografic se efectueaz la o temperatur cuprins ntre 20 0 i 25 0. O diferen de temperatur ntre pereii vasului cromatografic conduce la perturbri ale procesului de migrare n stratul adsorbant. n cazul substanelor fotosensibile, developarea trebuie efectuat ferit de lumin. n cazul n care faza staionar este format dintr-un adsorbant impregnat cu un lichid care mbib adsorbantul, nainte de aplicarea soluiilor-prob i a soluiilor-etalon pe placa cromatografic, aceasta este introdus ntr-un vas cromatografic n care se afl un strat cu grosimea de aproximativ 10 mm din lichidul de impregnare (eventual diluat cu un solvent volatil, dac se prevede astfel n monografia respectiv) i se las pn cnd acesta a parcurs distana prevzut n monografia respectiv. Natura adsorbantului, solventul sau amestecul de solveni care constituie developantul (n mililitri), modul de preparare al soluiilor de aplicat (prob, etalon), volumele aplicate pe placa cromatografic i distana parcurs de developant snt prevzute n monografia respectiv. Linia de start trebuie situat la o distan de 2 cm de marginea plcii. Distana dintre dou puncte de aplicare a soluiilor trebuie s fie de cel puin 1,5 cm, distana dintre punctele marginale i laturile plcii trebuie s fie de cel puin 2 cm. Soluiile se aplic pe placa cromatografic n pete circulare, cu diametrul de 2 6 mm, sau n benzi, conform prevederilor din monografia respectiv. Dac este cazul, soluia se aplic n fraciuni, ateptnd de fiecare dat evaporarea solventului, eventual cu ajutorul unui curent moderat de aer. Dup evaporarea solventului, placa cromatografic se introduce n vasul cromatografic cu developant, pe ct posibil n poziie vertical. Petele de pe linia de start nu trebuie s ating suprafaa stratului de developant. Dup ce developantul a parcurs distana prevzut, de obicei 10 15 cm, placa cromatografic se scoate din vasul cromatografic, se usuc i se pun n eviden petele, conform prevederilor din monografia respectiv. De obicei, punerea n eviden a petelor de pe cromatogram se efectueaz prin examinarea acestora ca atare sau dup tratare cu reactivi potrivii, n lumina vizibil sau n lumina ultraviolet la 254 nm sau la 366 nm. Pentru identificarea substanelor, se compar pe aceeai cromatogram valoarea Rf i culoarea sau fluorescenta petei obinute cu soluia-prob, cu valoarea Rf i culoarea sau fluorescenta petei obinute cu soluia-etalon; cele dou pete trebuie s fie asemntoare.

Valoarea Rf a unei substane este Rf = a / b n care : a = distana parcurs de substan de la punctul de aplicare al soluiei pn la centrul petei (n centimetri) ; b = distana parcurs de developant de la punctul de aplicare a soluiei pn la frontul developantului, trecnd prin centrul petei (n centimetri). Identificarea unei substane se efectueaz, n anumite cazuri, fa de o substan de referin, cu ajutorul valorii Rf. Compararea vizual a dimensiunii petelor i a intensitii coloraiei sau fluorescentei se folosete pentru evaluarea semicantitativ a impuritilor. Dozarea substanelor separate pe cromatogram se efectueaz, dup rzuirea petelor respective i eluarea substanelor de pe adsorbant cu un solvent potrivit, prin spectrofotometrie sau direct pe plac, de obicei, prin densitometrie. Adsorbanii, lianii i solvenii folosii trebuie s fie de puritate cromatografic. Figura 9 Plac cu strat subire (a), camer sandwich (b) i camera de developare cu placa i cuva cu faza mobil (c) clem

placa CSS

bac faz mobil

a)

b)

c)

Alegerea fazelor mobile pentru cromatografia pe strat subire trebuie s in seama de aceleai reguli ca i n cazul cromatografiei pe coloan. Timpul de developare este de 10-60 min, deci mai mic dect pe hrtie i mai ales pe coloan, iar reproductibilitatea este mai mare. Mrimea probei ce se aplic cu microseringi Hamilton, cu micropipete automate cu memorie sau cu simple tuburi capilare gradate n 5, 10, 25, 100 l, este de 10-100 g/spot, n 1-10 l soluie 1%. Diametrul spotului unei probe nu trebuie s fie mai mare de 5 mm, dar nici mai mic de 2 mm. Pentru detecia spoturilor incolore sau nefluorescente, acestea se expun aciunii vaporilor de iod care reacioneaz cu componenii separai prin developare, dnd compui colorai. Se pot utiliza plci gata preparate al cror strat subire conine un colorant fluorescent, spoturile datorate analiilor aprnd prin expunerea plcilor la radiaii UV, sub forma unor pete de culoare nchis, nefluorescente. Detecia compuilor organici se poate face i prin pulverizarea cu acid sulfic a plcii, urmat de nclzire. Se pot pulveriza de asemenea diveri reactivi de culoare sau se pot rzui spoturile, iar dup eluie s se fac msurtorile necesare prin metode instrumentale adecvate.

