Biologie Celulara si Histologie

Curs 2 - Diferentiere Celulara. Celule Stem

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Cuprins

Diferentiere celulara Celule stem notiuni generale Celule stem embrionare Celule stem adulte Promisiuni terapeutice legate de utilizarea celulelor stem Probleme de etica in cercetarea din domeniul celulelor stem

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Repere temporale ale cercetarii cu celule stem

1878: primele tentative de fertilizare in vitro a ovulelor mamaliene 1959: primele comunicari legate nasterea unor animale (iepuri) in urma fertilizarii in vitro in S!" anii 1960: studiile asupra teratocarcinoamelor au stabilit originea embrionara a celulelor acestor tumori 1968: prim fertilizare in vitro a unui ovul uman (#d$ards and %avister) 1978: se naste primul copil in urma fertilizarii in vitro in "nglia (ulterior: &'() "ustralia &'(& - S!") 1981: stabilirea primei culturi de celule stem embrionare de soarece (#vans * +aufman si ,artin) urmatorii 2) de ani cercetarile au fost focalizate asupra dezvoltarii de culturi stabile si non-teratogene de celule stem embrionare si asupra identificarii factorilor de diferentiere anii 2000 apar in plus comunicari legate de transdiferentiere si plasticitate

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Diferentiere celulara

#volutia unui organism de la stadiul de ovul fecundat (zigot) la maturitate presupune parcurgerea mai multor stadii de diviziune si specializare celulara

Procesul de diferentiere celulara

Cele mai specializate celule isi pierd capacitatea de reproducere (diviziune)

#-: .ematiile neuronii

.ttp://stemcells.ni..gov/info/scireport/c.apter&.asp

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Diferentiere celulara

.ttp://bcs.$.freeman.com/t.elife$ire

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Diferentiere celulara
Clasificare a celulelor, in functie de potentialul de diferentiere
Clasificare in functie de potentialul de diferentiere 0otipotente Pluripotente Numarul tipurilor de celule in care se pot diferentia toate 0oate cu e-ceptia celulelor din membrana embrionara !n numar mare !n numar mic 5 6 2 & 8ici un tip !emple de celule stem "ipuri de celule re#ultate in urma diferentierii 0oate tipurile celulare Celulele provenite din toate cele trei straturi celulare embrionare

1igotul blastomerele Culturi de celule stem embrionare (#S) umane

,ultipotente 2ligopotente 4uadripotente 0ripotente %ipotente !nipotente 8ullipotente

Celulele .ematopoietice Precursorii mieloizi Celule progenitoare mezenc.imale Precursori gliali Precursori bipotentiali din ficatul fetal murin Precursori mastocitari Celule diferentiate terminal (e-: eritrocite)

Celule sc.eletale cardiace .epatice toate tipurile de celule sangvine 3 tipuri de celule sangvine (monocite macrofage eozinofile neutrofile eritrocite) Celule cartilaginoase celule adipoase celule stromale celule osteogenetice (osteoblasti) 2 tipuri de astrocite oligodendrocite 7imfocite % macrofage mastocite 8u se mai divid

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Celule stem notiuni generale

Ce sunt celulele stem9

Celule nespecializate (nediferentiate) cu 2 proprietati fundamentale:

1$Capacitatea de a se diferentia in celule de tipuri diferite 2$Capacitatea de autoregenerare (autoreproducere) pe o perioada foarte lunga

:erar.izare a celulelor stem (dpdv al capacitatii de diferentiere)

1:;20 (totipotent) C#7. S0#, #,%<:28"<# (pluripotente) C#7. D:8 S0<"0!<:7# ;#<,:8"7# endo/mezo/ectoderm (multipotente) C#7. S0#, D# 7:8:# (oligopotente) C#7!7# S0#, D#0#<,:8"0# 0:S!7"< (tri- sau bipotente) C#7!7# 0#<,:8"7# (nulipotente)

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Ce induce diferentierea celulelor stem9

Stimuli interni

%aga=ul genetic al celulei respective

Stimuli e!terni

>actori de contact Semnale intercelulare (molecule secretate de celule invecinate) >actori prezenti in mediul e-tracelular

