INTRODUCERE

Pasta de dini este o necesitate pentru viaa cotidian, iar funcia sa principal este de a
cura dinii, precum i pentru decontaminarea i tratamentul inflamaiilor. Diferitele tipuri i
mrci de pasta de dini prezinta, n general, diferite proprieti i funcii. Prin urmare,
estimarea calitii fiecarui brand de pasta de dinti este destul de important pentru a controla
calitatea produselor. Punctul cheie pentru calitatea de pasta de dinti este stabilitatea produselor
n perioada de garanie.
Unele lucrri au dezvluit o instabilitatea caracteristic a pastei de dinti adesea legat
de valoarea pH-ului din pasta de dini.
n materia prim folosit la fabricarea pastei de dini, inclusiv n faz solid ct i n
faz lichid, materialul de legatura este componenta principala. Caracteristicile materialului de
legatura implic o anumit rat de disociere, iar rata de disociere excesiv va duce la o reacia
acido-bazic, ce provoac flatulen i aadar modificarea pH-ului.
Prin urmare, detectarea valorii pH-ului a produselor de past de dini este partea vital
n monitorizarea calitii. Modificarea valorii pH-ului poate influena calitatea pastei de din i.
Companiile naionale i internaionale de past de dini dau o mare atenie acestui fapt, i
consider valoarea pH-ului ca fiind un indicator chimic important.

CAPITOLUL 1. Determinarea pH-ului pe diferite mrci de pasta de dini

prin spectroscopia n infrarou apropiat cu ajutorul chemometriei
Metoda standard pentru a determina pH-ul pastei de dini este utilizarea unui pHmetru. Conform standardului, proba de past de dinti trebuie s fie cntrit exact i

22

amestecat complet. Prin urmare, procedura este consumatoare de timp, dac exist o mulime
de mostre ce urmeaz a fi testate, i pot aparea erori aleatorii. Spectoscopia cu infrarou
apropiat (NIR) permite o monitorizare on-line a procesului de analiz, care s permit o
intervenie rapid atunci cnd se observ unele abateri n produs. n aceast lucrare, NIR, a
fost folosit pentru a prezice valoarea pH-ului probelor de past de dini cu ajutorul metodei
celor mai mici patrate cu ajutorul chemometriei.
Chemometria poate fi in general descrisa ca o aplicare a metodelor statistice in chimie
in scopul de a imbunatati procesul de masurare si de a extrage informatii cat mai utile si mai
complete din datele brute ale masuratorilor fizico-chimice (de regula instrumentale).
Chemometria reprezinta o abordare a determinarilor chimice care se bazeaza pe ideea
masuratorilor indirecte; astfel, masuratorile legate de compozitia chimica a unui set de probe
sunt puse in legtura cu o proprietate de interes a materialului testat, incat aceasta proprietate
poate fi identificata la o proba necunoscuta prin efectuarea unor determinari mai putin
laborioase decat cele efectuate initial asupra setului de probe bine cunoscute.
Partea experimentala
aizeci i nou de probe de past de dini de patru branduri au fost colectate, inclusiv
pasta de dinti pentru aduli- A (20), marca B (19) i C (20), i un set de prob de pasta de dini
pentru copii - D (10).
Toate probele au fost uscate la 100C timp de 48 h, iar apoi s-au macinat timp de 2
min. Probele au fost trecute printr-o sit (0,45 mm) i au fost diluate ntr-un recipient din
sticl, apoi s-au efectuat msurtorile NIR. Fiecare prob a fost scanat de trei ori la 800-2500
nm cu un interval de eantionare de 2 nm cu ajutorul unui Spectrofotometru (Hitachi4100) iar
apoi s-a efectuat media spectrelor.
Msurtorile valorii pH-ului s-au realizat astfel. 5,00 g prob de past de dini a fost
cntrit i transferat ntr-un pahar de 50 ml, se adaug 20 ml ap distilat i se amestec
complet. Apoi pH-ul probei a fost msurat cu un pH-metru, la 20C.
Pentru a testa impactul pretratarii pentru calibrare s-au folosit patru tipuri de metode de
pre-procesare pentru a minimiza influena efectelor fizice i a corecta efectele multiplicative n
analiza NIR.
Aceste metode includ:
-

eliminarea fondului i creterea capacitii de rezoluie;

corecii multiplicative (MSC).

22

Rezultate i discuii
Spectrele celor 69 probe sunt prezentate n Fig. 1a, i poate fi constatat c acestea sunt
destul de aseamntoare. Aceste spectre au o absorbie relativ sczut n regiunea selectat.
Acest lucru este posibil deoarece pasta de dinti contine multe substante anorganice. Exist
schimbri n spectre din cauza distribuiilor de imprastiere i dimensiunea particulelor de
lumin. Spectrele pretratate obinute prin cele patru metode descrise mai sus sunt prezentate n
Fig. 1b-e.

Figura 1. Spectrele originale ( a) i spectrele de corecie (b)

Spectrele de corecie (fig. 1b) arat o diferen mic n comparaie cu originalul su
(fig. 1a), liniile de baz ale tuturor spectrelor au fost mutate aproape de zero, n timp ce
formele sunt asemntoare cu cele originale. Se pare c numai corecia poate elimina influen a
erorilor de instrument, mediul de testare, variaia de lumin.
Tehnici derivate sunt utilizate pe scar larg pentru a elimina trecerea de baz, i ar
putea elimina n mod eficient erorile i de a mbunti capacitatea de sensibilitate i rezoluia.
Pentru alegerea celei mai bune metode de pre-tratament, spectrele complete PLS au
fost dezvoltate cu diferite pre-tratamente.

22

Rezultatele calculate cu utilizarea a patru metode de pretratare diferite sunt prezentate

n tabelul 1.
Tabel 1. Rezultatele metodelor de pretratare

Cel mai bun model din aceast lucrare a fost evaluat n funcie de cea mai mic
rdcina medie ptrat a erorii de calibrare (RMSEC), rdcina medie ptrat eroare de
predicie (RMSEP) i coeficientul de corelaie (r) ntre valorile previzionate i msurate. Prin
urmare, n conformitate cu standardul de evaluare, cu cea mai bun performan pentru
determinarea pH-ului a fost obinut cu MSC pentru spectrele pretratament. S-ar putea ca
distribuiile de imprastiere i dimensiunea particulelor de lumin s fi fost eliminate n mod
eficient n aceast situaie.

Figura 2. Valorile pH-ului

Concluzii
Spectroscopia NIR combinat cu PLS a fost aplicat la determinarea pH-ului probelor
de past de dini.
Pretratarea, prin diferite metode de preprocesare au fost aplicate datelor NIR pentru
evaluarea modelului optim pentru estimarea valorii pH-ului din probele de pasta de dinti, care
reflect calitatea pastei de dinti. Rezultatele au indicat c NIR combinat cu chemometria ar
putea fi folosite pentru a determina valoarea pH-ului pastei de dini.

22

CAPITOLUL 2. Efectul sortimentelor de past de dini cu fluor aupra

remineralizrii i microduritii smaltului dup demineralizarea in vitro
Scopul acestui studiu este de a evalua efectul pastelor de dini cu fluor disponibile
comercial pe remineralizarea smalului
Materiale i metode

22

Bucati de smalt au slefuite cu discuri de carbon (320, 600 si 1200 granulaie) i

mprite aleator n apte grupe. Specimenele au fost supuse unui regim zilnic cuprinznd dou
tratamente de periaj de un minut; unul nainte i unul dup perioada de demineralizare de 6 ore
i 18 ore i remineralizare n saliv artificial. In timpul experimentului grupurile de bucati de
smal au fost tratate cu: past de dini Sensodyne Rapid fluorur (1040 ppm NaF), Colgate
Total (1100 ppm NaF), fluorura Parodontax (1400 ppm NaF), fluorura Sensodyne (1400 ppm
NaF), Pronamel Sensodyne (1450 ppm NaF), Elmex-GABA International (1250 ppm fluorur
F Amine), i Pasta Detartrine fr fluorur (Septodont). Microrezistena suprafeelor (SMH)
fost determinat la momentul iniial i dup 12 zile, utiliznd HMV-2000 (50 g, 490,3 mN, 10
s) (Shimadzu, Japonia).
Rezultate
Toate grupurile de probe tratate cu fluoruri artat creterea SMH, comparativ cu
grupul de control. Pronamel, Sensodyne F, Sensodyne Rapid i Colgate Total au fost
superioare statistic altor paste de dini cu fluor.
Concluzie
Rezultatele obinute n studiul prezent arat c pastele de dinti cu fluor (1450 ppm)
inhiba eficient demineralizarea n condiii experimentale.

