RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.

2
LINII DIRECTOARE PENTRU VERIFICAREA ADECVARII LA SCOP
A METODELOR UTILIZATE N
LABORATOARELE DE ANALIZE MEDICALE
CUPRINS
l. SCOP
2. DOMENlU DE APLlCARE
3. DOCUMENTE DE REFERlN
4. DEFlNlll
5. PRlNClPll DE BAZ
6. DESCRlEREA ACTlVlTlLOR
7. MODlFlCRl FA DE VERSlUNEA ANTERlOAR
Editia din l0.03.20l4 Pag. l/9
RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2
1. SCOP
Prezentul document ofer linii directoare pentru verificarea adecvarii la scop a
metodelor n laboratoarele de analize medicale, n vederea satisfacerii cerintelor
SR EN lSO l5l89.
Acest ghid documenteaz metodele generale si parametrii de performanta care
trebuie evaluati n vederea verificarii metodelor utilizate de laboratoarele de
analize medicale acreditate sau n curs de acreditare.
2. DOMENIU DE APLICARE
Prezentul document este aplicabil laboratoarelor care efectueaza analize
medicale.
3. DOCUMENTE DE REFERIN!
2.l. SR EN lSO l5l89 Cerinte particulare pentru calitate i competent
2.2. SR Ghid lSO / CEl 99: 20l0. Vocabular international de metrologie.
Concepte fundamentale i generale i termeni asociati (VlM)
". DEFINIII
".1. Va#$%are (SR Ghid lSO / CEl 99) - verificare prin care se confirm c
cerintele specificate sunt adecvate pentru o utilizare intentionat.
".2. Va#$%are %e &e'(%) (Ghidul EURACHEM - The Fitness for Purpose of
Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics)
1. procesul prin care laboratorul isi stabileste caracteristicile de perfomanta si
limitele metodei si prin care identifica factorii care influenteaza aceste
caracteristici precum si gradul de influenta al acestor factori
2. procesul prin care laboratorul verifica daca metoda este adecvata scopului
in care va fil utilizata
".3. Ver$*$+are, confirmare prin examinare i furnizare de dovezi obiective c
sunt ndeplinite cerinte specificate
-. PRINCIPII DE BAZ!
SR EN lSO l5l89 include cerinte privind adecvarea procedurilor utilizate la
cerintele beneficiarilor serviciilor de laborator i la scopul n care vor fi utilizate.
Validarea analitic se concentreaz pe analitii tint i urmrete identificarea i
cuantificarea surselor potentiale de variabilitate tehnic n analize efectuate pe
eantioane de pacient. Validarea clinic se concentreaz pe bolile asociate sau
pe conditiile pacientului i urmrete, n principal, identificarea i cuantificarea
surselor potentiale de variabilitate biologic la analiza unui eantion dat.
Editia din l0.03.20l4 Pag. 2/9
RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2
Validarea i verificarea reprezint dou proceduri diferite. Validarea implic
identificarea nevoilor utilizatorului i stabilirea dovezilor documentate care ofer
cea mai bun asigurare c o ncercare ndeplinete consistent acele nevoi.
Verificarea implic confirmarea c specificatii pre-determinate sunt ndeplinite n
mod consistent.
Un proces de verificare/validare include etape de planificare, implementare i de
control. Etapa de planificare include definirea responsabilittilor, obiectivelor i
cerintelor aplicabile i documentarea(inclusiv asigurarea documentatilor de
referinta aplicabile). lmplementarea const n experimente a cror rezultate sunt
nregistrate. Controlul cuprinde verificarea conformittii i declaratia final.