Prin urmare, n procedeele cromatografice pe strat subire trebuie s se parcurg mai multe etape, dup cum urmeaz: tratamentul pregtitor, deci activarea stratului subire; aplicarea probei i a soluiilor de standarde; developarea care produce separarea propriu zis (unidimensional i/sau bidimensional); revelarea sau vizualizarea spoturilor de analii; interpretarea rezultatelor analitice, att pentru detecie, ct i pentru determinrile cantitative. Componenii se dispun de jos n sus sub forma unor spoturi. Pentru o separare mai net a componenilor se poate face i o developare bidimensional, una pe nlime cu o anumit faz mobil (a) i apoi pe orizontal (b), cu o alt faz mobil (de fapt i n acest caz developarea este pe vertical, deoarece se rotete placa cu 90, figura ). Pentru determinri cantitative se utilizeaz un fotodensitometru care msoar densitatea optic a spoturilor, parametru care este proporional cu concentraia fiecrui analit. Se poate msura fluorescena sau se poate msura transmiia fiecrui analit. Se poate msura fluorescena sau se poate msura transmiia sau lumina reflect. Instrumentele moderne nregistreaz spectrul complet al substanei, iar cele cu detector cu diode n serie pot scana placa cu lungimi de und multiple. Exist i tehnici cromatografice pe strat subire de nalt performan, (HPTLC) care execut pe straturi subiri formate din particule foarte fine de suport, cnd separarea este mai rapid i mai eficient pe probe mai mici de substane. Figura 10 Developarea unidimensional (a), bidimensional (b) i calcularea Rf (c)
front eluent Rf = Rf = H1 H2 1

t1 1 t2 H1 = distana parcurs de analit H2 = distana parcurs de solvent (faza mobil) t1 = timpul necesar pentru eluarea analitului H2 t2 = timpul necesar pentru ca eluentul s ajung la front

H1

a)

start

b)

(c)

Cromatografia n faz gazoas Cromatografia n faz gazoas (CG) este o tehnic foarte rspndit, primele ei aplicaii datnd de la nceputul anilor 1940, cu aplicabilitate n separarea fraciunilor uoare n rafinriile petroliere. Dezvoltarea sa ulterioar s-a datorat unor avantaje pe care le prezint: sensibilitate mare aplicabilitate pe scar larg elaborarea rapid a unei proceduri analitice posibilitatea automatizrii procesului analitic CG este o variant a cromatografiei pe coloan n care separarea componentelor dintr-un amestec complex se realizeaz ntre o faz mobil gazoas i o faz staionarlichid (cromatografie gaz-lichid, CGL) sau solid (cromatografie gaz-solid, CGS). n CGL faza staionar este un suport solid inert, ce poate fi chiar peretele coloanei cromatografice, impregnat cu un lichid. Cromatografia gaz-solid se realizeaz cu faze staionare solide poroase de tipul carbon - grafit, silicagel sau alumin. Tehnica cromatografiei de gaze Un gaz-cromatograf cuprinde schematic (figura 2.3.35) trei module specifice: un injector coloan un detector Faza mobil care antreneaz proba n coloan este un gaz numit graz vector. Debitul controlat cu precizie permite o mare repetabilitate a timpilor de retentie.

Figura 11. Schema unui gaz cromatograf Analiza ncepe n momentul n care o cantitate foarte mic din proba de analizat este introdus sub form lichid sau gazoas n injector care are un rol dublu: transformarea probei probei lichid (cromatografie gaz-lichid, CGL) sau solid (cromatografie gaz-solid, CGS). n CGL faza staionar este un suport solid inert, ce poate fi chiar peretele coloanei cromatografice, impregnat cu un lichid. Cromatografia gaz-solid se realizeaz cu faze staionare solide poroase de tipul carbon - grafit, silicagel sau alumin. Coloana este plasat ntr-o incint cu temperatur reglabil. Moleculele componente ale probei, ajungnd n contact cu f a staionar din coloan, vor interaciona n funcie de tria forelor ce se stabilesc ntre componente i adsorbani (CGS) sau n funcie de repartiia lor ntre faza mobil i lichidul staionar (CGL). Viteza de deplasare a componentelor de-a lungul coloanei este diferit, fapt care duce la separarea i eluarea lor din coloan ntr-o anumit ordine. La ieirea din coloan componentele eluate succesiv de gazul vector sunt decelate de un detector care p va sesiza proprietile ce deosebesc componentele de gazul vector i produc un semnal care se nregistreaz i care este apoi transformat n cromatogram. Vrful cromatografic sau picul" corespunde componentului

