MASTER DE PRODUSE FARMACEUTICE I COSMETICE

BIOCHIMIE AVANSAT

ELEMENTE DE BIOLOGIE CELULAR

Conf. Dr. Biochim. Bogdan Nicolae Manolescu

Facultatea de Chimie Aplicat i tiina Materialelor

Departamentul de Chimie Organic C. Neniescu
Laborator 013, Corp F, Campus Polizu
 Ultrastructura celular

Ultrastructura celular Robert Hooke:

arhitect, filosof i naturalist englez:

studii de mecanic (legea elasticitii a lui Hooke)
construcia de telescoape (rotaia Marte i Jupiter)
studii de paleontologie (susine teoria evoluionist)

realizeaz un microscop i analizeaz: Robert Hooke (1635 1703)

seciune de plut (Quercus suber)
organisme vegetale, insecte

introduce termenul de celul (lat. cella = camer mic)

 Ultrastructura celular

Ultrastructura celular Robert Hooke:

In the collection of most of which I made use of microscope and some other
glasses and instruments that improve the senses (...) only to promote the
use of mechanical helps for the senses, both in the surveying the already
visible world, and for the discovery of many others hither to unknown...
(Micrographia, 1665)
 Ultrastructura celular

Ultrastructura celular Schwann, Schleiden & Virchow:

elaboreaz TEORIA CELULAR:

toate organismele sunt alctuite din una sau mai multe celule
celula este unitatea de baz a organismelor
toate celulele provin din celule pre-existente

All living things are composed of cells and cell products (Microscopical
researches into the accordance in the structure and growth of plants and
animals, 1839)

Matthias Jakob Schleiden (1804 1881)

Theodor Schwann (1810 1882)
Rudolf Virchow (1821 1902)
 Ultrastructura celular

Tipuri de celule:

celula prokariot (gr. pro = nainte + karion = nucleu):

celul lipsit de nucleu delimitat de un nveli dublu membranar
cel mai simplu tip de celul

celula eukariot (gr. eu = adevrat + karion = nucleu):

celul prevzut cu un nucleu delimitat de un nveli dublu membranar
celule cu grade diferite de complexitate
 Ultrastructura celular

Celula prokariot:

diametrul = 1 10 m

forme fundamentale:
sferic coci
linear bacili
helical spirochete

compenente celulare:
membran celular confer permeabilitate selectiv
perete celular (peptidoglican) confer protecie mecanic (30 250 )
citoplasm conine 1 cromozom circular, enzime, ribozomi
apendici (flageli motilitate, pili ataare la diferite substrate)
 Ultrastructura celular

Clasificarea prokariotelor:

micoplasme:
cele mai mici celule (0,12 m diametru)
singurele prokariote lipsite de perete celular
exemple: Mycoplasma pneumoniae, M. genitalium

bacterii Gram pozitive:

perete celular gros (250 )
se coloreaz n tehnica de coloraie Gram

bacterii Gram negative:

perete celular subire (30 )
nu se coloreaz n tehnica de coloraie Gram

Hans Christian Gram

(1853 1938)
Ultrastructura celular
 Ultrastructura celular

Celula eukariot:

diametrul = 10 -100 m

diversitate mare a formei

compenente celulare:
organite delimitate de o singur membran (reticul endoplasmatic, aparat Golgi,
lizozomi, peroxizomi)
organite delimitate de un nveli
dublu membranar (nucleu, mitocondrie)
membran celular
 Ultrastructura celular

Nucleul:

cel mai mare organit

anvelopa nuclear:
membran intern
spaiu intermembranar
membran extern

ONM = outer nuclear membrane (membrana nuclear extern)

INM = inner nuclear membrane (membrana nuclear intern)
NPC = nuclear pore complex
RER = rough endoplasmic reticulum

roluri biologice:
stocarea materialului genetic (genom, ADN)
replicarea i repararea ADN
transcrierea (sinteza de ARNr, ARNt, ARNm)
comunicarea cu citosolul la nivelul porilor nucleari
 Ultrastructura celular

