Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
COSMIN POP
Coordonator tiinific
Prof. Dr. Carmen Socaciu
Cluj Napoca
2014
Cuprins
INTRODUCERE ............................................................................................................................ I
PARTEA I ....................................................................................................................................VI
Capitolul 1 ....................................................................................................................................VI
PLANTE MEDICINALE CU POTENIAL ANTIMICROBIAN .................................................VI
Capitolul 2 ....................................................................................................................................VI
TEHNOLOGII MODERNE DE USCARE A EXTRACTELOR DE PLANTE..............................VI
Capitolul 3 ................................................................................................................................ VIII
MICROORGANISME PATOGENE DIN ALIMENTE,............................................................. VIII
PARTEA A DOUA.................................................................................................................... VIII
CERCETRI PROPRII.............................................................................................................. VIII
Capitolul 4 ................................................................................................................................. VIII
OBINEREA I CONCENTRAREA EXTRACTELOR............................................................ VIII
4.1. STUDIU EXPERIMENTAL 1. OBINEREA I CARACTERIZAREA EXTRACTELOR
APOASE I HIDROACLCOOLICE DIN 7 PLANTE MEDICINALE INDIGENE CU
POTENIAL ANTIMICROBIAN ............................................................................................. VIII
4.1.1 Materiale i metode ..............................................................................................................IX
4.1.1.1. Obinerea extractelor brute din cele 7 plante investigate.................................................... X
4.1.1.2. Metode de analiz a extractelor ........................................................................................XI
Analiza spectrometric UV-Vis, determinarea fenolilor totali........................................................XI
4.1.1.3. Analiza microbiologic semicantitativ, pe mediu solid .................................................. XII
4.1.2. Rezultate i discuii............................................................................................................ XII
4.1.2.1. Descrierea extractelor apoase i hidroalcoolice ............................................................. XII
4.1.2.2. Analiza spectrometric UV-Vis, i concentraia de compui fenolici .............................. XIII
4.1.2.3.Evaluarea comparativ a activitii antimicrobiene a extractelor, pe mediu solid cu agar
...................................................................................................................................................XIV
4.1.3 Concluzii ...........................................................................................................................XVI
4.2. STUDIUL EXPERIMENTAL 2. OBINEREA I CARACTERIZAREA EXTRACTELOR
DE SALCIE VSC I FRUNZE DE NUC ...............................................................................XVII
4.2.1.2. Spectru UV-Vis i determinarea concentraiilor de compui fenolici totali ....................XVII
4.2.1.3. Analiza cromatografic HPLC i detecie cu fotodiod (HPLC_DAD)........................ XVIII
4.2.1.4. Analiza microbiologic pe mediu solid (semi-cantitativ) i lichid (cantitativ) .......... XVIII
4.2.1.5. Analiza metalelor din extractele apoase de salcie, vsc i nuc..................................... XVIII
4.2.3. Rezultate i discuii...........................................................................................................XIX
4.2.3.1. Caracterizarea spectrelor UV-Vis i a cromatogramelor HPLC-DAD a celor trei extract
...................................................................................................................................................XIX
4.2.3.2. Evaluarea semicantitativ a activitii antimicrobiene pe mediu solid ............................ XX
4.2.3.3. Evaluarea cantitativ a activitii antimicrobiene pe mediu lichid ................................XXII
Dezvoltarea microorganismelor pe mediu lichid ........................................................................XXII
4.2.3.4. Analiza metalelor din extractele brute de salcie, nuc i vsc ....................................... XXIV
4.2.5. Concluzii ........................................................................................................................ XXV
INTRODUCERE
Industria alimentar precum i industria farmaceutic sunt ntr-o continu evoluie,
aprnd pe pia noi porduse, folosind tehnologii tot mai avansate i mai rapide. Odata cu
creterea produciei i complexitarea proceselor tehnologice o problem foarte important o
are imerea sub control a microorganismelor care pot cu uurin contamina prosusele i
liniile tehnologice. n prezent produsele folosite pentru indeprtarea microorganismelor sunt
artificial produse n industrie, ele necesit a fi stocate n locuri speciale, folosirea lor se face
cu mult grij i atenie deoarece pot pune n pericol sntatea uman, iar dup utilizare
apele provenite n urma procesului de dezinfectare conin cantiti mari de acizi, produi
alcalini i sod, necesit tratate nainte de a fi deversate n laucuri, ruri sau iazuri.
Produsele realizate din extracte de plante cu ajutorul tehnologiilor inovatoare, care
sunt mai prietenoase cu mediul nconjurtor dect cele chimice, i doresc substituirea
produselor chimice clasice.
Prin aceast lucrare se vrea realizarea unei alternative la dezinfectanii clasici i
nlocuirea lor cu biodezinfectante care nbin tehnologile avansate de procesare (uscare,
imobilizare, stocare) cu extracia clasic din plante, realiznd n final un produs pentru
industria alimentar ct i pentru utilizatorii caznici. Noul produs va fi mult mai uor de
manipulat i stocat, nu va necesita condiii speciale pentru transport, avnd un volum redus
fiind sub form de pudr.
Literatura de specialitate a demonstrat faptul c foarte muli compui care se pot
extrage din diferite plante au efecte duntoare mpotriva culturilor de microorganisme,
unele microorganisme sunt rezistente la antibiotice, dar sunt foarte repede eliminate de
subtanele active gsite n plante.
Aadar referitor la climatul local i la diversitatea mare de plante care se pot gsi pe
teritoriul Romniei am ales un numr de plate care se ntalnesc i se utilizeaz n diferite
domenii i aplicaii. Plantele selectate sunt plante ornamentale Tagetes erecta (Aztec
marigold), Tagetes patula (French marigold), plante care se folosesc n domeniul culinar
(Coriandrum sativum (coriandru), Rosmarinus officinalis (rosmarin), Ocimum basilicum
(busuiocul) i Satureja Montana (cimbru), dar i plante slbatice Urtica dioica (urzic),
Chelidonium majus (rostopasc).
manipulat cu grij, pentru c poate s produc explozii urmate de distrugeri sau rniri
(Araruna et al., 2013). Usctorul n pat fluidizat se folosete n industria alimentar pentru a
usca i acoperii diferite produse alimentare, dar se regsete i n industria farmaceutic
(Desobry et al., 1997; Jaros and Pabis, 2006).
Uscarea prin crioevaporare, cunoscut i sub denumirea de liofilizare, ndeprteaz
apa prin nghearea produsului la presiuni sczute, proces care are patru etape: pre-tratearea,
nghearea, uscarea primar i uscarea secundar (Patapoff et al., 2002; Builders et al.,
2010). Pre-tratarea se folosete pentru a proteja diferitele componente ale produsului
mpotriva formrii cristalelor de ghea care pot distruge produsul. Procesul de ngheare
este lent, temperturile sunt cuprinse ntre 500C i 800C, la o presiune de civa miliBarr
(Hottot et al, 2004). Uscarea primar ndeparteaz pn la 95% din cantitatea de ap
existent n produs. Sub aceste condiii apa trece din form solit n form gazoas i poate
s dureze pn la 2 3 zile. Procesul de uscare secundar este folosit pentru a elimina apa
care este legat chimic de produs (Pathomwichaiwat et al., 2012). Liofilizarea se folosete
pentru materialele sensibile la temperaturi ridicate, cum ar fi proteinele, enzimele,
microorganismele i plasma sanguin, este un procedeu costisitor, dar protejeaz diferitele
componente active.
Pentru a confirma faptul c produsul rezultat are efect antrimicrobian s-au folosit
cinci tipuri de microorganisme (E. coli, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes,
Bacillus cereus i Salmonella).
Scopul prezentei lucrri a fost utilizarea unor tehnologii moderne de uscare
(atomizare, uscare n pat fludizat i liofilizare) a unor extracte de plante din flora indigen,
avnd potenial antibacterian cunoscut.
