Testul ELISA

Este un test care utilizeaza vizualizarea complexelor antigen-anticorp prin artificii tehnice.
Sensibilitatea reaciilor antigen-anticorp poate fi marita legand de anticorp (mai rar de antigen) un
marker - o enzim (peroxidaza, beta-galactozidaza sau fosfataza alcalina).
Avantajele folosirii: grad ridicat de sensibilitate si specificitate.

Tehnici ELISA (enzime-linked-imunosorben-assay)

1.Tehnica indirecta: utilizata in serodiagnostic

Antigenul cunoscut este adsorbit pe suport de polistiren

Se pune serul cu anticorpii de identificat, se incubeaza, se spala,
Se adauga serul antiimunglobulina marcat enzimatic, se incubeaza se spala,
Se adauga substratul.
Se masoara intensitatea reactiei de culoare prin spectrofotometrie.

2. Tehnica directa (sandwich): utilizata doar in identificarea Ag

Ac cunoscuti sunt fixati pe suport solid

Se adauga proba cu antigen, se incubeaza, se spala
Se adauga anticorpi specifici marcati enzimatic, incubare, spalare
Se adauga substratul pentru enzima
Se citeste intensitatea culorii prin spectrofotometrie

Aplicatii:
detectarea anticorpilor bacterieni, virali, parazitari, fungici
detectarea Ag. virale, parazitare, bacteriene, a toxinelor bacteriene.

Utilizari
Diagnosticul infectiei cu HIV
Se bazeaza pe detectarea anticorpilor anti-HIV. Titrul maxim al anticorpilor se coreleaza n
timp, cu nivelul viremiei. Imunitatea mediata celular anti-HIV se detecteaza timpuriu
dupa infectie si este dominata de numarul mare de limfocite TCD 8, al caror numar creste de
10-20 de ori fata de valorile normale (200-600/ ml).
Ele manifesta activitate citotoxica specifica anti-HIV si lizeaza limfocitele infectate. Desi
foarte energic, raspunsul imun primar nu elimina complet virusul si nici celulele infectate.
Organismul nu se sterilizeaza deoarece anticorpii specifici anti-HIV, produsi n timpul
infectiei primare, nu au activitate neutralizanta optima. O proportie importanta a virionilor nu
este neutralizata, pastrndu-si infectiozitatea.

Alte utilizari:
Se foloseste in detectarea:
virusului herpes simplex (HSV-1 si HSV-2)
cancerului oral
anticorpilor pentru Mycobacterium in tuberculoza
rotavirusului

markerilor hepatitei B
enterotoxinei E. Coli
alergenilor alimentari
anticorpilor IgG anti Porphyromonas gingivalis la circa 2/3 din pacienii cu
boala parodontala

Antistreptolizina O (ASLO)
Determinarea titrului antistreptolizinei O din sange semnifica evaluarea raspunsului
imunologic al organismului la o agresiune streptococica si anume la exotoxina microbiana
denumita streptolizina. Raspunsul organismului la agresiunea strptococica consta in aparitia
de anticorpi.
Streptolizina este o hemolizina produsa de streptococii de grup A. La pacientii infectati,
streptolizina O actioneaza ca un antigen fata de care organismul dezvolta un raspuns umoral
specific (antistreptolizina O=ASLO).
Nivelurile anticorpilor devin detectabile in 1-2 saptamani de la infectia streptococica si ating
un maximum dupa 3-6 saptamani; daca nivelurile ridicate persista dupa 6 saptamani sau chiar
se inregistreaza o crestere a acestora se va suspecta o reinfectie

Recomandari pentru determinarea ASLO

confirmarea expunerii la streptolizina streptococica;
test util in diagnosticul conditiilor asociate cu infectii streptococice: reumatism articular
acut, glomerulonefrita, endocardita, scarlatina, amigdalita, faringita, impetigo.
monitorizarea regulata a pacientilor cu reumatism articular acut (la interval de 2-4
saptamani)

Recoltare
Pregatire pacient jeun (pe nemancate)
Specimen recoltat - sange venos
Recipient de recoltare - vacutainer fara anticoagulant cu/fara gel separator
Prelucrare necesara dupa recoltare - se separa serul prin centrifugare
Volum proba minim 0.5 mL ser
Cauze de respingere a probei - specimen intens lipemic, contaminat bacterian sau intens
hemolizat
Stabilitate proba serul este stabil 2 zile la temperatura camerei; 2 zile la 4-8C; 6 luni la
20C2.

Interpretarea rezultatelor
Valori de referinta

Varsta

Valoare
(UI/mL)

0-16 ani

<150

>16 ani

<200

Titrul ASLO este crescut in 80-85% din cazurile de infectie streptococica A. Nivelul
anticorpilor ASLO atinge valori foarte mari in special in reumatismul articular acut, de aceea
titrurile persistent scazute pledeaza impotriva acestei afectiuni

Titrul ASLO creste in urmatoarele conditii:

- in convalescenta, dupa scarlatina, creste peste 200u/ml; mentinerea crescuta a titrului ASLO
exprima evolutia catre sindrom poststreptococic sau catre complicatii tardive
- infectie streptococica in antecedentele recente ale pacientului, cand se inregistreaza o
crestere in dinamica a titrului; dupa o angina streptococica, titrul ASLO creste in 2-3
saptamani, atinge nivelul maxim la 5 saptamani si scade apoi lent, pana la 6-12 luni (in cazul
in care boala se vindeca)
- instalarea sau agravarea unei complicatii poststreptococice

Limite si interferente
Titrul ASLO poate fi crescut si la unii purtatori sanatosi de streptococ betahemolitic grup A
Numai 25% dintre pacientii cu streptococie cutanata au titrul ASLO crescut. La acesti
pacienti se recomanda determinarea anticorpilor anti-DNAaza B
Tratamentul antimicrobian suprima raspunsul umoral fata de streptolizina O, de aceea testul
nu este indicat la pacientii care au primit recent antibiotice
b-lipoproteinele din serul pacientilor cu boli hepatice neutralizeaza proprietatile hemolitice
ale streptolizinei O, determinand obtinerea de rezultate fals crescute.
In cazul specimenelor de ser contaminate cu Bacillus cereus sau Pseudomonas, blipoproteinele existente in produsii de crestere bacterieni neutralizeaza proprietatile hemolitice
ale streptolizinei O, determinand obtinerea de rezultate fals crescute
In cazuri foarte rare, prezenta gamapatiei monoclonale, in special IgM (macroglobulinemia
Waldenstrm) poate determina rezultate eronate.