Tehnicile utilizate pentru a determina performanta unei metode includ una sau
mai multe din urmtoarele:
- Etalonarea(a se vedea definitia VlM) folosind etaloane sau materiale de
referint certificate cu trasabilitate documentat;
- compararea rezultatelor obtinute cu metode diferite;
- comparri interlaboratoare / scheme de ncercare de competent (control
extern);
- evaluarea sistematic a factorilor care influenteaz rezultatele ncercrii;
- estimarea incertitudinii de msurare
-.1. CONDITIILE IN CARE TREBUIE SA SE VERIFICE ADECVAREA LA SCOP
A METODELOR
-.1.1. C.n% /e rea#$0ea0) 1a#$%area &e'(%e$
Un laborator trebuie sa valideze o metoda de lucru atunci cand este necesar sa
se stabilesca daca parametrii de performanta ai acesteia sunt adecvati pentru
rezolvarea problemelor analitice urmarite, cum ar fi:
- atunci cand laboratorul introduce in lucru o metoda pe care nu a mai utilizat-o
in trecut
- atunci cand trebuie implementate imbunatatiri ale metodei ca urmare a
introducerii de imbunatatiri de catre producatorul reactivulului, a schimbarii
echipamentului, a schimbarii producatorului reactivilor etc.
- atunci cand metoda este extinsa pentru a fi utilizata si pentru un alt scop decat
cel de pana in prezent.
- atunci cand rezultatele controlului de calitate indica o modificare a
performantelor metodei
-.1.2. Can% /e rea#$0ea0a 1er$*$+area a%e+1ar$$ &e'(%e$
Metodele si procedurile utilizate trebuie verificate ca produc rezultate
satisfacatoare pentru analize medicale. O evaluare a procedurilor de catre seful
laboratorului sau persoana desemnata trebuie facuta initial si la intervale definire
de timp (in mod normal o data pe an).
-.1.3. S'a2$#$rea 3ra%4#4$ %e ex'$n%ere a# 1er$*$+ar$$
Gradul de extindere al validarii trebuie sa tina cont de:
Editia din l0.03.20l4 Pag. 3/9
RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2
- relevanta parametrilor evaluati pentru utilizarea intentionata
- relevanta parametrilor evaluati pentru a satisface cerintele clientului
- natura modificarilor aduse atunci cand se implementeaza imbunatatiri ale
metodei
- natura diferentelor atunci cand se compara metode diferite, echipamente
diferite etc.
Chiar si atunci cand se introduc in lucru metode standardizate sau publicate in
literatura de specialitate, este necesara o verificare pentru a stabili modul in care
laboratorul reuseste sa obtina performanta indicata in referential (standard,
literatura, specificatiile producatorului date in prospectul de lucru etc.)
Validarea trebuie sa fie un echilibru intre costuri, riscuri si posibilitati tehnice.
-.1.". C(n%$5$$#e 'e6n$+e 7n +are /e rea#$0ea0) 1er$*$+area a%e+1ar$$ #a /+(8 a
&e'(%e$
Verificarea metodei trebuie s se realizeze n urmtoarele conditii:
19 Responsabilul activitatii trebuie sa fie o persoana competenta
29 Conditiile de mediu cerute de specificatiile metode (ex. specificatiile date de
producatorul echipamentului, reactivilor, literatura de specialitate) trebuie sa
fie satisfacute
39 Echipamentul de msurare trebuie sa fie in buna stare de functionare
"9 Reactivii utilizati sunt adecvati lucrului cu echipamentul care urmeaza a fi
utilizat si sunt in termen de valabilitate
-9 Materialele de referinta / materialele de referinta certificate utilizate trebuie sa
fie adecvate metodei care urmeaza a fi verificate (ex. tabelele de valori ale
concentratiilor analitilor serului de control intern au valori specifice analizorului si
principiului chimic ce urmeaza a fi utilizate) si trebuie sa fie in termen de
valabilitate.
-.1.-. RESPONSABILIT!ILE LABORATORULUI
Laboratoarele trebuie s:
a) defineasca specificatii clare a a parametrilor de performan si eficien pentru
proceduri, echipamente i materiale.
b) asigure de competen a personalului implicat n validarea i verificarea
procedurilor i echipamentelor
c) evalueze critic, acolo unde este necesar, cu expert extern, c orice informa ie
furnizata, necesara verificarii, este de incredere si ca au fost efectuate activitati care
stabilesc ca procedurile, echipamentele i materialele indeplinesc cerintele de
performan cerute.
