Patogenitatea și virulența gripei

Yuying Liang
Articol: 2223057 | Primit 21 februarie 2023 , Acceptat 05 iunie 2023 , Publicat online: 20 iunie 2023

 Citează acest articol

 https://doi.org/10.1080/21505594.2023.2223057

 CrossMark

În acest articol

 ABSTRACT
 1. Introducere
 2. Mecanismul de replicare și patogeneză a virusului gripal
 3. Mecanismul de evoluție a virusului gripal
 4. Determinanți virali pentru patogenitate și virulență
 5. Răspunsurile imune ale gazdei: protecție imună sau imunopatogeneză
 6. Factorii gazdă și semnalizarea celulelor contribuie la replicarea și patogeneza virală
 rezumat
 Declarație de divulgare
 Informații suplimentare
 Referințe


 Top

 Articolul complet
 Cifre și date
 Referințe
 Citează
 Metrici
 Licențiere
 Retipăriri și permisiuni
 Vizualizați PDFVizualizați EPUB

 XFacebookLinkedInE-mailAcțiune

ABSTRACT
 Virusurile gripale, inclusiv patru tipuri majore (A, B, C și D), pot provoca boli ușoare până la severe și letale
la oameni și animale. Virușii gripali evoluează rapid prin deriva antigenică (mutație) și schimbare
(reasortarea genomului viral segmentat). Au apărut frecvent noi variante, tulpini și subtipuri, care provoacă
infecții epidemice, zoonotice și pandemice, în ciuda vaccinurilor și medicamentelor antivirale disponibile în
prezent. În ultimii ani, virusurile gripei aviare, cum ar fi subtipurile H5 și H7, au cauzat sute până la mii de
infecții zoonotice la oameni, cu rate ridicate de mortalitate. Probabilitatea ca aceste virusuri gripale animale
să se transmită prin aer la om prin evoluția virală reprezintă o mare îngrijorare pentru următoarea
pandemie. Boala virală gripală severă este cauzată atât de efectele citopatice virale directe, cât și de
răspunsul imun exacerbat al gazdei împotriva încărcăturii virale mari. Studiile au identificat diferite mutații
ale genelor virale care cresc replicarea și transmiterea virală, modifică tropismul tisular sau specificitatea
speciei și eludează antiviralele sau imunitatea preexistentă. S-au făcut, de asemenea, progrese
semnificative în identificarea și caracterizarea componentelor gazdă care mediază răspunsurile antivirale,
funcțiile pro-virale sau imunopatogeneza în urma infecțiilor virale gripale. Această revizuire rezumă
cunoștințele actuale despre determinanții virali ai virulenței și patogenității gripei, aspectele protectoare și
imunopatogenice ale răspunsurilor imune înnăscute și adaptative ale gazdei și rolurile antivirale și pro-
virale ale factorilor gazdă și ale căilor de semnalizare celulară. Înțelegerea mecanismelor moleculare ale
factorilor de virulență virală și a interacțiunilor virus-gazdă este esențială pentru dezvoltarea măsurilor
preventive și terapeutice împotriva bolilor gripale.

CUVINTE CHEIE:

 virusul gripal
 virulenţă
 răspunsuri imune
 factori gazdă
 interacțiuni virus-gazdă
 patogeneza

Articolul anteriorVedeți cuprinsul problemeiArticolul următor

1. Introducere

Virusurile gripale (gripa) au o distribuție globală și sunt agenți patogeni atât pentru oameni, cât și pentru
animale. Virusurile gripale umane provoacă epidemii anuale (sezoniere), care sunt infecții respiratorii foarte
contagioase, care pot duce la boli severe și complicații care pun viața în pericol în grupurile cu risc
crescut.Citare1 ]. Ocazional, o nouă tulpină de virus gripal uman ar apărea dintr-o origine animală și s-ar
răspândi rapid în rândul populațiilor umane care nu au imunitate preexistentă, provocând mortalitate și
morbiditate excesivă la nivel global, cunoscută sub numele de pandemie. Au existat patru pandemii de
gripă în vremurile moderne, gripa „spaniolă” din 1918–19, gripa „Asia” din 1957, gripa „Hong Kong” din
1968 și „gripa porcină” din 2009. Gripa „spaniolă” din 1918-1919 a fost cea mai severă pandemie din istoria
recentă, despre care s-a estimat că a provocat aproximativ 500 de milioane de infecții și 50-100 de
milioane de decese în întreaga lume.Citare2 ]. De asemenea, oamenii pot fi infectați sporadic cu virusuri
gripale animale (zoonotice), cel mai adesea gripa aviară și porcină; cu toate acestea, ei încă nu au stabilit
infecția susținută la oameni. În special, virusurile gripale aviare H5 și H7 A au cauzat sute până la mii de
infecții la oameni, cu o rată ridicată a mortalității (30-50%) (revizuită în [Citare3 ]). Probabilitatea ca aceste
viruși de gripă aviară să obțină transmisii eficiente de la om la om pentru a provoca următoarea pandemie
prezintă un risc semnificativ pentru sănătatea publică.

Măsurile actuale de control pentru infecțiile gripale includ vaccinuri și medicamente antivirale. Cu toate
acestea, virusurile gripale au evoluat rapid pentru a scăpa de imunitatea la vaccin și pentru a dezvolta
rezistență la medicamente. Noile variante virale prezintă o legare redusă a anticorpilor de neutralizare
provocați de vaccin, provocând nepotriviri ale vaccinului sau eficacitate redusă a vaccinului. Au fost
detectate mutații rezistente la medicamentele antivirale aprobate de Food and Drug Administration (FDA)
din SUA [Citare4 ]. Unele devin predominante în tulpinile circulante, făcând clasa de antivirale, precum
inhibitorii M2, ineficientă. Sunt necesare urgent vaccinuri de protecție generală și noi terapii pentru a
combate virusurile gripale în continuă schimbare.

S-au făcut progrese semnificative în înțelegerea mecanismelor moleculare ale replicării, transmiterii și
patogenezei bolii virale gripei. Această revizuire rezumă cunoștințele actuale despre markerii genetici virali
și răspunsurile gazdei care afectează patogenitatea și virulența virusului gripal, ceea ce va ajuta la
dezvoltarea unor opțiuni mai bune de prevenire și tratament.
2. Mecanismul de replicare și patogeneză a virusului gripal

2.1. Genomul și genele virusului gripal

Virusurile gripale aparțin familiei Orthomyxoviridae și includ patru tipuri majore A, B, C și D. Virusul gripal A
(IAV) poate infecta o gamă largă de specii de păsări și mamifere, inclusiv oameni, păsări, rate, găini,
curcani, porci. , cai și câini [Citare5 ]. Virusul gripal B (IBV) infectează oamenii și focile, în timp ce virusul
gripal C (ICV) infectează oamenii și porcii.Citare5 ]. IAV, IBV și ICV sunt agenți patogeni umani. Virusul
gripal D (IDV), descoperit în 2011, infectează porcii și bovinele, fără infecții umane raportate până în
prezent [Citare6 ]. Această revizuire se concentrează în primul rând pe IAV, deoarece provoacă
majoritatea infecțiilor gripale umane și animale.

IAV sunt viruși ARN înveliți cu opt segmente ARN monocatenar cu sens negativ (Figura 1a). Proteinele
învelișului viral includ două glicoproteine majore, hemaglutinina (HA) și neuraminidaza (NA) și proteina
transmembranară M2. Sub membrana virală se află rețeaua matriceală formată din proteina M1. În
interiorul particulelor virale se află opt segmente de ARN viral (ARNv) sub forma complexului
ribonucleoproteic viral (vRNP), din care fiecare ARNv este încapsidat de nucleoproteine (NP) și asociat cu
complexul polimerază PB1/PB2/PA (Figura 1b).

Figura 1. Ilustrarea componentelor virionilor gripei, organizarea genomică și genele virale. (a) Virusul gripal
este un virus ARN învelit, care are 3 proteine de înveliș (HA, NA și M2) pe membrana virală, un strat de
matrice format M1 și opt vRnps. (b) Fiecare vRNP constă dintr-un segment de ARNv învelit cu NP și
asociat cu complexul de polimerază PB2/PB1/PA. (c) Fiecare segment vARN codifică 1-3 gene, prin
splicing alternativ (NS2/NEP și M2) și deplasare de cadre (cum ar fi PA-X și PB1-F2). Proteinele accesorii
exprimate prin deplasarea cadrelor sunt prezentate ca bare/cutii pline de culoare verde închis.

