Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Analiza Instrumentala Partea I
Analiza Instrumentala Partea I
7
7
7
9
13
13
15
18
18
19
22
24
28
31
31
33
34
38
40
43
43
49
51
53
53
57
1
58
59
60
63
65
67
68
71
72
74
74
79
82
87
89
90
91
92
93
93
99
99
101
104
109
110
110
117
124
125
133
135
135
137
142
144
151
155
157
158
161
1
162
164
168
169
170
172
173
175
177
178
179
179
3
182
185
187
190
192
195
198
198
198
202
204
205
206
206
208
211
216
220
222
227
232
238
243
245
247
252
253
258
260
260
263
266
270
271
278
278
280
284
287
290
292
293
295
297
298
303
306
306
306
308
308
309
311
319
319
325
328
331
332
334
335
337
339
342
343
5
348
351
353
358
364
365
367
369
372
373
374
376
Capitolul 1
electromagnetice.
Spectrul
care trec printr-un anumit punct, n unitatea de timp. Frecvena se exprim n hertzi
(Hz), cicli pe secund sau s-1. Lungimea de und i frecvena sunt raportate la
viteza luminii prin relaia:
= c/n
(1.1)
unde c este viteza luminii n vid (2,9976 1010 cm/s) i n este indicele de refracie
(raportul vitezei luminii n vid i al vitezei sale n mediul respectiv). n unele cazuri
o
,,, care reprezint numrul de
este mai avantajos de a folosi numrul de und,
-1
lungimi de und pe 1 cm. Se exprim n cm .
(1.2)
A2 c
8
(1.3)
(1.4)
Spectrul electromagnetic
Radiaiile electromagnetice care sunt de interes pentru chimie variaz de la
radiaiile care au energie foarte mare, la undele radio ce au energie foarte mic.
Prin spectru electromagnetic se neleg radiaiile de toate lungimile de und
cuprinse n acest interval.
n tabelul 1.1 se prezint, n funcie de lungimile de und, frecvene i
energie, radiaiile ce constituie spectrul electromagnetic, tipurile de tranziii ce pot
avea loc i metodele de analiz corespunztoare. Diferitele regiuni ale spectrului
constituie domeniile spectrale, pentru fiecare domeniu utilizndu-se un anumit tip
8
de aparat pentru a genera sau detecta radiaii, de exemplu: infrarou, raze X, vizibil
etc. ntre domeniile spectrale nu sunt limite nete, ci limite difuze, fiind, de fapt, o
ntreptrundere a acestora. Fiecrui domeniu spectral i corespund interacii
specifice ale radiaiei cu proba de analizat.
Tabelul 1.1.
Domeniile spectrului electromagnetic, tipuri de tranziii ce pot avea loc i
metodele de analiz corespunztoare [22].
log (m)
-1
log (cm )
log (s )
-1
logE
logE
h
2
(1.5)
unde E este variaia de energie ntre dou stri, iar este durata de via a
strii excitate. Aceasta determin o lire natural a liniei spectrale, dat de relaia:
1
N
(1.6)
2
10
exp. = N + D + F + A
(1.8)
exp 1
N0 g0
kT
(1.9)
unde:
N1 i N0 sunt numrul de particule din strile energetice E1 respectiv E0, la
temperatura T; g1 i g0 reprezint ponderile statistice ale nivelurilor respective; k
este constanta lui Boltzmann. Pentru strile energetice nedegenerate, g1/g0 = 1.
Raportul densitilor de ocupare a unor niveluri energetice pentru o anumit
temperatur va fi influenat de diferena E = E1 E0, ntre energiile
corespunztoare acestora. La temperatur obinuit starea fundamental (starea cu
energia cea mai mic) este n general mult mai populat dect celelalte stri
energetice.
11
Ioni
Neutroni
Metode de analiz
Microscopie optic
Refractometrie
Nefelometrie
Turbidimetrie
Polarimetrie
Difracia razelor X
Difracia
electronilor
*Microscopie
electronic
Reflexia ionilor
*Microscopie
ionic
Difracia
neutronilor
12
unde:
13
Nivelurile N
Nivelurile M
Nivelurile L
Fig. 1.4. Diagrama nivelurilor energetice ale cadmiului pentru tranziii de raze X.
(a) emisie de raze X; (b) absorbie de raze X.
dat de Moseley:
1
2 1
RZ 2 2
n1 n2
(1.11)
I I 0e l
(1.12)
unde:
I este intensitatea radiaiei transmise printr-o prob omogen de grosime l,
exprimat n cm, I0 este intensitatea radiaiei incidente, iar este coeficientul liniar
de absorbie exprimat n cm-1. Coeficientul liniar de absorbie depinde de lungimea
de und a razelor X i de atomii ce absorb radiaia.
Coeficientul de absorbie de mas, m, se obine prin mprirea lui la ,
care este densitatea materialului respectiv:
16
(1.13)
CNZ 4 3
A
(1.14)
m =
Valoarea lui m este dat de relaia:
log m
log
Fig. 1.5. Absorbia radiaiilor X de ctre o specie atomic.
elemente cu numr atomic mare ntr-o matrice ce conine elemente uoare. Astfel,
poate fi determinat plumbul prezent sub form de tetraetil plumb sau bromul
prezent sub form de derivai bromurai n benzine.
electronic pot fi considerate imediat dup tranziie ntr-o geometrie practic identic
cu a strii lor fundamentale. Din acest motiv, tranziiile electronice pot fi
reprezentate sub forma unor linii verticale ntr-o diagram energetic (fig. 1.8).
Principiul Frank-Condon ne indic probabilitile tranziiilor de vibraie care
nsoesc tranziiile electronice. Tranziiile sunt cele mai probabile n momentele n
care molecula adopt n cursul vibraiilor o geometrie comun strii fundamentale
i a celei excitate.