separat n coloan i trecut prin detector iar nlimea lui este proporional cu concentraia acestuia n faz gazoas, ntocmai ca la cromatografia de lichide pe coloan. n gaz-cromatografie se definete, de asemenea, linia de baz a cromatogramei", linia trasat la baza ei atunci cnd, n condiii stabilite de lucru, din coloan iese numai gazul vector, fr componente. n cromatografia n faz gazoas, exist patru parametri operaionali pentru o faz staionar dat: lungimea coloanei L viteza fazei mobile u (care condiioneaz numrul de talere teoretice) temperatura n coloan T raportul fazelor (care condiioneaz k") Aparatul permite reglarea temperaturii i a vitezei fazei mobile, putndu-se aciona astfel asupra eficacitii i a factorilor de retenie. A. Gazul vector Se utilizeaz ca faz mobil, cel mai adesea, unul din gazele vectoare: heliu (He), azot (N2), hidrogen (H2), fie provenind din cilindri sub presiune, fie obinute pe loc pornind de la un generator de gaz (N2, H2) care are i avantajul de a furniza un gaz foarte pur. Mai rar se utilizeaz Ar, Ne. Gazul vector trebuie s fie lipsit de urme de hidrocarburi, de vapori de ap sau de oxigen, prezena acestora reducnd sensibilitatea unor detectori. Dac gazul vector are provenien industrial, este indicat ataarea unui filtru dublu (deshidratant i reductor) la intrarea acestuia n injector. Natura gazului vector nu modific ntr-o manier semnificativ valorile coeficienilor de distribuie a compuilor analizai datorit absenei interaciunilor ntre gaz i solut, temperatura este singurul factor de modificare important. Vscozitatea i viteza gazului ntr-o coloan influeneaz dispersia compuilor n faz staionar i difuzia acestora n faz mobil (vezi curba van Deemter), prin urmare acioneaz asupra parametrilor de efidacitate N i asupra sensibilitii deteciei (figura 2.3.36). Curbele tipice van Deemter demonstreaz c dintre cele 3 gaze studiate, hidrogenul este cel care permite separarea cea mai rapid. Se constat, de asemenea, o cretere a vscozitii cu temperatura, heliul fiind mai vscos dect azotul la aceeai temperatur.

n cromatografia de gaze, faza mobil fiind compresibil, debitul msurat la ieirea din coloan trebuie corectat prin factorul de corecie de compresie J care ine cont de suprapresiunea n partea de sus a coloanei. Dac pe cromatogram apare un pic datorat unui compus nereinut, este posibil calcularea vitezei medii de naintare a gazului vector n coloan, u. Pe de alt parte adaptnd un debitmetru cu bul de spun la ieirea din coloan, cunoscndu-i diametrul se poate deduce viteza gazului vector u0 la ieirea din aparat, la presiunea atmosferic Do- Raportul ntre cele dou

viteze este egal cu J, factorul de compresie, raportat la presiunea relativ p/p0 (p presiunea n capul coloanei):

B. Introducerea probei i camera de injectare Proba sub form de soluie, de un volum foarte mic (de exemplu, 0,5 \i\), este introdus n aparat cu ajutorul unei nicroseringi existente sub forma a numeroase modele adaptate diverselor injectoare i coloane. Pentru probele gazoase se utilizeaz injectoare cu bucle asemntoare celor din cromatografia de lichide. Injectorul este poarta de intrare a probei n cromatograf avnd n acelai timp i alte funcii: vaporizeaz i antreneazi amestecul prob - gaz vector n capul coloanei. Caracteristicili njectoarelor ca i modul de injectare difer n funcie de coloanele cu care sunt asociate. Calitatea separrilor depind de aceast faz a analizei. C. Incinta termostatat Gaz-cromatograful este dotat cu o incint nclzit, . termostatabil, cu dimensiuni adecvate pentru instalarea injectorului, coloanei i detectorului. D. Detectorii Se submpart n dou clase: o universali - sensibili practic la toate componentele eluate o specifici - sensibili numai la un tip particular de molecule, grupri funcionale sau legturi chimice La baza deteciei st, n principiu, orice proprietate care deosebete componenta de detectat de eluent, rspunsul depinznd de concentraia molar sau masic a solutului n gazul vector. Dup modul n care nregistreaz rspunsul se disting: detectori difereniali - indic concentraia compusului n eluent n momentul intrrii acestuia n detector detectori integrali indic concentraia compusului n eluent la momentul tR Detector de conductibilitate termic. Detectorul de conductibilitate termic sau catarometru este un detector universal care se bazeaz pe msurarea diferenei de conductibilitate termic ntre eluentul care conine componenii de analizat i eluentul pur (H2, N2, He). Este un detector cu sensibilitate medie.