Afișează dimensiunea completă

Fiecare segment de ARNv codifică una până la trei proteine prin mecanisme alternative de splicing sau
translație (Figura 1c). Există un total de zece proteine esențiale pentru infecția virală (PB1, PB2, PA, NP,
HA, NA, M1, M2, NS1 și NEP/NS2) și câteva proteine accesorii, cum ar fi PB1-F2 și PA-X, care mediază
interacțiunile virus-gazdă, modulează imunitatea înnăscută și afectează patogenitatea virală (revizuită în
[Citare7 ]). PB1 (conținând un domeniu de ARN polimerază dependent de ARN), PB2 (conținând un
domeniu de legare a capacului) și PA (conținând un domeniu de endonuclează) formează un complex de
polimerază heterotrimeric care este esențial pentru sinteza ARN viral. NP încapsidează ARNv și ARN-ul
complementar (cARN) și este, de asemenea, necesar pentru sinteza ARN viral, așa cum este demonstrat
prin testul minigenomului virusului gripal.Citare8 ,Citare9 ]. HA se leagă de receptorul gazdă și mediază
fuziunea membranei. NA facilitează eliberarea și răspândirea virionilor descendenți prin scindarea acidului
sialic de pe suprafața celulei. M1 mediază asamblarea particulelor virale și înmugurirea din membrana
plasmatică. M2 este o proteină canal ionic de pe membrana virală care este necesară pentru replicarea
virală și modularea homeostaziei celulare. NS1 afectează răspunsurile antivirale ale gazdei prin mai multe
mecanisme, așa cum este descris mai jos în detalii. NEP/NS2 facilitează exportul vARN-urilor din nucleu în
citoplasmă pentru asamblare.

2.2. Ciclul de viață al virusului gripal

Pentru a iniția o infecție, virusul gripal se leagă mai întâi de receptorul de suprafață celulară, reziduurile de
acid sialic ale glicoproteinelor sau glicolipidelor, prin situsul de legare la receptor (RBS) din proteina
HA. Virușii sunt interiorizați în endozomii timpurii și traficați către endozomii tardivi, unde mediul cu pH
scăzut provoacă modificări conformaționale în HA pentru a expune o peptidă de fuziune care duce la
fuziunea membranelor virale și endozomale. Canalele de protoni M2 de pe membrana virală mediază
afluxul H + în interiorul viral, ceea ce scade pH-ul pentru a facilita eliberarea vRNP-urilor din M1 în
citoplasma celulară într-un proces numit dezvelire.Citare1 ,Citare7 ].

VRNP-urile eliberate sunt apoi importate în nucleu pentru replicarea și transcripția ARN viral. Sinteza ARN
viral este mediată de complexul polimerază heterotrimeric PB1/PB2/PA.Citare10 ]. Complexul de
polimerază recunoaște secvența promotorului terminal al fiecărui segment de ARNv și generează ARN cu
catenă pozitivă complementară (ARNc), care este apoi utilizat pentru a produce mai multe copii de
ARNv. ARNm este transcris din ARNv și inițiat de structurile capac furate din pre-ARNm celular într-un
mecanism de smulgere a capacului, prin care PB2 se leagă de 5' m.Citare7 ]G capac, iar endonucleaza PA
îl scindează. Coada 3’-poliadenilată este adăugată la ARNm-urile virale printr-un mecanism de
bâlbâială. Astfel, ARNm-urile gripei sunt 5-' acoperite și 3-poliadenilate. Unele transcrieri virale (M și NS)
sunt procesate de mașina de splicing ARN gazdă. Atât transcriptele virale primare, cât și cele procesate
sunt exportate în citoplasmă pentru traducere de către ribozomii gazdă. PB1, PB2, PA și NP sunt importate
în nucleu pentru a crește sinteza ARN viral și formarea vRNP. Proteinele membranei virale (HA, NA și M2)
circulă către membrana plasmatică prin căile secretorii celulare. Alte proteine nestructurale, cum ar fi NS1,
PB1-F2 și PA-X, modulează răspunsurile celulei gazdă.

VRNP-urile nou sintetizate sunt exportate din nucleu cu asistență de la M1 și NEP/NS2 și transportate la
membrana plasmatică pentru asamblare și înmugurire.Citare11 ]. M1 interacționează atât cu proteinele
membranei virale, cât și cu vRNP-urile pentru a media formarea particulelor virale și este, de asemenea,
un jucător important în înmugurirea virusului. Opt vRNP-uri sunt împachetate în particule virale într-o
configurație „1 + 7”, unde un vRNP central este înconjurat de 7 vRNP-uri [Citare12 ]. Virionii descendenți
nou formați formează agregate la suprafața celulei datorită legării HA la acizii sialici pe proteinele
învelișului viral și pe suprafața celulei. Activitatea neuraminidazei NA este astfel necesară pentru a elibera
noi virioni care se pot răspândi pentru a infecta noi celule țintă.

Trei clase de medicamente antivirale aprobate de FDA vizează diferite etape ale ciclului de viață
viral.Citare4 ]. Inhibitorii M2 (M2I) – amantadina și rimantadina – blochează activitatea canalului ionic
M2. Zanamivir și oseltamivir sunt inhibitori NA (NAI) care împiedică eliberarea particulelor virale de la
suprafața celulei și opresc răspândirea virală. Baloxavir marboxil (BXM) este un inhibitor al activității
endonucleazei PA (PAI) și suprimă transcripția virală. Au fost identificate mutații rezistente la medicamente
în fiecare clasă de antivirale [Citare4 ]. Rezistența la M2Is se dezvoltă rapid și necesită un singur sau un
număr limitat de mutații în M2, cum ar fi L26F, V27A și S31N, care sunt predominante în tulpinile virale
gripale circulante.Citare13 ]. Astfel, amantadina și rimantadina M2Is nu mai sunt recomandate pentru
tratarea infecțiilor gripale. Mutații rezistente la NAI, cum ar fi H275Y, E119G, I223R, R292K și Q136K,
precum și mutații rezistente la PAI, cum ar fi I38M sau I38T, au fost identificate din izolatele de
gripă.Citare4 ,Citare14 ,Citare15 ], deși frecvența lor globală era încă scăzută [Citare16 ]. Cu toate
acestea, ar trebui dezvoltate clase noi de medicamente antivirale și/sau terapii bazate pe gazdă pentru a
trata infecțiile gripale.

2.3. Patogeneza virusului gripal

Virusurile gripei umane sunt transmise pe cale respiratorie, în timp ce virusurile gripei aviare se răspândesc
între păsări în principal prin contact direct pe căi fecal-oral, fecal-fecal și fecal-respirator.Citare1 ]. Virușii se
reproduc în principal în celulele epiteliale care căptușesc tractul respirator sau
intestinal.Citare1 ,Citare17 ]. Replicarea virusului a atins apogeul la ~48 ore după inoculare și a scăzut lent
după aceea, cu pierdere redusă după 6-8 zile.Citare17 ]. Infecțiile gripale ușoare implică, în general, tractul
respirator superior și traheea, în timp ce cele mai severe și fatale infecții umane sunt asociate cu infecții
virale în tractul respirator inferior. Virusul gripal provoacă moartea celulelor epiteliale prin diferite
mecanisme. În plus, celulele epiteliale infectate eliberează citokine și chemokine pentru a atrage celulele
inflamatorii infiltrate, cum ar fi neutrofilele și macrofagele și pentru a activa celulele endoteliale
adiacente. Aceste celule imune și neimune activate produc și mai multe citokine inflamatorii, cum ar fi IL -
6, IL - 1β, TNFα și CCL - 2, pentru a stimula infiltrarea ulterioară, a deteriora bariera epitelial-endotelială și
a provoca moartea mai multor celule epiteliale. Virusurile aviare zoonotice H5N1 pot provoca o boală
extrem de letală la om, care este asociată cu diseminarea virală la tropism tisular larg, titru viral ridicat în
mai multe organe.Citare18 ,Citare19 ], și un răspuns hiperinflamator [Citare18 ]. Astfel, patogenia bolii
gripale severe este cauzată nu numai de efectele citopatice virale directe, ci și de răspunsurile inflamatorii
exacerbate ale gazdei.Citare18 ,Citare20 ]. Prin urmare, terapiile eficiente ar trebui să urmărească
reducerea atât a replicării virale, cât și a inflamației patogene a căilor respiratorii.

