Electroforeza

Electroforeza (sau ionoforeza), reprezint migrarea particulelor ionice dintr-o soluie, spre
electrozi, sub aciunea unui cmp electric, putndu-se produce n diferite sisteme disperse:
sisteme solid lichid (suspensii sau soluii coloidale), sisteme lichid lichid (emulsii), sau
sisteme disperse lichid gaz. n acest sens, tehnicile de electroforez pot evolua n mediu liber
(frontale), sau n mediu stabilizant (zonale), deosebind: electroforeza capilar zonal (CZE),
electroforeza capilar pe gel (CGE), electroforeza cromatografic micelar (MEKC), respectiv
electrocromatografie capilar (CEC).

Figura 1. Tipuri de electroforeze

Dei electroforeza reprezint o tehnic de separare relativ recent (primul brevet n legtur
cu asemenea procedee fiind depus n 1987), este suficient de mult folosit deja pentru a o accepta
ntre tehnicile electrice clasice destinate mediului, fiind bine adaptat pentru dozarea, eventual
automat, a poluanilor din soluii sau a proteinelor din plasma sangvin, n competiie oarecum
cu procedele de cromatografie, dar i pentru electroremedierea solurilor poluate. Deplasarea
particulelor ionizate se realizeaz, n varianta clasic, dar separarea particulelor, n vederea
dozrii poluanilor, are loc ntr-un tub capilar umplut cu un electrolit. Perfecionri ale acestor

principii, au permis att separarea speciilor ionizate (cationic mai rapid i anioni mai lent), dar i
separarea moleculelor neutre, pe seama unor agregate coloidale introduse n electrolit.
Schema de principiu a unui aparat de dozare a poluanilor ce folosete fenomenul de
electroforez capilar asta dat n figura alturat.

Tub capilar
Msurare
E2

E1
C1

C2

Figura 2. Schema de principiu a dozrii poluanilor din soluii prin electroforez capilar
Se observ cele dou rezervoare de electrolit, n care sunt plasai doi electrozi metalici, E1
i E2, catod respectiv anod n raport cu sursa de nalt tensiune, sugerat n desen prin (+) i (-),
ce asigur injecia prin aplicarea unui cmp electric de (500-2000) [V/cm] timp de cteva
secunde. Separarea compuilor implic utilizarea unui cmp electric de circa 3000 [V/cm].
Realizri moderne corecteaz neajunsuri legate de producerea de gaz la electrozi prin folosirea
unui electrod suplimenatar de nalt tensiune. Electrozii sunt de obicei din Ag, convenabil
amplasai astfel nct efecte parazite de tip electroliz, s nu perturbe msurtorile. Configuraia
indicat mai sus se refer la analiza anionilor, astfel nct injecia soluiei de examinat se
realizeaz la catod, iar detecia se efectueaz la anod. Acest sens este invers n cazul analizei
cationilor, numit uneori i alimentare pozitiv. Electroliii utilizai acoper un interval de
valori ale pH-ului de 1-13 uniti, anumii aditivi putnd ajuta pentru a obine informaii
suplimentare pe seama unor efecte secundare.
Cele dou rezervoare de electrolit sunt legate printr-un tub capilar din silice topit,
impregnat cu o poliamid, avnd lungimea de (30-100) [cm] i diametrul interior de (50-200)
[m].

