Sunteți pe pagina 1din 222

Felicia Loghin

TOXICOLOGIE GENERAL

Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu Cluj-Napoca 2002

CUPRINS
INTRODUCERE N TOXICOLOGIE Definiie i scop Istoricul toxicologiei SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII Substane toxice: definiie, clasificare Intoxicaii: definiie, clasificare 1. Clasificarea conform criteriului clinico-evolutiv 2. Clasificarea conform criteriului social-juridic NOIUNI DE TOXICOCINETIC Mecanisme de transport prin membranele biologice Absorbia substanelor toxice 1. Absorbia digestiv 2. Absorbia pe cale respiratorie 3. Absorbia cutanat 4. Absorbia parenteral Distribuia substanelor toxice Stocarea substanelor toxice Eliminarea substanelor toxice 1. Excreia renal 2. Excreia prin fecale 3. Eliminarea pulmonar 4. Alte ci de eliminare Metabolizarea substanelor toxice Reacii din faza I 1. Reacii de oxidare A. Sistemul enzimatic al monooxigenazelor dependente de citocromul P450 B. Flavinmonooxigenaza C. Oxidrile nemicrozomale 2. Reacii de reducere A. Reduceri microzomale B. Reduceri nemicrozomale 1 1 4 8 8 9 9 11 19 19 28 28 33 36 38 38 41 43 43 45 46 47 47 51 51 51 61 62 64 65 66

3. Reacii de hidroliz Reacii din faza II 1. Glucuronoconjugarea 2. Sulfoconjugarea 3. Conjugarea cu aminoacizi 4. Acetilarea 5. Conjugarea cu glutation 6. Metilarea Rezultatul biotransformrii xenobioticelor 1. Inducia enzimatic 2. Inhibiia enzimatic 3. Bioactivarea RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE Riscul i evaluarea riscului FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA Factori chimici care influeneaz toxicitatea Factori biologici care influeneaz toxicitatea Factori de mediu care influeneaz toxicitatea MECANISME DE ACIUNE TOXIC Afectarea structurii celulare Moartea celular A) Aciunea caustic B) Formarea de reactivi intermediari Tulburri ale funciei celulare induse de substanele toxice Disfuncii ale exprimrii genice Disfuncii ale activitii celulare n desfurare Afectarea homeostaziei celulare Genotoxicitatea Teste de mutagenez Carcinogeneza chimic Patogeneza cancerului Carcinogene chimice Teratogeneza Imunotoxicitatea Imunosupresia Stimularea rspunsului imun Autoimunitatea

67 68 68 69 70 71 72 72 74 74 75 76 88 92 97 97 103 117 124 128 128 130 130 139 140 141 141 143 147 150 151 156 161 165 167 168 173

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC Patologia toxic a sistemului nervos Neuronopatii Axonopatii Mielinopatii Tulburri ale transmiterii impulsului nervos Miopatii Vasculopatii toxice Patologia toxic a funciei pulmonare Efecte sistemice Efecte pulmonare Efecte asupra cilor respiratorii superioare Efecte pulmonare dup expunere pe o alt cale Patologia toxic a ficatului Leziuni citotoxice acute Leziuni colestatice Hepatopatii cronice Patologia toxic a rinichiului Insuficiena renal acut Insuficiena renal cronic Sindromul nefrotic Patologia toxic a sngelui i a mduvei hematoformatoare Afectarea hematopoezei Afectarea sngelui periferic Patologia toxic a pielii BIBLIOGRAFIE

177 177 183 186 189 190 191 191 191 192 194 197 197 198 200 201 202 203 205 205 206 207 207 209 210 213

INTRODUCERE N TOXICOLOGIE
DEFINIIE I SCOP Toxicologia poate fi definit ca tiina care studiaz efectele duntoare ale substanelor chimice asupra organismelor, precum i interaciunile acestora cu organismele vii. ntr-un sens mai larg, ea a fost definit ca tiina care se ocup cu identificarea, izolarea i determinarea cantitativ a substanelor toxice, cu aciunea lor asupra organismului, precum i cu mijloacele folosite pentru combaterea efectelor toxice (Gonzales, 1954). Etimologia cuvntului toxic provine din greaca antic, n care toxon nsemna arc, sgeat sau otrava cu care era tratat vrful sgeilor. Dup Pliniu, termenul toxicus deriv de la taxus, o specie de conifere ale crei fructe se foloseau la otrvirea sgeilor. Cuvntul otrav provine de la verbul slav otraviti, care nseamn a mhni, a tulbura senintatea sufleteasc. Sfera noiunii de otrav este mai restrns dect a aceleia de toxic i se refer la substanele folosite n scop criminal. Toxicologia este o tiin pluridisciplinar, care necesit cunotine de farmacologie, biochimie, chimie, fiziologie, patologie i dei a fost adesea considerat drept o component a acestora, ea este o disciplin tiinific de sine stttoare. Toxicologia este o tiin experimental, cu un caracter aplicativ pronunat. Rolul su n serviciul societii const n primul rnd n protejarea oamenilor i a altor organisme mpotriva efectelor duntoare ale substanelor toxice, dar i n dezvoltarea unor compui din clasa medicamentelor anticanceroase sau a pesticidelor care s prezinte o toxicitate mai selectiv i deci o mai mare securitate n utilizare. Scopurile toxicologiei moderne sunt multiple, iar clasificrile diferiilor autori sunt mai mult sau mai puin detaliate. Astfel, Loomis i Hayes (1996) definesc trei domenii principale de interes: toxicologia mediului, toxicologia economic i toxicologia medical (Fig.1.1). Prima se ocup cu reziduurile, poluarea i igiena industrial, a doua cu dezvoltarea de noi substane chimice utilizabile ca medicamente, pesticide i aditivi alimentari, iar ultima cu diagnosticul i tratamentul intoxicaiilor i cu aspectele medico-legale ale acestora. Hodgson i Levi (1997) propun o clasificare mai detaliat, care evideniaz foarte clar domeniile de interes ale toxicologiei i importana acesteia n societatea modern. Cele cinci grupe principale studiaz:

2 TOXICOLOGIE GENERALA

FARMACOLOGIE CHIMIE BIOLOGIE FIZIOLOGIE

PATOLOGIE INGINERIE SANATATE PUBLICA IMUNOLOGIE

TOXICOLOGIA

MEDIULUI POLUARE ATMOSFERICA A SOLULUI MARINA

ECONOMICA SUBSTANTE INDUSTRIALE ALIMENTE SI ADITIVI ALIMENTARI MEDICAMENTE SI COSMETICE CERCETARE FUNDAMENTALA

MEDICALA DIAGNOSTIC TERAPIE MEDICO-LEGALA BOLI PROFESIONALE

Fig. 1.1. Domeniile de interes ale toxicologiei i disciplinele conexe (Loomis i Hayes, 1996)

A. Mecanismele de aciune toxic 1. Toxicologia biochimic se ocup cu evenimentele ce au loc la nivel biochimic i molecular, incluznd enzimele de metabolizare a xenobioticelor, generarea intermediarilor reactivi, interaciunea cu macromoleculele, aspecte de biologie molecular 2. Toxicologia comportamental studiaz efectele substanelor toxice asupra comportamentului uman i animal 3. Toxicologia nutriional studiaz efectele dietei asupra toxicitii 4. Carcinogeneza se ocup cu evenimentele chimice i biochimice care conduc la apariia cancerului 5. Teratogeneza studiaz evenimentele chimice i biochimice care conduc la efecte duntoare asupra procesului de dezvoltare 6. Mutageneza se ocup cu efectele toxice asupra materialului genetic 7. Toxicitatea la nivelul organelor studiaz efectele substanelor toxice asupra funcionalitii organelor

INTRODUCERE N TOXICOLOGIE

B. Msurarea substanelor toxice i a toxicitii 1. Toxicologia analitic este o ramur a chimiei analitice care se ocup cu identificarea i determinarea cantitativ a substanelor toxice i a metaboliilor acestora n produse biologice i n probe de mediu 2. Evaluarea toxicologic implic utilizarea organismelor vii pentru estimarea efectelor toxice 3. Patologia toxicologic este o ramur a patologiei care se ocup cu efectele substanelor toxice manifestate prin modificri ale morfologiei subcelulare, celulare, tisulare sau la nivel de organ 4. Studii structur-activitate studiaz relaiile ntre proprietile fizicochimice ale substanelor toxice i toxicitatea acestora i n special utilizarea acestor relaii pentru prevederea toxicitii. C. Toxicologie aplicat 1. Toxicologia clinic se ocup cu diagnosticul i tratamentul intoxicaiilor la om 2. Toxicologia veterinar studiaz diagnosticul i tratamentul intoxicaiilor la animale, n special la cele de companie i la cele care reprezint surse de produse alimentare 3. Toxicologia medico-legal urmrete diagnosticarea intoxicaiilor letale, inclusiv prin detectarea otrvurilor n probele biologice provenite de la intoxicai 4. Ecotoxicologia studiaz contaminarea mediului nconjurtor cu poluani, comportarea poluanilor n biosfer i efectele nocive ale acestora asupra ecosistemelor. 5. Toxicologia industrial reprezint un domeniu specific al toxicologiei mediului, care se ocup de mediul de munc. D. Toxicologia unor clase de substane chimice cu anumite utilizri: include aspectele toxicologice ale dezvoltrii de noi substane cu utilizri comerciale specifice: 1. Substane chimice utilizate n agricultur insecticide, ierbicide, fungicide, rodenticide. Se urmrete dezvoltarea de substane cu toxicitate selectiv, adic maxim fa de organismele int i minim fa de celelalte organisme din mediu sau fa de om. 2. Medicamente evaluarea toxicitii i a efectelor adverse 3. Droguri 4. Aditivi alimentari 5. Substane chimice industriale 6. Substane naturale: fitotoxine, micotoxine, minerale 7. Produi de combustie

4 TOXICOLOGIE GENERALA

E. Toxicologie reglementar se preocup de formularea unor acte legislative care au drept scop reducerea efectelor toxice ale substanelor asupra sntii omului sau asupra mediului 1. Aspectele legale se refer la formularea de legi i regulamente i la aplicarea acestora 2. Evaluarea riscului const n definirea riscurilor, a riscurilor poteniale i n stabilirea raportului beneficiu / risc, servind la adoptarea msurilor legislative.

ISTORICUL TOXICOLOGIEI Toxicologia este o tiin experimental, ale crei nceputuri se pierd n negura timpurilor, dezvoltarea sa fiind strns legat de drama otrvirilor, care a marcat evoluia societii umane de la nceputurile ei pn n epoca modern. Omul primitiv, aflndu-se n contact direct cu natura, a nceput s cunoasc elementele din regnul mineral, vegetal i animal, difereniind produsele toxice de cele folositoare pentru alimentaie. El cunotea efectele toxice ale veninului de arpe, plantelor otrvitoare cum ar fi cucuta sau aconitul, precum i ale unor substane minerale ca arsenul, plumbul, mercurul, stibiul, cuprul. Unele din acestea erau folosite n scopuri criminale sau de suicid. Papirusul egiptean Ebers (aproximativ 1500 .C.) poate fi considerat drept cea mai veche farmacopee care a supravieuit i conine informaii despre numeroase otrvuri, printre care cucuta, aconitul, opiul, plumbul, cuprul, stibiul, glicozidele cianogenetice. Aceste otrvuri erau considerate a avea proprieti mistice i utilizarea lor era nconjurat de superstiii. Se considera de exemplu c ingestia acestor substane era letal pentru cei vinovai i fr efecte pentru cei inoceni. Astfel, n Egiptul antic soiile infidele erau supuse pedepsei piersicilor, care presupunea administrarea smburilor zdrobii de piersici ce conin amigdalin, substan care elibereaz n organism cianur. Sumerienii, n jurul anilor 4500 .C., se nchinau la zeia Gula, care era considerat drept stpna farmecelor, vrjilor i a otrvurilor. Folosirea sgeilor otrvite este cunoscut din cele mai vechi timpuri. Vntorii preistorici Masai din Kenia, care au trit acum 18.000 de ani, foloseau sgei otrvite, probabil cu extracte din specii de Strophanthus. Referire la sgeile otrvite se face i n textul indian Rig Veda (sec.XII .C.), n Odiseea lui Homer (850 .C.) i n Cartea lui Iov. Primele ncercri de identificare i clasificare a otrvurilor, precum i de introducere a unor antidoturi, au fost semnalate n Grecia i Roma antic. Theophrastus (370-286 .C.), un student al lui Aristotel, a inclus numeroase referine la plantele otrvitoare n lucrarea sa De Historia Plantarum. Dioscorides

INTRODUCERE N TOXICOLOGIE

(40-80 D.C.), un medic grec care a trit la curtea mpratului Nero, a fcut prima ncercare de a clasifica otrvurile n funcie de originea lor: animale, vegetale i minerale, clasificare care s-a pstrat timp de 15 secole. Nicander din Colophon (204-135 .C.), un medic i poet grec, este considerat a fi unul din primii toxicologi i a experimentat toxinele animale pe criminalii condamnai. n poemul su Theriaca a descris simptomele i tratamentul otrvirilor cu toxine animale, iar n poemul Alexipharmaca vorbete despre antidoturi. Otrvirile intenionate au fost foarte frecvente n antichitate, att n execuii ct i pentru eliminarea oponenilor politici. Poate cel mai cunoscut caz de utilizare a otrvii ca modalitate de execuie este cel al filozofului grec Socrates (470-399 .C.), care a fost executat prin administrarea unui extract de cucut (Conium maculatum). Una din cele mai infame otrvitoare din toate timpurile a fost Locusta, care a fost angajat de Agrippina, mama lui Nero, pentru a-i asigura acestuia accesul la tron. Recunoaterea, clasificarea i utilizarea otrvurilor n Grecia antic i n Roma antic au fost nsoite de o cutare neobosit a unui antidot universal. n acest sens, un loc aparte n istoria toxicologiei l ocup legenda regelui Mithridates al VIlea al Pontului, ale crui numeroase experiene de toxicitate acut pe criminali l-au fcut s pretind c a descoperit un antidot pentru fiecare reptil veninoas sau substan otrvitoare. Teama sa de a nu fi otrvit era att de mare, nct ingera regulat un amestec de 36 de ingrediente pentru a se proteja mpotriva unui asasinat. Datorit efectului acestui amestec de antidoturi, ncercarea de a se sinucide cu otrav cu ocazia capturrii sale iminente de ctre inamici a euat i a fost nevoit s apeleze la sabia unui servitor. Un alt antidot folosit n Roma antic a fost Theriacum, preparat de medicul lui Nero, Andromachus. Acesta a adugat la antidotul regelui Mithridate, Mithridatum, ingrediente cum ar fi carnea de vipere, ceapa de mare i cantiti mari de opiu, iar alte ingrediente au fost ndeprtate. Numrul total de componente era de 75 i se presupunea c acest antidot ar fi fost eficient n contracararea tuturor otrvurilor i a mucturilor de animale veninoase. ntre cderea Romei i secolul al XII-lea D.C., subiectul otrvurilor este rar ntlnit n documente. Prima evaluare critic a antidoturilor se regsete n lucrarea medicului i filozofului evreu Maimonides (Moses ben Maimon, 1135-1204) intitulat Tratat despre otrvuri i antidoturile lor (1198), care marcheaz intrarea ntr-un nou stadiu al dezvoltrii toxicologiei. Maimonides, ca i Hippocrates naintea sa, a scris despre biodisponibilitate, menionnd c laptele, untul i smntna pot s scad absorbia intestinal. El a respins unele din tratamentele populare ale timpului, dar a continuat s susin utilizarea theriacului i a mithridatului n tratamentul mucturilor de arpe. ncepnd din secolul al XV-lea, otrvirea criminal a fost practicat din ce n ce mai des n Italia, care devine leagnul crimei prin otrvire. O figur infam a acestui timp este otrvitoarea Toffana, care prepara cosmetice pe baz de arsen