Tabelul 2. Pastele de dini testate n studiu microduritii

22

Tabelul 3. Analiza statistic a valorilor obtinute pentru modificarea microduritii

emailului n timpu al 12 zile (p-valoare, Student t-test)

22

CAPITOLUL 3. Determinare prin HPLC a cinci conservani paraben n

probe de saliv i past de dini folosind detecia UV i o coloan scurta
monolitica
Studiul prezint dezvoltarea i aplicarea unei metode HPLC-UV pentru separarea
simultan i determinarea a cinci conservani paraben (metil, etil, propil, n-butil i izo-butilparaben) n probe reale. Toi analiii au fost separai n mod eficient n mai puin de 20 de
minute folosind un simplu amestec H2O:ACN i o coloan scurt monolitica (50mm x 4,6mm)
la un debit de 3.0 mLmin-1. Fenoxietanolul a fost utilizat ca standard intern cromatografic.
Metoda a fost validat pentru liniaritate, limite de detecie i cuantificare, acuratee i precizie.
Saliva i pasta de dini au fost analizate dup pretratarea SPE pe cartue Licrolut RP-18.
Limitele de detecie au variat ntre 0,1 i 0.3mgL -1 n toate cazurile i recuperrile au fost intre
86 i 113%.
Parabenii sunt esteri ai acidului p-hidroxibenzoic i n conformitate cu US Food and
Drug Administration (FDA) sunt conservanii cei mai utilizai pe scar larg n produsele
cosmetice. Practica industrial implic de obicei, utilizarea de amestecuri parabeni i n
anumite cazuri n combinaie cu alte tipuri de conservani pentru a furniza conservare
mpotriva unui spectru larg de microorganisme. n ultimii ani exist dezbateri n curs privind
sigurana i potenialul de riscuri de cancer de la utilizarea produselor care conin parabeni . n
plus, parabenii n produsele de ngrijire personal, cum ar fi apa de gura, reacioneaz cu
clorul din apa de la robinet i produce cantiti semnificative de clorurai. Pe baza acestor
fapte, noi metodologii de analiz pentru controlul eficient al calitii cosmetice lor i a altor
produse care conin parabeni ar fi binevenit. (concentraia maxim permis pentru
concentraia total de parabeni este de 0,8%, iar pentru parabeni simplii este de 0,4%)
Partea experimentala
Probe de saliv umane au fost colectate de la voluntari sntoi care s-au ab inut cel
puin o sptmn de la utilizarea produselor ce conin paraben. nainte de a colectare
donatorii i-au splat gura cu o soluie de 5 g L-1 acid citric (stimulator saliv) i de trei ori cu
ap dublu deionizat. Saliva colectata a fost centrifugata la 2000 rpm timp de 5 min i filtr at.
Un volum de 2 ml de prob a fost centrifugat cu soluie de metanol. Probele au fost tratate n
22

continuare prin SPE, care a fost format de urmtoarele etape: (1) activarea cartu elor cu 1 ml
metanol, (2) prob de ncrcare, (3), splare cu 1 ml ap i (4) eluare prob cu 1 ml metanol.
Soluiile au fost evaporate la sec dup care reconstituite n soluie metanolic de 100mgL -1. i
analizate prin metoda HPLC.
Tipurile comerciale disponibile de saliv artificial contin MP si PP ca i conservani
(www.pharmagel.gr) . Probele au fost diluate in methanol, filtrate dup care analizate.
Pastele de dini au fost diluate in 5 ml de methanol si centrifugate 15 min la 3000 rpm.
100 ml de supernatant a fost diluat n ap deionizat i tratat prin procedeul SPE. Dup eluare
proba rezultat a fost evaporatla sec i reconstituit n 2 ml de metanol.
Metoda HPLC
Analiii au fost separate la o vitez de 3ml/min la temperature mediului ambient dup
care au fost detectai la 254 nm. Amestecul de ap i acetonitril a avut urmtoarele
concentraii pe parcursul experimentului:
-0-5 min : 3-10% ACN
-5-10 min : 10-20 % CAN
-10-20 min : 20 % CAN
Rezultate i discuii
Experimentele preliminare au fost efectuate n scopul de a defini lungimea de und
optim pentru detectarea UV a analiilor. Primele ncercri de a separa analiii au fost efectuate
n condiii izocratice utiliznd SpeedROD (50mm x 4,6mm ID) n toate cazurile. Acetonitril ul
a fost folosit pentru a modifica pH-ul n toate experimentele. Cu toate acestea, n condiii
izocratice izomerii BP nu au fost separati n mod eficient (Rs <1,0) n orice tampon, prin
urmare, au fost testate mai multe elutii.
Fenoxietanolul s-a dovedit a fi un potrivit standard intern, la o concentraie de 100 mgl-1. n
condiiile de gradient de eluie alese, fenoxietanol ul a fost eluat primul i baz-line separat de
MP, fr a provoca interferen cu analiza.
Experimentele preliminare au confirmat necesitatea aplicrii unui pretratament
suplimentar SPE, n vederea mbuntirii cromatogramei. Din acest motiv, a fost adoptat un
protocol SPE simplu, folosind metanol ca solvent de eluare. Cartue cu faz invers de la doi

22

productori diferii au fost examinate i comparate din punct de vedere al analitilor. Nici un
tratament pe baz de SPE nu a fost necesar pentru saliva artificial. Eficiena procedurii
aplicat SPE poate fi vzut clar de la o cromatogram reprezentativ de martor i cu saliv
uman (fig. 3). Rezultate similare au fost obinute pentru cellalt tip de probe, de asemenea.

Fig.3. Cromatogramele reprezentative de martor (a) i (b) saliva uman; 1: fenoxietanol, 2:

MP, 3: EP, 4: PP, 5: n-BP i 6: izo-BP.
Metoda HPLC propus a fost validat n termeni de liniaritate, limite de detecie
(LOD) i cuantificare (LOQ), repetabilitatea (in zile de precizie), precizia intermediar i
precizia totala. Liniaritatea a fost evaluat n soluii standard, saliva uman i pasta de dini.
LD i LOQs n fiecare caz au fost estimate pe criteriul semnal-zgomot (S/N = 3 i 10,
respectiv). Rezultatele includ ecuaiile de regresie, intervale liniare i coeficienii de regresie
sunt prezentate n tabelul 5. Precizia i acurateea metodei HPLC propus n soluii apoase a
fost validat att n aceeai zi i n timpul unei perioade de apte zile. Toate experimentele au
fost efectuate la trei niveluri de concentraie ale analiilor (high-low-mediu-), i anume 1,0, 5,0
i 30.0mgL-1. n zile precizie variat n intervalul de 0.5-2.2% i precizia de zi cu zi, n
intervalul de 0.5-5.8%. Erorile relative au fost acceptabile variind n Gama de -13.0 i +
10,0%, iar -7.0 i + 6,3% pentru cadrul de zile i de zi cu zi experimente, respectiv. Precizia i
acurateea datelor de la aplicarea metodei HPLC pentru analiza salivei umane i past de dini

22

probele sunt cuprinse n Tabelul 6. Acurateea a fost evaluata pentru o gam larg de
concentraii, inclusiv valori ntre limitele de cuantificare i limitele superioare ale metodei de
toate parabeni. Recuperrile la sut au fost acceptabile, n toate cazurile variind ntre 88,0 i
113,0% la saliva uman i ntre 86,0 i 112,0% pentru probele de past de dini. Dup cum s
menionat mai sus, Xerotin saliv artificial a fost analizat fr SPE pretratare. Procentul
recuperri pentru MP i PP variat ntre 95,1 i 108,0% cu RSD fiind <6,6% n toate cazurile.
n scopul de a demonstra n continuare caracterul bioanalitice de acest studiu, am analizat
saliv colectat direct dup tratamentul cu Xerotin n conformitate cu instruciunile de
produs. O cromatogram este prezentat n Fig. 4.
Tabel 5. Linearitatea i limitele de detectare i cuantificare a metodei dezvoltate.