3. Mecanismul de evoluție a virusului gripal

3.1. Istoricul evoluției virusului gripal

IAV-urile au 18 subtipuri cunoscute HA și 11 NA. Cu excepția H17N10 și H18N11 de la lilieci, toate
celelalte 16 subtipuri HA și 9 NA au fost găsite la păsările acvatice (rațe, gâște și păsări de coastă)
[Citare21 ]. Virusurile gripei aviare pot infecta păsările de curte (găini, curcani și rațe domestice),
provocând daune economice majore. Câteva dintre aceste subtipuri de origine aviară au stabilit infecții în
interiorul gazdei la alte specii, cum ar fi H1N1, H2N2 și H3N2 la oameni și porci; H7N7 și H3N8 la
cabaline; și H3N8 și H3N2 la canini.

Virusurile gripei umane s-au schimbat de-a lungul anilor [Citare4 ] (Figura 2). De la gripa pandemică
spaniolă din 1918, subtipul IAV H1N1 a persistat la om până când a fost înlocuit în 1957 de un subtip H2N2
(pandemie asiatică). H2N2 a circulat la om până în 1968, când a fost înlocuit cu un subtip H3N2 (pandemia
din Hong Kong). Virusul H1N1 a reapărut în 1977 și a fost înlocuit cu o nouă tulpină H1N1 în 2009
(pandemie porcină). În prezent, două subtipuri de IAV, H1N1 și H3N2, împreună cu două linii de IBV
(B/Yamagata și B/Victoria) [Citare22 ], co-circulează la om. Prin urmare, vaccinurile anuale împotriva gripei
sunt cvadrivalente și conțin două subtipuri IAV și două linii IBV.

Figura 2. Evoluția virusului gripal. Aproape toate subtipurile IAV (H1 la H16, N1 la N9) au gazde naturale la
păsările de apă, dintre care unele au stabilit infecții la alte specii, cum ar fi H1N1, H2N2 și H3N2 la oameni
și porci. Virusurile gripei umane s-au schimbat de-a lungul anilor, în principal din cauza apariției a patru
virusuri gripale pandemice. În prezent, virusurile gripale circulante includ două subtipuri IAV H1N1 și H3N2
și două linii IBV (B/Yamagata și B/Victoria). Unele IAV animale, în special gripa aviară și porcină, se pot
răspândi ocazional pentru a provoca infecții zoonotice la oameni. În ultimii ani, virusurile aviare H5 și H7 au
provocat infecții umane cu o rată ridicată a mortalității.

Afișează dimensiunea completă

Oamenii sunt ocazional infectați cu virusuri gripale de la porci și păsări, ceea ce uneori duce la boli severe
și moarte, dar nu a fost stabilit la om. Se știe că virusurile gripei aviare de subtipurile H5, H6, H7 și H9
provoacă infecții zoonotice. În special, H5 și H7 au provocat focare majore la păsări, cu pierderi
semnificative în industria păsărilor de curte și mii de infecții umane cu o rată ridicată a mortalității (CFR)
(revizuită în [Citare3 ]). Virusul gripei aviare înalt patogen (HPAIV) H5N1 a fost detectat pentru prima dată
în Hong Kong în 1997 și circulă printre păsările domestice și păsările migratoare sălbatice din Asia, Europa
și Africa din 2003. Virusul aviar H5N1 a provocat 868 de persoane confirmate de laborator. infecții și 457
de decese la nivel global din 2003 până în 2022 (CFR: 53%) [Citare23 ]. Virușii noi H7N9 care au apărut în
China în 2013 au cauzat un total de 1.568 de infecții umane confirmate de laborator, inclusiv 616 cazuri
fatale (CFR:39%), în ianuarie 2023, conform actualizării săptămânale ale OMS privind gripa
aviară.Citare24 ]. Acești viruși de gripă aviară nu au stabilit încă o transmitere eficientă de la om la om, dar
dobândirea potențială a transmisibilității prin aer prin evoluția virală continuă reprezintă o potențială
amenințare pandemică.Citare25 ]. Din toamna anului 2022, s-a descoperit că un HPAIV H5N1 din clada
2.3.4.4b infectează multe specii de mamifere, inclusiv vulpi, pisici, dihori, foci, urși grizzly și oameni și, mai
alarmant, s-a răspândit printre nurcile din fermele de nurci.Citare26 ]. Nu se știe dacă virusul nurcii poate
infecta oamenii și poate provoca infecții eficiente de la om la om.

3.2. Mecanisme de evoluție a virusului gripal – deriva și schimbare antigenică

Evoluția virusurilor gripale este condusă de două mecanisme majore: deriva antigenică și schimbarea
antigenică. Deriva antigenică este acumularea de mutații în genomul viral în timpul replicării virale din
cauza lipsei activității de corectare a ARN polimerazei dependente de ARN viral.Citare5 ]. Mutațiile
localizate în epitopii de anticorpi ai proteinelor de suprafață, HA și NA, pot reduce recunoașterea
anticorpilor preexistenți provocați împotriva tulpinilor virale anterioare. Deriva antigenică explică apariția
infecțiilor gripale sezoniere și necesitatea vaccinurilor anuale de rapel antigripal.

Schimbarea antigenică este rezultatul reasortării segmentelor de ARN genomic viral a două virusuri gripale
diferite care co-infectează aceeași celulă pentru a genera noi tulpini și/sau subtipuri, care au potențialul de
a provoca boli severe și/sau de a se răspândi rapid într-o populație cu fără imunitate
preexistentă. Mecanismul de reasortare a virusului gripal a fost revizuit [Citare27 ]. Schimbarea sau
reasortarea antigenică este un factor major al generării de tulpini pandemice sau zoonotice. Virusul gripal
pandemic din 1957 a rezultat din reasortarea unui virus aviar H2N2 și a unui virus uman H1N1, în timp ce
virusul pandemic din 1968 a fost rezultatul reasortării unui virus aviar H3 și a unui virus uman H2N2
atunci. Virusul pandemic H1N1 2009 (H1N1pdm 2009) a fost generat după mai multe evenimente de
reasortare la porci. Virușii aviari H5N1 și H7N9, care provoacă infecții zoonotice la oameni cu mortalitate
ridicată, sunt generați prin reasortare cu alte subtipuri de virusuri aviare, în special virusurile aviare H9N2.

4. Determinanți virali pentru patogenitate și virulență

Capacitatea de replicare a gripei, severitatea bolii și transmisibilitatea sunt atât specifice virusului, cât și ale
gazdei. Virușii gripei aviare cu patogenitate scăzută provoacă simptome ușoare la păsările sălbatice și
păsările de curte, cu semne mici sau deloc de îmbolnăvire, în timp ce virusurile gripale aviare foarte
patogeni provoacă mortalitate ridicată la păsările de curte infectate. În comparație cu virusurile gripale
sezoniere, tulpinile pandemice provoacă morbiditate ridicată, mortalitate și transmitere rapidă în populația
umană. Chiar și printre tulpinile pandemice, virusul din 1918 este unic prin virulența sa extremă (mortalitate
estimată la 1%) și curba sa distinctă „în formă de W” a ratelor de deces specifice vârstei, cu decese
maxime observate la adulții tineri, în plus față de persoanele în vârstă și sugari [Citare2 ]. Infecțiile
zoonotice cu virusurile HPAIV H5N1 și H7N9 au dus la o mortalitate de 30% până la 50% la pacienții
infectați, dar a limitat transmiterea de la om la om.Citare3 ].

Au fost efectuate studii ample pentru a identifica și caracteriza determinanții virali asociați cu patogenitate
crescută, virulență și transmitere. În special, modificările genetice necesare pentru replicarea adaptivă și
transmisibilitatea prin aer la gazdele mamifere.Citare28–32 ] au fost studiate pe larg (revizuite în
[Citare33 ]). Principalii determinanți ai virulenței (tabelul 1) includ modificări care afectează intrarea virală,
cresc activitatea polimerazei virale și modularea răspunsurilor gazdei. Ele funcționează sinergic pentru a
provoca o infecție eficientă și o transmitere susținută la gazde noi.Citare46 ,Citare68 ,Citare95 ]. De
exemplu, un set de cinci sau șase substituții în trei gene virale (HA, PB2 și PB1) sunt necesare pentru ca
un virus aviar H5N1 să dobândească transmisibilitate prin aer.Citare28 ,Citare32 ]. Identificarea focarelor
virale cu potențial pandemic prin supravegherea activă a prevalenței și evoluției virusurilor gripale A la
gazde aviare, porcine și umane pentru a identifica markerii moleculari ai virulenței este o componentă
importantă a planului de pregătire pentru pandemie.

