Universitatea de Stat de Medicina și Farmacie ,,Nicolae Testemițanu”

Biologie și modele ale Barierei

hematoencefalice
Profesor: Ambros Ala
A realizat: M2208
Moraru Ana-Maria
Cigulea Marina
Biriucov Romina
Spiridon Iana
Bucur Artiom
Verdeș Ulian
Cuprins
• Generalității
• Scurt istoric
• Structura barierei hematoencefalice
• Căi de transport
• Modele in vitro
• Organoizi cerebrali
• Modele de diferite patologii
• Concluzie
• Bibliiografie
Definiție
• Bariera hemato-encefalică (BBB) este una dintre cele
mai selective bariere endoteliale. O înțelegere a
proprietăților sale celulare, morfologice și biologice în
sănătate și boală este necesară pentru a dezvolta terapii
care pot fi transportate de la sânge la creier.
• Pentru a facilita transportul selectiv, BBB se bazează pe
transcitoză- transportul mediat de receptor activ al
moleculelor specifice prin celulele endoteliale.

• Aceasta protejează țesutul neural de toxinele din sânge si

limitează trecerea medicamentelor
O scurtă istorie a barierei
hematoencefalice
• Dezvoltarea și funcționarea creierului necesită un BBB eficient, o interfață strânsă
și selectivă între circulația sângelui și parenchimul cerebral.
• În 1921, Lina Stern și Raymond Gautier (1) au numit oficial structura biologică
observată de Paul Ehrlich, Edwin Goldmann și Max.
• In 1901 „la barrière hémato-encéphalique”.
• Folosind albastru de tripan și ferocianura de potasiu, Goldmann a descoperit că
compartimentul de sânge este separat ermetic de țesutul cerebral printr-o barieră-
capabilă să împiedice trecerea nutrienților sau a medicamentelor.
• Mai târziu, Hugo Spatz (3) a observat prezența celulelor endoteliale nefenestrate
responsabile de proprietățile interfeței sânge-țesut.
• 1967 de către Reese & Karnovsky au observat, a acumulărea peroxidazei de
hrean exclusiv în lumenele capilarelor cerebrale – astfel au determinat proprietatile
unice de bariera a BBB.
Celulele primare
• Pot fi ușor izolate din biopsii animale sau umane și cultivate in vitro.
• Celulele primare umane prezintă în mod paradoxal valori TEER scăzute, de
obicei sub 100/cm2
• Dezavantaje majore ale celulelor primare umane sunt că își pierd adesea
proprietățile BBB prin trecerea celulei și eterogenitatea sursei reduce
semnificativ reproductibilitatea experimentelor.
• Celulele endoteliale ale venei ombilicale umane (HUVEC) au fost crescute
în cocultură cu pericite, astrocite și chiar neuroni. În aceste condiții,
expresia markerilor cheie BBB, cum ar fi ZO-1 și VEcaderina, este adesea
suprareglată. HUVEC generează canale stabile sau rețele vasculare.
• Celulele endoteliale își modifică fenotipul în funcție de condițiile lor de
cocultură și de celulele stromale folosite în model.
Celulele imortalizate
• Își păstrează proprietățile după trecerea celulelor și sunt identici genetic
unul cu celălalt, îmbunătățind astfel reproductibilitatea în modelele BBB.
• Liniile celulare prezintă în general proprietăți slabe BBB și funcție de
barieră și pot să nu fie potrivite pentru studiile de transport molecular.
• Liniile de celule BBB de rozătoare își pierd caracteristicile in vivo, cum ar fi
expresia GLUT-1.
• Diferite linii celulare ar putea fi optime, în funcție de aplicarea studiului.
• Din cauza TJ scăzut sau nivelurile de expresie TR, liniile celulare
imortalizate nu sunt capabile să creeze un strat celular strâns și pot să nu
fie relevante pentru modelarea generală a BBB, ci doar pentru studii
specifice, cum ar fi absorbția medicamentelor sau transmigrarea
patogenului în BBB.
Celulele embrionare și mezenchimale
• Celule stem pluripotente (PSC) cu capacitatea de a se diferenția în toate tipurile de
celule.
• ESC-urile de la blastocist pot fi folosite pentru a recapitula dezvoltarea embrionară
a celulelor endoteliale microvasculare cerebrale (BMECs) și au fost generate mai
multe protocoale de diferențiere a embrionilor în acest scop.
• Protocoalele de diferențiere embrionară 3D permit diferențierea directă în cele trei
straturi embrionare.
• Pot fi utilizate diferite tipuri de linii ESC umane, în funcție de expresia proteinei
dorită a celulelor diferențiate rezultate. De exemplu, H1 și H9 sunt utilizați pentru
exprimarea PECAM-1 iar HES3 și HES4 sunt folosiți pentru exprimarea VE-caderinei.
• Weidenfeller et al. au demonstrat că celulele progenitoare neuronale
nediferențiate nu exprimă proprietăți BBB, dar celulele diferențiate o fac.
• În plus față de ESC, MSC, care dau naștere țesutului conjunctiv embrionar, pot
îmbunătăți stabilizarea modelelor BBB rezultate.
Celulele stem pluripotente induse