Obiectivele principale ale studiilor experimentale au fost:
1. Obinerea de extracte apoase i hidroalcoolice din 7 tipuri de plante indigene.
2. Caracterizarea compoziiei n compui fenolici a extractelor, amprenta
spectroscopic, cromatografic i activitatea antioxidant.
3. Evidenierea aciunii antimicrobiene a extractelor prin teste calitatitive i
cantitative pe medii de cultur nsmnate cu diferite tipuri de bacterii.
III
alcoolic. Fiind investigat cea mai ecologic i rapid metod de extracie, dar i care
plante au avut cea mai mare cantitate de componeni activi cu efect antibacterian.
Capitolul 5 cuprinde date despre modul de obinere al pudrelor folosind cele trei
metode de evaporare a apei, precum i comportamentul maltodextrine (MD), srii (S)
i al alactozei (L), matrici supuse la condiii de evaporare diferite.
Capitolul 6 include datele obinute privind eficiena antimicrobian a pudrei de
salcie fixat pe maltodextrin (MD) sau sare (S)
O parte a acestei teze de doctorat a fost realizat la VLB Berlin un institut de
cercetare pentu produse alcoolice i non alcoolice din Germania, n colaborare cu
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar, Cluj - Napoca, Romnia, ca
urmare a obinerii unui grant pus la dispoziie de Deutsche Bundesstiftung Umwelt (DBU
Fundaia German de Mediu) n perioada septembrie 2011 - august 2012.
PARTEA I
Capitolul 1
PLANTE MEDICINALE CU POTENIAL ANTIMICROBIAN
n capitolul 1 sunt prezentate plantele medicinale utilizate pentru studiul experimental
fcndu-se referire la caracteristicile morfo-fiziologice ale plantelor Tagetes sp (Tagetes erecta
(Aztec marigold) i Tagetes patula (French marigold)), Urtica dioica (Urzica), Chelidonium majus
(Rostopasc), Coriandrum sativum (Coriandru), Rosmarinus officinalis (Rozmarin), Ocimum
basilicum (Busuiocul), Satureja Montana (Cimbru), Viscum album (Vsc), Juglans regia (Nuc) i
Salix alba (Salcie) i la compuii bioactivi din acestea.
Capitolul 2
TEHNOLOGII MODERNE DE USCARE A EXTRACTELOR DE PLANTE
n capitolul II sun prezentate tehnologiile de uscare a extractelor de plante ntr-un mediu
controlat (la temperaturi sczute sau ridicate), cu scopul de a pstra intacte componentele
fizicochimice bioactive i proteinele (Desobry et al. 1997; Hottot et al., 2004; Zhao et al., 2013;
Zhang, et al. 2010).
Atomizarea este tehnologia cea mai folosit n industria alimentar i farmaceutic.
Tehnologia funcioneaz n proces continuu, temperatura de uscare i prelucrarea produsului
ramne constant, fiind posibile ajustri de parametri pe perioada uscrii. (Masters, 1991; De Souza
et al. 2009)
Uscarea n pat fluidizat este o metod protectoare, utiliznd aerul cald care intr n contact
cu produsul de jos n sus, uscnd, aglomerand sau concentrnd diferite produse (Grace et al., 2008),
la o temperatur scazut (max. 800C), putndu-se folosi i la extracte alcoolice. Acest preoces este
uor de controlat i este foarte uor s trecem de la studiu de laborator la producie. Produsul obinut
este sub forma unei pudre fine, care trebuie manipulat cu grij, ea putnd produce explozii urmate
de distrugeri sau rniri (Araruna et al., 2013). Uscarea n pat fluidizat se folosete n industria
alimentar pentru a usca i acoperii diferite produse alimentare, dar ea se regsete i n industria
farmaceutic (Desobry et al., 1997; Jaros and Pabis, 2006).
VI
Uscarea prin crioevaporare, cunoscut i sub denumirea de liofilizare, ndeprteaz apa prin
nghearea produsului la presiuni sczute, proces care are patru etape: pre-tratearea, nghetarea,
uscarea primar i uscarea secundar (Patapoff et al., 2002; Builders et al., 2010). Pre-tratarea se
folosete pentru a proteja diferitele componente ale produsului mpotriva formrii cristalelor de
ghea care pot distruge produsul. Procesul de ngheare este lent, temperturile sunt cuprinse ntre
500C i 800C, la o presiune de civa miliBarr (Hottot et al, 2004). Uscarea primar ndeparteaz
pn la 95% din cantitatea de ap existent n produs. n aceste condiii apa trece din form solit n
form gazoas i poate s dureze pn la 2 3 zile. Procesul de uscare secundar este folosit pentru
a elimina apa care este legat chimic de produs (Pathomwichaiwat et al., 2012). Liofilizarea se
folosete pentru materialele sensibile la temperaturi ridicate, cum ar fi proteinele, enzimele,
microorganismele i plasma sanguin, este un procedeu costisitor, dar protejeaz diferitele
componente active.
Plantele cum ar fi nucul, vscul i salcia sunt cunoscute a fi bogate n derivai polifenolici cu
activitate anti-microbian (Niamh et al., 2009; elik and Wendel, 2005; Pop, 2013). Flavonoidele
fromeaz o grup mare de compui chimici din familia derivaiilor polifenolici, cu potenial
antimicrobian (incluznd acizii fenolici, flavone i izoflavone, dihidroflavone) (Day and Harborne,
1993; Harborne and Williams, 2000; Cardonaa et al., 2013; Neveu et al., 2010). Polifenolii sunt
prezeni n diferite plante medicinale, inclusiv n fructe, cereale, ceai, cafea, vin (Sarica et al.,
2005), dar i n plante ornamentale (Areej et al., 2013; Couto et al.,2012), fiind dovedit faptul c au
activiti anti-microbiene (Nichenametla, 2006).
Polifenolii existeni n diferite plante au un efect anti-inflamator,
protector mpotriva
stresului oxidativ, efect care este corelat cu efectul de prevenie al arterosclerozei i al altor maladii
cardiovasculare (Deepinderjeet and Sachin, 2013).
Atomizarea este un proces de evaporarea al apei folosind un flux de aer cald. Aparatul
pulverizeaz o perdea fin de vapori, vapori care intr n contact cu fluxul de aer sunt transformai
ntr-o pudr fin, care se separ gravimetric ntr-un ciclon.
Procesul de liofilizare folosete pentru evaporarea apei temperaturi joase (-600C) i presiuni
care ajung aporape la valoare vidului (milibari). Combinaia de temperatur i presiune sczut face
ca apa aflat n soluia procesat s se evapore, rezultnd un produs lipsit de ap.
VII
Capitolul 3
MICROORGANISME PATOGENE DIN ALIMENTE,
PARTEA A DOUA
CERCETARI PROPRII
Capitolul 4
OBINEREA I CONCENTRAREA EXTRACTELOR
4.1. STUDIUL EXPERIMENTAL 1. OBINEREA I CARACTERIZAREA
EXTRACTELOR APOASE I HIDROACLCOLICE DIN 7 PLANTE MEDICINALE
INDIGENE CU POTENIAL ANTIMICROBIAN
Considernd date de literatur care indic aciunea antimicrobian a unor plante medicinale
indigene, obiectivele acestui studiu experimental au fost:
1. Obinerea unor extracte apoase i hidroalcoolice din 7 plante medicinale indigene
2. Analiza spectofotometric UV-Vis a extractelor i determinarea coninutului n compui
fenolici
3. Evaluarea semicantitativ a efectului antimicrobian.
VIII
Tipul
Codificare
extractului
Apos
011
Hidroalcoolic
021
Apos
012
Hidroalcoolic
022
Apos
013
Hidroalcoolic
023
Apos
014
Hidroalcoolic
024
Apos
015
Rostopasc (Chelidonium
majus)
Coriandru (Coriandrum
sativum)
IX
Rozmarin (Rosmarinus
Hidroalcoolic
025
Apos
016
Hidroalcoolic
026
Apos
017
Hidroalcoolic
027
Apos
018
Hidroalcoolic
028
officinalis)
Busuioc
(Ocimum basilicum)
Tabel 4.2
Cantitatea de extract total, nainte i dup recuperarea etanolului i procentul de concentrare a
extractului (%)
Extract final
Procent de
Extract iniial
( dup eliminarea
concentrare a
ml
etanolului) ml
extractului (%)
452
215
47,57
330
127
38,48
355
132
37,18
638
293
45,92
660
347
52,58
570
307
632
352
360
160
53,86
55,70
44,44
S-a trasat curba de etalonare prin reprezentarea grafic a absorbanelor citite n funcie de
concentraia de acid galic (mg/ml).
Pentru determinarea concentraiei de compui fenolici din extractele (011 018 i 021 028) concentrate s-a procedat similar, la determinare utilizndu-se 1 ml extract.
4.1.1.3. Analiza microbiologic semicantitativ, pe mediu solid
Reactivii utilizai au fost: mediul de cultur Murashige-Skoog (mediu MS) i ap distilat steril.
Culturile de microorganisme E. coli i Bacillus subtilis au provenit din Laboratorul de
microbiologie al Centrului de cercetare Biochimie i biotehnologie agroalimentar.
Materiale utilizate: hot cu flux laminar, plci Petri, incubare termostat, autoclav,
spectometru Nanodrop.
Metoda utilizat e bazat pe proprietatea substanelor antimicrobiene de a difuza ntr-un
mediu de cultur solid nsmnat cu o cultur bacterian.
Mediul de cultur utilizat a fost Mueller-Hinton (30% extract carne, 1,75% casein, 0,15%
amidon, 1,7% agar), fr glucoz i nesuplimentat. S-au folosit microorganisme provenite din
cultrua pur avnd o concentraie de aproximativ 0,5 pe scala MacFarland.
Tehnic de lucru: mediul topit i rcit la 50 C se toarn n plci Petri ntr-o grosime de 4
mm; dup solidificare se nsmneaz cu suspensie bacterian pe toat suprafaa
plcii. Cu
o pens sau depus microcomprimatele cu extractele (011 018 i 021 - 028) concentrate. Se
incubeaz la 3537 C pentru 1824 ore i se msurat diametrul zonei de inhibiie cu ajutorul unei
rigle.
Valorile citite s-au comparat cu tabelele de interpretare (n mm), tulpina bacterian
apreciindu-se ca fiind sensibil sau rezistent la extractul testat. (Zarnea G., 1984)
4.1.2. Rezultate i discuii
4.1.2.1. Descrierea extractelor apoase i hidroalcoolice
Fig. 4.1. Aspectul extractelor apoase (011 018) numerotate de la stnga la dreapta
XII
Fig. 4.2. Aspectul extractelor hidroalcoolice (021 028) concentrate, numerotate de la stnga
la dreapta
4.1.2.2. Analiza spectrometric UV-Vis, i concentraia de compui fenolici
Tabel 4.3
Absobiile UV-Vis ale principalilor acizi fenolici din plantele studiate
Compus bioactiv
gallic
217, 272
protocatechuic
gentisic
caffeic
vanillic
syringic
p-coumaric
sinapic
238, 326
feruilic
XIII
Tabel 4.4
Cantitate de polifenoli totali din extractele apoase i hidroalcoolice
mg Polifenoli/
Cod extract
1ml extract
0.078
0.106
0.065
0.085
0.042
1,543
2,236
2,484
0,591
0.032
0,873
1,039
0.044
8,216
7,522
13,939
XIV
Tabel 4.5
Zona de inhibiie bacterian a extractelor apoase
E. coli
Bacillus subtilis
nefiltrat
nefiltrat
1:1
1:1
0,7
0,7
Din tabelul 4.5 reiese c extractele apoase (011, 012, 014, 015, 016, 018) nu au inhibat
creterea microorganismelor. Extractele (013 si 017) au manifestat inhibiie antibacterian selectiv,
astfel 013 a avut aciune asupra Bacillus subtilis (0,7 cm), dar nu a avut aciune asupra E. coli, n
timp ce 017 a inhibat creterea E. coli (0,7 cm), dar nu a inhibat creterea Bacillus subtilis.
Tabel 4.6
Zona de inhibiie a extractelor hidoalcoolice
E. coli
Planta
Bacillus subtilis
nefiltrat
filtrat
nefiltrat
filtrat
1:1
1:1
1:1
1:1
1:5
0,7
0,6
0,7
1,2
1,4
0,7
1,3
0,7
0,8
0,9
Conform tabelului 4.6 au manifestat inhibiie bacterian asupra Bacillus subtilis, extractele
022 (0,7 cm), 026 (1,4 cm) i 027 (1,3 cm) sub form filtrat n raport 1:1, extractele nefiltrate au
avut inhibiie bacterian semnificativ mai slab 026 (1,2 cm) i 028 (0,9 cm).
n cazul E. coli inhibiia bacterian a fost observat n cazul extractelor 026 (0,6 cm) raport
1:1 nefiltrat, 028 (0,8 cm) nefiltrat raport 1:1. Extractul filtrat 026 (0,7 cm) raport 1:1 a manifestat
aciune antimicrobian n cazul E. coli.
Analind rezultatele obinute, putem aprecia c extractul hidroalcoolic de rozmarina a avut
cel mai bun efect antimicrobian mpotriva bacilus subtilis, iar busuiocul a manifestat aciune
antibacterian similat cu acesta.
De asemenea se poate remarca faptul c extractele filtrate au avut eficien antibacterian
mai ridicat n cazul bacilus subtilis.
XV
Gradele diferite de inhibiie bacterian a biocomponeilor asupra celor dou bacterii sunt
influenate de structura bacterian. Astefel E. coli avnd mebrana bacterian de natura
lipopolizaharidic a impiedicat trecerea compuilor spre interiorul celulei, fiind puin afectat de
biocomponei.
4.1.3 Concluzii
1. Analiza UV-Vis a extractelor din plantele studiate confirm absorbii mai puternice n
cazul extractelor hidroalcoolice dact n cazul extractelor apoase, acestea fiind caracterizate de
prezena acizilor fenolici.
2. Diferena de extracie a compuilor bioactivi (spectrele UV-Vis) este datorat polaritii
diferite a solvenilor utilizai la extracie.
3. Coninutul de polifenoli totali a fost mai ridicat n cazul extractelor hidroalcoolice de
rozmarin, busuioc i crie.
4. La finalizarea investigaiilor se poate afirma c extractele hidroalcoolice au avut efecte
antibacteriene mai intense dect extractele apoase.
5. Extractele hidroalcoolice din Rosmarinus officinalis, Ocimum basilicum i Satureja
Montana au dat rezultate bune, inhibnd dezvoltarea bacteriana a E coli sau Bacillus subtilis. n
general efectul a fost mai intens asupra bacteriei Bacillus subtilis.
6. Variantele de extracte filtrate au fost mai active, cel mai intens efect antibacterian fa de
Bacillus subtilis fiind observat la extractele filtrate 026 i 027, Rosmarinus officinalis i Ocimum
basilicum.
7. Rezultatele cele mai bune, cu efect antibacterian pe ambele tulpini de E coli i Bacillus
subtilis au fost observate cu extractele hidroalcoolice de cimbru Satureja Montana (028) i
Rosmarinus officinalis (026).
XVI
Codificare
Vsc
031
(Viscum album)
032
033
Mg Polifenoli/ 1 ml extract
Salcie
2,6
Vsc
Nuc
1,21
XVII
XVIII
Tabel 4.9
Condiii analitice generale pentru spectroscopia de absorbie atomic n flacr
Lungime
Element
de und
Tipul de flacr
(nm)
Clorur
Interferene
Corecie
de lantan
principale
de fond
Fe
Deuteriu
Cadmiu
228,8
Aer/acetilen oxidant
Nu
Cobalt
240,7
Aer/acetilen oxidant
Nu
Deuteriu
Cupru
324,8
Aer/acetilen oxidant
Nu
Deuteriu
Plumb
217,0
Aer/acetilen oxidant
Nu
Deuteriu
Mangan
279,5
Fier
248.3
Nichel
Zinc
Aer/acetilen sau
Da
Fe, Si
Deuteriu
Aer/acetilen oxidant
Nu
Al, Mn
Deuteriu
232,0
Aer/acetilen oxidant
Nu
Fe
Deuteriu
213,9
Aer/acetilen oxidant
Nu
acetilen/N2O reductoare
Deuteriu
XIX
8 si 9)
i theaflavine
(P10). Datele obinute sunt n concordan cu cele din baza internaionala Duke.