Tabel 6. Precizia i acurateea testului de saliv uman i analiz pastei de dini.

22

22

Fig.4. Cromatogram reprezentnd saliva uman colectata imediat dup tratamentul cu

Xerotin; 1: fenoxietanol, 2: MP i 4: PP.
Concluzii
Metoda HPLC propus ofer o cale simpl i viabil pentru determinarea
conservanilor de tipul parabenilor din probele reale. Combinaia dintre o coloan monolit
scurt i un amestec simplu de eluenti permit separarea tuturor analiilor inclusiv izomerii ni izo-BP. Un protocol simplu SPE determin aplicarea cu succes a metodei dezvoltate pentru
matrici mai complexe, cum ar fi saliva uman, comparativ cu majoritatea metodelor
anterioare, care sunt limitate la produse farmaceutice.

CAPITOLUL 4. Metoda de determinare a florului in pasta de dinti prin

absorbtie moleculara a aluminiului mono florura folosind HR-CS-FAAS
22

Fluorul a fost determinat prin intermediul liniei de rotaie de absorbie molecular a

aluminiului mono florura (AlF) generat n flacr in C 2H2 / N2O la 227.4613 nm folosind ca
sursa continua un spectrofotometru de absorbtie atomica de nalt rezoluie in flacr(HR-CSFAAS). Efectele lungimilor de und ale AlF, rata de combustibil(C 2H2 / N2O) i cantitatea de
Al pe exactitate, precizie i sensibilitate au fost investigate i optimizate. Banda de absorbie
Al-F la 227.4613 nm s-a dovedit a fi linia analitic cea mai potrivit n ceea ce prive te
sensibilitatea i interferenele spectrale. Sensibilitate maxim i o bun liniaritate s-au obinut
in flacara protoxid de azot/acetilena, la un debit de 210 L/h i o nlime a arztorului de 8
mm, folosind 3000 mg/L de Al pentru 10-10000 mg/L de F.
Acurateea i precizia metodei au fost testate prin analiza eantioanelor inte i
materialului de referin a apelor uzate certificate. Rezultatele au fost n concordan cu
sumele certificate, precum i precizia de cteva zile n timpul acestui studiu a fost
satisfctoare (RSD <10%). Limita de detecie i concentratie caracteristic a metodei au fost
de 5,5 mg/L i 72,8 mg/L, respectiv. In cele din urma, s-au determinat concentraiile de fluor
din mai multe probe de past de dini. Rezultatele constatate i date de productorii nu au fost
semnificativ diferite. Metoda a fost simpla, rapida, precisa i sensibila.
Fluorul este un element natural care se gsete din abunden n scoara terestra. Ca
elemente diverse, fluorul este de asemenea necesar n organism dar n cantiti mici. Este
esenial pentru organismul uman ntr-un interval foarte mic de concentraie critic i multe
efecte nocive apar n caz de exces sau lipsa ei. Fluorul este util pentru sanatatea dentara n
doz redus i se adaug la multe produse stomatologice cum ar fi pasta de dinti, apa de gura,
geluri si lacuri ca ingredient activ. Cu toate acestea, expunerea cronic la fluor n cantiti mari
interfereaz cu formarea osoas i pot provoca fluoroza scheletului, deci cantitatea de admisie
a fluorulului este foarte importanta.
Exista numeroase metode pentru determinarea de fluor i formelor florine n pasta de
dini, cum ar fi metodele de analiz, electrozi ion-selectivi, determinarea poteniometric,
cromatografie ionic, metode spectrofotometrice i electroforez capilar n timp ce fiecare
dintre ele au propriile lor dezavantaje. Exist unele studii despre determinarea fluorlui n pasta
de dini cu spectrometrie de absorbie atomic.

22

Partea experimentala
1. Un spectrofotometru de absorbie Analytik Jena ContrAA 700 de inalta rezolutie
Continuum Source Atomice, echipat cu un 300 W xenon lamp cu arc scurt cu o surs
de radiaii continuu a fost folosit pe tot parcursul lucrrii. AlF a fost obtinut n flacara
protoxid de azot/acetilena cu un debit de 210 L/h. Msurtorile de absorbie
moleculare ale AlF au fost efectuate la 227.4613 nm i la o nlimea arzatorului de 8
mm. Numrul de pixeli ai detectorului matrice utilizat pentru detectarea liniei Alf a fost
de 1 (pixel central). Toate msurtorile s-au efectuat de trei ori.
2. Ap de mare puritate s-a obinut de la o osmoza inversa TKA conectata cu un
deionizator. Soluiile stoc de 5000 mg/L a standardelor de fluor si 10,000mg/ L
aluminiu s-au preparat prin dizolvarea fluorurii de sodiu de nalt puritate i azotat de
aluminiu n ap i se dilueaz zilnic corespunztor. Materialul standard de referin a
apei reziduale, care include 10,0 0,1 mg/L de F-, 50,0 0,5 mg/L de Cl-, 7.5 0,08
mg/L de PO4 3-, 5,0 0,05 mg/L de NO3- si 100 1 mg/L de SO4 2-, a fost asigurat de
Standardele LGC. ase marci diferite de probe de past de dini coninnd fluorur de
sodiu i monofluorofosfat de sodiu au fost achiziionate de la pia din Istanbul, Turcia.
3. Soluii standard de fluor, standarde de referinta a apelor uzate unde au fost amestecate
cu aluminiu 3000 mg/L ca molecul element de formare i aspirate in flacra n
condiii optime. Soluie-martor a fost 3000 g/mL Al. Pentru a prepara soluia de pasta
de dinti (sau suspendarea),1 g de prob au fost cntrite cu precizie, dispersate n ap
ultra pur i completat la 50 ml din nou cu ap ultra pur. Amestecul a fost
omogenizat n baie cu ultrasunete la 50 C timp de 30 min i o parte alicot de 5 ml a
fost

adusa la 10 ml cu 6000 g/mL Al. n ciuda unei eficiente omogenizari cu

ultrasunete, probele precipita ncet. Prin urmare, amestecul a fost centrifugat timp de
aproximativ 1 minut inainte de a aspira in flacara. Suspensia a fost diluat la un anumit
nivel, undea fost aspirat ca o soluie fr nici o problem (de exemplu, fr nfundarea
sau depunere n capul arztorului i tubul capilar de aspiraie).
Rezultate si discutii
1. Alegerea moleculei pentru formarea elementului

22

n aceast metod o molecula diatomica se formeaz n flacra intre analit i un element

(molecula de formare a elementului). Elementul este ales astfel nct molecula diatomica care
conine analitul s fie suficient de stabila pentru a rmne n flacra n timpul msurrii, n
timp sensibilitatea sa este suficient pentru detectarea concentraiilor analitului (zis
concentraia moleculei diatomice format din analit) n probele studiate. Se presupune c
speciile diatomice cu energii dissociate mai mari de 500 kJ/mol sunt adecvate pentru acest
scop. Energia de disociere a AlF este 653 kJ/mol. Prin urmare, Al este un element adecvat
pentru determinarea F. n plus, este uor disponibil i ieftin. ALF pot fi format prin
descompunerea AIF3 (AIF3 (g) ALF (g) + F (g)) i / sau recombinare atomilor de Al i F n
faz gazoas (Al (g) + F (g) ALF ( g)).
2. Alegerea standardului de etalonare
Soluia stoc de fluor a fost preparat din fluorura de sodiu de nalt puritate i HF.
Optimizarea a fost fcut cu doi reactivi diferiti de fluor, i nici o diferenta semnificativa nu a
fost gasita intre sensibilitile cele dou standarde. Deoarece HF este riscant pentru sntate,
NaF a fost folosit ca un etalon.
3. Efectul cantitatii de Al asupra sensibilitatii
Linearitatea curbei de calibrare pentru determinarea halogenilor prin MAS a moleculelor
diatomice are nevoie de precauie i efort suplimentar deoarece depinde nu numai de
concentraia de analit, ci, de asemenea, de reactivul de formare a moleculei.

