Obiectivele: Tipurile de acizi nucleici, nucleici, func funciile i i repartizarea lor n n celul. celul.

Constituienii acizilor nucleici; bazele azotate, pentozele, acidul fosforic. Nucleozidele i nucleotidele. 3, ! c"#$ dezo%iribonucleici. &tructura pri'ar, secundar i teriar a acizilor dezo%iribonucleici Cro'atina. Nucleoso'ul. &tructura acizilor ribonucleici (t)N", ')N", r)N"*. +enaturarea i ,ibridizarea acizilor nucleici. Acizii nucleici sunt produi de policondensare ai 'ononucleotidelor, deci sunt polinucleotide. Nucleotidele ! sunt esteri ai nucleozidelor cu un rest, dou dou sau trei resturi fosfat

Rolul nucleotidelor: -. Nucleozid 'onofosfaii reprezint ele'ent ul structural al acizilor nucleici. ele'entul nucleici. Nucleozid trifosfaii sunt precursori 'acroer.ici la sinteza +N" i )N". /n aceste reacii cednd .rupa pirofosfat se transfor' n resturi de nucleozid'onofosfat, baza structurala a laniului polinucleotidic. 0. "T$ ! purttorul ener.iei c,i'ice n celul, servete la transferul .rupelor fosfat 'acroer.ice i e c,eia ce lea. procesele ce decur. cu eli'inarea, de.a1area ener.iei i cele ce utilizeaz ener.ia. "+$ i "#$, ce se for'eaza n rezultatul defosforilrii "T$, se vor fosforila pn la "T$ n procesul respiratiei tisulare.. 3. iau parte la transferul unor blocuri de constructie (acidul acetic, .lucoza, colina* transfor'ndu!le n substan e 2 biolo.ice active uridindifosfat.lucoz, citindifosfatcolin citindifosfatcolin a etc. 3. .4nele 'ononucleotide pre'ordiale conin i alte baze azotate ! nicotina'ida n nicotina'id 'ononucleotid, precursorul N"+, flavin'ononucleotida i 5"+. 6. 7n or.anius'e snt prezente 0 feluri de esteri fosforici ai nucleotidelor, ("#$, "+$, "T$*, n alte cazuri fosfatul lea.a 0 ato'i de 80 ai pentozei n acelai nucleotid. &e for'eaz nucleotide ciclice ! 09,39 i 39, 9. $rodusul 09,39 se for'eaz ca inter'ediat la de.radarea ribornucleotidelor, pe cnd c"#$ 39, 9 ! este un ribonucleotid natural ce poseda proprietti unicale i o activitate biolo.ic deosebit, re.lnd 'etabolis'ul ca 'esa.er n efectul ,or'onal. Nucleozidul :azele piri'idinice :azele purinice Structura ADN

Structura primar- reprezint succesiunea dezo%iribonucleotidelor (for'ate de :": ",;,C,; ; $e $entoza! dezo%iriboza, rest fosfat* i este stabilizat de le.turile 39 9 fosfodiesterice (for'at la interac interaciunea 39,idro%i.rupei 39,idro%i.rupei din pentoza unui nucleotid i 9!,idro%i.rupa pentozei altui nucleotid. Catena de +N" are dou capete 39 i 9. Captul 9 este trifosforilat iar 3 con conine ,ido%ilul liber. +eci catenele sunt polare &tructura secundar ! reprezint o spiral dubl (bicatenar* n care bazele azotate ocup ocup interiorul structurii (sunt ,idrofobe* interac interacioneaz prin le. le.turile de <, care asi.ur 'perec,erea specific (co'pli'entar* a :". C!; i "!T! planurile :" sunt orientate perpendicular pe a%ul unic ! planul resturilor .lucidice are pozitia de un.,i drept fa de cel al :" ! catenele sunt antiparalele. =%ist diferite for'e de +N" care sunt deter'inate de .radul de de,idratare a acizilor nucleici: ",: i >. #odific #odificrile n dublul ,eli% sunt dependente de antura1ul e%tern ai 'oleculei de +N". +N". +ublul ,eli% posed dina'is'. forma A: A: con conine -- resturi la o spir spir, este rsucit spre dreapta. forma clasica B: con conine -8 'ononucleotide 'ononucleotide la o spir. este rsucit spre dreapta. ! -8 nucleotide ocup 33 "n.stre'i (3,3 n'*. ! o nucleotid cuprinde 3,3" (8,33 n'*.? conformatia Z spre deosebire de " i : este rsucit spre stn.a. Chargaff (1949) studiind componen componena DNA a stabi it urmtoare e egit egiti la aceea aceeai specie de or.anis'e +N" are o co'ponen co'ponen nucleotidic nucleotidic identic identic co'ponenta +N" la diverse specii de or.anis'e difer difer ! +N" la aceea aceeai specie nu este dependent de: vrst, ra raie ali'entar, condi condiiile 'ediului a'biant ! n +N", "@T i ;@C, deci "2T@- i ;2C@- ! su'a :" purinice este e.al cu su'a :" pir'idinice dac "AT este 'ai 'are dect ;AT ave' +N" de tip "T

"!T?
-

dac ;AT este 'ai 'are dect "AT ave' +N" de tip ;T t C de topire este 'ai 'ica cnd predo'in perec,ile

t C de topire este 'ai 'are cnd predo'in perec,ile ;!C la eucariote +N" 'itocondrial este circular +N" con conine secven secvene structurale i re.latoare Structura ter teriar a +N" se con conine n cro'ozo'i, care au diferite for'e n dependent de stran.ula stran.ulaie, care sunt la o' n nu'r de 36. 4n cro'ozo' prezint o 'olecul .i.ant de +N" superspiralizat (predo'in superspiralizarea ne.ativ*, deci este unitatea structural repetabil a cro'atinei +N" este asociat n nucleozo' cu proteinele bazice ,istonele, care for'eaz bucle proteice octa'erul (set dublu de <3,<3,<0",<0:* este nfurat de +N" dublu inelar cu lun.i'ea de -36 nucleotide for'nd o structur discoidal. ! solenoid. solenoid. Be. Be.turile dintre +N" i ,istone sunt ionice ARN

