În principal, aceasta bariera protejeaza celulele cu 23
de cromozomi (care ar putea fi receptate ca non - self) de un eventual atac cu anticorpi al organismului. BARIERA HEMOTESTICULARA • 1. membrana bazala; • 2. spermatogonia; • 3. spermatocit primar; • 4. spermatocit secundar; • 5. spermatida; • 6. spermie; • 7. celula Sertoli; • 8. bariera hemotesticulara. INFERTLITATE
ETAPA I- ESTE REPREZENTATĂ DE
SPERMOGRAMA ŞI SPERMOCULTURĂ
ETAPA II ESTE REPREZENTATA DE
EFECTUAREA ANTICORPILOR ANTISPERMATICI. TESTE DE INFERTILITATE MASCULINA • 1.SPERMOGRAMA - reprezinta test de fertilitate masculina care verifica cantitatea si calitatea spermei • Rezultatele • NORMOSPERMIE = valori normale; • Volum sperma: 1.5 ml • pH: 7.2 Numar total de spermatozoizi: 39 de milioane / ejaculate Concentratia spermatozoizilor: 15 milioane / ml Vitalitate: 58% spermatozoizi vii Mobilitate progresiva: 32% Mobilitate totala (progresiva + neprogresiva): 40% Morfologie: 4% forme normale • Rezultate anormale • polizoospermie = concentratia spermatozoizilor peste limitele normal; • hipospermie = volumul spermei < 1,5 mL ; • hiperspermie = volumul spermei > 5 mL; • aspermie = absenta spermei; • piospermie = prezenta leucocitelor in sperma (dau culoare galbuie); • hematospermie = prezenta hematiilor in sperma (dau culoare rosiatica); • astenozoospermie = motilitate < 40%; • teratozoospermie = > 96% din spermatozoizi au forme anormale; - • necrozoospermie = spermatozoizi neviabili; • oligoozoospermie = spermatozoizi mobili < 15 mil./mL si motilitate < 40%; • azoospermie = absenta spermatozoizilor. SPERMOGRAMA
• In cadrul spermogramei se analizeaza si morfologia
(structura amanuntita a componentelor fiecarui spermatozoid: cap, gat si coada) spermatozoizilor. • Se analizeaza 100 spermatozoizi. • Pe baza caracteristicilor ei sunt catalogati ca • normali (valoare normala mai mare de 4%) si • anormali (malformati: cap dublu, cap amorf, cap alungit, piesa intermediara grosa, coada dubla, coada franta,coada incolacita etc) TIPURI DE SPERMII Spermocultură ANTICORPI ANTISPERMATICI - 8% din barbaţii infertili. - Anticorpii - de clasa IgG si IgA au relevanţă clinică. - Anticorpii antispermatici de clasa IgG au efecte citotoxice si sunt detectati în ser sau la nivelul spermatozoizilor cu ajutorul testului SpermMar pentru IgG. - Anticorpii antispermatici de clasa IgA au în principal proprietati de aglutinare, rar apar în absenta anticorpilor de clasa IgG, dar semnificaţia lor pentru infertilitatea masculină este mai mare. - Pacienţii care prezintă combinat anticorpii antispermatici de clasa IgA şi anticorpii antispermatici de clasa IgG, sau care prezintă doar anticorpii antispermatici de clasa IgA, au şanse foarte mici de obţinere a sarcinii pe cale naturală. - Pentru o mai bună studiere a existentei anticorpilor antispermatici, se folosesc două teste: MAR test si immunobead(IBT). Test MAR (Mixed Antiglobulin Reaction) - se efectueaza pentru detectarea anticorpilor prezenti pe spermatozoizi (IgA si IgG). - Cand sunt prezenti anticorpii antispermatici, spermatozoizii mobili vor lega particulele de latex formand aglutinari. - > 40% spermatozoizi legati de particule - pozitiv (probabilitate foarte mare de infertilitate de cauza imunologica). Testul Mar direct se efectuează pentru detectarea anticorpilor prezenţi pe spermatozoizi. - Se efectuează pe spermatozoizi din probe proaspete sau pe spermatozoizii obţinuţi în urma prelucrării probelor. - Suspensia cu spermatozoizi este amestecată cu o suspensie cu particule de latex acoperite cu anticorpi monoclonali anti – IgA uman sau cu anticorpi monoclonali anti – IgG uman. Testul Mar indirect se efectuează pentru detectarea anticorpilor de clasa IgG prezenţi pe spermatozoizi. - Se efectuează pe spermatozoizii obţinuţi în urma prelucrării probelor. - Suspensia cu spermatozoizii obţinuţi prin prelucrarea este incubată cu serurile de control şi - apoi amestecată cu o suspensie cu particule de latex acoperite cu anticorpi monoclonali anti – IgG uman. Halosperm este un test diagnostic bazat pe tehnica dispersiei cromatinei nucleului spermatozoizilor.
Principiul consta in denaturarea blanda a ADN-ului cu
formarea unui halo in jurul capului spermatozoidului cand ADN-ul este intact, - lipsa acestui halo cand ADN-ul este fragmentat. - SDF>30% fragmentare mare a ADN-ului.