Tabelul 1. Markeri moleculari asociați cu virulența și patogenitatea virusului gripal. Substațiile HA se

bazează pe sistemul de numerotare H3[Citare97 ].
Descărcați CSVTabel de afișare

4.1. Variantele HA extind tropismul tisular și cresc susceptibilitatea celulei gazdă

HA este un determinant major al intervalului de gazdă datorită rolului său esențial în legarea receptorului
gazdă și fuziunea membranei în timpul intrării virale. Trimerul HA de pe membrana virală constă din două
domenii: un cap globular care conține un situs de legare la receptor și un domeniu tulpină proximală a
membranei. Locul de legare la receptor constă din trei elemente secundare, bucla de 130, helix de 190 și
buclă de 220 și include patru reziduuri foarte conservate (Y98, W153, H183 și Y195).Citare96 ]. Toate
pozițiile HA au fost bazate pe numerotarea H3 [Citare97 ]. Mutanții HA permit virusurilor să extindă
tropismul tisular, să schimbe specificitatea receptorului, să mărească legarea receptorului gazdă și să
optimizeze fuziunea membranei la diferite temperaturi sau medii cu pH.

4.1.1. Scindarea HA de către proteazele care activează gazda

Virusul gripei aviare cu patogenitate scăzută (LPAIV) al subtipurilor H5 și H7 poate suferi mutații în HPAIV,
în principal datorită dobândirii unui site de clivaj multi-bazic.Citare60 ]. Clivarea proteolitică mediată de
protează gazdă a moleculelor precursoare de HA HA0 la HA1 și HA2 activează o schimbare
conformațională a HA, care este esențială pentru fuziunea membranei și infecțiozitatea
virală.Citare98 ]. Prin urmare, distribuția proteazelor activatoare în gazdă este un determinant major al
tropismului tisular viral. Proteinele HA ale LPAIV-urilor și virusurilor gripale de mamifere conțin un singur
reziduu bazic la locul de clivaj și pot fi scindate numai de proteazele extracelulare ale gazdei, care
restricționează răspândirea virală la țesuturile în care sunt prezente proteaze specifice. Proteinele HPAIV
HA dobândesc un situs de clivaj multi-bazic, care permite scindarea intracelulară de către proteazele
prezente omniprezent, ducând la diseminarea sistemică a HPAIV și a bolii letale la păsările de curte.

4.1.2. Adaptarea gazdă dependentă de HA

Cu excepția virusurilor gripale de lilieci (HA17 și HA18), proteinele HA (HA1–16) recunosc acizii sialici
terminali (SA) ai glicoconjugaților de suprafață celulară ca receptori. Virusurile gripei aviare și ecvine se
leagă de preferință SA legată de galactoză printr-o legătură α-2,3 (α2,3-SA), în timp ce virusurile gripale
umane preferă SA legate α-2,6, iar virusurile gripale porcine se leagă eficient de
ambele.Citare99 ]. Afinitatea diferențială de legare la receptor este un determinant important al intervalului
de gazdă a virusului gripal și al patogenității virale. α2,3-SA este predominant în celulele epiteliale
intestinale ale păsărilor, permițând replicarea eficientă și eliminarea virusurilor gripei aviare. La om, α2,6-
SA este mai abundent în tractul respirator superior (URT) decât în tractul respirator inferior (LRT), în timp
ce α2,3-SA este mai abundent în plămâni. Virușii gripei umane se reproduc în principal în URT, provocând
boală ușoară, dar transmitere eficientă între oameni. Infecția cu virusul gripei aviare la om (zoonotică) se
reproduce mai bine în LRT decât în URT, rezultând o boală mai severă, dar o capacitate limitată de
transmitere.Citare99 ]. Prin urmare, virusurile gripei aviare trebuie să dobândească specificitate de legare a
receptorilor umani pentru infecția eficientă și transmiterea prin aer la om. Porcii au atât α2,3-SA, cât și
α2,6-SA în tractul respirator și pot acționa ca vase de amestec pentru virusurile gripei aviare și
umane.Citare100 ].

Aminoacizii care determină specificitatea de legare la receptor au fost definiți în multe subtipuri de HA, care
necesită, în general, două modificări ale reziduurilor în buzunarul de legare a receptorului, cum ar fi pozițiile
190 și 225 pentru virusurile H1N1, 226 și 228 pentru virusurile H2N2 și H3N2.Citare96 ]. Pentru virusurile
H1N1, D190 și D225 sunt asociate cu legarea α - 2,6, în timp ce E190 și G225 sunt asociate cu legarea α -
2,3 [Citare47 ,Citare48 ]. Proteina HA pandemică H1N1 1918, care conține reziduuri D190 și D225, leagă
exclusiv receptorii α - 2,6. Substituția D225G a condus la legarea mixtă α - 2,6 și α - 2,3, în timp ce
substituția D190E singură a dus la legarea α - 2,3. În concordanță cu specificitatea de legare a receptorului
α - 2,3, virusul pandemic recombinant 1918 cu mutații D190E/D225G a pierdut transmiterea respiratorie
între dihori [1]Citare49 ]. Virusul recombinant H1N1pdm 2009 cu D225G a avut o specificitate dublă de
legare la receptor pentru α-2,6 și α-2,3-SA și a afișat o legare crescută la LRT uman, dar a păstrat totuși
transmisia de aerosoli la gazdele mamifere.Citare51 ], care ajută la explicarea bolii severe asociate cu
D225G în timpul pandemiei din 2009. Pentru virusurile H2N2 și H3N2, L226 și S228 sunt asociate cu
legarea α - 2,6, în timp ce Q226 și G228 sunt asociate cu legarea α - 2,3 [Citare52 ]. Substituțiile Q226L și
G228S au schimbat legarea receptorilor de la α - 2,3 la α - 2,6, ceea ce a contribuit la apariția infecțiilor
pandemice H2N2 din 1957 și H3N2 din 1968.

S-a demonstrat, de asemenea, că Q226L și G228S cresc specificitatea de legare α - 2,6 a altor subtipuri
de HA aviare (H5, H7, H9, H10 și H15). Cu toate acestea, trecerea acestor proteine HA la preferința
receptorului uman necesită, în general, mutații suplimentare [Citare33 ,Citare57 ] (tabelul 1).

În afară de substituțiile pentru comutarea specificității de legare la receptor, sunt necesare alte mutații care
cresc stabilitatea HA și/sau legarea generală a receptorului pentru adaptarea gazdei. Mutageneza
direcționată la locul și adaptarea experimentală a unui virus aviar H5N1 au arătat că transmisibilitatea prin
aer la dihori necesită doar trei până la patru substituții în proteina H5, în afară de substituțiile în genele
polimerazei.Citare28 ,Citare32 ]. Printre substituțiile H5, Q226L sau G228S au crescut specificitatea de
legare a receptorilor la mamifere, H110Y a modificat stabilitatea acidă și a temperaturii a HA, iar T160A a
crescut legarea generală a receptorului [1].Citare32 ,Citare36 ,Citare37 ]. Un alt studiu experimental de
adaptare [Citare31 ] au arătat că un virus reasortant generat de laborator necesită patru substituții (N158D,
N224K, Q226L și T318I) în cadrul proteinei H5 pentru a fi transmis între dihori prin aerosoli sau picături
respiratorii. N158D, N224K și Q226L permit trecerea la legarea la receptorul uman [Citare31 ,Citare36 ], în
timp ce T318I crește stabilitatea la căldură și scade pragul de pH al HA în timpul fuziunii membranei
[36]Citare37 ,Citare59 ]. Deoarece mutațiile de legare la receptorii umani în H5 reduc stabilitatea termică a
HA și cresc pragul de pH pentru fuziunea membranei, mutațiile compensatorii, cum ar fi T318I, care
inversează efectele pot facilita transmiterea respiratorie a virusului aviar la om.Citare101 ].

Apariția virusurilor gripei aviare H7N9 în China care provoacă infecții zoonotice cu CFR ridicat din 2013 a
atras o atenție considerabilă din cauza evoluției lor continue și a riscului potențial de pandemie. Majoritatea
izolatelor zoonotice H7N9 se leagă atât de receptorii umani, cât și de cei
aviari.Citare102 ,Citare103 ]. Substituțiile Q226L și G186V au explicat creșterea legării α - 2,6 SA
[Citare39 ,Citare56 ], dar nu au fost suficiente pentru schimbarea specificității receptorului. O combinație de
trei substituții, V186G/K-K193T-G228S sau V186N-N224K-G228S, este suficientă pentru a comuta
specificitatea receptorului H7N9 de la tipul aviar la cel uman.Citare44 ], dintre care, G228S este un
determinant cunoscut pentru legarea receptorilor umani, V186G/K/N pierde legarea α - 2,3 și crește
legarea α - 2,6, iar N224K crește legarea globală a receptorului [Citare31 ,Citare35 ,Citare44 ].