S considerm o molecul n stare fundamental. Deoarece aceasta vibreaz
chiar cnd se afl pe nivelul de vibraie cel mai cobort, trebuie considerat un
domeniu al distanei internucleare. Se poate considera c cea mai probabil
distan internuclear va fi ns cea corespunztoare poziiei de echilibru,
amplitudinea vibraiilor fiind mic. Pentru stri vibraionale cu energie mai mare,
cea mai probabil poziie a nucleelor este la sfritul vibraiilor, cnd atomii se
opresc i i schimb direcia.
Dup cum se vede n fig. 1.8b, atunci cnd nu se modific distana ntre
nuclee n urma excitrii electronice (nu se modific tria legturii) sunt mai
21
Fig. 1.9. Vibraii de ntindere (a) i (b) i de deformare (c), (d), (e) i (f).
1
2
(1.16)
1 h
E v h v
2 2
f
1
1
v ; ~
2
2c
f
1
v
(1.17)
a)
b)
E v h v
v
2 4D
2
(1.18)
Fig. 1.11. (I) Diagrama nivelurilor de energie electronic i de vibraie ale unei
molecule cu o stare fundamental de singlet So i stri excitate de singlet, S1 i
triplet T1. Tranziiile neradiative sunt figurate prin linii ondulate: (a) absorbia
radiaiei, (b, b) relaxare vibraional i conversie intern, (c) fluorescen, (d)
fosforescen. (II) (a) spectru de absorbie; (c) spectru de fluorescen; (d)
spectru de fosforescen (la temperatur joas).
strii electronice excitate, dup cum se vede din fig.1.8a, toate celelalte tranziii
avnd o probabilitate mai mic.
Tranziia de fluorescen cea mai probabil, deci cu intensitatea cea mai
mare, va avea loc de pe nivelul v = 0 a strii electronice excitate, pe un anumit
nivel de vibraie cu numrul cuantic v = v al strii electronice fundamentale, dat
de intersecia verticalei ce unete mijlocul segmentului ce ne indic valoarea
energiei pentru v = 0 i curba de energie potenial pentru starea electronic
fundamental.
Toate celelalte tranziii vor avea o probabilitate mai mic. Notnd cu a
respectiv cu a nivelurile de vibraie ale strii electronice excitate i fundamentale,
putem spune c tranziiile de absorbie 0 a vor avea aceeai probabilitate cu
tranziiile de emisie 0 a, ceea ce va face ca spectrul de emisie s fie imaginea n
oglind a spectrului de fluorescen. Maximul benzii de fluorescen va fi ns
deplasat la lungimi de und mai mari fa de cel de absorbie.
Din starea excitat de singlet, molecula poate reveni la starea fundamental i
prin conversia intern a energiei n energie termic, proces neradiativ, sau prin
conversia intersistem, prin schimbarea spinului unui electron din starea excitat de
singlet, ducnd la o alt stare excitat, de triplet, T1. n starea de triplet, relaxarea
vibraional va fi, de asemenea, foarte rapid. Deoarece conversia intersistem este
un proces de spin interzis, deci relativ puin probabil, va fi competitiv cu
fluorescena i conversia intern, numai pentru anumite molecule. Orice tranziie
din starea de triplet T1 la starea fundamental este de asemenea, un proces de spin
interzis. Din acest motiv, durata de via a strii de triplet este relativ lung, 10-6
10 s.
Dac pierderea de energie se face n continuare radiativ, molecula revenind
la starea fundamental pe diferite niveluri de vibraie ale strii electronice
corespunztoare acestei stri, are loc fenomenul de fosforescen. Fosforescena se
studiaz la temperaturi foarte joase de ex. la temperatura azotului lichid, la aceste
temperaturi crescnd probabilitatea tranziiilor radiative. Revenirea la starea
fundamental se poate face i neradiativ, prin conversie intern. Din cauza
caracterului de spin interzis, fosforescena are loc ntr-un timp mai lung, egal cu
timpul de via al strii de triplet.
Lungimile de und ale radiaiilor emise n urma fenomenului de
fosforescen vor fi mai mari dect cele ale radiaiilor de fluorescen (fig.
1.11(II)(d)) deoarece starea de triplet are o energie mai mic dect starea de
singlet.
Pentru anumite tipuri de molecule se poate reveni din starea de triplet T1 pe
nivelul S1 (prin ocuri termice) emindu-se apoi cu ntrziere spectrul de
fluorescen. Radiaiile de fosforescen emise n acest mod vor avea aceeai
lungime de und ca cele de fluorescen. i n cazul fosforescenei putem vorbi de
un randament cuantic de fosforescen care, n general, este cu att mai mare cu ct
temperatura este mai mic. Din acest motiv, probele de analizat se rcesc frecvent
la temperatura azotului lichid.
27
E0
30
31
-1
(c m )
CsI
Filtre
32
Suprafa
aluminizat
(oglind)
36
Rp =
dn
=t
d
d
(1.19)
unde t este baza prismei, iar dn/d este dispersia indicelui de refracie.
Puterea de rezoluie este limitat de lungimea bazei prismei i de puterea de
dispersie a materialului dn/d care nu este constant, fiind funcie de lungimea de
und.
Utilizarea unei prisme ntr-un montaj de tip Littrow (fig. 1.19B) prezint
avantajul unui grad mai mare de dispersie, i n plus, este evitat dubla refracie
atunci cnd se folosete un material anizotropic, cum este cuarul. Oglinda din
montajul de tip Littrow poate fi constituit dintr-un material metalic dispus chiar
pe prism (dup cum se vede din fig. 1.19B).
Materialele din care sunt realizate prismele depind de domeniul spectral n
care acestea se utilizeaz. Ele trebuie s fie transparente i s aib o dispersie
suficient de mare.
Pentru domeniul UV se utilizeaz prisme din cuar sau dioxid de siliciu topit,
care sunt transparente pn la aproximativ 200 nm. Fluoritul (CaF2) este
transparent pn la 125 nm putnd fi utilizat n ultravioletul de vid. Pentru
domeniul vizibil i IR apropiat prismele se fac din sticl de diferite caliti.
n domeniul infrarou se utilizeaz materiale cristaline ionice. n fig. 1.15
sunt prezentate cteva dintre aceste materiale i domeniile de numere de und (cu
aproximaie) n care acestea pot fi utilizate cu cele mai bune rezultate: fluoritul,
CaF2, ntre 1600 i 1250 cm-1, clorura de sodiu ntre 625 i 4000 cm-1, bromura de
potasiu ntre 700 i 400 cm-1, KRS-5 (un cristal mixt de bromur i iodur de taliu)
i bromura de cesiu n domeniul 425-280 cm-1, iodura de cesiu este utilizabil pn
la 180 cm-1. Sub aceast valoare de obicei se folosesc reele de difracie ca sisteme
de dispersie.
Reele de difracie. Reelele de difracie pot fi prin transmisie sau prin
reflexie. n fig. 1.20 se prezint drumul parcurs de radiaii n cazul unei reele de
difracie prin reflexie.
Suprafaa reelei este puternic reflectorizant i prezint un mare numr de
anuri (zgrieturi) echidistante, n mod obinuit 600-2000 pe mm, n funcie de
domeniul spectral n care se utilizeaz.Radiaiile reflectate de reeaua de difracie
sufer un fenomen de interferen pozitiv sau negativ n funcie de lungimea de
und a acestora i de diferena de drum strbtut. Diferena de drum este dat de
diferena BC AD = d(sin i sin ). Totui, este considerat un unghi negativ
astfel c diferena de drum este d(sin i + sin ).
37
Fig. 1.19. Drumul parcurs de radiaii pentru o reea de difracie prin reflexie.
(1.20)
unde n este un numr ntreg. O radiaie de o anumit lungime de und care este
reflectat de o reea de difracie pentru un unghi de inciden i, poate suferi o
interferen constructiv pentru mai multe unghiuri , formndu-se astfel spectre
de diferite ordine. Cele mai intense radiaii aparin ordinului nti, intensitatea
radiaiilor scznd cu ordinul spectrului.
Separarea radiaiilor se face prin rotirea reelei de difracie. n faa fantei de
ieire a monocromatorului fiind aduse radiaiile de diferite lungimi de und ce
aparin spectrului de ordinul 1.
Reelele de difracie prezint, spre deosebire de prisme, o dispersie
unghiular liniar pe ntreg domeniul de lungimi de und utilizat, ceea ce constituie
un avantaj.
39
ajutorul unui poteniometru), fie pe cale optic (cu ajutorul unei pene optice sau a
unei diafragme reglabile); n acest caz, mrimea se msoar n uniti de
compensare pe scala poteniometrului sau a sistemului optic.
n aparatele moderne sistemul de evaluare se bazeaz n mare msur pe
utilizarea calculatoarelor care pot prelua semnalul de la amplificator, l compar cu
semnalele corespunztoare ale unor probe etalon, stocate n memorie, iar apoi ne
dau direct datele analitice.
Sisteme monofascicul i cu dou fascicule utilizate n spectrometria de
absorbie
Dei toate aparatele spectrometrice de absorbie au prile componente
prezentate n fig. 14, totui sunt multe deosebiri ntre ele, depinznd de productor,
domeniul spectral pentru care a fost concepute, rezoluia acestora etc. Fr a intra
n detalii, vom discuta n continuare numai modurile generale de operare ale unui
spectrometru de absorbie.
Sisteme monofascicul
Un fascicul de radiaii de la o surs ptrunde n monocromator, unde este
dispersat de prism sau reea. Prin rotirea sistemului de separare a radiaiilor, n
faa fantei de ieire a monocromatorului sunt focalizate radiaii de diferite lungimi
de und. n cazul spectrometriei de absorbie, nainte de a ajunge la detector,
radiaiile trec prin proba de analizat. Absorbia radiaiei de ctre prob se
determin fie msurnd intensitatea fasciculului transmis n prezena i absena
probei, fie fa de o prob de referin (de comparaie) care conine de obicei toi
componenii probei cu excepia aceluia a crui absorban o msurm.
In cazul spectrometriei de emisie radiaiile emise de prob sunt separate de
monocromator iar apoi ajung direct la detector unde li se msoar intensitatea.
Sisteme cu dou fascicule
n instrumentele cu dou fascicule se realizeaz cu ajutorul unui dispozitiv
optic o separare a radiaiilor provenite de la surs n dou fascicule. Un fascicul
este trecut prin proba de referin, iar cellalt prin proba de analizat. Intensitile
celor dou fascicule sunt apoi comparate, fie continuu, fie alternativ, de mai multe
ori pe secund. Astfel, n cazul instrumentelor cu dou fascicule are loc o
compensare a fluctuaiilor intensitii sursei, a rspunsului detectorului i a
amplificrii, msurndu-se numai diferena celor dou semnale.
n fig. 1.21 se prezint schema unui instrument cu dou fascicule ce
funcioneaz pe baza principiului prezentat:
41
42
1
2
1
LC
(1.21)
Fig. 1.23. Tipuri de electrozi folosii la utilizarea arcului sau scnteii electrice ca
surs de vaporizare i excitare. (a) i (b) analiza unor probe bune conductoare de
electricitate; (c) i (d) analiza unor probe lichide; (e) analiza unor probe care au
conductibilitate electric mic.
Un fascicul laser
Poate fi folosit la analiza unor zone foarte mici de pe suprafaa unei probe.
Fasciculul laser, focalizat cu ajutorul unui microscop n zona de analizat,
vaporizez o cantitate mic de prob, dnd natere unui crater semisferic cu
45
46
D log
Io
1
log
I
T
(1.22)
47
n care:
I este intensitatea unui fascicul luminos incident produs de o surs (lumin
0
E = It
D log E g
(1.24)
Densitatea de nnegrire D
Domeniu de
subexpunere
Domeniu de
lucru
log E
48
ntre liniile fierului se pot atribui liniile spectrale ce apar n proba necunoscut.