- Utilitate clinica - Alegerea metodei de reproducere
asistata (ART) corespunzatoare Proba se tratează cu Halosperm Kit şi are la bază un proces de dispersie, de condensare a cromatinei spermatice cu dispariţia ei în cazul unui spermatozoid afectat. Prezenţa haloului traduce viabilitatea spermatozoidului. În concluzie, testul este o evaluare cantitativă exprimată procentual a calităţii probei, care ne indică conduita în tehnica de reproducere asistată. - Dacă SDF este sub 30%, se poate practica inseminare artificială, - când însă nivelul este peste 30% atunci şansele de reusită vor fi prin fertilizare in vitro sau ICSI, evitându-se o inseminare inutilă. - Superioritatea acestei metode se manifestă intocmai prin corecta selectare a tehnicii de reproducere asistată, fără încercari eşuate care întârzie scopul final. - Cele mai bune rezultate au fost obţinute prin ICSI datorită procesului de selecţie a celor mai viabili spermatozoizi şi de excludere a materialului de proastă calitate. INFERTILITATE FEMININA Celulele tecii foliculare interne Celulele stratului granulos folicular INHIBINA • FSH stimuleaza producerea de catre celulele granuloase a inhibinei, care va subpresa FSH-ul. • Inhibina este produsa atat in gonade, cat si in glanda hipofiza, placenta, corp galben ; • Exista doua tipuri de inhibina : alfa si beta. : • Inhibina B prezinta un varf de secretie in prima parte a fazei foliculare si un al doilea pick secretor la ovulatie. • Inhibina A prezinta un varf secretor la jumatatea fazei luteale; • Secretia de inhibina este diminuata de GnRH CICLUL OVARIAN • Cuprinde – Ciclul folicular (F. Foliculara); Ovulatia;Formarea si evolutia corpului galben (F.Luteala) • Dureaza in medie 28 zile - Incepe la pubertate - Se termina la menopauza (50-52 ani) = epuizarea rezervei ovariene • ATENTIE ----- C. Ovarian nu este acelasi lucru cu C. Menstrual CICLUL FOLICULAR Foliculul –reprezinta complexul format dintr-un ovocit (primar sau secundar) inconjurat de unul sau mai multe straturi de celule foliculare. Ciclul folicular incepe la pubertate ATENTIE – ciclul ovogenetic debuteaza in viata intrauterina) si se termina la menopauza (epuizarea foliculilor din ovar = golirea ovarelor). Determinarea rezervei ovariene (important in fertilitate) • INHIBINA B (produsa de celulele granuloase) – masurata in faza foliculara
• AMH (anti-Mullerian hormone)
O dată cu începerea pubertăţii, AMH este produs de celulele stratului granulos ale foliculilor de creştere din ovar AMH La sexul masculin valorile AMH pot diferenţia -criptorhidismul (celule Sertoli) de anorhie iar -la copiii mici ce prezintă ambiguitate genitală determinarea markerului este utilă pentru evaluarea prezenţei şi funcţiei testiculare. Implicatii clinice: Sunt 2 situatii in care AMH-ul poate oferi informatii extrem de pretioase in atitudinea terapeutica: - Determinarea rezervei ovariene (la femeile care urmaresc obtinerea unei sarcini prin fertilizare in vitro) sau determinarea prezentei testiculelor pe traiectul de coborare atunci cand ele nu se gasesc in scrot. OVULATIE Semne clinice de ovulatie • Cresterea temperaturii bazale • Modificarea mucusului cervical (devine elastic si alunecos pentru a asigura un "vehicul" sigur pentru "transportul" spermei) asemanator albusului de ou
Daca C.O este mai lung/scurt se calculeaza considerand
constanta faza luteala (14 zile) = Metoda calendarului Ex- C.O 35 zile – ovulatia are loc in 35-14 = ziua 21 Aspectul de feriga a mucusului cervical în perioada ovulaţiei Teste de ovulatie – masoara nivelul de LH in urina (colorimetric) – acelasi principiu ca si testul de sarcina – Masurarea progesteronului in sange in ziua 21 (secretat de corpul galben- in principal) – este un martor al ovulatiei care a avut loc in ziua 14
• Considerand un C.O de 28 zile, ovulatia are loc teoretic in ziua
14 (la 24-36 h dupa peack-ul de LH = trigger al ovulatiei) OVULATIE - Implicatii clinice
– Planificarea sarcinei – perioada fertila = 1 sau 2
zile inainte si dupa ovulatie – Contraceptie (Metoda calendarului) – Tehnici de reproducere umana asistata (inseminare intrauterina – IUI- pe ciclu natural, fara stimulare ovariana in prealabil) CICLUL UTERIN • Poate fi impartit in 4 faze: • 1. Menstruala • 2. Proliferativa • 3. Secretorie • 4. +/-Premenstruala • Fiecare faza se afla sub un control hormonal strict. • Hormonii care controleaza ciclul uterin sunt secretati de ovare sub influenta hipofizara (LH-ul si FSH-ul nu controleaza dimensiunile mucoasei uterine). Implicatii clinice: • Mucoasa uterina poate fi urmarita ecografic inregistrandu-se dimensiunile endometrului (format din 3 straturi bazal +spongios+ compact) utilizandu-se adesea termenul ecografic de endometru trilaminar – pentru a desemna faza secretorie (postovulatie).
• Progesteronul pregateste uterul pentru implantare.
• Implantatia blastocistului (nu embrion, nu zigot, nu
morula) se face doar in faza secretorie cand mucoasa uterina este suficient de groasa si “suculenta” (tradusa in termeni hormonali printr-un progesteron crescut). Explorarea infertilitatii feminine Principalele dozari hormonale: • ESTRADIOL • PROGESTERON • FSH • LH • PROLACTINA • TESTOSTERONUL (FREE) Explorarea infertilitatii feminine • TEMPERATURA BAZALA • EVOLUTIA MUCUSULUI CERVICAL • ECOGRAFIA
• BIOPSIA DE ENDOMETRU • HISTEROSCOPIA • LAPAROSCOPIA Teste de permeabilitate tubara: