UNIVERSITATEA DE VEST VASILE GOLDIS ARAD FACULTATEA STIINTE ALE NATURII, INGINERIE SI INFORMATICA

SPECIALIZAREA: ANALIZE DE LABORATOR UTILIZATE IN DOMENIUL BIOMEDICAL

Tehnici si metode de analize din probe biologice

Coordonator : Prof.univ.dr.Anca Hermenean

Masterand : NISTOR VLAD ( BRATU) Florica Anul : I

ARAD 2012 2013

Recoltarea urinei se face in felul urmator : Intr-un vas curat se recolteaza prima urina de dimineata pentru examenul sumar urina (investigatie calitativa). Pentru investigatii cantitative glicozurie , albuminurie se colecteaza toate emisiunile din 24 h intrun vas, de asemenea curat. Vasul este prevazut cu un antiseptic pentru a impiedica fermentatia. La femei se recomanda toaleta vulvo-vaginala. In cazuri speciale se recomanda cateterismul pentru a nu avea erori in determinarea proteinelor, dar atentie, poate provoca insa infectii vezicale cu germeni de uretra, mai ales Proteus si E.Coli. proteinelor. Analiza urinei consta in : examen macroscopic examen microscopic examen clinic La inspectia urinei intr-un recipient transparent si curat, se apreciaza: Culoarea : de la incolor prin galben-pai pana la brun inchis. In caz de : hemoglobinurie urina apare ca zeama de carne hematurie masiva urina este sangvinolenta bilirubinurie urina are culoarea bruna ca berea melanurie si alcaptonurie urina devine neagra in cursul depozitarii Unele medicamente excretate in urina modifica culoarea urinei in mod caracteristic -albastru de metilen in verde-albastru -amidazofere si alte antialgice,antipiretice in portocaliu-rosu Transparenta : urina normala este clara si transparenta. In cursul depozitarii se pot sedimenta elemente celulare. din urina acida si concentrata se pot sedimenta precipitate rosii (urati amorfi de Na si K) sub forma de sediment lateriti,u ceea ce se dizolva la cald Recoltarea se recomanda de asemenea in afara perioadelor menstruale pentru a evita prezenta hematiilor de aceasta provenienta , precum si erori in determinarea

 din urina alcalina se precipita uratii de amoniu, fosfatii tertiari de calciu. Miros : - urina normala proaspata are miros caracteristic aromatic produs de prezenta unor aminoacizi organici volatili - in timpul depozitarii, ureea se descompune enzimatic, degajand amoniac - in cetoacidoza urina are miros de acetona - in unele infectii microbiene urina poate contine si hidrogen sulfat Volum : in 24 ore cariaza cu cantitatea de lichide ingerate precum si cu eliminarea de apa prin transpiratie, plamani, intestin. De asemenea variaza in raport cu varsta si cu greutatea. Valori normale: la adult : 1200-1600 ml Volumul este crescut in scleroze renale, diabet - scazut in diaree, stari febrile, nefroza, nefrite

Examenul fizico-chimic Densitatea urinei se determina cu urodensimetru - in mod normal este cuprinsa intre 1010-1025 si variaza in functie de cantitatea de apa ingerata care se elimina si pe alte cai decat cea renala - la volum mare densitatea scade - la volum mic, densitatea creste o exceptie o constituie diabetul zaharat in care volumul este crescut odata cu densitatea (se elimina glucoza si corpii cetonici) Se pune urina cu grija ca sa nu faca spuma intr-un cilindru suficient de lung si cu diametrul mare pentru ca urodensiometrul sa intre usor - citirea se face la meniscul inferior - trebuie sa se tina cont de temperatura la care se face determinarea , in mod normal la 15C

Ph-ul urinei normale variaza intre 5,8 6 si se determina ionometric si colorimetric .