Cromatografia lichid de nalt presiune (HPLC) Cromatografia lichid de nalt presiune (HPLC) se deosebete de cromatografia de gaze prin utilizarea n calitate de faz mobil a unui lichid, care trece prin coloana umplut cu un adsorbant solid cu o vitez mare n urma uneei presiuni aplicate. HPLC permite separarea amestecurilor multicomponente. Metoda este selectiv i sensibil, rapid i reproductiv. Identificarea medicamentelor se face dup timpul de retenie a fiecrui component. Dozarea se efectueaz dup aria picului, care este proporional cu cantitatea de medicament n prob.

unui de

Imaginea cromatograf lichide

Figura 12. Schema de lucru a unui cromatograf de lichide Exemplu de utilizare a metodei HPLC Metoda HPLC de dozare a difeturiui i profeturului Metoda este bazat pe folosirea n calitate de reagent pentru formarea perechilor de ioni a anionilor anorganici cu dimensiuni mari, de exemplu percloratul, n concentraii destul de mari (circa 0,1 M). Folosirea n acelai timp unei coloane scurte a permis elaborarea unei metode expres pentru determinarea compuilor nominalizai din grupul alchilizotiuroniului: timpul de echilibrare a coloanei cu faza mobil constituie 5-10 min; durata elurii unei probe la analiza difeturului este de 2,5 min., a profeturului 4,5 min. Condiiile separrii cromatografice: cromatograf Jasco seria 1500, dotat cu detector UV cu lungime de und variabil; coloana Hypersil BDS C18, 4x75 mm, 3 m; lungimea de und a detectorului 222 nm; faza mobil: sol perclorat de sodiu 0,1M, ajustat pn la pH 3,0-3,3 cu acid o-fosforic : acetonitril (96 : 4) debitul 1 ml/min; temperatura coloanei 30C.

n fig. 12. este redat un exemplu de cromatogram a amestecului model. Identificarea compuilor determinai se face prin comparare cu mostrele standard dup timpul de retenie a picurilor cromatografice corespunztoare.

40 30 A, mAU

20 10 0 0 1 2 T, min 3 4 5

Figura 12. Cromatograma soluiei de calibrare, cu coninut de difetur (1) i profetur (2) a cte 6,25 mg/l. Astfel, difeturul manifest un pic, corespunztor cationului de etilizotiuroniu. Liniaritatea curbei de calibrare se pstreaz pentru concentraiile de pn la 100 mg/l (fig. 13). Pe cromatograma profeturului, n afar de picul de baz a substanei active, a fost obinut nc un pic, care posed un timp de retenie, analogic cu cel al difeturului. Acest fapt ne permite s concluzionm, c profeturul conine impuriti de difetur (fig. 2.14.).

3 000 2 500 2 000

100 50 0 0 2 4

80

A, mAU

ur fet i D tur ofe r P

60

S, mAU s

40

1 500 1 000 500 0 0

20
1

0 0 1 2 T, min 3 4 5

20

40

60

80

100

C, mg/l

Figura.13. Curba de calibrare pentru metoda HPLC de determinare a difeturului i profeturului.

Figura 2.14. Cromatograma soluiei de profetur (2) cu coninut de sruri de etilizotiuroniu (1) 2,1% recalculat pentru difetur.

n urma cercetrilor efectuate i rezultatelor obinute se propun urmtoarele metodele de determinare cantitativ a difeturului i profeturului n substane, soluiei difetur 10%, comprimatelor filmate cu difetur i a impuritii de sruri de etilizotiuroniu n profetur.
Pregtirea soluiilor standard. Se cntresc 0,05-0,1 g (mas exact) de mostr standard a compusului determinat (corespunztor difetur sau profetur), se pun ntr-un balon cotat de 50 ml, se dizolv n 30 ml ap i se aduce pn la cot cu acelai solvent (soluia A). 0,5 ml soluie obinut se transfer n alt balon cotat de 50 ml i se aduce pn la cot cu faza mobil (soluia B). Se cromatografiaz 20 l de soluie n condiiile indicate mai sus.