Extractul de vsc a fost caracterizat ca fiind bogat n quercetine i theaflavine.
800
400
300
8
1
100
5 7
6
10
9
10
15
20
25
300
45
200
400
400
9
8 10
6
7
13
300
200
11
12
100
0
0
5
500
Absorbanta(mAU)
500
200
500
Absorbanta(mAU)
Absorbanta (mAU)
600
600
600
700
100
0
10
15
20
25
30
Timpderetentie(min)
10
15
20
25
Timpderetentie(min)
quinic;
glucozidic;
4-quercetin
rhamnozid;
5-kaemferol
6-kaemferol
glucozid;
3- eriodictiol
2-
glucozid;
7-glucozid;
4-
7-glucuronid;
5-
9-quercetin
3- theaflavin 3-galate
3-glucozid;
9-quercetin
arabinozid;
10-theaflavin
galate
glucozid;
isorhamnetin
Fig. 4.2. Spectre comparative HPLC DAD/MS la 280 nm ale extractului de nuc, salcie i vsc
4.2.3.2. Evaluarea semicantitativ a activitii antimicrobiene pe mediu solid
de 1:1 i 1:5
Extract de nuc
Extract de salcie
testat
1:1
1:5
1:10
1:1
1:5
1:10
E. coli
0.1
0.8
Staphylococcus
1.1
Bacillus cereus
2.72
2.1
0.9
Salmonella
0.3
0.8
3.08
2.6
0.5
aureus
enteritis
Listeria
monocytogenes
Datele prezentate n tabelul 4.10 sugereaz faptul c n cazul extractului de nuc (1:1) zona de
inhibiie bacterian a fost de 0,8 cm, n cazul listeriei; diluia 1:1 a manifestat slab inhibiie
bacterian mpotriva E.colisi Salmonella enteritis (0,1 respectiv 0,3 cm), n timp ce inhibiia nu a
fost observat la Bacillus cereus i Staphylococcus aureus. Diferenele aprute la zonele de inhibiie
sunt datorate diferenelor de structur membranar a celor dou bacterii.
Extractul de salcie a avut influen negativ asupra creterii bacterinene, n cazul Listeria
monocytogenes (dil 1:1- 3,08 cm) i Bacillus cereus (dil 1:1- 2,72 cm). Se poate observa c
extractul de salcie a avut o inhibiie slab asupra salmonela, stafilococ i E. coli. (0, 1,1 i 0,8 cm).
n cazul diluiei 1:5 i 1:10 s-au observat zone de inhibiie doar n cazul Bacillus cereus i Listeria
monocytogenes. Slabul efect antibacterian, manifestat de extractul de nuc poate fi atribuit
concentraiei slabe de polifenoli totali, comparativ cu extractul de salcie (de trei ori).
XXI
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
S. aureus
1:1
1:5
0
8 24
1:10
Absorbance 600 nm
Absorbance 600 nm
S. aureus
1:1
1:5
0 2 4 6 8 24
Time hours
1:10
Time hours
Fig. 4.6. Dinamica creterii la Staphylococcus aureus n vitro utiliznd trei concentraii ale
extractelor de Juglans regia i Viscum album
Braga i Col., (2005) au folosit Punica granatum pentru a inhiba dezvoltare S. aureus, la fel
cum i Zuo i col. (2008) au demonstrat o diminuare a creterii lui Staphylococcus utiliznd extracte
din plante medicinale.
Vscul care are un coninut destul de sczut n acizi fenolici; nu are nici un efect mpotriva
lui Staphylococcus aureus.
Figura 4.7 prezint curba de cretere pentru Listeria monocytogenes crescut n vitro i
adaugnd extracte de Juglans regia and Viscum album n diferite concentraii( 1:1, 1:5 i 1:10),
arat o mic inhibare a acesteia. Doar extractul de nuc (1:1) arat o inhibare mai pronunat a
Listeria monocytogenes, rezultate similare au fost raportate de (Alvarez et al. 2006; Zuo et al.,
2008). Vscul a avut un efect inhibitor scazut asupra listeriei.
XXII
Absorbance 600 nm
Absorbance 600 nm
0.3
0.25
0.2
Listeria
0.15
1:1
0.1
1:5
0.05
1:10
0.25
0.2
Listeria
0.15
0.1
1:1
0.05
1:5
1:10
0 2 4 6 8 24
0 2 4 6 8 24
Time hours
Time Hours
Fig. 4.7. Dinamica creterii la Listeria monocytogenes n vitro utiliznd trei concentra ii ale
extractelor de Juglans regia i Viscum album
Extractul de nuc a reusit s inhibe dezvoltarea Bacillus cereus pe toata perioada
investigaiei, rezultatele cele mai bune sunt date de dil. 1:1 (Fig 4.7), rezultate similare fiind
raportate i de Hyejung et al, n 2013.
Extractul de vasc a avut un efect mai slab al inhibitiei, dar un rezultat pozitiv a fost observat
la dil. 1:1 care a reuit la final s stopeze cretera microorganismului, rezultate similare au fost
raporate i de Gutirrez-Larranzar et al., 2013.
Ansorbance 600 nm
Ansorbance 600 nm
0.300
0.250
0.200
B. Cereus
0.150
1:1
0.100
1:5
0.050
0.000
1:10
0.300
0.250
0.200
B. Cereus
0.150
1:1
0.100
1:5
0.050
1:10
0.000
0 2 4 6 8 24
0 2 4 6 8 24
Time hours
Time hours
Fig. 4.8. Dinamica creterii la Bacillus cereus n vitro utiliznd trei concentra ii ale
extractelor de Juglans regia i Viscum album
Extractul de nuc inhib creterea lui E. coli (Fig 4.9) ntr-o manier controlat, rezultate
similare fiind observate i de (Wong i Kitts 2006), comparativ cu extractul de vsc care are un
efect mai slab al inhibiiei (Fig 4.9)
XXIII
0.3
Absorbance 600 nm
Absorbance 600 nm
0.3
0.25
0.2
E. Coli
0.15
1:1
0.1
1:5
0.05
1:10
0
0
0.25
0.2
E. Coli
0.15
1:1
0.1
1:5
0.05
1:10
8 24
0 2 4 6 8 24
Time hours
Time hours
Fig. 4.9. Dinamica creterii la E coli n vitro utiliznd trei concentra ii ale extractelor de
Juglans regia i Viscum album
Dup 24 de ore de investigare n Fig 4.10 se poate observa cum extractul de nuc a inhibat
dezvoltarea Salmonella enteritidis. n studii recente s-a demonstrat o inhibiie a Salmonella cu
ajutorul unui extract din Vaccinium corymbosum (Shen et al., 2014).
Vscul are un elect slab de inhibare al salmonelei. Studii similare realizate cu extrat de Aloe
0.25
Absorbance 600 nm
Absorbance 600 nm
Salmonela
0.10
1:1
0.05
1:5
1:10
0.00
0.30
0.25
0.20
Salmonela
0.15
1:1
0.10
1:5
0.05
1:10
0.00
0 2 4 6 8 24
0 2 4 6 8 24
Time hours
Time hours
Fig. 4.10. Dinamica creterii la Salmonella n vitro utiliznd trei concentra ii ale extractelor
de Juglans regia i Viscum album
4.2.3.4. Analiza metalelor din extractele brute de salcie, nuc i vsc
Valorile concentraiilor de metale, exprimate n mg/L (ppm) i g/L (ppb) sunt redate n
Tabelul 4.11.