Structura primar- secven secvena de ribonucleotide (baze: ",;,C,4; pentoza! riboza i rest fosfat* stabilizat de le.turi fosfodiesterice. =ste 'onocatenar. Structura secundar a t!)N" are inf iarea unei Cfrunze de trifoiC =a se for'eaz n infiarea n ur'a i'perec,erii co'ple'entare intracatenare a nucleotidelor anu'itor sectoare. &ectoarele, care nu sunt ncadrate n n for'area le.turilor de < for'eaz lan lanuri sau bucle &ectorul de acceptare CC" cu ,idro%ilul 3D liber la care se fi%eaz .rupa COO< al "". :ucla anticodonic este for'at din apte nucleotide. =a con conine un triplet nucleotidic specific pentru fiecare t! )N" nu'it anticodon. "nticodonul t!)N" dup principiul co'ple'entarittii se 'perec,eaz cu codonul respectiv din )N"r. )N"r. 7nterac 7nteraciunea codon!anticodon deter'in deter'in ordinea aran1 aran1rii a'inoacizilor n catena polipeptidic. ! :ucla pseudouridilic const din apte nucleotide n care restul acidului pseudouridilic este obli.atoriu i particip la interaciunea cu ribozo'ii. ! :ucla di,idrouridinic const din E!-0 resturi nucleotidice, printre care prezena ctorva resturi de di,idrouridin este obli.atorie i interactiuneaz cu enzi'a a'inoacil!)N"sintetaza, care contribuie la recunoaterea de ctre a'inoacid a ")N!t specific. Structura ter teriar iar a t)N"

are de acu'

nu for'a frunzei de trifoi dar a'intete for'a nc,eieturii cotului (Fan!derGaals* (Fan!derGaals*

Propriet ile fizico-chimice ale acizilor nucleici Proprietile ! $roprit ile ile fizico!c,i'ice ale acizilor nucleici sunt: $roprit ! 'asa 'olecular 'are. propriet ile coloidale i os'otic proprietile os'otice, tipice pentru to toi co'pu co'puii 'acro'oleculari. $ropriet ile lor ,idrofile depind de fosfa $roprietile fosfai. viscozitatea i densitatea nalt a solu soluiilor, capacitatea de denaturare. la p< fiziolo.ic toti "N sunt polianioni (!* Denaturarea fi renaturarea - proprietate caracteristic pentru 'oleculele cu or.anizare spaial e provocat de nclzire, aciunea substanelor, care rup le.turile de ,idro.en, forele Fan!der!Gaals, ce stabilizeaz structura secundar i teriar a acizilor nucleici. =%. nclzirea +N"!duce la desfacerea spiralei duble n dou catene, adic are loc transfor'area Hspiral ! .,e'C. Ba rcirea treptat catenele din nou se reunesc dup principiul co'ple'entarittii, for'nd spirala dubl nativ. "cest feno'en se nu'ete renaturare! Ba racirea brusc renaturarea nu are loc. +enaturarea i renaturarea acizilor nucieici este nsoit de sc,i'barea activittii lor optice. Toti acizii nucleici posed activitate optic 'a%i' la lun.i'ea undei de 068 n', ceea ce corespunde cu absorbia 'a%i'al a bazelor azotate. Hibridizarea AN $e capacitatea de renaturare a "N este bazat bazat 'etoda de deter'inare a .radului de nrudire a acizilor nucleici, care poart denu'irea de ,ibridizare 'olecular. Ba baza 'etodei st 'perec,erea co'ple'entar co'ple'entar a sectoarelor unicatenare ale acizilor nucleici. "ceast 'etod a per'is descoperirea particularit particularitilor structurii pri'are a +N". +N". &!a stabilit, c n n co'ponen co'ponena +N" a

ani'alelor se afl sectoare cu o succesiune nucleotidic nucleotidic identic identic, care de 'ulte ori se repet. <ibridizarea decur.e foarte repede. )estul +N" este prezentat printr!o succesiune unical unical a nucleotidelor, care nu se dubleaz. dubleaz. Obiectivele: )eplicarea "+N! 'ecanis'ul, substratele, 'atricea, enzi'ele i factori proteici, etapele biosintezei "+N. Telo'eraza. )olul i structura.. )eparaia "+N. Transcripia sau biosinteza ")N: 'atricea, substratele, enzi'ele, 'ecanis'ul :iosinteza ")N pe 'atrice de ")N #odificrile posttranscripionale (processin.* +o.'a central a .eneticii 'oleculare. Concepia: o .en ! un polipeptid. 7n,ibitorii sintezei acizilor nucleici. 7n.eneria .enetic i se'nificaia ei practic. &inteza anticorpilor Trsanscripia invers. &tructura .enelor ! di'ensiunile lor, intronii i e%onii, .enele structurale i re.latoare. Codul .enetic i proprietile lui. #utaiile 'oleculare: prin substituie, supri'are i inseriile de nucleotide. )olul 'utaiilor )ibozo'ii ! sediul sintezei proteinelor, structura lor. $rocesul de translare (sinteza proteinelor*. proteinelor*. #odific #odificrile posttranslaionare ale proteinelor. "sa'blarea proteinelor! foldin.ul )e.larea biosintezei proteinelor. 7nduc 7nducia i represia enzi'elor. 7n,ibitorii sintezei proteice . proteice. $oli'orfis'ul proteinelor (variantele ,e'o.lobinei, enzi'elor, .rupelor san.uine*. :olile ereditare i dia.nosticul lor bioc,i'ic.