22

Figura 5. Modificarea absorbiei moleculare Alf cu concentraia Al la concentraii

constante F (a) 100 mg/L i (b) 500 mg/L. Barele de eroare reprezint deviaia standard (N: 3).

Figura 6. Spectrul de absorbie al unei probe de past de dini n vecintatea liniilor

moleculare pentru ALF la 227.4613 nm (Al: 3000 mg L-1).

22

Figura 7. Curba de calibare liniara si curba standard etalon. Exemplu: Al:3000 g/mL.
Barele de eroare reprezinta deviatia standard (N:3)
Prin urmare, modificarea absorbanei cu concentraia F a fost investigat la diferite
cantitati de Al simultan. n prezena unei cantitati fixe de Al selectate pentru cuantificarea F n
probele studiate, absorbanta trebuie s se schimbe liniar cu concentraia F ntr-o gam larg.
Altfel, n funcie de concentraia F n eantion, recalibrare ar fi fost necesara la diferite
cantiti de Al. Aa cum se arat n Fig. 6, sensibilitatea maxim pentru Alf a fost ob inut cu
concentraii de Al diferite n funcie de concentraia F. Cnd concentraia de fluor a fost fixat la
100 mg/L, concentraie optim de Al a fost de 3000 mg/L, n timp ce pentru 500 mg/L F,
concentraia cea mai potrivit Al a fost gsit ca 5000 mg/L .
Deoarece se ateptat suspensiile de probe de past de dini sa conine circa 20-30 mg/L de
F, care corespunde la aproximativ 1000-1500g/g F n pasta de dini, 3000 mg/L Al ar putea fi
utilizat n siguran ca si cantitate optima n toate cuantificrile. Dup ce a constatat
concentraie optime de Al, n prezena a 3000 mg/L Al, o curb de calibrare liniar a fost
obinut de pn la 1000 mg/L de F care a fost mult mai mare dect concentra iile F din
soluiile de eantion pregtite pentru analiz (fig. 7). Cu alte cuvinte, 3000 mg/L de Al poate fi
utilizat pentru determinarea F n probe de past de dini fr nici o problem. Preciziile de
masuratori in Fig. 7 au fost destul de satisfctoare.

22

4. Optimizarea conditiilor de flacara

Unul dintre parametrii critici optimizati n metoda este tipul de flacr. Aa cum se arat n
Fig. 8, gradul de utilizare a diferitelor tipuri de flacr pentru determinarea MAS prin Alf a
fost investigat i se constat c metoda este mai stabil i are RSD mai mic atunci cnd este
utilizat in flacara protoxid de azot/ acetilena. Aa cum se arat n Fig. 8, absorbana moleculara
maxim de Alf a fost obtinuta la o rat de combustibil de 210 L/h i o nl ime de 8 mm
deasupra arztorului. Sensibilitatea in flacara protoxid de azot / acetilen la 227.4613 nm a
fost semnificativ mai bun dect cea n flacara aer /acetilen i dup optimizare parametrilori
experimentali / instrumentale, primul este utilizat n mod eficient.

Figura 8. Compararea absorbantelor cu tipuri diferite de flacara. Negru-flacara protixid de

azot/acetilena. Gri- flacara aer/acetilena

Figura 9. Optimizarea parametrilor de flacara cu 3000 mg/L Al si 500 mg/L F.

22

5. Validarea
Limita de detecie pentru determinarea F a fost de 5,5 mg/L bazat pe 3 timpi de la
abaterile standard obtinute de la 10 msurtori repetate ale soluiei-martor (3000 mg/L Al),
aspirate in flcra.
Curba de calibrare a fost liniar pn la 1000 mg/L de F. Performanele analitice ale
metodei i metodele anterioare au fost rezumate n Tabelul 7. Trebuie precizat c
concentraia de F din probele de pasta de dinti au fost n jurul valorii de 30-40 mg/L
nainte aspiraie i pasta de dini este una dintre cele mai bogate probe in F. Nu exist nici
un folos de extindere a curbei de calibrare liniara la concentraii foarte mari F. Prin urmare,
domeniul liniar cu Alf este suficient pentru aproape toate probele pentru determinarea F.
Cu toate acestea, nivelul LOD obinut este suficient pentru a detecta concentraiile de F
n probele de past de dini. De asemenea, caracteristicile curbe de calibrare, precum i
parametrii analitici prezentate n tabelul 7 nu sunt stricte, deoarece valorile lor pot varia de
alt set de experimente de la o zi la alta. Dup optimizarea parametrilor experimentali,
validitatea metoda a fost testat prin analiza unui material de referin certificat (tabelul 8).
Concentraia certificata de F n CRM poate fi determinat n limitele de incertitudine,
precum i concentraiile adugate pot fi recuperate satisfctor (Tabelul 8), care arat c
interferena de la matricea apei reziduale nu este semnificativ n prezena a 3000 mg/L de
concentratii Al i F. Cu toate acestea, acest lucru nu nseamn c F poate fi ntotdeauna
determinat prin utilizarea tehnicii de calibrare liniar n toate probele.
n cele din urm, coninutul F din diferite probe de past de dini au fost determinate
aplicnd aditie standard si tehnici de calibrare liniare. Deoarece probele au fost introduse
direct ca suspensii (sau diluat reziduuri), rezultatele reflecta continutul total de fluorul.
Dup cum se arat n Tabelul 9, rezultatele gsite de cele dou tehnici nu au fost in
concordanta de acord (nivel de ncredere cel puin 95%). Cu toate acestea, n cazul in care
nu avem nici o diferen semnificativ, rezultatele constatate de tehnic aditiei standard ar
trebui s fie mai fiabile din cauza interferenelor non-spectrale provenind din reacii
ncruciate de Al i F cu matrice simultana. Ar trebui precizat c valorile date de ctre
productorii de pe pachetele de pastele de dini sunt doar informative si nu poate fi folosit
ca referin. Prin urmare, dei nu este singurul criteriu pentru exactitatea experimentelor

22

noastre, se observ c rezultatele s-au gsit destul de aproape de valorile date de

productorii.
Florul ionic si legaturile covalente de flour provenite de la dizolvarea mostrelor de
pasta de dinti continand NaF si monoflorofosfat de sodiu poate fi determinat in jurul
valorii date de producatori. Trebuie subliniat faptul ca, florura din monoflorofosfat nu
poate fi determinat cu IC sau ICE pentru ca florura este usor eliberata. In concluzie, dupa
optimizarea conditiilor experimentale, concentratile de flour pot si determinate cu success
prin MAS de AlF de HR-CS-FAAS.
Tabel 7. Compararea indicatorilor de eficacitate pentru determinarea florului prin AAS
flacara folosind diferite molecule

Tabel 8 Determinarea concentratiilor de flour in apa reziduala

22

Tabel 9 Determinarea flourului in diferite probe de pasta de dinti.