O a doua metod de efectuare a unei analize calitative se bazeaz pe
determinarea exact a lungimilor de und ale radiaiilor emise de elementele din
proba de analizat. n acest scop se ntrebuineaz un microscop mobil cuplat cu o
scal micrometric (sau un microscop fix i o plac mobil cuplat cu un urub
micrometric) care permite observarea direct a spectrului probei i a spectrului
cunoscut. Acest instrument se numete microscop comparator. Lungimile de und
ale radiaiilor determinate astfel vor fi atribuite elementelor de analizat folosind
atlase de spectre.
Analiza semicantitativ
Permite determinarea ordinului de mrime al concentraiilor unor elemente.
La utilizarea plcii fotografice ca receptor de radiaii se poate face o analiz
semicantitativ prin compararea vizual a spectrului probei cu o serie de spectre
etalon, obinute de la probe sintetice de concentraie cunoscut i cu o compoziie
asemntoare cu a probei de analizat. Prezentm n continuare urmtoarele metode
de analiz semicantitativ:
- Metoda spectrelor de comparaie: se nregistreaz pe aceeai plac
fotografic mai multe spectre ale unor probe etalon alturi de spectrul probei de
analizat i se compar vizual. Concentraia unui element n proba necunoscut va fi
aproximativ egal cu concentraia unui element din etalon, pentru care liniile
elementului de analizat prezint nnegriri asemntoare.
- Metoda diluiei: se nregistreaz spectrul probei de analizat diluat cu praf
de grafit n raport cunoscut (de exemplu 1/10, 1/100, 1/1000) i se compar cu
spectrele obinute pentru anumite probe etalon.
- Metoda sectorului logaritmic: se nregistreaz spectrul probei n condiiile
n care un disc dintr-un material opac ce are marginea tiat dup o curb
logaritmic se rotete n faa fantei de intrare a spectrografului (fig. 1.27).
Deoarece densitatea de nnegrire a plcii fotografice este funcie logaritmic de
intensitatea radiaiei (relaiile (1.23) i (1.24)), liniile spectrale vor aprea n acest
caz sub forma unor pene a cror nlime va fi proporional cu concentraia
elementului de analizat. Comparnd nlimea liniilor spectrale astfel nregistrate
pentru un etalon i proba de analizat, se poate evalua semicantitativ concentraia n
proba necunoscut.
50
Fig. 1.27. Sectorul logaritmic (a), i aspectul unei linii nregistrate pentru
diferite concentraii (b).
I ac b
(1.25)
unde I este intensitatea radiaiei emise, c este concentraia elementului care emite
radiaiile, a este un factor legat de natura elementului i condiiile de excitare iar b
este un factor datorat autoabsorbiei liniei spectrale (b < 1). Cu ct autoabsorbia
unei linii spectrale este mai mare cu att b ia valori mai mici. Autoabsorbia unei
linii spectrale crete cu concentraia elementului din vaporii atomici care emit linia
spectral respectiv.
Deoarece intensitatea radiaiilor emise este funcie de o serie de parametri ai
surselor de excitare, greu de reprodus i de controlat, intensitatea unei linii
spectrale se msoar fa de intensitatea liniei unui element numit standard sau
etalon intern, coninut de proba de analizat. Condiiile de excitare fiind aceleai
pentru ambele elemente, ele nu vor influena valoarea raportului ntre intensitile
celor dou linii.
Elementul de analizat ales drept standard intern trebuie s ndeplineasc o
serie de condiii. Astfel, este necesar s fie n concentraie constant (de obicei
mare) att n etaloane, ce conin cantiti cunoscute din elementul de analizat, ct i
n probele de analizat. Linia standardului intern trebuie s fie n vecintatea celei a
elementului de analizat, pentru a evita erorile ce pot aprea datorit variaiei
sensibilitii detectorului n funcie de lungimea de und. Standardul intern trebuie
s aib volatilitate i condiii de excitare ct mai apropiate de ale elementului de
analizat.
Raportul dintre intensitatea unei radiaii emise la o anumit lungime de und
51
axcx
a st c st
(1.26)
st
Ix
bx log cx k
I st
(1.27)
(1.28)
(1.29)
Dx Dst D log
Ex
Est
(1.30)
52
D Dx Dst log
Ix
I st
(1.31)
D
bx log cx k
(1.32)
Hidrogen
Propan
Comburant
aer
N2O
oxigen
aer
N2O
oxigen
aer
Temperatura oC
2400
2800
3140
2050
2700
2700
1900
Prob
Prob
(absorbie)
(ionizare)
(oxidare)
(emisie)
(combinare)
Spectrele de absorbie atomic sunt mai simple dect cele de emisie, iar
aceasta face ca i interferenele spectrale s fie mai reduse.
Absorbia de fond apare n spectrometria de absorbie atomic, drept urmare
a absorbiei moleculare i a difuziei radiaiei de ctre particulele solide
nevaporizate prezente n flacr, care provin din proba de analizat.
Absorbia molecular se datoreaz unor compui ce constituie matricea
chimic a probei i care sunt vaporizai mpreun cu elementul de analizat. O parte
din radiaia dat de lampa cu catod cavitar va fi absorbit nespecific de aceti
compui.
Se poate face o corecie a absorbiei de fond i datorit difuziei radiaiei
msurnd semnalul total de absorbie i scznd din el valoarea care nu se
datoreaz absorbiei de ctre atomi. Aceasta este posibil deoarece atomii absorb
radiaii ce corespund unor benzi spectrale mult mai nguste dect benzile de
absorbie molecular. De asemenea, difuzia radiaiei este practic constant pentru
radiaii din benzi spectrale mult mai largi dect cele pe care le absorb atomii.
