Disciplina de reproducie obstetric i ginecologie Anul VI medicin veterinar CURSUL nr.

2
NSMNRILE ARTIFICIALE prima generaie de biotehnici de reproducie realizarea rapid a progresului genetic la animale IA la bovine, ovine, caprine, suine, cabaline, canide, felide, psri i chiar insecte (Hafez, 1993) 1789 abatele Spallanzani, pui de cine avantaje: 1. realizarea progresului genetic; 2. controlul bolilor cu transmitere sexual; 3. disponibilitatea evidenelor de reproducie riguroase, indispensabile unui bun management reproductiv; 4. randament i implicit,profit economic. RECOLTAREA, EXAMENUL I PRELUCRAREA SPERMEI N VEDEREA CONSERVRII Managementul masculilor n vederea recoltrii spermei condiiile asigurate masculilor alimentaia - carene (pubertate ntrziat; infertilitate) alimentaia - excese (ngrare; caracteristici sperm) dimensiunile testiculare - corelate cu potenialul produciei spermatice recoltarea spermei saltul i procedurile de stimulare frecvena recoltrii spermei (taur, berbec, vier, armsar, cine) metode utilizate (vaginul artificial, electroejacularea, masajul transrectal) Examenul spermei evaluarea spermei i fertilitatea - cel mai frecvent la tauri i mai rar n cazul masculilor altor specii culoare, miros, vscozitate, pH, precum i concentraie, mobilitate, frecvena anomaliilor Examenul spermei Aspectul i volumul spermei Concentraia spermatozoizilor Morfologia spermatozoizilor Anomalii motenite ale spermatozoizilor Mobilitatea spermatozoizilor Aprecierea capacitii fecundante a spermatozoizilor

Nomenclatura parametrilor uzuali utilizai n evaluarea spermei

Parametrul volum Criteriul de evaluare absent redus crescut zero redus normal crescut sczut toi spermatozoizii mori procent crescut Nomenclatura aspermie hipospermie hiperspermie azoospermie oligozoopsermie normozoospermie polizoospermie astenozoospermie necrozoospermie teratozoospermie

concentraie

mobilitate viabilitatea anomalii ale spermatozoizilor

taur probabil fertil peste 500 milioane spermatozoizi per ml mai mult de 50% spermatozoizi cu micri progresive de naintare peste 80% spermatozoizi cu morfologie normal Caracteristici comparative ale spermei de cine (Oettle, 1993)

Conservarea spermei Crioconservarea (glicerolul - criomodificri) Rspunsul celular la crioconservare i crioprotectori (cristale de ghea expunerea prelungit la sruri) Caracterstici de specie ale susceptibilitii spermatozoizilor la crioalterri (stresul osmotic) Un bun diluant (Hafez, 1993): (a) s asigure nutrieni, drept surs de energie; (b) asigurarea proteciei mpotriva aciunii duntoare exercitate de rcirea rapid; (c) s reprezinte un tampon capabil s previn modificrile nocive ale pH-ului, rezultate n urma generrii acidului lactic; (d) meninerea presiunii osmotice i a echilibrului electrolitic optime; (e) inhibarea dezvoltrii bacteriilor; (f) sporirea volumului spermei, n aa fel nct s poat fi utilizat pentru mai multe inseminri; (g) s protejeze celula spermatic pe parcursul procesului de congelare Depistarea estrului i inseminarea femelelor 1. utilizarea unui metrial seminal de bun calitate; 2. respectarea tehnicii de decongelare precum i a celei de depunere a spermei n tractul genital al femelei; 3. sntatea deplin a aparatului genital femel;

4. inseminarea la momentul optim al estrului. Depistarea estrului i inseminarea femelelor depistarea estrului i evidenierea momentului optim de inseminare factor limitativ spermatozoizii s fie capacitai i s ajung n apropierea ovocitei la scurt timp dup ovulaie detectarea ovulaiei este dificil de realizat, momentul inseminrii trebuie s fie raportat la cel al debutului estrului Eficacitatea metodelor de detectare a estrului (Holman, 1987, cit. de Hafez, 1993)
Metoda de detectare Taur ncerctor Observaie vizual Frecvena observaiilor vizuale de 2 ori / zi de 3 ori / zi de 2 ori / zi de 3 ori / zi % depistat 80 90 85 100 65 75 70 - 80

3 observaii a cte 20 minute : dimineaa devreme, dup amiaza i seara la ora 22

Eficiena depistrii estrului la vaci 3 depistri a cte 15 minute (la orele 8, 14 i 21) o eficien a depistrii de 69,6% 3 depistri a cte 30 minute (la orele 8, 14 i 21) o eficien a depistrii de 81,2% 4 depistri a cte 30 minute (la orele 8, 14, 21 i 24) o eficien a depistrii de 84,1% Perioada estral semne clinice prezena mucusului la comisura inferioar a vulvei status hormonal specific (LH, estrogeni) pregtirea ovulaiei (la aprox. 24 de ore dup vrful de LH) momentul optim de inseminare (10 ore dup peak-ul de LH) controlul estrului Inducerea estrului la vaci de lapte care nu sunt observate n estru pn la 45 de zile postpartum;

Sincronizarea unei grupe de viele pentru inseminarea cu sperm provenit de la tauri care asigur ftare uoar; Reducerea timpului necesar pentru depistarea estrului; Facilitarea utilizrii IA n mod extensiv; Sincronizarea vacilor donoare i a celor receptoare pentru embriotransfer; Inducerea activitii ovariene la vacile de carne cu anestru de lactaie. manipularea creterii valului folicular inducerea sincronizat a dezvoltrii unui nou val folicular la toate femelele tratate rezult dezvoltarea sincron a unui folicul dominant se asociaz iniierea luteolizei fie la momentul emergenei valului folicular, fie imediat dup selecia foliculului dominant VA REZULTA un folicul dominant nou selectat la mai mult de 95% din femelele tratate sincronizarea ESTRULUI sincronizarea LUTEOLIZEI sincronizarea VALURILOR FOLICULARE Utilizarea PGF2alfa regresia corpului luteal dinamica valului folicular (momentul apariiei estrului) fertilitatea la estrul indus se apropie de cea obinut la estrul spontan debutul perioadelor estrale va fi rspndit pe parcursul a 2-5 zile de la adm. PGF sunt necesare dou administrri la 10-14 zile interval cu IA la estrul depistat dou adm. la 11 zile i IA programat (72-96)

PGF2alfa - PROGRAMUL 1 PG 1 depistare estru i inseminare PG 2 IA dubl, programat

11

14 15

Distribuia prognozat a estrului: ziua I - 5% ziua II - 20% ziua III - 45 %

ziua IV - 20% ziua V - 5% restul reacioneaz mai trziu sau deloc

PGF2alfa - PROGRAMUL 2 depistare estru i inseminare PG IA dubl, programat

7 11

Pe parcursul a 10 zile este posibil inseminarea aceluiai numr de femele, ca i n cazul inseminrii fr sincronizare pe parcursul a 21 zile. Dac 20-25% din vaci intr n estru n primele cinci zile, atunci majoritatea efectivului ar trebui s fie cu activitate ciclic.

PGF2alfa - PROGRAMUL 3 PG 1 depistare estru i inseminare 1 6

PGF2alfa - PROGRAMUL 4 PG 1 depistare estru i inseminare 0 6 PG 2

IA dubl, programat depistare estru i inseminare

9 10

Utilizarea progestagenelor Tratamentele cu progestagene mimeaz faza luteal a ciclului. Pentru a obine un estru fertil normal, lungimea tratamentului cu progestagene a fost stabilit la 10 12 zile. Progestagene sub form de: soluie injectabil, dispozitive vaginale, implant subcutan administrarea progestagenelor n combinaie cu estradiolul la debutul tratamentului nu numai c va regla parial durata de via a corpului luteal existent, ci i va exercita un rol n influenarea valurilor foliculare ulterioare.

profilul progesteronului
estrogen progestagen Estru

generat de CL generat de progestagene

11

13

15

17

0 2

4 6 8 10

profilul progesteronului
estrogen progestagen Estru Estru

generat de CL generat de progestagene

liza CL

0 2

4 6 8 10

0 2

4 6 8 10

profilul progesteronului
estrogen progestagen Estru

generat de CL generat de progestagene

14 16 18

0 2

4 6 8 10

profilul progesteronului
estrogen progestagen

generat de CL generat de progestagene

liza CL

Estru

Estru

2 4 6 8 10 12

0 2

4 6 8 10

profilul progesteronului
estrogen progestagen Estru 14 16 18 0 2 4 6 8 10 11 13 15 17 0 2 4 6 8 10 12

generat de CL generat de progestagene

0 2

4 6 8 10

Depistarea estrului i nsmnarea artificial la oaie i capr IA la ovine cervixul - barier anatomic IA intrauterin extrem de dificil (rata concepiei ajunge spre 75%, fa de 30% n cazul inseminrii intravaginale) posibil laparoscopic se justific doar n cazul introducerii caracterelor valoroase n efectiv Sincronizarea ovinelor sezon de reproducere pesarii intravaginale cu progestagene (12-14 zile) i PMSG la extragerea pesariilor (estrul apare la 48 de ore de la extragerea pesariilor) 2 adm. de PGF2alfa la 11 zile (estrul apare la 24-48 de ore dup ultima PGF) pesariile cu progestagene genereaz rezultate superioare fa de PGF
Momentul inseminrii IA se efectueaz la 48-60 de ore consecutiv extragerii pesariilor sau la 72-96 de ore dup administrarea PGF2alfa o singur inseminare - 55 de ore dup extragerea pesariilor dou inseminri - la 48 i 60 de ore sperma diluat i pstreaz proprietile timp de 24 de ore la 5 C din ejaculat mediu rezult 10-30 de doze, fiind necesare 200-500 milioane spermatozoizi (fc. de locul depunerii) decongelarea - la 35 timp de 30 de secunde C,

Locul depunerii spermei Intravaginal (60% G ptr. sperma proaspt, 40% pentru cea congelat) necesare 500 milioane spermatozoizi Intracervical - rezultate foarte bune, n special cu sperma congelat; profunzimea afecteaz rata gestaiei Intrauterin nsmnarea artificial la caprine cervixul uor de tunelizat diestru mai lung - pesariile se menin 17 zile monte la estrul exprimat (12 i 24 de ore de la debutul estrului) - rata G de 60% congelarea spermei - separarea lichidului seminal contenie - anestezie general nsmnarea artificial la scroaf Durata estrului i momentul ovulaiei raportat la cel al debutului estrului sunt supuse unei puternice variabiliti la scroaf Utilizarea examenului ecografic al ovarelor a permis stabilirea faptului c ovulaia se produce undeva la trei sferturi (7215%) din durata integral a estrului Almeida i col. (2000) - o durat medie a estrului de 52,6 ore (limitele fiind cuprinse ntre 30 i 72 de ore), ovulaia producndu-se ntre 30 i 60 de ore (n medie la 44 de ore, adic la aproximativ 85% din durata perioadei estrale, raportat la debutul estrului) sperma diluat - 4-7 zile la frigider (4-5 miliarde spermatozoizi per doz) sincronizarea cldurilor - progestagen n furaje (Suisynchron) + PMSG sincronizarea cldurilor - PG600 (gonadotropin seric 400UI i gonadotropin corionic 200UI); PG600 induce i poliovulaie (embriotransfer) Rezultatele tratamentelor sunt afectate de momentul aplicrii lor raportat la cel al nrcrii purceilor, precum i de prezena sau absena ciclicitii ovariene nsmnarea artificial la iap material seminal proaspt sau congelat depistarea estrului - armsar ncerctor semne clinice de estru - obligatoriu ETR De-a lungul perioadei de clduri, diametrul foliculului crete cu aproximativ 3 mm/zi, pn cu dou zile naintea producerii ovulaiei, cnd mrimea rmne constant. Cu aproximativ 12 ore nainte de ovulaie, dimensiunea foliculului descrete cu 2-3 mm, acesta devine mai fluctuent, iar forma sa rotund se transform ntr-una triunghiular neregulat, datorit descreterii presiunii interioare. Stabilirea momentului ovulaiei se face prin examene transrectale repetate, precum i prin ecografie. Se urmrete efectuarea inseminrii ct mai aproape de momentul ovulaiei, astfel nct s rezulte un indice de inseminare optim. Dac inseminarea are loc cu 24-12 ore naintea producerii ovulaiei, rata gestaiei poate atinge 72%, iar n cazul efecutrii inseminrii n ultimele 12-6 ore premergtoare ovulaiei, rata instalrii gestaiei poate ajunge la 100%. n cazul inseminrii cu material seminal congelat, este necesar repetarea examenului transrectal la interval de 8 ore, pentru a putea estima cu ct mai mult acuratee momentul ovulaiei

nsmnarea artificial la cea Dispareunie vs. interes economic Incapacitatea masculului: lipsa experienei absena libidoului afeciuni genitale afeciuni prostatice Femela refuz monta: incapacitate fizic probleme psihologice moment inoportun (necorelat cu ovulaia i nivelul hormonilor estrogeni)

Examen clinic

Frotiu vaginal

Dozare progesteron

CEAUA nu se preteaz (este prea devreme sau prea trziu), sau sunt clduri anovulatorii. Sperm necorespunztoare NU se insemineaz

Ceaua se preteaz Recoltarea spermei

Sperm de bun calitate

2 inseminri la 2 zile interval

nsmnarea artificial la cea determinarea momentului ovulaiei (frotiu vaginal, nivel progesteron, vaginoscopie) recoltarea i examenul spermei - caracteristicile ejaculatului i capacitatea fecundant a spermei refrigerarea spermei la 4 - cteva zile C inseminarea - profund intravaginal sperma refrigerat - fecunditate de 85% sperma congelat - 55% n cazul depunerii intravaginale i 70% la depunerea intrauterin nsmnarea artificial la pisic controlul estrului cu PMSG, FSH sau HCG momentul IA (dou nsmnri artificiale la interval de 24 de ore, precedate de fiecare dat de 50 UI de HCG) sperma se depune n vaginul anterior sau cervixul posterior nu este posibil diluarea ejaculatelor

Disciplina de reproducie obstetric i ginecologie Anul VI medicin veterinar

CURSUL nr. 3

ASPECTE FIZIOLOGICE ACTUALE ale vacii de lapte Intervalul pn la prima ovulaie Funcionalitatea corpului luteal Funcionalitatea foliculilor ovarieni Exprimarea estrului Calitatea ovocitelor Funcionalitatea uterului CONTROLUL CICLULUI SEXUAL PRIN INTERMEDIUL MEDICAIEI anestrul sincronizarea estrului i depistarea estrului inseminarea programat sincronizarea reinseminrilor

Hormoni utilizai n inducerea i sincronizarea ovulaiei GONADOTROPINE PMSG - aciune similar FSH (stimuleaz maturarea folicular) HCG - aciune similar LH; (induce ovulaia) asociere PMSG+HCG; (combin aciunea FSH i a LH) GnRH - induce eliberarea LH i FSH din hipofiza anterioar PROGESTAGENI Progesteron sau progestageni sintetici - implant, spiral sau burete intrevaginal (PRID = progesterone releasing intravaginal device) MIMEAZ ACIUNEA (PREZENA) CORPULUI LUTEAL ESTROGENI Conjugai ai estradiolului induc regresia prematur a corpului luteal mbuntesc rspunsul axului hipotalamo-hipofizo-ovarian la progestageni interfereaz nidaia (cea) PGF2alfa produs natural al endometrului n absena produsului de concepie PGF2alfa sau analogi sintetici induc regresia corpului luteal n perioada de susceptibilitate aciune uterotonic