Determinarea cantitativ a principiilor de baz n substanele difetur i profetur i a impuritii de sruri de etilizotiuroniu n profetur. 0,05-0,1g (mas exact) de substan cercetat se prepar analogic mostrei standard i se injecteaz n cromatograf proba n volum de 20 l. La analiza substanei profetur se cromatografiaz i soluia standard de difetur pentru determinarea impuritii de etilizotiuroniu. Coninutul substanei de baz X % n compuii analizai, recalculat pentru substan uscat se calculeaz conform relaiei:
X= Sp m 100 ust ) 100 50 0.5 50100 Sp m 100 ust ) 100 st ( st ( = Sst mp (100 up ) 100 50 0.5 50 Sst mp (100 up )

n care: Sp i Sst ariile picurilor substanelor analizate pe cromatogramele probei cercetate i a soluiei standard; mp i mst masele luate pentru analiz a substanei analizate i a mostrei standard, g; up i ust umiditatea substanei analizate i a mostrei standard, %. Coninutul impuritii de sruri de etilizotiuroniu, recalculat pentru difetur n substana profetur se determin conform aceleai relaii, folosind n calitate de standard soluia de difetur i introducnd n calitate de Sp aria picului impuritii de pe cromatograma profeturului . PARTEA PRACTIC Problema 1. S se efectueze dozarea medicamentelor prin metode fizico-chimice conform tehnicilor de lucru : Dozarea Izoniazidei din comprimate 0,1 i 0,3 g

Dozare. Aproximativ 0,1 g (prob exact) de pulbere triturat de comprimate cu doza 0,lg i 0,05g pentru doza de 0,3 g se trece ntr-un balon cotat cu capacitatea de 100 ml, se dizolv n ap purificat, apoi se completeaz cu acelai solvent pn la cot, se agit. 1 ml de soluie obinut se trece ntr-un balon cotat cu capacitatea de 50 ml, se adaug 1,5 ml de soluie de acid clorhidric 0,1 M, se aduce volumul soluiei cu ap pn la cot i se agit minuios. Se citete absorbanta soluiei obinute la spectrofotometru la lungimea de und 266 nm n cuva cu grosimea stratului 10 mm, utiliznd n calitate de soluie de referin apa, ce conine 3% de soluie de acid clorhidric 0,1 M. Paralel se citete absorbanta soluiei standard de izoniazid. Cantitatea de izoniazid (X) ntr-un comprimat n grame se calcul dup formula:

Ai - absorbanta soluiei analizate; Ao absorbanta soluiei standard de izoniazid; m masa probei de cercetat, g; m0 - masa izoniazidei standard n g, folosit pentru prepararea soluiei standard; b masa medie a unui comprimat, n g. Coninutul C6H7N30 (izoniazid), trebuie s fie corespunztor 0,095g - 0,105g sau 0,285g - 0,315g, recalculat la masa medie a unui comprimat. Adnotare
.Prepararea soluiei standard de izoniazid. Circa 0,10 g (proba exact) de izoniazid (Ph. Eur., FR X p. 558 ) se trec ntr-un balon cotat cu capacitatea 100 ml, se dizolv n 60 ml ap, se completeaz volumul soluiei cu ap pn la cot i se agit. 1 ml de soluie obinut se trece ntr-un balon cotat cu capacitatea 100 ml, se adaug 3 ml soluie de acid clorhidric 0,1 M, se completeaz soluia cu ap pn la cot i se amestec. Soluia se folosete proaspt preparat. Pregtirea apei, care conine 3% de soluie de acid clorhidric 0,1 M. 3 ml soluie de acid clorhidric 0,1 M se trec ntr-un balon cotat cu capacitatea 100 ml , se completeaz volumul soluiei cu ap pn la cot i se amestec. Soluia se pregtete proaspt preparat. Determiarea cantitati a Piridoxin hidroclorur 1 ml din preparat se aduce intr-un balon cotat 50 ml cu ap purificat (Soluia A). n alte trei colbe cotate de 50 ml se pune: I colb 5 ml soluia A; II colb 5 ml soluie standard de piridoxin hidroclorur n III colb 5 ml ap. n toate trei se adaug 2,5 ml soluie de clorur fieric (III) -2,7%, peste 5 min.se aduce cu ap purificat pn la cot. Se msoar absorbana soluiilor la 455 nm , n calitate de soluie de compensare Soluia din colba III. Coninutul piridoxinei hidroclorur n 1ml reparat se calculeaz conform formulei D1x 50 x m X=---------------------D2xVx200 D1 densitatea optic a soluiei de analizat. D2 Densitatea optic a soluiei Standard de piridoxin hidroclorur. V- volumul de soluie piridoxin hidroclorur luat pentru analiz. Coninutul C8H11NO3*HCl n 1ml preparat trebuie s fie nu mai puin 0,0485 nu mai mult 0,0515g. Pregtirea soluiei standard de piridoxin hidroclorur. 0,2 g mas exact piridoxin hidroclorur standard se dizolv cu ap purificat ntr-o colb cotat 200 ml. 1ml solutie standard conine 0,001 g piridoxina hidroclorur. Soluia este valabila 1 lun. Pregtirea soluiei de clorur fieric(III) 2.7%. 2,7 g mas exact FeCl3 se adaug n 1ml acid clorhidric se adaug 5 ml ap purificat se dizolv i soluia se completeaz pin la volumul 100,0 ml. Soluia este valabil 5 zile. Pregtirea soluiei de acid clorhidric . 9.3 ml acid clorhidric concentrat se diyolv n 30 ml ap, soluia se completeaz pin la volumul 50,0 ml.

Dozarea Cloramfenicolului (levomicitinei)

0,1 g preparat se introduce ntr-un balon cotat de 100ml i se dizolv la nclzire, (circa 50 ), se rcete i se aduce cu apa pn la cot. 1 ml din soluia obinut se transfer ntr-un balon cotat de 100ml, se aduce cu apa pn la cot, se citete absorbana soluiei obinute la lungimea de und 278nm. 1%/1cm la 278 nm = 298
0

Dozarea sulfosalazinei 0,150 g preparat (mas exact) se ia ntr-un balon cotat cu capacitatea de 100ml, se dizolv i se aduce pn la cot cu soluie 0,1 mol/l hidroxid de sodiu. se iau 5ml de soluie obinut ntr-un balon cotat cu volumul de 1000 ml, care conine 750 ml ap; se agit, se adaug 20,0 ml soluie 0,1 mol/l acid acetic i se aduce cu apa la cot. Se determin absorbana soluiei obinute i a soluiei standart cu concentraia 7,5 mg/ml sulfasalazin standard, la lungimea de und 359 nm. Calculul coninutului se face dup formula: . 20 . st = --------------------st unde ,, st absorbana soluiei cercetate i a soluiei standard, corespunztor. st concentraia soluiei standard, n mkg/ml Dozarea derivailor furanului Nitrofural. Metoda fotocolorimetric: A. Circa 0,02g preparat (mas exact) se dizolv n 70-80ml ap n balon cotat cu volumul 100ml, la nclzire pe baia de ap la 70-80 0. Dup rcire volumul se aduce cu ap pn la cot. La 0,5ml soluie obinut se adaug 7,5ml ap, 2ml soluie 0,1mol/l hidroxid de sodiu i se amestec. Peste 20min. Se msoar densitatea optic a soluiei obinute ( 1) la fotocolorimetru la lungimea de und circa 450 nm (filtru de lumin albastru) n cuva cu grosimea stratului 3mm. n calitate de soluie de control se folosete ap. Paralel se efectueaz reacia cu 5ml soluie 0,02% furacilin i se msoar densitatea optic (2). Coninutul de furacilin n procente () se determin dup formula: 1 . st . 100 . 0,5 . 100 = ----------------------------2 . . 0,5 . 100 unde , st masa preparatului i standardului n grame. B. Circa 0,75 g preparat (mas exact) se ia ntr-un balon cotat cu volumul 250 ml, se dizolv n 30ml dimetilformamid. Se aduce volumul soluiei cu apa pn la cot, se amestec.5 ml soluie obinut se ia n balonul cotat cu volumul 250ml, se aduce volumul soluiei cu apa pn la cot i se amestec. Se msoar densitatea optic a soluiei obinute la spectrofotometru la lungimea de und 375 nm n cuva cu grosimea stratului 10mm. n calitate de soluie de control se folosete apa. Paralel se determin densitatea optic probei standard de nitrofural. Coninutul de nitrofural n procente(X) se determin dup formula: . st . 100 . 100 = -------------------------- , st . . (100-) unde , st densitatea optic a soluiei cercetate i standard; , st masa preparatului i standardului n grame; coninutul de ap n preparat. Coninutul de C6H6N4O4 la recalculare n substana uscat trebuie s fie nu mai puin de 98 % i nu mai mult de 102,0 %.