• iPSC-urile au avantajul considerabil că pot, în principiu, să producă toate celulele care

compun un organ, menținând în același timp consistența genetică între toate celulele
diferențiate, permițând astfel generarea unui model BBB specific pacientului.
• Ele prezintă proprietăți de barieră excelente, cu o expresie puternică a markerilor
BBB, cum ar fi ZO-1, claudin-5 și ocludină, precum și a markerilor de activitate
celulară, cum ar fi GLUT-1 și P-glicoproteina.
• Ele au adesea o durată de viață limitată in vitro, iar procesele care variază de la
dediferențiere la rediferențiere sunt complexe, consumatoare de timp și foarte
sensibile la condițiile experimentale.
• Astfel de modele nu trebuie să se concentreze numai pe inducerea BMEC, ci pot
include toate componentele relevante ale NVU.
• iPSC-urile sunt folosite pentru a construi modele complexe de BBB care includ diferite
tipuri de celule cu un genom comun.
• iPSC-urile au un potențial tumorigen și teratogen neneglijabil.
Embriogeneza barierei
hematoencefalice

Vascularizația creierului

Proprietățile de barieră sunt dobândite

prin calea canonică de semnalizare Wingless–Int1
(Wnt)/β-catenină

Dobândirea unui fenotip BBB complet

Proteine de suprafață joncțională

1.TJ-uri care conectează membranele plasmatice ale

celulelor și reglează transportul paracelular

AJ-uri care unesc filamentele de actină ale celulelor

învecinate și stabilizează TJ-uri

TR-uri care guvernează transferul transcelular peste barieră

 Modele transcelulare de transport
• Caracteristic pentru moleculele mici : ionii,
gazele si moleculelel lipofile
• Traversează pasiv BBB prin difuzie bistratul
Difuzia pasiva lipidic și citosolul celulelor endoteliale
• Memebranele au permeabilitate

• Se bazează pe transportul ABC dependent de

energie prin anumite pompe de eflux
Eflux activ al (colesterolul, acizii graşi).
transportorul • Pentru substanţele lipofile care nu pot traversa
ui ABC membranele lipofile (glicoproteina P).
 Modele transcelulare de transport

• Se pot lega activ și transportă substanțele dizolvate.

• Exprimați de celulele endoteliale si BBB proteine.
Transport purtător de
substanță dizolvată
activă

• Specific pentru moleculele mari care nu pot trece

Transcitoză prin membrană.
activă • Receptorii de molecule se leaga de suprafață
mediată de formeaza caveole si exocitaza prin polul opus al
receptor celulei.
Dezvoltarea vasculaturii SNC
• angioblastele derivate din mezoderm
invadează regiunea capului și se unesc pentru
Vasculogeneza a forma plexul vascular perineural.