Metode utilizate pentru inducerea estrului i ovulaiei la FEMELELE ANESTRICE BOVINE RASE DE CARNE - femele impubere sau n anestru postpartum estrogen n Z1, urmat de progestagen timp de 7-12 zile i PMSG n ultima zi (opional) majoritatea exprim estrul n primele 5 zile dup tratament VACI DE LAPTE N ANESTRU POSTPARTUM GnRH n Z14 postpartum majoritatea ovuleaz n prima zi dup tratament OVINE I CAPRINE (anestru sezonier sau femele impubere) progestagen timp de 12-21 de zile, nsoit de administrarea PMSG n apropierea sfritului perioadei majoritatea femelelor exprim estrul la 2-4 zile dup tratament PMSG mbuntete rezultatele SUINE PMSG singur sau PMSG n Z1 i HCG la 48-96 de ore sau PMSG i HCG n prima zi - la majoritatea femelelor estrul apare la 3-5 zile dup tratament CABALINE ANESTRU SEZONAL lungirea fotoperioadei cu 4 ore pe zi la majoritatea iepelor ciclul o s apar cu 4-6 sptmni mai devreme fa de normal ANESTRU PROFUND progestagen timp de 15 zile majoritatea exprim estrul la 1 sptmn dup tratament Sincronizarea estrului la FEMELELE CICLICE BOVINE PGF2alfa a) depistarea estrului 5-6 zile i IA; restul femelelor PGF n ziua 7 i IA la estrul depistat b) PGF n Z1 i IA celor intrate n estru n primele 5 zile; celelalte primesc PGF n Z11 i Z12 i IA la estru sau programat c) 2 X PGF la 11-12 zile interval i IA la estrul exprimat sau IA programat; femelele rmn sincronizate 1-2 cicluri PROGESTAGEN + ESTROGEN Z1 - implant + injecie ; implant timp de 9 zile ; IA la estru exprimat sau programat ; estru la 3-5 zile dup scoaterea implantului PROGESTAGEN + PGF2alfa progestagen timp de 7 zile i PGF n Z6; IA la estru sau programat ; estru la 2-3 zile dup administrarea PGF OVINE PROGESTAGEN + PMSG implant 12-14 zile i PMSG la extragerea sa mont la estru exprimat sau IA dubl majoritatea - estru n primele 2 zile dup PMSG PGF2alfa

2 X PGF2alfa la 9 zile interval mont la estru exprimat sau IA dubl majoritatea exprim estru la 2-3 zile dup a doua PGF CAPRINE PROGESTAGEN + PMSG implant 18-21 zile i PMSG la extragerea sa mont la estru exprimat sau IA dubl majoritatea - estru n primele 2 zile dup PMSG PGF2alfa 2 X PGF2alfa la 11-12 zile interval mont la estru exprimat sau IA dubl SUINE PROGESTAGEN administrat n furaj timp de 14-18 zile mont la estru exprimat (4-7 zile dup sistarea progestagenului) ECVINE - progestagen - implant 15 zile ; mont la estru (4-7 zile) - PGF2alfa - 1/2 doz n diestru ; mont la estru (dup 3-5 zile) - PGF2alfa + HCG : PGF n Z1, HCG n Z7 sau Z8, PGF n Z15, HCG n Z21 sau Z22 .Estru va aprea la majoritatea femelelor la 2-4 zile dup terminarea tratamentului

Strategii ANTILUTEOLITICE Creterea dimensiunii foliculului preovulator, pentru a genera un CL mai mare (implant) Sporirea ratei de cretere a CL (implant cu GnRH) Creterea nivelului circulant al P4 (inducerea unui CL accesoriu cu HCG) Scderea efectului exercitat de foliculul dominant n perioada critic (cu GnRH, care l deturneaz i scade E2) Creterea amplitudinii semnalului antiluteolitic emis de produsul de concepie (administrarea bIFNt) Scderea rspunsului luteolitic de la nivelul organismului matern (PUFA, AINS)

EMBRIOTRANSFERUL embrionii generai n tractul genital al unei femele (donatoarea) sunt trasnferai n uterul altei femele (receptoarea), n vederea ducerii gestaiei la bun sfrit
etapele embriotransferului: sincronizarea femelelor supraovulaia fecundaia colectarea embrionilor examinarea embrionilor (conservarea) transferul la femela receptoare

Embriotransferul la BOVINE Aplicaii: Sporirea numrului descendenilor provenii de la vacile genetic superioare; Accelerarea testrii descendenilor; Reducerea intervalului dintre generaii prin supraovularea vielelor prepuberale i transferul embrionilor la recipiente mature, astfel putndu-se accelera i selecia genetic; Transportul internaional al embrionilor, astfel nct s se previn problemele ridicate de rspndirea bolilor i necesitatea carantinei (fiind necesar luarea n considerare a riscului difuzrii afeciunilor virale); Investigarea mortalitii embrionare; Obinerea embrionilor de la vaci cu afeciuni care nu le permit ducerea gestaiei la termen; Utilizarea ET ca mijloc de cercetare tiinific. selecia donatoarelor Pot fi selectate vaci considerate potrivite de ctre proprietar. Vacile trebuie s aib cel puin dou luni de la parturiie. Femela trebuie s prezinte o activitate normal de reproducie, precum i o structur normal a aparatului genital. selecia receptoarelor Se impune ca acestea s prezinte dimensiuni corporale potrivite i maturitate morfologic astfel nct s poat fta eutocic. Trebuie s posede o funcie normal de reproducie (funcional i structural). Ultima ftare trebuie s se fi produs cu cel puin dou luni n urm. aspecte imunologice Redirecionarea rspunsului imun de la imunitatea celular. Toleran tranzitorie fa de antigenele produsului de concepie. Activarea populaiilor specifice de limfocite implicate n imunosupresie sau a eliberrii citokinelor care stimuleaz funcia placentar. Embriotransferul la RUMEGTOARELE MICI talia redus a femelelor anatomia complex a cervixului caracteristici ET la rumegtoarele mici 8-12 embrioni per donatoare 4-6 caliti necesare transferului rezult 2-4 produi programele de congelare reduc rata ftrilor cu 40% caprele - sensibile la stres (luteoliz prematur) protocoale ET
inducere i sincronizare estru (pesarii cu progestagene - 14 z ovine i 16 caprine i 500 UI PMSG la extragere) supraovulaia (FSH sau PMSG adm. n apropierea momentului extargerii pesariilor) recuperarea i transferul embrionilor (chirurgical sau laparoscopic)

Embriotransferul la ECVINE fiziologia reproducerii sincronizarea ovulaiei recuperare embrioni 70-80% reuit de 50% (metode nechirurgicale) i de 70% (GIFT) sincronizarea ovulaiei armsarul poate fi disponibil doar o perioad limitat de timp; din motive comerciale se impune concentrarea perioadelor de gestaie-ftare; pentru embriotransfer, este obligatoriu ca donatoarea i receptoarea s ovuleze n interval de 24 de ore. progesteronul i progestagenele, utilizate ca atare pot suprima estrul i ovulaia la iepe dar nu sunt eficace pentru sincronizarea ovulaiei n interval de 1-2 zile, interval necesar pentru embriotransfer i mont n intervalul unei singure zile. Protocoale sincronizare: GnRH i PGF2alfa PGF2alfa i HCG estradiol + progesteron (+ PGF2alfa), administrate timp de 10 zile, n prima sptmn dup ovulaie estradiol + progesteron + PGF2alfa i HCG n ziua 2-3 a estrului indus (sincronizare de 90-95%) 2 administrri de PGF2alfa (la 14-18 zile) i HCG dup 2 zile, sincronizare de 60-72% ET la ecvine caracteristici: recoltarea embrionilor (ziua a 9-a) supraovulaia (FSH ecvin) crioconservarea embrionilor (la 6 zile, viabilitate superioar) alte tehnici de reproducere asistat: GIFT ; IVF i ICSI Embriotransferul la SUINE metode chirurgicale prin excelen (rata medie a gestaiei - 60%, cu 6.5 descendeni) laparoscopie (dotri, anestezie) procedee nechirurgicale (rezultate inconstante, G ntre 9 i 64%) adm. progestagenelor n ziua a 9-a a G mbuntete rata concepiei de la 40 la 60% coarne uterine scurtate (i anastomozate) Embriotransferul la PISIC ovulaia provocat de stimulii mecanici !!! donatoare tratate cu gomadotropine (FSH administrat timp de 3-8 zile consecutiv a indus intrarea n estru n afara sezonului de mont) meninerea gestaiei la receptoare reprezint o problem

Disciplina de reproducie obstetric i ginecologie Anul VI medicin veterinar

CURSUL nr. 4
tehnici de reproducere asistat in vitro maturarea in vitro a ovocitelor i embrionilor fecundaia in vitro clonarea transgeneza

maturarea ovocitar presupune: ruperea membranei nucleare completarea primei diviziuni meiotice i expulzia primului globul polar ; rezult ovocita secundar. Se formeaz placa metafazic pentru cea de-a doua diviziune meiotic ovulaia asigurarea condiiilor optime permite maturarea ovocitar in vitro se recolteaz ovocite din foliculi maturi se cultiv n medii de cultur suplimentate cu gonadotropine i steroizi bovine OPU - aspirare transvaginal ghidat ecografic IVM - medii de cultur + steroizi + celule ale granuloasei sau linii celulare speciale IVF - ovocit + spermatozoizi IVC - embrion + mediu special (SOF) IVP = IVM + IVF + IVC Cabaline rat sczut a IVF reuita IVC condiionat de mediul de cultur - n general comercial (15%), dar dac se adaug lichid folicular, se ajunge la atingerea metafazei II n 68,5% din cazuri Porcine obstacole: maturarea ovocitelor (nuclear i citoplasmatic) dezvoltarea de la stadiul de unic celul la blastocist polispermia

fecundaia in vitro etapele eseniale ale fecundaiei ataarea gameilor blocarea polispermiei formarea pronucleilor (femel i mascul) unirea pronucleilor amfimixia fecundaia in vitro (IVF) ovocitele reiau meioza - competen meiotic colectarea i capacitarea spermatozoizilor colectarea i fecundarea ovocitelor condiiile necesare realizrii IVF maturarea nuclear i citoplasmatic a gameilor n gonade dezvoltarea capacitii fecundante a gameilor n tracturile reproductive ale masculului i femelei un numr optim de spermatozoizi cu capacitate fecundant normal i micri viguroase o ovocit fecundabil care s posede deja primul globul polar

CLONAREA ansamblul de tehnici prin care se pot produce pe cale asexuat, celule sau organisme IDENTICE din punct de vedere genetic injectarea intracitoplasmatic a spermatozoidului transferul nuclear ICSI = Injectarea Intracitoplasmatic a Spermatozoidului etapele premergtoare fecundaiei zigoii generai prin ICSI: remodelri nucleare anormale ; afectarea cromatinei pe parcursul decondensrii ADN organismele obinute consecutiv ICSI: infertilitate crescut la masculi aberaii cromozomiale la hetero- i autozomi anomalii mentale, fizice, reproductive ROSNI = Tehnica Injectrii Intracitoplasmatice a Nucleului Spermatidelor Rotunde dac nucleul spermatidei posed o capacitate redus de a activa ovocita, se impune i aplicarea unui tratament de activare a ovocitei transferul nuclear introducerea nucleului aparinnd unei celule totipotente (ovocit fecundat sau zigot) donatoare ntr-o ovocit matur enucleat embrionul dezvoltat va fi transferat unei mame surogat pentru a se dezvolta n continuare

totipotena potenialul de a iniia i regla un proces normal de dezvoltare OVOCITA FECUNDAT i ZIGOTUL au proprietatea de a genera un nou organism = TOTIPOTENTE materialul genetic donator este introdus n citoplasma reecptoarei prin fuziunea realizat ntre celulele donatoare i receptoare se produce implicit introducerea materialului genetic i a citoplasmei nucleul donator (i NU celula receptoare) trebuie s rspund provocrilor noului mediu, din acest motiv nucleul putnd fi definit drept TOTIPOTENT etap: nlturarea materialului genetic din ovocita receptoare (enucleerea) nlturarea unor componeni citoplasmatici i reducerea viabilitii citoplasmei descreterea numrului total de celule ale blastocitilor clonai numrul redus de celule determin gradul redus de viabilitate a embrionilor clonai sincronizarea ciclurilor celulare ntre carioplastul donator i citoplasma receptoare remodelarea nuclear i sinteza de ADN sunt desvrite n primele 24 de ore consecutiv transferului nuclear n ovocita enucleat sincronizarea ciclurilor celulare: blocarea embrionilor n profaz prin intermediul unor ageni medicamentoi care mpiedic funcionarea citoscheletului pre-activate, pe post de ntrebuinarea ovocitelor enucleate citoplasm Nucleii donatori trebuie s fie n fazele G0 sau G1, altminteri rezult alterri ireversibile ale cromatinei i aneuploidie Lungimea primului ciclu celular al embrionului determin capacitatea de supravieuire (dac este mai lung, rezult embrioni viabili) Reprogramarea nuclear evoluia de la stadiul de ZIGOT la stadiul de BLASTOCIST, a necesitat un interval identic de timp pentru embrionii obinui prin fecundare sau transfer nuclear nucleii donatori au fost reprogramai (s-au ntors n acelai cadru de dezvoltare morfologic i temporal ca i zigotul) Dominko i col., 1998 citoplasma ovocitelor de bovine deine capacitatea de a reprograma nucleii celulelor somatice provenii de la diferite specii de mamifere i de a iniia dezvoltarea embrionar timpurie

Progresele realizate n domeniu 23 februarie 1997 - Cercettorii de la Institutul Roslin din Scoia anun reproducerea cu succes a oii Dolly, dup o lung i atent verificare a puritii genelor. Data real de natere a lui Dolly a fost 5 iulie 1996. 4 martie 1997 - Preedintele SUA, Bill Clinton semneaz un ordin executiv care interzice utilizarea de fonduri federale pentru clonarea uman, invocnd profunde aspecte etice. Iulie 1997 - Cercettorii britanici care o clonaser pe Dolly o cloneaz pe Polly, care poart gene umane. Se exprim sperana n clonarea unei ntregi turme de oi identice care s poat produce proteine umane pentru uz medical. Mai 1999 - Institutul Roslin este cumprat de compania american de biotehnologie Geron Corp. La scurt timp, Japonia, India i majoritatea rilor europene condamn clonarea sau impun legi speciale pentru controlul cercetrilor. Februarie 2002 - Cercettorii japonezi, care clonaser cel puin zece oareci, anun c toi muriser prematur. O umbr de ndoial afecteaz sigurana clonrii. n aceeai lun se anun c oarecii clonai deveniser obezi. Februarie 2002 - Cercettorii de la Texas A and M University anun clonarea unei pisici. Au prezentat-o la vrsta de dou luni i au botezat-o CC, de la carbon copy (copie la indigo). Noiembrie 2002 - Dr. Severino Antinori, expert italian n fertilitate, anun c o pacient a sa ateapt naterea primului copil clonat n luna ianuarie 2003 i c mai exist alte dou femei care poart embrioni clonai. CLONAID - Decembrie 2002. Clonaid, o companie asociat cu un grup care crede c omenirea a fost creat de extrateretri prin clonare, anun c primul copil clonat se va nate pn la sfritul anului. Decembrie 27, 2002. Clonaid anun prima clon uman, o feti de 3.1 kg, nscut prin cezarian n SUA, n data de 26 decembrie. Numele su este Eva. O alt clon este ateptat s se nasc n urmtoarele sptmni n Europa. Ianuarie 3, 2003. Se anun naterea celei de-a doua clone, tot o feti, prinii fiind un cuplu de lesbiene din Olanda. Ianuarie 22, 2003. Se anun naterea celei de-a treia clone, de data asta un bieel, n Japonia. Ca i n celelalte cazuri, Clonaid nu pune la dispoziie nici un fel de date pentru verificare, iar prinii Evei refuz testul genetic. 14 februarie 2003 - Dolly este eutanasiat. Avea doar ase ani cel mult jumtate din vrsta pe care ar fi putut-o atinge. Fusese clonat folosind celule de la o oaie care n momentul respectiv avea ea nsi ase ani. Dup o artrit, s-a mbolnvit grav de plmni (cancer de origine virotic). n 1998 dduse natere n mod natural lui Bonnie, iar n anul urmtor mai avusese trei miei. n momentul de fa, n lume exist cteva sute de animale clonate, unele ajungnd chiar pe piaa de carne.