Dogma central a geneticei moleculare Postulatul de baz a geneticei moleculare a fost formulat de Watson i ric!: este transmiterea informaiei genetice de la ADN la "rotein care se realizeaz realizeaz "rin urmtoarele trei "rocese: re"licarea# au oc "n nuc eu transcri"ia# translaia$ au oc "n citozol

$rocesul de transcripie este reversibil. =nzi'a care catalizeaz transcripia invers se nu'ete revertaza (reverstranscriptaza* i a fost descoperit la oncovirui. &inteza ")N!ului pe baza ")N se nu'ete replicarea ")N, ea are loc la virui, care nu au "+N. $rocesul de translaie este ireversibil i se nu'ete biosinteza proteinei.

Replicarea (sinteza unei noi molecule de AND pe matrice de ADN) %om"onentele necesare "entru re"licarea sunt: sunt: & DNA matricea bicatenar de#o$inuc eo#idtrifosfaeii respecti%i A &'( C&'! )&'( &&' ionii de *g++( *n++( ,n++ ribonuc eo#idtrifosfaeii respecti%i- A &'( )&'( C&'( .&' /n#ime e 0i proteine e specifice stabi i#ante ! 1e ica#a - desfacerea dub u ui he i$( treptat( pe poriuni mici! Ce e 2 catene rm3n separate ca urmare a inter%eniei proteine or de stabi i#are &opoi#omera#a 4 0i 44 "n tur supertorsiuni e ADN( (4 5 introduce supertorsiuni negati%e6 44 5 scindea# o eg! fosfodiesteric pe una din catene 0i permite ce or 2 catene s se roteasc una fa de a ta) DNA-po imera#e e 4( 44( 444 sinteza catenei fiice n direcia 9I39 . DNA-po imera#e e 4! posed activitate 9! 3J e%onucleazic, nltur pri'erul i!l nlocuiete cu fra.'ente de "+N DNA-po imera#e e 44 rol neclar DNA-po imera#e e 444 K aciune poli'erazic ( 9! 3J* ! sintetizeaz n direcia J! 39 lanul polidezo%iribonucleotidic, prelund instrucii de la "+N!'atri, ! " ciune e%onucleazic (39! J* 7NA-po imera#a( "rimaz ! sintetizeaz pri'erul n direcia 9! 3J . DNA - iga#e e unete fra.'entele OLasaLi de pe catena ntrziat

Procesul biosintezei DNA se caracterizeaz prin

& sediul sintezei +N" este nucleul ! replicarea este un proces se'iconservativ ! se desfoar n trei etape : ini iniiere, elon.are, ter'inare ! prezen prezena prai'erului este obli.atorie replicarea este cuplat cu desf ener.ie* desfurarea +N" parental (necesit (necesit ener.ie* replicarea decur.e n a'bele direc ii cu aceeai vitez. . $e catena direc vitez ntrziat se sintetizeaz fra.'entele '!aza!i$ '!aza!i$ ! este bazat pe 'pac,etarea co'pli co'pli'entar a bazelor azotate azotate ! catena!fiic este antiparalel cu catena parental dar nu identic dup secvena nucleotidic ! forta 'otric 'otric a procesului este ,idroliza pirofosfatului ! an.a1eaza si'ultan intre.ul cro'ozo'. cro'ozo'. DNA-polimerazele (!!!) " prezint prezint un co'ple% 'ultienzi'atic ce posed cteva situsuri ! pentru +N", pentru a'ors, d)T$, e%onucleazic i catalitic. are activitate poli'etazic, preia instrucia de la 'atri i necesit prezena a'orsei cu O< n 39liber ct i dezo%inucleozidtrifosfailor nu poate ini iniia sinteza catenelor de +N"!deaceia este necesar prai'erul. posed activitate 39! 9!e%onucleazic i e%ercit o funcie de autocorecie este ncadrat n repararea +N" +N"!poli'erazele (7*: ndeprteaz prai'erii prin activitatea sa 9)39 e%onucleazicadau. d)N prin activitatea sa poli'erazic ireversibilitatea procesului e asi.urat de aciunea ei pirofosfotazic posed aciune de sudare cu consu' de "T$ posed funcie de autocontrol catalizeaz o copiere a +N" co'pli'entar cu cea 'atriceal. #ecanismul replicrii ( eta"e: iniierea) elongarea) terminarea *niierea parcur.e dou etape: +ormarea furcii de re"licaie & sub aciunea ,elicazelor are loc desfacerea duple%ului parental pe anu'ite poriuni K replicatori (la scindarea le.. de < dintre :" ! se utilizeaz 'in 0 'ol. de "T$*. Topoizo'eraza efectueaz rupturi 'onocatenare apoi sudeaz le.tura fosfodiesteric i favorizeaz rela%area structurii +N"