Concluzii
Lucrarea demonstreaz c HR-CS FAAS poate fi folosit pentru determinarea fluorului
n probele de past de dini prin msurarea liniei adecvate de absorbie molecular de Alf
generate in flacara protoxid de azot/ acetilena. Acesta este de ncredere, rapid i simplu.
Prin urmare, dup validarea metodei, flacara protoxid de azot/acetilena a devenit
importan pentru determinarea F prin AlF de HR-CS-AAS. Avantajele cele mai
remarcabile ale metodei : Al este ieftin i o molecul uor accesibila de formare a unui
element in flacr i folosit ca un atomizor n acest studio, este un atomizor mai ieftin
dect un cuptor de grafit, care este folosit pe scar larg n studiile anterioare. Cu toate
acestea, aceasta este o metod indirect i ca alte studii similare, exist ali parametric care
pot s fie optimizate, concentratiile de molecule.. Prin urmare, n caz de orice diferen
dintre rezultatele gsite de calibrare liniar i tehnici standardizat, acesta din urm este
mai fiabile din cauza motivelor menionate mai sus.

22

CAPITOLUL 5. Eficacitatea antimicrobienilor naturali n past de dini

mpotriva biofilmelor orale
Introducere
Formarea biofilmului este un proces natural n mediul bucal, dar trebuie s fie controlat
prin periaj regulat pentru a preveni dezvoltarea cariilor i bolilor periodontale.
Tipurile de past de dini obinuite conin o combinaie de fluoruri i detergeni, n
principal dodecil sulfat de sodiu pentru a spori eficacitatea perieri i prevenind astfel bolile.
Prin urmare, o varietate de sortimente de past de dini i ap de gur cu propriet i
antibacteriene au fost dezvoltate i evaluate in vitro i in vivo. Antimicrobieni comuni adugai
sunt triclosan, fluorur de staniu, clorura de cetil piridiniu i clorhexidin.
In ciuda eficacitaii multor tipuri de past de dini cu proprieti antibacteriene, exist o
dorin tot mai mare a societii s se bazeze pe compui naturali de ngrijire a snt ii.
Parodontax1, de exemplu este o past de dini pe baz de plante cunoscute, care conine
bicarbonat de sodiu i mai multe componente pe baz de plante, care au proprietati
medicinale: extract de Chamomilla cu proprietati anti-inflamatorii, extract de echinaceea ce
stimuleaza imunutatea, extractul de salvia scade sngerarea gingiilor, extractul de myrrha
este un antiseptic natural i extractul de Mentha piperita este anti-septic, antiinflamator i
antimicrobian. Chitosan este un alt compus natural derivat din chitina bio-polizaharid i are o
structur de poli carbohidrat cationic.
Chitina este al doilea cel mai abundent biopolimer n natur i pot fi gsite n
exoskeletons de artropode, cochilii de crustacee i aripi de insecte. Chitosan-ul prezinta
activitate antimicrobian si nu este toxic. Aplicaii ale activitii antimicrobiene a chitosanilor
sunt n prezent investigate n ambalarea produselor alimentare, textile si industria cosmetic i
n medicin, inclusiv stomatologie.
Chitosanul are proprieti antibacteriene mpotriva tulpinilor bacteriene orale, precum
i capacitatea de a adsorbi i modifica proprietile fizico-chimice ale filmelor salivare (sau
''pelicule''), ceea ce sugereaz posibilele efecte asupra redepunerii placii bacteriene dup
utilizare. Datorit structurii sale cationice, cu toate acestea, se poate pune ntrebarea dac

22

aceste proprieti sunt pstrate ntr-o past de dini. Recent, cu toate acestea, primele paste de
dini care conin chitosan au fost puse la dispoziie pe pia prin intermediul internetului
Scopul acestei lucrri a fost de a evalua in vitro valorile eficacitii antimicrobiene a dou
formule de past de dini care conin substane antimicrobiene naturale (extracte din plante i
chitosan) n ceea ce privete distrugerea bacteriilor n biofilme orale de diferite compoziii i
starea de dezvoltare. In plus, valorile eficacitii antimicrobiene ale acestor antimicrobiene
naturale au fost comparate cu standardul pentru combaterea chimic a biofilmelor orale:
clorhexidin.
Materiale si metode
Supernatante de pasta de dinti, clorhexidin i soluii tampon
Pentru acest experiment s-au folosit 2 mrci diferite de pasta de dini pe baz de plante i
anume Parodontax fr fluor si Chitodent, acestea avnd la baz chitosan. Pentru expunerea
unui biofilm, un supernatant de past de dini a fost preparat prin dizolvarea a 25% din
greutatea din pasta de dinti n tampon de adeziune, care a fost centrifugat pentru a ndeprta
particulele abrazive. Corsodyl, cu un coninut de clorhexidin 0,2% a fost utilizat ca martor
pozitiv i negativ.
Inocul bacterian
Actinomyces naeslundii i Streptococcus oralis au fost utilizate pentru biofilmele cu
dubl coaderare de specii. A. naeslundii a fost cultivat n bulion Schaedler suplimentat cu
0,01 g / l hemin n condiii anaerobe i S. oralis n bulion Todd Hewitt n aer nconjurtor la
37 C. Tulpinile au fost precultivate ntr-o arj de cultur peste noapte i inoculate ntr-o a
doua cultur care a fost cultivat timp de 16 h, recoltate prin centrifugare timp de 5 minute la
6500r/m i splate de dou ori cu tampon de adeziune. Pentru a rupe lanurile bacteriene sau
agregate, bacteriile au fost sonicate intermitent prin rcire pe ghea timp de 30-40 s la 30W.
Aceast procedur nu provoaca liza celular. Bacteriile au fost diluate pn la o densitate
celular de 1 x 108 / mL pentru A. naeslundii i 3 x 108 / ml in tampon aderent cu mediu de
cretere de 2%. Suspensia de S. oralis a fost suplimentat cu 1,5 mg / ml saliv uman.

22

Saliva uman a fost colectat de la doi voluntari sntoi. Saliva proaspt a fost
colectat dimineaa. Cele dou probe de saliv au fost amestecate i diluate 1: 1 cu tampon de
adeziune, reducnd concentracia bacterian la 1.5 x 108 / mL fa de 3 x 108 / mL. Pentru o
cretere, n stare proaspt saliva a fost centrifugat, n scopul de a elimina bacteriile, celulele
tesutului, timp de 10 min la 10.000 x g la 10C. Ulterior, saliva fost sterilizat prin filtrare
folosind un filtru de 1,2 mm, urmat de un filtru de 0,45 mm. Saliva a fost diluat la 10% n
tampon de adeziune, pentru a obine o soluie cu vscozitate care poate fi utilizat n camera
de curgere a placii paralele.
Formarea biofilmului i expunerea la substane antimicrobiene
n primul rnd un film de

saliva condiionat s-a format pe lamele de sticl a

microscopului. n acest scop, au fost colectate salive de la cel puin 20 de voluntari sntoi de
ambele sexe n pahare rcite cu gheaa. Saliva a fost comasat, centrifugat i tratat prin
adugarea de fluorur de fenilmetilsulfonil la o concentraie final de 1M ca un inhibitor de
proteaz, pentru a inhiba denaturarea proteinei salivare. Soluia a fost din nou centrifugata,
dializat peste noapte la 4C mpotriva apei demineralizate, i liofilizat pentru a stoca n mod
eficient saliv n form neschimbat pn cnd este nevoie. Pentru experimente, saliva
liofilizat a fost dizolvat la o concentraie de 1,5 mg / ml n tampon de adeziune. Lamele de
sticl au fost incubate n aceast saliva reconstituit timp de 16 ore la temperatura camerei.
Biofilmele folosite n acest studiu au fost biofilme cu dublu strat de bacterii de coaderare i
multi-specii de bacterii orale din saliva proaspt colectat.
Pentru biofilmele cu mai multe specii, adeziunea bacterian iniial a salivei umane a fost
realizat prin curgere cu o diluie de 50% din saliva timp de 2 ore i a continuat, atunci cnd
este cazul, de un flux de 16 h, cu o soluie 10% de saliv sterilizat prin filtrare.
Trei camere de flux au fost operate simultan, pentru a permite evaluarea biofilmelor nainte i
dup expunere, precum i dup redepunerea de bacterii din saliva.
Dup cretere, expunerea antimicrobian i / sau redepunerea bacterien, una dintre cele trei
camere de curgere a fost deconectat i biofilmele au fost colorate timp de 30 min.. Opt seturi

22

de imagini au fost obtinute cu ajutorul unui laser de scanare microscopic.