6 TOXICOLOGIE GENERALA

(Agua Toffana). Ea a fost succedat de o imitatoare cu geniu organizatoric, Hieronyma Spara, care i-a dirijat activitile spre obiective maritale i financiare specifice. Printre familiile care au fost implicate n cazuri de otrvire, cea mai faimoas este familia Borgia, care folosea o otrav numit la cantarella, un amestec de arsen i fosfor. Activitatea lui Alexandru VI, a fiului su Cesare i a Lucreiei Borgia a contribuit la creterea considerabil a proprietilor statului papal. Catherina de Medici a exportat cunotinele sale n domeniul otrvirilor din Italia n Frana. Sub faada ngrijirii celor sraci i bolnavi, ea a testat diferite amestecuri toxice sub aspectul simptomatologiei, momentului de instalare a acesteia i locului de aciune. O urma notorie a acesteia a fost marchiza de Brinvilliers, iar momentul culminant al acestei practici n Frana este reprezentat de Catherine Deshayes, supranumit La Voisine, care i oferea serviciile contra unor sume de bani i care a fost condamnat pentru foarte multe cazuri de otrviri, printre victimele sale numrndu-se peste 2000 de copii. Bazele tiinifice ale toxicologiei au fost puse n epoca iluminist de ctre medicul i alchimistul elveian Philippus Aureolus Theophrastus Bombastus von Hohenheim-Paracelsus (1493-1541). Afirmaia sa: Toate substanele sunt otrvuri; nu exist nici una care s nu fie otrav. Doza potrivit difereniaz o otrav de un remediu rmne i astzi principiul de baz al toxicologiei, contribuind la dezvoltarea conceptelor de relaie doz-efect i de indice terapeutic. De asemenea, n cartea sa Bergsucht (1533-1534), Paracelsus descrie manifestrile clinice ale intoxicaiilor cronice cu arsen i mercur, precum i boala minerilor. Preocuprile n domeniul toxicologiei ocupaionale au fost continuate de Bernardino Ramazzini care a publicat n 1700 lucrarea Discurs cu privire la bolile muncitorilor. Revoluia industrial a condus la apariia mai multor boli profesionale. Astfel Sir Percival Pott a recunoscut n 1775 rolul funinginei n apariia cancerului scrotului la coari. Printele toxicologiei poate fi considerat medicul i chimistul spaniol Mateo Jos Buenaventura Orfila (1787-1853), care a fost profesor de medicin legal la Universitatea din Paris. El a descris Toxicologia drept o disciplin tiinific diferit de medicina clinic i de farmacologie i a militat pentru utilizarea analizei chimice i a materialului de autopsie ca dovezi n intoxicaiile criminale. n 1814 public Tratatul de toxicologie n care pune bazele toxicologiei experimentale i medico-legale. Alte nume importante n dezvoltarea toxicologiei experimentale sunt Franois Magendie (1783-1855) care a studiat mecanismul de aciune toxic al emetinei, stricninei i cianurii. Elevul su, Claude Bernard (1813-1878), a avut contribuii importante la descifrarea aciunii toxice a monoxidului de carbon i a curarei. Tratatul lui Bernard, O introducere n studiul medicinei experimentale, face parte din literatura clasic n dezvoltarea toxicologiei.

INTRODUCERE N TOXICOLOGIE

n domeniul toxicologiei analitice, s-a urmrit elaborarea unor metode pentru distrugerea materiei organice i pentru izolarea i identificarea substanelor toxice din produsele biologice. Astfel, numele chimistului englez James Marsh este legat de elaborarea unei tehnici pentru decelarea arsenului (1836), iar cel al chimistului german Stas de izolarea nicotinei din probe biologice (1851). Fresenius n 1845 i von Babo n 1847, dezvolt o metod de screening pentru toxicii necunoscui, Selmi i Armand Gauthier descoper ptomainele, iar Ogier glicozizii cadaverici. O contribuie important a fost adus de Chelle n problema otrvurilor cianhidrice, prin descoperirea acidului cianhidric disimulat. Dezvoltarea toxicologiei n secolul XX este tot mai rapid i intereseaz tot mai multe domenii. Progresele din chimia analitic nregistrate dup 1945 au fcut posibil evoluia fr precedent a toxicologiei analitice. Episodul talidomidei a determinat nsprirea legislaiei n domeniul evalurii toxicologice a medicamentelor, iar publicarea crii lui Rachel Carson, Silent Spring (1962), a evideniat efectele utilizrii pesticidelor asupra mediului, contribuind la apariia ecotoxicologiei. A crescut preocuparea pentru descifrarea mecanismelor prin care se produc efectele toxice i pentru stabilirea relaiilor care exist ntre proprietile fizico-chimice i toxicitate. S-a dezvoltat toxicologia clinic i au aprut noi antidoturi care acioneaz prin mecanisme specifice. A crescut preocuparea pentru prevenirea intoxicaiilor, att a celor profesionale ct i a celor medicamentoase, prin apariia Centrelor pentru prevenirea intoxicaiilor. n ara noastr, nc nainte de nfiinarea nvmntului farmaceutic, au existat farmaciti care au desfurat activiti n domeniul toxicologiei. Primul toxicolog poate fi considerat farmacistul i medicul Constantin Hepites, care a avut din 1833 un laborator de analize chimico-legale la Brila i care a devenit ulterior profesor la coala Naional de Farmacie din Bucureti. Dup 1890, toxicologia romneasc a fost reprezentat de medicul i farmacistul Mina Minovici, care a publicat lucrri n domeniul ptomainelor, iar fratele su, tefan Minovici, a publicat n 1912 un manual de toxicologie. Ali farmaciti care au contribuit la dezvoltarea toxicologiei romneti au fost: Bacovescu, Vintilescu, Deleanu, Al. Ionescu-Matiu, N. Ioanid, V. Galea, M. Cotru.

SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII


SUBSTANE TOXICE: DEFINIIE, CLASIFICARE Substana toxic reprezint obiectul de studiul al toxicologiei i poate fi definit drept orice compus chimic capabil s produc alterri structurale i funcionale la diferite niveluri de organizare a materiei vii, alterri care se exprim pe plan clinic printr-o stare patologic, care poate s fie reversibil sau nu. Aceast definiie se refer la compuii chimici exogeni, care ptrund n organism din mediul exterior i care poart denumirea de xenobiotice. n principiu, conceptele de substan toxic i de otrav sunt sinonime, dar n realitate primul are un caracter general, n timp ce al doilea este utilizat atunci cnd folosirea compusului este intenionat, n special n scop criminal. Cea mai veche clasificare a substanelor toxice dateaz din vremea lui Dioscorides, care le clasifica dup originea lor n substane vegetale, animale sau minerale. n zilele noastre, se disting trei grupe de substane toxice n funcie de origine: Compui organici de sintez: o Poluani din aer, ap, alimente: CO, oxizi de azot, oxizi de sulf, hidrocarburi, particule, deeuri industriale, pesticide, fertilizani o Aditivi alimentari: conservani, antioxidani, colorani o Substane chimice din mediul de munc: metale grele, fluoruri, monoxid de carbon, hidrocarburi, alcooli, esteri, compui organometalici, nitro- i aminoderivai o Droguri: deprimante ale SNC, stimulante, halucinogene, etc o Medicamente o Pesticide o Solveni: hidrocarburi alifatice, hidrocarburi halogenate, alcooli alifatici, glicoli, hidrocarburi aromatice o Hidrocarburi aromatice policiclice o Cosmetice Toxine naturale: o Micotoxine: aflatoxine, tricocetene, etc o Toxine microbiene: toxina botulinic, toxina tetanic, etc o Toxine din plante (fitotoxine): alcaloizi, glicozide, etc o Toxine animale: veninuri de erpi, veninuri din insecte

SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII

Substane anorganice: metale Alte criterii de clasificare in cont de organul int asupra cruia acioneaz substana, de mecanismul de aciune, sau de toxicitatea compuilor. Astfel, n Uniunea European, substanele toxice sunt clasificate n 4 clase de toxicitate, pe baza valorii dozei medii letale (DL50) determinate la obolani (Tabel II.1.): Tabel II.1.: Clasele de toxicitate n Uniunea European Intervalul DL50 (mg / kg) DL50 25 25 < DL50 200 200 < DL50 2000 2000 < DL50 Clasa de toxicitate Foarte toxice Toxice Duntoare Neclasificate

INTOXICAII: DEFINIIE, CLASIFICARE Intoxicaia este rspunsul organismului la ptrunderea unei substane toxice. Ea reprezint o stare patologic, reversibil sau nu, care se traduce printr-o modificare a structurilor celulare sau a metabolismului celular. Intoxicaiile se pot clasifica dup dou criterii principale: criteriul clinico-evolutiv - intoxicaii acute - intoxicaii cronice criteriul social-juridic - intoxicaii voluntare = intenionate - intoxicaii involuntare = accidentale

1. Clasificarea conform criteriului clinico-evolutiv 1.1. Intoxicaiile acute apar n urma ptrunderii n organism a substanei toxice n doz relativ mare, o singur dat sau de mai multe ori ntr-un interval de 24 de ore. Simptomatologia apare n general brusc, este bine conturat i evolueaz rapid. Exist ns i substane toxice cum ar fi fosforul, taliul sau paraquatul, n cazul crora simptomatologia nu se instaleaz dect dup cteva zile sau sptmni de la absorbie. Evoluia poate conduce la decesul intoxicatului sau la recuperarea

10 TOXICOLOGIE GENERAL

total sau parial a acestuia. n ultimul caz pot s rmn sechele sau leziuni persistente. Dependent de doza absorbit i de modul de evoluie, intoxicaiile acute pot fi subclasificate la rndul lor n: intoxicaii supraacute intoxicaii acute propriu-zise intoxicaii subacute Intoxicaiile supraacute survin n urma absorbiei unor doze mai mari dect dozele letale, simptomatologia fiind aproape instantanee i aprnd la cteva minute sau ore de la expunere. De cele mai multe ori aceste intoxicaii sunt letale. Intoxicaiile subacute survin n urma absorbiei unor doze mici de substan toxic, simptomatologia este moderat, apare dup o perioad de laten, iar uneori este subclinic, fr manifestri evidente, chiar dac se produc perturbri la nivele biologice distincte. Intoxicaiile acute sunt n rile dezvoltate una din principalele cauze de spitalizare a persoanelor sub 30 de ani. Se constat c frecvena acestor intoxicaii este de peste 50% la sexul feminin, c grupa de vrst cea mai afectat este cea sub 13-14 ani, c peste 80% din intoxicaii se produc la domiciliu i peste 70% sunt accidentale. Clasele de substane implicate n producerea intoxicaiilor pot s difere de la o ar la alta, n funcie de gradul de industrializare sau caracteristicile culturale. Astfel, n rile dezvoltate sunt mai frecvente intoxicaiile cu medicamente (analgezice, antidepresive, sedative-hipnotice, stimulante i droguri, medicamente cardiovasculare), n timp ce n rile n curs de dezvoltare se ntlnesc mai ales intoxicaii cu produse agricole (pesticide, ciuperci otrvitoare) sau produse industriale (alcool metilic, produse petroliere) i menajere (sod caustic, detergeni, decapani, solveni, etc.). 1.2. Intoxicaiile cronice se produc n urma absorbiei repetate de doze mici de substan toxic. Aciunea toxic se datoreaz fie acumulrii substanei n organism, la nivelul diferitelor organe sau esuturi, fie sumrii efectelor lezionale n decursul timpului, cu apariia unor stri patologice. Modificrile care apar sunt adesea latente (subclinice), dar pot s devin manifeste n cazul scderii condiiei fiziologice generale sau a mobilizrii substanei toxice din depozite, cnd se produce o intoxicaie acut prin creterea nivelelor sanguine ale toxicului. Cauzele cele mai frecvente ale intoxicaiilor cronice sunt utilizarea necorespunztoare a medicamentelor, produselor industriale i pesticidelor, contaminarea mediului i toxicomaniile.

SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII

11

2. Clasificarea conform criteriului social-juridic 2.1. Intoxicaii voluntare Din aceast categorie fac parte: crimele, sinuciderile, toxicomaniile, dopingul i utilizarea afrodisiacelor. 2.1.1. Crimele prin otrvire, care n trecut au fcut numeroase victime, au sczut ca inciden o dat cu dezvoltarea unei metodologii eficiente pentru punerea n eviden a substanei toxice implicate. Unele cazuri celebre de otrvire au contribuit decisiv la progresul toxicologiei analitice (dozarea arsenului, extracia substanelor toxice organice, etc). n general, substanele folosite n scop criminal sunt substane cu un potenial toxic ridicat i cu proprieti fizice care s le confere persisten i care s nu permit decelarea lor de ctre victim (fr miros sau gust caracteristic). Printre acestea se numr: - derivaii de arsen - srurile de mercur - acizii corozivi - stricnina - stupefiantele - acidul cianhidric i cianurile - barbituricii i alte psihotrope - insecticidele organofosforice (n special paration) - fosforul, produsele raticide pe baz de fosfor, fosfura de zinc - aconitina - elementele radioactive, etc. Un loc aparte ntre intoxicaiile criminale l ocup intoxicaiile colective ca urmare a folosirii substanelor toxice de lupt, care fac parte din categoria substanelor iritante, caustice i vezicante pe piele i mucoase (Iperita folosit n primul rzboi mondial), a substanelor neurotoxice (Somanul, Sarinul), sau a biotoxinelor. 2.1.2. Sinuciderile reprezint autointoxicaii acute, de cele mai multe ori cu sfrit letal. Sinuciderile au fost frecvente n toate timpurile, dar n ultimul secol statisticile indic o cretere a procentului de otrviri fa de alte metode de sinucidere. Ele sunt mai frecvente la femei, dei cazurile letale sunt mai ntlnite la brbai. Grupul de vrst cel mai afectat este cel ntre 17 i 20 de ani. Sinucigaii caut de obicei substane toxice care produc o moarte uoar (barbiturici, tranchilizante, morfin), iar n lipsa acestora se folosesc substane mai uor accesibile (sod caustic, acizi, pesticide). Principalele substane utilizate n scop suicidar sunt:

12 TOXICOLOGIE GENERAL

- medicamente psihotrope (hipnotice, antidepresive), asociate sau nu cu alcool - gaz de eapament (monoxid de carbon) - aspirin - digitalice - pesticide (insecticide, raticide) - cianuri - stricnin - hipoclorit - solveni, etc.

