CERCETRI PRIVIND INIIEREA I DERULAREA UNUI PROGRAM MODERN DE SELCIE (utiliznd i multiple ovulaii i embrio-transferMOET) A EFECTIVULUI DE RAS PINZGAU

de TRANSILVANIA din ARA HAEGULUI-HUNEDOARA Autor: Dr. Ing Niculi Mang

ndrumtor tiinific: Prof Dr. Ing. IOAN VINTIL

Starea actual
- Rasa Pinzgau de Transilvania este n pericol de extincie prin absorbia genomului su n alte rase mai performnte. - Penru salvarea ei este necesar conservarea ,,in situ i (sau),,ex-situ .

Obiectivele proiectului
Cunoaterea structurii genetice actuale ale principalelor caractere importante economice i ameliorarea lor Evitarea scderii mrimii genetice a populaiei (numrul de familii)i evitarea erodrii n continuare a diversitii ei. Cunoaterea strii de heterozigoie a populaiei prin utilizarea polimorfismului markerilor moleculari n locii care codific tipurile deproteine din lapte nsuirea tehnologiei de superovulaie i embriotransfer n vederea realizrii unei ,,Bnci deGene n localitatea G-ral Bertelot din jud. Hunedoara Elaborarea unei schie de program pentru sporirea agricultorilor care cresc rasa Pinzgau n stare pur.

REZULTATELE OBINUTE
A.Cu privire la starea structurii genetice a caracterlor cantitative importante economic. Msurtorile efectuate pe 270 de vaci n ara Haegului i compararea rezultatelor cu cele obinute de ali cercettori n regiunea Suceava au scos n eviden urmtoarele:

 1.- Rasa Pinzgau de Transilvania din ara Haegului are o structur genetic asemntoare cu cea din Bucovina. 2 - Potenialul de sintez a laptelui, pe un ciclu de productie, nu depete 3500 Kg i 130 kg grsime cu o persisten bun a lactaiei 3.- Producia medie maxim de lapte se manifest la a 7-a lactaie, iar longevitatea productiv depete 8 lactaii 4.- Are o remarcabil fecunditate (77%) i natalitate (92%)cu o rat sczut a avortului embrionar 5.- Handicapul ei genetic este tardivitatea productiv i cea reproductiv.

 B.Cu privire la polimorfismul locilor care codific proteinele din compoziia laptelui. Am folosit dou metode: a. Analiza ADN pentru doi loci(k-cazeina i beta globulina), folosind: - Reacia PCR - Analiza RFLP(polimorfismul lungimii fragmentelor de restricie) b.. Analiza produilor de expresie a genelor din 6 loci (Alfa-cazeina, beta cazeina, Alfa S2 cazeina, K-cazeina, alfa lactoglobulina . beta lactoalbumina) cu ajutorul electroforezei cu focalizare izoelectric

REZULTATELE OBINUTE
Analiza ADN: Pentru amplificarea genelor K-cazeinei i Betalactoglobulinei am folosit urmtorii primeri: Pentru k-cazein: KAPPA-1 5-ATC ATT TAT GGC CAT TCC ACC AAA G3 KPPA-2 5-GCC CAT TTC GCC TTC TCT GTA ACA GA-3 Pentru Beta-lactoglobuline BETA -1 5- TGT GCT GGA CAC CGA CTA CAA AAA G-3 BETA-2 5- GCT CCC GGT ATA TGA CCA CCC TCT-3 Dup amplificare n 35 de cicluri n probele recoltate de la 24 de vaci s-au obinut ampliconi cu o dimensiune de 350 perechi de baze pentru K-cazein i de 247 perechi de baz pentru Beta-lactoglobulin.

Aspectul lor l redm n figurile de mai jos PCR - Kcn / 350 pb

Polimorfismul lungimii fragmentelor de restricie obinute cu ajutorul enzimei de restricie Hind III. PCR-RFLP Kcn /cu restrictaza Hind III Se obin urmtoarel genotipuri: AA = 350 pb AB = 350/219/131 pb BB = 219/131 pb

Aspectul i poziia ampliconilor beta-lactoglobulinei PCR BLG / 247 pb

Aspectul i poziia fragmentelor de resticie din locusul betalactoglobulinei PCR-RFLP BLG /cu restrictaza Hae III Se obin urmtoarele genotipuri AA = 148/99 pb AB = 148/99/74/74 pb BB = 99/74/74 pb

Genotiparea vacilor la nivelul expresiei genelor

Pentru acest fel de analiz ne-am folosit de electroforeza cu focalizare izoelectric a tipurilor de proteine din lapte

Rezultatele obinute
Pe un lot reprezentativ de 25 de vaci din rasa Pinzgau s-au obinut urmtoarea structur genetic pentru 6 loci care codific tipurile de protein din lapte.
Locusul proteinei Alfa S-1 cazeina Genotipurile BB BC CC Beta-cazeina A,1A.1 A.1B A.1A.2 A.2A.2 A.2B AA Frecventa genotipurilor 0,711 0,184 0,105 0,237 0,105 0,368 0,158 0,132 1,00 Frecventa genelor Pb=0,803

Qc=0,197

qA.1=0,474 Qa,2=0,408 Mb=0,118

AlfaS.2 cazeina

pA=1,00

K/cazeina

AA AB BB BB

0,184 0,684 0,132 1,00

pA=0,526 qB=0,474 pB=1,00

Alfa/lactoalbumina Beta-lactoglobulina

AA AB BB BC

0,079 0,342 0,447 0,132

pA=0,25 qB=0,68 qc=0,066

C..Cu privire la embrio-transfer

Este necesar pentru realizarea Bncii de Gene destinat conservrii ,,Ex-situ a rasei Pinzgau deTransilvania

Metodologia utilizat
a. Alegerea a 10 vacilor donatoare de embrioni b. Inducerea superovulaiei cu FSH i LH timp de 3 zile injecii de 2x pe la interval de 12 ore la 7 vaci

c. Recoltarea embrionilor dup 7,5 zile de la data nsmnrii d.In urma recoltarii s-au obtinut 12 embrioni, din acestia un numar de 9 s-au dovedit a avea perspective sa reziste la congelare in azot lichid.