4.2. Substituțiile în genele interne cresc replicarea virală în celulele țintă

Genele interne ale virusului gripal, inclusiv trei proteine polimeraze (PB2, PB1 și PA), NP și M1, conțin
markeri importanți de virulență care cresc replicarea virală și producția de descendență. Genele
polimerazei joacă un rol critic în replicarea adaptivă a virusurilor gripei aviare.Citare72 ]. Aceste mutații
adaptive ale proteinelor polimerazei cresc în general activitatea polimerazei în celulele de
mamifere. Determinantul major al virulenței și markerul adaptiv al mamiferelor este PB2
E627K.Citare68 ,Citare69 ]. Virusurile gripei aviare au, în general, E627, în timp ce toți virusurile umane și
multe virusuri gripale zoonotice au K627, cu excepția virusului H1N1pdm 2009. O altă substituție
adaptativă la mamifere este PB2 D701N, care s-a dovedit că extinde gama de gazdă a virusului aviar
H5N1 la șoareci și oameni și că crește transmiterea virală la cobai.Citare69 ,Citare71 ]. În mod
surprinzător, 2009 H1N1pdm nu a avut nici E627K, nici D701N; introducerea K627 și N701 nu a sporit
virulența sau transmiterea la dihori sau șoareci [Citare104 ].

Studiile au arătat că mutațiile adaptative ale polimerazei, în special PB2 E627K, sunt cauzate de
diferențele specifice speciilor în proteinele ANP32, care sunt factori esențiali ai gazdei pentru sinteza ARN
viral.Citare105–107 ]. Comparativ cu ANP32A aviar, ANP32A uman nu are o inserție de 33 de aminoacizi
în domeniul dezordonat C-terminal, care permite legarea PB2 K627, dar nu a PB2
E627.Citare108 ,Citare109 ]. Atât omologii umani ANP32A, cât și ANP32B pot sprijini sinteza ARN viral
prin polimeraze virale gripale umane sau polimeraze virale aviare cu mutația adaptivă PB2
E627K.Citare110 ,Citare111 ]. Alte mutații ale polimerazei, cum ar fi PB2 K562R, PA A343T și K356R, pot
coopera cu PB2 E627K pentru a crește sinergic activitatea polimerazei
virale.Citare40 ,Citare67 ,Citare80 ]. Un alt mecanism de adaptare a fost demonstrat pentru izoformele
importin-α gazdă, care mediază importul nuclear al vRNP-urilor și proteinelor virale pentru sinteza ARN
viral.Citare112 ]. PB2 și NP aviar depind de importin-α3, în timp ce mamiferele PB2 și NP folosesc în
primul rând importin-α7.Citare112 ]. Mutația adaptivă PB2 D701N îmbunătățește interacțiunea dintre PB2 și
importin-α7 pentru a promova importul nuclear vRNP în celulele de
mamifere.Citare112 ,Citare113 ]. Multiple determinanți de virulență sau mutații adaptive au fost identificați
în proteinele PB2, PB1, PA și NP, care funcționează pentru a crește activitatea polimerazei virale aviare în
celulele mamiferelor (tabelul 1), deși mecanismele lor de adaptare nu au fost bine caracterizate.

Fiind motorul major al înmuguririi și asamblarii virale, M1 contribuie, de asemenea, la virulență prin
creșterea replicării virale. Un studiu anterior a constatat că D30 și A215 contribuie la patogenitatea ridicată
a virusurilor aviare H5N1 la șoareci și că mutațiile duble D30N/A215T au atenuat în mod semnificativ mai
mulți virusuri H5N1 la șoareci.Citare114 ]. Substituția M1 A215T elimină SUMOilarea lui M1, ceea ce duce
la o reducere semnificativă a stabilității M1, exportului nuclear vRNP, replicarea virală și producția de
descendență virală.Citare115 ]. Substituția D30N modifică forma particulelor virale H5N1 de la filamentos la
sferic, deși mecanismul prin care forma virionului afectează patogenitatea virală este
necunoscut.Citare115 ]. M1 T37A al virusului H9N2 elimină locul de fosforilare pentru a stabiliza proteina
M1 și crește replicarea virală la șoareci și celulele umane.Citare116 ].
4.3. Antagonismul viral al imunității antivirale a gazdei
La fel ca toți ceilalți virusuri, virusurile gripale trebuie să depășească imunitatea antivirală a gazdei pentru o
replicare eficientă. Proteina virală NS1 este un factor cheie de virulență cunoscut că afectează răspunsurile
antivirale ale gazdei prin diferite mecanisme (revizuit în [Citare117 ]). S-a demonstrat că NS1
interacționează cu mulți factori virali și gazdă prin domeniile sale funcționale, inclusiv un domeniu de legare
a ARN-ului N-terminal (RBD) (aa 1–73), o regiune linker (aa 74–88), un domeniu efector ( ED) (aa 89–202)
și o coadă C-terminală de lungime variabilă [Citare118 ]. Multe dintre funcțiile NS1 sunt specifice tulpinii
datorită variațiilor de secvență ale diferitelor proteine NS1. O singură substituție a P42S în RBD NS1 a
prevenit activarea mediată de dsARN a căilor NF-κB și IRF - 3 și a crescut drastic patogenitatea unui virus
H5N1 la șoareci.Citare119 ]. Substituția NS1 I106M într-un virus H7N9 a crescut legarea acestuia de
CPSF30 și a blocat expresia genei gazdei, ceea ce duce la o infecție mai virulentă in
vivo.Citare120 ]. Două mutații NS1, D189N și V194I, prezente în virusurile H3N2 umane circulante
afectează capacitatea acestora de a inhiba expresia genei gazdă și de a atenua virulența virală la șoareci,
în timp ce NS1 V194I afectează termosensibilitatea replicării virale și atenuează în continuare virulența
virală.Citare120 ,Citare121 ]. Virușii gripali recombinanți care exprimă NS1 uman (din H1N1 sau H3N2
uman) au indus niveluri mai mari de interferoni de tip I și III (IFN-I/III) decât cei care exprimă NS1 aviar (din
H5N1, H7N9 și H7N2 aviar) în celulele dendritice (DC) , sugerând că NS1 aviar are o capacitate crescută
de a antagoniza producția de IFN-I/III [Citare122 ].

Proteina PA-X este exprimată din ARNm PA prin deplasarea cadrului ribozomal [Citare123 ]. Are aceleași
reziduuri N-terminale 191 ca PA, care conține domeniul endonucleazei și un domeniu C-terminal unic, care
are o lungime de 61 aa pentru majoritatea izolatelor virale, inclusiv virusurile H1N1pdm 1918 și aviare, dar
este mai scurt (41 aa) în virusul H1N1pdm 2009 [Citare123 ]. PA-X vizează selectiv ARNm-urile celulare,
dar nu ARNm-urile virale pentru degradare, ceea ce duce la oprirea proteinei gazdă și la inhibarea
răspunsurilor antivirale celulare.Citare118 ,Citare123 ]. PA-X modulează, de asemenea, răspunsurile
gazdei, cum ar fi inflamația, răspunsurile imune și apoptoza. Mecanismul funcțional al PA-X în suprimarea
imună înnăscută este revizuit în detaliu [Citare118 ]. Studiile asupra virusurilor gripale cu deficit de PA-X au
sugerat că rolurile biologice ale PA-X în replicarea virală și patogenitatea sunt specifice gazdei și
tulpinii.Citare118 ]. S-a demonstrat că PA-X scade patogenitatea la șoareci prin modularea răspunsurilor
gazdei în urma infecției cu virusul H1N1pdm 1918, tulpina H1N1pdm 2009 (A/Beijing/16/2009 (BJ/09),
virusurile HPAI H5N1 și tulpinile H1N1 circulante.Citare123–125 ]. Alte studii, totuși, au arătat un rol pro-
virulență al PA-X în tulpina H1N1pdm 2009 A/California/04/09, H9N2 aviară și A/PR8 la șoareci.Citare126–
129 ].