Rezult deci c la lungimi de und apropiate de cele absorbite de atomi, absorbia
radiaiei de ctre acetia va fi practic zero, n timp ce scderea intensitii radiaiei
datorit absorbiei moleculare sau difuziei va fi aceeai cu cea de la lungimea de
und absorbit de atomi.
n spectrometria de emisie atomic poate aprea o radiaie de fond ce
nsoete radiaia emis de atomii de analizat. Radiaia de fond se poate datora
flcrii sau celorlali componeni ai probei de analizat. Pentru a determina
intensitatea radiaiei emise numai de atomii de analizat, din intensitatea total
emis la o lungime de und de o specie atomic se scade valoarea fondului msurat
n apropierea liniei spectrale respective.
Efecte de ionizare. n flacr poate s aib loc i o ionizare a atomilor unor
elemente. Metalele alcaline sunt n mod deosebit ionizate. Ionizarea reduce
populaia de atomi neutri aflai att n stare fundamental ct i n stare excitat i
deci va reduce sensibilitatea determinrilor.
Pentru a reduce ionizarea atomilor n flacr se adaug probelor un exces de
element uor ionizabil, ca de exemplu potasiu sau cesiu.
Interferene datorit vaporizrii. O serie de fosfai, silicai i aluminai ai
unor elemente sunt termic stabili. Pentru a aduce la stare de vapori atomici
elementul respectiv trebuie utilizate flcri suficient de calde, de exemplu o flacr
protoxid de azot/acetilen. Variaii ale temperaturii flcrii vor determina deplasri
ale echilibrului de disociere. Aceasta duce la o variaie a populaiei de atomi i a
sensibilitii att n cazul spectrometriei de emisie, ct i de absorbie atomic.
Metale ca: aluminiul, titanul i lantanul formeaz oxizi refractari care sunt foarte
stabili. Pentru a obine o populaie de atomi suficient de mare n cazul acestor
elemente este necesar s lucrm n flcri calde n exces de carburant, cu scopul de
a crea o atmosfer reductoare. Pentru a reduce interferenele datorit vaporizrii,
la probele de analizat se adaug elemente care se pot combina uor cu anionii ce
formeaz compui puin volatili.
56
57
e
No go
unde:
g* i go sunt ponderile statistice ale nivelurilor respective, E, diferena de
energie ntre cele dou stri, k, constanta lui Boltzmann i T, temperatura absolut.
n tabelul 1.4 se dau valorile unor raporturi N*/No pentru liniile de rezonan
ale unor elemente:
Tabelul 1.4. Valorile N*/No pentru liniile de rezonan ale unor elemente
Element
Linii de
rezonan
E (eV)
Na
Cs
Ca
Cu
Zn
589
852,1
422,7
324,8
213,9
2,10
1,45
2,93
3,82
5,80
N*/No
2000 K
9,86 10-6
4,44 10-4
1,21 10-7
4,82 10-10
7,45 10-15
3000 K
5,88 10-4
7,24 10-3
3,69 10-5
6,65 10-7
5,50 10-10
58
fundamental este aproape ntotdeauna cu populaia cea mai numeroas, cel mai
important proces este absorbia de rezonan.
O parte din radiaia absorbit va fi emis spontan la aceeai lungime de und,
prin revenirea atomului la starea cu energie mai mic, dar, deoarece aceast
radiaie este emis izotropic, fraciunea ce ajunge la detectorul de radiaii este
practic nesemnificativ.
n fluorescena atomic, radiaia de la o surs de excitare este trecut prin
vaporii atomici, dar detectorul nu primete radiaia primar, ntre direcia de
observare i a fasciculului incident fiind un unghi, de obicei de 90o. O parte din
atomii excitai prin absorbie revin la starea fundamental prin emisie spontan de
fotoni. Astfel, fluorescena atomic difer de emisia atomic numai prin modul de
excitare.
n cazul spectrelor de emisie atomic, care sunt produse de obicei termic,
utiliznd flcri, arcuri sau scntei electrice, pentru un anumit element, numai o
mic parte din atomi trec n stare excitat i pot deci emite radiaii, iar aceast parte
este puternic influenat de temperatura sursei de excitare. Din acest motiv, mici
fluctuaii ale temperaturii determin variaii apreciabile ale intensitii radiaiilor
emise.
n cazul absorbiei atomice, important este populaia de atomi aflat n stare
fundamental, care este mai puin influenat de mici fluctuaii de temperatur.
Spectrul de emisie este de obicei mai complex dect cel de absorbie,
deoarece numeroase specii atomice prezente n sursa de excitare emit radiaii.
Aceste radiaii trebuie separate utiliznd un monocromator de rezoluie nalt.
Probabilitatea suprapunerii liniilor spectrale n emisie este mult mai mare dect n
absorbie.
Spre deosebire de spectrele de emisie, spectrele de absorbie sunt mai simple,
pentru rezolvarea lor necesitnd utilizarea unui monocromator mai puin
pretenios.
I I o e k l
60
(1.34)
e
k d = mc N f
2
(1.35)
unde N este numrul de atomi pe cm3 care pot absorbi n domeniul de frecven
corespunztor liniei spectrale, f este tria oscilatorului (numrul mediu de
electroni pe atom ce pot fi excitai de radiaia incident), e este sarcina unui
electron, c este viteza luminii i m masa unui electron.
Limea natural a unei linii spectrale este de ordinul 10-5 nm. n realitate
limea unei linii spectrale de absorbie a atomilor aflai ntr-o flacr sau alt sistem
de atomizare este mai mare, ajungnd la 0,01-0,001 nm. Lirea liniei apare
datorit autoabsorbiei, efectului Doppler i proceselor de coliziune, lire Lorentz
(capitolul 1.1.2).
n majoritatea cazurilor, cel mai important factor ce contribuie la lirea
liniilor spectrale se datoreaz ciocnirii atomilor de analizat cu atomii gazelor
strine.