anxiolitice,

neuroleptice,

2.1.3. Toxicomaniile sunt intoxicaii voluntare de tip cronic, determinate de consumarea repetat a unui drog. Conform Organizaiei Mondiale a Sntii: Toxicomania reprezint o stare psihic, uneori i fizic, care rezult din interaciunea unui organism i a unui medicament i care se caracterizeaz prin modificri de comportament i alte reacii, care conin ntotdeauna nevoia de a lua substana n mod continuu sau periodic, pentru a resimi efectele sale psihice i uneori pentru a evita suferinele privaiunii. Etimologia cuvntului toxicomanie provine din limba greac, de la toxicon (otrav) i manie (nebunie). Denumirea toxicomaniei se formeaz de la numele drogului plus sufixul manie (ex. cocainomanie, heroinomanie), sau de la numele drogului plus sufixul ism (ex. alcoolism, tabagism). Clasificarea toxicomaniilor se poate face: a) dup gravitatea lor: toxicomanii majore (cu heroin, cocain, LSD) toxicomanii minore (cafeism, teism) toxicomanii de grani (tabagism) b) dup numrul drogurilor administrate monotoxicomanii, cnd se consum un singur drog politoxicomanii, cnd se consum mai multe droguri n ultima perioad se constat o cretere marcat a numrului politoxicomaniilor, drogaii asociind 2, 3 i chiar 7 droguri. De asemenea, este foarte frecvent asocierea dintre droguri i alcool. Utilizatorii de droguri sunt n marea lor majoritate tineri, aproximativ 90% ntre 16 i 30 de ani, segmentul de vrst cel mai afectat fiind cel ntre 21 i 25 de ani. n funcie de vrst, se folosete cu predilecie un anumit drog. Astfel, solvenii sunt n general utilizai de subieci foarte tineri, ntre 8 i 18 ani, la 14 ani se ncearc tutunul, la 16 ani consumul de alcool, iar la 18 ani consumul de canabis, cocain, heroin i halucinogene. Aproximativ 75% din utilizatori sunt biei. Toxicomaniile au, n general, patru caracteristici:

SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII

13

1) Dependena psihic, care const n modificri de comportament i o stare mental particular nsoit de necesitatea psihic imperioas de a-i administra substana periodic sau continuu, pentru a obine o stare de bine sau pentru a nltura disconfortul psihic. Este caracteristica principal, care se ntlnete n toate cazurile de toxicomanie. 2) Dependena fizic este o stare patologic ce const n necesitatea organic de a folosi drogul, n vederea evitrii tulburrilor ce apar la ntreruperea administrrii. 3) Tolerana reprezint administrarea unor doze crescute de drog pentru a obine efectul dorit. Toxicomanii ajung astfel s tolereze doze care produc la persoanele normale efecte foarte grave, sau chiar moarte. Tolerana nu este o caracteristic obligatorie a unei toxicomanii, ea fiind mai pronunat la unele droguri (ex. morfin, cocain), i absent la altele (ex. halucinogene). 4) Sindromul de abstinen apare la ntreruperea administrrii substanei, sau uneori la reducerea important a dozelor. El se caracterizeaz prin tulburri psihice i organice care se manifest prin simptome opuse celor produse de drogul n cauz. 2.1.4. Dopingul const n administrarea de substane n scopul creterii randamentului fizic, intelectual sau sportiv; aceste substane pot sau nu s produc dependen. Printre principalele clase de compui utilizai se numr hormonii i euforizantele, care pot induce n timp tulburri endocrine i neuropsihice importante. 2.1.5. Utilizarea de afrodisiace a fost ntlnit pe parcursul ntregii istorii a umanitii, dar nu s-au obinut produse ntr-adevr eficiente i care s nu posede efecte adverse. Afrodisiacele fac n general parte din clasa euforizantelor i a vasodilatatoarelor.

2.2 Intoxicaii accidentale n acest grup se ncadreaz intoxicaiile prin contaminarea mediului, intoxicaiile profesionale, intoxicaiile medicamentoase, intoxicaiile alimentare, intoxicaiile casnice i intoxicaiile cu toxine animale sau vegetale. 2.2.1. Intoxicaiile prin contaminarea mediului (aer, ap, alimente) pot avea caracteristicile unor epidemii atunci cnd n mediu sunt deversate cantiti masive de substane toxice. Exemple de substane care pot produce intoxicaii prin contaminarea mediului sunt: Oxizii de sulf i de azot ajung n atmosfer n urma proceselor de combustie i sunt foarte iritani pentru piele i mucoase

14 TOXICOLOGIE GENERAL

Tetraetilul de plumb folosit ca antidetonant n benzina pentru motoarele cu combustie intern Particule de fluoruri provenite din prelucrarea criolitei n vederea obinerii aluminiului; pot fi responsabile de producerea maladiei numit fluoroz Hidrocarburile aromatice policiclice rezultate n urma combustiei materiei organice; au un potenial cancerigen deosebit Pesticidele utilizate n agricultur i gospodrii pot s determine intoxicaii prin contaminarea mediului Substanele cel mai frecvent implicate n cazurile de contaminare a mediului sunt, n ordine alfabetic, urmtoarele: cadmiul, dioxidul de carbon, mercurul, oxizii de azot i oxidanii fotochimici, oxizii de sulf, plumbul. 2.2.2. Intoxicaiile profesionale sunt intoxicaii care survin la locul de munc, n special n industrie i n agricultur. Uneori ele se pot produce ca urmare a unor accidente de munc i au caracter acut, dar de cele mai multe ori sunt intoxicaii cronice, insidioase, care rezult n urma absorbiei repetate a substanelor n timpul exercitrii profesiei. Substanele cu care se produce intoxicaia poart denumirea de noxe industriale i pot fi materii prime, intermediari sau produse finite. Principalele grupe sunt: oxidul de carbon, plumbul, arsenul, mercurul, manganul, siliciul, solvenii, aminele aromatice, pesticidele. Ptrunderea lor n organism se face n special prin inhalare, pe cale cutanat sau eventual prin ingestie. mbolnvirile produse poart denumirea de boli profesionale, iar nomenclatura lor deriv de la substana incriminat (ex. saturnism, hidrargirism). Simptomatologia apare insidios, fr forme caracteristice, iar n momentul n care se instaleaz boala leziunile sunt bine constituite, astfel nct tratamentul este dificil i nu poate evita apariia sechelelor. Prevenirea acestor boli profesionale se bazeaz pe aplicarea unor msuri de igien i de siguran specifice, pe supravegherea medical a muncitorilor, pe folosirea de echipamente i materiale de protecie adecvate i pe respectarea concentraiilor maxime admisibile n mediul de munc. 2.2.3. Intoxicaiile medicamentoase sunt intoxicaiile care necesit cel mai frecvent ngrijire medical de specialitate. Ele pot fi: Intoxicaii voluntare n scop suicidar, care se ntlnesc aproape exclusiv la adult sau la adolescent Intoxicaii accidentale o La copii sau la bolnavi psihici o Prin erori produse la diferite nivele: medic, farmacist, pacient

SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII

15

Erori ale medicului: - prescrierea unor doze de medicament care depesc dozele maxime terapeutice - prescrierea concomitent a unor formulri care conin un principiu activ comun sau substane cu aciune sinergic - prescrierea unor medicamente fr a ine cont de posibilele interaciuni medicamentoase sau de starea patologic a pacientului care poate modifica farmacocinetica compusului Erori ale farmacistului: - nedescifrarea corect a prescripiei - nesemnalarea dozelor maxime depite - confuzia de substane - eliberarea de preparate neomogene - absena consilierii pacientului cu privire la modul de administrare Erori ale pacientului: - supradozarea voluntar - automedicaia - polipragmazia - confuzia medicamentului - confuzia cii de administrare Aceste intoxicaii pot fi acute sau cronice. n cazul expunerii cronice, absorbia repetat poate conduce la fenomene de toleran sau ineficacitate, sau la acumularea medicamentului. De aceea, cunoaterea farmacocineticii compusului are o importan deosebit n evitarea acestor intoxicaii. De asemenea, medicamentele pot induce efecte adverse, uneori grave, iar pentru acelai compus sensibilitatea poate varia considerabil de la un individ la altul. Astfel, unii pacieni pot dezvolta reacii alergice de gravitate variabil. Mai trebuie luate n considerare riscurile care apar la subiecii cu deficiene de eliminare datorate unor afeciuni renale sau riscurile posibile la asocierea dintre unele medicamente i alimente. Importana efectelor adverse a determinat dezvoltarea activitii de farmacovigilen, care conform OMS reprezint: orice activitate care are drept scop obinerea de indicaii sistematice cu privire la legturile probabile de cauzalitate ntre medicamente i reaciile adverse observate ntr-o populaie. 2.2.4. Intoxicaiile alimentare pot avea diferite cauze: intoleran la anumite alimente, consumarea de alimente care conin n mod natural substane toxice, consumarea de alimente contaminate cu substane toxice, consumarea de alimente contaminate microbian.

16 TOXICOLOGIE GENERAL

1) Intolerana la alimente se datoreaz unei sensibiliti particulare, de natur alergic, care se observ la anumii indivizi atunci cnd consum unele alimente cum ar fi crustaceele, unii peti, cpuni, etc., care sunt inofensive pentru majoritatea populaiei. Alergenii sunt reprezentai de proteinele alimentare. Dup primul contact cu organismul, alergenii alimentari determin producerea unor mici cantiti de imunoglobuline (IgE), care la majoritatea indivizilor este suprimat prin expunerea repetat a mucoasei digestive. Exist ns persoane la care producerea de IgE continu, consecina fiind apariia alergiilor alimentare. Acestea afecteaz n principal persoanele cu risc genetic crescut, care pot dezvolta i alte boli genetice. Cantitatea de IgE produs, deci intensitatea reaciei alergice, depinde de vrsta la care a avut loc primul contact cu antigenul, de doz, de integritatea mucoasei digestive i de ali factori care nc nu au fost identificai. 2) Consumarea de alimente care conin n mod natural substane toxice cum ar fi: - ciuperci toxice (Amanita phaloides, Amanita muscaria, etc.) - plante ingerate prin confuzie care conin alcaloizi toxici (Atropa belladona) sau glicozizi cianogenetici (smburi de migdale, piersici, zarzre) - peti care n perioade de criz secret substane pentru combaterea prdtorilor - molute care acumuleaz toxine prin ingerarea de plancton toxic 3) Consumarea de alimente contaminate cu substane toxice Substanele pot ajunge n alimente prin: a) cedarea din ambalaje - din conservele vechi necorespunztor cositorite, care pot ceda plumb - din vasele de ceramic artizanal care sunt glazurate cu colorani pe baz de plumb, pe care l pot ceda n alimentele acide - cedarea de plastifiani sau stabilizani din materiale plastice: ex. compuii organostanici folosii ca stabilizani pentru materialele din PVC i care pot fi cedai n uleiuri, avnd proprieti hepatotoxice i neurotoxice; triortocresil fosfatul care a fost folosit ca plastifiant pentru hrtia de ambalaj pentru unt i care are proprieti neurotoxice. b) folosirea de aditivi alimentari, fie neautorizai, fie n cantiti care depesc dozele zilnice admisibile - azotaii, care sunt folosii n mezeluri pentru a le pstra culoarea, se pot reduce n anumite condiii la azotii, care n prezena aminelor secundare pot forma nitrozamine cancerigene - unii aditivi alimentari sunt alergeni: metabisulfitul de sodiu folosit ca antioxidant poate declana crize de astm la unele persoane;

SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII

17

- glutamatul de sodiu, care este folosit ca potenator de gust, este bnuit a fi responsabil de sindromul restaurantului chinezesc, caracterizat prin arsuri i furnicturi pe fa, gt i partea superioar a corpului. c) remanena unor compui pe produsele alimentare - pesticide: insecticidele organoclorurate, care sunt stabile, puin biodegradabile i cumulative de-a lungul lanurilor alimentare, au fost n mare parte interzise n marea majoritate a rilor; insecticidele organofosforice sunt puin stabile, sufer o hidroliz rapid n sol i pe vegetale, riscul de contaminare a produselor vegetale fiind redus; fungicidele organometalice sunt liposolubile, stabile i se pot fixa la nivelul SNC, avnd o toxicitate considerabil. - substane cu care sunt tratate animalele din cresctorii: antibioticele sau estrogenii. Antibioticele sunt folosite pentru a preveni infeciile sau pentru a crete calitatea proteinelor animale. Persistena lor n alimente poate fi asociat cu unele riscuri: - perturbarea florei intestinale umane; datorit cantitilor reduse n care se gsesc n alimente, acest risc este redus - declanarea unor reacii alergice - inducerea rezistenei la antibiotice; riscul este redus, datorit concentraiilor mici n care se gsesc n carne Estrogenii sunt administrai, n special la bovine, pentru a crete cantitatea de protein animal format. Se pare c metabolismul lor nu este identic cu cel al hormonilor endogeni, putnd exista riscuri de natur diferit, motiv pentru care n Europa a fost interzis utilizarea lor. d) contaminarea cu poluani industriali i radioactivi care se pot acumula n alimentele destinate hranei omului sau animalelor. f) contaminarea alimentelor cu mucegaiuri care produc substane toxice numite micotoxine: aflatoxina B1, un hepatocarcinogen foarte puternic, ochratoxinele care sunt nefrotoxice, patulina care este neurotoxic i care se poate regsi n unele sucuri de mere. 4) Intoxicaiile de origine microbian se datoreaz consumrii de alimente care devin patogene n urma contaminrii cu bacterii sau cu toxine bacteriene: a) Intoxicaiile microbiene survin n urma consumrii de alimente contaminate cu toxine bacteriene produse anterior ingerrii (ex. toxina botulinic) b) Toxinfeciile bacteriene se produc n urma consumrii de alimente contaminate cu bacterii care se dezvolt n organismul consumatorului excretnd toxine (ex. Escherichia coli, Staphiloccocus, Salmonella).

18 TOXICOLOGIE GENERAL

2.2.5. Intoxicaiile casnice sunt n general intoxicaii acute sau supraacute, care adesea evolueaz spre un sfrit letal sau care n cazul n care sunt tratate pot lsa sechele grave. n aceste intoxicaii sunt implicai cel mai frecvent copiii i persoanele n vrst. Se produc n general din neatenie, netiin sau impruden. Substanele incriminate sunt: - substanele caustice: sod caustic, acizi tari, unii putnd intra n compoziia unor produse decapante sau detartrante - produse folosite pentru dezinfecie - colorani pentru pielrie sau esturi - spume izolante sau adezivi pe baz de uree-formol, care pot elibera formaldehid - pesticide, n special insecticide organofosforice (paration) sau raticide (fosfura de zinc) - medicamente, n special la copii, care confund drajeurile cu bomboanele - alcool metilic confundat cu alcool etilic 2.2.6. Intoxicaii cu toxine animale sau vegetale Numeroase plante, insecte, peti i reptile conin toxine (acizi organici, enzime, peptide) care inoculate la mamifere produc durere local i o multitudine de efecte sistemice de tip anafilactic, hemolitic, paralizant, cardiotoxic, etc.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC
Pentru ca un compus chimic s i poat exercita efectul toxic, el trebuie s vin n contact cu sistemul biologic asupra cruia acioneaz. Efectul poate s fie local, la nivelul cii de ptrundere, sau sistemic, dup absorbia n organism. Dup ptrunderea n organism, xenobioticele urmeaz mai multe faze pn la producerea efectului toxic. Acestea sunt: faza de expunere, faza toxicocinetic i faza toxicodinamic (Fig. 3.1.). Natura i intensitatea efectelor substanei toxice vor depinde deci de concentraia acesteia la nivelul organelor-int, care la rndul su este determinat de: - doza administrat - absorbie, distribuie, capacitatea de fixare, excreia din organism Cu studiul comportrii medicamentelor n organism, adic al absorbiei, distribuiei, metabolizrii i excreiei, se ocup farmacocinetica, care utilizeaz modele i ecuaii matematice pentru a descrie i apoi a prevedea acest comportament. Toxicocinetica studiaz absorbia, distribuia, metabolizarea i excreia xenobioticelor n condiii n care se poate produce toxicitate sau n caz de expunere excesiv.