• interacțiuni între germenii vasculari și celulele

precursoare neuronale
• formarea angiogenă a mugurilor de vase prin
Faza secreția factorului de creștere a endoteliului
angiogena vascular (VEGF)
Celulele perivasculare

• se înfășoară complet în jurul capilarelor

creierului formate din celule endoteliale
Pericitele • permit exprimarea și organizarea mai
multor proteine TJ și receptori cheie de
transport (TR), și participă la secreția
membranei bazale din jurul capilarelor BBB

• - își conectează fizic picioarele terminale

de partea abluminală a vasului - ajută la
Astrocitele rafinarea fenotipului BBB si mențin, de
asemenea, homeostazia între sânge și
țesutul cerebra
 Transportul prin BBB are doua căi

• molecule mici 70 kDa transportul prin

Paracelular BB este impiedicat de unii factori insa
pot influenta transportul

• aceste transport este crucial

Transcelula demonstrat de experimente, rezolutia

r limitata a impiedicat capacitatea de a

discerne clar transpotul transcelular
de cel paracelular la niveșul creierului
Căi de semnalizare

 Căile Delta/Notch

Neuregulin/ErbB

 Calea β a receptorului
PDGF-B/PDGF pentru
pericite
Alegerea celulei sursă

• Cheia dezvoltării modelelor

BBB in vitro.

• Celulele endoteliale BBB

au diferențe morfologice și
funcționale critice față de
alte celule.

• Posedă joncțiuni celulă-celulă

mai strânse, sunt foarte
polarizate și, prezintă valori mai
mici ale permeabilității.
Unitatea neurovasculară (NVU)
- capilarele BBB
- neuroni polarizați - reglează fluxul sanguin proporțional cu activitatea
lor prin angajarea astrocitelor sau pot fi în detrimentul integrității
BBB, deoarece pot activa astrocitele și pot perturba bariera
- celule de susținere găsite în stroma creierului, cum ar fi microglia,
macrofagele rezidente ale SNC și alte celule gliale - implică
transmiterea de informații pentru neuroni și apărarea imună pentru
microglia, aceste două tipuri de celule joacă un rol neneglijabil în
homeostazie
Modele in vivo
Cunostințele cu privire la proteine BBB au provenit de la
animale, au oferit o perspectivă extraordinară asupra
fiziologiei țesutului cerebral, în special în contextul modelării
bolii.
Avantajul clar al acestor modele este relevanța lor fiziologică,
incluzând nu numai toate structurile care formează BBB, ci și
efectele fluxului sanguin sau mediatorii biochimici ai funcției.
Diferențele genetice, moleculare și imunologice care stau la
baza dintre BBB-urile umane și animale au limitat utilizarea
modelelor in vivo ca platforme eficiente pentru dezvoltarea
terapeutică.
 Mai multe caracteristici morfologice ale BBB informează proprietățile sale
funcționale, guvernând în cele din urmă transportul controlat de nutrienți, molecule
și terapii de la sânge la creier
Caracteristicile barierei hematoencefalic

• Hemodinamica

• Gradientul de presiune intravasculară dintre arteriolele capilare pre-BBB și venulele

postcapilare este regulatorul primar al fluxului luminal BBB.

• Dilatarea arteriolelor de rezistență crește acest gradient de presiune -> crescând

astfel fluxul capilar BBB
• Vasodilatația arteriolară și creșterea fluxului sanguine este cauzată datorită
abundenței caveolelor
• Funcționalitatea
• Reglarea în sus a mai multor TJ, joncțiunii aderente (AJ) și TR la nivelul BBB
guvernează dependența acesteia de moduri selective de transport și informează
endoteliul restricționat
 Modele in vitro
Creșterile treptare ale complexității și funcționalătății modelelor BBB in vitro
au permis generarea de platforme sophisticate inclusiv celule care pot fi
stimulate dinamic, precum și prezența hidrogelurilor pentru a imita matricea
extracelulară a creierului 3D. Astfel clasificăm sistemele ca 2D sau 3D.