PB1-F2 este o proteină mică exprimată în gena PB1 prin schimbarea cadrului de citire + 1 [Citare130 ] și
este un factor major de virulență care modulează răspunsurile imune înnăscute ale gazdei (revizuit în
[Citare131 ]). Expresia PB1-F2 este detectată în multe, dar nu în toate, tulpinile de gripă A și nu este
detectată în virusurile gripale B [Citare130 ]. Proteinele PB1-F2 variază în lungime și secvență. Ca atare,
rolul PB1-F2 în virulența virală este specific tulpinii și gazdei.Citare131 ]. Diferite proteine PB1-F2 pot
modifica în mod diferențial răspunsurile IFN-I, răspunsurile inflamatorii și moartea celulelor imune,
contribuind la virulența virală și la patogenitatea.Citare131 ]. O singură mutație N66S în proteina PB1-F2
este asociată cu patogenitatea ridicată a virusurilor 1918 H1N1pdm și HPAIV H5N1.Citare94 ]. PB1-F2 al
virusului H1N1pdm 1918, dar nu al virusului A/PR8, se leagă de DDX3 și provoacă degradarea acestuia
[Citare132 ], ceea ce poate explica patogenitatea severă a virusului pandemic din 1918. PB1-F2 al virusului
H7N9 extrem de patogen, dar nu al virusului A/WSN, este un inhibitor puternic al MAVS, un mediator
esențial al semnalizării antivirale, prin formarea de agregate în mitocondrii pentru a preveni agregarea și
activarea MAVS, ducând la suprimarea Producția de IFN-I și activarea NLRP3 mediată de MAVS
[Citare133 ]. H7N9 PB1-F2, totuși, nu afectează maturarea extracelulară a inflamazomului NLRP3, în
contrast puternic cu PB1-F2 al virusului A/WSN, care suprimă eficient procesarea și secreția IL-1β de către
toți stimulii.Citare134 ]. Astfel, funcția diferențială a PB1-F2 poate explica furtuna de citokine foarte ridicată
observată în infecția cu H7N9, dar nu și în infecția cu WSN.Citare134 ].

5. Răspunsurile imune ale gazdei: protecție imună sau imunopatogeneză

Răspunsul imun al gazdei împotriva infecțiilor virale gripale joacă un rol important în determinarea
patogenezei bolii.Citare135 ]. Un răspuns imunitar puternic și reglat fin poate controla și elimina eficient
infecția virală fără daune semnificative, în timp ce s-a demonstrat că un răspuns inflamator excesiv și/sau
prelungit provoacă leziuni tisulare și exacerbarea bolii. Elucidarea mecanismelor de protecție imună și
imunopatogeneză este crucială pentru dezvoltarea unor terapii eficiente împotriva gripei.
5.1. Activarea timpurie a imunității înnăscute se corelează cu protecția
La infecție, virusurile gripale sunt recunoscute de sistemul imunitar înnăscut prin diferite clase de receptori
de recunoaștere a modelelor (PRR), receptori de tip Toll legați de membrană (TLR3, TLR7 și TLR8),
receptorul citosol RIG-I și receptorul asemănător NOD. familia NLRP3 [Citare136 ]. Activarea căilor de
semnalizare TLR și RIG-I duce la suprareglarea IFN-I/III și a citokinelor proinflamatorii. IFN-urile acționează
prin semnalizare paracrină și autocrină pentru a induce expresia genelor care stimulează interferonul
(ISG), dintre care multe exercită activități antivirale pentru a restricționa replicarea virală. Citokinele
proinflamatorii activează celulele fagocitare, recrutează celule imune suplimentare la locul infecției și
contribuie la inițierea imunității adaptive. Inflamazomul NLRP3 declanșează clivajul proteolitic și eliberarea
de citokine IL-1β și IL-18 și provoacă piroptoza în celulele infectate.Citare136 ]. Rolurile protectoare ale
acestor căi imune înnăscute împotriva infecției cu virusul gripal au fost demonstrate în diferite modele de
animale knockout. Unele ISG-uri au demonstrat o activitate antivirală puternică. Mx este un factor de
restricție bine cunoscut pentru virusul gripal. IFITM-urile blochează fuziunea membranei virus-gazdă. 2'-5'-
oligoadenilat sintaza (OAS) și RNaza L degradează ARN viral. PKR se leagă de ARNdc și blochează
translația proteinei prin fosforilarea factorului de inițiere a translației eucariote 2α (EIF2α). Au fost
identificați și alți factori antivirali care blochează replicarea virusului gripal prin diferite mecanisme (revizuite
în [Citare136 ]).

Activarea timpurie a imunității înnăscute robuste se corelează cu protecția gazdei împotriva infecțiilor virale
gripale la modelele animale. Un virus H7N9 extrem de patogen a provocat letalitate completă la șoareci cu
un titru de virus pulmonar ridicat, în timp ce virusul H9N2 a provocat o infecție ușoară și auto-rezolvată. În
comparație cu H7N9, infecția cu H9N2 a dus la inducerea precoce și tranzitorie a imunității înnăscute, așa
cum este evidențiată de reglarea în sus a IFN-Is, ISG-urilor, markerilor celulelor imune și a genelor
proinflamatorii.Citare137 ,Citare138 ]. Macrofagele au fost recrutate în plămâni într-un moment mult mai
devreme (încă de la 6 ore) pentru infecția cu H9N2 decât pentru infecția cu H7N9 (ziua 3).Citare137 ]. Co-
infecția cu H9N2 a dus la o protecție eficientă atât împotriva infecțiilor cu H7N9, cât și împotriva infecțiilor
PR8 (H1N1), susținând rolul protector al imunității înnăscute timpurii.Citare137 ].

5.2. Efectul patogen al activării accelerate a răspunsurilor proinflamatorii

Studiile asupra bolilor virale gripale severe atât la oameni, cât și la animale au demonstrat efectul patologic
al hiperactivării răspunsurilor imune împotriva replicării virale crescute. Virusul 1918 H1N1pdm este extrem
de virulent și provoacă o rată a deceselor anormal de mare la adulții tineri, vârstnici și
sugari.Citare2 ]. Șoarecii și primatele non-umane infectate cu virusul reconstruit H1N1pdm 1918 au
demonstrat o activare marcată și prelungită a căilor proinflamatorii și a morții celulare, sugerând că
activarea accelerată a răspunsului imun al gazdei contribuie la o patologie pulmonară
severă.Citare95 ,Citare139 ]. Studiile virologice și imunologice ale cazurilor mortale umane de infecții
aviare H5N1 și H1N1pdm din 2009 sugerează că o încărcătură virală ridicată și răspunsurile inflamatorii
intense rezultate sunt esențiale pentru patogenia bolii.Citare18 ,Citare140–142 ]. Virusul aviar H7N9 a
provocat un fenotip mai sever la animale decât H9N2 și H3N2 sezonier, iar severitatea bolii s-a corelat cu o
infecțiozitate crescută și o inducere crescută a citokinelor proinflamatorii.Citare143–146 ]. Nivelurile
excesive de citokine proinflamatorii, cum ar fi IL - 6, IL - 8, IP10, G-CSF, MCP - 1 și MIP - 1α, sunt asociate
cu inflamația pulmonară și leziunile tisulare în leziunile pulmonare acute cauzate de virusul gripal și SARS-
infecții cu CoV-2, precum și în astm și boala pulmonară obstructivă cronică
[Citare95 ,Citare145 ,Citare147 ,Citare148 ]. Rolurile imunopatogene ale furtunilor de citokine și ale
celulelor imune înnăscute au fost revizuite [Citare149 ].

5.3. Rolurile antivirale și imunopatologice ale macrofagelor

Macrofagele sunt celule imune înnăscute importante care protejează împotriva infecțiilor virale prin
secretarea de citokine, inițierea imunității adaptative și curățarea resturilor și a celulelor
moarte.Citare150 ]. Macrofagele alveolare sunt macrofage rezidente în țesuturi care joacă un rol esențial în
protecția împotriva morbidității și mortalității induse de virusul gripal.Citare86 ]. Cu toate acestea, activarea
excesivă a citokinelor în macrofage contribuie la leziunile pulmonare și la severitatea
bolii.Citare141 ,Citare151 ]. Astfel, activarea controlată a macrofagelor este critică pentru rolul lor protector
în urma infecțiilor virale gripale. Studii recente au arătat că semnalizarea celulară Wnt/β-catenina/HIF-1α și
factorul transcripțional PPAR-γ funcționează pentru a promova activitatea inflamatorie a macrofagelor
alveolare.Citare90 ,Citare152 ], iar reglarea în jos a PPAR-γ în urma semnalizării antivirale IFN-I este
critică pentru suprimarea răspunsului inflamator exagerat [152]Citare152 ].
Macrofagele sunt susceptibile la infecția virală gripală; cu toate acestea, majoritatea infecțiilor sunt abortive
și doar un număr mic de viruși pot produce particule infecțioase prin depășirea blocurilor
celulare.Citare87 ,Citare88 ,Citare153 ]. Virușii care infectează productiv macrofagele alveolare murine
primare includ un subset de virusuri H5N1 foarte patogeni și viruși A/WSN. Chiar dacă replicarea
productivă în macrofage nu determină doar virulența virală in vivo, ea scade funcția fagocitară a
macrofagelor și, prin urmare, poate contribui la dezvoltarea bolii.Citare88 ].