XXIV
Tabel 4. 11
Valorile concentraiilor metalelor detectate n extracte exprimate n ppm ( mg/l)
Element/Plant
Ppm (mg/l)
Salcie
Nuc
Vsc
Li
0.006
0.027
0.032
Na
5.511
8.850
17.501
Mg
119.091
403.671
242.748
Ca
640.561
19.045
316.688
Mn
23.841
7.983
61.869
Fe
4.456
1.502
2.689
Co
0.039
0.005
0.052
Ni
0.064
0.125
0.777
Cu
0.215
0.267
0.832
Zn
23.085
2.780
5.057
Pb
Cd
<0.001
0.216
<0.001
0.002
<0.001
0.035
4.2.5. Concluzii
Studiul cofirm c extractele apoase din nuc (Juglans regia), vsc (Viscum album) i salcie
(Salix alba) au un bun efect antimicrobian. Toate cele trei extracte au un coninut ridicat de derivai
polifenolici, prezentai n urma analizelor HPLC. Dupa investigarea efectelor pe agar, extractul de
salcie a aratat cel mai mare efect antimicrobian n special mpotriva Listeria monocytogenes i
Bacillus cereus.
Evaluarea cantitativ antimicrobian, n mediu lichid i msurnd absorbana amestecului de
microorganisme din extract, a dovedit c n funcie de concentraia de polifenoli i derivai fenolici,
activitatea difer ntre extractul de nuc, vsc i salcie, acestea reuind s inhibe creterea
microorganismelor.
n concluzie, extractul apos din salcie, nuc i vsc, se pot utiliza ca un conservat natural sau
un bio-dezinfectant, mpotriva unui numr mare de microorganisme, care se pot ntalni n produsele
alimentare. Aceste extracte pot fi utilizate ca ingrediente pentru producerea unor produse folosite
pentru obtinerea unor biodezinfectante.
XXV
Capitolul 5
OBINEREA I CARACTERIZAREA FIZICO CHIMIC A PUDRELOR
OBINUTE, COMPARATIV PRIN CELE TREI TEHNICI DE USCARE
Scopul cercetrilor experimentale a fost obinerea i caracterizarea unor pudre obinute,
din extracte de nuc (Juglans regia), vsc (Viscum album) i salcie (Salix alba), utiliznd diferite
metode de uscare (atomizare, ucare n pat fluidizat i liofilizare).
Obiectivele studiului:
1. Utilizarea a trei metode diferite de uscare (atomizare, ucare n pat fluidizat i liofilizare)
pentru a obine pudre, selectnd cea mai eficient metod de uscare, imobilizare i
conservare a activitii antioxidante i antimicrobiene a polifenolilor prezeni n pudre,
provenii din cele trei extracte de plante
2. Determinarea aciunii antioxidante a pudrelor obinute, comparativ cu extractele crude de
nuc (Juglans regia), vsc (Viscum album) i salcie (Salix alba)
3. Analiza screening prin spectrometrie n Infrarosu ( FTIR) a pudrelor, comparativ cu
extractele crude de nuc (Juglans regia), vsc (Viscum album) i salcie (Salix alba)
5.1. MATERIALE I METODE
5.1.1. Obinerea extractelor i analiza spectrometric a compuilor fenolici
Descris la subcapitolul 4.1.1.2.
5.1.2. Determinarea activitii antioxidante (DPPH)
5.1.3. Analiza spectrometric FT-IR
Toate extractele crude i pudrele rezultate au fost caracterizate cu ajutorul spectofotometriei
IR, n domeniul MIR (600-4000cm -1). nregistrarea spectrelor de absorbie FTIR s-a fcut direct
prin utilizarea spectofotometrului Shimadzu IR Prestige -21 cu accesoriu de diamant de tip ATR
orizontal (Horizontal Attenuated Total Reflectance) cu o singur reflexie. S-au utilizat volume de
10
und 600-4000 cm
-1
XXVI
Fig. 5.1. Atomizorul Mobil Minor de la GEA, utilizat n experimente. 1 camer de uscare,
2 ciclonul folosit pentru colectarea pulberilor, 3 ventilatorul care absoarbe particulele din
camera de uscare.
Fig. 5.2. Usctorul n pat fluidizat utilizat n experimente: 1 - camera unde are loc uscarea,
XXVII
XXVIII
Atomizare (SD)
Liofilizare (FD)
Proces
de
1800C
uscare
450C
Debit
finala
50C, Temperatura
380
800C
de
uscare:
400C
Debit pompa: 28 ml/min
ml/min
Matric
e
MD
LA
LA
Salcie
(Salix
alba)
Vsc
(Viscu
m
album)
Nuc
(Juglan
s regia)
Fig. 5.4. Aspectul pudrelor obinute din trei extracte de nuc, salcie i vsc, imobilizate pe
maltodextrin (MD), lactoz (LA) i sare (S) utilizand atomizarea (SD), uscarea n pat fluidizat
(FB) i liofilizarea (FD)
Extract
cI
SD
FB
(mg
(mg GAE /
FD
ml FD
ml
MD
LA
extrac
LA
MD
LA
2,44
2,44
2,44
2,44
1,32
1,61
1,51
1,88
1,00
1,00
1,00
1,00
0,51
0,55
0,51
0,66
1,19
1,19
1,19
1,19
0,70
0,82
0,70
0,71
t)
Salcie
2,60
cD
= 2,44 -
(Salix
2,44
alba)
cR =1,53
Vsc
1,00
cD
1,50
= 1,00 -
(Viscum
1,00
album)
cR =0,82
Nuc
1,21
cD
0,52
= 1,19 -
(Juglans
1,19
regia)
cR =0,60
0,70
XXX
Zona 1
Zona 2
Zona 3-4
Zona 5
600-970 cm-1
1000-1250 cm-1
1300-1700 cm-1
2900-3300 cm-1
Salcie
1041, 1232
2937, 3238
Nuc
1647, 1732
2935, 3278
2933, 3238
871
590, 605, 632, 786, 1047, 1215
Vsc
866
mg GAE/1 ml pudra
M Trolox/1ml
Raport
dizolvata
pudra dizolvata
Polifenoli/
activitate
antioxidant
Salcie(SD)
pe
matrice
1,501
13,55
9,02
0,698
6,02
8,62
Vsc(SD) pe matrice MD
0,520
5,24
10,07
Salcie(FD) pe matrice S
1,317
11,90
9,03
Nuc(FD) pe matrice S
0,701
5,87
8,37
Vsc(FD) pe matrice S
0,509
5,41
10,62
Salcie(FB) pe matrice S
1,512
13,26
8,75
Nuc(FB) pe matrice S
0,700
5,98
8,54
MD
XXXI
Vsc(FB) pe matrice S
0,512
5,60
10,93
Se constat c pudrele de salcie au cea mai intens activitate antioxidant ( 11,9- 13,55 M
Trolox/1ml pudr dizolvat) i aceasta este corelat cu un coninut maxim de polifenoli (1,3171,512 mg GAE/1 ml pudr dizolvat). La tehnicile SD i FB s-au obinut rezultate mai bune,
utilizndu-se matrici de MD, respectiv S.
Activitatea antioxidant minim ( redus cu aprox. 50 %) a fost constatat la pudrele de
vsc, indiferent de tehnica de uscare sau matrice.
Rapoartele obinute ntre concentraia de polifenoli i activitatea antioxidant au fost relativ
constante pentru o anumit tehnic de uscare, dar a fost diferit n funcie de tipul plantei din care
s-a obinut pudra. Astfel, raportul cel mai mare s-a obinut la vsc (10,07-10,93), cu toate c
valoarea absolut a compuilor fenolici a fost cea mai mic, n timp ce salcia i extractul de nuc au
avut valori similare , n intrevalul 8,5-9. Aceste diferene sugereaz ca activitatea antioxidant a
vscului este mai mare per unitate de compus fenolic, adic potenialul antioxidant al unitilor
polifenolice din vsc ( flavonoide) e mai intens. In schimb, potenialul antioxidant al unitilor
polifenolice din salcie ( acizi fenolici) e mai mic dei concentraia acestora e mai mare.