MECANISME DE TRANSPORT PRIN MEMBRANELE BIOLOGICE Organismul este alctuit din o sum de organe, esuturi, celule i organite subcelulare, fiecare din acestea fiind protejate de nveliuri specializate sau membrane protectoare. Pentru ca o molecul de substan toxic s fie absorbit, distribuit i n final excretat din organism dup ce i-a exercitat efectul, ea trebuie s traverseze aceste membrane protectoare (Fig.3.2.). Procesul toxicocinetic implic deci o serie de etape de translocare, care cresc posibilitatea expunerii substanei exogene la o serie de molecule endogene voluminoase, cum ar fi proteinele, ce pot lega eficient aceste substane, modificndu-le funcia i ndeprtndu-le din organism. Xenobioticul poate veni n contact cu diferite pri ale organismului, putnd fi excretat prin rinichi, tractul respirator sau glandele salivare. De asemenea, molecula exogen poate fi biotransformat de sistemele enzimatice prezente n diferitele organe. Ea poate fi depozitat n organe de depozitare (Fig.3.3.)

20 TOXICOLOGIE GENERAL

Eliberarea substantei Substanta toxica Entitati toxice Interactiunea intre Absorbtie toxice din forma de disponibila pentru Distributie disponibile entitatile toxice si administrare Metabolizare absorbtie receptori Formarea substantei Excretie toxice in tubul digestiv 1 - Faza de expunere 2 - Faza toxicocinetica 3 -Faza toxicodinamica

Efect toxic

Fig. 3.1. Parcursul unei substane toxice n organism

MEDIUL EXTERN

LICHID EXTRACELULAR MEMBRANA LICHID INTERSTITIAL MEMBRANA- CAPILARA PLASMA MEMBRANA- CAPILARA Mucoasa Respiratorie Pielea

LICHID INTERSTITIAL MEMBRANA CELULARA LICHID INTRACELULAR MEMBRANA SUBCELULARA LICHID DIN INTERIORUL ORGANITELOR CELULARE

Fig.3.2. Transportul xenobioticelor prin barierele membranare

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 21

Diferitele tipuri de membrane au o structur similar. Conform teoriei clasice, membranele sunt alctuite dintr-un strat bimolecular de fosfolipide, cu grupri polare de fosfatidilcolin sau fosfatidiletanolamin, care predomin pe suprafaa intern i pe cea extern a membranei, i cu lanuri de acizi grai, mai mult sau mai puin perpendiculari, care umplu spaiul intern. n acest strat dublu sunt inserate proteine, care pot forma pori hidrofili (Fig. 3.4). Acizii grai din membran nu au o structur cristalin rigid, fiind cvasi-fluizi la temperaturi fiziologice. Caracterul fluid al membranelor este determinat n mare parte de structura i de proporia acizilor grai nesaturai. Cu ct membranele au un coninut mai mare de acizi grai nesaturai, cu att ele sunt mai fluide i sunt mai uor strbtute de compuii chimici. Una din cele mai importante caracteristici ale membranei celulare este permeabilitatea selectiv. Astfel, ea poate fi traversat de anumite substane n funcie de anumite proprieti fizico-chimice cum ar fi: mrimea i forma moleculei, liposolubilitatea, polaritatea, similitudinea structural cu molecule endogene.
EXPUNEREA LA XENOBIOTIC ABSORBTIE

FORMA LIBERA

FORMA LEGATA

DISTRIBUTIE

LOCURI DE DEPOZITARE

LOCURI DE BIOTRANSFORMARE

EXCRETIE

XENOBIOTICUL SI METABOLITII SAI

Fig.3.3. Cile pe care le poate urma un xenobiotic n organism

22 TOXICOLOGIE GENERAL

Fig.3.4. Structura tridimensional a membranei celulare. Proteinele (a) sunt inserate n stratul bimolecular de fosfolipide (b) (Timbrell J.A., 1991)

Principalele mecanisme prin care xenobioticele pot traversa membranele biologice sunt: difuzia pasiv, filtrarea prin porii membranei, transportul specializat i endocitoza. 1. Difuzia pasiv reprezint probabil cel mai important mecanism de transport al xenobioticelor. Const n trecerea moleculei, fr consum de energie, dintr-un compartiment cu concentraie mare spre un compartiment cu concentraie mic, deci n sensul gradientului de concentraie. Nu prezint specificitate de substrat i se bazeaz pe difuzia substanei prin stratul lipidic bimolecular. Pentru ca molecula s fie transportat prin difuzie pasiv, trebuie s fie ndeplinite anumite condiii: - existena unui gradient de concentraie - liposolubilitatea xenobioticului - compusul nu trebuie s fie ionizat Compuii ionizai nu vor difuza uor prin membran deoarece pe de o parte ei au o solubilitate redus n lipide, aceasta fiind esenial pentru transport, iar pe de alt parte pot determina interaciuni ionice ntre xenobiotice, lipidele i proteinele din membran.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 23

Aceste condiii au fost ncorporate n teoria pH-partiiei, conform creia doar compuii lipofili neionizai vor fi absorbii prin difuzie pasiv n situaia existenei unui gradient de concentraie. Multe substane chimice de interes toxicologic sunt acizi sau baze slabe, care n soluie sunt ionizate. Forma ionizat are o liposolubilitate redus, deci nu va trece uor prin stratul lipidic al membranei. Forma neionizat are un anumit grad de liposolubilitate, fiind astfel difuzibil. Viteza de difuzie prin membran este definit de Legea lui Fick: Viteza de transport = [KS(C2 C1)] / g Unde: K este coeficientul de difuzie, S este suprafaa membranei, C2 este concentraia compusului la suprafaa extern a membranei, C1 este concentraia la suprafaa intern a membranei, iar g reprezint grosimea membranei. Coeficientul de difuzie prin membran K depinde de proprietile fizicochimice ale compusului, cum ar fi liposolubilitatea, mrimea i forma moleculei. Parametrul care apreciaz liposolubilitatea compuilor este coeficientul de partiie lipide / ap, care este cu att mai mare cu ct compusul este mai lipofil. Pe de alt parte, raportul molar ntre moleculele ionizate i cele neionizate ale unui acid sau ale unei baze organice n soluie depinde de constanta de ionizare, care furnizeaz o msur a triei acestora. pH-ul la care un acid sau o baz organic slab este ionizat 50% poart numele de pKa sau respectiv pKb. Gradul de ionizare al unui compus depinde de pKa-ul su i de pH-ul soluiei. Relaia ntre pKa i pH este descris de ecuaiile Henderson-Hasselbach: Pentru acizi: Pentru baze: pKa pH = log ([forma neionizat] / [forma ionizat]) pKa pH = log ([forma ionizat] / [forma neionizat])

n concluzie, difuzia acizilor slabi prin membran va fi favorizat de existena unui mediu acid, iar cea a bazelor slabe de un mediu bazic (Fig.3.5.).

24 TOXICOLOGIE GENERAL

pH scazut .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... ..........

pH ridicat

ACIZI

BAZE

Fig. 3.5. Transportul acizilor i bazelor slabe n funcie de pH

2. Filtrarea se bazeaz pe difuzia substanei dizolvate n ap prin porii membranei, n sensul gradientului de concentraie. Fluxul apei prin aceti pori este determinat de forele hidrostatice i / sau osmotice. Procesul este limitat de mrimea porilor membranei. Astfel, porii majoritii celulelor sunt n jur de 4 nm, permind trecerea doar a compuilor hidrofili, cu mas molecular de 100-200 daltoni, n timp ce porii membranei glomerulare sunt relativ mari, n jur de 70 nm, permind trecerea moleculelor cu mas mai mic dect a albuminei (60 000 daltoni). Deoarece multe substane toxice au molecule relativ mari, acest mecanism este mai important n eliminarea xenobioticelor, mai ales pe cale renal. 3. Transportul specializat Exist numeroi compui al cror transport prin membrane nu poate fi explicat doar prin difuzie pasiv sau filtrare, deoarece ei sunt fie prea mari pentru a trece prin pori fie sunt prea puin liposolubili pentru a difuza prin stratul lipidic bimolecular. Totui, ei sunt adesea transportai rapid prin membrane, chiar mpotriva gradientului de concentraie. Acest fenomen se explic prin existena unor sisteme specializate de transportori. Aceste sisteme sunt responsabile de transportul prin membrana celular a unor substane nutritive cum ar fi glucidele, aminoacizii, acizii nucleici, dar i a unor compui exogeni. Transportorul este de obicei o protein, care leag substana toxic, o trece de o parte pe cealalt a membranei i apoi o elibereaz, relundu-i poziia iniial i devenind disponibil pentru un nou ciclu de transport (Fig. 3.6.). Aceste mecanisme sunt importante atunci cnd xenobioticul prezint similitudini structurale sau chimice cu compui endogeni care utilizeaz mecanismele de transport specializat n cursul proceselor fiziologice normale. Se cunosc mai multe tipuri de transport specializat:

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 25

3.1. Transportul activ, care prezint urmtoarele caracteristici: - a) compusul se deplaseaz mpotriva gradientului electrochimic sau de concentraie - b) se realizeaz cu consum de energie metabolic - c) poate fi inhibat de substanele toxice care interfereaz n metabolismul celular - d) sistemul de transport este saturat la concentraii mari de substrat - e) sistemul de transport este selectiv pentru anumite caracteristici structurale ale moleculei transportate, deci poate s apar competiia ntre diferii compui pentru legarea de transportor Sistemele de transport sunt cuplate cu enzime ce produc energie (ex. ATPaze) i deoarece pot fi saturate, procesul se desfoar conform unei cinetici de tip Michaelis-Menton. Prin acest mecanism poate fi transportat medicamentul anticanceros 5fluorouracil de ctre sistemul de transport al pirimidinelor, plumbul poate fi absorbit n intestin prin sistemul de transport al calciului, iar ierbicidul paraquat este preluat n plmni prin sistemul de transport al poliaminelor. Transportul activ este foarte important mai ales pentru eliminarea xenobioticelor din organism. Sistemul nervos central are dou sisteme de transport la nivelul plexurilor coroide, care elimin compuii din lichidul cefalorahidian, un sistem pentru acizi i unul pentru bazele organice, rinichiul are dou sisteme de transport, iar ficatul cel puin patru. 3.2. Difuzia facilitat are similitudini cu transportul activ: - a) necesit o molecul proteic transportoare (enzime numite permeaze) - b) procesul poate fi saturat sau inhibat competitiv dar n acelai timp este diferit, deoarece: - c) transportul se realizeaz n sensul gradientului electrochimic sau de concentraie - d) procesul nu necesit energie metabolic i nu este inhibat de substanele care interfereaz n metabolismul celular 3.3. Transportul prin intermediul transportorilor ABC Transportorii ABC fac parte din superfamilia proteinelor ABC (ATP Binding Casette) care reprezint un grup ubicuitar i evolutiv de proteine cu diferite funcii, majoritatea legate de transportul prin membranele biologice, n special din celul spre exteriorul acesteia. Ele sunt alctuite dintr-un domeniu transmembranar format de obicei din ase helixuri transmembranare i dintr-un domeniu de legare a nucleotidelor. Cei mai cunoscui reprezentani ai acestei clase sunt P-glicoproteina i proteina MRP (multidrug resistance-associated protein) (Fig 3.7).

26 TOXICOLOGIE GENERAL

Membrana

Transportor

Energie Substanta toxica

Fig.3.6. Reprezentarea schematic a transportului activ

Trstura cea mai particular a acestei categorii de transportori este reprezentat de gama foarte larg de substraturi ce pot fi transportate, corelaia cu structura moleculelor fiind dificil de realizat. Cercetri recente au identificat n molecula substraturilor P-glicoproteinei cel puin dou grupri acceptoare de legturi de hidrogen cu o poziionare spaial precis, dar aceast cerin nu pare a fi foarte restrictiv. Compuii transportai nu pot fi foarte hidrofili sau foarte hidrofobi, iar n ceea ce privete mrimea moleculei exist limite inferioare i superioare, fiind excluse moleculele foarte mici sau foarte mari. S-a demonstrat c P-glicoproteina este implicat n transportul morfinei din creier napoi n snge prin bariera hemato-encefalic i c poate fi indus de administrarea cronic a acestei substane, ceea ce poate explica parial mecanismul de instalare a toleranei la morfin. Proteina MRP poate i ea transporta substraturi cu structuri foarte variate, dar n special hidrofile, iar interesul su toxicologic deosebit const n faptul c poate transporta din celul nu numai molecule amfotere, dar i metabolii conjugai cu glutation sau acid glucuronic, participnd astfel la aa numita faz a III a de detoxifiere. Proteina MRP este implicat i n instalarea rezistenei la terapia anticanceroas, prin excluderea din celula int a moleculelor de medicament.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 27

Fig. 3.7. Modelele structurale ale P-glicoproteinei (A) i Proteinei MRP (B)

4. Endocitoza Acest proces const n invaginarea membranei celulare pentru a ngloba particule solide (fagocitoza) sau particule lichide (pinocitoza). Se formeaz o vezicul care poate fuziona cu un lizozom primar, transformndu-se n lizozom secundar n care enzimele pot digera macromolecula. Uneori, o poriune a membranei plasmatice care prezint receptori specifici leag macromolecula i apoi se invagineaz. Procesul necesit energie metabolic i poate fi indus de prezena anumitor molecule, cum ar fi ionii din mediul nconjurtor. Acest sistem de transport este important la nivelul alveolelor pulmonare, unde particulele insolubile de dioxid de uraniu sau azbest pot fi absorbite prin fagocitoz, sau la nivelul intestinului, pentru absorbia moleculelor mari. Este de asemenea important pentru eliminarea din snge a unor substane prin intermediul sistemului reticulo-endotelial din splin i ficat. Din punct de vedere toxicologic, cele mai importante mecanisme de transport prin membrane sunt difuzia pasiv i transportul activ.

28 TOXICOLOGIE GENERAL

ABSORBIA SUBSTANELOR TOXICE Absorbia reprezint procesul prin care xenobioticele ptrund n organism, respectiv trec din mediul extern n lichidele biologice (snge, limf, lichid cefalorahidian). O substan toxic poate ptrunde n organism pe diferite ci, care pot fi clasificate n: - a) ci naturale: o digestiv o respiratorie o cutanat o prin mucoase sau seroase - b) ci artificiale (parenterale) o intraperitoneal (i.p.) o intravenoas (i.v.) o subcutan (s.c.) o intramuscular (i.m.) Cile principale de absorbie pentru substanele toxice sunt calea digestiv, calea respiratorie i calea cutanat. Cile parenterale se folosesc de obicei pentru administrarea substanelor medicamentoase i sunt utilizate n experimentele toxicologice. Calea de ptrundere poate s influeneze: - efectul toxic final al unui compus; astfel, pH-ul acid stomacal poate determina hidroliza unor substane, iar bacteriile intestinale pot modifica natura unor compui prin metabolizare, afectnd astfel efectul toxic indus - distribuia ulterioar a substanelor; astfel, absorbia cutanat este lent i va conduce la o distribuie iniial n circulaia periferic, n timp ce absorbia pulmonar este rapid, organele majore fiind expuse foarte repede. - metabolismul prin primul pasaj hepatic; substanele care sunt absorbite din tractul digestiv trec nti prin ficat nainte de a ajunge n inim i a fi distribuite n ntreg organismul, suferind o prim metabolizare sub aciunea enzimelor hepatice. Substanele administrate pe alte ci, inclusiv cele absorbite prin mucoasa nazal, bucal sau din rect, nu sufer acest prim pasaj i ating concentraii mai mari n organism.