Spre deosebire de linia de absorbie a atomilor ntr-o surs de atomizare, care
funcioneaz la presiunea atmosferic, linia de emisie a unei lmpi cu catod cavitar
este mult mai ngust, presiunea n interiorul acesteia fiind de ordinul 1 torr i deci
numrul de ciocniri este mult mai redus.
n fig. 1.32 se prezint, pentru acelai element, profilul unei linii de absorbie
n flacr i respectiv al unei linii de emisie provenite de la o lamp cu catod
cavitar:
61
k o KN
(1.36)
deci absorbana:
A log
I o o
I o
KN l
K' c
log 10
(1.37)
62
Cel mai utilizat sistem de atomizare este flacra, fiind uor de folosit. Acest
sistem de atomizare precum i interferenele care pot aprea la utilizarea lui au fost
discutate n cadrul cap. 1.4.1. Pentru evitarea unora dintre deficienele flcrilor ca
sisteme de atomizare, s-au propus sistemele de atomizare electrotermice. Dintre
acestea menionm cuptoarele de grafit tip Lvov i Massmann i filamentul de
crbune tip West.
La utilizarea unui sistem de atomizare electrotermic toi atomii de analizat
dintr-o prob sunt transformai n vapori atomici practic n acelai timp i rmn n
sistemul de atomizare putndu-se msura absorbia de ctre acetia a radiaiei date
de ctre lampa cu catod cavitar. Din acest motiv, sensibilitatea determinrilor este
mare (10-8 10-11 g). Pentru efectuarea unei determinri sunt necesare probe
lichide cu volum foarte mic (5-10 L) sau se pot analiza chiar probe solide.
63
Efectele de matrice sunt ns mai importante dect n flacr, iar eroarea relativ a
determinrilor este de 5-10% (mai mare dect n flacr).
Cel mai utilizat sistem de atomizare electrotermic este cuptorul de tip
Massmann, prezentat n fig. 1.34.
n prima etap, proba este nclzit la 110-125 oC, timp de 20-30 s pentru
evaporarea solventului i a componentelor mai volatile ale matricei.
n etapa a doua, temperatura este mrit, avnd loc volatilizarea unor
compui i piroliza componenilor ce constituie matricea probei, ca de exemplu,
compuii organici.
n etapa a treia, proba este nclzit la temperaturi nalte (2000-3000 oC),
cnd are loc transformarea n vapori atomici a elementului de analizat. n aceast
etap se nregistreaz absorbia radiaiei emise de lampa cu catod cavitar de ctre
vaporii atomici, n funcie de timp.
Durata total a atomizrii este de ordinul 4-8 s. Semnalul nregistrat este sub
forma unui maxim de absorbie a crui nlime (sau suprafa pentru determinri
mai precise) este proporional cu cantitatea din elementul de analizat.
Limita de detecie pentru absorbia atomic fr flacr este cu 2-3 ordine de
mrime mai cobort (deci concentraiile determinate sunt mai mici) dect pentru
absorbia atomic n flacr, atomii volatilizai rmnnd un timp mult mai lung n
drumul optic al radiaiei provenite de la lampa cu catod cavitar.
66
AA n flacr (ppm)
AA cu atomizare
electrotermic (ppm)
As
0,1
0,0002
Ba
0,2
0,00006
Ca
0,02
0,0004
Cd
0,01
0,000003
Co
0,07
0,00006
Cu
0,04
0,00004
Fe
0,06
0,000008
Hg
2,20
0,0005
Mg
0,003
0,000007
Pb
0,1
0,00005
Zn
0,009
0,000002
fascicul de electroni
68
n 2d sin
(1.38)
unde:
69
d este distana dintre planurile cristalului, este unghiul de inciden iar n este un
numr ntreg reprezentnd ordinul de difracie.
Din fig. 1.38 se vede c radiaia reflectat de ctre al doilea plan al cristalului
analizor parcurge o distan CBD n plus fa de radiaia reflectat de primul plan.
Unghiurile CAB i BAD sunt egale cu . Deci
CB BD AB sin , iar AB
este distana interplanar d. CBD 2d sin va trebui s fie un multiplu ntreg
al lungimii de und a razelor X reflectate pentru ca acestea s fie n faz i s
interfere constructiv. Radiaiile cu alte lungimi de und vor suferi o interferen
distructiv.
Unghiul ntre prelungirea direciei fasciculului incident i a celui reflectat este
de 2. Pentru a separa razele X emise de prob n funcie de lungimea de und,
cristalul analizor este montat pe un gonimetru (instrument ce msoar unghiuri) i
este rotit aa cum se prezint n fig. 1.40. n tabelul 1.6 se prezint mai multe
cristale analizoare i caracteristicile acestora.
Tabelul 1.6. Cristale analizoare
Domeniul de utilizare (nm)
Maximum
Minimum
Topaz
Distana interplanar
d, (nm)
0,136
0,262
0,0189
Fluorur de Li
0,201
0,389
0,0281
Aluminiu
0,234
0,452
0,0326
Clorur de Na
0,282
0,545
0,0393
Cuar
0,334
0,646
0,0466
Cristal
70
Grafit pirolitic
0,671
1,296
0,0936
Mic
0,996
1,925
0,139
Palmitat de
plumb
4,560
7,830
0,639
71
72
73
dI = kIdl
(1.39)
dI
= kdl
I
(1.40)
It
I0
obinem:
74
dI
k dl
I
0
(1.41)
ln
I0
kl
It
sau
I t I 0e kl
(1.42)
I0
I
kl sau log 0 k ' l
It
It
(1.43)
(1.44)
log
I0
acl
I
(1.45)
care este expresia legii Lambert-Beer. Dac grosimea probei este exprimat n cm
i concentraia n grame de substan pe litru de soluie, constanta a este numit
absorbtivitate specific i se exprim n L g-1cm-1. Frecvent c se exprim n moli/L
iar l n cm, n aceste condiii constanta a se noteaz cu , care se numete
absorbtivitate molar sau coeficient molar de absorbie. Ecuaia (1.45) devine:
75
log
I0
cl A
I
(1.46)
log T log
I0
cl A
I
(1.47)
Sisteme multicomponente
Pentru sisteme cu mai multe componente absorbante se poate considera c, n
procesul de absorbie, acestea acioneaz independent una de alta i absorbanele
lor sunt aditive. O asemenea situaie este prezentat n fig. 1.44:
A = An = n cn l
(1.48)
c/2
Fig. 1.45. Efectul utilizrii unei benzi spectrale. (a) Un component la dou
concentraii, (b) Curb de calibrare liniar la 1 ,(c) Curb de calibrare
nelinear la 2
Este de dorit s lucrm cu benzi spectrale nguste pentru exactitate mare, dar
pe msur ce banda se ngusteaz, la detector ajunge o energie din ce n ce mai
redus, ceea ce face mai dificile determinrile. Abaterile de la legea Lambert-Beer
sunt mai mari pentru benzi spectrale largi dect pentru benzi spectrale nguste.