14 august 2003 - Specialitii chinezi folosesc pentru prima oar tehnica clonrii pentru a crea embrioni hibrizi coninnd un amestec de ADN de iepure i om. Se anun totodat c embrionii obinui au fost imediat distrui. Dar dezbaterea etic privind clonarea este relansat RISCURILE CLONRII procent crescut de eecuri - rata succesului n cazul TN variaz ntre 0,1 i 3% (din 1000 de ncercri, rezult ntre 1 i 30 de clone) ovocita enucleat i nucleul transferat pot fi incompatibile ovocita cu noul nucleu poate s nu se divid sau dezvolta corespunztor implantarea embrionului poate eua gestaia poate eua probleme n dezvoltare LOS clonele au organele interne anormal de mari probleme respiratorii, circulatorii i de alt natur deoarece LOS nu apare ntotdeauna, nu se poate prevedea care clone l vor exterioriza unele clone fr LOS au malformaii renale sau cerebrale, disfuncii imunitare, genernd probleme ulterioare deficiene imunitare vieii produi prin clonare au evideniat deficiene n funcionarea sistemului imunitar scderea imunitii este normal odat cu mbtrnirea dar la animalele clonate este accelerat, determinnd apariia pneumoniilor i altor insuficiene imunitare la oarecii clonai, morbiditatea i mortalitatea crescute s-au datorat disfunciilor hepatice i pulmonare modaliti anormale de exprimare a genelor n embrionul natural, ADN-ul este programat s exprime UN ANUMIT set de gene. pe msura diferenierii celulelor embrionare, programul se modific pentru fiecare tip de celule difereniate (piele, elemente sanguine, esut osos sau nervos, de exemplu) programele sunt diferite la clone, nucleul transferat NU are acelai program ca embrionul natural. Reprogramarea complet (artificial realizat de om) este necesar dezvoltrii ct mai apropiate de normal. Reprogramarea incomplet condamn embrionul. telomerii telomerii secvene terminale ale ADN alctuite din repetri ale TTAGGG. la fiecare diviziune telomerii se scurteaz cte un pic, pn ajung att de scuri nct nu mai sunt posibile diviziuni prezena lor la captul cromozomilor previne pierderea materialului genetic pe parcursul diviziunilor, precum i alipirea accidental a capetelor diferiilor cromozomi telomeraza

enzima (ribonucleoprotein) care adaug secvene repetate de telomer la captul 3 al ADN-ului se gsete n celulele germinale se gsete n celulele canceroase n unele tipuri de celule umane, scurt timp, de-a lungul fazei S a ciclului celular activitate INTENS n blastociti, sistemele IVF, partenogenetice i de TN la om i oarece a fost evideniat un mecanism de reprogramare a telomerazei pe parcursul dezvoltrii embrionare timpurii embrionii clone bovine au evideniat o dinamic a telomerazei similar cu cea a embrionilor generai prin IVF sau PA telomerii i mbtrnirea majoritatea celulelor de om se divid de 30-50 de ori nainte de a-i nceta reproducerea, ajungnd la senescen se admite c senescena este legat de lungimea telomerilor deoarece prin adugarea telomerazei, enzima care lungete telomerii, celulele se pot reproduce la infinit telomerii i cancerul telomeraza este enzima care regleaz orarul mitotic sau celular; telomeraza lungete i consolideaz telomerii scurtai, nlocuind fragmentele de ADN pierdute pe parcursul diviziunilor obinuite la om, exist tot mai multe dovezi c telomerii scuri contribuie direct la declanarea fazelor timpurii n anumite tipuri de cancer telomeraza se regsete n peste 90% din formele de cancer ntlnite la om diferene ale telomerilor lungimea telomerilor (secvenele de ADN de la capetele cromozomilor) scade pe msura parcurgerii diviziunilor celulare, fiind un etalon al vrstei telomerii cromozomilor aparinnd VACILOR sau OARECILOR clonai sunt MAI LUNGI dect normalul la OAIE (vezi Dolly) sunt MAI SCURI mbtrnire mai rapid ?

transgeneza rezultatul injectrii directe a genelor strine n celula primordial a unui organism n dezvoltare animalele transgenice pot exterioriza o larg varietate de noi fenotipuri consecutiv exprimrii ADN-ului moleculelor exogene tehnologia transgenic = transferul unui segment de ADN supus ingineriei genetice (o construcie de ADN) n materialul genetic al altei (altor) specii TT - n laptele vacilor: promotorul genei -globulinei (orice protein) alfa1-antitripsina (tratament fibroza chistic) fibrinogen (hemostaza n plgile de mari dimensiuni)

lipaz (tratament de substituie n pancreatite)

XENO-TRANSPLANTUL = utilizarea organelor provenite de la alte specii (animale) SUA: la fiecare 16 minute un nume nou se adaug listei de ateptare zilnic mor 11 pacieni n ateptare anual : 30 miliarde dolari cheltuii cu pacienii aflai n stadiile finale ale afeciunilor fatale

supravieuirea organelor transplantate incorporarea n sistemul circulator al corpului omenesc interfaa dintre afluxul sanguin al corpului omenesc i organul transplantat (porc) respingerea grefelor supra-acut tardiv (DXR = delayed xenograft rejection) pe termen lung (LTR = long time rejection) potenialele consecine ale utilizrii tehnicilor de reproducere asistat asupra strii de bine (welfare) a animalelor ovulaiile multiple i ET transferul embrionilor rezultai n urma poliovulaiei: creterea procentului mortalitii embrionare viei mai voluminoi durat mai lung a gestaiei indicen crescut a distociilor (cezariene) inducerea poliovulaiei asincronie n dezvoltarea foliculului preovulator precum i n procesul meiotic al ovocitei creterea unei ntregi cohorte de foliculi nseamn un nivel anormal de mare al estrogenilor naintea ovulaiei i al progesteronului dup ovulaie nivelurile crescute ale E2 afecteaz organizarea microtubulilor afecteaz meioza afecteaz eliberarea primului globul polar nivelurile ridicate ale P4 afecteaz mediul uterin determinnd asincronia ntre stadiul de dezvoltare embrionar i mediul uterin la momentul transferului concret:

Dorland i col. (1993) - % crescut de embrioni mixoploizi, 1 haploid i 1 triploid consecutiv inducerii superovulaiei Viuff i col. (1999) - mixoploidii la 72% dintre blastocitii bovini produi in vitro Karwaski i col. (1996) - 27-45% din embrionii rezultai n urma supraovulaiei au o cariogram anormal - mor la scurt timp dup implantare embrionii au aspect corespunztor i vor fi transplantai

Sinclair i col. (1997) - ritm de cretere difereniat pentru organele interne (ficat, inim, rinichi i glande suprarenale) consecutiv IVP Farin i col. (2000) - nvelitorile fetale - modificri macroscopice i histologice Hill i col. (2000): aproape 50% din fetuii clonai se pierd ntre zilele 30 i 90 ale gestaiei (FA de 2-4% NORMAL) ; n jurul zilei 40 a gestaiei este evident dezvoltarea anormal a placentoamelor

Chavette-Palmer i col. (2000) -necropsierea fetuilor sau vieilor rezultai din clone: steatoz hepatic asociat cu dezvoltarea asincron a organelor hidropizia anexelor fetale disfuncii metabolice i ale funciei de cretere insuficien placentar n gestaia avansat afectate nivelurile IGF-urilor transgeneza exprimarea unei transgene i procesul de sintez i eliberare a unei proteine se realizeaz concomitent procese complexe (ex: imunitatea sau funcia de cretere) mediate prin nenumrate gene, care opereaz ntr-un complex de factori reglatori ECHILIBRU DELICAT !!!!!!!!! Animal Welfare (starea de bine a animalelor) definirea strii de bine a animalelor (comparaii cu lot martor) Biotechnology Industry Organization (www.bio.org) raiunea i spiritul de prevedere confruntate cu ignorana i orgoliul

Disciplina de reproducie obstetric i ginecologie Anul VI medicin veterinar

CURSUL nr. 5
Reglarea funciei de reproducere la mascul Procesele reproductive desfurate n organismul masculului sunt reglate printr-o bucl scurt, una lung i una ultra-scurt. Bucla lung implic interaciunile dintre FSH inhibin i LH testosteron. Bucla scurt dintre epiteliul interstiial i cel seminifer implic factori de cretere i hormoni. Bucla ultrascurt regleaz interaciunile dintre celulele Sertoli. cele germinale i cele musculare. Cteva dintre proteinele circulante sunt incluse prin compartimentul bazal n celulele Sertoli prin mecanisme endocrine: transferina, ABP, IGF i factorii de cretere nrudii. Proteinele secretate de celulele Sertoli n compartimentul adluminal sunt incluse printr-un mecanism paracrin n celulele germinale. Spermatocitele i spermatidele tinere reprezint inta predilect pentru proteinele produse n celulele Sertoli. Celulele Sertoli i Leydig Celulele Sertoli i cele germinale i regleaz reciproc secreia ciclic a proteinelor pe parcursul lungimii tubului seminifer, iar celulele mioide amplific acest proces prin intermediul factorilor de transformare i cretere, a modulatorilor umorali precum i prin intermediul matricei extracelulare. Celulele Sertoli sunt prevzute cu ci pentru transportul intracelular al metaboliilor celulari, care coordoneaz activitatea epiteliului seminifer. Activina i inhibina Aceast familie a glicoproteinelor gonadale posed mecanisme remarcabile pentru a genera semnale diverse. Modul diferit de asociere a subunitilor poate genera dimeri cu aciune biologic opus n diferite esuturi. Aceti hormoni heterodimerici sunt alctuii dintr-o subunitate i una sau dou subuniti (A sau B) care suprim secreia FSH din hipofiza anterioar. Activinele sunt dimeri puternic stimulatori ai eliberrii FSH (dimeri ai subunitilor ale inhibinei) i sunt purificate din lichidele gonadale. ACT i INH de asemenea acioneaz la nivelul gonadelor ca modulatori paracrini i autocrini ai producerii steroizilor, factorilor de cretere i altor hormoni. INH este un hormon glicoproteic produs de gonade pentru a regla secreia de FSH cu efect minim asupra producerii LH hipofizar. Numele de inhibin a fost folosit prima dat n 1932 pentru a denumi o substan hidrosolubil din testicul. Transferina 2, microglobulina i albumina din plasma seminal

Nivelurile transferinei, -microglobulinei i albuminei din plasma seminal sunt corelate cu numrul de spermatozoizi. Aceasta este o relaie general ntre proteinele din plasma seminal i numrul de spermatozoizi; unele produse din sperm regleaz transportul proteinelor plasmatice n plasma seminal. Transferina din plasma seminal poate fi folosit drept parametru clinic al funcionrii celulelor Sertoli.

I. ROLUL ENDOCRIN AL TESTICULULUI 1. Locul de secreie al androgenilor (AND) Celulele interstiiale Leydig Din COL, sub influena enzimelor mitocondriale, se sintetizeaz PREG , iar mai apoi, sub influena enzimelor din reticulul endoplasmatic , rezult TEST (testosteron). Celulele Sertoli sunt i ele capabile s metabolizeze P4 n TEST iar pe acesta s l transforme n 5DHT (dihidrotestosteron) sau s l aromatizeze n 17E2 care se regsete n concentraii sczute n testiculele numeroaselor specii. 2. Cantitile de steroizi secretate n afara TEST, considerat hormonul masculin prin excelen i a 5DHT, secretat n cantiti mai mici, se mai evideniaz n testicule i ANDROSTENDIONUL precum i DIHIDROEPIANDROSTERONUL. n urin a fost evideniat ANDROSTERONUL, de 10 ori mai puin activ dect testosteronul. Importana cantitii steroizilor secretai variaz cu vrsta animalului. Valorile absolute cresc de la natere spre vrsta adult. Semi-viaa biologic a TEST n sngele periferic este scurt, de ordinul minutelor. 3. Modul de evacuare a androgenilor Se face ntotdeauna prin sngele venos, consecina fiind apariia caracterelor sexuale primare i secundare, manifestarea comportamentului sexual i retroaciunea negativ asupra axului hipotalamo hipofizar. Androgenii pot fi evacuai, n cantiti mult reduse i prin lumenul tubilor seminiferi, rete testis i epididim. Transferul este posibil datorit ABP (androgen binding protein), secretat de ctre celulele Sertoli. ABP are afinitate crescut pentru TEST i DHT, facilitndu-le pasajul n tubii seminiferi i contactul cu celulele germinale. n acest mod, androgenii stimuleaz spermatogeneza. 4. Roluri fiziologice - dezvoltarea caracterelor sexuale secundare; - aciune anabolizant (influena exercitat asupra musculaturii) - stimularea spermatogenezei - retrocontrolul negativ asupra descrcrii de FSH i LH.

II. CONTROLUL HIPOFIZEI ANTERIOARE ASUPRA PRODUCERII ANDROGENILOR I SPERMATOGENEZEI 1.Efectul gonadotropinelor hipofizare asupra secreiei androgenilor ICSH favorizeaz activarea ADENILCICLAZEI (AC) din celulele interstiiale, permind transformarea ATP n AMPc. Acest nucleotid joac un rol esenial n transformarea COL n PREGNENOLON. Stimularea producerii TEST se realizeaz prin aciunea sinergic a ICSH i FSH. Mecanismul de aciune se evideniaz la nivelul celulelor Sertoli. FSH stimuleaz metabolizarea P4 n TESTOSTERON. LTH (PRL) deine un rol pozitiv n steroidogenez prin creterea numrului de receptori pentru ICSH i a acumulrii de colesterol intracelular. Completeaz aciunea principal a ICSH. 2. Rolul hipofizei anterioare n spermatogenez influeneaz volumul (masa) testiculelor; influeneaz numrul celulelor germinale precum i procesul acestora de diviziune i maturare; influeneaz durata ciclului epiteliului seminifer.

III. CONTROLUL ENDOCRIN AL REPRODUCIEI LA MASCUL a. ICSH stimuleaz celulele Leydig rezultnd o descrcare de TEST; b. TEST traverseaz celulele Sertoli sau sunt captate de ABP i parial transformat n DHT; c. rolul principal al FSH este de a stimula funcionarea celulelor Sertoli i de a spori formarea ABP; d. dup trecerea n celulele Sertoli, o parte din androgeni (considerai drept principalii stimulatori ai spermatogenezei), mbib celulele germinale pentru a le dirija diviziunea i diferenierea; e. sub influena funcionrii intense a celulelor germinale, celulele Sertoli elibereaz n snge cantiti crescute de INHIBIN, care va bloca descrcarea de FSH, prin aceasta meninnd procesul spermatogenezei n limite rezonabile. f. feed-backul este exercitat n egal msur i de androgenii prezeni n circulaie care mpiedic eliberarea de ICSH i FSH. g. androgenii circulani contribuie n egal msur la stimularea caracterelor sexuale primare i secundare precum i a comportamentului sexual. h. influena factorilor de mediu, n spe a luminii, care prin intermediul SNC i a epifizei controleaz hipotalamusul, respectiv eliberarea GnRH i consecutiv, funciile hipofizare.