Nitrofurantoin (furadonin). Metoda fotocolorimetric: Circa 0,1g preparat (mas exact) se ia n balon cotat cu volumul 100ml, se adaug 50ml ap i 2,5ml soluie 1mol/l hidroxid de sodiu, se dizolv la amestecare, se aduce volumul soluiei cu apa pn la cot i se amestec bine. 0,6ml soluie obinut se ia n balon cotat cu volumul 100ml, se aduce volumul soluiei cu ap pn la cot i fix peste 20 minute, calculnd timpul de la momentul adugrii soluiei 1mol/l hidroxid de sodiu. Se determin densitatea optic a soluiei obinute la fotoelectrocolorimetru n cuva cu grosimea stratului 1cm i cu filtru de lumin violet cu lungimea de und 360nm. n calitate de soluie de control se folosete apa. Coninutul procentual de furadonin () se determin dup formula: . 100 . 100 = ------------------------ , st1% . . 0,6 unde densitatea optic a soluiei cercetate; st1% - indicele de absorbie a probei standard, determinat n aceleai condiii; masa preparatului n grame. Coninutul 8H6N4O4 . 2 la recalculare n substana uscat trebuie s fie nu mai puin de 98 % i nu mai mult de 102,0 %. Metoda spectrofotometric: Circa 0,120g preparat (mas exact) se ia n balonul cotat cu volumul 1000ml, se dizolv n 50ml dimetilformamid. Se aduce volumul soluiei pn la cot. 5ml soluie obinut se iau n balonul cotat cu volumul de 100ml, se aduce volumul soluiei pn la cot cu soluie, care conine 1,8% acetat de sodiu i 0,14% acid acetic anhidru. Se determin densitatea optic a soluiei obinute la lungimea de und 367nm. n calitate de soluie de control se folosete soluia de acetat de sodiu, indicat mai sus. Coninutul 8H6N4O5 n procente se calculeaz dup formula: . 1000 . 100 = ------------------------ , 765 . . 5 unde densitatea optic a soluiei cercetate; 765 indicele de absorbie (st1%) probei standard de nitrofurantoin; Masa preparatului n grame. ninutul de 8H6N4O5 la recalculare n substana uscat trebuie s fie nu mai puin de 98% i nu mai mult de 102,0 %. Furazolidon. Determinarea fotocoliremetric: Circa 0,1g preparat (mas exact) se ia n balonul cotat cu volunul 50ml. Se adaug 30ml dimetilformamid. Dup dizolvarea preparatului se adaug soluie spirtoas 0,05mol/l de hidroxid de sodiu, se amestec, se rcete pn la 200, se aduce volumul soluiei dimetilformamid pn la cot, se amestec. 0,6 ml soluie obinut se amestec n balonul cotat cu volumul 100ml, se aduce volumul soluiei cu ap pn la cot, exact peste 20min, calculnd de la momentul adugrii soluiei spirtoase 0,05mol/l hidroxid de potasiu. Se msoar densitatea optic a soluiei la fotoelectrocolorimetru n cuva cu grosimea stratului 0,5cm i cu filtru de lumin violet cu lungimea de und circa 360 nm. n calitate de soluie de control se folosete apa. Coninutul furazolidonei n % () se calculeaz dup formula: . 50 . 100 = ------------------------ , st1% . . 0,6 . 0,5 unde densitatea optic a soluiei cercetate; s1% - indicele de absorbie a probei standard, se determin n aceleai condiii; masa preparatului n grame.

Coninutul 8H7N3O5 la recalculare n substana uscat trebuie s fie nu mai puin de 98% i nu mai mult de 102,0 %. Dozarea Rutozidei (Rutin) Circa 0,025 g preparat (mas exact) se dizolv n 10ml alcool fierbinte absolut i se filtreaz prin filtrul de sticl 4 . Filtrul se spal cu alcool fierbinte absolut (2 ori cte10 ml). Filtratele unite se trec n balonul cotat cu volumul 100ml, se rcete i se aduce volumul soluiei cu acelai alcool pn la cot. 5 ml soluie alcoolic se ia n balonul cotat cu volumul 50ml i se aduce volumul soluiei cu alcool absolut pn la cot. Se determin absorbana soluiei obinute la spectrofotometru la lungimile de und 375nm (A1) i 362,5nm (A2) n cuva cu grosimea 1 cm. Dac raportul (A1)/(A2) se afl n limitele 0,8750,004, atunci coninutul de rutin n procente ()se calculeaz dup formula: (A2) . 1000 = --------------- , 325,5 . unde 325,5 absorbana specific a rutinei pure (anhidre) n alcool absolut la lungimea de und 362,5nm proba n grame. Dac raportul (A1)/(A2) este mai mare de 0,879, atunci coninutul procentual de rutin () se determin dup formula: 14,60 . (A2) 13,18 .(A1) = -------------------------------- , Coninutul 273016 la recalculare n substana uscat trebuie s fie cel puin de 95,0 %. Dozarea clorhidratului de platifilin din comprimate Metoda fotometriei extractive: Circa 0,1g pulbere ( mas exact) de comprimate triturate se introduc n plnia de separare cu capacitatea 50 ml i se agit cu 2,5ml ap. Apoi se adaug 0,4ml soluie 1% tropolion 000-II, 3 picturi soluie 0,5 mol/l acid clorhidric, 20ml cloroform i se agit coninutul plniei timp de 1min. Stratul de cloroform se trece n balonul cotat cu capacitatea de 200ml. Extracia se repet nc de 4 ori, folosind de fiecare dat 20ml cloroform i agitnd 1min. Extraciile de cloroform se trece n acea balon cotat, volumul soluiei se aduce cu cloroform pn la cot. Se msoar absorbana soluiei obinute la fotoelectrocolorimetru, cu filtrul de lumin violet n cuva cu grosimea stratului 5mm. Soluie de control este cloroformul. Paralel se face proba de control cu 2,5ml soluie de substana standard de hidrotartrat de platifilin. Coninutul de hidrotartrat de platifilin n grame (X) se determin dup formula: 1 . b . 0,002 . 2,5 = ------------------------ , 0 . unde 1 absorbana a soluiei cercetate 0- absorbana probei standard 0,002 coninutul de hidrotartrat de platifilin n 1ml soluia soluiei standard masa preparatului n grame b masa medie a comprimatului n grame