Probleme actuale de studiu:

%dentificarea unor seturi de factori care determina diferentierea unei celule stem intr-o anumita directie sau alta >enomene de plasticitate a celulelor stem

Celule stem ale unei anumite linii se pot diferentia in celule adulte ale cu altei linii celulare (e-: celula stem .ematopoietica se poate diferentia in celula musculara cardiaca etc)

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Polarizarea celulara

.ttp://bcs.$.freeman.com/t.elife$ire

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

0ipuri de celule stem

Celule stem em&rionare

Celule stem provenite din embrioni (stadiul de blastocist)

Celule stem adulte (somatice)

Sunt celule nediferentiate intalnite printre celulele diferentiate ale unui organism adult 2riginea lor nu este cunoscuta (?) <ol in reparatiile tisulare
.ttp://stemcells.ni..gov

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Celulele stem embrionare

.ttp://bcs.$.freeman.com/t.elife$ire

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Celulele stem embrionare

Cultivate dupa recoltare in vase placate cu fibroblasti murini (A feeder cellsB asigura aderenta la substratB sursa de nutrienti) in prezenta de ser bovin fetal ,etode moderne: adaugarea la mediu cu %>S a '%( (leuCemia in.ibiting factor) permite proliferarea in absenta celulelor feederB utilizarea de matrici proteice preconditionate prin cresterea de fibroblasti Diferentierea depinde C<:0:C de factorii de mediu prezenti
.ttp://stemcells.ni..gov/staticresources/images/figure&@lg.=pg

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Diferentierea celulelor stem embrionare

Rezultate publicate

"dipocite "strocite Cardiomiocite Condrocite Celule .ematopoietice Celule dendritice Celule endoteliale

+eratinocite Precursori limfoizi ,astocite 8euroni 2ligodendrocite Celule insulare pancreatice ,usc.i neted ,usc.i striat

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Celulele stem adulte

Cele mai vec.i cunoscute celulele stem din maduva osoasa .ematogenaB 2 populatii:
&. Celulele stem .ematopoietice

;enereaza toate liniile de celule sangvine ;enereaza celule osoase cartilaginoase adipoase tesut con=unctiv fibros

2. Celulele stromale (mezenc.imale)

Celule stem tisulare descoperite in ultimii ani in foarte multe tesuturi

2rigine necunoscuta Stare dormantaB devin active atunci cand este nevoie de reparatii tisulare Piele vase de sange sange periferic ficat creier (?)

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Diferentierea celulelor stem din maduva osoasa

.ttp://stemcells.ni..gov/Static<esources/images/figure2@lg.=pg

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

:ntrebari-c.eie referitoare la celulele stem adulte

Cate tipuri de celule-stem adulte e-ista si in ce fel de tesuturi9 Care este provenienta celulelor-stem adulte9 adulte

eorie neconfirmata ramasite de celule embrionare

De ce raman in stare nediferentiata cand toate celulele din =ur s-au diferentiat9 #-ista plasticitate si transdiferentiere si in vivo sau doar in vitro9 Ce semnale controleaza plasticitatea9 #ste posibila manipularea celulelor stem adulte pentru a le accelera proliferarea (pentru a fi suficiente in ideea unor transplanturi tisulare)9

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Celule stem embrionare vs. celule stem adulte

C#7!7# S0#, #,%<:28"<# C#7!7# S0#, "D!70#

Se pot diferentia in orice fel de celula

Se pot diferentia intr-un numar limitat de tipuri de celule <are in tesuturi mai dificil de cultivat in vitro >ara reactii de respingere daca se recolteaza celule stem adulte de la aceeasi persoana la care urmeaza sa fie implantate dupa diferentiere (/transdiferentiere/plasticitate)

<elativ de usor de cultivatB numar practic infinit de diviziuni 0eoretic pot e-ista reactii de respingere a implantului de celule stem embrionare