5.3.
CONCLUZII
1. Au fost obinute pudre din extracte apoase 15% de nuc (Juglans regia), vsc (Viscum
album) i salcie (Salix alba), utiliznd trei tehnologii de uscare: atomizare (SD), uscare n pat
fluidizat (FB) i crioliofilizare (FD). Un total de 21 de pudre, s-au obinut utiliznd aceste tehnici
pe trei matrici diferite: maltodextrin, sare sau lactoz.
Matricele utilizate s-au comportat diferit n procesul de uscare, pentru atomizare cele mai
potrivite au fost sarea i maltodextrina, sarea i lactoza s-au comportat bine pentru uscarea n pat
fluidizat. Rezultate bune au fost obinute de sare i lactoz i n procesul de liofilizare, dar
tehnologia este destul de costisitoare. Consideram ca atomizarea este cea mai adecvat metoda de a
imobiliza extracte bogate n polifenoli pe un suport de sare sau maltodextrina, datorit faptului c
este un proces rapid i continuu de uscare, fiin n final cel mai economic.
Cea mai rapid metod de evaporare a fost SD n sistem continuu. Prin acest procedeu s-au
obinut pudre cu matricile de maltodextrina (MD) i sare.
Uscarea n pat fluidizat a dat rezultate bune la utilizarea matricilor de lactoza i sare, dar nu
a avut un rezultat satisfctor pentru MD. Dezavantajul FB este faptul c se lucreaz doar n sarje
mici 300 450 g/sarja.
XXXII
Crioliofilizarea este un proces lent i un mare consumator de energie. Matricile care s-au
pretat bine pentru acest procedeu au fost sarea i lactoza.
2. Coninutul de compui fenolici a fost diferit n funie de extractul de plante i stabilitatea
pudrei i a matrici utilizate.
Astfel, pudra de salcie a avut coninut maxim de polifenoli de 1.53 mg GAE/ ml pudra
obinut pe maltodextrina, dizolvat i 1.88 mg GAE/ ml pudr obinut pe lactoz, dizolvat. O
mai bun stabilitate a polifenolilor a fost observat pentru procesul de SD, cu cea mai bun
recuperare de polifenoli, de pn la 82% pe un substrat de MD.
3. Spectrometria FTIR a fost utilizat pentru a obine amprenta specific a extractelor de
plante nainte i dup uscare. Conform datelor spectroscopice, cea mai bun tehnologie de uscare
s-a dovedit a fi atomizarea, datorit vitezei mare de procesare, precum i un proces continuu de
aciune, comparativ cu liofilizarea care este un proces lent, datorit evaporatii la temperatur
scazut.
4. Pudrele de salcie au avut cea mai intens activitate antioxidant ( 11,9- 13,55 M
Trolox/1ml pudr dizolvat) i aceasta este corelat cu un coninut maxim de polifenoli (1,3171,512 mg GAE/1 ml pudr dizolvat). Tehnicile SD i FB au fost cu rezultate mai bune, utiliznduse matrici de MD, respectiv S.
Activitatea antioxidant minim ( redus cu aprox. 50 %) a fost constatat la pudrele de
vsc, indiferent de tehnica de uscare sau matrice.
Rapoartele obinute ntre concentraia de polifenoli i activitatea antioxidant au fost relativ
constante pentru o anumit tehnic de uscare, dar a fost diferit n funcie de tipul plantei din care
s-a obinut pudra. Astfel, raportul cel mai mare s-a obinut la vsc (10,07-10,93), cu toate c
valoarea absolut a compuilor fenolici a fost cea mai mic, n timp ce salcia i extractul de nuc au
avut valori similare , n intrevalul 8,5-9. Aceste diferene sugereaz c activitatea antioxidant a
vscului este mai mare per unitate de compus fenolic, adic potenialul antioxidant al unitilor
polifenolice din vsc ( flavonoide) e mai intens. n schimb, potenialul antioxidant al unitilor
polifenolice din salcie ( acizi fenolici) e mai mic dei concentraia acestora e mai mare.
Produsul obinut din extractul de salcie este cel mai bogat n polifenoli i se recomand a fi
folosit ca bio- dezinfectant.
XXXIII
Capitolul 6
EFICIENA ANTIMICROBIAN A PUDREI DE SALCIE FIXT PE
MALTODEXTRIN (MD) SAU SARE (S) TESTAT PE CINCI TIPURI DE
MICROORGANISME
XXXIV
Fig. 6. 1 .a-b. Aspectul culturii de E.coli pe mediu solid, dup incubare cu soluia care a fost
recoltat dup 5 min (a), respectiv 10 min (b) de la aplicarea pudrei rehidratate de salcie
fixate pe MD
Fig. 6.2. a-b Aspectul culturii de S.aureus pe mediu solid, dup incubare cu soluia care a
fost recoltat dup 5 min (a), respectiv 10 min (b) de la aplicarea pudrei rehidratate de salcie
fixate pe MD
XXXV
Fig. 6.3. a-b. Aspectul culturii de B.cereus pe mediu solid, dup incubare cu soluia care a
fost recoltat dup 5 min ( a), respectiv 10 min (b) de la aplicarea pudrei rehidratate de salcie
fixate pe MD
Fig. 6.4. Aspectul culturii de Salmonella (stnga) i Listeria ( dreapta) pe mediu solid, dup
incubare cu soluia care a fost recoltat dup 5 min de la aplicarea pudrei rehidratate de salcie
fixate pe MD
Dup 5 min de la aplicarea pudrei de salcie/ MD rehidratat pe placua de faian, pe mediu
solid s-au dezvoltat 62 colonii de Salmonella, i respectiv 321 colonii de Listeria. Dupa 10 minute,
12 colonii de Salmonella, i respectiv 9 colonii de Listeria. n cazul pudrei de salcie/ S rehidratat,
pe mediu solid s-au dezvoltat 8 colonii de Salmonella, i respectiv 9 colonii dup 5 min i dup 10
min, s-au dezvoltat 2 colonii de Salmonella, i respectiv Listeria.
XXXVI
E.coli
600
Nr. coloni
500
400
300
200
100
0
5 (MD)
m
512
1
321
2
69
3
7
4
3
10 (MD)
266
57
5 (sare)
324
245
51
10 (sare)
184
41
Fig. 6.5. Numrul de colonii formate pe plcutele de cultur (m proba initial, 1 4 diluii fcute
din proba martor) dup aplicarea soluie (pudra rehidratat din extract de salcie pe matrice de
maltodextrin (MD) i sare) la 5 i 10 minute de la aplicare
Nr. coloni
S. aureus
5 (MD)
m
35
1
4
2
0
3
0
4
0
10 (MD)
5 (sare)
10 (sare)
Fig. 6.6. Numrul de colonii formate pe plcutele de cultur (m proba iniial, 1 4 dilutii fcute
din proba martor) dup aplicarea soluie (pudra rehidratat din extract de salcie pe matrice de
maltodextrin (MD) i sare) la 5 i 10 minute de la aplicare
XXXVII
Nr. coloni
B. cereus
140
120
100
80
60
40
20
0
5 (MD)
m
135
1
52
2
7
3
1
4
0
10 (MD)
105
24
5 (sare)
10 (sare)
Fig. 6.7. Numrul de colonii formate pe plcutele de cultur (m proba iniial, 1 4 diluii fcute
din proba martor) dup aplicarea soluie (pudra rehidratat din extract de salcie pe matrice de
maltodextrin (MD) i sare) la 5 i 10 minute de la aplicare
Nr. coloni
Salmonella
70
60
50
40
30
20
10
0
5 (MD)
m
62
1
21
2
2
3
0
4
0
10 (MD)
12
5 (sare)
10 (sare)
Fig. 6. 8. Numrul de colonii formate pe plcutele de cultur (m proba iniial, 1 4 diluii fcute
din proba martor) dup aplicarea soluie (pudra rehidratat din extract de salcie pe matrice de
maltodextrin (MD) i sare) dup 5 i 10 minute de la aplicare
XXXVIII
Nr. coloni
Listeria
350
300
250
200
150
100
50
0
5 (MD)
m
321
1
215
2
62
3
8
4
5
10 (MD)
5 (sare)
10 (sare)
Fig. 6.9. Numrul de colonii formate pe plcutele de cultur (m proba iniial, 1 4 diluii fcute
din proba martor) dup aplicarea soluie (pudra rehidratat din extract de salcie pe matrice de
maltodextrin (MD) i sare) dup 5 i 10 minute de la aplicare
6.4. CONCLUZII
Efectul antibacterian a fost testat cu pudrele de salcie pe matrici de maltodextrin i sare, pe
cinci tipuri de culturi bacteriene care au fost dispersate iniial pe plci de faian. Evaluarea
efectului s-a fcut prin preluarea de tampoane dup pulverizarea cu pudr de salcie dizolvat, la
intervale de 5 i 10 min, tampoane care au fost dizolvate n ap distilat i incubate pe plci de agar.