Inițial celulele au fost cultivate

în 2 dimensiuniprin utilizarea
unui singur tip de celulă pentru
a imita BBB.
 Modelele
statice 2D
În modelele 2D, celulele sunt cultivate pe plastic dur
sau inserții Transwell fără aplicarea curgerii.

Cultivarea celulelor de plastic oferă mai multe avantaje

în ceea ce privește ușurința imaginiii și controlul
mediului, precum și prezența mai multor protocoale
standard.

Cu toate acestea, materialele plastice dure nu

recapitulează interfața dintre compartimentele
parenchimatoase vasculare și cerebrale, aspectul major al
BBB, limitând astfel utilizarea acestor modele pentru a
evalua funcționalitatea BBB prin studii metabolice, de
difuzie sau permeabilitate.
Modelele 2D-pe-un-cip
Prin intermediul acestor modele este
facilitatăinteracțiunea celulă-celulă,
aplicarea fluxului de fluid și a
tensiunilor de forfecare controlate și
citiri în timp real.

BBBoC-urile sunt un instrument

puternic pentru studierea fiziologiei
BBB în ceea ce privește expresia
proteinelor membranare (TJs, AJs și
TRs) sau interacțiunile celulă-celulă,
cum ar fi formarea picioarelor
terminale astrocitelor (100).
 Modelele 3D
Acestea pot imita mai bine
arhitectura și funcția BBB, oferind
În comparație cu sistemele
în același timp o relevanță 2D, capacitatea modelelor
fiziologică mai mare. Au fost de creier 3D de a
propuse mai multe platforme recapitula hemodinamica
pentru a genera modele de creier BBB fiziologică este
asemănătoare omului, în special primordială în funcția
prin utilizarea hidrogelurilor
biocompatibile, a unor tipuri de
barierei.
celule relevante și a tehnicilor
care provin din procesul de
embriogeneză.
 Modele
imprimate 3D

Aceste biocerneluri integrează celule

precum neuronii, astrocitele,
HUVEC sau celulele de glioblastom

Imprimarea 3D sau fabricarea aditivă

constă în producția strat cu strat a unui
fișier de proiectare asistată de computer.

Your Picture Here

Pentru a imprima modele de organe, hidrogelurile sunt adesea

folosite ca biocerneluri, care sunt rețele de molecule polimerice
și hidrofile, cum ar fi derivații de gelatină (colagen), precum
gelatina metacriloil (120), acidul hialuronic sau alginatul (121).
Organoizi cerebrali și barierea hematoencefalică
Modele pentru boala Alzheimer
Modele de accident vascular cerebral
Modele de cancer cerebral

In alt studiu folosind o platformă microfluidică de

S-a dezvoltat o cocultură,model de celule gliom cu
mare capacitate cu celule endoteliale ale creierului
HUVEC și fibroblaste pulmonare în gelatină și acid
și astrocite în colagen, au descoperit că celulele
hialuronic și sa observat că adăugarea de elemente
tumorale pulmonare și mamare prezintă o
celulare și matriceale a dus la o scădere a
transmigrare mai mare potențial în comparație cu
răspunsului de celulele gliomului la medicamente.
melanomul și celulele canceroase hepatice.