Examenul microscopic al urinei se face pe sedimentul urinii proaspete, la cel mult 6 ore de la emisie dupa centrifugarea urinii timp de 3-6 minute la 1500-2500 rpn se separa supernatantul de sediment se pune pe o lama o picatura din sedimentul de pe fundul eprubetei de centrifugare si se acopera cu o lamela , evitandu-se formarea de bule de aer preparatul se examineaza la microscop cu obiectivul mic pentru a stabili prezenta elementelor celulare si a cristalimelor, urmand apoi studiul microscopic cu obiectivul mare se evita centrifugarile la turatii mari, deoarece se distrug elemetele figurate Sedimentul urinar este format din : elemete organizate : celule epiteliale provenite din caile urinare, leucocite, hematii, cilindrii, paraziti, celule levurice elemente neorganizate - de natura organica : acid uric, cistina, leucina, tirozina

- de natura anorganica : fosfati, carbonati, oxalati

Numaratoarea elementelor patologice din urina Metoda Addis : - se masoara volumul probei de urina se centrifuga proba de urina se arunca supernatantul se omogenizeaza sedimentul pe camera Burker-Turk se aplica lamela - se citesc elementele (leucocite,hematii,cilindrii) pe toata camera, se impart la 4 si rezulta media elementelor pe camera.

Examenul clinic cantitativ al urinei Proteinuria urina normala contine urme de proteine nedetectabile prin precipitare Proteinuriile pot fi: prerenale postrenale ( caile urinare) renale (glomerurale) selective ( prezenta exclusiva a albuminelor serice ) semiselective neselective

Proteina Beuce-Jones formata din lanturi usoare (X sau K) ale imunoglobulinelor Piuria se evidentiaza prin gelificarea puroiului din urina in mediu puternic alcalin (KON 20%) Melituriile eliminarea patologica a glucozei si a altor glucide (pentozurie,fructozurie) se pun in evidenta cu ajutorul testelor specifice corespunzatoare Bilirubinuria se elimina numai bilirubina directa impreuna cu acizi biliari, care duce la scoaterea tensiunii superficiale din urina (proba Hay cu sulf precipitat) Cetonuria corpi cetonici se elimina in cetoacidoza diabetica, tulburari hidrominerale si stari carentiale se pun in evidenta cu proba de nitroprusiat de sodiu- solutia Lugol (acetona) Hemoglobinuria apare in urma unor hemolize ereditare, imuna sau toxica, in care hemoglobinemia depaseste limita superioara de 12nmol/l (1g/l). Hemina din urina se pune in evidenta prin actiunea sa peroxidozica: oxigenul eliberat din peroxidul de hidrogen transforma prin oxidare un cromogen incolor intr-un derivat colorat Melanuria melanogenul incolor format din melanoamele maligne se transforma prin oxidare ( cu clorura fenica sau nitroprusiat de Na) in melanina de culoare neagra Porfirinuria izomerii I si III ai uro si coproporfirinei se elimina in urina in diferite forme ale porfiriilor innascute eritropoietice si hepatice, respectiv toxice dobandite Polirinele se pun in evidenta pe baza fluorescentei rosii in UV.

Porfobilinogenuria produs intermediar al biosintezei heminei, se elimina in tulburarile secundare ale metabolismului porfirinic. Se pune in evidenta cu ajutorul reactiei de culoare rosie data cu reactivul Ehrlich care spre deosebire de urobilinogen nu este solubil in cloroform. Urobilinogenuria creste in bolile hepato-celulare, lipseste cu desavarsire in caz de obstructie biliara totala.

Examinari clinice cantitative

din urina de 24 de ore

1. Acidul 5-hidroxi-indolacetic ( H.I.A.A.) 2. Acidul uric metoda fotometrica 3. Aldosteron metoda RIA, ELISA 4. -amilaza metoda fotometrica 5. Catecolaminele metoda fotometrica 6. 17cetosteroizi metoda fotometrica 7. Creatina metoda fotometrica 8. Creatinina - metoda fotometrica 9. 17hidroxizteroizi metoda fotometrica 10. Estrogeni metoda fotometrica 11. Pregnandiol metoda fotometrica 12. Uropepsinogen metoda fotometrica Ionograma urinara 1) Calciu metoda fotometrica de emisie 2) Cloruri metoda fotometrica de emisie 3) Fosfati metoda fotometrica de emisie 4) Magneziu metoda fotometrica de emisie 5) Potasiu metoda fotometrica de emisie 6) Sodiu metoda fotometrica de emisie

Bibliografie : Laborator clinic biochimie, Natalia Mitrica-Kondi Biochimie clinica, Eugen Mdy, Ileana Funduc, Ruxandra Alexandrescu, Minodora Dobreanu