1. Absorbia digestiv Este o cale de ptrundere major pentru substanele toxice, fie prin intermediul alimentelor contaminate, fie ca medicamente sau substane otrvitoare

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 29

ingerate accidental sau intenionat. Majoritatea crimelor i sinuciderilor se produc ca urmare a ptrunderii agentului toxic pe cale oral. Tractul gastrointestinal poate fi privit ca un tub care strbate organismul. Dei el se gsete n organism, coninutul su poate fi considerat ca fiind n afara organismului. De aceea, substanele toxice din tractul gastrointestinal nu produc afectare sistemic dect dup absorbie, cu excepia compuilor iritani sau caustici. Absorbia se poate face de-a lungul ntregului tub digestiv, n mod difereniat, dependent de: - structura mucoasei digestive - pH-ul de la nivelul segmentului digestiv respectiv Absorbia se face prin difuzie pasiv, transport activ, endocitoz sau transport paracelular, adic prin jonciunile intercelulare. Celulele mucoasei intestinale conin i P-glicoproteina, care a fost implicat n secreia intestinal a unor medicamente ca: ciclosporina, digoxinul, unele fluorochinolone, ranitidina, citostatice, beta blocante. Moleculele absorbite sunt transferate n celulele endoteliale, spre capilare i ficat, sau napoi spre lumenul intestinal (secreie). 1.1. Absorbia la nivelul cavitii bucale este o cale minor de absorbie a substanelor toxice deoarece timpul de contact cu mucoasa bucal este foarte scurt. Pot fi absorbite substane cum ar fi: alcoolii, aldehidele, cetonele, cianurile, nitroglicerina, hormonii estrogeni, nicotina, cocaina. Absorbia la nivelul esofagului este foarte redus, datorit timpului scurt de contact, dar substanele toxice caustice pot leza grav mucoasa esofagian.

1.2.

1.3. Absorbia la nivelul stomacului depinde de: - Coeficientul de partiie al substanei: substanele liposolubile sunt mai uor absorbite prin difuzie pasiv, care reprezint procesul de absorbie cel mai important din punct de vedere cantitativ, dar n acelai timp, un anumit grad de hidrosolubilitate, care favorizeaz dizolvarea n coninutul apos al stomacului i deci un contact intim cu mucoasa, crete gradul de absorbie; cel mai bine se vor absorbi substanele cu un coeficient de absorbie apropiat de 1. - Prezena formei neionizate, absorbabile prin difuzie pasiv. Absorbia va fi deci determinat de pH-ul mediului i de pKa-ul substanei toxice. Deoarece pH-ul secreiei gastrice este acid, cuprins ntre 1,2 i 3,5, n funcie de starea de plenitudine a stomacului (1,2-1,8 a jeun i 3-3,5 dup mas), la acest nivel se vor absorbi acizii slabi (pKa > 2,5), care se gsesc n forma neionizat. Bazele slabe care sunt ionizate sau parial ionizate (pKa < 2,5) sunt neabsorbabile sau greu absorbabile. Aceste diferene sunt amplificate de

30 TOXICOLOGIE GENERAL

faptul c la pH-ul sngelui circulant de 7,4 acizii slabi se gsesc sub form ionizat i vor fi preluai de fluxul sanguin, n timp ce bazele slabe sunt neionizate i vor avea tendina de a difuza napoi n stomac. 1.4. Absorbia la nivelul intestinului subire intereseaz majoritatea compuilor care ptrund pe cale oral. - Bazele slabe, care la pH-ul mai alcalin (pH 6) al sucului intestinal se gsesc sub form neionizat, vor fi rapid absorbite, dei pH-ul 7,4 al plasmei nu favorizeaz ndeprtarea lor, fiind posibil rentoarcerea n intestin. - Acizii slabi, care se gsesc sub form ionizat, vor fi totui absorbii datorit: o Suprafeei mari a intestinului subire i timpului lung de sejur n acest segment al tractului digestiv o Ionizrii moleculei la pH-ul 7,4 al sngelui, care favorizeaz ndeprtarea de la locul absorbiei i meninerea gradientului de concentraie de-a lungul membranei intestinale (Fig.3.8.). o Existenei unui microstrat acid n vecintatea mucoasei intestinale, cu grosime de 20 m i al crui pH este cu 0,5 uniti mai mic dect cel din lumenul intestinal; aciditatea acestui microstrat este mai pronunat n duoden fa de poriunea distal a intestinului subire.
Plasma pH 7,4
NH2 NH3
+

COO

Stomac pH 2
COOH

NH3

NH2

Intestin pH 8-9
COOH

Plasma pH 7,4
COOH COO
-

COO

NH2 NH3
+

Fig. 3.8. Absorbia moleculelor ionizate la nivelul stomacului i intestinului

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 31

Absorbia substanelor toxice din intestin este favorizat de (Fig.3.9): Grosimea redus a mucoasei intestinale unistratificate Suprafaa considerabil de contact oferit de prezena vilozitilor i a microvilozitilor Vascularizaia bogat la acest nivel Timpul lung de contact dintre mucoas i substan pH-ul apropiat de cel fiziologic Coninutul de substane emulgatoare. Aceste substane emulgatoare sunt reprezentate de srurile biliare, sruri de sodiu i potasiu ale acizilor biliari conjugai cu glicin i taurin. Ele au un rol important n absorbie, mbuntind viteza de dizolvare i solubilitatea n ap a substanelor insolubile. Ali factori care influeneaz absorbia sunt: mrimea particulelor, prezena unor solveni i emulgatori, prezena microorganismelor, legarea de componente ale coninutului gastric, viteza de golire a stomacului, temperatura coninutului stomacal, motilitatea intestinal, efectul alimentelor, secreia gastrointestinal.

Fig. 3.9. Tractul intestinal la om (a: ficatul; b: stomacul; c: duodenul; d: ileonul; e: colonul; f: seciune longitudinal prin ileon; g: vilozitate; k: detaliu al unei viloziti; o: detaliu al celulelor epiteliale cu microviloziti (Timbrell J.A, 1991)

32 TOXICOLOGIE GENERAL

Un aspect important al absorbiei gastrointestinale este reprezentat de circuitul enterohepatic. Dup secreia prin bil a metaboliilor conjugai hidrosolubili, acetia pot fi hidrolizai n intestin de microflora intestinal sau de alte condiii locale, elibernd compusul ntr-o form mai puin polar, care poate fi reabsorbit i ajunge din nou n ficat prin vena port (Fig.3.10). Acest proces se poate repeta de mai multe ori i crete timpul de njumtire biologic, fcnd posibil apariia unor efecte adverse la nivel hepatic. Un alt ciclu este circuitul buco-enteric, n care substanele toxice absorbite n intestin sunt transportate de snge ajungnd la nivelul glandelor salivare, fiind apoi excretate n cavitatea bucal. Un exemplu de substan toxic ce poate intra n acest circuit este mercurul.

Fig. 3.10. Diagrama circulaiei enterohepatice (Niesink R.J.M., et al, 1996)

1.5. Absorbia la nivelul intestinului gros Capacitatea de absorbie a intestinului gros este mult mai redus fa de cea a intestinului subire, iar aceast cale de ptrundere este mai puin important pentru substanele toxice. Absorbia n acest caz depinde de : - a) locul de administrare, absorbia fiind mai rapid i mai eficient atunci cnd substana este aplicat n apropierea anusului, zon irigat de venele hemoroidale inferioare, care evit pasajul hepatic; - b) vrst, procesul descrescnd treptat o dat cu naintarea n vrst.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 33

n concluzie, absorbia gastrointestinal se realizeaz preponderent la nivelul intestinului subire, fapt corelat pozitiv cu suprafaa disponibil pentru absorbie a acestui segment digestiv (Tabel III.1).

Tabel III.1. Mrimea suprafeei de absorbie pentru diferitele segmente ale tractului digestiv Cavitatea bucal Stomac Intestinul subire Intestinul gros Rect 0,02 0,1-0,2 100 0,5-1,0 0,04-0,07

2. Absorbia pe cale respiratorie Este o cale de absorbie important pentru ptrunderea substanelor toxice care se gsesc n aerul din mediul industrial sau comunal sub form de gaze, vapori ai lichidelor volatile sau particule fine, lichide sau solide. Sistemul respirator este prevzut cu unele mecanisme de protecie mpotriva substanelor toxice, n special a celor sub form de particule. Totui, el este vulnerabil din mai multe motive: - Schimbul de gaze la nivelul alveolelor capilare se produce la o distan foarte mic (1-2 m) de sistemul circulator, ceea ce permite nu numai schimbul de oxigen i dioxid de carbon, ci i schimbul de substane toxice gazoase. - Pereii alveolari sunt umectai de un film apos subire, care faciliteaz absorbia iniial a substanelor toxice din aerul alveolar. Totui, n unele cazuri, componenta fosfolipidic de la suprafaa stratului monomolecular interacionez cu compuii cu liposolubilitate mare i le ntrzie absorbia. - Suprafaa alveolelor pulmonare este foarte mare (ntre 50 i 100 de m2), de aproximativ 50 de ori mai mare dect suprafaa pielii (Fig. 3.11.).

34 TOXICOLOGIE GENERAL

Fig. 3.11. Structura sistemului respirator (a: traheea; b: bronhiol; c: sac alveolar cu vascularizaia aferent; d: aranjarea vaselor de snge n jurul alveolelor; e: aranjarea celulelor i a spaiilor de aer n alveole; f: structura celular a alveolei; g: celul endotelial a vasului capilar; h: eritrocite; i: celul epitelial a sacului alveolar. (Timbrell J.A., 1991)

Procesul respiraiei implic trecerea aerului prin mai multe segmente intercorelate care includ: nasul, gura, faringele, traheea, bronhiile i apoi cile respiratorii inferioare i alveolele pulmonare. Cantitatea de aer reinut n plmn este cunoscut drept volumul rezidual. Viteza de ptrundere a substanelor toxice sub form de vapori este controlat de viteza de ventilaie alveolar, compusul fiind prezent n alveole de manier temporar, de aproximativ 20 de ori / minut. n cazul inhalrii gazelor, moleculele acestora difuzeaz din spaiul alveolar n snge, n care se dizolv. Cu excepia unor gaze cu afinitate special pentru anumite structuri ale organismului (ex. legarea monoxidului de carbon de hemoglobin), captarea unui gaz de un esut se realizeaz de obicei printr-un simplu proces fizic de dizolvare. Dizolvarea moleculelor de gaz n snge are loc pn la stabilirea unui echilibru ntre moleculele de gaz din snge i cele din spaiul alveolar, echilibru la care raportul concentraiilor n cele dou faze este constant i poart denumirea de coeficient de partiie snge-gaz, fiind caracteristic pentru fiecare substan. Viteza de absorbia a gazelor la nivel pulmonar va depinde deci de valoarea acestui coeficient:

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 35

- pentru gazele cu solubilitate redus, viteza de absorbie depinde n principal de fluxul sanguin n plmni - pentru gazele cu solubilitate mare, viteza de absorbie depinde n principal de ventilaie (frecvena respiratorie). n cazul particulelor solide, absorbia depinde n principal de mrimea acestora (Fig. 3.12).

Nas Gura Faringe 5 - 30m Trahee Bronhii Bronhiole 1 - 5m

Alveole 1 m

Fig. 3.12. Segmentele la nivelul crora se produce absorbia n tractul respirator

Particulele cu dimensiuni mai mari de 5 m sunt de obicei depozitate n regiunea naso-faringelui. Particulele ntre 2 i 5 m sunt depozitate n principal n zona traheobronic, de unde sunt eliminate prin micarea retrograd a stratului de mucus din poriunea ciliat a tractului respirator. Tusea i strnutul favorizeaz deplasarea mucusului i a particulelor spre cavitatea bucal, de unde particulele pot fi eventual nghiite i absorbite n tractul gastrointestinal. Particulele de 1 m sau mai mici ptrund n sacii alveolari. Ele pot fi absorbite n circulaia general sau pot fi fagocitate de macrofagele alveolare i ajung n limf, unde substanele toxice pot fi depozitate perioade lungi de timp. ndeprtarea particulelor din plmni se realizeaz n mare msur prin dizolvare i transport vascular. Unele particule pot ns rmne n alveole un timp nedefinit. Aceasta are loc atunci cnd celulele alveolare prolifereaz n loc s se descuameze i nglobeaz particule de praf, care n asociere cu dezvoltarea unei reele de fibre de reticulin conduc la formarea unei

36 TOXICOLOGIE GENERAL

plci sau a unui nodul. De exemplu, fibrele de azbest sunt fagocitate, rmn n plmn i pot cauza fibroz i chiar tumori pulmonare.

3. Absorbia cutanat Pielea este un esut multistratificat complex, care constituie o barier fiziologic relativ eficient mpotriva ptrunderii xenobioticelor. Ea este relativ impermeabil fa de majoritatea ionilor i fa de soluiile apoase, dar este permeabil pentru multe substane toxice n stare de agregare solid, lichid sau gazoas. Pielea este alctuit din trei straturi: epiderm, derm i hipoderm, n acesta din urm gsindu-se aparatul pilosebaceu i glandele sudoripare (Fig.3.13).

Fig. 3.13. Structura pielii la mamifere

(Niesink R.J.M., et al, 1996)

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 37

Absorbia substanelor toxice se poate face prin: foliculii piloi, sau celulele glandelor sebacee i sudoripare; este o cale minor, deoarece suprafaa lor raportat la suprafaa total a pielii este doar de 0,1-1%. Difuzie prin celulele epidermei care constituie poriunea majoritar a suprafeei pielii. Epiderma este un esut de grosime diferit (ntre 0,1 i 0,8 mm), alctuit din mai multe straturi. Stratul extern, care reprezint bariera principal n calea ptrunderii substanelor exogene, este stratul cornos, care este constituit din 8-16 straturi de celule aplatizate, cheratinizate. Aceste celule moarte, cheratinizate, sunt foarte hidrofile, proprietate care menine pielea moale i supl. Pielea este acoperit de un ulei natural, sebumul, care confer epidermei capacitatea de a mpiedica ptrunderea apei. Stratul cornos uman prezint diferene fizico-chimice i structurale de la o regiune a organismului la alta, care influeneaz gradul de absorbie; de exemplu, substanele toxice se absorb uor prin scrot, cap, gt, axil, mai puin prin peretele abdominal i foarte greu n regiunea plantar sau palmar. Prima etap a absorbiei prin piele este difuzia xenobioticelor prin epiderm, care este o etap limitant de vitez datorit prezenei stratului cornos: - substanele polare difuzeaz prin suprafaa extern a filamentelor proteice ale stratului cornos hidratat - moleculele nepolare se dizolv i difuzeaz prin matricea lipidic dintre filamentele proteice, viteza de difuzie fiind direct proporional cu liposolubilitatea i invers proporional cu masa molecular; totui, substanele foarte hidrofile sau foarte lipofile nu pot strbate stratul cornos. A doua etap a absorbiei const n difuzia substanei toxice prin derm, care reprezint un mediu de difuzie poros, neselectiv i apos. Din derm, compuii sunt preluai n circulaia sistemic prin numeroasele capilare venoase i limfatice care l irig. Absorbia cutanat poate fi influenat de: - proprietile fizico-chimice ale substanei, n special gradul de ionizare, mrimea moleculei, solubilitatea n ap i lipide - pH-ul pielii - temperatura ambiant - masajul local - aplicarea de surfactani i spunuri - solventul n care este condiionat substana Prin tegumente vor ptrunde: - substane gazoase i volatile: H2S, CO, CO2, HCN - compui organici lipofili: hidrocarburi alifatice i aromatice, alcooli, solveni clorurai, nitro- i aminoderivai aromatici, fenoli, insecticide organofosforice, alcaloizi lichizi (nicotina)

38 TOXICOLOGIE GENERAL

- unele substane minerale (Hg, Pb, Bi, ioduri alcaline), direct sau dup reacie cu acizii grai din sebum.

