VALIDAREA METODELOR

UTILIZATE DE
LABORATOARELE DE
NCERCRI
Validarea reprezint confirmarea prin examinare i furnizare de dovezi
obiective c sunt ndeplinite anumite cerine specifice pentru o utilizare dat.
Validarea metodei este procesul prin care laboratorul i stabilete
caracteristicile de performan i limitele metodei i prin care identific factorii
care influenteaza aceste caracteristici precum i gradul de influena al acestor
factori i procesul prin care laboratorul verifica dac metod este adecvat scopului
pentru care va fi utilizat.
In functie de scopul validarii pot fi evaluai urmtorii parametri:
o Exactitatea grad de concordan ntre rezultatul unei msurri i o valoare
adevrat a msurandului.
o Limit de detecie limita cea mai de jos a domeniului de aplicare practic a
metodei (cea mai mic valoare, concentraie, cantitate, etc care poate fi
detectat).
o Limita minim de cuantificare cea mai mic concentraie de analizat care
poate fi determinat cu un nivel acceptabil al repetabilitii i acurateii
o Liniaritatea proprietate a metodelor de msurare ce caracterizeaz un
domeniu de concentraie.
o Repetabilitatea fidelitatea n condiii de repetabilitate
o Reproductibilitatea fidelitatea n condiii de reproductibilitate
o Robusteea sensibilitate n raport cu variaia unuia sau mai multor
parametri.
o Sensibilitate incrucisata- sensibilitate in raport cu inreferentele generate de
alti analiti;
o Selectivitate gradul n care o metod rspunde ntr-un mod unic la un analit
cerut.
Criteriile calitative de acceptare a unei metode adecvatea scopului validrii
sunt:

o Incertitudinea parametru asociat rezultatului unei msurri, care

caracterizeaz imprastierea valorilor ce, n mod rezonabil , ar putea fi
atribuite masurandului .
o Domeniu de lucru (a unei metode de analiz) interval stabilit experimental
i verificat statistic prin etalonarea procedurii, situat ntre concentraia sau
masa cea mai mic i concentraia sau masa cea mai mare.
o Deplasarea (unei metode analitice) diferena rezultatelor unei metode
rezultate n raport cu un material de referinta.
o Deviatia standard de Repetabilitatea
o Deviatia standard de Reproductibilitatea
Validarea metodelor se poate face integral sau partial. Medodele care se
valideaza integral, privind acceptabilitatea tuturor parametrilor de performanta,
sunt:
o metodele nestandardizate;
o Metodele dezvoltate in laborator;
Medodele care se valideaza partial, adica se demonstreaza acceptabilitatea
lor din punctul de vedere al adecvarii la scop, sunt:
o metodele cantitative,
o metodele noi, publicate in literatura de specialitate, recunoscute in
comunitatea stiintifica de specialitate.
Validarea metodelor de analiza este necesara: Laboratoarelor medicale,
Laboratoarelor de incercari, Laboratoarelor de incercari/etalonare ca dovada a
bunei aplicari a metodelor de analiza in conditiile proprii de laborator.
n cazul n care nu se valideaz metodele de analiza nu se poate avea
control asupra performantei laboratorului, nu exista posibilitatea de a imbunatatii
calitatea serviciilor prestate, nu exist dovezi in cazul unor reclamatii, nu se
obine/menine acreditatrea laboratorului, se pierde din eficien prin costuri
suplimentare (costurile noncalitii).
n cele ce urmeaz voi prezenta o Instruciune de lucru pentru validarea
metodelor utilizate n laboratoarele de incercari pentru analiza apa potabila,
produse alimentare si furaje.