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

Plasticitate si transdiferentiere

Conceptia clasica

Celulele stem se pot diferentia e-clusiv Din avalE (e-: o celula precursoare .ematopoietica nu se poate transforma intr-o celula nervoasa etc) %N(%R)*"* ++++

Cercetarile recente (ultimii ani) au demonstrat e-istenta fenomenelor de:

"ransdiferentiere transformarea directa a unui tip de celula diferentiata in alt tip de celula diferentiata (e!" celula pancreatica in celula #epatica) ,lasticitate posibilitatea celulelor stem adulte de a isi e-tinde DdomeniulE de diferentiere la celule de alt tip (e!" din celula stem #ematogena se pot forma celule musculare)
Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Plasticitatea celulelor stem adulte

.ttp://stemcells.ni..gov/Static<esources/images/figure6@lg.=pg

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

,etode de preparare a celulelor stem pluripotente

.ttp://stemcells.ni..gov/

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

,otentialul de utili#are al celulelor stem

!tilizarea celulelor stem embrionare /adulte in vederea reparatiilor tisulare Studiul etapelor precoce ale diferentierii unui zigot uman in vederea identificarii factorilor implicati si eventual gasirii de tratamente ale malformatiilor congenitale "estare medicamente "estarea efectelor unor to!ine %nginerie genetica

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

-&iecti.e in de#.oltarea transplantelor de celule stem em&rionare

.ttp://stemcells.ni..gov/info/scireport/c.apter6.asp

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

/tili#area celulelor stem pentru reparatii tisulare

Utilizarile celulelor stem hematopoietice

0urse de celule stem .ematopoietice:

)adu.a osoasa adulta sursa clasica de celule stem .ematopoietice 0angele periferic te.nica modernaB recoltarea se face dupa stimulare prealabila a
maduvei osoase cu o citoCina care duce la cresterea numarului de celule imature din circulatia generalaB sangele este trecut printr-un filtru special care opreste celulele care poseda marCeri de suprafata caracteristici celulelor stem

Cordonul om&ilical deocamdata nu e-ista studii concludente care sa ateste

superioritatea transplantelor de celule stem din cordonul ombilical fata de cele din maduva osoasa sau sangele periferic (eficacitate similara)

0istemul 1ematopoietic fetal Celule stem em&rionare (diferentiere controlata)

:n stadii incipiente de cercetare

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

/tili#area celulelor stem pentru reparatii tisulare

Utilizarile celulelor stem hematopoietice

Boli care pot fi tratate cu a=utorul celulelor stem .ematopoietice:

7eucemii limfoame tratament intrat in uz de mai mult de 2) de ani %oli de sange ereditare ca tratament de ultima linie

"nemie aplastica anemie sicCle-cell etc Sindroame metabolice

<efacerea maduvei osoase dupa un tratament c.imioterapic si radioterapic pentru cancer transplant autolog (celulele sunt recoltate de la pacient inainte de tratament
stocate readministrate dupa inc.eierea tratamentului)

0ratamentul cancerului prin metoda graft-versus-tumor In studiu utilizarea in cazul bolilor autoimune:

7upus eritematos sistemic Poliartrita reumatoida

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

/tili#area celulelor stem pentru reparatii tisulare

Tratamentul diabetului zaharat cu ajutorul celulelor stem

Ce este diabetul za.arat9

!n grup (?) de boli caracterizat prin scaderea productiei de insulina (Formon pancreatic) din corp

Pancreasul glanda e!ocrina si endocrina

Celule ductale captusesc canalele de e-cretie Celule acinare secreta enzime digestive eliberate in tubul digestiv (duoden) Celule insulare (insulele 7anger.ans) celule endocrine secreta insulina (celule beta) si alti .ormoni (glucagon somatostatina polipeptid pancreatic)

.ttp://stemcells.ni..gov/info/scireport/c.apterG.asp

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

/tili#area celulelor stem pentru reparatii tisulare

Tratamentul diabetului zaharat cu ajutorul celulelor stem

Strategia terapeutica

!tilizarea de celule stem embrionare/adulte umane care prin diferentiere / transdiferentiere / plasticitate sa se transforme in celule beta pancreatice Conditii sine$%ua$non