S-a conceput un model 3D in vitro pe termen lung

de sferoide tumorale de glioblastom înconjurate de
canale de gelatină HUVEC bioimprimate de studiat
livrarea medicamentelor în timp. Deși aceste
modele sunt utile pentru screening-ul pentru
toxicitatea terapeutică,utilizarea de HUVEC sau
fibroblaste pulmonare nu recapitulează complet
tipurile de celule găsite în creier și arhitectura 3D a
acestor sisteme ar putea fi îmbunătățită pentru a
reproduce vascularizația BBB în vivo în contact cu
tumorile
 Două mecanisme generale sunt
Modele de boli infecțioase considerate a fi responsabile pentru
transportul lor

creșterea
transportul activ
permeabilității
prin intermediul
barierei în urma
receptorilor.
infecției

Bolile infecțioase cunoscute că vizează BBB includ boala cu virus Zika, malaria,și, mai recent, boala
coronavirus 2019 (COVID-19),

• Utilizarea datelor pacienților a arătat că SARS-CoV-2, virusul care provoacă COVID-19,folosește unitatea
S1 a proteinei sale pentru a se atașa de receptorul 2 al enzimei de conversie a angiotensinei pe celulele și
infectează pacientul

S-au folosit celule endoteliale ale creierului primar pentru a inginer modele 2D și 3D BBB care arată că
proteina spike crește inflamația, bariera permeabilitatea la dextran și expresia moleculelor de adeziune pe
celulele endoteliale ale creierului, sugerând activarea celulară și descompunerea BBB.
Modele în vitro
Se știe că mai multe alte boli
neurologice afectează
predominant BBB Deși nu sunt
discutate pe larg în această
revizuire, acestea includ
tulburări neurodegenerative, cum
ar fi boala Parkinson și
Huntington, precum și epilepsia
și tulburările mintale, cum ar fi
schizofrenia, depresia clinică și
tulburarea de anxietate.
S-a conceput un model 2D in
vitro al bolii Huntington
Modele animale in vivo, deși
utilizând celule endoteliale
utile de înțeles profilurile
derivate din iPSC ale
genetice și fenotipice ale acestor
pacientului. Ei au descoperit
boli, adesea eșuează în
deficite BBB în ceea ce privește
traducerea lor în sens rezultate
semnalizarea angiogenică,
clinice
expresia proteinei transcitoză și
permeabilitatea barierei generale
Concluzie
În calitate de gardian al creierului, BBB a atras un interes extraordinar pentru rolul său
în sănătate și boală. Acest lucru necesită proiectarea unor modele umane relevante in
vitro care recapitulează proprietățile sale morfologice și funcționale cheie.

În ciuda progreselor recente semnificative în abilitate pentru a crea noi sisteme in vitro,
rămân provocări majore, cum ar fi încorporarea tuturor celor relevante tipuri de celule
ale BBB, utilizând un hidrogel 3D adecvat pentru a recapitula ECM a creierului și
realizarea vascularizației in vitro pentru transportul peste această barieră, în special
pentru terapii în contextul bolilor neurologice.

Eforturile și progresele viitoare în vascularizarea organoizi cerebrali care încorporează

toate celulele BBB relevante într-o matrice asemănătoare creierului vor fi cu siguranță
oferiți platforme care pot recapitula cu acuratețe BBB uman.

Mai important, există necesitatea de a îmbunătăți în continuare tehnicile de măsurare a

permeabilității pentru a surprinde schimbările în integritatea barierei în sănătate și
boală.
Bibliografie

file:///C:/Users/User/Documents/Blood
%E2%80%93Brain_Barrier_M2208-27743%202.pdf

https://www.google.com/search?
q=hutingot&tbm=isch&ved=2ahUKEwjf3Kf64sz7AhXPt6QKHebqAVYQ2-
cCegQIABAA&oq=hutingot&gs_lcp=CgNpbWcQAzIJCAAQgAQQChAYOgUIABCABDoIC
AAQgAQQsQM6BAgAEEM6BwgAEIAEEBNQvQpYvhtg_xxoAHAAeAGAAYgNiAHTJ5IBET
AuMS4yLjEuMC4xLjEuMS4xmAEAoAEBqgELZ3dzLXdpei1pbWfAAQE&sclient=img&ei
=u4KCY58Tz--
SBebVh7AF&bih=754&biw=1536&rlz=1C1SQJL_enMD917MD917&hl=ro#imgrc=LFCu
enHA2UoroM