Validarea metodelor de ncercare

INSTRUCTIUNEA PENTRU VALIDAREA METODELOR

UTILIZATE N LABORATOARELE DE INCERCARI PENTRU
ANALIZA APA POTABILA, PRODUSE ALIMENTARE SI FURAJE
1. SCOP
Prezentul document are rol de instruciune pentru validarea metodelor
n laboratoarele de incercari, n vederea satisfacerii cerinei 5.4.5. Validarea
metodelor din SR EN ISO/CEI 17025:2005.
Aceasta instructiune stabileste directii minime cu privire la modul de
validare si la parametrii de performanta care trebuie evaluati n vederea
validrii medodelor. Un laborator poate s considere ca relevani pentru
scopurile proprii si sa evalueze si alti parametri decat cei prezentati mai jos.
2. DOMENIU DE APLICARE
Acest document se aplica atat de catre laboratoarele de incercari apa
potabila, produse alimentare si furaje.
3. DOCUMENTE DE REFERIN
SR EN ISO/CEI 17025:2005 - Criterii generale pentru competena
laboratoarelor de ncercri si etalonare.
Ghidul EURACHEM - The Fitness for Purpose of Analytical
Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related
Topics
CR-01-1 Cerinte suplimentare pentru acreditarea laboratoarelor de
incercari calitatea apei
CR-01-2 Cerinte suplimentare pentru acreditarea laboratoarelor de
incercari produse alimentare si furaje
EA 4-14 Selectia si utilizarea materialelor de referinta
EA 4/16 Linii directoare privind estimarea incertitudinii in
incercarea cantitativa
EA03/04 Utilizarea incercarilor de competenta ca instrument pentru
acreditare de incercari.
Eurachem/Citac Guide GC 4 Quantifyng Uncertainty in Analitical
Measurement

Validarea metodelor de ncercare

 ILAC G 9 Linii directoare privind selectia si utilizarea materialelor

de referinta
ILAC G 24 - Guidelines for the determination of calibration intervals
of measuring instruments
SR Ghid ISO/CEI 99 - Vocabular internaional de metrologie.
Concepte fundamentale i generale i termeni asociai (VIM)
4. DEFINIII
- Validarea (SR EN ISO/CEI 17025:2005) - confirmarea prin examinare si
furnizarea de dovezi obiective ca sunt indeplinite cerintele pentru utilizarea
intentionala.
- Validarea metodei (Ghidul EURACHEM - The Fitness for Purpose of
Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related
Topics)
- Procesul prin care laboratorul verifica daca metoda este adecvata scopului
in care va fil utilizata
- Procesul prin care laboratorul isi stabileste caracteristicile de perfomanta si
limitele metodei si prin care identifica factorii care influenteaza aceste
caracteristici precum si gradul de influenta al acestor factori
- Validarea este o procedur care asigur c o metod de ncercare este ct se
poate de ncredere. Acest proces de verificare a metodei const dintr-un
program de validare a metodei care rspunde la ntrebarea: ct de precis
este metoda n minile utilizatorului final?"
- Validarea unei metode de analiz este, de fapt, o metodologie de
confirmare sau de acreditare a validrii tiinifice a unei metode de analiz.
Aceast metodologie are drept scop demonstrarea faptului c o metod sau
un procedeu analitic corespunde utilizrii pentru care a fost prevzut i c
performanele caracteristice metodei considerate, stabilite prin studii de
laborator, satisfac cerinele pentru ca aceast metod s poat fi aplicat.
- Din anumite puncte de vedere, validarea (i documentarea ei) poate fi
privit ca o carte de vizit a laboratorului pentru c, dac nu inem seama de
cerinele acreditrii, ea ilustreaz clar competena laboratorului.
5. DESCRIEREA ACTIVITII
5.1. Cnd se realizeaz validarea metodei