4. Absorbia pe cale parenteral Aceast cale de administrare se ntlnete de obicei n intoxicaiile acute medicamentoase, n tentativele de sinucidere i n cazurile de supradozare la toxicomani. Viteza de absorbie depinde de modul de administrare, fiind cea mai mare n cazul administrrii intravenoase, cnd substana toxic este introdus direct n circulaia sanguin, eliminndu-se procesul de absorbie. Calea intraperitoneal este utilizat n experimentele toxicologice, atunci cnd se urmrete asigurarea unei biodisponibiliti ct mai apropiat de 100% a unei substane insolubile. Absorbia xenobioticelor este rapid, datorit vascularizaiei bogate i a suprafeei mari a cavitii peritoneale. Compuii sunt absorbii iniial n circulaia portal i deci vor trece prin ficat nainte de a ajunge la organe. Cile subcutanat i intramuscular se caracterizeaz prin viteze de absorbie mai reduse, dar xenobioticul ajunge direct n circulaia general. Viteza de absorbie poate fi influenat de modificarea circulaiei sanguine n zona respectiv, de exemplu prin asocierea unui vasoconstrictor cum ar fi adrenalina, care reduce viteza de resorbie i prelungete aciunea substanei toxice.

DISTRIBUIA SUBSTANELOR TOXICE Distribuia este procesul de transfer al substanei chimice din circulaia general n esuturile organismului. Procesul poate fi caracterizat att sub aspectul vitezei ct i al extinderii, parametrii farmacocinetici corespunztori fiind constanta vitezei de distribuie (, k12, k21) i volumul aparent de distribuie (Vd). Distribuia are loc de obicei rapid. Viteza de distribuie este determinat ntro prim faz de circulaia sanguin i de viteza de difuzie din capilare n celulele unui anumit organ sau esut. Distribuia final depinde n mare msur de afinitatea xenobioticului pentru diferite esuturi. Ptrunderea substanei toxice n celule se face prin difuzie pasiv sau transport activ. Moleculele mici hidrosolubile i ionii difuzeaz prin porii membranei celulare, n timp ce moleculele liposolubile difuzeaz prin membran. Moleculele foarte polare i ionii de dimensiuni medii sau mari nu pot ptrunde dect prin mecanisme specializate de transport. Lichidele organismului sunt divizate n trei compartimente distincte: apa plasmatic, apa interstiial i apa intracelular. Apa extracelular este constituit

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 39

din apa plasmatic i apa interstiial. La om, plasma reprezint aproximativ 4% din greutatea corporal, dar 53% din volumul sanguin total, lichidul interstiial constituie 13% din greutatea corporal, iar lichidul intracelular 41%. Concentraia substanei toxice n snge dup expunere depinde de volumul aparent de distribuie. Astfel, dac substana este distribuit doar n plasm, n compartimentul vascular va fi atins o concentraie mare. Dac ns aceeai cantitate de xenobiotic este distribuit n apa interstiial i intracelular, concentraia n compartimentul vascular va fi mult mai mic. Distribuia substanelor toxice este ns complex i nu poate fi apreciat doar prin distribuia n unul din compartimentele apoase ale organismului. Legarea de i/sau dizolvarea n depozite de stocare cum ar fi esutul adipos, ficatul sau oasele, sunt factori importani n determinarea distribuiei unui xenobiotic. Substanele toxice sunt transportate n organism de ctre snge fie dizolvate n apa plasmatic, fie legate de un transportor. Acest transportor poate fi reprezentat de: - proteinele plasmatice, n special albuminele, care leag ioni i molecule n general mici - lipoproteinele, care leag moleculele liposolubile, probabil prin dizolvare n componenta lipidic - eritrocitele, care pot fixa unii compui cum ar fi plumbul - leucocitele, care pot fagocita particulele insolubile Distribuia xenobioticelor n organism depinde de: legarea de proteinele plasmatice afinitatea pentru proteinele tisulare debitul sanguin n organ existena unor bariere de protecie 1. Legarea de proteinele plasmatice se face n principal de albumin i eventual de alfa-1-glicoproteina acid sau de globulin. Aceast legare face ca substana toxic s nu fie disponibil imediat pentru a fi transferat n spaiul extravascular, deci proteinele plasmatice exercit att un rol de transport ct i de stocare. Legturile formate sunt ns reversibile (legturi ionice, de hidrogen, fore van der Waals, interaciuni hidrofobe) i substana toxic poate fi eliberat pentru a traversa peretele vascular. Disocierea se poate produce atunci cnd afinitatea xenobioticului pentru o alt molecul sau component celular este mai mare dect cea pentru proteinele plasmatice, sau cnd scade concentraia compusului nelegat. Astfel, de cte ori concentraia dintr-un compartiment, snge sau esut, scade, are loc o redistribuie. ntre diferitele substane se poate produce o competiie pentru legarea de proteinele plasmatice, fapt care este la originea a numeroase interaciuni medicamentoase, unele cu potenial toxic considerabil (de exemplu interaciunea sulfamidelor

40 TOXICOLOGIE GENERAL

antibacteriene cu sulfamidele antidiabetice, care poate provoca apariia comei hipoglicemice). 2. Afinitatea pentru proteinele tisulare conduce la fixarea preferenial a substanelor toxice n anumite organe. 3. Debitul sanguin n organ reprezint unul din principalii factori care determin distribuia diferitelor xenobiotice n organe. Astfel, organele puternic vascularizate (ficat, rinichi) pot concentra substanele toxice preferenial fa de alte organe. Creierul, care reprezint doar 2% din greutatea corporal, primete 16% din fluxul cardiac i poate deci reine cantiti mai mari de xenobiotice. 4. Barierele organismului Bariera hemato-encefalic protejeaz sistemul nervos central de fluctuaiile compoziiei sngelui, realiznd o separare aproape complet a acestuia de restul organismului. Bariera hemato-encefalic (BHE) este localizat la nivelul peretelui capilar, unde celulele endoteliale sunt strns unite, lsnd ntre ele un spaiu extrem de redus, care nu permite trecerea substanelor toxice legate de proteinele sanguine spre creier. Se estimeaz c suprafaa capilarelor cerebrale este de aproape 20 m2 pentru o greutate medie a creierului uman de 1300 g. Comparativ cu celulele endoteliale ale altor capilare, capilarele cerebrale au un numr redus de vacuole i un procent crescut al fraciunii mitocondriale, ceea ce face ca principalul sediu anatomic i funcional al BHE s fie endoteliul cerebral. Datorit existenei barierei hemato-encefalice, schimbul direct ntre compartimentul vascular i parenchimul cerebral este semnificativ redus. Pot ptrunde gazele i moleculele lipofile de dimensiuni mici, dar pentru majoritatea celorlalte substane transportul se face prin intermediul unor transportori sau a veziculelor. Sunt patru motive pentru care substanele toxice nu pot ptrunde uor n creier: - celulele endoteliului capilar din SNC sunt strns lipite, lsnd foarte puini pori ntre ele, astfel nct mpiedic trecerea moleculelor hidrosolubile de dimensiuni mici pn la medii - conin un transportor dependent de ATP, proteina MDR, care transport unele substane napoi n snge - capilarele din SNC sunt nconjurate n mare msur de astrocite, care trebuie s fie traversate de compuii liposolubili - concentraia n proteine a lichidului interstiial din SNC este mai sczut comparativ cu alte lichide biologice, ceea ce limiteaz deplasarea compuilor insolubili n ap prin transport paracelular.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 41

Ptrunderea substanelor toxice n creier este deci condiionat de liposolubilitatea acestora i de prezena formei neionizate. Unele xenobiotice ptrund n creier printr-un proces ce implic transportori. De exemplu, metilmercurul se combin cu cisteina, formnd o structur asemntoare cu metionina, care este acceptat de transportorul aminoacizilor din celulele endoteliului capilar. Bariera placentar este un organ intermediar ntre ft i peretele uterului, prin care se realizeaz transferul de gaze, substane nutritive i produi de degradare ntre sngele mamei i al copilului. Ea este alctuit din mai multe straturi de celule, care variaz de la o specie la alta. Placenta are i un oarecare rol de protejare a ftului fa de ptrunderea substanelor toxice datorit capacitii sale de a biotransforma unele xenobiotice, dar poate fi strbtut prin difuzie pasiv de substanele liposolubile. Concentraia compusului atinge de obicei 75-100% din concentraia n sngele matern n 5 minute de la administrare, de aceea protecia oferit ftului de aceast barier este redus.

STOCAREA SUBSTANELOR TOXICE Sngele distribuie substanele toxice n toate esuturile organismului care, n funcie de afinitatea lor, pot reine cantiti mai mari sau mai mici de substan. Aceast reinere poate fi de dou tipuri: - a) n esuturi care reprezint locul de aciune al substanei toxice, caz n care se folosete termenul de localizare. Un astfel de exemplu este monoxidul de carbon, care are afinitate foarte mare pentru hemoglobin, sau paraquatul, care se acumuleaz n plmn. - b) n alte esuturi dect cele la nivelul crora i manifest aciunea toxic, cnd se prefer termenul de stocare sau cel de acumulare. De exemplu, plumbul este stocat n oase, dar i manifest aciunea la nivelul esuturilor moi, insecticidele organoclorurate se acumuleaz n esutul adipos, dar acioneaz toxic la nivelul sistemului nervos central. Substana toxic din organele de stocare este n echilibru cu fraciunea liber din plasm. Deci, pe msur ce compusul este biotransformat sau excretat din organism, o alt fraciune este eliberat din depozite, fapt care poate crete foarte mult timpul de njumtire biologic. Locurile majore de stocare a substanelor toxice n organism 1. Proteinele plasmatice pot fixa att constitueni fiziologici normali, ct i xenobiotice. Majoritatea acestora se leag de albumine. Transferina, o beta1

42 TOXICOLOGIE GENERAL

globulin, este implicat n transportul fierului n organism, iar ceruloplasmina n transportul cuprului. Alfa- i beta-lipoproteinele leag compui liposolubili cum ar fi vitaminele, colesterolul, hormonii steroizi, dar i xenobiotice. Substanele cu caracter bazic se pot lega de alfa1-glicoproteina acid. Legarea de proteinele plasmatice este reversibil, dar unii compui se pot lega att de puternic nct dup o singur doz rmn n organism mai muli ani. De exemplu, medicamentul Teridax (acidul 2,4,6-triiodo-3-hidroxifenil propionic) are din acest motiv un timp de njumtire de 2,5 ani. 2. Proteinele tisulare din ficat i rinichi Ficatul i rinichiul au o mare capacitate de a lega diferite substane chimice i concentreaz probabil mai multe xenobiotice dect toate celelalte organe mpreun. Dei mecanismele prin care ficatul i rinichiul rein substanele toxice din snge nu au fost pe deplin elucidate, se pare c n majoritatea cazurilor sunt implicate transportul activ i legarea de unii componeni tisulari. Astfel, a fost identificat n citoplasma hepatocitelor o protein, ligandina, care are o mare afinitate pentru acizii organici, i care leag i azocoloranii carcinogeni i corticosteroizii. Metalotioneina, o protein cu sulf cu mas molecular mic din ficat i rinichi, are o mare afinitate pentru metale cum ar fi cadmiul i zincul. 3. esutul adipos este un loc important de stocare pentru compuii cu liposolubilitate mare cum ar fi: insecticidele organoclorurate, nitroderivaii aromatici, solvenii organici. Se pare c reinerea se face prin simpl dizolvare a substanei toxice n grsimile neutre. Aceast stocare determin scderea concentraiei xenobioticului la locul de aciune, deci este de ateptat ca astfel de compui s aib o toxicitate mai redus la persoanele obeze dect la cele normale. Concentraia plasmatic poate crete ns mult ca urmare a mobilizrii rapide a lipidelor dup o perioad de post, existnd posibilitatea apariiei de intoxicaii acute. 4. esutul osos reprezint locul major de stocare pentru unele substane toxice cum ar fi fluorul, plumbul, stroniul. Fixarea are loc n urma unei reacii rapide de schimb ntre substana toxic din lichidul interstiial i cristalele de hidroxiapatit din os. Datorit similitudinii ca dimensiune i sarcin, ionul fluorur poate nlocui ionul hidroxil, n timp ce ionul de calciu poate fi nlocuit de ionii de plumb sau stroniu. Stocarea substanelor toxice n os poate sau nu s aib consecine nedorite. De exemplu, plumbul nu este toxic pentru os, n timp ce fluorul produce fluoroz scheletic, iar stroniul radioactiv osteosarcom. Xenobioticele stocate n os pot fi eliberate prin:

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 43

- schimb ionic la nivelul suprafeei cristalelor de hidroxiapatit - dizolvarea cristalelor prin mecanisme osteoclastice Unii compui mai pot fi stocai n fanere (arsen, seleniu), piele (aur, argint), sau n celulele sistemului reticulo-endotelial care pot fagocita particulele.

ELIMINAREA SUBSTANELOR TOXICE Dup absorbie n organism, distribuie i biotransformare, substanele toxice sunt eliminate, fie ca atare, fie sub form de metabolii. Eliminarea include toate procesele care conduc la scderea concentraiei xenobioticului n organism. Aceasta se poate realiza prin metabolizare, sau prin excreie. Excreia la rndul ei se poate face pe cale renal, prin fecale, pe cale pulmonar sau prin secreii ale organismului: sudoare, saliv, lacrimi sau lapte. Eliminarea ncepe imediat dup ptrunderea xenobioticului n organism, dar poate s nu reprezinte procesul major pn n momentul n care absorbia i distribuia sunt diminuate. Factorii care influeneaz eliminarea sunt: - integritatea funcional a principalelor sisteme de organe (cardiovascular, renal, hepatic) - vrsta - sexul - competiia pentru procesul de eliminare sau inhibarea acestuia de ctre alte xenobiotice - saturarea proceselor enzimatice - factorii genetici - proprietile fizico-chimice ale substanei

1. Excreia renal Rinichii reprezint principalele organe excretoare. Pe aceast cale se elimin majoritatea produilor rezultai din cile metabolice normale, dar i xenobioticele polare i metaboliii hidrofili ai xenobioticelor lipofile. Unitatea funcional a rinichiului este nefronul (Fig. 3.14.), la nivelul acestuia avnd loc procesele fiziologice ce sunt utilizate att pentru excreia substanelor endogene, ct i a celor exogene, i anume: filtrarea glomerular, secreia tubular i reabsorbia tubular.

44 TOXICOLOGIE GENERAL

Fig. 3.14. Structura nefronului (McKimm W., 2000)

1.1.

1.2.