Parametrii care ar putea fi luati n considerare(minim trei) n timpul verificarii includ:
- Selectivitatea i specificitatea
- Domeniu de masura
- Etalonarea msurarilor care au un impact asupra rezultatelor
Editia din l0.03.20l4 Pag. 4/9
RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2
- Trasabilitatea msurrilor sau a rezultatelor
- Bias (eroare de justete)
- Liniaritate
- Limita de detec ie / limita de cuantificare
- Robuste e
- lnterferen e i efecte de memorie
- Fidelitate
- Rate de fals negative si fals pozitive
d) procure echipamente si materiale cu cerinte de performan validate acceptabil,
care s rspund nevoilor analitice i de examinare
e) verifice ca echipamentul, odat instalat, indeplineste caracteristicile de
performan cerute de laborator ( i unde este cazul declaratiile productorului) i s
furnizeze dovezi obiective ale modului n care acestea au fost efectuate nainte de
utilizare.
f) dac procedurile sau echipamentele sunt utilizate in afara scopului intentionat
trebuie sa specifice ca acestea au fost validate scopului pentru utilizarea propus.
g) sa defineasca criterii de adecvare la scop
Odata validata i verificata performan a procedurilor si echipamentelor i
materialelor, laboratoarele trebuie in mod continuu :
-sa ntreprind in mod periodic i adecvat controlul intern al calit ii
-sa realizeze in mod periodic i adecvat evaluarea externa a calitatii (control extern)
sau n cazul n care acesta nu este disponibil, sa realizeze activitati alternative de
evaluare a performan ei si eficien ei
-sa asigure in mod continuu competen a personalului care utilizeaza procedurile de
lucru i echipamentele.
-.1.: ROLUL FURNIZORULUI PRODUC!TORILOR DE EC;IPAMENTE <I
MATERIALE
Furnizorii / producatorii de echipamente i materiale trebuie s furnizeze:
-O declara ie precis privind utilizarea intentionata a echipamentelor i
materialelor
-O declara ie precis cu privire la caracteristicile de performan ale
echipamentelor i materialelor cnd sunt utilizate pentru scopul propus
-O declara ie precis cu privire la intervalele i procedurile recomandate de
mentenan a, cur are, etalonare, cat i verificrile de performan al
echipamentelor, precum i recomandri cu privire la etaloanele sau materialelor
de referin potrivite pentru etalonare.
-Furnizarea de informa ii de validare care sa demonstreze ca echipamentele i
materialele indeplinesc caracteristicele de performan adecvate directivei lVD si
scopului intentionat.
-Furnizarea unei documentatii tehnice care sa includa toti parametrii necesari
verificarii adecvarii la scop, de exemplu conditii pentru amplasare si conditii de
mediu pentru utiizare.
Acesta include, de exemplu validarea oricrei functii de calcul automate efectuate
de softul de calculator integrat.
-Furnizarea de ghiduri ale utilizatorului, inclusiv, de exemplu, pentru condi iile de
mediu pentru echipamente i stocarea materialelor
:. DESCRIEREA ACTIVIT!ILOR
Editia din l0.03.20l4 Pag. 5/9
RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2
:.1 Para&e'r$$ 1a#$%)r$$
lnformatiile folosite pentru a valida metoda pot fi obtinute prin testari in laborator
sau din alte surse (informatii date de producatorul reactivilor/echipamentului,
literatura de specialitate, standarde de metode etc.)
Pot fi evaluati, in functie scopul validarii, urmtorii parametrii:
- limita detectie
- limitele domeniului de masurare
- fidelitatea (repetabilitate/reproductibilitate)
- exactitate
- incertitudinea de msurare
- robustetea metodei
- sensibilitatea
- specificitatea
ln cazul metodelor calitative trebuie evaluat cel putin sensibilitatea i
specificitatea pentru exactitatea diagnosticului precum i fidelitatea.
ln cazul metodelor cantitative trebuie evaluate cel putin justetea i fidelitatea,
incertitudinea de msurare, limita de detectie, limita de cuantificare(unde este
aplicabil), limitele domeniului de msurare, robustetea i linearitatea
ln cazul metodelor automate se va evalua si efectul de memorie (carry over)
:.2 M(%a#$')5$ %e e1a#4are a 4n(r 8ara&e'r$ %e 8er*(r&an5),
:.2.1 L$&$'a &$n$&a %e %e'e+'$e
Laboratorul trebuie sa aiba proceduri documentate pentru evaluarea limitei de
detectie pentru utilizare la verificarea adecvarii la scop, in functie de metoda
utilizata.