Figura 10.

Camera cu flux paralel cu placa format din placa de baza, distanier, placa

superioar. Spatiul deschis din camera de curgere este proiectat s dein un substrat (sticl).
Senzori de temperatur i elementele de nclzire sunt ataate de asemenea. (B) proiectul de
baz al ntregului sistem de debit utilizat, prezentat cu o singura camer conectata.

22

Analiza statistic
Analiza statistic i compararea diferitelor grupuri au fost efectuate cu probe pereche
pentru compararea nainte i dup expunerea la tampon sau agent antimicrobian i eantioane
independente pentru comparaii ntre diferite modele de biofilme.

Rezultate
Biofilmelor iniiale
Volumul total al biofilmelor iniiale cu strat dublu dup 2 ore de aderen ridicat, au
msurat n medie, 2,4 1,0 m3 / m2 avnd o viabilitate mare (95%) (Fig. 11). Volumele
biofilmelor dup 2 ore de aderen iniial cu bacteriile din saliva au fost n jur de 0,2 m 3 /
m2.
Clorhexidin i supernatantele de past de dini pe baz de ierburi i chitosan au eliminat
semnificativ (p <0,05) mai multe bacterii dect probele tampon (Fig. 12), fr diferene
semnificative n ndeprtarea clorhexidinei.

22

Figura 11. Volumul total al biofilmelor (m3 / m2) din biofilme orale pe sticla acoperite cu
saliv: (A), biofilme iniiale cu strat dublu dup 2 ore, (B) biofilme cu strat dublu dup 16 ore
(C) Biofilmele mature dup 16 ore

22

Figura 12. Eliminarea in procente dupa 2 ore, biofilmele vechi, iniiale, dupa 16 h cu dubl
specie i dupa 16 h

Figura 13. Scanare cu laser imagini suprapuse microscopic (A) dup 16 ore (B),dup 2 ore

22

Volumul total al biofilmelor cu dubl strat dup 16 ore a ajuns la 10,9 3.4 m3 / m2,
care este de aproximativ patru ori mai gros dect dup 2 ore de cretere.
Biofilme cultivate din saliva au un rezultat semnificativ mai mic 2,1 0,8 m 3 / m2) dect
biofilmele cu start dublu.
Toate biofilme dup 16 h de cretere (Fig. 11) au fost extrem de viabile inainte de
expunerea la substanele antimicrobiene naturale i clorhexidinei.
Clorhexidina a fost semnificativ mai eficient n ndeprtarea cu strat dublu n comparaie cu
soluia tampon ( Fig. 12) dect cele dou supernatante de past de dini.
Aderarea bacteriilor n timpul fazei de redepunere a fost observat numai dup expunerea
la clorhexidina. De reinut c bacteriile apar de culoare glbui, imediat dup expunere ca
urmare a suprapunerii cu bacterii roii i verde-fluorescente prezente pe grosimea biofilmului.
Discutii
n aceast lucrare, s-a discutat despre eficacitatea antibacterien a dou paste de dini care
conin componente antimicrobiene naturale n raport cu eficacitatea clorhexidinei, acesta fiind
standardul pentru biofilmul oral chimic (sau 'placa') de control.
Eficacitate antibacterian a fost evaluat mpotriva biofilmelor cu statut de maturizare diferite,
cultivate timp de 2 sau 16 ore i a cuprins doua colonizari iniianle de A. naeslundii i S.
oralis, ale suprafeelor emailate in vivo, inclusiv biofilmele cu multi straturi cultivate timp de
16 de ore de la saliv.
Este cunoscut faptul c clorhexidin influeneaz compoziia biofilmele orale.
Rezultatele noastre arat c

bacteriile vii din biofilmele cu dublu strat sunt

mai mici

procentual dect n biofilme cu mai multe straturi, care ar putea explica printr-o eficacitate
mai mare ucidere clorhexidinei cu privire la actinomicete. Clorhexidina i chitosanul au
acelai mecanism de aciune antimicrobian, att ca perturba membrana celulelor bacteriene,
ceea ce duce la moartea celulei.
Mecanismele de activiti antimicrobiene ale componentelor din Parodontax sunt
neclare. Aderarea bacteriilor n faza de redepunere a biofilmele au fost observate numai dupa
expunerea la clorhexidina i pe baz de chitosan ntr-un biofilm cu mai multe straturi.
Probabil, varietatea diferitelor tulpini bacteriene i specii n saliv ofer posibilitatea
bacteriilor de a adera la un biofilm expus, n timp ce cele dou tulpini care constituie biofilmul

22

cu strat dublu nu sunt atrase de aceste biofilme. Aceasta subliniaz avantajul major, i n
acelai timp dezavantajul utilizrii biofilmelor cu mai multe specii cultivate din saliv.
Datorit numrului mare de tulpini i specii, experimentul devine mai puin definit dect
atunci cnd se lucreaz cu un biofilm cu strat dublu, dar pe de alt parte, biofilmele multi
specii sunt o mai bun reprezentare a biofilmelor ce apar clinic. In plus, a crescut redepunerea
de bacterii dup expunerea la aceste dou substane antimicrobiene
Acest lucru sugereaz c biofilmele mature pot aciona ca un rezervor pentru
antimicrobieni orali care s permit uciderea prelungit, n timp ce biofilmele initiale sunt
evident prea subiri pentru a aciona ca un rezervor eficace.

22

CAPITOLUL 6. O metod rapid i precis pentru determinarea fluorului

total i solubil n pasta de dinti folosind spectrometrie de absorbie molecura
cu cuptor de grafit de inalta rezolutie i compararea acestuia cu tehnici
stabilite
Introducere
Beneficiile fluoruri n prevenirea cariilor dentare au fost discutate controversat de muli
ani, dar sunt n general acceptate n zilele noastre. Cantiti mici de fluoruri se adaug n ap,
alimente i n special n pastele de dini i gelurile dentare.
Pastele de dini sunt amestecuri multicomponente cu diferite componente anorganice i
organice. Ele conin ageni de lustruire i ndulcire , arome, detergeni, conservani i diferite
ingrediente active. Printre acestea sunt plcile de inhibare, ageni antiflogistici i fluoruri ca si
ageni anti-carii eficiente. Astzi, mai mult de 95% din pastele de dinti contin fluoruri pentru
prevenirea cariilor.
Printre fluorurilor folosite sunt fluorura de staniu (SnF 2), fluorur de sodiu (NaF),
monofluorofosfat de sodiu (Na2PO3F), i fluorur de amin, care au diferite proprieti chimice
i biologice.
Fluorura de staniu a fost prima fluorura utilizat n pasta de din i n SUA nc de la
sfritul anilor 1960. Fluorura de staniu i fluorara de sodiu sunt foarte solubile n ap i
furnizeaz fluorura bio-activa. Fluorurile amine asigura o protecie eficient bacterian
reducnd placa de bacterii productoare. S-a artat, totui, c abrazivele utilizate n pasta de
dini pot avea o influen dramatic asupra stabilitii fluorurii disponibil n de past de dini.
Aceste probleme de stabilitate au aprut datorit unei schimbri de solubilitate n apa a
fluorurii la cele insolubile fiind nsoite de pierderea nedorit a efectului terapeutic al pastei de
dini. Din acest motiv, n special pentru pastele de dini pe baz de carbonat de calciu ,este
adugat monofluorofosfatul de sodiu ca fluorur de rezerva. Monofluorofosfatul de sodiu este
solubil i disociaz de cationii de sodiu i monofluorofosfat de anioni PO 3F2- unde fluorul este
legat covalent. n timpul depozitrii monofluorofosfatul de sodiu poate hidroliza la ionul fosfat
i elibera ioni de fluor. Deoarece diferena dintre concentraiile toxice i terapeutice ale
fluorurii este destul de mic, o metod precis i rapid pentru determinarea fluorurii ionice
22