Sinteza "rimerului & sub aciunea pri'azei se sintetizeaz o poriune 'ic de ")N n direcia 9! 39. $ri'erul este for'at din !-8 ribonucleotide. ;ruparea 3JO< K e un iniiator al sintezei de "+N. $longarea ADN "olimeraza *** unindu!se la captul 39 O< al pri'erului ncepe sinteza "+N fiic. )eacia decur.e prin atacul nucleofil al .rupei 39 O< al pri'erului asupra unui d)NT$ co'ple'entar catenei de "+N 'atri. &e for'eaz le.tura fosfodiesteric i se elibereaz $$; ,idroliza $$ deter'in poli'erizarea propriu zis. =lon.area decur.e n direcia 9I 3J, 3J, i parcur.e cu aceeai vitez pe a'bele catene Catena de baz se va sintetiza continuu, iar cea ntrziat va fi for'at din fra.'ente OLasaLi. (di'ensiuni de -888 K 0888 nucleotide la procariote i - 8!088 la eucariote*. "+N poli'eraza 7 e%clude pri'erii i sintetizeaz co'ple'entar "+N. 5ra.'entele snt unite cu enzi'a "+N li.aza (necesit "T$ la eucariote i N"+ la procariote*. %erminarea

,erminarea replicrii are loc atunci, cnd cele dou bifurcaii de replicare se ntlnesc ntr!o re.iune opus re.iunii CoriC. $roteinele speciale se'nalizeaz oprirea repilcrii prevenind aciunea ,elicazelor. Replicarea la eucariote $articulariti: "+N poli'erazele: MNOP M! i'plicat n replicarea "+N nuclear! responsabil de sinteza catenei ntQrziat P K rspunde de sinteza catenei lider. =a 'anifest aciune e%onucleazic N K i'plicat n reparaia "+N O ! i'plicat n replicarea "+N 'itocondrial :ifurcaia replicii este de 3888 baze pe 'inut co'parativ cu -6.888 la procariote $e o 'olecul de "+N e%ist 'ai 'ulte ori.ini de replicare (3R-83 (3R-83 ! 3R-8 separate prin perec,i de baze*. /n aceste ori.ini 'ultiple de replicare se or.anizeaz bifurcaii! ce se deplaseaz biderecional pe cro'oso'ul eucariot n curs de replicare.

%elomer %elomeraza )eplicarea capetelor D ale catenelor este inco'plet (teoria lui Olovnicov, -ST-*, deoarece dup nlturarea pri'erilor "+N p nu e e capabil s co'pleteze aceste .oluri. "stfel la fiecare replicare, capetele "+N se scurteaz. "ceasta nu afecteaz infor'aia .enetic deoarece catenele conin fra.'ente repetitive neinfor'ative K telo'ere. Telo'erele sunt replicate de o = specific K telo'eraza Telo'eraza K reprezint o ribonucleoproteid: ")N i protein &ubunitatea proteic T)T (telo'eraze revers transcriptase* posed activitate catalitic.

%elomeraza - fiind o re.ertaz /ADN "olimeraza ARN de"endent0 folosete ca matri "ro"ria coenzim - un fragment de ARN$ Structura i funcia RNA telomerazice$ &tructura primar la 'a1oritatea )N" telo'erice, re.iunea 'atricial se afl la deprtarea de 8 nucleotide de la captul D, i are ur'toarea succesiune de nucleotide D!C4""CCC4"!3D. &tructura secundar e co'pus din 3 bucle i un fra.'ent unicatenar, ce conine 'atria pentru sinteza +N" telo'erice. #ecanismul elongrii capetelor cromozomului la eucariote 4nhibitorii te omera#ei oli.onucleotidele 'odificate, co'ple'entare re.iunii 'atrice a )N" K telo'erazice. "a nucleotide specific se fi%eaz de 'atria )N" Ktelo a o'ului, in,ibnd activitatea telo'erazic in vitro. 7n vivo apare proble'a transportului in,ibitorilor prin 'e'brana celular i 'icarea diri1at n nucleul celular. Ca in,ibitori au fost testai i in,ibitorii reverstranscriptazelor K azidoti'idina, didezo%i.uanozina.

Nu'rul telo'erilor deter'in durata vieii fiecrei celule i condiioneaz reducerea critic a nu'rului lor, induce 'oartea pro.ra'at a celulei deci pierderea 'otivelor telo'erice este cauza i'btrnirii (telo'era conine 'ii de 'otive TT";;;*. lun.i'ea telo'erei este 'arc,erul biolo.ic al 'btrnirii. 'btrnirii. 7eparaia ADN =rorile n ti'pul replicrii sunt reduse la 'ini'u' i'u' datorit +N" poli'erazei ce posed funcie endonucleazic 'in Tipuri de deteriorri: 5or'area de bree #odificarea :" $ierderea de :" 5or'area di'erilor de piri'idin sub aciunea razelor ultraviolete

Re"araia "rin e1cizia dimerului 7eparaie prin fotoreacti%are 7eparaie prin recombinare &ranscrierea (transcrip (transcripia)-biosinte#a A7N pe matrice de ADN Co'ponentele necesare: -. +N" dublu ,elicoidal (anu'ite por poriuni* (catenaA*, 0. &ubstrat ! ribonucleozidtrifosfatii, ribonucleozidtrifosfatii, ("T$, ;T$, CT$, 4T$* 3. )N" poli'eraza: posed aciune poli'erazic, nu posed aciune e%onucleazic, conine ionii de >n i necesit prezena ionilor de #.AA, #nAA n 'ediu. la procariote prezint un penta'er co'pus din proto'eri si.'a , 0, i -; posed centre catalitice(a* , de fi%ate a +N" i a substratelor. la eucariote: )N"p7 sintetizeaza )N" ribozo'al (0E& si -E&* )N"p77 sintetizeaza )N"'? )N"'? )N"p777 sintetizeaza )N"t, )N"r & i 'olecule 'ai 'ici $tapele transcripiei &inteza decur.e n 3 etape: iniierea, elon.area, ter'inarea. 4niierea K ncepe n anu'ite secvene de "+N nu'ite pro'otor ($ K 38 nucleotide*. ")N K poli'eraza recunoate cu a1utorul si.'a Toi $ bacterieni au 0 secvene consens situate pe catena codifictoare: Caseta $ribnoU D T"T""T 3D Caseta 3 D TT;"C" 3D $ la eucariote:

;C casete ;;;C; C""T casete CC""T Caseta <o.ness KT"T"T2"T $ri'ele 0 sunt responsabile de frecvena transcripiei (cQnd ncepe*, a 3 ! ! i'plicat n iniiere K se'nal (unde*. Toate sunt responsabile de e%acitatea iniierii $e $ deosebi' 0 locusuri: de recunoatere (depistat cu a1utorul si.'ei* i locusul de legare la1 a ARN "olimerazei. Bocusul de recunoatere e situat la o distan de 0 nucleotide de locusul de le.are i -8 nucleotide de la punctul de iniiere (A-*

&i.'a &i.'a subunitatea .sete punctul de iniiere i: "ctiveaz identificarea secvenelor de )N" poli'eraz 7a parte la desfacerea dublului ,eli% de "+N 7a parte la for'area pri'ei le.turi fosfosiesterice "stfel co'ple%ul de iniiere este for'at, si.'a subunitatea e disociat de la ,oloenzi' i ia parte la iniierea unui alt ciclu de transcriere. / ongarea 0i &erminarea 2longarea ! alunecarea ")N poli'erazei pe 'atra de "+N K sinteza transcriptului ( 8 nucleotide pe secund* . )N"p nu controleaz catena sintetizat K erorile sunt 'ai 'ulte fa de ,erminarea K )N"p recunoate secvenele nucleotidice specifice de pe "+N, ce conin un nu'r 'are de ;, C i T.. $roteina V ! se asociaz la = i se 'ic 'preun cu ea, ns la identificarea se'nalelor de ter'inare coboar de pe 'atri i ncetinete aciunea =,producQnd transcriptul cu folosirea ener.iei K "T$ 'rocesingu Toi precursorii de ")N n nucleu trec etapa de 'aturizare posttranscripional. $e parcursul procesin.ului ! pre!")N se transfor' n ")N 'atur. $rocesin.ul nclude trei operaii: 3odificarea fragmentelor terminale 45 i (5 ale ARN : a. WCapX!area: la captul D !este adiionat .uanozina 'etilat (prote1area '")N de atacul D!e%onucleazelor*; b. la captul 3D K se adau. o secven 'are de poli " (088 " !coad*. =a servete la e%portul 'oleculelor de ")N din nucleu n citoplas'. 21cizia intronilor i sudarea e1onilor$ "a nu'itul splisin. are loc n nucleul celulei: enzi'e specifice identific secvenele de baze la 1onciunea intron K e%on. 4n rol i'portant n e%cizie le revine ")N nuclear (")N 4*, care are o secven de baze co'ple'entar cu secvenele de la fiecare intron.")N nuclear scoate intronii, capetele e%onilor sunt 1u%tapuse, apoi sudate de RNA ligazele #etilarea bazelor t!")N K 'pedic distru.erea ")Nt de ctre nucleaze.

&ranscripia in%ers sinteza "+N pe catena de ")N #atria K ")N &ubstrat K d)NT$:d"T$, d;T$, dCT$, TT$ =nzi'a K revers transcriptaza Caracteristic viruilor onco.eni #ecanis'ul: a. )evers transcriptaza sintetizeaz pe ")N viral catena de "+N! ,ibrid "+NY")N b. &cindarea ")N viral de o nucleaz c. "utoreplicarea "+N K cu for'area unui duple% de "+N

Structura gene or- dimensiuni( )S6 )7 ;ene! poriunile "+N ce conin infor'aia .enetic cu privire la sinteza unei proteine 5iecrei .ene i cores corespunde un lan polipeptidic! de aici i conceptul: o gen -un lan "oli"e"tidic 6S& .enele ce codeaz polipeptide i ")N. $oriunile ;& ce conin infor'aie (transductibile* -e1oni# iar secvenele ce nu sunt traduse n ")N' - introni 6R - se.'ente de "+N, repetabile, relativ 'ici ce au un rol re.lator. Rolul lor: Pot fi semnale ce ne arat 7nce"utul i sf8ritul 6S Partici" 7n iniierea i terminarea transcri"iei 6S Dimensiunile genelor - f. variabile. =%. $roteina ce conine 3 8 ""!!! 3 8R3@-8 8 nucleotide. Ztiind c :" sunt localizate la 8,33 n'Y!!!! 8,33 n'R -8 8@3 T n' @8,36'c'

%odul genetic

7nfor'a 7nfor'aia .enetic .enetic referitor la biosinteza proteinelor se trans'ite cu a1utorul codu ui genetic( genetic( ce reprezinta for'a de e%pri'are a rela relaiei dintre secven secvena de nucleotide din +N" i i succesiunea de "" din B$. B$.