Coninutul 18H27NO5 . 466 trebuie s fie 0,0045-0,0055 , calculnd la masa medie a comprimatului. Dozarea Cianocobalaminei Metoda spectrofotometric. Circa 0,1g preparat ( mas exact) se dizolv n ap ntr-un balon cotat cu capacitatea de 500ml i se aduce volumul cu ap pn la cot. 25ml de aceast soluie se trece n balonul cotat cu volumul 250ml i se aduce volumul soluiei cu ap pn la cot. Se determin absorbana optic a soluiei obinute la spectrofotometru la lungimea de und 361 nm n cuva cu grosimea de 1 m. Coninutul de cianocobalamin n % (X) se determin dup formula: . 500. 10 = ------------------------ , 207 . unde absorbana soluiei cercetate; 207- absorbana specific 11% a cianocobalaminei pure (anhidre) la lungimea de und 361 nm; masa preparatului n grame. Coninutul 63H88N14 la recalculare n substana uscat trebuie s fie nu mai puin de 95,0 %. Dozarea prozerinei Metoda cromatografiei cu schimb de ioni. Circa 0,03 g (mas exact) preparat se dizolv n 10ml ap, se trece prin coloana cu cationi CU-2 de forma H (RH) cu viteza 20-25 picturi pe minut. Apoi coloana se spal cu ap (30-50 ml) pn la reacie neutr dup metiloranj. Lichidul obinut la splare se trece la filtratul bazic i se titreaz din semimicrobiuret cu soluie 0,1mol/l hidroxid de sodiu (indicator metiloranj).
1 ml soluie 0,1mol/l hidroxid de sodiu corespunde la 0,03344 g prozerin.

Problema 2. Efectuai dozarea substanelor medicamentoase utiliznd parametrii indicai n tabel. Parametrii necesari pentru dozarea unor substane medicamentoase. Preparatul Solventul Lungimea de und, nm 261 262 260 388 330 292 266 1%/1

Nicotinamida Acid nicotinic Piridoxal fosfat Clorhidrat de piridoxin Izoniazid

Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Ap Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Soluie tampon fosfat, 7,0 Ap Soluie 0,01 mol/l de acid clorhidric

438 309,7 246,9 201 312,93

Ftivazid Parmidin Sulfat de chinin

Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Alcool etilic Alcool etilic Alcool etilic Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Alcool etilic Alcool etilic Alcool etilic Ap Ap Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Alcool etilic Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Soluie tampon 2,0-4,0 Alcool etilic Ap Ap Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric Ap Ap Ap Soluie 0,1 mol/l de acid clorhidric

267 268 234 278 331 318 318 347 234 278 331 272 270 272 284 285 285 284 285 285 285 255 234 262 260 274

860,0 98,7 125,1 115 112 140,3 880,03 98,00 127,98 530,6 512,3 531,75 50,11 55,62 53,04 40,56 37,01 39,9 39,7 6,30 282,5 197,5 246,9 212,3

Clorhidrat de chinin

Clorhidrat de apomorfin Codein

Fosfat de codein Clorhidrat de morfin Clorhidrat de trimepiridin Clorhidrat de tiamin

Clorhidrat de tiamin Fosfotiamin

Ap Soluie tampon fosfat 7,0

Tehnica de lucru: Calculai masa de substan necesar pentru dozare cu considerarea diluiei respective ( 0,4). Preparai soluia, petrecei detreminarea i calculai coninutul de substan analizat.

Bibliografie
1. 2. 3. 4. 5. Conspectul prelegerilor Farmacopea romn. Ediia X-a Bucureti: Editura medical, 1993.-1315 p. : . 1, I ., .: , 1987. 336 . : . 2, I ., .: , 1989. 400 . Boji M., Roman L., Sndulescu R., Oprean R. Analiza i Controlul medicamentelor.Vol. I. - Cluj-Napoca: Editura Intelcredo, 2003. 495 p.

6. Boji M., Roman L., Sndulescu R., Oprean R. Analiza i Controlul medicamentelor.Vol. II. - Cluj-Napoca: Editura Intelcredo, 2003. 768 p. 7. abilev F.V. Chimie farmaceutic, Chiinu: Universitas, 1994.- 675 . 8. .. .- .: , 1985. 768 .