UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE GR.T.

POPA IAI FACULTATEA DE BIOINGINERIE MEDICAL SPECIALIZAREA MASTER: BIOTEHNOLOGII MEDICALE AVANSATE

REFERAT

DOZAREA UREEI

PROF. DR.: OCTAVIAN BALTAG

Asistent medical de laborator: Daniela Bercovici Grupa 1 2012

UREAZA/GLUTAMAT DEHIDROGENAZA PRINCIPIUL METODEI Ureea din proba consum, prin intermediul reaciilor cuplate descrise mai jos, NADH, care poate fi dozat spectrofotometric1,2. Uree + H2O 2NH4+ + CO2 NH4+ + NADH + H+ + 2 oxoglutarat glutamat + + NAD CONINUT A. B. S. Reactiv Reactiv Standard COD 11516 4 x 40 mL 4 x 10 mL 1 x 5 mL COD 11517 2 x 200 mL 2 x 50 mL 1 x 5 mL COD 11541 1 x 800 mL 1 x 200 mL 1 x 5 mL

COMPOZIIE A. Reactiv: Tris 100 mmol/L, 2-oxoglutarat 5.6 mmol/L, ureaza >140 U/mL, glutamat dehidrogenaza>140 U/mL, etilenglicol 220 g/L, azida de sodiu 0.95 g/L, pH 8.0. Duntor dac este nghiit. n caz de accident, sau dac nu v simiti bine, cerei imediat sfatul medicului. B. Reactiv: NADH 1.5 mmol/L, azida de sodiu 9.5 g/L. Duntor dac este nghiit. n contact cu acizii, elibereaz gaze toxice. Dup contactul cu pielea, splai imediat cu mult ap. n caz de accident, sau dac nu v simii bine, cerei imediat sfatul medicului. S. Standard glucoza/uree/creatinina. Glucoza 100 mg/dL, uree 50 mg/dL (8.3 mmol/L, BUN23.3 mg/dL), creatinina 2 mg/dL. Standard primar lichid. DEPOZITARE Se va depozita la 2-8C. Reactivii i standardul sunt stabile pn la data marcat pe eticheta dac recipientele sunt pastrate bine nchise i dac este prevenit contaminarea n timpul utilizrii lor.

Indicii privind deteriorarea: Reactivi: prezenta de particule, turbiditate, valoarea absorbantei blancului peste 1.100 la 340 nm(cuveta de 1 cm). Standard: prezenta de particule, turbiditate. PREPARAREA REACTIVILOR Reactivul de lucru. Transferai coninutul flaconului de reactiv B n flaconul cu reactiv A. Agitai usor. Alte volume pot fi preparate respectnd proporia: 4 mL reactiv A+ 1 mL reactiv B. Reactivul de lucru este stabil pentru 2 luni la 2-8C. ECHIPAMENT ADITIONAL Analizor, spectrofotometru sau fotometru cu filtru de 340 nm i cuva de 1cm termostatabila la 37C PROBA Ser, plasm sau urin, recoltate prin proceduri standard. Diluai urina proaspat 1/50 cu ap distilat nainte de msurare. Ureea din ser sau plasm este stabil 7 zile la 2-8C. Se recomanda utilizarea heparinei ca anticoagulant. Ureea din urin este stabil pentru 3 zile la temperatura camerei dac este prevenit creterea bacterian. MODUL DE LUCRU 1. Aducei reactivul de lucru i analizorul la 37C. 2. Pipetai n cuveta:(observatia 1). Reactiv de lucru Proba sau standard (S) 1.5 mL 10 >L

3. Agitai i introducei cuveta n fotometru. Pornii cronometrul. 4. Cititi absorbanta(A) la 340 nm dupa 30 secunde(A1) si dupa 90 de secunde(A2). CALCULAREA REZULTATELOR Concentratia ureei in proba de analizat se calculeaz utiliznd urmtoarea formul general:

Daca este utilizat standardul de uree furnizat n kit (observatia 2):