dizolvate i totale n pasta de dini este esenial pentru controlul calitii de ingrediente active,
pentru evaluarea proprietilor de depozitare a pastei de dini, i pentru conformitatea cu
specificaiile cerinelor de sntate pentru consumul de fluor zilnic. n primul rnd,
formulatorul i productorul sunt interesai ca fluorura total sa poata controla cantitatea
introdus ntr-o anumit formul.
n al doilea rnd, eficiena prevenirii cariilor depinde de fluorura liber bioactiv
disponibil n suspensia pastei de dini, ceea ce necesit determinarea fluorurii ionice (liber
sau bio-activ) i determinarea fluorurii solubil.
Cromatografie ionic este, de asemenea, utilizat pe scar larg oferind posibilitatea de a
determina mai muli ioni n aceeai prob, ns, cu dezavantajul costului de achiziie mai mare
i o rat de eantionare mai mic. In plus, aceast analiza necesit probe fr particule care
efectueaz o filtrare printr-un filtru 0.15-0.45 M obligatoriu. O alt problem este faptul c
ionul de fluor este slab reinut pe coloane comune i este eluat foarte aproape de "golurile" cu
muli elueni; componentele matricei, cum ar fi bicarbonatul poate provoca tulburri.
Se recomand utilizarea de detectare a conductivitii pentru determinarea fluorurii prin
cromatografie ionic.
Acidul clorhidric concentrat se adaug pentru a reduce pH-ul la 2-3 i probele sunt
nclzite pentru a hidroliza compui cu fluor; HF este eliberat i navele trebuie s fie nchise
imediat pentru a evita pierderea de analit. Exist, de asemenea metode descrise pentru
determinarea simultan a fluoruri i monofluorofosfat de sodiu prin CI. Timpul de eluie a
acestui element este puternic dependent de pH. pH-ul prea sczut va avea ca rezultat o coeluie de fosfat i monofluorofosfat de sodiu i pH-ul prea mare va crete timpul de retenie i
prin urmare, reducerea frecvenei de eantionare.
O abordare complet diferit pentru determinarea ionic i covalent a fluorurii n pasta de
dini a fost propus de Gomez i colab. n 1992. Metoda a fost bazat pe formarea de
molecule gazoase ntr-o flacr de protoxid de azot/acetilen. Investigaiile cu privire la
posibilitatea de a stabili nemetalele, cum ar fi fluorul, folosind benzile de absorb ie ale
moleculelor biatomice lor formate n flcri i cuptoare au fost deja efectuat n 1970 i
nceputul anilor 1980. n toate aceste studii spectrometrele de absorbie atomic convenionale
echipate cu lmpi cu catod tubular i / sau au fost folosite cu lamp de deuteriu.

22

Rezoluia relativ sczut a acestor spectrometre i posibilitile de corecie de fond limitate

a dus la o varietate de probleme, astfel c aceast abordare nu a gsit nici o aplicare mai larg.
Aceast situaie sa schimbat dramatic odat cu introducerea de echipamente disponibile n
comer pentru spectrofotometria atomica de absorbtie cu surs continu de nalt rezoluie
(HR-CS AAS), care este n egal msur aplicabil pentru msurarea spectrometrie de
absorbie molecular, cu rezoluie nalt i o corecie de fond simultan.
Scopul prezentei lucrri a fost de a investiga aplicabilitatea metodei optimizate pentru
determinarea rapid i precis a fluorului total i solubil n probe de past de dini de diferite
origini.
Partea experimentala
Spectrometria de absorbie molecular a GAF(florura de galiu)
Un model de surs continu de nalt rezoluie de spectrometru de absorbie atomic
echipat cu un pulverizator transversal nclzit. Instrumentul utilizeaz o lampa cu xenon scurt,
funcioneaz ntr-un mod hot-spot, ca surs de radiaie continu, un monocromator dublu de
inalta rezolutie constnd dintr-o pre prism i un monocromator.
Toate msurtorile au fost efectuate la 211.248 nm cu ajutorul unui cuptor de grafit.
Platformele au fost acoperite cu carbur de zirconiu ca modificator permanent.
Reactivi i agenti
Ap de mare puritate obinut printr-un sistem de osmoza inversa i purificat cu un
schimbtor de ioni. Standardul de fluor a fost elaborat prin diluarea unei 1,00 gl -1 soluie stoc
(fluorura de sodiu n ap). Solutiile de Pd, i Zr au fost de asemenea realizate prin diluare cu
ap pornind de la soluiile standard disponibile n comer, 10 gl -1 Pd dizolvat n 15% HNO3 i
1 gl-1 Zr dizolvat n HCI 2M.Ga reactiv de 10 gl -1 a fost preparat prin dizolvarea Ga (III)
hidrat de nitrai din ap. n cazul n care orice diluie a probei a fost necesar apa pur a fost
folosit ca diluant.

22

Se utilizeaz programul de temperatur dat n tabelul 10, tubul a fost condiionat de

msurarea alternativ a soluie martor i un standard de 20 gl-1 F.
Tabelul 10. Programul de temperatura pentru acoperirea platformei cu carbora de zirconiu
prin intermediul a trei injectii 50l fiecare .

Programul de temperatur utilizat pentru determinarea fluor n pasta de dini este

prezentat n tabelul 11, iar soluiile, volumul i concentraia utilizate pentru determinrile lor
sunt date n tabelul 12, soluia martor a coninut toi reactivii indicai n tabelul 12 cu proba
sau standardul nlocuit cu ap. Condiiile au fost modificate doar uor n comparaie cu cele
publicate anterior. Paladiu i zirconiu i soluia galiu necesar pentru formarea moleculei au
fost injectate secvenial automat

n probe i primele patru etape ale programului de

temperatur n tabelul 11 au fost executate. Scopul acestui pretratament a fost de a reduce

galiu de metal pentru a face mai eficient pentru formarea moleculei GAF i s elimine
coninutul de acid al Pd/Zr pentru a evita pierderile de analit n form de HF n etapele de
uscare i de piroliz . Dup aceast etap a fost introdus o rcire nainte de injectare a probei
i celelalte soluii modificatoare, i restul programului de temperatur din tabelul 11 a fost
executat, folosind o piroliz i vaporizare la o temperatur de 550 C - 1550 C. Pentru o
performan automat a pretratrii se efectueaz neaprat ,rcirea pentru a putea msura
analitul.
Tabelul 11. Programul de temperatura a cuptorului de grafit pentru pretratarea, formarea
moleculei GAF i vaporizare.

22

Tabelul 12. Volumul i concentraia soluiilor ale reactivul Ga folosite pentru pretratare
termic i injectarea mpreun cu eantionul.

O alt schimbare n comparaie cu condiiile optimizate anterior a fost utilizarea

NH4H2PO4 ca un modificator suplimentar. Motivul principal este de a crea o matrice similar
pentru toate probele, inclusiv cele care nu conin MFP.
Probele i pregtirea probelor
Dou eantioane de pasta de dinti care au fost pregtite de ctre productor special pentru
aceast anchet i patru paste de dini disponibile pe pia, care au fost achiziionate de la un
supermarket local, au fost investigate n aceast lucrare. Cele dou paste de dini special
pregtite, Colgate Total Colgate Max i au fost furnizate de ctre productor n trei forme, care
conin concentraii de fluor diferite.
Concentraia standard menionat ca 100%, iar aceleai probe au fost preparate, de
asemenea, cu 30% mai mic (70%) i 30% mai mare (130%) coninut de fluor. De i
productorul nu a informat coninutul de fluor din aceste probe, s-ar putea presupune c
"concentraia standard de 100%" este acelai care se gsete n toate pastele de dini
disponibile pe pia din acest productor. Aceste probe au fost depozitate timp de 1 an nainte
de msurarea fluorului total i dizolvate n scopul de a investiga influena acestui parametru de
continutul de fluor. Diferitele componente de fluor ale acestora i concentraiile stabilite sau
asumate sunt enumerate n tabelul 13. Pentru determinarea fluorului total, aproximativ 1020mg de prob de pasta de dinti a fost cntrit cu precizie n cupe de eantionare din
polipropilen

i umplute pn la 50 ml cu ap deionizat. Pentru a crete dizolvarea

componentelor solubile matricei cupe de prob au fost plasate ntr-o baie cu ultrasunete timp
de aproximativ 5 minute. Suspensiile de pasta de dinti au fost diluate cu un factor de 10 cu ap
deionizat fr filtrare i fr ajustarea pH-ului.