:ntegrarea in tesutul gazda #-istenta secretiei endocrine in vivo

Stadiul actual

S-au obtinut celule beta pancreatice capabile sa secrete in vitro insulina ca raspuns la modificari ale nivelului glucozei din mediuB sursa: celule stem embrionare de soarece
.ttp://stemcells.ni..gov/info/scireport/c.apterG.asp

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

/tili#area celulelor stem pentru reparatii tisulare

Tratamentul bolilor neurologice cu ajutorul celulelor stem

%oli neurologice care pot beneficia de tratamentul cu celule stem:

%oala ParCinson

Caracterizata prin tulburari progresive de motilitate (tremor .ipertonie .ipoCinezie) urmate de deteriorare cognitiva si dementa Cauza: distructia neuronilor care secreta neurotransmitatorul Dopamina situati in substanta neagra (nucleu situat in trunc.iul cerebral)

Boala &lz#eimer Coreea Huntington Scleroza laterala amiotrofica

Degenerarea neuronilor motori maduva spinarii Se manifesta ca o paralizie flasca progresiva musculatura sc.eletica H musc.ii respiratori

7eziuni ale maduvei spinarii

Sectionarea traumatica sau de alte cauze a maduvei spinarii avand ca urmare paralizii

'eziuni cerebrale in traumatisme, accidente vasculare

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

/tili#area celulelor stem pentru reparatii tisulare

Tratamentul bolii Parkinson

0trategii: &.implantarea de celule producatoare de dopamina

Celule fetale Celule stem embrionare diferentiate in laborator

2.utilizarea de factori trofici care sa determine mobilizarea si diferentierea celulelor stem e-istente in tesutul nervos

.ttp://stemcells.ni..gov/info/scireport/c.apter(.asp

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

/tili#area celulelor stem pentru reparatii tisulare

Tratamentul bolii Parkinson
:magine de P#0 (tomografie cu emisie de pozitroni) cu dopamina marcata radioactiv a creierului unui pacient cu boala ParCinson inainte de implantul de celule stem fetale (stg) si la &2 luni dupa implant (dr)

8 #ng I ,ed 2))&B655(&)) p. G&)

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

/tili#area celulelor stem pentru reparatii tisulare

Tratamentul SLA

:n 2))& un grup de cercetatori care a utilizat sobolani carora le-a fost indusa S7" au raportat rezultate favorabile ameliorarea deficitului motor in urma transplantului de celule stem embrionare umane

()err et al *2++,-. Human embr.onic germ cell derivatives facillitate motor recover. of rats /it# diffuse motor neuron in0ur..1

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

/tili#area celulelor stem pentru reparatii tisulare

Refacerea miocardului bolnav

.ttp://stemcells.ni..gov/

Pe modele murine de infarct miocardic acut atat in2ectarea intracardiaca de celule stem adulte cat si in2ectarea intra.asculara de celule stem 1ematopoietice umane au avut un rezultat favorabil din punctul de vedere al reparatiei miocardului distrus in urma infarctului

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

/tili#area celulelor stem pentru terapie genica

.ttp://stemcells.ni..gov/info/scireport/c.apter&&.asp

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

,ro&leme de etica legate de utili#area celulelor stem

2robleme controversate"

Problemele sunt legate de utilizarea celulelor stem embrionare si nu adulte !tilizarea embrionilor avortati vs. utilizarea embrionilor rezultati in urma fecundarii in vitro insa nefolositi la inseminarea artificiala Problemele sunt strans legate de controversele legate de statutul etic legal moral al embrionilor

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem

%ibliografie suplimentara

.ttp://$$$.Joutube.com/$atc.9vAm!c#&K@b24# .ttp://bcs.$.freeman.com/t.elife$ire/ .ttp://stemcells.ni..gov/info/scireport/2))Lreport..tm .ttp://learn.genetics.uta..edu/content/tec./stemcells/

DBB Masterat Inginerie Medicala si Clinica

Biologie Celulara si Histologie 2. Diferentiere celulara. Celule stem