Tulpinile de virus gripal pot, de asemenea, modula în mod diferențial polarizarea macrofagelor, ducând fie
la stare antivirală, fie la starea patogenă.Citare89 ]. Macrofagele sunt foarte eterogene și includ două
subclase majore: macrofage proinflamatorii M1 și antiinflamatorii M2. Macrofagele M1 sunt activate la
începutul infecției pentru a secreta citokine inflamatorii, cum ar fi IL-1, IL-6 și TNF-α și declanșează
răspunsuri antivirale. Macrofagele M2 sunt activate mai târziu în timpul infecției pentru a opri inflamația, a
repara leziunile tisulare și pentru a produce TGF-β și IL-10.Citare154–156 ]. Studii recente au sugerat că
macrofagele M2 sunt benefice pentru infecția gripală, în timp ce polarizarea M1 este asociată cu leziuni
pulmonare acute în boala gripală severă.Citare155 ,Citare157 ,Citare158 ]. Astfel, comutarea polarizării
macrofagelor de la M1 la M2 poate fi o terapie nouă pentru bolile gripale.Citare159 ,Citare160 ].

5.4. Rolurile antivirale și imunopatogenice ale celulelor T

Atât celulele T CD4, cât și CD8 sunt componente importante ale imunității adaptive pentru a elimina
infecțiile virale și pentru a proteja gazda de boli severe.Citare161 ,Citare162 ]. Celulele T CD4 specifice
gripei preexistente sunt asociate cu o excreție virală mai scăzută și o boală mai puțin severă la voluntarii
sănătoși după infecția virală gripală.Citare91 ]. Transferul adoptiv al celulelor T CD4 de memorie
protejează șoarecii neamorși [Citare92 ]. De asemenea, s-a demonstrat că celulele T CD8 de memorie
oferă protecție reactivă încrucișată [Citare93 ,Citare163 ]. O comparație a imunității gazdei la pacienții
spitalizați după infecția zoonotică cu H7N9 cu diverse rezultate ale bolii a relevat un rol protector important
al celulelor T CD8 de memorie împotriva bolii gripale severe.Citare164 ,Citare165 ]. Pacienții cu recuperare
precoce au prezentat un răspuns precoce robust al celulelor T CD8 specifice H7N9, în timp ce cei cu
spitalizare prelungită au arătat recrutarea tardivă a celulelor T CD4 și CD8. În schimb, pacienții decedați au
prezentat o imunitate minimă specifică gripei și o mică activare a celulelor T.Citare164 ]. Aceste studii
sugerează că un răspuns precoce al celulelor T cu memorie puternică poate ajuta la reducerea severității
bolii. În schimb, celulele T hiperactive pot fi dăunătoare deoarece provoacă leziuni tisulare și/sau
declanșează răspunsuri inflamatorii.Citare162 ,Citare166 ].

Celulele T cu memorie rezidentă în țesut (TRM ) joacă un rol important în apărarea de primă linie împotriva
reinfecției.Citare167 ]. Celulele pulmonare CD8 T RM mediază protecția împotriva infecțiilor respiratorii prin
producerea de răspunsuri efectoare imediate la locul de intrare a agentului patogen; cu toate acestea,
răspunsurile intense pot provoca, de asemenea, inflamație și leziuni tisulare [Citare168 ]. S-a demonstrat
că celulele pulmonare CD8 + T RM adoptă fenotipuri asemănătoare epuizarii pentru a evita inflamația post-
infectie și sechelele fibrotice după infecția virală gripală.Citare169 ]. Cu toate acestea, la gazdele în vârstă,
celulele CD8 T RM pulmonare prezintă disfuncționalități în răspunsul antiviral și susțin inflamația pulmonară
cronică și sechelele fibrotice.Citare170 ], care ajută la explicarea pneumoniei severe la vârstnici după
infecția virală gripală.

6. Factorii gazdă și semnalizarea celulelor contribuie la replicarea și

patogeneza virală

6.1. Factori gazdă pro-virali

Ca toate celelalte infecții virale, virusurile gripale se bazează pe factorii gazdă și pe mașinile celulare
pentru a se reproduce (Figura 3). Sute de factori gazdă pro-virali au fost identificați prin knockout-ul sau
knockout-ul genomului la nivelul întregului genom de către CRISPR sau ARNi și prin analiza proteomică a
proteinelor celulare asociate proteinelor virale.Citare171 ]. Validarea rolurilor funcționale ale fiecărui
candidat în infecția cu virusul gripal și caracterizarea mecanismelor lor moleculare necesită efort și resurse
extraordinare. Limitat de spațiu, doar unii factori proviral gazdă sunt rezumați pe scurt aici.

Figura 3. Factorii gazdă pro-virali și căile de semnalizare a gazdei importante pentru replicarea virusului
gripal. Factorii gazdă și căile de semnalizare celulară sunt deturnate de virusul gripal pentru a promova
replicarea virală în diferite etape ale ciclului de viață viral. Factorii gazdă sunt listați în casetele de culoare
verde deschis lângă pasul specific al replicării virale. Receptorii tirozin kinaze (EGFR, c-Met, TrkA) de pe
membranele plasmatice sunt activate de infecția virală gripală și funcționează pentru a promova replicarea
virală. EGFR, c-Met și PLC-y1 îmbunătățesc absorbția virală. Semnalizarea TrkA este importantă pentru
mai multe etape ale ciclului de viață viral: sinteza ARN viral, exportul nuclear vRNP și înmugurirea și
eliberarea virală. Semnalizarea NF-kB îmbunătățește sinteza ARN viral și induce expresia genelor
proinflamatorii. Căile PI3K/Akt și Raf/MEK/ERK cresc, de asemenea, puternic replicarea virală.

Afișează dimensiunea completă

Intrarea virală include atașarea, absorbția și fuziunea, iar fiecare pas implică mai mulți factori
gazdă. Atașarea virală necesită acizi sialici ai glicoproteinelor de suprafață celulară sau
glicolipidelor. Captarea virală prin endocitoză are loc prin acțiuni coordonate ale proteinelor endocitare
celulare. Factorii gazdă care promovează internalizarea virusului gripal includ receptorul 2 al acizilor grași
liberi (FFAR2) și superfamilia superfamiliei imunoglobulinelor proteinelor transmembranare DCC subclasa
membru 4 (IGDCC4) [Citare172 ,Citare173 ]. Odată internalizate, particulele virale se deplasează de la
endozomii timpurii la cei tardivi, unde au loc fuziunea și neacoperirea pentru a elibera vRNP-
urile. Prolidaza (PEPD) este importantă pentru traficul endozomal timpuriu al particulelor
virale.Citare174 ]. Cisteina proteaza catepsina W (CtsW) și fosfataza acidă lizozomală 2 (ACP2) sunt
necesare pentru fuziunea virală.Citare175 ,Citare176 ]. S-a demonstrat că substratul 8 al căii receptorului
factorului de creștere epidermic al factorului celular (EPS8) promovează neacoperirea virală a
gripei.Citare177 ].

Componentele virusului gripal trebuie să călătorească între citoplasmă și nucleu, deoarece sinteza ARN
viral are loc în nucleu, în timp ce sinteza proteinelor virale și asamblarea particulelor virale au loc în
citoplasmă. Virusul gripal folosește mașinile de trafic nucleocitoplasmatic celular pentru importul și exportul
nuclear de vRNP, ARNm viral și proteine virale.Citare178 ]. Importul nuclear depinde de proteinele
importine celulare [Citare179 ] și este îmbunătățită de subunitatea β1 a proteinei G (GNB1), care crește
interacțiunea dintre proteinele PB2 și importină [179]Citare180 ], și de către BinCARD1, o izoformă a
proteinei care interacționează cu Bcl10 cu CARD (BinCARD), care a crescut legarea NP cu importina α7
[180].Citare181 ]. Exportul nuclear de ARNm viral utilizează mașinile de export de ARNm gazdă pentru a
se transloca prin complexul de pori nucleari pentru translație în citoplasmă.Citare182 ]. Mulți factori celulari
sunt implicați în diferite etape ale sintezei ARN viral și au fost revizuiți [Citare183 ]. VRNP-urile nou
sintetizate trebuie să se acumuleze la membrana plasmatică pentru asamblare. Traficul citoplasmatic al
vRNP-urilor descendenți depinde de asocierea lor cu izoforma celulară Rab11 GTPază
RAB11A.Citare184 ] în reciclarea endozomilor de-a lungul rețelei de microtubuli, vezicule alternative sau
organite în fază lichidă (revizuite în [Citare185 ]).