22

Pentru determinarea fluorului solubil, probele au fost centrifugate timp de 5 minute cu

2700 rpm / rcf i supernatantul a fost utilizat pentru investigaii suplimentare.
Tabelul13. Speciile de florura din pastele de dinti investigate si concentratiile lor specific
de florura.

Cromatografia gazoasa
Toate determinrile au fost realizate folosind un cromatograf gazos GC-MS 2010 Plus
echipat cu injectie O coloan capilar RTX-5MS a fost folosit pe tot parcursul. Analizele au
fost efectuate n modul de scanare i ionizare electronic. Condiiile cromatografice au fost
urmtoarele: temperatura injectorului 280 C, interfaa 200 C i programul de temperatura
cuptorului a coloanei a fost de: 35 C (2min) i o ramp de 20C
Reactivi i soluii
Reactivii folosii au fost Diclor-dimetil 99 % , fluorur de sodiu suprapura, acid clorhidric
37%. Fluorura de sodiu a fost uscat la 100 C timp de 2 ore nainte de prepararea solu iilor
standard. O soluie stoc NaF cu 0,50 gl-1 F a fost preparat prin dizolvarea fluorurii de sodiu n
ap deionizat.

Prepararea probelor

22

25mg de past de dini a fost cntrite cu precizie ntr-un tub de 15ml de teflon; 10 ml de
ap deionizat, 0,3 ml acid clorhidric preparat iar tubul a fost nchis ermetic. Proba a fost
lsat timp de 10 min timp de reacie, n cazul n care fibra a fost plasat n partea superioar
pentru nc 10 min de timp de extracie. In timpul reaciei i extrageri, probele au fost agitate
continuu cu un agitator magnetic. Ambele etape ale procedurii au fost efectuate la temperatura
camerei. i s-au adugat 30 ml de Diclor-dimetil, iar tubul a fost nchis ermetic. Proba a fost
lsat timp de 10 min timp de reacie, n cazul n care fibra a fost plasat n partea superioar
pentru nc 10 min de timp de extracie. In timpul reaciei i extragerea, probele au fost agitate
continuu cu un agitator magnetic. Ambele etape ale procedurii au fost efectuate la temperatura
camerei.
Rezultate i discuii
Spectrometrie de absorbie molecular
Analiza probelor de past de dini
Principalul interes al acestei anchete a fost de a dezvolta o metod simpl de determinare
a fluorurii totale si a dizolvat n pasta de dini independent de forma sa chimic (ionice sau
covalente). Printre fluoruri care sunt de obicei utilizate n pastele de dini, adic, NaF.
Fluorurile amine i monofluorofosfat de sodiu, primul a fost folosit pentru calibrare, al
doilea descompune uor la temperaturi ridicate, iar pentru a simula prezena MFP, NH4H2PO4
a fost adugat la toate soluiile ca un modificator suplimentar; au existat diferene
semnificative n sensibilitatea pentru cei trei compui i au fost observate n aceste condiii.
n scopul de a investiga influena timpului de depozitare a probelor cu privire la aceste
valori probelor de past de dini Colgate Total Colgate Max i care au fost date de ctre
productor cu concentraii de fluor diferite, i au fost depozitate timp de 1 an nainte de
analiz. n plus, patru probe disponibile n comer, care au fost presupuse a fi relativ proaspete,
au fost analizate pentru coninutul lor total i dizolvat. Rezultatele obinute prin spectrometrie
de absorbie molecular GAF sunt prezentate n tabelul 14. Toate rezultatele sunt n
concordan cu valorile declarate de productori.
Tabelul 14. Concentratiile totale si dizolvate gsite n probele de pasta de dinti investigate
folosind HR-CS MAS.

22

Ambele standarde de control intern al calitii msurate dup probele de pasta de dinti
sunt, de asemenea, n conformitate cu concentraiile ateptate, demonstrnd stabilitate de
calibrare dup analiza probelor reale cu matrice. Rezultatele din tabelul 14 demonstreaz, de
asemenea, independena metodei dezvoltate pentru determinarea total a fluorului de tipul de
specii de fluor, chiar i dup o perioad de depozitare foarte mult timp.
Linearitatea metodei a fost studiat pentru domeniul de calibrare pe baza parametrilor de
curba analitic, au fost determinate ca-0.25mgl 1 i-0.80mgl 1, respectiv. Aceasta corespunde
unei LOQ din pasta de dini de aproximativ 320 Gl -1, bazat pe o masa probei de 25 mg.
Rezultatele au aratat un coeficient bun de corelaie (R) de 0.998, iar repetabilitatea ntregii
proceduri, inclusiv proba pretratare, i determinare a fost ntre 1% i 3%, bazat pe trei
determinri repetitive. Rezultatele determinrii fluorului total n probele de past de dini prin
GC-MS sunt prezentate n Tabelul 15, coloana 2.
Tabelul 15 Compararea valorilor gsite pentru fluorur total folosind HR-CS GF MAS i
GC-MS, si fluorului dizolvat folosind HR-CS GF MAS i a florukui ionic (bio-activ) folosind
F-ISE.

22

Concluzii
Rezultatele obinute pentru coninutul de fluor din pasta de dinti folosind procedura HRCS GF MAS propuse sunt n concordan cu coninutul declarat de productori, precum i,
cele mai multe dintre rezultatele obinute cu o metod independent GC-MS. Ambele metode
par a fi comparabil cu respect de acuratee i precizie. Metoda propus nu necesit nici o
pregtire semnificativ i poate fi uor automatizat.
Nici o diferen n sensibilitate nu a fost gsit pentru diferiii compui cu fluor care sunt
de obicei adugai

n diferitele tipuri de past de dini. Din cauza lipsei unor metode

alternative rapide i sigure determinarea fluorului n diferite matrici este n prezent limitat n
principal la determinarea fluorurii ionice.

22

Bibliografie
1. Method development for the determination of fluorine in toothpaste via molecular
absorption of aluminum mono fluoride using a high-resolution continuum source nitrous
oxide/acetylene flame atomic absorption spectrophotometer, Nil Ozbek, Suleyman Akman,
Talanta 94 (2012) 246-250;
2. Whitening toothpastes: A review of the literature, Andrew Joiner , Journal of dentistry 38s
(2010) e17-e24;
3. Efficacy of natural antimicrobials in toothpaste formulations against oral biofilms in vitro,
Martinus J. Verkaik, Henk J. Busscher , Debbie Jager, Anje M. Slomp, Frank Abbas, Henny C.
van der Mei, Journal of dentistry 39 (2011) 218-224;
4. LC-determination of five paraben preservatives in saliva and toothpaste samples using UV
detection and a short monolithic column, Anastasia Zotou, Ioanna Sakla, Paraskevas D.
Tzanavaras, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 53(2010) 785-789;
5. A fast and accurate method for the determination of total and soluble fluorine in toothpaste
using high-resolution graphite furnace molecular absorption spectrometry and its comparison
with established techniques, Heike Gleisnera, Jrgen W. Einaxb, Silvane Morsc, Bernhard
Welzc, Eduardo Carasekc, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 54(2011) 10401046;

22

6. Near-infrared spectra combined with partial least squares for pH determination of

toothpaste of different brands, Yong Nian Ni, Wei Lin, Chinese Chemical Letters 22(2011)
1473-1576.

22