:.2.2 L$&$'e#e %e &)/4rare
Limitele de msurare sunt :
a9 L$&$'a &$n$&a %e +4an'$*$+are cea mai mica concentratie de analit, diferita
de zero, care poate fi determinata cu un nivel acceptabil al repetabilitatii si al
exactittii.
Aceasta limita se determina prin testarea mai multor probe preparate cu
concentratii mici (ex. dilutii diferite ale unui ser de calibrare), apropiate de limita
minima de masurare specificata de producatorul kitului de reactivi. Fiecare proba
este testata de minim l0 ori si se calculeaza pentru fiecare valoarea medie si
abaterea standard.
Se considera ca limita minima de masurare proba cu cea mai mica concentratie si
pentru care abaterea standard are o valoare acceptabila.
O2/er1a5$$,
1. Daca limita minima a curbei de etalonare este mai mare decat limita minima
de masurare, atunci trebuie acordata atentie modului in care se realizeaza
extrapolarea. ln acest caz, daca se utilizeaza un analizor automat, atunci
Editia din l0.03.20l4 Pag. 6/9
RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2
limita minima de cuantificare pe care o poate obtine laboratorul este data de
limita minima a curbei de etalonare.
2. Daca limita minima a curbei de etalonare este data de valoarea 0 a
concentratiei, atunci limita minima de masurare a analitului va fi foarte probabil
mai mare decat 0 si trebuie determinata de laborator ca mai sus, daca
aceasta limita este relevanta din punct de vedere clinic (exemplu: este
relevant sa se cunoasca limita minima de detectie in cazul markerilor de
diagnostic post operator cum sunt markerii tumorali sau markerii de rejectie a
transplantului)
3. Pentru determinarile calitative, limita minima de detectie este de exemplu
valoarea cut-off, care este indicata in prospectul kitului de reactiv
29 L$&$'a &ax$&) %e &)/4rare cea mai mare concentratie de analit care
poate fi determinata fara dilua proba
O2/er1a5$$ ,
19 ln cazul in care curba de etalonare a analizorului este liniara, atunci
limita maxima de masurare este egala cu limita de liniaritate
(specificata de producatorul kit-ului reactivi).
29 ln cazul in care curba de etalonare nu este liniara (ex. determinari
imunologice), atunci atunci trebuie acordata atentie modului in care se
realizeaza extrapolarea. ln acest caz, daca se utilizeaza un analizor
automat, atunci limita maxima de masurare pe care o poate obtine
laboratorul este data de limita maxima a curbei de etalonare.
N('),
Laboratorul trebuie sa arate ca domeniul su de msurare include domeniul de
referinta biologic (domeniul de valori normale) si acopera valorile patologice
corespunzatoare populatiei de pacienti care se adreseaza laboratorului in mod
obisnuit.
:.2.3 F$%e#$'a'e Laboratorul trebuie sa stabileasca repetabilitatea si
reproductibilitatea pe materiale de referinta (pentru controlul intern) cu valori
cunoscute ale concentratiei analitilor si pe probe de pacienti - atat probe cu valori
normale, cat si probe cu valori patologice
a9 Pentru stabilirea re8e'a2$#$'a'$$ =$n'ra-%e'er&$nare9: laboratorul masoara mai
multe replici ale unei pool de seruri sau material de referint, una dupa alta, in
aceleasi conditii, cu acelasi echipament, reactivi, operator, intr-un interval de timp
foarte scurt si va estima abaterea standard.
NOTA
ln cazul metodelor cantitative se vor efectua minim l0 masurari in conditii de
repetabilitate. Pentru analize care necesita o durata mare de timp se accepta
reducerea numarului de replici, care, insa, sa nu conduca la o scadere a exactitatii
de masurare.