Validarea metodelor de ncercare

Nu exist reguli generale privitoare la scopul validrii sau frecvenei

acesteia. Totui, este sigur faptul c o singur validare de baz nu poate
garanta operaii fiabile pe termen lung. Laboratorul trebuie sa demonstreze
adecvarea la scop pentru toate metodele folosite la analiza produselor
alimentare inclusiv apei potabile, mineralelor si furajelor.
Un laborator trebuie sa valideze o metoda de lucru atunci cand este
necesar sa se stabilesca daca parametrii de performanta ai acesteia sunt
adecvati pentru rezolvarea problemelor analitice urmarite, cum ar fi:
- atunci cand laboratorul introduce in lucru o metoda noua sau pe care nu a
mai utilizat-o in trecut
- atunci cand s-a modificat personalul care aplica metoda
- atunci cand trebuie implementate imbunatatiri ale metodei ca urmare a
introducerii de imbunatatiri de catre producatorul reactivulului, a schimbarii
echipamentului, reetalonarea echipamentului, a schimbarii producatorului
reactivilor etc.
- atunci cand metoda este extinsa pentru a fi utilizata si pentru un alt scop
decat cel de pana in prezent (ex. extinderea utilizarii metodei pentru o alta
matrice, un alt compus sau la modificarea domeniului de lucru ) sau cand
laboratorul nu aplica tot standardul
- atunci cand rezultatele controlului de calitate indica o modificare a
performantelor metodei
5.2. Stabilirea gradului de extindere al validrii
Gradul de extindere al validarii trebuie sa tina cont de:
- relevanta parametrilor evaluati pentru utilizarea intentionala (ex: pentru
determinari de reziduuri poate fi relevanta determinarea limitelor de
detective ale metodei sau selectivitatea)
- relevanta parametrilor evaluati pentru a satisface cerintele clientului (ex:
limita de detectie cu concentratia maxima admisibila)
- natura modificarilor aduse atunci cand sunt implementate imbunatatiri ale
metodei
- natura diferentelor atunci cand se compara metode diferite, echipamente
diferite etc.
Chiar si atunci cand se introduc in lucru metode standardizate sau publicate
in literatura de specialitate este necesara o validare pentru a stabili modul in
care laboratorul reuseste sa obtina performanta indicata in referential
(standard, literatura, specificatiile producatorului date in prospectul de lucru
etc.)

Validarea metodelor de ncercare

Validarea trebuie sa fie un echilibru intre costuri, riscuri si posibilitati

tehnice.
5.3. Condiiile tehnice n care se realizeaz validarea metodei
Validarea metodei trebuie s se realizeze n urmtoarele condiii:
- Responsabilul de validare trebuie sa fie o persoana competenta
- Conditiile de mediu cerute de specificatiile metodei (ex. specificatiile date
de producatorul echipamentului, reactivilor, literatura de specialitate) trebuie
sa fie satisfacute
- Echipamentul de msurare trebuie sa fie in buna stare de functionare,
trebuie sa fie etalonat inainte de validare, intervalul dintre doua etalonari
trebuie stabilit in conformitate cu cerintele ILAC G 24, dupa fiecare
reetalonare laboratorul trebuie sa revalideze parametrii afectati (ex:
incertitudinea de masurare)
- Reactivii utilizati sunt adecvati lucrului cu echipamentul care urmeaza a fi
utilizat si sunt in termen de valabilitate
- Materialele de referinta utilizate in procesul de validare trebuie sa fie
adecvate metodei care urmeaza a fi validate (ex: matricea si nivelul de
concentratie) si trebuie sa fie in termen de valabilitate
5.4. Parametrii validrii
Informatiile folosite pentru a valida metoda pot fi obtinute prin testari
in laborator sau din alte surse (informatii date de producatorul
reactivilor/echipamentului, literatura de specialitate, standarde de metode
etc.)
Pot fi evaluati, in functie de scopul validarii, urmtorii parametrii:
- selectivitate/specificitate;
- limit de detecie;
- limit de cuantificare;
- domeniu de lucru i liniaritate;
- exactitate/fidelitate;
- precizie (repetabilitate i reproductibilitate); - recuperare;
- rezisten/robustee;
- incertitudinea de masurare.
Pentru metodele microbiologice standardizate, laboratoarele de
incercari trebuie sa dovedeasca adecvarea la scop conform cerintelor