Cele 3 nucleotide, .rupate cte 3, pot oferi 63 de posibilitti pentru cei 08 "". 4n "" este specificat de 3 nucleotide i fiecare triplet se nu'ete codon. Codonii se citesc consecutiv de 'oleculele de t)N", care ndeplinesc rolul de adaptor n sinteza proteinelor. $ropriettile codului .enetic ! este tri"let 6- codoni codific a'inoacizii corespunztori, 3!codific ter'inatia sintezei proteice; codul este degenerat unui a'inoacid poate s!i corespunda 'ai 'ulte codoane: ar., leu, ser, fiecare este codificat de cte 6 codoni, ns 'et! i trp sunt specificati de ctre un sin.ur codon. Codonii unui a'inoacid sint sinoni'e. &pecificitatea codonului e deter'inat de pri'ele dou litere. +e.enerarea se refer la nivelul nucleotidului 3 din codon sau - din anticodon care oscileaza, (o baz ovielnic* i e dispus s incalce re.ulile (efectul Gobble*. Codul nu are .irgule, se'ne de punctuatie, ce ar indica nceputul i sfritul fiecarui codon. Citirea 'esa1ului .enetic se face nentrerupt de la codonul start pn la cel ter'inator. Codul .enetic este uni.ersal ! toate vietuitoarele utilizeaz acela 'ecaniz' de traducere (abaterea prezint codul .enetic al 'itocondriei*; !Codul .enetic nu este ambiguu (acelai triplet nu se'nific 0 a'inoacizi diferiti. Nu se su"ra"une cu e%ceptie la virusuri; Codul .enetic este liniar (este coliniar adic e%ist o concordant liniara ntre .en i proteina codificat*. ("4;* este tripletul de initiere iar 4";, 4"",4;" de ter'inare (non sens* uracilul n pozitia - prezint codoanele nonsens codoanele cu 4 (n pozitia 0* codifica "" ,idrofobi cei cu " n pozitia !0 codific "" polari sau cu sarcin dac n anticodon n directia ( 9![39* pri'a baz nucleotidic e: a* Citozina sau "denina, el va citi un sin.ur codon; b* 4racilul sau ;uanina el va citi 0 codoane; c* inozina ! respectiv va citi 3 codoane;

Obiectivele: )ibozo'ii ! sediul sintezei proteinelor, structura lor. $rocesul de translare (sinteza proteinelor*. proteinelor*. #odific #odificrile posttranslaionare ale proteinelor. )e.larea biosintezei proteinelor. 7nduc 7nducia i represia enzi'elor. 7n,ibitorii sintezei proteice . proteice. $oli'orfis'ul proteinelor (variantele ,e'o.lobinei, enzi'elor, .rupelor san.uine*. 7n.eneria .enetic i se'nificaia ei practic. &inteza anticorpilor #utaiile 'oleculare: prin substituie, supri'are i inseriile de nucleotide. )olul 'utaiilor

Ribozomii )eprezint sediul de traducere a ")N' i sinteza proteinelor. &tructura! co'ple%e ribonucleoproteice i sunt for'ai din dou subuniti de 'ri'e ine.al ('are i 'ic* &tructura ribozo'ilor procariotici: subunitatea 38 & K conine ")Nr -6& i 0- proteine. subunitatea 8& K ")N r &, 03& i 3- proteine. &inteza ")Nr i for'area subunitilor are loc n citoplas'. &tructura riboso'ilor eucariotici: subunitatea 38& K ")Nr -E& i 33 proteine. subunitatea 68& K ")N r &, ,E&, 0E& i 3S proteine. ")Nr K se for'eaz n nucleol. )ibozo'ul va avea constanta de sedi'entare T8& la procariote si E8& la eucariote. & K este coeficientul de sedi'entare &vedber., care depinde de for'a, densitatea i di'ensiunea particulelor.

'entrele catalitice ale ribosomilor Situsul A ! a'inoacil K responsabil de unirea co'ple%ului a'inoacil! ")Nt Situsul P K peptidil K .zduie zduiete ")Nt le.at de un lan lan polipeptidic de1a sintetizat Situsul 2 K e responsabil de eli'inarea ")Nt $rocesul de sintez proteic poate fi sc,iat su'ar prin interaciunea celor 3 tipuri de ")N ! infor'aia din ")N' este citit n ribozo' si transpus n proteine, "" necesari fiind adui de ")Nt. /n starea sa nedisociat ribozo'ii sunt activi.

 +eplasarea liber a ribozo'ilor n diferite sectoare ale celulei, sau co'binarea lor n diferite locuri cu 'e'branele reticulului endoplas'atic ofer posibilitatea de asa'blare a proteinei n celul. #ai 'ul 'uli ribozo'i pot citi si'ultan acela acela ")N 'esa.er pe care il parcur. in acela acela sens. &e constituie astfel un poliribozo', structur structur ce per'ite accelerarea sintezei proteice. ,ranslarea /traducerea) biosinteza "roteinelor0 se realizeaz realizeaz n ur'toarele etape: 7. "ctivarea "". 77. Translarea proprio zis: propriozis: -.7niierea lanului polipeptidic.(B$* 0. =lon.area B$. 3. Ter'inarea B$ i i eliberarea acestuia 777. $relucr $relucrri posttraducere ale proteinei sintetizate. Acti(area aminoaciz aminoacizlor) are ioc n citozolul celulei ! "" se lea.Q de .r. O< din pozitia 09 sau 39 al cap CC" din )N"t cu consu' de ener.ie (0 le.. #acroer.ice*. ! activarea tuturor "" e catalizat de 08 de "" )N"t ! sintetaze care asi.ur specificitate. ! =nzi'a are 3 centre de fi%are: pentru t)N", "T$, "" i <08. ! necesit prezena ionilor de #.0A, \, pentru a!i e%ercit funcia. K aci unea pirofosfatazei cauzeaz ireversibilitatea reac aciunea reaciei &e desfoar n dou etape: "T$ $$i -. N<0!C<!COO<
7