IV. INFLUENA ANOTIMPULUI I A FACTORILOR DE MEDIU ASUPRA REPRODUCIEI LA MASCUL

A. Exemple de influene exercitate asupra reproduciei la berbec 1. Variaia greutii i a activitii testiculare Rasa Ile de France: intervalul decembrie mai, testiculele cntresc 210 grame iar n intervalul iunie-octombrie, 285 grame, rezultnd diferene de 3540% volumul esutului interstiial crete cu 55% volumul tubilor seminiferi crete cu 50% mrimea nucleilor celulelor Sertoli crete cu 20% nr. total de spermatogonii crete cu 60% Studiu fcut pe Merinos, cu aceleai perioade de referin indic: producie spermatic cotidian 1x109 i 4,8x109 rezervele epididimare: 25x109 i 60x109 spermatozoizi procentul spermatozoizilor anormali este maxim n martie-aprilie (30%) i minim n septembrie-octombrie (10%) 2. Variaia greutii i activitii glandelor anexe Activitatea glandelor accesorii (apreciat prin greutatea veziculelor seminale) cunoate aceeai curb cresctoare ca i spermatogeneza. Din iulie pn n decembrie, cantitatea total de fructoz (101,5) este dubl fa de cea observat ntre ianuarie i iunie (51,5). La taur, care este puin sensibil la variaiile sezoniere, singura caracteristic care parcurge un ciclu anual evident este coninutul n fructoz, care este sczut n mai, iunie, iulie, decembrie, ianuarie i crescut n martie i septembrie (echinoxul). 3. Variaia activitii endocrine Activitatea testiculelor i a glandelor anexe depinde de variaia nivelului de LH, care este sczut n decembrie i mai (6,75 g) i ridicat ntre iunie i noiembrie (11,25 g). Nivelul LH sanguin este foarte crescut la nceputul sezonului de mont, numrul pulsiunilor fiind de aproximativ 9 pe zi. B. Influena duratei zilei-lumin Activitatea hipofizo-testicular la berbec se intensific atunci cnd luminozitatea zilnic atinge 9-10 ore. KARSCH i col. (1984): influxul nervos provocat de lumin prin fotoreceptorii retinieni este condus prin nucleul suprachiasmatic i ganglionul cervical superior la epifiz. Epifiza traduce influxul prin secreie de MELATONIN, care este sporit pe parcursul fazei nocturne. Astfel, melatonina intervine n schema de secreie a LH, prin modularea producerii GnRH.

C. Influena temperaturii n principiu, temperaturile ridicate nu influeneaz funcia endocrin a testiculului, afectnd ns, n cazul expunerilor prelungite procentul spermatozoizilor mobili, frecvena anomaliilor capului i cozii precum i procentul ovocitelor fecundate.

SPERMATOGENEZA Schema diviziunilor succesive Spermatozoizii sunt rezultatul unor transformri complexe (diviziuni i diferenieri celulare) care se deruleaz n peretele tubilor seminiferi, fiecare faz avnd importan n volumul i calitatea final a produsului elaborat. Celulele germinale, succesiv diviziunilor i diferenierilor, migreaz de la membrana bazal a tubului seminifer spre lumenul acestuia, rmnnd ns tot timpul ataate celulelor nutritive Sertoli. La nceput, spermatogoniile, reprezentnd celule stem relativ nedifereniate, se multiplic prin mitoz la nivelul membranei bazale a tubilor seminiferi, de-a lungul creia sunt dispuse. Acest proces se produce la nivelul compartimentului bazal al tubilor seminiferi. Spermatogeneza asigur att producerea ciclic a spermatocitelor primare ct i meninerea constant a numrului celulelor stem. n plus fa de aceast mas gata de diviziune, exist i o rezerv de spermatogonii care nu prolifereaz i care sunt extrem de rezistente la aciuni ale radiaiilor sau substanelor toxice. Aceste celule supravieuiesc chiar i traumatismelor suferite de testicul. Restul proceselor au loc n compartimentul lumenal n care spermatocitele primare parcurg meioza pentru a produce spermatocite secundare. Acestea la rndul lor sufer o diviziune meiotic pentru a produce spermatidele. Prima etap: diviziunile spermatogoniale Un stoc de spermatogonii sue de rezerv (spermatogonii A0 ), provenite din gonocite i constituite n special nainte de pubertate, se divid, fr a se putea preciza exact numrul diviziunilor. Pe parcursul dezvoltrii embrionare, celule speciale denumite celule germinale primordiale migreaz din regiunea sacului embrionar n gonadele nedifereniate. Dup ce ajung la gonadele fetale, celulele primordiale se divid de cteva ori nainte de a forma celulele denumite gonocite. La mascul, aceste gonocite par s parcurg diferenierea chiar naintea pubertii pentru a forma spermatogonia A0, care st la originea celorlalte celule germinale. Sub influena hormonilor antehipofizari gonadotropi LH i FSH, aceste spermatogonii A0 se vor putea divide n noi spermatogonii sue (A0 i A1). Spermatogoniile sue A1 sunt mai difereniate i continu diviziunile ulterioare pentru ca peste 46 49 de zile s devin spermatozoizi, n timp ce spermatogoniile A0 rmn (la adult) de rezerv un timp variabil, permind relansarea activitii spermatogenice n anumite perioade ale anului (sezon sexual).

Spermatogoniile A1 se divid, rezultnd spermatogonii A2. Acestea (A2) vor furniza spermatogoniile A3 (mai difereniate, fiind numite spermatogonii active) precum i spermatogonii sue A1 (noi), denumite spermatogonii imobile. Spermatogoniile imobile A1 rmn n repaus pn la urmtorul ciclu spermatogenic, cnd ele vor juca rolul spermatogoniei sue care va genera A2 apoi A3 i A1 etc. n acest mod, spermatozoizii formai vor fi ntotdeauna tineri deoarece diviziunea care d natere celulelor mam este relativ recent. Spermatogoniile active A3 intr imediat n diviziune i se observ 4 mitoze succesive (la berbec i taur, deoarece acest numr este diferit la alte specii) care conduc la formarea succesiv de celule denumite : spermatogonii intermediare, spermatogonii B1, spermatogonii B2 i spermatocite primare. La cine se consider c exist i spermatogoniile A4, care ndeplinesc aceleai roluri ca i A3 la alte specii (Hewitt 1998). Exist diferene ntre modurile de clasificare a spermatogoniilor, iar la anumite specii, se evideniaz trei i nu patru tipuri de spermatogonii. Spermatocitul primar este n realitate o spermatogonie care intr n meioz. Aceast etap a diviziunilor spermatogoniale este, n mare parte, responsabil de producia cantitativ de spermatozoizi din cel puin trei motive: a) exist corelaie pozitiv ntre: - numrul total de celule somatice Sertoli, stabilit nainte de pubertate i cel al spermatogoniilor sue A1 din testicul; - numrul total de celule sue A1 din testicul i producia cotidian de spermatozoizi. b) numrul de diviziuni ntre spermatogonia su A1 i ultima generaie spermatogonial este crescut i spermatogonia A1 imobil a liniei spermatice urmtoare se izoleaz trziu, n plus numrul de celule fiice pe celul su este important. c) n cursul diviziunilor spermatogoniale ( ntre A2 i B2) apare un numr foarte mare de degenerescene: 2/3 din producia teoretic este pierdut la taur, aproximativ jumtate la berbec sau obolan. Aceste degenerescene sunt sub control endocrin gonadotrop. Variaiile luminoase sezoniere joac, n aceast privin un rol important la berbec. A doua etap: meioza, diviziunea spermatocitelor i formarea spermatidelor Spermatocitele I (2n cromozomi) provenite din diviziunea ultimei generaii spermatogoniale, sufer reducerea cromatinic (prima diviziune reducional) dup o lung profaz meiotic i dau natere spermatocitelor II cu n cromozomi care dup o via foarte scurt se divid n spermatide (a doua diviziune ecvaional). Aceast etap permite trecerea de la valoarea tetraploid a genomului (2n cromozomi sub form de tetrade) din spermatocitele I n profaz, la valori haploide care caracterizeaz gameii. La nceputul acestei etape se produce ultima sintez de ADN. Linia germinal i cteva spermatocite prsesc progresiv compartimentul bazal al tubului seminifer pentru a intra n compartimentul central, n interiorul barierei testiculare formate prin jonciunile foarte strnse dintre membranele citoplasmatice ale celulelor Sertoli nvecinate.

Un numr mare de elemente trec spre compartimentul central traversnd citoplasma sertolinean. n stadiul leptoten, cromozomii se individualizeaz, apoi, n stadiul zigoten se pliaz (mpacheteaz), n pahiten fiecare cromozom se ngroa, n diploten se produce dispersia cromozomilor, tetradele fiind foarte evidente. n timpul diachinezei, cromozomii foarte spiralai nu sunt ataai dect prin chiasma. n timpul acestor faze, mitocondriile sufer modificri importante nsoite de hipertrofierea cristelor. Durata vieii spermatocitelor I este variabil de la o specie la alte dar constant n cadrul aceleiai specii. Hipofizectomia antreneaz numeroase degenerescene n cursul meiozei, n special n pahiten. Administrarea testosteronului corecteaz parial efectele (n cazul obolanului). Prima diviziune reducional conduce la spermatocite II (cu n cromozomi), morfologic foarte diferite de spermatocitele I, fiind ns foarte asemntoare (dar ceva mai mari) cu spermatidele rotunde care provin din a doua diviziune ecvaional. Procesul diviziunii poate fi uneori perturbat. Astfel, s-a evideniat la taurii Charolaise prezena spermatozoizilor diploizi (1,73 % din spermatozoizi prezentnd un flagel dublu sau o pies intermediar dubl). aceast anomalie ar putea fi dat de transformarea direct (n absena celei de-a doua diviziuni meiotice de maturare) a spermatocitelor secundare n spermatide. Spermatidele pot suferi diferenierea n celule specializate mobile (spermiogeneza).

A treia etap: (spermiogeneza)

transformarea

spermatidelor

spermatozoizi

Spermatida provenit n urma meiozei se va transforma n spermatozoid consecutiv unor modificri morfologice complexe. n funcie de evoluia nucleului spermatidelor, se pot distinge trei populaii: spermatidele cu nucleu rotund, spermatidele cu nucleu n alungire (oval) precum i cele cu nucleu alungit. La nivelul citoplasmei, spermatida sufer transformri importante cu achiziionarea unei polariti celulare, a unui aparat locomotor precum i a unui echipament enzimatic, fiind capabil de a ajunge la ovocit i de a-i penetra citoplasma (n vederea fecundaiei). Evoluia citoplasmei spermatidelor a fost studiat graie tehnicii coloraiei PAS (care pune n eviden glicoproteinele). A fost posibil astfel urmrirea formrii aparatului acrosomic precum i definirea celor 4 etape succesive, respectiv fazele Golgi, cap, acrozomial i de maturaie. FAZA GOLGI Este caracterizat prin formarea unor granule proacrozomale PAS-pozitive la interiorul aparatului Golgi, confluarea granulelor ntr-o singur granul acrozomal, aderarea acestei granule rezultante la membrana nuclear precum i stadiile timpurii ale dezvoltrii cozii la polul opus celui la care ader granula

acrozomal. Centriolul proximal migreaz foarte aproape de nucleu, unde se presupune c formeaz o baz pentru ataarea cozii la cap. FAZA CAP Este caracterizat prin difuzarea granulei acrozomiale aderente, pe suprafaa nucleului spermatidei. Acest proces continu pn cnd aproape dou treimi din poriunea anterioar a nucleului fiecrei spermatide este acoperit de ctre o membran subire, alctuit din dou straturi, adernd puternic la membrana nuclear. Pe parcursul acestei faze, componentele axonemale ale cozii aflate n dezvoltare, formate din elemente ale centriolului distal, se alungesc mult peste marginea citoplasmei celulare. Pe parcursul dezvoltrii timpurii, axonema este foarte asemntoare cu structura unui cil alctuit din doi tubi centrali nconjurai de nou perechi de tubuli. FAZA ACROZOMIAL Este caracterizat prin modificri care survin la nivelul nucleului, acrozomului i cozii spermatidelor n dezvoltare. Modificrile sunt facilitate de rotaia fiecrei spermatide astfel nct acrozomul este direcionat ctre baza peretelui exterior al tubului seminifer iar coada este direcionat spre lumen. Modificrile nucleare includ condensarea cromatinei n granule dense i reformarea nucleului sferoidal ntr-o structur alungit, plat. Acrozomul, care este aproape aderent nucleului, de asemenea se condenseaz i se alungete pentru a corespunde formei nucleului. Aceste modificri ale formei nucleului i acrozomului par a fi modelate de ctre celulele Sertoli nconjurtoare. Modificrile morfologice sunt uor diferite pentru fiecare specie, aspect care se reflect n particularitile spermatidelor i spermatozoizilor. Modificrile n morfologia nuclear sunt nsoite de deplasarea citoplasmei spre captul caudal al nucleului, unde nconjoar poriunea proximal a cozii n dezvoltare. n interiorul acestei citoplasme, microtubulii se asociaz pentru a forma o cma cilindric numit manet , care se proiecteaz posterior de extremitatea caudal a acrozomului, unde subiindu-se nconjoar axonema. n maneta cilindric, o structur citoplasmic specializat denumit corpul cromatoid se condenseaz n jurul axonemei pentru a forma structura circular cunoscut sub denumirea de anulus. Anulusul se formeaz la nceput lng centriolul proximal i pe parcursul dezvoltrii sale migreaz caudal de-a lungul cozii. Mitocondriile, care anterior au fost distribuite n citoplasma spermatidei, ncep s se concentreze n apropierea axonemei, unde formeaz nvelitoarea care caracterizeaz piesa mijlocie a cozii. FAZA DE MATURARE Implic transformarea final a spermatidei alungite n celula care va fi eliberat n tubul seminifer. Remodelarea nucleului i acrozomului fiecrei spermatide, iniiate pe parcursul fazei precedente va avea drept efect generarea spermatozoizilor caracteristici fiecrei specii. La interiorul nucleului, granulele de cromatin parcurg o condensare progresiv pn cnd vor forma un material fin, omogen care va umple n mod uniform ntregul nucleu al spermatozoidului. Pe parcursul fazei de maturare, n jurul axonemei se formeaz un nveli fibros, cptuit de nou fibre. Fibrele par s fie asociate separat cu nou perechi de microtubuli ai axonemei i se continu cu coloane la interiorul gtului piesei

de legtur a spermatidei. nveliul fibros acoper axonema de la gt pn la nceputul piesei terminale. Anulusul migreaz distal de aceast poziie, adiacent nucleului de-a lungul cozii pn la un punct n care va separa piesa intermediar de piesa principal a cozii. Mitocondriile vor fi strns mpachetate ntr-un nveli continuu, de la gt pn la annulus. n timpul ultimelor stadii ale spermiogenezei, maneta dispare i atunci celulele Sertoli formeaz din citoplasma care rmne dup alungirea spermatidei, un lob sferoidal denumit corpul rezidual. Acest lob citoplasmatic, care rmne ataat la spermatida alungit, printr-o poriune ngust de citoplasm, este de asemenea interconectat cu ali corpi reziduali prin puni intercelulare care rezult din diviziunea incomplet a celulelor germinale pe parcursul spermatocitogenezei. Formarea corpului rezidual completeaz maturarea final, iar spermatidele alungite sunt gata pentru a fi puse n libertate sub form de spermatozoizi. Spermiaia Astfel este denumit procesul prin care celulele germinale sunt eliberate n lumenul tubilor seminiferi dup spermatogenez i spermiogenez. Celulele astfel puse n libertate sunt considerate a fi spermatozoizi. Celulele Sertoli sunt asociate cu celulele germinale pe parcursul dezvoltrii acestora i s-a evideniat faptul c morfologia lor funcional, la unele specii difer n funcie de stadiul de dezvoltare atins de celulele germinale cu care sunt asociate. Rolul celulelor Sertoli n spermatogenez include suportul i nutriia celulelor germinale, fagocitoza elementelor mbtrnite precum i secreia lichidelor lumenale. Celulele Leydig au de asemenea un rol n susinerea spermatogenezei. Compartimentul celulelor interstiiale nconjoar compartimentul tubilor seminiferi pe care l scald ntr-un lichid bogat n testosteron. n plus, celulele mioide care formeaz limita epiteliului seminifer, contribuie la micrile de propulsie ale spermatozoizilor precum i ale lichidului n tubii seminiferi. i celulele mioide, n mod asemntor celulelor Leydig i Sertoli, sunt afectate de factorii testiculari de cretere. Cercetarea unei seciuni histologice transversale prin tubii seminiferi relev diferite moduri de aranjare, depinznd de tipul celulei germinale, morfologia i stadiul de dezvoltare a acesteia, precum i de dispunerea n straturi n lumenul tubilor. n orice zon a tubului seminifer, pe seciune sunt evidente asocieri ale celulelor germinale aparinnd fiecrui tip. O poriune a tubului coninnd celule de un anume tip este nvecinat cu poriuni coninnd celule aflate n stadiile precedente i imediat urmtoare celor de referin. ntreaga serie a acestor asocieri este denumit ciclul spermatogen. Intervalul necesar completrii unui asemenea ciclu este definit drept durata ciclului spermatogen, reprezentnd timpul scurs ntre dou eliberri consecutive de spermatozoizi. Acesta dureaz 13,8 zile la cine. Un interval mediu de 62 de zile este necesar pentru

spermatogenez la cine. n literatur nu exist informaii similare referitoare la motan, dar se presupune c ar fi ceva asemntor. Dispunerea secvenial n spaiu a celulelor n dezvoltare, pe lungimea tubului seminifer la un moment dat este cunoscut drept valul spermatogen (spermatogenic wave). Acest aranjament spaial poate servi eliberrii constante de spermatozoizi, reducerii congestiei care altfel ar aprea dac spermiaia ar fi simultan pe parcursul lungimii tubului seminifer, iar la modul general faciliteaz maturarea spermatozoizilor precum i transportul acestora prin tubi.