Filtrarea glomerular reprezint mecanismul principal de eliminare. La adult, prin artera renal trece aproximativ 25% din volumul minut cardiac (1,2-1,3 l/minut), deci n medie 1800 l de snge pe zi. Sngele sufer un proces de filtrare cu o vitez de 130 ml/minut (190 l/zi), care constituie urina primar. Deoarece capilarele glomerulilor au pori mari (70 nm), majoritatea substanelor toxice pot fi filtrate la acest nivel, cu excepia moleculelor de dimensiune mare, cu masa molecular mai mare de 60000 daltoni, sau a celor legate de proteinele plasmatice. Reabsorbia tubular este cel de-al doilea proces major care are loc n rinichi. Filtratul glomerular conine ap i substane care sunt necesare organismului: aminoacizi, glucoz, sruri, care trebuie recuperate din filtrat n timpul procesului de eliminare. Acest proces are loc n special la nivelul poriunii proximale a tubilor renali, prin mecanisme de difuzie pasiv sau transport activ. Apa i majoritatea ionilor sunt reabsorbii n tubul distal i tubul colector. Reabsorbia xenobioticelor are loc o dat cu absorbia moleculelor endogene i se face de obicei prin difuzie pasiv. Substanele liposolubile sunt reabsorbite eficient, n timp ce compuii polari i ionii sunt excretai n urin. De aceea,

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 45

pentru substanele toxice cu caracter slab acid sau slab bazic eliminarea renal poate fi favorizat prin modificarea pH-ului urinar; astfel, alcalinizarea urinei conduce la ionizarea acizilor slabi, ceea ce mpiedic reabsorbia tubular, crescnd eliminarea. 1.3. Secreia tubular a substanelor toxice se poate face prin difuzie pasiv sau printr-un mecanism activ. Difuzia pasiv are o semnificaie minor deoarece filtrarea glomerular, fiind mult mai rapid, va contribui la crearea unui gradient de concentraie care este favorabil reabsorbiei tubulare. Secreia activ se realizeaz cu ajutorul a dou sisteme de transport, unul pentru acizi (anioni) i altul pentru baze (cationi). Aceste sisteme au specificitate redus, astfel nct un numr mare de compui pot fi transportai activ n tubii renali. Sistemul anionic poate transporta acizi organici (acid acetilsalicilic, peniciline), acizi sulfonici i metabolii acizi (sulfoconjugai, glucuronoconjugai, conjugai cu glicina). Sistemul cationic poate transporta baze organice (morfin, histamin) i compui cuaternari de amoniu. Deoarece specificitatea sistemelor de transport este redus, diferite xenobiotice pot intra n competiie pentru transportor. De asemenea, afinitatea sistemelor de transport activ pentru diveri compui fiind mai mare dect afinitatea proteinelor plasmatice, legarea de proteine nu reprezint un factor limitant al excreiei. Gradul de eliminare a unei substane toxice poate fi apreciat prin clearanceul renal, care reprezint cantitatea de snge sau plasm epurat total de xenobiotic n unitatea de timp: Cl = [Cu x V] / Cp Unde Cu este concentraia substanei n urin Cp este concentraia substanei n plasm V este debitul urinar (ml / min).

2. Excreia prin fecale Este un proces care nu este la fel de bine cunoscut ca i excreia pe cale renal. Sursele care contribuie la excreia substanelor toxice prin fecale sunt: 2.1. Substanele neabsorbite n tractul gastrointestinal: macromolecule i compui complet ionizai cu mas molecular mare, cum ar fi polimerii sau bazele cuaternare de amoniu 2.2. Excreia biliar: reprezint probabil sursa cea mai important a xenobioticelor eliminate prin fecale i a doua cale de eliminare dup cea renal. Ficatul are o poziie foarte avantajoas pentru ndeprtarea substanelor toxice

46 TOXICOLOGIE GENERAL

ajunse n snge dup absorbia din tractul gastrointestinal, deoarece acest snge va trece prin ficat nainte de a ajunge n circulaia general. Astfel, ficatul poate reine aceti compui, mpiedicnd distribuia lor n alte segmente ale organismului. n plus, ficatul este sediul major al biotransformrii xenobioticelor, iar metaboliii formai pot fi excretai direct n bil. Compuii exogeni excretai prin bil pot fi mprii n trei clase n funcie de raportul ntre concentraiile lor n bil i n plasm: - Substanele din clasa A (raportul n jur de 1) sodiul, potasiul, glucoza, mercurul, taliul, cesiul, cobaltul - Substanele din clasa B (raportul mai mare de 1, de obicei ntre 10 i 1000) acizii biliari, bilirubina, plumbul, arsenul, manganul i multe alte xenobiotice - Substanele din clasa C (raportul este subunitar) inulina, albumina, zincul, fierul, aurul, cromul Substanele toxice care se excret prin bil sunt : - compuii puternic polari, anioni sau cationi - metaboliii conjugai care nu pot fi reabsorbii n snge - compuii cu masa molecular mai mare de 300, cum ar fi hidrocarburile aromatice polinucleare, coloranii azoici Dup ce au ajuns n intestin mpreun cu bila, xenobioticele sau metaboliii acestora excretai pe aceast cale pot fi eliminai prin fecale sau, dependent de proprietile lor, pot fi reabsorbii, intrnd n ciclul enterohepatic. Metaboliii conjugai pot fi de asemenea hidrolizai i reabsorbii. 2.3. Secreia intestinal este un proces relativ lent, care se realizeaz n general prin difuzia pasiv a substanei din snge n lumenul intestinal. Este ntlnit la compui cu metabolizare redus sau care au clearance renal sau biliar sczut. n intestinul gros a fost demonstrat existena unui proces de secreie activ a acizilor i a bazelor organice.

3. Eliminarea pulmonar Pe cale pulmonar se elimin substanele care se gsesc n stare gazoas la temperatura corpului, precum i lichidele volatile. Cantitatea de lichid eliminat prin plmni este proporional cu tensiunea de vapori a acestuia. Astfel, lichidele foarte volatile, cum ar fi eterul etilic, se elimin aproape exclusiv pe aceast cale. Eliminarea se face prin difuzie simpl prin membranele alveolelor pulmonare.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 47

4. Alte ci de eliminare 4.1. Transpiraie i saliv: au o importan minor, iar excreia depinde de difuzia formei neionizate, liposolubile, a xenobioticului. Substanele toxice excretate prin saliv sunt de obicei nghiite i sunt din nou disponibile pentru absorbia gastrointestinal (ciclul salivar). Prin saliv se mai pot excreta i unele metale care pot forma cu hidrogenul sulfurat provenit din procesele de putrefacie a resturilor alimentare sulfuri ce se depun la nivelul gingiilor sub form de lizereu, constituind un indiciu al expunerii (ex. lizereul lui Burton din intoxicaia cu plumb). 4.2. Lapte. Secreia xenobioticelor n lapte este deosebit de important, deoarece substana toxic poate s treac de la mam la sugar, sau de la vaci la populaie, existnd riscul de producere a intoxicaiilor. Substanele sunt excretate prin lapte prin difuzie simpl. Deoarece laptele este mai acid dect plasma (pH 6,5), compuii bazici se pot concentra n lapte. De asemenea, laptele avnd un coninut n lipide de 3-4% , xenobioticele liposolubile difuzeaz mpreun cu lipidele din plasm n glanda mamar i sunt excretate n lapte n timpul lactaiei. Printre substanele care ating concentraii mai mari n lapte dect n plasm se numr: tiouracilul, streptomicina, litiul, iodul, mercurul, izoniazida, etanolul, difenilhidantoina, cloramfenicolul.

METABOLIZAREA SUBSTANELOR TOXICE Majoritatea xenobioticelor care ptrund n organism sunt liposolubile, proprietate care le permite s strbat membranele biologice, deci s fie absorbite i distribuite. Aceast proprietate reprezint ns un obstacol n calea eliminrii lor, deoarece compuii lipofili pot fi uor reabsorbii. De aceea, eliminarea substanelor toxice depinde n mare msur de transformarea lor n molecule hidrosolubile, care pot fi excretate prin urin sau prin fecale. O excepie de la aceast regul o constituie eliminarea pulmonar a substanelor volatile, n cazul crora transformarea n compui hidrosolubili nevolatili scade viteza de eliminare. Totalitatea modificrilor pe care un xenobiotic le sufer n organism poart denumirea de biotransformare sau metabolizare. Consecinele biotransformrii pot fi: Creterea eliminrii compusului prin formarea unor metabolii care n general sunt mai hidrosolubili, ceea ce are drept urmare scderea timpului de njumtire biologic i meninerea la minim a potenialului toxic.

48 TOXICOLOGIE GENERAL

Exist ns i excepii, n unele cazuri metabolizarea conducnd la scderea hidrosolubilitii i deci la reducerea excreiei. De exemplu, acetilarea scade solubilitatea n urin a unor sulfamide, fcnd posibil cristalizarea metaboliilor la nivelul tubilor renali i apariia necrozei tubulare. Modificarea activitii biologice a substanei n sensul reducerii sau a creterii toxicitii. Astfel: Detoxifierea reprezint procesul prin care n urma biotransformrii se obin metabolii mai puin toxici dect compusul printe, i deci mai uor excretabili Bioactivarea este procesul prin care n urma biotransformrii se obin metabolii mai toxici dect compusul printe. Tipul de biotransformare suferit de un xenobiotic depinde de: Structura i proprietile fizico-chimice ale compusului: gruprile funcionale, stereochimia, coeficientul de partiie Enzimele care se gsesc la nivelul esutului expus Enzimele implicate n metabolizarea xenobioticelor: Pot fi localizate n ficat sau n alte esuturi: piele, plmn, mucoasa nazal, ochi, tractul gastrointestinal, rinichi, pancreas, splin, inim, creier, testicole, placent, plasm, eritrocite, limfocite, trombocite Pot fi localizate ntr-un anumit tip de celul sau ntr-un anumit organ Spre deosebire de enzimele implicate n metabolismul intermediar, n general nu sunt specifice i deci nu sunt ntotdeauna foarte eficiente Enzimele implicate n mod normal n metabolismul intermediar pot cataliza biotransformarea unui xenobiotic dac structura acestuia este corespunztoare Un xenobiotic poate suferi mai multe tipuri de biotransformri Au o localizare subcelular particular: n primul rnd n reticulul endoplasmatic (microzomi), sau n citosol, iar cantiti mai mici n mitocondrii, nuclei, lizozomi, peroxizomi Locul biotransformrilor: Ficatul este organul implicat cel mai frecvent n biotransformarea xenobioticelor datorit: poziiei sale, irigrii sanguine bogate i funciei sale metabolice, ceea ce implic un coninut ridicat de enzime de metabolizare. Majoritatea substanelor toxice ptrund n organism pe calea tractului gastrointestinal, de unde ajung prin intermediul venei porte direct n ficat. Pentru acest motiv, ficatul este expus la concentraii mai mari dect majoritatea esuturilor.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 49

Creierul. Cercetrile din ultimii ani au demonstrat prezena n creier a unor enzime de metabolizare cum ar fi enzimele citocromului P450, UDP-glucuronoziltransferazele i glutation-S-transferazele. Aceste enzime sunt localizate att la nivelul barierei hemato-encefalice, n celulele endoteliale, ct i n diferite structuri cerebrale. n creierul uman, concentraiile cele mai ridicate de citocrom P450 au fost regsite n mduva cerebral i n cerebel, iar cele mai reduse n striat i hipocamp. De asemenea, citocromul P450 este prezent n neuroni, care reprezint locul de aciune al multor substane psihoactive. Cel mai cunoscut exemplu cu relevan toxicologic de biotransformare la nivelul barierei hemato-encefalice, este cel al 1-metil-4-fenil-1,2,5,6-tetrahidropiridinei (MPTP), care sub aciunea monoaminoxidazei B mitocondriale formeaz ionul dihidropiridiniu (MPP+), responsabil de inducerea unui sindrom de tip Parkinson. Intestinul. La nivelul mucoasei intestinale se gsesc izoenzime ale citocromului P450, glucuronoziltransferaze, sulfotransferaze i glutationS-transferaze ce pot fi responsabile de un metabolism presitemic al primului pasaj, care la rndul su poate influena biodisponibilitatea oral a xenobioticelor sau bioactivarea mutagenilor i carcinogenilor. Aceste enzime, alturi de enzimele bacteriene ale microflorei intestinale, pot metaboliza poluani din mediu relativ stabili i xenobiotice provenite din alimente la molecule cu aciune mutagen sau cancerigen. Plmnul conine de asemenea sisteme enzimatice de metabolizare a xenobioticelor, dar n proporie mai mic fa de ficat. El poate juca un rol semnificativ n eliminarea metabolic sau n bioactivarea xenobioticelor cu mas molecular mic ce sunt inhalate. Nasul. Metabolismul la nivelul mucoasei nazale are implicaii toxicologice importante, deoarece izoenzimele citocromului P450 de la acest nivel, care au o activitate catalitic mai mare dect n orice alt esut, pot converti unele xenobiotice din atmosfer n metabolii reactivi, crescnd riscul de apariie a cancerelor nazo-faringiene sau pulmonare (de exemplu, formarea nitrozaminelor n fumul de igare). Clasificarea reaciilor de biotransformare a xenobioticelor (Tabel III.2): Reacii din faza I - includ reacii de oxidare, reducere i hidroliz i introduc n molecula xenobioticului noi grupri funcionale (-OH, -NH2, -NH, COOH), sau modific grupri existente, care pregtesc intrarea metaboliilor obinui n faza II de metabolizare. De obicei se produce o cretere moderat a hidrofiliei moleculei. Reacii din faza II sunt cunoscute sub denumirea de reacii de conjugare i presupun biosinteza unui compus conjugat ntre substana

50 TOXICOLOGIE GENERAL

toxic (dac posed grupri polare), sau un metabolit polar rezultat din faza I, i un metabolit endogen. Metaboliii formai sunt mai hidrosolubili i mai uor excretabili. Majoritatea xenobioticelor sufer consecutiv att reacii din faza I ct i reacii din faza II. Cele care sunt puin metabolizabile sau cele hidrosolubile foarte polare sunt excretate n mare msur nemodificate. Tabel III.2. Cile generale de metabolizare a xenobioticelor i localizarea lor subcelular
REACIE Oxidare ENZIM FAZA I Alcool dehidrogenaz Aldehid dehidrogenaz Aldehid oxidaz Xantinoxidaz Monoaminoxidaz Diaminoxidaz Prostaglandin H sintetaz Flavinmonooxigenaze Citocromul P450 Azo- i nitroreducerea Reducerea carbonililor Reducerea disulfurilor Reducerea sulfoxizilor Reducerea chinonelor Dehalogenarea reductoare Carboxiesteraze Peptidaze Epoxid hidroxilaza FAZA II LOCALIZARE Citosol Mitocondrie, citosol Citosol Citosol Mitocondrie Citosol Microzomi Microzomi Microzomi Microflor, microzomi, citosol Citosol Citosol Citosol Citosol, microzomi Microzomi Microzomi, citosol Snge, lizozomi Microzomi, citosol Microzomi Citosol Citosol, microzomi Mitocondrie, microzomi Mitocondrie, citosol Citosol

Reducere

Hidroliz

Glucuronoconjugare Sulfoconjugare Conjugare cu glutation Conjugare cu aminoacizi Acilare Metilare

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 51

REACII DIN FAZA I 1. Reacii de oxidare Reaciile de oxidare sunt probabil reaciile cele mai ntlnite n biotransformarea xenobioticelor. Aceste reacii sunt catalizate de diferite enzime sau sisteme enzimatice: A) Sistemul enzimatic al monooxigenazelor dependente de citocromul P450 (CYP450), care mai poart i denumirea de Oxidaze cu Funcii Mixte Microzomale (OFMM), este cel mai important. Denumirea provine de la capacitatea acestui sistem de a ncorpora unul din atomii unei molecule de oxigen n substrat (RH), formnd un metabolit oxigenat (ROH) i de a reduce cellalt atom de oxigen la ap, conform ecuaiei: CYP450 RH + O2 2H+, 2eROH + H2O

OFMM este localizat n membrana reticulului endoplasmatic neted (Fig. 3.15.). Sistemul OFMM este alctuit din cel puin dou componente proteice: o protein heminic numit CitocromP450 (CYP450), care are funcia de a lega substratul i oxigenul o flavoprotein denumit NADPH-CYP450 reductaza, ce conine att flavinmononucleotid (FMN) ct i flavindinucleotid (FAD), i care servete drept transportor de electroni de la NADPH la CYP450 i o fosfolipid, fosfatidilcolina, care faciliteaz transferul de electroni de la NADPH-CYP450 reductaz la CYP450 Dintre cele trei componente, CYP450 este cea mai important datorit rolului su vital n activarea oxigenului i n legarea substratului. Datorit gamei foarte variate de xenobiotice pe care trebuie s le metabolizeze organismul, citocromul P450 se prezint sub numeroase izoforme sau izoenzime. Pn la ora actual au fost identificate 750 de izoforme, dintre care la om se ntlnesc 36, numrul total fiind estimat la mai mult de 50. Aceste izoforme sunt clasificate n familii, care au o similitudine a aminoacizilor constitutivi de peste 40% (notate printr-o cifr arab) i subfamilii, cu o similitudine de peste 55% (notate cu o liter); ultima cifr arab din denumire reprezint genul individual. Familiile CYP1, CYP2 i CYP3 din microzomii hepatici sunt asociate cu metabolismul oxidativ al majoritii xenobioticelor i s-a estimat c numrul total al substraturilor exogene ale CYP450 poate depi 200000.