Alte cauze de natur instrumental ce determin abateri de la legea LambertBeer includ: 1) variaia n sensibilitatea detectorului; 2) variaia n timp a
intensitii radiaiei emise de surs; 3) radiaia parazit a aparatului care ajunge la
detector.
Celulele n care se fac determinrile de absorban trebuie s fie perfect
78
c este egal cu [HA] + [A-], A- HA, iar este gradul de disociere. La diluarea
soluiei acidului respectiv, va varia, fiind funcie de concentraie, ceea ce face s
nu fie o dependen liniar ntre absorban i concentraie, deci s nu se respecte
legea Lambert-Beer.
O soluie apoas de bicromat ne ofer un alt exemplu de nerespectare a legii
2
2
Lambert-Beer. n acest sistem sunt prezente speciile CrO -, HCrO -, Cr O - care,
4
2HCrO4 + 2H2O
Cr2O72- + 3H2O
dc
sau:
c
c
1 dI
2,3l I
(1.50)
I
2,3 AI
(1.51)
I
I
I
d c I d
I
I log 0
I log 0 log 0 0,4343 0
dI c 2,3 dI
I
2,3
I
I
80
(1.52)
A = lg
respectiv:
T=
Io
I
= 0,4343
I 1
= = 0,3679 = 36,8%
Io e
1
I
k 2
I log 0
c
2,3
I
(1.53)
Difereniind:
2
1
1
1
I0 1 2
I0
d c k d 2
dI c 2,3 dI
I 2
I
(1.54)
A log
I0
2 0,4343 0,8686
I
I
0,135 13,5%
I0
81
Fig. 1.46. Eroarea relativ, c/c, n procente, n funcie de absorban, pentru care
eroarea n evaluarea transmitanei este constant, de 1% ([21] p. 74.
Din fig. 1.46 se poate vedea c domeniul de absorbane pentru care eroarea
relativ n determinarea concentraiei este mic este mult mai larg n cazul
detectorilor fotoemisivi fa de cei termici.
n *.
Termenii uzuali folosii la discutarea spectrelor electronice sunt: cromofor,
auxocrom; efecte: batocromic, hipsocromic, hipercromic i hipocromic.
Cromoforii sunt grupri de atomi care absorb radiaii din ultravioletul
apropiat, > 200 nm sau din domeniul vizibil, atunci cnd ei sunt legai de un
schelet neabsorbant saturat care nu posed electroni neparticipani (de exemplu un
lan de hidrocarbur). Cei mai muli cromofori au legturi duble sau triple.
Auxocromii sunt grupri de atomi, ca de exemplu -OH, -NH2, -Cl etc., care
au electroni de valen de nelegtur (neparticipani) i care nu absorb radiaii la
> 200 nm (prezint ns absorban intens n UV ndeprtat, prin tranziii
n *).
Atunci cnd un auxocrom este ataat la un cromofor, banda de absorbie a
cromoforului se deplaseaz de obicei la lungimi de und mai mari (efect
batocromic) i are loc o intensificare a absorbiei, efect hipercromic (crete
valoarea absorbtivitii molare , la max).
Efectul auxocromic este determinat aparent de interacia electronilor de
nelegtur, electroni liberi de valen, cu norul de electroni delocalizai, ca
urmare stabilizndu-se starea excitat *.
Efectul hipsocromic const n deplasarea benzilor de absorbie la lungimi de
und mai mici, iar efectul hipocromic n micorarea absorbiei radiaiei (micorarea
lui , la o anumit lungime de und).
n tabelul 1.7 se prezint maximele de absorbie pentru unii cromofori.
Benzile de absorbie mai intense corespund unor tranziii cu probabilitate mai
mare, *, iar benzile de intensitate mai mic sunt datorare unor tranziii cu
probabilitate mai redus.
Moleculele cu doi sau mai muli cromofori izolai, de acelai tip, separai
prin mai multe legturi simple, vor absorbi radiaia practic la aceeai lungime de
und ca i moleculele cu un singur cromofor. Intensitatea absorbiei va fi ns
proporional cu numrul cromoforilor.
Cnd doi cromofori sunt separai printr-o legtur simpl, apare conjugarea
electronilor, ceea ce duce la o schimbare important a spectrului de absorbie.
83
Tipul de
compus
Exemplu
Solvent
Benzi de absorbie
max (nm) max (L mol-1cm-1)
189
900
180
10000
290
17
R
Carbonil
C=O
Aceton
Hexan
Acetaldehid
Hexan
R
O
Carbonil
RC
(aldehid)
H
O
Carboxil
RC
Acid acetic
Etanol 95%
208
32
Acetamid
Ap
220
63
Metanol
201
5000
300
100
665
20
338
OH
O
Amido
RC
NH2
Nitro
R NO2
Nitrometan
Nitrozo
RN=O
Azo
R N = N R' Azometan
Etanol 95%
intensitate redus.
Fig. 1.49. Spectrele de absorbie ale legturii peptidice n poli L-lizin pentru
diferite conformaii: A) lanul peptidic distribuit ntmpltor, B) structur ,
C) -elice.
NH
biochimie.
87
Metoda este simpl i destul de sensibil. Toate proteinele reacioneaz ntrun mod asemntor, fiind foarte mici diferene de la o protein la alta.