Reticulul endoplasmatic:

reea extins de cisterne conectate ntre ele

reticulul endoplasmatic neted:

faa citosolic a membranei nu este asociat cu ribozomi
conine enzime implicate n sinteza acizilor grai, sterolilor, fosfolipidelor
conine enzime implicate n biotransformarea xenobioticelor

reticulul endoplasmatic rugos:

faa citosolic a membranei este asociat cu ribozomi
asigur sinteza proteinelor membranare i secretorii
este abundent la nivelul celulelor secretorii

Celule secretorii:

plasmocite (produc anticorpi)

celulele acinilor pancreatici (produc enzime digestive)
celulele insulelor Langerhans (produc insulin, glucagon)
Fenomenul de splicing alternativ
 Ultrastructura celular

Aparatul Golgi:

sistem de cisterne i vezicule aflate n legtur funcional cu reticulul

endoplasmatic rugos

conine enzime implicate n modificarea proteinelor ce urmeaz a fi:

inserate n membrana celular
secretate n spaiul extracelular
direcionate ctre alte organite (lizozomi, peroxizomi)

format din trei regiuni:

regiune cis primete veziculele de transport de la reticulul endoplasmatic

regiune median conine enzime implicate n modificarea proteinelor

regiune trans genereaz vezicule ce transport proteinele ctre membrana

celular sau alte organite
Ultrastructura celular
 Ultrastructura celular

Peroxizomii:

organite sferice ( = 0,2 1 m)

conin enzime specifice:

oxidaze
catalaz

roluri biologice:
oxidarea acizilor grai cu lan foarte lung (> 22 C)
oxidarea acizilor grai cu caten ramificat (acid fitanic)
oxidarea unor aminoacizi
formarea acizilor biliari din colesterol

disfuncii peroxizomale:
disfuncii datorate biogenezei defective a peroxizomilor (sindrom Zellweger)
disfuncii datorate deficienei unor enzime peroxizomale (acatalazemie)
 Ultrastructura celular

Lizozomii:

organite prezente doar n celulele animale

conin hidrolaze acide:

active la pH = 4,5 5,0 Care este semnificaia fiziologic
exemple: nucleaze, proteaze, fosfataze a valorii sczute a pH-ului?

roluri biologice:
autofagie degradarea unor organite sau materiale intracelulare de care celula
nu mai are nevoie
endocitoz/fagocitoz degradarea unor materiale extracelulare (bacterii,
particule) pe care celula le-a preluat din spaiul extracelular

clasificare:
lizozomi primari mici, fr particule sau materiale degradate
lizozomi secundari mari, cu materiale ce sunt degradate
 Ultrastructura celular

Procese ce implic lizozomii:

1. endocitoz preluarea unor materiale extracelulare de mici dimensiuni

2. fagocitoz preluarea de particule de mari dimensiuni (celule bacteriene)
3. autofagie degradarea unor componente intracelulare
 Ultrastructura celular

Lizozomii generarea pH-ului acid:

ATP-aze de clas V:
localizate n membrana lizozomilor, endozomilor i vacuolelor de la plante
transloc H+ din citosol n lumenul lizozomului
consum energie (ATP)

canale de Cl-:
localizate n membrana lizozomilor
transloc cte 1 anion Cl-/H+

observaii:
transportul nu este electrogen
nu apare niciun potenial de membran

Ci protoni se gsesc ntr-un lizozom

cu = 0,2 m i pH = 4?
 Ultrastructura celular

Mitocondriile:

aspecte generale:
organite prezente n celule cu metabolism aerob
produc energie (ATP)

organizare structural:
membran extern (permeabilitate selectiv)
spaiu intermembranar
membran intern (impermeabil)
matrice mitocondrial

roluri biologice:
producere de ATP
roluri metabolice

Oxidarea coenzimelor reduse

(NADH, FADH2) susine sinteza
ATP prin fosforilare oxidativ
 Ultrastructura celular