Validarea metodelor de ncercare

specifice din standardele de metoda.( a se vedea standardul SR EN ISO

7218:2009, capitol 14).
Pentru metodele microbiologice alternative (nestandardizate), laboratoarele
de incercari trebuie sa valideze metodele conform standardului SR EN ISO
16140:2005. ( a se vedea standardul SR EN ISO 7218:2009, capitol 14).
Atat pentru metodele standardizate cat si pentru cele alternative, in validarea
de metoda se va tine cont de categoriile de produse alimentare relevante
pentru patogenii majori si microorganisme majore nepatogene, care apar in
alimente.
In cadrul experimentelor desfasurate in scop de validare se vor folosi probe
contaminate artificial cu material de referinta certificat ( ce contine un nivel
bine definit de compus tinta intr-o stare stabila ) sau material de referinta
( tulpina bacteriana ATCC). Se pot folosi probe contaminate natural, dar
contaminarea trebuie sa fie confirmata inainte de studiu de validare iar
pastrarea probelor contaminate natural trebuie sa se faca astfel incat sa se
reduca la minim atat schimbarile microbiologice cat si stresul microbian.
Pentru metodele microbiologice , utilizate in analiza apei, se utilizeaza
stadardul
SR ENV ISO 13843:2002, care recomanda pentru metodele
standardizate demonstrarea prin experiment ca o metoda stabilita
functioneaza in conformitate cu specificatiile din standardul de metoda.
5.5. Raportul de validare
Raportul de validare trebuie sa contina urmatoarele:
- prezentarea conditiilor in care a fost realizata validarea (metoda folosita,
standardul aplicat, scurta descrie a metodei si principiul, data, responsabil,
persoanele care participa si care executa diferite etape ale procedurii
(filtrare, extractie, concentrare, purificare, derativizare ), competenta,
echipamente certificat etalonare, reactivi,
materiale de
referinta/materialele de regerinta certificate utilizate (ruta de trasabilitate,
loturi, termene de valabilitate), conditii de mediu, etc.
- stabilirea parametrilor de performanta ce urmeaza a fi demonstrati in
validare
- stabilirea criteriilor de acceptabilitate pentru parametrii de performanta in
conformitate cu legislatia aplicabila ex :
o apa potabila - Directiva 98/83/EC privind calitatea apei potabile
transpusa prin legea 458/2002, Legea 311/2004 pentru modificarea
si completarea Legii nr. 458/2002 privind calitatea apei potabile, OG
publicata in
Monitorul Oficial ao Romaniei, partea 1, Nr
Validarea metodelor de ncercare

69/26.01.2011 pentru modificarea si completarea legii nr. 458/2002

privind calitatea apei potabile
o reziduuri de pesticide - Method validation and quqlity control
procedures for pesticide residues analysis in food and feed, document
No.
SANCO/10684/2009,
supersedes
document
No.
SANCO/3131/2007, implemented by 01/01/2010
o apa minerala - Hotrre nr. 1020/2005, din 01/09/2005 pentru
aprobarea Normelor tehnice de exploatare i comercializare a apelor
minerale naturale Publicat in Monitorul Oficial, Partea I nr. 854 din
22/09/2005
o reziduuri - REGULAMENTUL (CE) NR. 333/2007 AL COMISIEI
din 28 martie 2007 de stabilire a metodelor de prelevare a probelor i
de analiz pentru controlul oficial al nivelurilor de plumb, cadmiu,
mercur, staniu anorganic, 3-MCPD i benzo(a)piren din produsele
alimentare si COMMISSION REGULATION (EC) No 1881/2006 of
19 December 2006 setting maximum levels for certain contaminants
in foodstuffs REGULAMENTUL (UE) NR. 574/2011 AL COMISIEI
din 16 iunie 2011 de modificare a anexei I la Directiva 2002/32/CE a
Parlamentului European i a Consiliului n ceea ce privete limitele
maxime de nitrii, melamin, Ambrosia spp. i transferul de anumite
coccidiostatice sau histomonostatice, precum i de consolidare a
anexelor I i II
- prezentarea rezultatelor obtinute in urma testelor efectuate de laborator
( date primare, cromatograme, spectre, rapoarte generate de echipament,
volume, mase, temperatura, umiditate, presiune, )
- prelucrarea rezultatelor
- concluzii cu privire la satisfacerea fiecareia dintre cerinte - o declaratie de
validitate a metodei
Raportul de validare va face referire la documente si inregistrari relevante.

Validarea metodelor de ncercare

Bibliografie
SR EN ISO/CEI 17025:2005 - Criterii generale pentru competena
laboratoarelor de ncercri si etalonare.
CR-01-1 Cerinte suplimentare pentru acreditarea laboratoarelor de incercari
calitatea apei
CR-01-2 Cerinte suplimentare pentru acreditarea laboratoarelor de incercari
produse alimentare si furaje
EA 4/16 Linii directoare privind estimarea incertitudinii in incercarea
cantitativa

Validarea metodelor de ncercare