Din datele obinute, corelate cu absorbiile la 600 nm, s-a constatat eficiea diferit a pudrelor, i
anume pudrele cu matrice sare au fost mai eficiente, timpul de aciune de 10 minute este mai bun.
Microorganiosmele cele mai sensibile au fost S.aureus i Salmonella.
n concluzie se recomand
CONCLUZII GENERALE
n raport cu scopul i obiectivele lucrrii se pot meniona urmatoarele concluzii
XXXIX
1. Au fost obinute extracte apoase i hidroalcoolice din plante indigene, i anume salcie,
vsc i nuc. Plantele au fost amestecate cu ap acidulat, avnd o concentraie de 15%
plant uscat i lsate la macerat timp de 24 ore.
2. Au fost caracterizate extractele, prin calculul eficienei de extracie, compoziia n
compui fenolici a extractelor, amprenta spectroscopic, cromatografic i activitatea
antioxidant.
Analizele fizico chimice, urmate de testele microbiologice au artat c extractele
hidroalcoolice sunt mai eficiente dect cele apoase. Cele mai bune rezultate au fost obinute la
extractele de Rosmarinus officinalis, Urtica dioica, Ocimum basilicum i Satureja Montana.
3. Au fost evideniate efecte antimicrobiene a extractelor prin teste calitative i cantitative
pe medii de cultur nsmnate cu diferite tipuri de bacterii.
Extractul hidroalcoolic de rozmarin (026) a fost singurul extract care a dat rezultate bune
mpotriva microorganismelor utilizate pentru test E.coli i Bacillus subtilis. Aa cum s-a vzut n
literatura de specialitate uleiurile eseiale obinute de la Rosmarinus officinalis au o bun activitate
mpotriva altor micoorganisme ca Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Pseudomonas
aeruginosa, Klebsiella pneumonia, Enterococcus feacalis, Escherichia coli, Staphylococcus
epidermidis, Bacillus subtilis i Candida albicans. Un rezultat bun s-a obinut i n cazul
extractului hidroaclcoolic de Satureja Montana (028) fiind singurul extract care a dat rezultate bune
mpotriva microorganismelor utilizate pentru test E.coli i Bacillus subtilis.
n concluzie extractele hidroalcoolice de Rosmarinus officinalis, Ocimum basilicum i
Satureja Montana au dat rezultate bune mpotriva microorganismelor inhibnd dezvoltarea
acestora.
Studiul efectuat pe extractul apos al nucului, vscului i salciei, a artat c toate cele trei
extracte au avut un efect antibacterian. Extractele invetigate au avut un coninut ridicat de
polifenoli, n special flavonoide i triterpenoide, rezultat obinut n urma analizelor HPLC.
Investigaiile fcute pe mediu de agar au demonstrat c extractul de salcie a aratat un efect bun
mpotriva Listeria monocytogenes i Bacillus cereus.
Evaluarea cantitativ a efectului antimicrobian n mediu lichid, utiliznd metoda de
spectometrice UV-Vis, a demonstrat c extractul de salcie este cel mai bogat n derivai polifenolici
(acid salicilic) i a avut cel mai bun efect antimicrobian. Nucul i vscul au activiti microbiene
specifice, n funcie de concentraie, respectiv tipul de microorganism folosit.
4. Obinerea de pudre din extractele apoase de salcie, nuc i vsc utiliznd diferite matrici
(maltodextrine, sare sau lactoz) prin tehnologii de uscare, de atomizare, uscare n pat
fludizat i crioliofilizare .
XL
Pudrele au fost obinute n urma extractului cu ap acidulat (1% HCl) cu 15% plant i
amestecat cu matricea (MD, L i S). n urma proceselor de desidratare au fost obiute un numr de
21 pudre. Matricile au avut un comportament diferit pe parcursul procesrii, sarea a reactionat bine
la toate cele trei procese de evaporare (SD, FB i FD), MD la SD i FD, iar L la FD i FB.
n urma investigaiilor fcute asupra pudrelor pentru a stabilii coninutul de polifenoli rmai
dup procesare a rezultat c extractul de salcie a avut cel mai mare procent de compui activi.
Ca i performan cele mai bune rezultate au fost obinute pe SD, cu matricile de S i MD.
Atomizarea prezint cteva avantaje comparativ cu procedurile similare ca, fulux continuu de
procesare (proces pe sarje la celelte dou procese), control permanet al debitului de lichid i
temperaturi de uscare, consum de energie sczut (liofilizarea consum o cantitate mare de energie
pentru a rci produsul la -50 - 600C), pe parcursul procesului se poate modifica uor concentraia
extractului, nlocui produsul sau modifica temperatura.
5. Caracterizarea fizico-chimic a pudrelor obinute din extractele de salcie, nuc i vsc.
Pudrele de salcie au avut cele mai bune rezultate ca activitate antioxidant (11,9- 13,55 M
Trolox/1ml pudr dizolvat) i aceasta este corelat cu un coninut maxim de polifenoli (1,3171,512 mg GAE/1 ml pudr dizolvat).
Rapoartele obinute ntre concentraia de polifenoli i activitatea antioxidant au fost relativ
constante pentru o anumit tehnic de uscare, dar a fost diferit n funcie de tipul plante din care
s-a obinut pudra.
6. Testarea efectului antibacterian al pudrei de salcie fixate pe maltodextrin sau sare, cu
potential de a fi utilizate ca biodezinfectante.
Dup rehidratarea pudrelor a fost efectuat un test controlat pentru a stabilii eficacitatea
extractului de salcie pe matrice de sare respectiv pe maltodextrin.
Pe suprafa ceramic curat de orice impuritate au fost impregnate microorganime cu o
concentraie tiut, s-a omogenizat distribuia acestora, dup care a fost aplicat soluia obinut n
urma rehidratrii. Extractul de salcie pe matice de sare a avut un rezultat net superior celui pe
matrice de maltodextrin, acesta avnd o aciune foarte bun pentru patru din cele cinci
microorganisme utilizate (Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Bacillus cereus i
Salmonella enteritis). Pudra rehidratat pe matice de sare din extractul de salcie poate fi folosit cu
uurint n eliminarea microorganismelor.
n concluzie putem aprecia c extractul apos i mai ales pudra de salcie, n form
concentrat are potenial antibacterian i poate fi utilizat ca si bioconservant sau biodezinfectant
natural de tip instant cu eficien mpotriva unor microorganisme patogene din spaiile de
producie a alimentelor, din spaii biomedicale, etc.
XLI
BIBLIOGRAFIE
1. Areej, M. et al. (2012). Anti-cancer, anti-inflammatory and anti-microbial activities of plant
extracts used against hematological tumors n traditional medicine of Jordan, J.