N<0!C<!CO KO!"#$
7

) 0. N<0!C<!CO KO!"#$A") Nt KO!"#$A")Nt

7

) "'inoacil "denilat N<0!C<!CO KO!)N"t A"#$

"'inoacil )N"t

Biosinteza decurge 7n ( eta"e: 7ni 7niierea, elon.area, ter'inarea 7niierea: 7niierea: ! subunitatea 38& for'eaz co'ple% cu 57!3! apoi se lea. ")N' cu codonul "4; plasat n situsul $ ! se a.au. 57!-! f'et!")Nt i ;T$ se lea. de 57!0 i se unete la co'ple%ul for'at de subunitatea 38& 38&. 57!3 i ")N' for'nd co'ple%ul de ini iniiere. ! Co'ple%ul de ini iniiere se co'bin cu subunitatea 8& for'nd ribozo'ul inte.ru, func funcional activ T8& . ! "re loc ,idroliza ;T$ la ;+$ i $ i eliberarea factorilor de ini iniiere. +ecur.e n 3 etape : - fi%area noului "'inoacil ")Nt co'ple%ul: a'inoacil!")Nt, a'inoacil!")Nt, factorul de elon.are T (5=!T* i ;T$. se fi%eaz pe situsul ", dup ce are loc ,idroliza ;T$ la ;+$ care se elibereaz 'preun cu 5=!T.

$longarea

0. for'area le.turii peptidice. =nzi'a peptidil!transferaza catalizeaz for'area le.turii peptidice ntre doi "" din situsul " i $.$eptida r'ne ataat de )N"t de pe situsul ".

3. transloca translocaia ribozo'ul se deplaseaz la ur'torul codon de pe ")N' i peptidil")Nt peptidil")Nt trece de pe situsul " pe $ aceast etap necesit factorul de elon.are ; (5=!;* i ;T$ (necesar (necesar pentru realizarea 'odificrilor confor'a confor'aionale care deplaseaz ribozo'ul* ribozo'ul*.

,erminarea este se'nalat de unul din cei trei codoni stop.

dup ce ulti'ul rest de a'inoacid (C ter'inal* a fost ad adu.at la lantul polipeptidic, el este covalent ataat cu .rupa sa COO< de ")Nt n situsul ". desprinderea necesit prezena factorilor de desprindere )7 ,)0, )3, care transfer transfer peptide pe situsul $. rup le.tura esteric dintre ")Nt i polipeptid desprind ")N', ")Nt i disociaz ribozo'a n dou subunitti. Necesarul ener.etic la for'area fiecrei le.turi proteice

! dou le.turi 'acroer.ice se folosesc la activarea fiecrui "" ! o le.tur 'acroer.ic! la fi%area "" ")Nt la situsul " ! o le.tur! la translocare

3odificrile "osttraducere includ: & ndeprtarea restului for'il la procariote i a 'etioninei la eucariote; ! for'area ,idro%iprolinei i ,idro%ilizinei ! acetilarea capatului N ! ter'inal! 'etilarea lizinei, ar.ininei ! fosforilarea ,idro%ia'inoacizilor ! carbo%ilarea .luta'atului ! iodurarea resturilor de tirozin ! .licolizarea resturilor de lizin ! e%cizia unor secvente polipeptidice ! for'area puntilor disulfidice ! ataarea unor substitueni neproteici (,e'ul* Anticorpii sunt" &inteza Anticorpilor

5iecare dintre 'ilioanele de anticorpi produi produi lea. unul dintre 'ilioanele de anti.ene posibile. =ste .reu de crezut c or.anis'ul or.anis'ul are n n patri'oniul su .enetic cte o .en pentru fiecare anticorp pe care!l care!l produce ntrucQt aceasta ar presupune o supradi'ensionare a .eno'ului eucariot. ;radul de diversificare n ob obinerea lan lanurilor H<C i HBC este crescut prin faptul c o poriune variabil este rezultatul asa'blrii a 3 re.iuni. +eci "+N ce deter'in poriunea variabil a anticorpului este constituit din: din: $or $oriunea variabil (F* constituit din ! 388 de .ene. $oriunea de diversitate (+* ce cuprinde !-0 .ene $ortiunea de articulare sau 1onciune (]* ! 3 .ene "sa'blarea acestor .ene n diferite co'bina co'binaii per'ite construirea a 08888 de sectoare F ! fapt ce asi.ur e%tre'a varietate a anticorpilor. anticorpilor. !nhibitorii sintezei proteice

! la ni.elul re"licrii: ! #ito'icina c ! 'piedica 'piedica separarea catenelor de "+N ! "cidul Nalidi%ic ! in,iba in,iba "+N .iraza & la ni.elul transcri"tiei: ! "ctino'icina + ! se se fi%eaza pe "+N K )ifa'picina ! in,iba in,iba ")N poli'eraza la ni.elul translatiei:) Tetracicilina ! in,iba in,iba le.area ")Nt la ribozo'i $uro'icina ! bloc,eaza bloc,eaza elon.area in,ibQ in,ibQnd co'petitiv ")Nt \ana'icina K translatie translatie !in,iba !in,iba citirea codului .enetic To%ina difteric ! in,ib translocaza Reglarea sintezei proteinei ! asi.ur cantitatea opti' opti' de protein necesar or.anis'ului. ! se realizeaz realizeaz la nivelul sintezei de ")N' ct i la cel al etapelor citoplas'atice de sintez. ! celulele dispun de dou dou tipuri de enzi'e: a) !nductibile) a cror concentraie depinde de prezena sau absena din 'ediu a unui co'pus ! inductor. +e obicei aceste enzi'e sunt i'plicate n ci catabolice. b) Represibile) a cror concentraie depinde de prezena sau absena din 'ediu a unui co'pus K corepresor c) 'onstitutibile care sunt n cantitate constant indeferent de starea 'etabolic a or.anis'ului #odelul lui ]acob!#anod de re.lare a biosintezei proteinelor poart nu'ele de &eoria operonu ui! :acteria are ca surs .lucoza. .lucoza.:acteria are ca surs lactoza