Membranele celulare:

plan general de organizare:

bistrat lipidic (dou monostraturi)
fa intern (ctre lumenul organitului/citosol)
fa extern (ctre citosol/spaiul extracelular)

dimensiunea membranelor biologice:

bistrat lipidic 5-6 nm
regiunea central hidrofob 3-4 nm

compoziia biochimic a membranelor:

lipide
proteine

Topologia
membranelor
 Ultrastructura celular

Membranele celulare funciile membranelor:

delimitarea i meninerea formei:

celulelor
organitelor celulare

barier semipermeabil:
controleaz i regleaz trecerea metaboliilor
reglarea cilor metabolice

generarea i meninerea unor gradiente ionice necesare pentru:

sinteza de ATP (membrana intern mitocondrial)
transmiterea impulsurilor nervoase (neuroni)

receptarea de semnale din spaiul extracelular:

receptori membranari
celula genereaz un rspuns adaptativ
 Ultrastructura celular

Membranele celulare compoziie biochimic:

lipide:
lipide simple (colesterol)
lipide complexe (glicerofosfolipide, sfingolipide)

proteine:
proteine intrinseci
proteine extrinseci
 Ultrastructura celular

Membranele celulare glicerofosfolipide:

cele mai abundente lipide membranare

deriv de la sn-glicerol-3-fosfat:
C1 acid gras saturat
C2 acid gras polinesaturat

clasificare n funcie de natura gruprii polare:

fosfatidilcoline
fosfatidiletanolamine
fosfatidilinozitoli
plasmalogene
 Ultrastructura celular

Membranele celulare sfingolipidele:

aspecte generale:
deriv de la sfingozin
structur amfipat

clasificare:
sfingomieline
cerebrozide
gangliozide

Teaca de mielin
 Ultrastructura celular

Membranele celulare colesterolul:

compus cu caracter amfipat:

regiune polar gruparea hidroxil
regiune hidrofob nucleul steranic

distribuia n diverse tipuri de celule:

prokariote absent
celule animale prezent (cantiti variabile)
celule vegetale ali derivai (sitosterol, stigmasterol)
 Ultrastructura celular

Membranele celulare proteinele:

proteine integrale de membran:

asociate puternic cu membranele
sunt eliberate prin metode energice (detergeni, solveni organici)

proteine periferice:
asociate slab cu membranele
pot fi asociate cu proteine integrale
sunt eliberate prin metode blnde (modificarea triei ionice a mediului)

proteine ancorate prin lipide:

ancore izoprenoidice
ancore acizi grai
ancore GPI (glicozilfosfatidil inozitol)

Crui tip i aparine proteina alturat?

Ultrastructura celular
 Ultrastructura celular

Membranele celulare tipuri de ancore lipidice:

ancore izoprenoidice:
catena izoprenoidic este inserat ntr-un monostrat al membranei
ancora este ataat la protein la un rest de Cys din secvena CaaX
exemple: farnezil (C15), geranilgeranil (C20)

ancore acizi grai:

acid miristic (C14) legtur amidic cu gruparea N-terminal
acid palmitic (C16) legtur tioesteric cu un rest de Cys
leag proteine pe faa intern a membranei

ancore GPI:
structur complex
leag proteine doar pe faa extern

a membranei
 Ultrastructura celular

Membranele celulare rolurile proteinelor:

transportori:
canale ionice
transportori pentru metabolii

receptori hormonali:
receptori pentru hormoni hidrosolubili
exemple: insulin, glucagon, catecolamine

sisteme efector generatoare de mesageri secunzi:

mesagerii secunzi determin declanarea unor procese intracelular
exemple: adenilat ciclaz, guanilat ciclaz

antigene de grup sangvin:

antigene ale sistemului ABO

Glicocalix
 Ultrastructura celular

Membranele celulare distribuia asimetric a lipidelor i proteinelor:

lipidele i proteinele sunt distribuite asimetric n cele dou monostraturi

consecinele distribuiei asimetrice:

modificarea proprietilor membranei (curbarea acesteia)
posibilitatea generrii unor mesageri secunzi (fosfatidilinozitoli)
transmiterea unor semnale ctre alte celule (intrarea n apoptoz)
 Ultrastructura celular

Membranele celulare structuri dinamice:

micri de rotaie n jurul axei:

moleculele se rotesc n jurul propriei axe

De ce se consum ATP n cazul

micri de difuzie lateral:
difuziei transverse!
deplasare n planul membranei celulare
n condiii fiziologice glicerofosfolipidele se deplaseaz cu 0,5 m

micri de difuzie transvers:

deplasare dintr-un monostrat n cellalt
proces lent (de ordinul zilelor)
proces catalizat de FLIPAZE in vivo (consum ATP)
Ultrastructura celular
 Ultrastructura celular

Membranele celulare structuri dinamice:

marcarea unei biomolecule membranare cu un fluorofor

aplicarea unei raze laser intense pe o arie mic (3 m2)
monitorizarea revenirii fluorescenei n timp

FRAP (fluorescente recovery after photobleaching)

 Ultrastructura celular

Membranele celulare structuri dinamice:

fluiditatea membranei celulare influeneaz:

transportul transmembranar
transmiterea semnalelor ctre celul

membrana celular exist n dou stri:

stare fludi (catenele hidrocarbonate au o dispunere dezordonat)
stare rigid (catenele hidrocarbonate au o dispunere ordonat)

factori ce influeneaz valoarea temperaturii tranziiei de faz:

compoziia calitativ i cantitativ n acizi grai
raportul cantitativ acizi grai saturai/acizi grai polinesaturai
coninutul de colesterol

Trecerea de la o stare la alta este

nsoit de modul de aranjare a catenelor
acizilor grai i de grosimea bistratului
 Ultrastructura celular

Membranele celulare structuri dinamice:

influena acizilor grai asupra membranei celulare:

acizii grai saturai se mpacheteaz ordonat n bistrat ( temp. tranz. faz)
acizii grai polinesaturai scad mpachetarea ordonat ( temp. tranz. faz)
creterea numrului de atomi de C ( temp. tranz. faz)

influena colesterolului asupra membranei celulare:

nucleul steranic afecteaz interaciile dintre catenele AG
determin scderea valorii temperaturii tranziiei de faz
 Ultrastructura celular

Membranele celulare structuri dinamice:

proteinele pot efectua micri de difuzie lateral n

planul membranei (100-500 ori mai lente dect n
cazul lipidelor)

experimentul lui Michael Edidin (1970):

celule umane antigen cu fluorofor rou
celule murine antigen cu fluorofor verde
fuziune indus de virusului Sendai

TEORIA MOZAICULUI FLUID (1972):

elaborat de Jonathan Singer i Garth Nicolson
membrana celular este o structur dinamic

proteinele sunt nite iceberg-uri ce se deplaseaz

pe o mare bidimensional de lipide

 Ultrastructura celular

Membranele celulare lipid rafts:

aspecte generale:
concept introdus n 1982
zone de dimensiuni mici (10 200 nm)
abatere de la teoria mozaicului fluid

structur i compoziie biochimic:

coninut mai ridicat de colesterol (3-5X)
lipide cu sfingozin
glicolipide
proteine ancorate prin ancor GPI

roluri biologice:
concentrarea proteinelor implicate n ci de semnalizare
modularea fluiditii membranare
controlul neurotransmisiei, traficul receptorilor celulari
 Ultrastructura celular

Citoscheletul:

aspecte generale:
reea tridimensional de proteine
prezent la toate tipurile de celule

roluri biologice:
determin i menine forma celular Citoscheletul eritrocitelor
permite organizarea organitelor
intervine n motilitatea celular
intervine n diviziunea celular
leag unele proteine membranare
controleaz deplasarea intracelular a veziculelor

elemente componente:
filamente intermediare
microtubuli
filamente de actin
 Ultrastructura celular

Citoscheletul:

filamente de actin:
8-9 nm diametru
alctuite din monomeri de actin

microtubuli:
24 nm diametru
alctuii din monomeri de tubulin ( i )

filamente intermediare:
10 nm diametru
structuri asemntoare unor sfori nfurate
 Ultrastructura celular

Microtubulii:

aspecte generale:
polimeri ai heterodimerului de tubulin
13 protomeri dispui circular
clasificare: m. stabili, m. instabili

microtubuli stabili:
specifici celulelor ce nu se divid
contribuie la meninerea formei celulare
asigur deplasarea direcionat a unor vezicule

microtubuli instabili:
specifici celulelor ce se divid
contribuie la segregarea cromozomilor n timpul

diviziunii celulare
 Ultrastructura celular
Microtubuli stabili confer form

Microtubuli instabili
 Ultrastructura celular

Citoscheletul microtubulii:

fiecare heterodimer de tubulin leag 2 molecule de GTP:

subunitatea :
leag ireversibil GTP
nu are activitatea GTP-azic

subunitatea :
leag reversibil GTP
are activitate GTP-azic

microtubulii sunt structuri cu polaritate:

determinat de modul de asamblare al heterodimerilor
pol + captul de cretere
pol - captul de scurtare
 Ultrastructura celular

Microtubulii:

subunitatea leag ireversibil GTP (nu are activitate GTPazic)

subunitatea leag reversibil GTP (are activitate GTPazic)

microtubulii sunt structuri cu polaritate:

pol + captul de cretere
pol - captul de scurtare
 Ultrastructura celular

Microtubulii importan farmacologic (colchicina):

aspecte generale:
alcaloid extras din ofran (Crocus sativus)
blocheaz alungirea microtubulilor

efecte biologice:
aciune anti-inflamatorie
aciune antalgic
aciune anticanceroas

indicaii terapeutice:
tratarea puseelor acute de gut
tratarea unor afeciuni reumatice
 Ultrastructura celular

Microtubulii importan farmacologic (taxolul):

aspecte generale:
compus izolat din tis (Taxus brevifolia)
blocheaz scurtarea microtubulilor

efecte biologice:
blocarea diviziunii celulare
inducerea apoptozei celulare

indicaii terapeutice:
tratarea cancerului ovarian (medicament de prim linie)
tratarea cancerului de sn
tratarea cancerului de prostat
tratarea cancerului pulmonar
Ultrastructura celular
 Ultrastructura celular

Microtubulii importan farmacologic (alcaloizii vinca):

aspecte generale:
alcaloizi izolai din Catharanthus roseus
blocheaz alungirea microtubulilor

efecte biologice:
blocarea diviziunii celulare

indicaii terapeutice:
tratarea cancerului pulmonar cu celule mici
tratarea cancerului de sn
tratarea cancerului testicular
 Ultrastructura celular

Proteazomul: Catabolismul proteinelor:

exogene stomac i intestin
endogene - proteazom
aspecte generale:
structur supramolecular (26S)
recunoate i degradeaz proteinele citosolice marcate cu ubiquitin
format din: 1 subunitate catalitic (20S), 2 subuniti reglatorii (19S)

subunitate reglatorie:
agregat de 700 kDa
recunoate i leag lanurile de ubiquitin
hidrolizeaz legturile izopeptidice de legare a ubiquitinei
catalieaz deplierea (unfolding) proteinei int

subunitate catalitic:
conine 28 subuniti i
conine 3 tipuri de situsuri proteolitice
 Ultrastructura celular

Proteazomul importan farmacologic:

medicamente:
Bortezomib (Velcade)
HT1171

Bortezomib:
inhibitor al proteazomului eukariot
tratarea mielomului multiplu (anumite condiii)

HT1171:
inhibitor al proteazomului prokariot
distruge celulele de Mycobacterium tuberculosis
distruge formele non-replicative (dormante)
 Ultrastructura celular

Proteine degradate de ctre proteazom:

conceptul de protein turnover:

sinteza proteinelor
degradarea proteinelor

durata de via a proteinelor variaz:

minute (cicline)
ani (proteinele cristalinului) N-terminal rule

marcarea proteinelor destinate degradrii:

N-terminal rule
adugarea ubiquitinei

ubiquitina:
76 aminoacizi
protein prezent la toate eukariotele
nalt conservat n evoluie

Marcarea proteinelor cu ubiquitin
 Ultrastructura celular

Marcarea cu ubiquitin

Degradarea proteinelor ubiquitinate