Prin spectrometrie n vizibil proteinele mai pot fi determinate cantitativ, pe
baza proprietii pe care o au de a lega anumii colorani, cum ar fi verde de
bromcrezol i purpura de bromcrezol. Pentru efectuarea determinrilor este necesar
un foarte strict control al pH-ului. n fig. 1.53 se prezint spectrele de absorbie ale
verdelui de bromcrezol i al compusului format cu albumina.
Cnd compusul de analizat nu absoarbe radiaii din domeniul n care se
lucreaz, se obine mai nti un derivat colorat al acestuia. De exemplu, creatinina
din snge reacioneaz cu ionul picrat, n mediu alcalin, pentru a forma un produs
colorat ce absoarbe la 490 nm, acidul uric este oxidat cu fosfotungstat n mediu
alcalin i absorbana produsului de reacie a fosfotungstatului de culoare albastr
este msurat la 680 nm.
89
Pentru a obine corect cele dou segmente de dreapt dintr-o curb de titrare,
este necesar ca legea Lambert-Beer s se respecte. Pentru exactitatea mai mare a
determinrilor se poate face o corecie a absorbanei msurate, innd seama de
diluarea probei n cursul procesului de titrare.
(1.55)
I a I 0 1 10cl
(1.56)
2,303cl
2,303cl
2,303cl
I a I o 2,303cl
...
2
!
3
!
n!
(1.57)
Pentru soluii foarte diluate i pentru care termenul cl este mai mic de 0,05
(n cazul fluorescenei) sau 0,01 (n cazul fosforescenei) putem scrie:
Ia = 2,303 Iocl
(1.58)
Deoarece termenii superiori pot fi neglijai, avnd valori foarte mici, valoarea
lui Ie va fi dat de relaia:
Ie = 2,303 Iocl
(1.59)
(pentru a nu ajunge la detector i radiaia excitatoare mult mai intens dect cea de
fluorescen).
Valabilitatea relaiei (1.59) se pstreaz, dar l trebuie nlocuit cu l' ce
reprezint grosimea stratului de soluie n direcia detectorului de radiaii.
Relaia (1.59) ne indic faptul c pentru concentraii mici, intensitatea
radiaiei de fluorescen este direct proporional cu concentraia substanei de
analizat. Deoarece valoarea intensitii radiaiei provenite de la surs, Io, se poate
modifica n timp, intensitatea radiaiei de fluorescen nu este msurat n mod
absolut, ci relativ. Determinrile se fac fa de un standard de fluorescen de
concentraie cunoscut. Curba de calibrare se construiete reprezentnd
fluorescena relativ funcie de concentraie.
Relaia (1.59) este valabil pentru concentraii mici, pn la cteva pri per
milion, depinznd de substana analizat. La concentraii mai mari, intensitatea
radiaiei de fluorescen descrete cu creterea concentraiei.
93
94
Condiii de lucru
ex.
em.
Actinomicin D
H2O2 - HO
370
420
0,10
Antimicin
pH = 1
285
355
0,10
Aspirin
CHCl3 HOAc
280
335
0,01
Codein
pH = 1
285
350
0,10
Estrogeni
pH = 13
490
546
0,10
LSD
pH = 7
325
365
0,002
Morfin
Fericianur
250
440
0,10
Fenobarbital
pH = 13
265
440
0,50
Procain
pH = 11
275
345
0,01
Chinin
pH = 1
350
450
0,002
Tetraciclin
pH = 11
390
515
0,02
Dehidrogenazele,
96
important
clas
de
enzime
Sensibilitate
(ppm)
care
efectueaz
L-lactat + NAD
piruvat + NADH + H
97
Reactiv
Saliciliden-o-aminofenol
Sensibilitate (ppm)
0,0003
Au
Rodamin B
0,02
Dibenzoil metan
0,0005
Ca
Calcein
0,20
Cr
Triazinilstilbexon
0,004
Mg
8-hidroxichinolin
0,01
Mo
Acid carminic
0,9
Zn
2,2'-metilen
dibenzotiazol
0,002
fotochimice.
Metodele fluorimetrice nu sunt indicate pentru determinarea unor
constitueni majori ai probelor, deoarece la concentraii mari exactitatea este destul
de redus. Frecvent poate s apar fenomenul de stingere a fluorescenei, datorit
temperaturii, oxigenului dizolvat, prezenei unor impuriti etc.
Domeniul de lungimi
de und, , m
0,5-16
0,25-25
0,4-23
0,15-9
1-37
1-50
0,5-35
0,5-11,5
0,2-6,2
0,2-6,5
16-300
Domeniul de numere
de und, ~ , cm-1
20000-625
40000-400
25000-435
6670-1110
10000-270
10000-200 (180)
20000-286
20000-870
50000-1613
50000-1538
625-33
Fig. 1.58. Corelaii simple ale vibraiilor de grup cu regiuni ale domeniului IR.
105
Infraro u
C=O
C=O
n cazul fluorescenei. Emisia radiaiei este instantanee iar spectrul obinut este sub
forma unor benzi nguste.
Pentru a obine spectrul Raman de rezonan se folosete o radiaie laser a
crei frecven este egal sau apropiat de frecvena corespunztoare unei tranziii
electronice.
Avantajul efectului Raman de rezonan const n marea sensibilitate i
selectivitate cu care poate fi studiat structura cromoforilor. Liniile Raman de
rezonan pot avea intensiti de 102-106 ori mai mari dect liniile Raman
obinuite, iar spectrul obinut este mai simplu, deoarece sunt intensificate numai
liniile corespunztoare vibraiilor cromoforilor. Se pot obine astfel informaii
detaliate privind modurile de vibraie ale cromoforilor ce au benzi de absorbie n
apropierea lungimii de und a radiaiei excitatoare. Aceast selectivitate apare, de
exemplu, n cazul proteinelor hemului, unde benzile Raman de rezonan se
datoresc numai vibraiilor cromoforului tetrapirolic.
108