VALORI DE REFERINTA Ser i plasma 3: 15-39 mg/dL uree = 7-18 mg/dL BUN = 2.56.5 mmol/L uree. Concentraiile n perioada neonatal sunt mai sczute, iar la adulii peste 60 ani sunt mai crescute dect la aduli. Aceste concentraii tind s fie uor mai crescute la brbai dect la femei. Urina3: 26-43 g/24h uree = 12-20 g/24h BUN = 428-714 mmol/L uree Aceste valori sunt oferite numai n scop orientativ; fiecare laborator ar trebui s-si stabileasc propriile intervale de referin. CONTROLUL DE CALITATE Se recomand utilizarea serului de control pentru biochimie nivel I (cod 18005, 18009 si 18042) i II ( cod 18007, 18010 si 18043) pentru a verifica performanele metodei. Fiecare laborator ar trebui s-i stabileasc propriile scheme de control de calitate i procedurile necesare pentru aciuni corective n cazul n care valorile pentru control nu se ncadreaza n intervalul acceptabil. CARACTERISTICI METROLOGICE Limita de detecie: 2.5 mg/dL uree = 1.6 mg/dL BUN = 0.42 mmol/L uree. Limita linearitii: 300 mg/dL = 140 mg/dL BUN = 50 mmol/L uree. Pentru valori mai mari diluai proba 1/2 cu ap distilat i repetai masurarea Repetabilitate ( n cadrul unei serii de msurri): Concentratie uree medie CV n

42 mg/dL = 7.0 3.3 % mmol/L 137 mg/dL = 22.7 L 1.9 % mmol/

20 20

Reproductibilitate ( de la o serie de msurri la alta): Concentratie medie CV uree 42 mg/dL = 7.0 4.3 % mmol/L 137 mg/dL = 22.7 L 2.8 % mmol/ n 25 25

Sensibilitate: 1.8 mEA*dL/mg = 10.8 mEA*L/mmol Veridicitate: rezultatele obinute cu acest reactiv nu au aratat diferene sistematice prin comparaie cu reactivi de referina (observaia 2). Detalii ale experimenelor comparative sunt disponibile la cerere. Interferene: lipemia (trigliceride <10 g/L) si bilirubina (<20 mg/dL) nu interfer. Hemoliza (hemoglobina 5 g/L) i amoniacul n concentraii crescute interfer. Alte medicamente i substane pot cauza interferente4. Aceste caracteristici metrologice au fost obinute utiliznd un analizor. Rezultatele pot varia dac se utilizeaz un instrument diferit sau proceduri manuale. RELEVANA DIAGNOSTIC Ureea este sintetizat n ficat ca i produs secundar al dezaminrii aminoacizilor. Eliminarea ei n urina reprezint calea major de excreie a azotului. Concentraiile plasmatice crescute de uree apar ca rezultat al unei diete hiperproteice, al catabolismului crescut al proteinelor, dup hemoragii gastrointestinale, deshidratare medie, soc sau funcionare cardiac defectuoas sau datorita tratamentului cu glucocorticoizi( uremie prerenala) 3,5. Uremia post-renal este cauzat de factori care obstrucioneaz fluxul urinar: nefrolitiaza, tumori sau hipertrofie a prostatei. Utilitatea ureei ca indicator al funciei renale este limitat de variabilitatea concentratiei plasmatice ca rezultat al factorilor non-renali3,5.

Diagnosticul clinic nu ar trebui s se bazeze pe rezultatul unui singur test ci ar trebui s integreze att datele clinice, ct i pe cele furnizate de laborator. OBSERVAII 1. Aceti reactivi pot fi utilizai n anumite analizoare automate. Instruciuni pentru multe dintre ele sunt disponibile la cerere. 2. Calibrarea cu standardul lichid furnizat poate cauza un bias referitor la matrix, n special n anumite analizoare. n aceste cazuri, este recomandat calibrarea utilizand un standard bazat pe ser( Biochemistry Calibrator, cod 18011,18044). BIBLIOGRAFIE 1. Talke H and Schubert GE. Enzymatische harnstoffbestimmung in blut und serm im optischen test nach Warburb. Klinische Wochenschrift 1965; 43: 174-175. 2. Gutmann I, Bergmeyer HU. Methods of enzymatic Analysis, ed Bergmeyer HU, Academic Press, NY, 1974; 4:1794-1798. 3. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2nd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB Saunders Co., 1994. 4. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press, 1997. 5. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press, 1997.