Proteinele matricei virale M1 și M2 joacă un rol central în asamblarea și înmugurirea virală. S-a demonstrat
că factorii gazdă care interacționează cu M1 își modulează funcțiile. GNB1 se leagă de M1 prin trafic
intracelular la membrana plasmatică și promovează eliberarea virală.Citare186 ]. PSMD12, o subunitate de
reglare a proteazomului 26S, mediază ubiquitinarea M1 legată de K63 la K102 pentru a promova
înmugurirea virală.Citare187 ]. Fosforilarea M1 la nivelul situsului T108 crește multimerizarea la nivelul
membranei celulare și controlează afinitatea acesteia de legare la complexul de fosfatază și kinază care
interacționează cu striatină celulară (STRIPAK), care este important pentru polimerizarea M1 și replicarea
virală.Citare188 ].

6.2. Căi de semnalizare a gazdei pro-virale

Pe lângă răspunsurile antivirale, diferite căi celulare sunt activate de infecțiile cu virusul gripal și exploatate
pentru a sprijini replicarea virală. Receptor-tirozin kinazele (RTK) și căile lor de semnalizare în aval
(Raf/MEK/ERK, fosfatidilinozitol - 3-kinaza (PI3K)/Akt, JAK/STAT, PLC-γ1, NF-kB) s-au dovedit a facilita
replicarea virală prin diferite mecanisme [Citare189 ]. Infecția cu virusul gripal activează multe RTK, cum ar
fi receptorul factorului de creștere epidermic (EGFR), c-Met și kinaza A a receptorului de tropomiozină
(TrkA), posibil prin gruparea plutelor lipidice induse de legarea virusului
multivalent.Citare190 ,Citare191 ]. EGFR activat și c-Met promovează absorbția virală eficientă
[Citare190 ]. Inhibarea EGFR de către compuși mici sau antagonistul proteic SOCS5 reduce replicarea
virusului gripal [Citare192 ,Citare193 ]. În plus față de promovarea directă a pătrunderii virale, s-a
demonstrat că activarea EGFR suprimă producția de IFN-I/III și răspunsul antiviral.Citare194 ,Citare195 ],
crescând în continuare producția virală. Cu toate acestea, rolul semnalizării EGFR în boala gripală ar putea
fi complex. EGFR a fost prezis a fi un regulator cheie al patogenității virale prin analizele bazate pe rețea
ale datelor transcriptomice și proteomice de la șoareci infectați cu șase tulpini de virus gripal cu severitate
diferențială a bolii.Citare196 ]. Tratamentul șoarecilor infectați cu virus cu inhibitorul EGFR gefitinib a
provocat o pierdere mai mare în greutate corporală după infecții neletale, dar nu și după infecții
letale.Citare196 ], sugerând un rol antiviral al EGFR în timpul infecțiilor neletale.

TrkA este un alt RTK activat de infecția cu virusul gripal, dar are roluri funcționale post-intrare în ciclul de
replicare virală.Citare191 ]. TrkA și ligandul său de mare afinitate, factorul de creștere a nervilor (NGF),
sunt esențiale pentru dezvoltarea și funcțiile celulelor neuronale.Citare197 ]. TrkA este, de asemenea,
exprimată într-o mare varietate de țesuturi și tipuri de celule non-neuronale, inclusiv celule epiteliale și
endoteliale pulmonare umane.Citare198 ] și joacă un rol important în inflamația alergică a căilor respiratorii
[Citare199 ,Citare200 ]. Inhibitorii TrkA blochează replicarea virusului gripal în mai mulți pași după intrarea
virală, sinteza ARN viral, exportul nuclear vRNP și înmugurirea și eliberarea
virală.Citare201 ,Citare202 ]. Folosind un model de mouse TrkA F592A knock-in pentru a controla în mod
specific activitatea kinazei TrkA [Citare203 ], Verma şi colab. a arătat că TrkA nu numai că promovează
replicarea virusului gripal în celulele epiteliale ale căilor respiratorii, dar contribuie și la inflamarea căilor
respiratorii și la patologia plămânilor prin activarea expresiei citokinelor/chemokinelor proinflamatorii în
celulele infectate.Citare191 ]. Astfel, țintirea TrkA ar putea fi un tratament eficient împotriva bolilor virale
gripale prin blocarea atât a replicării virale, cât și a inflamației căilor respiratorii.

NF-kB este un mediator major al citokinelor proinflamatorii, care poate exercita activități
antivirale.Citare204 ,Citare205 ] sau mediază răspunsurile inflamatorii patogene
[Citare206 ,Citare207 ]. Interesant este că multe studii au demonstrat un rol pro-viral pentru NF-kB în
replicarea virusului gripal.Citare208–212 ], în special în promovarea replicării ARN viral
[Citare208 ,Citare209 ,Citare213 ,Citare214 ], sugerând că virusurile gripale pot converti această cale
antivirală și proinflamatoare pentru replicarea virală. Descoperiri similare au fost observate pentru PI3K, a
cărui activare prin infecția virală gripală [Citare215–217 ] sa demonstrat că promovează producția de IFN-I
prin semnalizarea RIG-I [Citare217 ]. Cu toate acestea, s-a descoperit că inhibitorii PI3K suprimă puternic
replicarea virusului gripal în mai multe etape ale ciclului de viață viral.Citare218–220 ], demonstrând un rol
pro-viral al semnalizării PI3K. În plus, s-a demonstrat că inhibitorii căii Raf/MEK/ERK inhibă puternic IAV-
urile și IBV-urile in vitro și in vivo.Citare221–224 ]. Semnalizarea fosfolipazei C gamma 1 (PLC-y1) este
specifică virusului și tipului celular. PLC-γ1 activat are un rol pro-viral important în captarea celulară a
virusului H1N1, dar nu a virusului H3N2, în celulele epiteliale.Citare225 ], în timp ce exercită un rol antiviral
și inflamator în macrofagele infectate cu H1N1 prin activarea NF-kB pentru a exprima citokinele inflamatorii
într-o buclă de feedback pozitiv [225]Citare226 ].

Se așteaptă ca infecția virală să activeze rețeaua de semnalizare a gazdei, ducând la diferite răspunsuri
celulare, cum ar fi stresul, inflamația și moartea celulară, care pot restricționa infecția virală (antivirale) și
pot provoca simptome ale bolii (proinflamatorii). Virușii gripali nu numai că antagonizează răspunsurile
antivirale, ci și deturnează rețeaua de semnalizare activată pentru a realiza eficient diferite etape ale
ciclului de viață viral (rol pro-viral). Astfel, țintirea căilor proviale și/sau proinflamatorii în celulele infectate
cu virusul gripal poate fi dezvoltată ca terapie antigripală eficientă.Citare191 ,Citare210–212 ,Citare227 ],
care, spre deosebire de inhibitorii țintelor unice virale sau gazdă, are în general o barieră ridicată la
rezistență [Citare193 ,Citare201 ,Citare210 ]. Rolurile căilor de semnalizare a gazdei în replicarea virală și
severitatea bolii, cu toate acestea, pot fi specifice virusului și tipului celular și trebuie evaluate cu atenție
pentru dezvoltarea terapeutică.

rezumat

Evoluția continuă a virusurilor gripale, determinată de deriva (mutația) și schimbarea (reasortiment)

antigenică, reprezintă o barieră majoră în calea dezvoltării de vaccinuri și terapii antivirale eficiente. Gripa
severă este cauzată de efectele citopatice virale directe și imunopatogeneză. Această revizuire rezumă
determinanții virali și componentele gazdei care afectează patogenitatea și virulența virusului gripal. Sunt
necesare studii suplimentare pentru a caracteriza mecanismele moleculare ale determinanților de virulență
virală și factorii gazdă pro-virali, elucidarea rolurilor complexe ale imunității gazdei și căilor celulare în
replicarea virală și dezvoltarea bolii și identificarea mecanismelor de control al rolurilor protectoare și
patogenice ale gazdei. semnalizare și răspunsuri imune. Aceste cunoștințe vor facilita dezvoltarea de noi
clase de medicamente antivirale care vizează diferite componente virale și gazdă, precum și noi terapii
care exploatează roluri antivirale și atenuează efectele patogene ale semnalizării gazdei și ale
răspunsurilor imune.

Declarație de partajare a datelor

Partajarea datelor nu se aplică acestui articol, deoarece nu au fost create sau analizate date noi în acest
studiu.