Metodapatch-clampin

studiulbiofizic
alcanalelorionice

Lacatusu Alexandra
MG seria D grupa 25

Cuprins
1.Ce

este patch clamp?

2.Ce presupune patch clamp?
3. Inregistrarea curentilor electrici
4.Variatii ale tehnicii patch clamp

 Ceestepatchclamp?

Este o tehnic ce permite nregistrarea comportamentului

electric (potenial de membran, fluxuri de Na, K, Cl, Ca)
n celule ntregi sau n fragmente mici de membran
(patch petic). Aceast metod electrofiziologic foarte
sensibil, ai crei descoperitori au fost rspltii cu premiul
Nobel n 1991, a devenit un standard n laboratoare din
ntreaga lume. Aceast metod, care permite observarea
funcionrii n timp real a unei singure molecule proteice
din membrana

Erwin Neher

Bert
Sakmann

Tehnica

permite masurarea directa a

permeabilitatii, selectivitatii si a voltajului
canalelor ionice la nivel molecular, aratand
astfel un potential imens in cercetarea
neurostiintelor si electrofiziologie

 Cepresupunetehnicapatch-clamp?
Tehnica

patch-clamp implic ataarea vrfului

unei pipete de sticl (diametrul interior este de
ordinul micronilor) de membrana unei celule. n
condiii ideale, o uoar aspirare prin pipet duce
la formarea ntre marginea vrfului pipetei i
membrana celular a unei legturi foarte strnse.

Controlat

prin pulsuri
electrice, aceast
legtur se dovedete a
avea o rezisten de
ordinul a 109 ohmi
(gigaohmi). Dac pipeta
este racordat la un
amplificator
corespunztor, se pot
nregistra curenii electrici
generai de fluxurile
ionice transmembranare
prin bucica de
membran fixat pe
vrful micropipetei.

Inregistrareacurentilorelectrici
Curenii

electrici generai
de fluxurile ionice transmembranare prin
bucica de membran fixat pe vrful
micropipeteisunt reprezentate de pulsuri
rectangulare de curent
care reflect deschiderea i nchiderea canalelor
unice. n forma lor cea mai simpl, pulsurile de
curent apar neregulat, cu amplitudini aproape
identice dar de durate diferite.

 Variatiialetehnicii
In functie de ceea ce

vrea
cercetatorul sa studieze se pot
aplica cateva variatii ale tehnicii de
baza.
*Oncell-patch- Aceasta tehnica
presupune sigilarea electodului
pe membrana, astfel
membrana ramanand intacta
*Inside-outpatch-Tehnica consta
in retragerea pipetei care se afla in
configuratia on-cell, formandu-se
astfel o mica vezicula ce ramane
atasata
*Wholecell-patch-Inregistrarile
intregii
celule implica inregistrarea curentilor
prin mai multe canale ionice deodata

*Outide-out patch-Aceasta

metoda este optima pentru a

studia cum activitatea
canalelor este influentata de
semnalele chimice
extracelulare
*Perforated patch-Solutia
contine mici cantitati de
antifungic sau antibiotic
*Loose patch-implica un sigiliu
lejer si nu unul strans ce este
folosit in tehnicile
conventionale

In

concluzie, tehnica de patch-clamp ne

permite sa masuram amplitudinea
curentilor printr-un singur canal i
comportamentul cinetic al canalelor,
permite observarea functionarii in timp
real a unei singure molecule proteice din
membrana