Disciplina de reproducie obstetric i ginecologie Anul VI medicin veterinar

CURSUL nr. 6
BARIERA HEMATO TESTICULAR Jonciunile celulare Tubii seminiferi nu sunt strbtui de vase de snge sau limf. Mai mult, celulele germinale n dezvoltare din interiorul tubilor sunt protejate de modificrile chimice ale sngelui printr-o barier specializat n permeabilitate. Aceast barier hemato testicular are dou componente principale: 1. bariera incomplet sau parial a celulelor mioide care nconjoar tubii i 2. legturile de tip special dintre celulele Sertoli nvecinate. Celulele mioide Membrana bazal sau tunica propria care nconjoar tubii seminiferi conine un strat de celule mioide contractile. La unele specii, majoritatea legturilor intercelulare din acest strat sunt sudate prin alipirea strns a membranelor celulare nvecinate. Aceast barier nu este bine dezvoltat la taur, berbec sau vier, avnd o importan limitat ca barier specializat n permeabilitate n testiculele animalelor de ferm. Legturile dintre celulele Sertoli Principala barier de permeabilitate dintre snge i testicul se consider a fi complexele situate la jonciunile dintre celulele Sertoli nvecinate. Aceste jonciuni Sertoli Sertoli, situate chiar lng baza celulelor, conin multiple zone de aderen (legturi strnse) n care membranele opuse sunt unite. Aceste jonciuni blocante mpart tubul seminifer n dou compartimente distincte: 1. un compartiment bazal, care conine spermatogonii i spermatocite n preleptoten, i 2. un compartiment adluminal, coninnd stadiile mai avansate ale spermatocitelor i spermatidelor, care comunic liber cu lumenul tubilor. n compartimentul bazal au acces liber componentele care anterior au ptruns prin stratul celulelor mioide. Cea de-a doua barier, compus din jonciunile blocante, demonstreaz un nalt grad de permeabilitate, de la completa excludere a unor substane pn la aproape liberul transfer al altora. Permeabilitatea difereniat pare a fi important n meninerea unui mediu potrivit pentru funcia spermatogen a tubilor. Bariera H-T nu doar exclude ptrunderea unor anumite substane dar i funcioneaz prin pstrarea unor niveluri specifice ale anumitor substane, precum ABP, inhibina i inhibitori ai enzimelor. ANTIGENITATEA SPERMATOZOIZILOR O funcie important a barierei hemato testiculare este izolarea imunologic a gameilor n dezvoltare. Importana sa rezid n faptul c spermatocitele, spermatidele i spermatozoizii sunt aproape percepute ca celule strine de ctre sistemul imun al masculului adult. Deci, sechestrarea celulelor germinale n dezvoltare n spatele unei bariere imunologice previne formarea anticorpilor mpotriva propriilor celule spermatice n organismul masculului adult.

AUTOIMUNITATEA Imunizarea unui mascul mpotriva SPE sau a unor antigeni spermatici izolai determin diferite grade de orhite autoimune precum i ntreruperea spermatogenezei. Leziunile barierei H-T sau ale poriunii epididimale a canalului deferent (traumatisme sau infecii) adesea genereaz orhite autoimune care afecteaz ambele testicule. i vazectomia poate genera orhit autoimun. Gravitatea acesteia depinde de specie precum i de intervalul postoperator. n acest caz se presupune c rspunsul autoimun apare datorit destinderii intermitente i rupturii cilor ligaturate ceea ce va genera eliberarea SPE n cavitatea peritoneal. Ca rezultat al autoimunizrii, concentraia Ac antiSPE din lichidul seminal poate fi crescut. Ac sunt transportai n sperm din plasma sanguin precum i n secreia veziculelor seminale i a prostatei.. Aceti Ac nu pot ptrunde n tubii seminiferi datorit barierei H-T. Drept urmare, masculi cu tubii seminiferi normali dpdv histologic pot fi infertili consecutiv prezenei Ac n lichidul seminal. Spermatozoizii care cupleaz Ac pe suprafaa lor pot suferi o modificare a motilitii precum i imposibilitatea de a ptrunde prin mucusul cervical. Anticorpii antispermatici pot determina aglutinarea SPE i formarea unor coaguli mari. Ac direcionai mpotriva SPE pot influena n mod evident fertilitatea masculului. Aceti Ac pot fi detectai cu ajutorul imunofluorescenei, cu antiglobuline radiomarcate sau prin metodele care recurg la imobilizarea SPE sau la aglutinarea lor. Anticorpii antispermatici interfereaz funciile SPE prin mai multe ci: 1. Ac pot interfera diferite procese interactive dintre celule, inclusiv capacitarea i hiperactivarea spermatozoizilor, ataarea SPE, reacia acrozomului i ptrunderea prin ZP; 2. Ac cuplai pe suprafaa SPE pot inhiba supravieuirea i ptrunderea prin mucusul cervical; 3. Autoanticorpii antispermatozoizi pot interfera spermatogeneza. Cantitatea imunoglobulinelor cuplate la spermatozoizii ejaculai depinde de cteva mecanisme: 1. Concentraia Ac antispermatici n secreiile glandelor accesorii ale masculului; 2. Producia local a Ac comparativ cu cea care transsudeaz din snge; 3. Cuplarea Ac la SPE n epididim naintea ejaculrii, comparativ cu cuplarea care apare atunci cnd spermatozoizii sunt amestecai cu lichidul seminal; 4. Timpul scurs de la ultima ejaculare; 5. Afinitatea Ac fa de suprafaa SPE. PATOLOGIA APARATULUI GENITAL MASCUL Afeciunile testiculare Hipoplazia testicular stare patologic congenital care se manifest la pubertate este necesar diferenierea fa de atrofie i testiculele reduse n dimensiuni la apariia hipoplaziei testiculare contribuie factorii de mediu, rasa, anomaliile citogenetice, caracteristicile de intersexualitate i criptorhidismul important la tauri

diagnosticul nu se stabilete doar pe baza dimensiunilor testiculare se iau n considerare i caracteristicile spermei, structura histologic a testiculului precum i datele anamnetice dpdv microscopic, hipoplazia testicular variaz de la parial la difuz, putnd fi unisau bilateral n cazurile grave, tubii seminiferi sunt redui n dimensiuni, marcai doar de celulele Sertoli, prezentnd o membran bazal ngroat Criptorhidia Testiculul nu coboar n scrot. Dehiscena presupune migrarea tansabdominal (independent de androgeni) i coborrea ingvino-scrotal (dependent de androgeni), influenat de nervul genitofemural i gubernaculum n mod obinuit exprimare unilateral, fiind frecvent ntlnit la vieri i armsari asociat cu hipoplazia testicular asociat criptorhidiei, se pot evidenia: disgenez cromozomial, lipsa androgenilor, a GnRH, gubernaculum incomplet dezvoltat Degenerescena testicular cauz major a infertilitii la masculii tuturor speciilor frecvena crete pe msura mbtrnirii cauze: temperaturile extreme, infeciile sistemice, factori nutriionali, toxine, deficiene hormonale i excese, ocluzii vasculare, obstrucii ale fluxului spermatic, autoimunitatea i vrsta degenerescena testicular progreseaz de la atrofie la stadiul de fibroz (colapsul tubilor seminiferi) inflamaia imuno-mediat a esutului interstiial (antigeni intratubulari traverseaz bariera H-T) Procesele inflamatorii orhitele pot debuta ca periorhite cu reacie inflamatorie a tunicii vaginale care implic gradat i testiculele o peritonit anterioar poate reprezenta cauza obinuit a orhitei, avnd n vedere legtura dintre peritoneu i straturile tunicii vaginale, prin intermediul inelului ingvinal cale ascendent (hematogen) - traumatisme, bacterii (Brucella sp.), saprofii ai cilor genito-urinare (Actinomyces, E.coli, Haemophilus spp) uni- sau bilateral; inflamaia unui testicul poate produce modificri termice la testiculul contralateral) Tumorile testiculare descrise la cini, armsari i tauri tumori gonado-stromale (ale celulelor Leydig i Sertoli) tumori ale celulelor germinative (seminoame i teratoame) seminoamele exprim un potenial malignizant la armsari la cine, tipul tumorii poate fi relativ uor diagnosticat pe baza aspectului macroscopic al seciunii

Biopsia testicular poate fi utilizat complementar examenului spermei pentru a determina cauza infertilitii exceptnd taurul, unde tunica albugineea este bogat vascularizat, se poate uor preleva esut testicular se recomand tehnica transcutanat aseptic, pentru a reduce riscul infeciilor Examenul spermei calitatea spermei se apreciaz pe baza volumului ejaculatului, concentraiei spermatozoizilor, mobilitii i caracteristicilor morfologice ale acestora circumferina scrotal (tauri) intensitatea libidoului i a disponibilitii pentru mperechere Glandele anexe controlul androgenilor maturarea spermatozoizilor se desvrete n plasma seminal, sub influena factorilor constitueni ai acesteia taur: disfuncii ale glandelor accesorii (n special ale epididimului) pot genera anumite anomalii ale spermatozoizilor epididimita berbecilor (Brucella ovis - coada epididimului, extinzndu-se i la alte poriuni; Hemophilus agni sau Actinobacillus seminis determin inflamaia capului epididimar la berbecii tineri) seminoveziculita (adenita veziculelor seminale) taurilor generat de: Brucella, Actimomyces pyogenes, Chlamydia spp., Mycoplasma spp., Ureaplasma diversum, Hemophilus somnus, Streptococci, Staphylococci Afeciunile penisului hematomul - ruptura corpului cavernos sau a tunicii albugineea (intromisiune sau micri copulatorii - rasele grele de tauri) habronemiaza (Habronema spp) se dezvolt n procesul uretral al penisului cailor, genernd o inflamaie semnificativ a prepuului i penisului balanita i postita; att penisul ct i prepuul se inflameaz consecutiv aciunii bacteriilor i virusurilor; de obicei apare balano-postita neoplaziile peniene fibropapilomul; la taur, virus papilloma; produce durere, animalele afectate refuznd monta carcinomul celulelor scvamoase; apare la armsari, avnd aspect ulcerativ, conopidiform, localizat pe gland sau prepu tumorile veneriene transmisibile; apar la cine, tumorile prezentnd un cariotip constant de 59 de cromozomi somatici (fa de cei 78 prezeni n mod normal la cine)

INFERTILITATEA MASCULULUI Anamneza boli de tineree (traumatisme torsionri)

pubertate: - precoce (sindrom adreno-genital) - tardiv (sindrom Klinefelter sau hipopgonadism idiopatic) expunerea prenatal la DES sporete incidena chitilor epididimari i a frecvenei criptorhidismului expunerea la substane toxice, cldur, radiaii chimioterapia exercit un efect dependent de doz, exercitnd o influen devastatoare asupra epiteliului germinal steroizi anabolizani, cimetidina, spironolactona afecteaz ciclul reproductiv sulfasalazina, nitrofurantoina afecteaz motilitatea spermatozoizilor tratamente anterioare ale afeciunilor interne sau chirurgicale pot compromite temporar funcia de reproducere monorhizii - caractersitici modificate ale spermei rezolvarea herniilor testiculare poate afecta canalul deferent i vascularizaia testiculului orice stare febril deregleaz spermatogeneza; caracteristicile ejaculatului pot fi afectate 2-3 luni dup eveniment afeciuni renale, ale tiroidei, ficatului, influeneaz fertilitatea i chiar parametrii hormonali Examenul clinic semne de hipogonadism (caractere sexuale slab dezvoltate, penis, testicule, prostat, scrot subdezvoltate, mas muscular subdezvoltat) testicule: dac tubii seminiferi au fost afectai naintea pubertii, testiculele sunt mici i tari; dac au fost afectai post puberal, sunt mici i moi neregulariti ale epididimului sugereaz o fost infecie i o posibil obstrucie prostat mic (deficien de androgeni) sau mrit (infecie) anomaliile penisului - hipospadias, curbare anormal i fimoz palparea scrotului (evidenierea varicocelului) i a canalelor deferente (2% dintre brbaii infertili evideniaz absena congenital a canalelor deferente i a veziculelor seminale) Cauze pre-testiculare deficiena secreiei de gonadotropin releasing factors hiposecreie de FSH, LH insuficien hipofizar (tumori, procese infiltrative, intervenii chirurgicale, radiaii) hiperprolactinemie hemocromatoz (brbat) tulburri endocrine (exces de estrogeni-androgeni, glucocorticoizi, hiper- i hipotiroidism Cauze testiculare anomalii cromozomiale (Klinefelter, XYY) distrofie mioton anorhie bilateral aplazia celulelor germinale (Sertoli-cell-only syndrome) gonadotoxine (medicamente, radiaii) orhite traumatisme

afeciuni sistemice (renale, hepatice) tulburri ale sintezei ANDR sau aciunii acestora criptorhidie varicocel Cauze post-testiculare tulburri ale transportului spermei (congenitale, dobndite sau funcionale) tulburri ale motilitii sau funciilor SPE defecte congenitale ale cozii SPE defecte de maturare afeciuni imunologice infecii tulburri ale funciei sexuale Diagnosticul infertilitii biopsia i radiografia testicular evaluarea spermei evaluarea statusului hormonal (FSH, LH, LTH) studierea cromozomilor investigaii imunologice testri speciale ale SPE: interaciunea SPE-mucus cervical, evaluarea acrozomului, testul hipo-osmotic Tratamentul infertilitii varicocelectomia ablaia adenoamelor hipofizare terapie hormonal de substituie terapia infertilitii de natur imunologic tehnicile de reproducere asistat