Ethnopharmacol. 145(3): 728736
2. Bad Bug Book (2012b) - Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins - Second
Edition
- Bacillus cereus and other Bacillus
species, p 93
- 79
(http://www.fda.gov/Food/FoodSafety/FoodborneIllness/FoodborneIllnessFoodbornePathogens
NaturalToxins/BadBugBook/default.htm)
3. Bad Bug Book (2012c) - Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins - Second
Edition - Appendix 3. Factors that Affect Microbial Growth in Food, p 244 - 245
(http://www.fda.gov/Food/FoodSafety/FoodborneIllness/FoodborneIllnessFoodbornePathogens
NaturalToxins/BadBugBook/default.htm)
4. Braga, L.C., et al. (2005). Pomegranate extract inhibits Staphylococcus aureus growth and
subsequent enterotoxin production, J.Ethnopharmacol. 96: 335339.
5. Builders P.F. et al. (2010). Assessment of the intrinsic and stability properties of the freezedried and formulated extract of Hibiscus sabdariffa Linn. (Malvaceae), Afr. J. Pharmacy (4)6:
304-313
6. Cardonaa, F. et al. (2013). Benefits of polyphenols on gut microbiota and implications n
human health, J. Nutr. Biochem.24: 14151422
7. elik, M and Wendel, S.C., (2005). Spray drying and pharmaceutical applications. In: DM
Parikh. Handbook of pharmaceutical granulation technology. 2 Ed., Boca Raton: Taylor &
Francis GroupL 129-158.
8. Clark MA, and Barret EL (1987). "The phs gene and hydrogen sulfide production
bySalmonella typhimurium.". J Bacteriology 169 (6): 23912397
9. Couto, A. G. et all. (2012). Anti-infl ammatory, antiallodynic effects and quantitative analysis
of gallic acid n spray dried powders from Phyllanthus niruri leaves, stems, roots and whole
plant, Braz J Pharm Sci. 23(1): 124-131,
10. De Souza, T.P. et al. (2009). Development of granules from Phyllanthus niruri spray-dried
extract. Braz J Pharm Sci 45: 669-675.
11. Deepinderjeet, S. and Sachin K., (2013). Investigational study of Juglans regia extract and
quercetin against photoaging, Biomedicine & Aging Pathology Available online 17 September
12. Desobry, S. A. et al. (1997). Comparison of spraydrying, drum-drying and freeze-drying for hcarotene encapsulation and preservation. Journal of Food Science, 62(6): 1158 1162.
13. Desobry, S. A. et al. (1997). Comparison of spraydrying, drum-drying and freeze-drying for hcarotene encapsulation and preservation. Journal of Food Science, 62(6): 1158 1162.
14. Dey, P. M., & Harborne, J. B. (1993). 1. Plant phenolics methods n plant biochemistry (2nd
printing). London: Academic Press Limited. pp. 326341.
15. Dr. J. Jeff Schwegman (2009) "Basic Cycle Development Techniques for Lyophilized
Products".
16. F. Ronsse et all. Powder Technology 190 (2009) 170175
17. Fang, Z. and Bhandari B. (2011). Effect of spray drying and storage on the stability of
bayberry polyphenols, Food Chemistry, 129: 1391147
18. Gutirrez-Larranzar, M. et al. (2013). In vitro assessment of synthetic phenolic antioxidants for
inhibition of foodborne Staphylococcus aureus, Bacillus cereus and Pseudomonas fluorescens,
Food Control, 30(2): 393399
19. Harborne, J. B., & Williams, C. A. (2000). Advances n flavonoid research since 1992.
Phytochemistry, 55(6), 481504.
XLII
20. Hottot, A. et al. (2004). A direct characterization method of the ice morphology. Relationship
between mean crystals sizes and primary drying times of freeze-drying processes. Drying
Technol. 22: 113
21. Iskandar, F., et al., (2003).Control of the Morpology of Nanostructured Particles Prepared by
the Spray Drying of a Nano-particle.Sol, J. Coll. Interface Sci. 265(2), 296-303
22. Jaros, M. and Pabis S. (2006), Theoretical Models for Fluid Bed Drying of Cut Vegetables,
Biosystems Engineering 93(1): 4555
23. K. Dewettinck et all, Fluidized bed coating n food technology, Trends Food Sci. Technol. 10
(1999) 163168
24. Masters, K. (1991). Spray Drying Handbook, Longman, New York, p. 30
25. Neveu, V. et al. (2010). Phenol-Explorer: an online comprehensive database on polyphenol
contents n foods
26. Niamh, H. et al. (2009). Effect of drying methods on the phenolic constituents of meadowsweet
(Filipendula ulmaria) and willow (Salix alba), LWT - Food Science and Technology 42 (9):
14681473
27. Nichenametla, S. N., Taruscio, T. G., Barney, D. L., & Exon, J. H. (2006). A review of the
effects and mechanisms of polyphenolics n cancer. Critical Reviews n Food Science and
Nutrition, 46(2), 161183.
28. O. Yesil Celiktas, E. H. (2007). Antimicrobial activities of methanol extracts and essential oils
of Rosmarinus officinalis, depending on location and seasonal variations,. Food Chemistry 100,
553-559.
29. Patapoff, T.W. et al. (2002). The importance of freezing on lyophilization cycle development.
Biopharm. 3:1621.
30. Pathomwichaiwat, T. et al. (2012). Antiosteoporotic effect of sequential extracts and freezedried juice of Cissus quadrangularis L. n ovariectomized mice, Asian Biomedicine 6 (3), 377384
31. Pop, C. et al. (2013). Application of three alternative technologies (spray drying, fluid bed
drying and freeze drying) to obtain powdered formulas from plants with antimicrobial
potential, Bull. USAMV Cluj-Animal Science and Biotechnology, 70(1-2), in press
32. Pop, C. et al. (2013). Comparative antibacterial activity of different plant extracts in relation to
their bioactive molecules, as determined by LC-MS analysis Bull. USAMV Cluj-Animal Science
and Biotechnology, 70(1-2), in press
33. Rebecca J. Robbins, 2003, Phenolic Acids in Foods: An Overview of Analytical Methodology
J. Agric. Food Chem., , 51 (10), 2866-2887 DOI: 10.1021/jf026182t Downloaded from
http://pubs.acs.org on February 5, 2009
34. Sarica, S. et al. (2005). Use of an antibiotic growth promoter and two herbal natural feed
additives with and without exogenous enzymes n wheatbasedbroilerdiets. South African J. of
Animal Sci. 35(1):61e72.
35. Shen, X. et al. (2014). Antimicrobial effect of blueberry (Vaccinium corymbosum L.) extracts
against the growth of Listeria monocytogenes and Salmonella Enteritidis, Food Control, 35:
159165
36. Waihenya, R.K. et al. (2002). Efficacy of crude extract of Aloe secundiflora against Salmonella
gallinarum in experimentally infected free-range chickens in Tanzania, J. Ethnopharmacol. 79(
3): 317323
37. Wong, P.Y.Y. and Kitts, D.D. (2006). Studies on the dual antioxidant and antibacterial
properties of parsley (Petroselinum crispum) and cilantro (Coriandrum sativum) extracts, Food
Chemistry. 97: 505515
38. Wu H.M., et al., (2005).Spray-drying technology for the synthesis of nanosized LiMn2O4
cathode material. Scr. Mater. 52, 513
39. Zarnea G. (1984). Tratat de microbiologie general. Editura Academiei.
XLIII
40. Zhang, CH, et al. (2010). Experimental and numerical investigation of spray drying parameters
on the dried powder properties of Ginkgo biloba seeds. Dry Technol 3: 380-388.
41. Zhao, Q., et al. (2013). Effects of Spray Drying and Freeze drying on the Properties of Protein
Isolate from Rice Dreg Protein, Food and Bioprocess Technol. 6(7): 1759-1769.
42. Zuo, G.Y. et al. (2008). Screening of Chinese medicinal plants for inhibition against clinical
isolates of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), J. of Ethnopharmacol.,vol:
287290
XLIV