Reglarea sintezei la eucariote "tQt la nivelul transcripiei cQt i la nivelul translaiei )e.larea ,or'onal (cortizol! sinteza = .luconeo.enezei; estro.enii, andro.enii, vita'ina + K sintez de proteine specifice* )e.larea e%spresiei .enetice prin 'oleculele proteice le.ate de "+N (,istonele* K sinteza ")N pe "+N e in,ibat prin adaosul de ,istone )e.larea proteinei la nivelul translaiei K e posibil prin aciunea factorilor proteici, care contribuie iniierea, elon.area, ter'inarea. *ngineria genetic tiinta, , preocupat de crearea noilor fenotipuri prin transplantarea .enei unui or.anis' n .eno'ul altuia n tiinta preocupat scop de a lic,ida defectele ereditare ale .eno'ului, nu .ureaz .eno'ului, adic adic tratarea afectiunilor ereditare (.ena (.ena ntrodus ntrodus .ureaz n n patri'oniul ereditar al .eno'ului !.azd * !.azd &e obtin 'olecule ,ibride (,i'erice* /n linii 'arl procedura include etapele: -. Cptarea .enei 0. Cptarea "+N!ului reco'binat 3.Clonarea "+N!ului reco'binat

'ptarea genei: &tiind structura pri'ar a proteinei n laborator se poate obine .ena respectiv (se obin .ene pn la 0 8 codoane* ! 'ai .reu e ob obinerea .enei din .eno'ul celulei (.enele se despart prin introni*! 'ai uor e cptarea .enelor din virusuri cu enzi'a revertaza. 'ptarea ADN-ului recombinat .ena necesar se ntroduce n n celul pentru a se inte.ra cu .eno'ul acestuia. $entru aceasta n vitro .ena se une unete cu "+N! "+N!vector (plas'ide ce con conin "+N inelar (c (cteva .ene*. .ene*. +e re.ul se folosete = Coli, ce contine un cro'ozo' i plas'ide, ce pl plutesc n citozol (plas'ida este de -888 ori 'ai 'ica dect cro'ozo'ul*. $las'idele se replic replic independent de replicarea 'aterialului .enetic. 4nele plas'ide se pot include n cro'ozo' i apoi din nou s!l s!l prseasc. $las'idele pot trece dintr!o celul n alta n procesul de con1 con1u.are. $las'idele se separ din =.Coli i li se nltur o parte de "+N inelar cu a1utorul enzi'elor restrictaze, care recunosc i taie diferite sectoare. 5olosind restrictaze diferite se poate de tiat "+N n locusurile necesare. 7n rezultat se for'eaz capete lipicioase (sectoare 'onocatenare, capabile de a uni nucleotide co'pli'entare. Ba fel se procedeaz i cu .ena,care trebuie ntrodus (se for'eaz capete lipicioase co'pli'entare capetelor plas'idei*. +ac se a'estec .ena i plas'ida ele se vor uni cu capetele lipicioase. =nzi'a li.aza va uni capetele i se va cpta 'olecula "+N inelara, care con conine .ena 'enit pentru transplantare. 'lonarea

"+N!ului reco'binat! ob obinerea cantitilor dorite de protein codificat de .ena eucariot ntrodus n plas'id. +ac n cultura =.Coli se ntroduc plas'ide reco'binate, se for'eaz bacterii reco'binate. 7n celul plas'idele se replic. :acteriile n'ulindu!se for'eaz celule, care con conin aceste plas'ide. "cu' din 'asa bacterian se poate de capatat cantitti sufuciente de "+N reco'binat. reco'binat.

)anada'entul sintezei bacteriene este i'presionabil: =%! -88 celule =.Coli produc prin clonare '. so'atostatin (cantitate, ce se obine prin prelucrarea a -88 tone de creier de bovine*. $rin te,nica en.ineriei .enetice s! au obtinut cantiti 'ari de insulinQ insulinQ (<u'ulun*, 7nterferon, vaccine. Di.ersitatea formelor 7n *imita uneia i aceai s"ecie se datorete mutaiilor i 7ntr&o msura mai mare recombinrii genetice$ #uta #utaiile" #odificrile .eno'ului or.nis'ului, care se pstreaz i se trans'it prin ereditate poart nu'ele de 'uta ii. #uta #utaiile sunt 'odificri ale infor'a infor'aiei .enetice, care se trans'it apoi de la o .enera .eneraie la alta. #odificrile pot interesa o perec,e de baze ('utatii punctifor'e* sau un .rup de baze pe una sau pe a'bele catene ale unei 'olecule de +N". #utatiile punctifor'e: pot decur.e prin: l. substitutie ('isens 'utatii, unde deosebi' 0 tipuri*: a. Tranzitie ! o :" purinic este nlocuit tot cu una purinc, una piri'idinic !tot cu una piri'idinic. b.Transversie ! o perec,e de baze purinice este nlocuit cu una piri'idinic sau invers. 0. 7nser 'ecanis' const n ntroducerea unei perec,i de baze supli'entare n catena de +N". 7nserie ! acest

-8

3. +ele +eleia const n e%cluderea unei perec,i de baze n aa 'od ca ea nu 'ai poate f co'ple'entar i la replicare apare C.olulC n a'bele catene. 4nele 'odificri n secventa nucleotidic pot duce la for'area codonului sinoni' i succesiunea a'inoacizilor nu se va sc,i'ba ('utatii beni.ne*. Ba afectarea se.'entelor 'ari de .en apar 'utatii ntinse. 7n dependent de consecin consecinele 'odific 'odificrilor deosebi' 'uta 'utaie beni.n, neutr, nociv. ".en ".enii 'uta.eni pot provoca 'uta 'utaiile spontane ct i 'uta 'utaiile induse.

--