Disciplina de reproducie obstetric i ginecologie Anul VI medicin veterinar

CURSUL nr. 7
Endocrine Disruptors to disrupt = a distruge, a sfrma, a dezmembra, a submina, a dizloca, a sparge Rachel Carson - 1962 - Silent Spring Theo Colborn, Diane Dumanovski and John Peterson Myers - 1996, Dutton Press - Our Stolen Future: Are We Threatening Our Fertility, Intelligence and Survival ? Sheldon Krimsky 2000 Hormonal Chaos : The Scientific and Social Origins of the Environmental Endocrine Hypothesis. John Hopkins University Press, Baltimore, MD

SISTEMUL ENDOCRIN Sistemul endocrin acioneaz ca un sistem de mesaje chimice care asigur comunicarea n ntregul organism. Asigur controlul i reglarea funciilor organismului, n mod special a creterii i dezvoltrii Hormonii - n concentraii mici induc efecte semnificative - generai de creier, tiroid, gonade i alte glande endocrine, eliberai n fluxul sanguin care i poart la organele - int, unde activeaz i regleaz anumite funcii Sistemul este dirijat de la nivelul hipofizei, care acioneaz ca un centru de control, indicnd ovarelor sau tiroidei cnd i ci hormoni s produc i s elibereze - hipofiza este n acord fin cu hipotalamusul, care acioneaz ca un termostat, solicitnd hipofiza s intensifice producia, s o diminueze sau s o suprime Toate aceste mesaje induc cte un feed-back, meninnd toate componentele organismului n funciune i acionnd ca un ntreg De asemenea, hormonii ghideaz dezvoltarea sistemului nervos i al celui imunitar al copilului n acelai timp, hormonii programeaz funcionarea corespunztoare a organelor i esuturilor precum ficat, rinichi, musculatur; aceste procese de reglare sunt cruciale n perioada timpurie de dezvoltare a copilului Hormonii tirodieni sunt eseniali pentru funcia neurologic normal, deficienele acestor hormoni pe parcursul perioadei fetale sau copilriei ducnd la retardare mental, pierderea auzului i probleme logopedice Chiar n cazul unui IQ normal, copii care au suferit deficiene ale hormonilor tiroidieni sunt predispui la probleme de nelegere a limbajului, dificulti de nvare i memorizare, precum i comportament hiperactiv

SUBSTANELE CHIMICE INTERFEREAZ ACESTE SISTEME ESENIALE DE REGLARE Endocrine Disruptor = orice substan exogen care genereaz efecte adverse asupra sntii unui organism integru, sau asupra descendenilor acestuia, consecutiv modificrilor induse n funcia endocrin Endocrine Disruptor = orice substan care poate interfera funcia hormonal normal majoritatea sunt substane sintetice, liposolubile, reprezentate de pesticide sau chimicale de uz industrial pesticidele includ compui clorurai (DDT), toxafen i kepon compuii industriali includ PCB (bifenoli policlorurai), fenoli i dioxine caracteristicile comune sunt reprezentate de persistena ndelungat n mediu i organisme, fiind mai degrab liposolubile, dect hidrosolubile Hormono-mimetice substane chimice care acioneaz n organism ca i hormonii normali DES (dietilstilbestrol), administrat n anii `50 i `60 pentru a preveni avorturile la femei fiicele mamelor tratate cu DES au manifestat o inciden crescut a unei forme rare de cancer i a endometriozei fii mamelor tratate cu DES au nregistrat o frecven crescut a criptorhidiei, hipospadiasului, iar ca aduli, oligospermie Hormono-blocante interfereaz funcionarea natural a hormonilor substanele blocante se cupleaz la aceiai receptori proteici ca hormonii, fr a stimula ns vreo aciune aceste substane doar blocheaz calea hormonilor, mpiedicndu-i s-i transmit mesajele DDE (metabolit al DDT) a blocat aciunea TEST, conducnd la apariia penisurilor subdimensionate la aligatorii din Lake Apopka, Florida Hormono-declanatoare substane chimice care interfereaz prin cuplarea la receptorii proteici, dar mai apoi declaneaz un rspuns anormal n celul aceste substane declanatoare genereaz creterea la momentul nepotrivit, modificri ale metabolismului sau sinteza unor produi diferii dioxina i derivaii si dioxina acioneaz printr-un proces asemntor celui declanat de un hormon, genernd ns rspunsuri complet noi Aciuni demonstrate ale EDs La masculii animalelor de laborator, expunerea la Eds a determinat influenarea factorilor T de cretere produi la nivel local (TGF = transforming growth factor i NT3 = neurotropin family of factors), cu aciune paracrin asupra creterii i dezvoltrii testiculare. Studiile au demonstrat c factorii din mediu, exercitnd aciune de tip estrogenic (ex. metoxiclor) sau anti-androgenic (ex. vinclozolina) afecteaz fertilitatea masculilor perturbnd aciunea neurotropinelor sau a factorilor de cretere. Mai mult, a fost

evideniat efectul metoxiclorului asupra generaiei F1. Mamele expuse au generat masculi afectai de o funcie spermatogenic sczut i de un grad ridicat al apoptozei spermatozoizilor. Femelele de hamster supuse aciunii DES (dietilstilbestrol) sau 17 estradiolului, au demonstrat la nivelul uterului o activitate hiperplazic intensificat i un nivel ridicat al apoptozei. Studiul a dovedit c DES este un EDs perinatal mai activ dect E2. Expunerea perinatal la estrogeni a generat un estru persistent, caracterizat prin lipsa ovulaiei i ovare chistice care au secretat cantiti mari de E2, i puin sau deloc P4. Fenomenul rspunsului estrogenic deviant la nivelul uterului femelelor de hamster expuse perinatal la DES include att amplificarea creterii celulare ct i apoptoza celulelor epiteliale endometriale, procesul fiind generat de dezechilibrul exprimrii anumitor oncogene implicate n controlul proliferrii celulare. Expunerea iin uttero la dioxine, PCBs i DDT a generat organisme animale cu fertilitate Expunerea n u ero redus, anomalii neurologice i alte deficiene. Contaminarea cu EDs contaminarea primar cu EDs (dioxin, PCBs) are loc prin intermediul hranei (n special carne i pete contaminate cu niveluri sczute ale acestor chimicale) petele care provine din regiuni puternic contaminate poate purta n grsimea sa concentraii superioare celor evideniate n carnea de vit, porc sau pui sursa contaminrii o reprezint arderea deeurilor clorurate, scprile din procesele industriale sau pesticidele care ajung accidental n rezervele de hran chimicalele de uz industrial ajung n hran din emisiile n aer sau atunci cnd resturile deversate n mediu sunt ingerate de peti, vite, porci, pui sau alte animale domestice emisiile de gaze de la crematoare sau alte procese de ardere (dioxin, PCBs) pesticide aplicate pe recolte, care rmn pe acestea sau ajung n hran ap potabil contaminat cu EDs sau provenit din scurgeri din recipiente de plastic heringi care formeaz perechi de acelai sex i abandoneaz oule vulturi care nu mai manifest comportamentul de clocire i-i neglijeaz puii scderea dramatic a populaiilor de vidre cocoi feminizai miei nscui orbi scderea populaiei de uri albi delfinii euai i focile moarte pe coastele Atlanticului, Mediteranei contaminarea cu EDs poate genera fenomene asemntoare celor declanate de steroizii sexuali, afectnd negativ sntatea i capacitatea reproductiv a organismelor expunerea la EDs poate contribui la declanarea cancerelor hormono-dependente (de sn, prostat sau testiculare), a tulburrilor funciei de reproducere la masculi, n mod special prin scderea numrului spermatozoizilor din ejaculat i a volumului acestuia se consider c aceste efecte sunt mediate prin intermediul proteinelor specifice cunoscute drept RECEPTORII PENTRU ESTROGENI, ANDROGENI, HORMONI TIROIDIENI I DIOXIN

efectull dozellor sczute efectu doze or sczute

1997: Whelshons et al. Este necesar ca DOAR o mic proporie (5-10%) a receptorilor s fie ocupai pentru a induce un rspuns. Nagel et al (1997) au artat c 2 ppb de BISFENOL A administrate oricioaicelor gestante sunt suficiente pentru a induce hipertrofia prostatei la descendeni. Doza era de 25.000 mai mic dect cea de 50 mg/kg, recunoscut drept NOAEL (No Observed Adverse Effects Level) 1997: Colerangle and Roy au artat c o doz de BISFENOL A de 30 de ori mai mic dect cea stabilit de Comunitatea European a determinat un efect profund asupra activitii proliferative a glandei mamare la obolan 1998: Vom Saal i col. consider c datele anterioare sugereaz c o tulburare a dezvoltrii organelor reproductive fetale ar putea surveni n cazul n care mama nsrcinat consum zilnic, timp de o sptmn, cantitile de BISFENOL A care se gsesc n mod obiinuiitt n conserve sau produse alimentare nclzite n recipieni de ob nu policarbonat. Evidence of Reproductive Endocrine Effects in Women with Occupational Fuel and Solvent Exposures. Susan R. Reutman et al. Environmental Health Perspectives 2002; 110:805-811 Hidrocarburile (HC) din combustibili i solveni 63 femei din U.S. Air Force: aerul expirat, urin toluenul i benzenul - cele mai frecvent izolate n aerul expirat femeile cu cea mai ridicat expunere la HC au avut cele mai sczute niveluri ale LH se presupune c unii compui ai combustibililor i solvenilor acioneaz ca destabilizatori endocrini Semen quality and reproductive endocrine function in relation to biomarkers of lead, cadmium, zinc and copper in men. Telisman S et al. Environmental Health Perspective 2000; 108:45-53 149 muncitori sntoi care lucrau cu plumb Lucrtorii cu Pb: densitate i motilitate sczut, % crescut de SPE anormali, E2 crescut Cd corelat pozitiv cu % SPE anormali, nivelurile crescute ale LH i TEST i LTH sczut Pb i Cd acioneaz asupra testiculelor inducnd o deficien relativ de Zn sau interfernd distribuia acestuia Zn indispensabil producerii, maturrii i viabilitii SPE Testicular cancer and occupational exposures with a focus on xenoestrogens in polyvinyl chloride plastics. Ohlson CG, Hardell L. Chemosphere 2000; 40:1277-1282 cancerul testicular i activitatea n fabricarea PVC de 6x mai muli brbai cu seminom, ntre cei care au lucrat n industria PVC-ului substanele de nmuiere pe baz de ftalai, utilizate n fabricarea PVC, au fost identificate ca avnd toxicitate testicular i aciune endocrin destabilizatoare la animale The PBDEs: An emerging environmental challenge and another reason for breast-milk monitoring programs. Hooper K., McDonald TA. Environmental Health Perspective 2000; 108:387-392

PBDEs (polybrominated diphenyl ethers) sunt reziduuri prezente n mase plastice, spume i textile. Nefiind legate la produsele plastice, sunt eliberate n timp, contaminnd mediul interior i cel exterior PBDEs par a fi carcinogene, EDs i toxice pentru dezvoltarea sistemului neuronal PBDEs au fost asociate cu limfomul ne-Hodgkin la om, cancere la roztoare i dezechilibrarea homeostaziei hormonilor tiroidieni Endocrine Disruptors Block Sperm Function. Fraser R.L et al., Global Pesticide Campaigner (Volume 12, Number 2), August 2002. Spermatozoizii expui la aciunea EDs se matureaz prea rapid i rateaz ntlnirea cu ovocita, sau dac ajung, nu o mai pot fecunda. Cercettorii au artat c suspensionarea spermatozoizilor de oarece n soluii cu concentraii sczute de EDs (care acioneaz ca pseudo-estrogeni) s-a caracterizat prin maturare foarte rapid i eliberarea prematur a enzimelor necesare ptrunderii prin ZP. ntre produsele testate s-au aflat i ftalaii, substane chimice de tip EDs, utilizate ca ageni de nmuiere pentru multe produse din mase plastice (chiar i instrumentar medical), deodorani, loiuni sau lacuri de unghii. PROBLEME: 1. Toate organismele psrilor, animalelor i oamenilor contemporani au fost EXPUSE. 2. Experimentele pe animale de laborator au demonstrat c expunerea la EDs are impact la doze mult mai sczute dect cele care au putut fi imaginate pentru a fi luate n considerare. 3. Mult mai multe ci i sisteme guvernate de ctre hormoni poate chiar TOATE sistemele mediate de mesaje chimice sunt actualmente considerate a fi vulnerabile la aciunea EDs. 4. Tot mai muli compui chimic se dovedesc a avea aciune de tip EDs. 5. Sfera efectelor asupra sntii omului a fost lrgit prin luarea n considerare a efectelor expunerii organismului adult asupra dezvoltrii din perioada intrauterin 6. Metodele toxicologice tradiionale, de evideniere a curbei doz-efect, s-au dovedit ineficace pentru studierea EDs.

Analogie funcional ntre semnalizarea endocrin realizat de E2 i cea simbiotic realizat de luteolin (flavon). SUS: ovarul secret 17 E2, molecula de semnal care activeaz aparatul transcripional controlat de ER (receptorii ptr E2), n asociere cu un fragment specific de ADN (ERE estrogen response element), aciunea desfurndu-se n celula int pentru E2 (de ex. celula uterin). JOS: rdcina lucernei secret luteolina n solul nconjurtor. Aceasta constituie semnalul care activeaz aparatul transcripional controlat de proteina de cuplare pentru NodD i fragmentul de ADN rspunztor de recunoatere, coninut n regiunea promotoare a genei int. Asocierea luteolin-NodD activeaz transcripia mai multor gene bacteriene responsabile de nodulaia realizat n rdcina plantelor. n nodulaie se vor adposti bacteriile furnizoare de azot (simbioz).

Disciplina de reproducie obstetric i ginecologie Anul VI medicin veterinar

CURSUL nr. 8
CONTRACEPIA Controlul funciei de reproducere la cea metode chirurgicale (ovariectomia, ovariohisterectomia, ligatura oviductelor) metode hormonale (estrogeni, progestageni) metode imunologice (imunizri pasive sau active) Ovarian Remnant Syndrome prezena estrului n primul an consecutiv OVARIECTOMIEI (pn la 3 ani post operator) esutul ovarian care rmne consecutiv unei ovariectomii incomplete se chistizeaz i poate cauza manifestrile specifice estrului stump pyometra (piometrul bontului uterin) la 20% dintre femelele ovariectomizate (Okkens i col., 1981) ; la 58-71% dintre femelele cu piometru, este prezent i esut ovarian funcional frotiul vaginal indic prezena E2, i a esutului ovarian (sau are aspect tipic anestrului, la femelele castrate BINE) la animalele de companie NU se admite c suprarenalele pot produce suficient estrogen pentru a genera estrul nivelul crescut al LH arat c femela a fost castrat (lipsete inhibiia exercitat de ovare) determinri hormonale (P4 i E2) trei sptmni consecutiv (2 X spt) ; P4 peste 1 ng/ml sau E2 peste 40 pg/ml indic prezena esutului ovarian DD fa de vaginite, infecii are tractului urinar, estrogeni exogeni Structura analogilor difer de cea a hormonilor naturali legtura dintre hormonii naturali i receptorii acestora este tranzitorie analogii hormonali nu sunt ntotdeauna uor inactivai iar fixarea lor pe proteinele sanguine de transport sau pe receptorii esuturilor int se poate prelungi pe o perioad anormal fixarea analogilor hormonali pe proteinele sanguine de transport al hormonilor naturali poate afecta grav echilibrul hormonal Principalele efecte cunoscute ale analogilor hormonali corticoizii progestagenele estrogenii androgenii

analogi ai GnRH

Dei sunt insuficient caracterizate efectele iatrogene ale analogilor hormonali, au fost evideniate cteva efecte certe asupra funciei de reproducere. Corticoizii Reprezint medicamente mult prea uor utilizate n medicina veterinar, avnd avantajul de a induce rapid o ameliorare spectaculoas a strii animalului. Din pcate, pe termen mediu sau lung, pot aprea grave efecte secundare care compromit notabil funcia de reproducere. n practic, la femele, anestrul se prelungete anormal. La masculi, chiar dac n general libidoul se pstreaz, adesea se constat o scdere a volumului ejaculatului, numrul i mobilitatea spermatozoizilor fiind considerabil diminuate. Repercusiunile corticoterapiei asupra funciei de reproducie se datoreaz combinaiei exercitate de cteva dintre efectele acesteia asupra echilibrului neurohormonal: Inhibiia direct a ctorva etape ale steroidogenezei gonadale, precum ar fi transformarea colesterolului n androgeni i aromatizarea estradiolului; Competiia cu progesteronul la nivelul situsurilor de fixare pe CBG (Cortisol Binding Globulin), proteinele lor comune de transport sanguin. Corticoizii provoac o eliberare anormal de progesteron i n mod indirect, ntrein o inhibiie central a activitii gonadale. Aciunea inhibitoare asupra funciei tiroidiene care contribuie de asemenea la activitatea gonadal: sistemul nervos central reacioneaz la efectele corticoizilor prin frnarea activitii tiroidiene. Hipotiroxinemia stimuleaz secreia prolactinei, ea nsi inhibitoare a steroidogenezei la nivelul transformrii colesterolului n progesteron. Acest ultim efect poate contribui la ginecomastie. Pe termen mediu, corticoizii provoac inhibarea produciei suprarenale, iar cortizolul este indispensabil activitii gonadale: pertubarea steroidogenezei conduce la o producie anormal de estradiol care provoac att la masculi ct i la femele hipogonadism, iar la femele, n mod curios nu se observ nici o manifestare estral iar anestrul indus de ctre corticoizi se poate prelungi timp de cteva luni. La masculi, este posibil ca hiperestradiolemia i hipotestosteronemia induse de ctre corticoizi s activeze producerea inhibinei de ctre celulele Sertoli. Aceast cibernin anti-FSH perturb steroidogeneza. Administrarea corticoizilor unei femele gestante poate provoca un avort prin suferin fetal sau o parturiie prematur. La natere, micuii pot prezenta o atrofie corticosuprarenal care crete riscul mortalitii neonatale. De asemenea, trebuie reamintit c administrarea corticoizilor pe parcursul gestaiei crete frecvena tarelor ereditare. Efectele secundare ale corticoizilor nu sunt generate nici de forma farmacologic, nici de posologie.

Progestagenele Utilizarea progestagenelor este de asemenea foarte rspndit, acestea fiind folosite n vederea contracepiei la cea sau pentru anumite efecte cutanate la specia felin. n plus fa de activitatea lor antiestrogenic, progestagenele acioneaz i la nivel central inducnd perturbaii neurohormonale i metabolice care mimeaz un anabolism de gestaie. Se observ efecte variabile, n funcie de individ, cel mai adesea regsindu-se o hiperreactivitate corticosuprarenal, o hiperinsulinemie (cu riscul diabetic consecutiv), o hipersecreie de hormon de cretere (care poate conduce la acromegalie cu producie anormal de esut conjunctiv), o hipotiroidie i un efect natriuretic. Astfel, insulina este recunoscut drept hormon activ n zona hipotalamic, influennd eliberarea GnRH i a LH. De asemenea, insulina reprezint un factor care influeneaz activitatea ovarian prin inducerea receptorilor pentru LH n granuloas, contribuind prin aceasta la modularea ovulaiei. Factorii de cretere asemntori insulinei (IGFs Insulin-like Growth Factors) reprezint mediatori importani ai creterii, lactaiei i reproduciei. n cadrul acestei familii de citokine, IGF1 joac un rol important. Astfel, IGF1 este un mitogen puternic pentru celulele epiteliale mamare, putnd influena i apoptoza acestui tip de celule. De asemenea, IGF1 poate fi un puternic stimulator al steroidogenezei n granuloas precum i n celulele luteale. Roberts i col. (1997) au artat c sistemul IGF poate regla funcia hipotalamo-hipofizar i c ansamblul hipofizar al IGF1 poate fi reglat de ctre hormonii ovarieni i hipotalamici. Drept urmare, componentele circulante sau local produse ale sistemului IGF pot asigura un mecanism prin care modificrile n statusul metabolic al animalelor pot fi percepute la nivelul axului hipotalamohipofizo-ovarian n vederea reglrii funciei de reproducie. GH (hormonul de cretere) este cunoscut i drept hormonul somatotrop (STH), datorit efectului su stimulator asupra celulelor organismului. STH acioneaz i asupra tiroidei. Efectele sale includ: intensificarea sintezei proteice n toate celulele organismului; intensificarea mobilizrii acizilor grai din grsimi precum i intensificarea utilizrii acizilor grai n vederea producerii energiei; scderea gradului de preluare a glucozei din organism. La femelele gestante s-a ncercat n numeroase ocazii suplimentarea secreiei gonadale prin administrarea progestagenelor. Acest tratament trebuie utilizat cu mult precauie. Trebuie s ne asigurm c avem de-a face ntr-adevr cu o hipoprogesteronemie i c avortul este inevitabil. De fapt, progestagenele pot nu doar s perturbe interrelaiile naturale existente ntre corpul luteal unitatea fetoplacentar hipotalamus/hipofiz, ci i s acioneze asupra dezvoltrii fetale i s induc malformaii osoase sau anomalii ale organelor reproductive (intersexualitate, hipertrofie clitoridian). Progestagenele pot n egal msur s induc i o eliberare excesiv de cortizol (prin competiia de cuplare la nivelul CBG), care provoac imediat o hipercortizolemie (risc de avort, de inhibiie gonadal, tulburri ale metabolismului general) iar secundar, induc o inhibare a axului corticosuprarenal care poate sta la baza unui hipocortizolism, iar apoi, a unui hipogonadism.

Estrogenii Cinele are reputaia uneia dintre cele mai sensibile specii la estrogeni, datorit gravelor aplazii medulare iatrogene puse n eviden consecutiv administrrii acestora. Se cunosc destul de puine asupra efectelor pe termen mediu i lung exercitate asupra reproductorilor (iar la specia felin, aceste aspecte sunt i mai puin cunoscute). Estrogenii sunt prin excelen antiandrogeni (prin diminuarea sintezei i aciunii acestora). Este nerecomandabil aplicarea unor asemenea tratamente pentru limitarea temporar a libidoului la animalele destinate reproduciei. n fapt, chiar dac cinelui i revine rapid libidoul la normal, spermatogeneza poate fi grav perturbat timp de 5 10 luni. n plus, estrogenii pot avea consecine negative asupra aspectului pielii, cu consecine nefaste asupra expoziiilor sau a alegerii reproductorilor. La femele, se pare c avorturile induse cu ajutorul estrogenilor nu provoac grave tulburri hormonale pe termen mediu. Din pcate, funcia reproductiv este adesea compromis prin efectele directe ale estrogenilor asupra organelor genitale, soldate cu metrite sau piometru. De aceea este preferabil s nu se utilizeze estrogenii pentru tratamentul galactoreei care nsoete pseudogestaia, ci s se prefere analogii dopaminei (care diminueaz secreia prolactinei), deoarece estrogenii induc n cteva zile sinteza prolactinei i a receptorilor si mamari. Ca atare, lactaia nu este total blocat ci se re-declaneaz mult mai puternic. Reproductorii sunt practic expui riscurilor administrrilor repetate i prelungite de estrogeni, chiar dac aceste tratamente sunt destinate acestor animale excluse de la reproducie tocmai datorit problemelor lor (probleme cutanate, incontinen urinar, circumanaloame sau tulburri ale prostatei). La carnivorele domestice, riscul neoplaziilor induse prin administrarea estro- progestativelor este puin cunoscut, deoarece anchetele epidemiologice sunt dificil de realizat i carnivorele nu pot fi utilizate modele animale n cancerologie. Dar cunotinele acumulate la alte specii precum i evidenierea receptorilor specifici n anumite tumori mamare canine, permite supoziia conform creia tratamentele cu analogi steroidieni sunt susceptibile de a favoriza procesele tumorale. Androgenii n ultimii civa ani androgenii sunt foarte folosii drept anabolizani care faciliteaz creterea animalelor ameliornd i performanele cinilor de sport. n scurt timp se constat grave tulburri secundare: hipogonadism (absena ciclului la femele, azospermia la mascul), oprirea brusc a creterii prin calcificarea precoce a cartilajelor de conjugare, naterea unor descendeni intersexuai.

Analogi ai GnRH ncercarea de a induce ovulaia prin intermediul analogilor GnRH s-a dovedit puin mulumitoare la carnivorele domestice. Dei s-au obinut unele rezultate, nu s-a impus nici un protocol. Studiile au relevat faptul c nu att cantitatea secretat ct ritmul de secreie controleaz funcia de reproducere: creterea, apoi descreterea ritmului de secreie a GnRH induce hipogonadism. Insuficienta cunoatere a acestui subiect rmne larg ntlnit n cazul carnivorelor mici i trebuie subliniat faptul c administrarea intempestiv a analogilor GnRH poate genera efecte inverse celor scontate, de la un anumit punct putnd fi folosite drept contraceptive subtile. Este nepotrivit punerea n discuie a renunrii la utilizarea analogilor hormonali, dar prescrierea acestora trebuie fcut cu moderaie i discernmnt: buna cunoatere a limitelor de utilizare i respectarea acestora; prevenirea proprietarilor asupra eventualelor efecte iatrogene; exercitarea unei supravegheri pe termen scurt i mediu; a nu se administra mai muli analogi hormonali simultan. Efecte secundare generate de administrarea contraceptivelor producia anormal a GnRH inhibarea axului Hipotalamo-Hipofizo-Adrenal tulburarea metabolismului glucozei generarea neoplaziilor mamare favorizarea producerii piometrului Controlul funciei de reproducere la mascul Chirurgical (orhiectomia, vazectomia) Hormonal (androgeni, progestageni, androgeni + progestageni, steroizi anabolizani, anti-androgeni) Imunologic (generarea anticorpilor anti-gonadotropine, anti-GnRH, antispermatici) Administrarea steroizilor n scop contraceptive testosteron, enantat de testosteron androgeni administrai oral progestageni (ciproteron acetat) MAP + testosteron Contracepia la cine androgeni MAP (medroxi-acetat de progesteron) propionat de testosteron (rezultate proprii) injectarea intratesticular a glicerolului, a argininei zincate imunizarea antispermatic (rezultate proprii) La brbat, contracepia vizeaz: inhibarea producerii SPE n testicule interferarea funcionalitii spermatozoizilor n epididim

 ntreruperea transportului spermei prin canalul deferent prevenirea depunerii spermei dup ejaculare prevenirea interaciunii SPE-ovocit n tractul genital femel OMS (date din 2001) recunoate dou contraceptive pentru brbat un tratament de 3 luni, viznd administrarea lunar a butanoatului de levonorgestrel + buciclat de testosteron sau doar a buciclatului de testosteron ocluzionarea canalului deferent prin metode nechirurgicale Utilizarea canalului deferent n contracepie la brbat A. Vazectomia n ultimii 30 de ani, 40 de milioane de brbai (India) nu afecteaz libidoul, sistemul cardio-vascular i nu genereaz cancer de prostat sau testicular vazectomie fr bisturiu (pens hemostatic special) vazectomia nu este ntotdeauna reversibil (vazo-stomia) B. Dispozitive intra-vazale Firul intravazal ( nylon sau mtase chirurgical) Succes temporar, complet reversibil NU conferp sterilitate total Firele de Cupru n metodele ocluzive, SPE se acumuleaz n epididim i declaneaz unele reacii imunologice, determinnd creterea titrului Ac anti SPE. Titrul crescut al Ac poate fi cauza ratei sczute a G consecutiv procedurilor de restaurare a canalului deferent Firul de Cu induce modificri de natur toxic n enzimele acrozomiale Cu nlocuiete zincul din acrozom La animale, firele de Cu determin decapitarea SPE genernd infertilitate n timp, scade eficacitatea procedurii, datorit eroziunii firelor de Cu Dispozitiv electric intravazal crt. el. modific membrana acrozomial a SPE, sau crt. el. omoar SPE Grafit-aluminiu nglobat n teflon, inclus n canalul deferent Infertilitate la obolan, reversibil dup deconectarea firului Valva de control BIONYX Dispozitiv n form de T, din aur, care se monteaz n lumenul canalului deferent i are un canal central care poate fi deschis/nchis, pentru a permite/mpiedica trecerea SPE Agrafe de tantaliu, plasate pe scrot, care s comprime canalul deferent (cine nu este complet eficient; iepure) scoaterea lor este dificil i nu se restabilete fertilitatea integral Injecii transcutanate Chimiosterilizarea Combinaie de cianoacrilai, la 600.000 de brbai; agent sclerozant, se solidific n 20 de secunde 96% azoospermie i 99% prevenire sarcinii

 Sterilizare reversibil; are aprobarea OMS Ali ageni sclerozani Dopuri injectabile Elastomeri poliuretanici 98% prevenirea sarcinii timp de 5 ani dup injectare Dopul poate determina ruperea canalului deferent Gum siliconic format in situ nu interfereaz semnificativ fiziologia canalului deferent i dup scoaterea dopului, mucoasa se regenereaz i permite trecerea SPE

MALE CONTRACEPTION INFORMATION PROJECT 2006 ww.NewMaleContraception.com SUA 2% dintre femei fac un avort anual Europa de vest 1% dintre femei fac anual un avort SUA - 20% dintre femei au primul copil nainte de a mplini 20 de ani disponibile: plasturele contraceptiv, inelul contraceptiv, dispozitivele intrauterine multe femei nu suport efectele secundare prezervativul eficien de 985 (totui, genereaz 15% sarcini nedorite) brbaii le resping deoarece reduc senzaiile MOR la natere UNA din ASE femei (n Afganistan, Angola, Malawi, Nigeria, Sierra Leone), fa de UNA la 29.800 (SUEDIA) VAZECTOMIA unul din ase americani n vrst de peste 35 ani 500.000 de americani fac vazectomie n fiecare an teoretic este reversibil 30% din cazuri se soldeaz cu sterilitate permanent schimbarea opticii i a tradiiilor culturale brbaii devin dornici s i CONTROLEZE fertilitatea Olanda, Noua Zeeland 50% dintre familiile de peste 35 de ani vazectomia E2 din pilule determin creterea concentraiei SHBG (sex hormone binding globulin), care nu cupleaz doar estrogenii ci i hormonii tirodieni Efectul nrutete situaia celor 5 15% femei care sufer de tulburri ale tiroidei, sau a cror tiroid funcioneaz la limit Aceste modificri subtile ale strii generale i metabolismului energetic trec neobservate, ndeosebi datorit faptului c SHBG nu se analizeaz n cadrul testelor pentru tiroid SHBG cupleaz i testosteronul femeile i pierd libidoul PILULA CONTRACEPTIV a deceniului ase coninea de APTE ori mai mult ESTROGEN i de ZECE ori mai mult PROGESTAGEN dect n formulele actuale Contracepia la femei Plasturele E2 i P4 (se schimb sptmnal 3 sptmni, una pauz) Diafragma se inser pe cervix se adaug spermicid (eficient 2 ore)

Lunelle injecie lunar (E2 + P4) eficien de 99% Contracepia de urgen (120 ore post coital) scurtcircuiteaz reglarea hormonal Spermicide geluri, spume, supozitoare Ligaturarea oviductelor NICIUNA dintre metode nu previne STD (bolile cu transmitere sexual)

Disciplina de reproducie obstetric i ginecologie Anul VI medicin veterinar CURSUL nr. 1

LACTAIA Dezvoltarea glandei mamare Instalarea pubertii consecutiv fiecrui estru cretere i proliferare a canalelor galactofore stimularea exercitat de ESTROGENI. Gestaie primele 4 luni E2 n cantiti crescute sistemul galactofor se dezvolt. Gestaie a doua jumtate predomin P4 stimuleaz formarea lobulilor esutului alveolar (acinii), loc al secreiei lactate. Acest proces se intensific pn la momentul parturiiei. Dezvoltarea mamelei LTH, STH, ACTH, hormoni tiroidieni. Ugerul vacii capabil s produc lapte cam de pe la a G; avort L VII exist suficient esut alveolar ca s rezulte cantiti sczute de lapte. Lactogeneza Modificrile statusului hormonal peripartal: E2 cresc la sfritul G; P4 scade treptat i se prbuete cu 24-48 de ore antepartum; Corticoizii cresc foarte mult n preajma parturiiei; LTH crete cu 4-6 zile naintea parturiiei. Progesteronul : a stimulat dezvoltarea alveolar n G avansat; prin scderea sa brusc, a permis creterea LTH; blocheaz receptorii mamari pentru cortizol; prin scderea P4, cortizolul poate aciona asupra glandei mamare. Ejecia laptelui Laptele secretat n esutul alveolar se acumuleaz n canalele i sinusurile galactofore precum i n cisterna galactofor (80%). Ejecia OCITOCINA. Ocitocina (OT) Eliberarea OT stimuli de la receptorii senzoriali din uger, mameloane i organele genitale, fiind i rezultatul sunetelor i reflexelor asociate cu suptul sau mulsul. OT via biologic scurt, sub 2 minute NECESAR RESTIMULAREA. OT eliberat sub form pulsatil.

INDUCEREA ARTIFICIAL A LACTAIEI Posibil n cazul mimrii statusului hormonal peripartal i a modificrilor glandei mamare METODA A Injecie combinat (10 mg benzoat de estradiol i 100 mg P4) n zilele 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27 i 30. n zilele 31 i 32, 20 mg dexametazon i.m. Din ziua 10, femelele trebuie duse la standul de muls, ugerul trebuie masat i aparatul de muls aplicat scurt timp. Producerea laptelui poate ncepe naintea sfritului tratamentului sau pn la o sptmn dup terminarea sa. METODA B Injecie combinat, repetat la 12 ore (benzoat de estradiol 0,05 mg/kg i P4 0,125 mg/kg), 7 zile consecutiv ( 14 injecii n total). 20 mg beta sau dexametazon n zilele 18, 19 i 20. Masajul ugerului i muls, precum la metoda A.

REZULTATE : Aproximativ 20% din tratamente nu reuesc. Producia de lapte este aprox. 70% din cea ateptat. Fertlitatea ulterioar este normal. Unele vaci- simptome de nimfomanie, pe parcursul tratamentului cu E2. INDICAII : Vaci cu producie bun, dar care nu au devenit G, s rmn n efectiv, ca s poat fi folosite n continuare la reproducie, n anul urmtor (dac ftrile sunt grupate pe sezoane). Pentru a menine n efectiv vacile bune productoare care sunt infertile sau posibil sterile, mai degrab dect a recurge la nlocuiri costisitoare. Venkatramaiah i col., 1993 Vet.Bulletin vol.63, nr.5, p 511, rezumat 3378 Lactation induction by hormonal treatment in infertile bovines. 8 vaci infertile tratate fie cu PRID, fie cu norgestomet implant, timp de 7 zile i 0,1 mg estradiol benzoat/kg n 2 doze separate, 7 zile consecutiv. Au fost de asemenea injectate cu 6 g reserpin/ kg sau 100 mg largactil/kg n zilele 14 i 16 consecutiv tratamentului iniial, i 8 mg dexametazon/ kg n zilele 18 i 20. Consecutiv suprimrii P4, s-a masat ugerul de 2 ori/zi. Mulsul manual a fost iniiat n ziua 21. Lactaia a fost indus la toate animalele (1 a murit). Estrul a fost indus la 6 din cele 8 femele, iar 3 dintre ele au rmas gestante.

INDUCEREA LACTAIEI Croker B.A. et al 2003 Induced Lactation If Approved, Would it be Economical ? Inducerea lactaiei: 7 zile consecutiv, prin 2 administrri zilnice a cte 0,05 mg/kg corp E2 i 0,125 mg/kg corp P4 DEXametazon 0,05 mg/kg n ziua a 14-a MULSUL se ncepe n ziua a 15-a Studiu realizat pe vaci reform, sub supravegherea FDA, cu 17 zile de ateptare pentru lapte i 53 de zile pentru carne, dup ultima administrare de progesteron n studiu au fost incluse vaci care au avut cel puin 250 de zile de lactaie, un nivel de minim 8400 litri lapte pe 305 zile de lactaie vacile au fost nrcate timp de 60 de zile, apoi indus lactaia inducerea a fost considerat reuit dac producia de lapte a depit 15 litri de lapte/zi n sptmna a 7-a de lactaie lactaia a fost indus la 87% din vacile tratate (28 din 32) vacile au produs n medie 25 de litri de lapte pe zi

Magliaro A.L. et al Induced Lactation in Nonpregnant cows: Profitability and response to Bovine Somatotropin 2004, J Dairy Sci 87:3290-3297 Includerea BST n protocoalele de inducere a lactaiei ar putea avea urmtoarele efecte: 1. creterea procentului de vaci care produc lapte din totalul vacilor tratate 2. creterea cantitii de lapte produse pe parcursul lactaiei 3. reducerea efectelor negative ale anotimpului (scurtarea zilei lumin) asupra proporiei vacilor la care se induce lactaia din totalul celor tratate, precum i asupra produciei de lapte Studiul a artat c administrarea BST dup protocolul de inducere sporete nivelul produciei de lapte cu 17,8% (28,4 litri / zi, fa de martor 24,1 litri /zi) protocolul de inducere s-a bazat pe 7 zile de E2 +P4 i muls ncepnd din ziua a 18-a dpdv economic, vacile cu lactaie indus (vaci negestante) au fost comparate cu primiparele (la producia de lapte), rezultnd la vacile induse (i tratate cu BST) un profit de 1966 USD per lactaie, comparativ cu primiparele (1446 USD) utilizarea BST este profitabil

Utilizarea hormonului de cretere (GH, somatotrop, bST) pentru sporirea produciei de lapte GH este hormonul galactopoietic principal la vac, fiind n mod curent utilizat pentru creterea produciei de lapte tratarea vacilor cu bST crete nivelul produciei de lapte cu 10 40%, prin afectarea mamogenezei i lactogenezei GH acioneaz prin: intermediul IGF 1 (axul GH IGF 1)

stimuleaz sinteza hepatic de IGF1 (crete nivelul circulant) precum i sinteza mamar a IGF1 modificri metabolice (modificarea repartiiei nutrienilor disponibili) GH favorizeaz ANABOLISMUL glandei mamare i CATABOLISMUL extra-mamar scderea nivelului de asimilare a glucozei i intensificarea producerii lactatului n muchi favorizeaz creterea produciei de lapte i a coninutului acestuia n grsime, protein i lactoz la vacile tratate cu bST.

Influena nivelului produciei de lapte asupra metabolismului i funciei de reproducere n perioada puerperal Producii mari de lapte (peste 6500 l/lactaie) = necesar ridicat de energie INEVITABIL (ingesta/producia de lapte) apare NEB (bilan energetic negativ) Amplitudinea NEB : producia de lapte i apetitul peripartal

NEB reduce pulsatilitatea LH n perioada postpartal, amnnd prin aceasta reluarea activitii ovariene (Lucy -2001) NEB genereaz i un bilan proteic negativ: Ficatul neoglucogenez; nivel sczut al glucozei = AC.PROPIONIC puin disponibil Ficatul utilizeaz CARBOHIDRAI din aminoacizi glucogeni, asigurai prin PROTEOLIZ Scade disponibilitatea AA necesari sintezei hepatice a apoproteinelor (transportorii TAG spre glanda mamar, pentru lapte) Consecine: Starea ficatului modificarea sintezei hepatice a IGF IGF rol important n creterea i dezvoltarea folicular Tulburri ale creterii i dezvoltrii foliculare, implicit ale ovulaiei i ciclicitii sexuale FRECVENA MAMITELOR I PIERDERILE DATORATE MAMITELOR 14% cazuri irecuperabile (incurabile) 8% lapte necorespunztor (mamitic sau cu reziduuri de antibiotice) 8% cheltuieli medicaie, asisten veterinar, examene de laborator 70% pierderi n producie (lapte, parametri reproductivi) FIECARE compartiment afectat, sufer urmtoarele pierderi (scade producia de lapte): 9% , dac exist 500.000 - 1.000.000 celule / ml lapte (mamit subclinic) 18% , dac exist peste 1.000.000 celule / ml lapte (mamit clinic) 37% , atunci cnd sunt peste 5.000.000 celule / ml lapte pierderile unuia dintre compartimente nu sunt compensate de celelalte compartimente !!! Laptele mamitic are un coninut redus de grsimi, cazein i lactoz

Reziduurile de antibiotice, pericol pentru persoanele alergice Etiopatogenia mamitelor : Predispozani : produciile mari de lapte mulsul incomplet retenia laptelui edemul mamar Favorizani: excesul proteic subalimentaia i dezechilibrele nutriionale subinvoluia i infeciile uterine Glanda mamar se apr prin : mecanismul umoral (imunitatea motenit) imunitatea dobndit aprarea celular cuprinde: macrofage, limfocite i neutrofile aspecte genetice : selecia pe baza SCC sczut SCC sczut - crete riscul mamitelor corelaie pozitiv ntre nivelul crescut al produciei de lapte i frecvena mamitelor selecia pe baza aspectelor clinice (mamite) inclus n programul de selecie n rile scandinave (eviden naional) vacile n purperium sunt imunocompromise : stresul indus n mod fiziologic de lactogenez numrul sczut al neutrofilelor capabile de fagocitoz rspunsul inflamator ntrziat capacitatea redus a neutrofilelor de a anihila bacteriile Infecia mamar se produce: ascendent (galactofor) - flora microbian ptrunde prin canalul papilar n sinusul galactofor descendent (hematogen) - endometrite sau TBC limfatic - leziuni cutanate factori antibacterieni din lapte: SPECIFICI imunoglobulinele ag. opsonizani previn colonizarea cu bacterii neutralizeaz toxinele ptrund n uger pe parcursul procesului inflamator NESPECIFICI complementul lizozimul sistemul lactoperoxidaz - tiocianat

lactoferina

Cauzele insucceselor tratamentelor n mamite : 1. Diagnosticul tardiv, determinat de : (a) supravegherea insuficient a efectivelor i competena redus a ngrijitorilor i (b) debutul insidios, adesea inaparent. Consecina - instituirea tratamentului dup relativ mult timp de la debutul bolii. 2. Folosirea unor medicamente inactive sau n doze insuficiente, precum i rezistena germenilor fa de substanele folosite (utilizarea insuficient a antibiogramei i a diagnosticului bacteriologic). 3. Existena unor focare infecioase profunde, neafectate de medicaia utilizat. 4. Suspendarea timpurie a tratamentului dup dispariia semnelor clinice (inflamaia local i normalizarea secreiei), nainte de a se fi produs sterilizarea mamelei (recidive). 5. Nerespectarea tehnicilor de terapie (este cauza cea mai frecvent de apariie a mamitelor micotice). 6. Meninerea n efectiv a vacilor purttoare de germeni (mai multe mamite n aceeai lactaie sau mamite cronice purulente) i mulgerea lor mpreun cu femelele sntoase. Tratamentul mamitelor cronice : parenchimul mamar grav lezat i nlocuit cu esut conjunctiv (fibroz i scleroz mamar). OBIECTIV: distrugerea florei bacteriene, pentru a nu mai disemina infecia pierderi prin agalaxia compartimentului afectat i hipogalaxia celor sntoase afectat producia vacilor dup a 3-a lactaie (cnd scade posibilitatea nlocuirii esutului glandular secretor). Tratamentul mamitelor subclinice : acoperit (toate sferturile mamare, la toate vacile) selectiv al vacilor (toate compartimentele la vacile care au unul sau mai multe sferturi afectate) selectiv al compartimentelor infectate (doar sferturile pozitive la testele paraclinice) Profilaxia mamitelor la vac controlul periodic al vacilor, n special dup ftare, de 2 ori n primele 30 de zile p.p. examenul laptelui prin teste rapide (CMT) numrarea celulelor somatice din lapte cunoaterea momentului apariiei mamitei (repaus mamar sau lactaie) i tratamentele precedente echipamentul de muls i funcionarea sa igiena mulsului (curirea instalaiei de muls i a mamelei, toaleta i asepsia mamelei nainte i dup muls, corectitudinea cu care se face mulsul).

pentru fiecare efectiv, plan coerent, a crui ndeplinire se verific periodic

tratarea corect a mamitelor clinice i a celor subclinice (n cazul creterii frecvenei lor, se impune tratarea ntregului efectiv n repaus mamar) determin scderea semnificativ a frecvenei mamitelor n efectiv tratarea corespunztoare a afeciunilor genitale i a celor podale Vaccinarea: nr. mare al agenilor patogeni precum i heterogenitatea lor specificitatea: corespunztor mpotriva UNUI ag. patogen, nu i a altuia Ig ptrund n uger DOAR dup declanarea mamitei vaccin care stimuleaz diapedeza polimorfonuclearelor n infeciile intramamare Imunomodulatorii: levamisolul Propionibacterium acnes complexele cazeinei citokine inductoare ale secreiei de interferon alte soluii : stimularea rezistenei prin determinarea gl. mamare s produc proteine protectoare strine sau peptide antibacteriene (prin transgenez) Finlanda - vaci puse s produc LF uman n lapte, au avut un SCC foarte sczut n laptele lor i au fcut foarte rar mamite Programe de combatere a mamitelor se includ toate msurile enunate la profilaxie se pune accent pe prevenirea apariiei noilor infecii pe parcursul lactaiei precum i pe eliminarea n perioada de repaus mamar a celor subclinice Congresul de Buiatrie (1996) - Programul n cinci puncte imersia mameloanelor tratamentul total n perioada nrcrii curenia i aciunea corect a mainii de muls reformarea vacilor tratarea cazurilor clinice n adpost, trebuie avut n vedere c: paiele se asociaz cu un numr crescut al streptococilor rumeguul sau surcelele favorizeaz mamitele acute cu germeni coliformi o pant a pardoselii de 2-3% reduce acumularea urinei i a apei ventilaia corespunztoare asigur meninerea uscat a adpostului i a aternutului se recomand evitarea aglomeraiei i a efectivelor mult prea mari Referitor la creterea rezistenei organismului femelei se va investiga ce anume favorizeaz ptrunderea germenilor pe canalul papilar alimentaia favorizeaz rezistena (vitamina E i Seleniul stimuleaz activitatea macrofagelor) imunizarea mpotriva Streptococcus uberis (Anglia) i Staphilococcus aureus (SUA) genereaz un succes limitat

Scderea numrului de celule somatice duce la scderea incidenei mamitelor i pe scderea numrului de celule se bazeaz ntregul complex de msuri profilactico - curative Mamitele la alte specii : cabaline (durata lactaiei) ovine - caprine (infecioase) suine (sindromul MMA) canide (lactaia nervoas i mamitele induse de nrcarea intempestiv)