Interiorul tubului capilar poate fi neprelucrat sau constituit dintr-un gel, fiind umplut cu
acelai electrolit ca i cele dou rezervoare, cu o diferen de potenial de (10-30) [kV] aplicat
ntre cei doi electrozi pe seama sursei de alimentare. Realizri moderne corecteaz neajunsuri
legate de producerea de gaz la electrozi, prin folosirea unui electrod suplimenatar, de nalt
tensiune
Injectarea eantionului de analizat se poate realiza pe cale hidrostatic (prin ridicarea
rezervorului), cnd cantitatea de soluie introdus este funcie de timpul de injectare i de
diametrul interior al tubului capilar, prin aspirare a soluiei n tubul capilar, sau prin
electromigrare, cu aplicarea la nivelul tubului capilar a unei diferene de potenial de (5-10) [kV],
timp de cteva secunde, cnd ns injecia nu este reprezentativ pentru soluia considerat.
Valoarea cmpului electric, aplicat timp de cteva secunde, este de (500-2000) [V/cm]. Separarea
compuilor implic utilizarea unui cmp electric de circa 3000 [V/cm]. Volumul de soluie
injectat pentru electroforez este redus. Temperatura la care se realizeaz electroforeza este de
4C, la care densitatea soluiilor este maxim, apelndu-se eventual la termostatare.
Detectarea speciilor folosete spectrometria de absorbie n UV/vizibil, conductometria
sau fluorescena, apelnd la elemente sensibile plasate pe tubul capilar (fig. 1).
Deplasarea particulelor n electroforez decurge principial conform celor prezentate mai
jos. Substanele n stare coloidal posed un nucleu insolubil, cu un anumit grad de dispersie,
care intr n aciune cu ionii electrolitului, aflai n faz lichid i care se mic mpreun cu
stratul adsorbit. Complexul format de nucleu i de stratul adsorbit se numete granul, care este
mrginit cu stratul de alunecare n modelul stratului dublu electric. Prezena cmpului electric
influeneaz micarea acestor granule.
Mecanismul de separare, n electroforeza capilar, se bazeaz pe diferena de vitez de
migrare a speciilor chimice ncrcate electric, V ef, ntr-un cmp electric de intensitate E, care se
poate evalua cu relaia :
Vef = ef E ,
unde ef este o constant, numit mobilitate electroforetic, ce depinde de sarcina electric a
speciei, q, de vscozitatea electrolitului, , i respectiv de raza efectiv (Stokes) a speciei
solvatate, r :
ef = q / ( 6 r ) .
Este evident deci c mobilitatea electroforetic depinde de tensiunea de alimentare ce
impune intensitatea cmpului electric, de sarcina i dimensiunile speciei chimice ncrcate
electric, dar i de vscozitatea electrolitului, de concentraia i pH-ul acestuia, fiinc mai mare
pentru particule de talie mic i cu sarcin electric mare. Practic timpul de migrare prin
electroforez este mai mic pentru cationi, mediu pentru particule neutre i mai mare pentru
anioni.
Pentru electrolii cu valori pH > 4 i n cazul tuburilor capilare cu diametrul interior sub
200 [m], intervine pe lng fluxul electroforetic i un flux electroosmotic, astfel nct este
posibil adaptarea procedeului pentru separarea mai rapid a cationilor, cum se ntmpl
obinuit, sau pentru separarea anionilor, ceea ce presupune adaosuri de tetraalchilamonium n
electrolitul de baz de exemplu.

Timpul de analiz a electroliilor prin electroforez capilar este de (5-15) minute, iar
cantitatea de electrolit necesar este de ordinul [nL], ceea ce face ca asemenea procedee s fie
foarte rspndite astzi n practica laboratoarelor de analize (medicale sau de mediu), dei
precizia i selectivitatea sunt mai reduse dect n cazul cromatografiei.

n tabelul urmtor sunt indicate principalele moduri de utilizare a electroforezei capilare,

precizndu-se principiul de funcionare i speciile vizate.
Mod de utilizare
Electroforeza n zona
liber
Electroforeza micelar

Principiu
Mobilitatea
electroforetic i
electroosmotic
Interaciuni
ionice/hidrofobe cu
micelii

Electroforez pe gel

Talia i sarcina speciilor

Focalizare izoelectric

Punctul izoelectric

Specii vizate
Anioni i cationi minerali i
organici, tensioactivi
Molecule neutre sau particule
ncrcate electric : pesticide,
hidrocarburi aromatice, acizi,
amine, vitamine
Macromolecule : proteine, acizi
nucleici
Peptide i proteine

Menionm faptul c electroforeza capilar pe gel cu focalizare izoelectric se aplic n

principal pentru analize n domeniile biochimiei i biologiei, sau n tehnologiile genetice, fiind
doar semnalat n acest tabel.