Editia din l0.03.20l4 Pag. 7/9
RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2
Abaterea standard obtinuta de laborator trebuie sa fie mai mica sau egala cu cea
specificata de producatorul kitului de reactivi sau al echipamentului
29 Pentru stabilirea re8r(%4+'$2$#$'a'$$ $n'ra#a2(ra'(r- laboratorul masoara mai
multe replici (cu respectarea notei de mai sus) ale unui pool de seruri sau
material de referint, in aceleasi conditii, cu acelasi echipament, reactivi,
operator, in zile diferite si va estima abaterea standard
Abaterea standard obtinuta de laborator trebuie sa fie mai mica sau egala decat cea
specificata de producatorul kitului de reactivi, al echipamentului, materialului de
referinta(dupa caz).
:.2." Exa+'$'a'e
Laboratorul trebuie sa-si stabileasca exactitatea pe materiale de referinta certificate
cu valori cunoscute ale concentratiei analitilor, atat pe probe cu valori normale, cat si
pe probe cu valori patologice
a9 B$a/ =er(are %e >4/'e'e9: laboratorul masoara mai multe replici ale materialului
de referinta, in aceleasi conditii, cu acelasi echipament, reactivi, operator, in zile
diferite, estimeaza valoarea medie a biasului.
Aceasta marime trebuie sa fie mai mica sau egala cu valoarea permisa specificata
de producatorul reactivilor sau analizorului.
29 Prin 8ar'$+$8ar$ #a +(&8arar$ $n'er#a2(ra'(are, laboratorul trebuie sa
identifice care este abaterea rezultatului pe care il obtine fata de valoarea cu care
este comparat. Din analiza rezultatelor la comparari interlaboratore, laboratorul va
stabili daca perfomanta sa in comparatie cu alte laboratoare este acceptabila.
:.2.-. In+er'$'4%$nea %e &a/4rare
Laboratorul trebuie sa identifice pentru fiecare masurand sursele de incertitudine
semnificative si sa aiba procedura de evaluare a incertitudinii pentru fiecare
masurand in parte.
Masurandul este definit de urmatorii parametrii:
-marimea (concentratie masica, concentratie molara, concentratie catalitica,
concentratie arbitrara in cantitate de substanta, conform procedurii ... OMS)
-analitul (de exemplu proteina, ioni de Na, colesterol, ASO, hemoglobina, numar
de eritrocite, etc)
-sistemul in care se gaseste (ser, urina, sange venos, fluid pleural, lichid cefalo-
rahidian)
-unitatea de masura( mM/L; g/L; nkat/L; Ul /L )
-procedura de masurare
Bugetul de incertitudine trebuie sa ia in considerare atat factorii preanalitici cat si
procesul de masurare. Variabilitatea biologica, inter-indivizi (eroarea maxima
tolerata) poate fi declarata separat.
:.2.:. R(24/'e5ea &e'(%e$
Editia din l0.03.20l4 Pag. 8/9
RENAR Anexa nr. 1 RS-1.3 LM.2
Laboratorul trebuie sa identifice factorii a caror variatie ar putea afecta rezultatul
masurarii.
Pentru fiecare din acesti factori se investigheaza efectul variatiei deliberate a
factorului asupra repetabilitatii si exactitatii.
:.2.?. Ra8(r'4# %e 1er$*$+are
Raportul de verificare trebuie sa contina urmatoarele:
- prezentarea conditiilor in care a fost realizata verificarea (data, responsabil -
competenta, echipamente certificat etalonare, reactivi, calibratori, materiale
de referinta utilizate loturi, termene de valabilitate, conditii de mediu, etc)
- prezentarea cerintelor (de adecvare la scop si de performanta) pe care trebuie
sa le satisfaca metoda
- prezentarea rezultatelor obtinute in urma testelor efectuate de laborator (de
preferat sub forma tabelara)
- concluzii cu privire la satisfacerea fiecareia dintre cerinte
- o declaratie de adecvare la scop
Editia din l0.03.20l4 Pag. 9/9