52 TOXICOLOGIE GENERAL

Fig.3.15. Localizarea sistemului oxidazelor cu funcii mixte microzomale


(Niesink R.J.M., et al, 1996)

Izoenzimele au specificitate de substrat diferit. De exemplu, izoformele CYP1A au afinitate pentru substraturile poliaromatice planare cum ar fi benzpirenul, n timp ce CYP2E prefer compuii cu mas molecular mic, cum ar fi etanolul sau acetona. Izoformele CYP450 hepatic implicate n metabolizarea medicamentelor sunt prezentate n Fig.3.16., i se observ c mai mult de 1/3 din substane sunt metabolizate de o singur izoenzim, CYP3A4, ceea ce explic frecvena ridicat a interaciunilor medicamentoase care se produc prin mecanisme enzimatice.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 53

2D6 21%

2E 1 4%

3A4/5 36%

2C18/19 8% 2C8/9 17% 2B6 3% 1A2 8%

1A1 3%

Fig. 3.16. Procentul izoenzimelor CYP450 implicate n metabolizarea principalelor medicamente utilizate n terapie

Reacii catalizate de citocromul P450: 1.1.1. Hidroxilarea alifatic Gruprile metil sunt oxidate la grupri hidroximetil, iar acestea din urm, prin oxidare nemicrozomial, pot fi oxidate n unele cazuri la acizi carboxilici (ex. tolbutamidul). Cnd n molecul sunt prezente mai multe grupri metil similare, de obicei este oxidat una singur; n cazul gruprilor metil aromatice, cele mai susceptibile sunt cele din poziia para. Catenele alchil laterale sunt adesea hidroxilate la nivelul carbonului terminal sau al penultimului atom de carbon (ex. pentobarbitalul), n timp ce gruparea izopropil poate fi hidroxilat la carbonul teriar i la oricare din gruprile metil echivalente (Ex. ibuprofenul, Fig.3.17.). Hidroxilarea catenelor alchil grefate pe ciclurile aromatice nu urmeaz regulile generale, datorit influenei nucleului aromatic. 1.1.2. Hidroxilarea aromatic Reacia de oxidare depinde de izoenzima CYP450 care catalizeaz oxidarea i de potenialul de oxidare al compusului aromatic. Se obin de obicei produi fenolici, iar poziia n care are loc hidroxilarea depinde de tipul substituenilor de pe nucleu, conform teoriei substituiei aromatice electrofile. Pentru compuii monosubstituii ai benzenului predomin hidroxilarea n poziia para, dar se formeaz n oarecare msur i izomerul orto. Atunci cnd sunt prezente mai multe nuclee fenil, de obicei este hidroxilat unul singur (ex. fenitoinul) (Fig.3.18.).

54 TOXICOLOGIE GENERAL

SO2NHCONHC4H9

SO2NHCONHC4H9

CH3 Tolbutamid

HOCH2

CH3 CH3

CH3 CH3

HN CH3 O N H O O

HN CH3 N H O OH

Pentobarbital OH CH3 CH3 CH3 CH3 COOH CH3

COOH Ibuprofen CH3 HO

CH3 CH3

COOH

Fig.3.17. Exemple de oxidri alifatice

Hidroxilarea aromatic are loc de obicei prin formarea unui intermediar epoxidic care este foarte reactiv i instabil i poate suferi rearanjri intramoleculare.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 55

OH

Benzen

OH OH

OH

OH Hidrochinona Fenol (principalul metabolit) OH

Pirocatehina

OH OH

OH Rezorcina

OH 1,2,4-trihidroxibenzen

OH

H N O O Fenitoin N H O

H N O N H

Fig.3.18. Exemple de hidroxilri aromatice

1.1.3. Reacii de epoxidare Reaciile de epoxidare sunt extrem de importante i pot implica att compui aromatici ct i compui alifatici i aliciclici.

56 TOXICOLOGIE GENERAL

Epoxidarea substanelor aromatice este o etap intermediar n hidroxilarea aromatic i conduce la formarea de intermediari foarte reactivi, care au fost implicai n producerea carcinogenezei chimice i a necrozei celulare sau tisulare. Aceti epoxizi pot suferi o rearanjare neenzimatic cu formare de fenoli, sau pot forma dihidrodioli sub aciunea enzimei epoxid hidrolaz (Fig. 3.19).
OH

1- Naftol OH OH

Naftalina

Naftalin epoxid

Naftalin 1,2-dihidrodiol O

HO OH

Benzpiren 7,8 diol-9,10 epoxizi HO O OH Benzpiren Benzpiren 7,8 epoxid Benzpiren 7,8 dihidrodiol O

HO OH

Fig. 3.19. Exemple de epoxidare aromatic

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 57

Prin epoxidarea alifatic se formeaz epoxizi stabili i persisteni n organism (ex. dieldrinul, metabolitul stabil al insecticidului aldrin, care este principalul reziduu regsit la animalele expuse) sau pot fi bioactivate unele substane toxice (ex. aflatoxina B1 , unul din cei mai puternici hepatocarcinogeni cunoscui) (Fig.3.20.).

Cl Cl CCl2 Cl Cl Aldrin O O CH2 Cl Cl

Cl

CCl2

CH2

Cl Dieldrin

O O O Aflatoxina B1 OCH3 O Epoxidul aflatoxinei B1

Fig.3.20. Exemple de epoxidare alifatic

1.1.4. Reacii de dealchilare: O-, N- i S-dealchilare Un exemplu de O-dealchilare este demetilarea codeinei cu formarea morfinei care, dei nu reprezint metabolitul principal, este responsabil de inducerea farmacodependenei la administrarea cronic a codeinei. N-dealchilarea se ntlnete frecvent n metabolizarea medicamentelor, insecticidelor sau a altor xenobiotice. Prin N-dealchilarea unor antidepresive cum ar fi amitriptilina sau fluoxetina se obin metabolii care i pstreaz activitatea farmacologic, respectiv nortriptilina i norfluoxetina, iar prin dealchilarea cocainei se obine norcocaina, care se pare c este responsabil de efectele hepatotoxice ale cocainei. Nicotina, prin N-dealchilare formeaz nornicotina.

58 TOXICOLOGIE GENERAL

S-dealchilarea se ntlnete la tioeteri, cum ar fi metilmercaptanul sau 6metiltiopurina.

CH3

CH3

H3CO

O Codeina

OH

HO

O Morfina

OH

N CH3

N H

N Nicotina H3C S N H N N

N Nornicotina

SH H N

6-Metilmercaptopurina

6-Mercaptopurina

Fig.3.21. Exemple de reacii de dealchilare

1.1.5. Reacii de deaminare oxidativ Deaminarea oxidativ poate avea loc n cazul aminelor alfa-substituite, cum este amfetamina. Mecanismul oxidativ urmeaz o cale similar cu cea a Ndealchilrii, rezultnd n final un metabolit carbonilic (Fig. 3.22.). Disubstituirea

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 59

carbonului din poziia alfa inhib deaminarea (ex. fenterminul). Unele amine secundare i teriare i aminele substituite cu grupri voluminoase pot suferi deaminare direct, fr N-dealchilare, cum este cazul fenfluraminei.

CH3

CH3 + NH3

NH2

Amfetamina

Fenilacetona

Fig.3.22. Exemplu de reacie de deaminare oxidativ

1.1.6. Reacii de N-oxidare Reaciile de oxidare a azotului pot conduce la formarea de hidroxilamine, oxime sau N-oxizi. Hidroxilaminele se formeaz din anilin sau din derivaii si substituii (Fig.3.23.). N-oxizii se formeaz din amine teriare i amide.

H NCOCH3 2-Acetilaminofluorenul N-Hidroxiacetilaminofluorenul

OH NCOCH 3

Fig.3.23. Exemplu de N-oxidare

1.1.7. Reacii de S-oxidare Tioeterii sunt oxidai la sulfoxizi, care la rndul lor sunt oxidai la sulfone. Aceast reacie se observ la insecticide din diferite clase (carbamice, organofosforice, hidrocarburi clorurate), precum i la medicamente din grupul fenotiazinelor (Fig.3.24). i flavinmonooxigenazele pot cataliza astfel de reacii.

60 TOXICOLOGIE GENERAL

O S S

N R Fenotiazine

R1

N R

R1

Fig.3.24. Exemplu de reacie de S-oxidare

1.1.8. Reacii de P-oxidare Oxidarea fosforului conduce la transformarea fosfinelor trisubstituite n fosfin oxizi (Fig.3.25.). Aceast reacie poate fi catalizat i de flavinmonooxigenaze.

C6H5 H3C P C6H5 O Difenilmetilfosfina H3C P

C6H5

C6H5

Oxidul difenilmetilfosfinei

Fig.3.25. Exemplu de P-oxidare

1.1.9. Reacii de desulfurare oxidativ Derivaii de acid tiofosforic i ditiofosforic folosii ca insecticide pot suferi o reacie de oxidare prin care gruparea P=S este transformat ntr-o grupare P=O, ceea ce conduce la creterea activitii inhibitoare a colinesterazei (Fig.3.26.).

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 61

H2C2O P H2C2O

S O NO2

H2C2O P H2C2O

O O NO2

Paration

Paraoxon

Fig.3.26. Exemplu de desulfurare oxidativ

1.1.10. Reacii de dehalogenare oxidativ Metabolizarea anestezicelor fluorurate prin dehidrohalogenare oxidativ conduce la formarea de metabolii cu hepato- i nefrotoxicitate considerabil. Astfel, halotanul poate genera o clorur a acidului trifluoroacetic, care este foarte reactiv i se poate lega covalent de proteinele tisulare, transformndu-le n proteine acilate cu proprieti antigenice (Fig.3.27.).

O CF3CHBrCl Halotan CF3CBrClOH CF3C Cl

Proteina

O CF3C NH Proteina

Trifluoroacetat-proteina

Fig.3.27. Dehalogenarea oxidativ a halotanului

B) Flavinmonooxigenaza (FMO) este o enzim dependent de NADPH i O2, cu un mecanism de aciune diferit de cel al CYP450 monooxigenazei, activarea oxigenului avnd loc nainte de legarea substratului. Specificitatea de substrat a FMO este mai larg dect a OFMM, ea putnd metaboliza amine teriare i secundare i diferii compui cu sulf cum ar fi sulfuri, tioeteri, tioli i tiocarbamai (Fig.3.28.). Ea nu catalizeaz ns reaciile de dealchilare a heteroatomilor.

62 TOXICOLOGIE GENERAL

N CH3 N Nicotina N

N CH3

Nicotin-1'-N-oxidul

O S CNH2 S CNH2

Tiobenzamida

Tiobenzamid S-oxidul

Fig. 3.28. Exemple de oxidri catalizate de FMO

C) Oxidrile nemicrozomiale sunt catalizate de enzime localizate n mitocondrii sau n citoplasm. 1.3.1. Oxidri catalizate de alcool-dehidrogenaze Alcool-dehidrogenazele (ADH) catalizeaz conversia alcoolilor la aldehide i cetone: RCH2 OH + NAD+ RCHO + NADH + H+

Reacia este reversibil, compuii carbonilici fiind redui la alcooli. Enzima se gsete n fraciunea solubil a omogenatelor tisulare din ficat, rinichi i plmn i este probabil cea mai important enzim implicat n metabolizarea alcoolilor exogeni. Deoarece aldehidele formate prin oxidarea alcoolilor primari sunt toxice i greu excretabile, aceast reacie poate fi considerat una de bioactivare. 1.3.2. Reacii catalizate de aldehid-dehidrogenaze Aldehid-dehidrogenazele sunt enzime care catalizeaz oxidarea unui numr mare de aldehide endogene i exogene, n urma reaciei formndu-se acizii corespunztori, care pot fi apoi conjugai:

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 63

RCHO + NAD+

RCOOH + NADH + H+

n genomul uman au fost identificate 16 gene i dou pseudogene care codific aldehid-dehidrogenaze i se recunoate existena unui polimorfism al acestor enzime. Deoarece aldehidele sunt compui electrofili foarte reactivi ce pot interaciona cu gruprile tiol i amino inducnd efecte citotoxice, genotoxice, mutagene sau carcinogene, oxidarea lor de ctre aldehid-dehidrogenaze (ALDH) este considerat o reacie de detoxifiere. Aldehid-dehidrogenazele pot s conduc ns i la formarea de metabolii activi, cum se petrece n timpul metabolizrii tricloretilenei. Iniial, hidrocarbura clorurat este biotransformat sub aciunea CYP450 la tricloretanol i apoi la cloralhidrat i acid tricloracetic, reacii catalizate de alcool- i respectiv aldehiddehidrogenaze. Acidul tricloracetic, dar nu i metaboliii anteriori, a fost identificat a fi responsabil de producerea de efecte carcinogene i teratogene. 1.3.3. Reacii catalizate de aminoxidaze Se cunosc dou tipuri de aminoxidaze, care catalizeaz deaminarea oxidativ a aminelor, att endogene ct i exogene. a) Monoaminoxidazele (MAO) sunt flavoproteine care se gsesc n mitocondriile celulelor din diferite esuturi: ficat, creier, rinichi, intestin, eritrocite. Substraturile sunt monoamine, amine secundare i teriare, n care amina trebuie s fie legat de o grupare metilen nesubstituit. Se cunosc dou tipuri de MAO: MAOA i MAO-B, care au preferine diferite pentru substraturi. MAO-A se gsete n principal n terminaiile nervoase adrenergice periferice i are afinitate pentru catecolamine, n timp ce MAO-B este ntlnit n special n trombocite i are selectivitate pentru -feniletilaminele nefenolice lipofile. Substraturi comune sunt dopamina, tiramina i alte feniletilamine monofenolice. Un exemplu de implicare a monoaminoxidazelor n bioactivarea unor substane este acela al 1-metil-4-fenil-1,2,5,6-tetrahidropiridinei (MPTP), un contaminant obinut n procesul de sintez a meperidinei, care este biotransformat de MAO-B. Metabolitul su MPP+ (ionul 1-metil-4-fenilpiridiniu) se acumuleaz n neuronii dopaminergici, producnd neurotoxicitate similar cu cea din boala Parkinson (Fig.3.29).

64 TOXICOLOGIE GENERAL

CH3

CH3

MPTP

MPP+

Fig.3.29. Bioactivarea MPTP sub aciunea MAO-B

b) Diaminoxidazele oxideaz aminele la aldehide, dar prefer diaminele alifatice cu lanuri de 4 sau 5 atomi de carbon. Cele cu mai mult de 9 atomi de carbon sunt oxidate de monoaminoxidaze, iar aminele secundare i teriare nu sunt metabolizate (Fig.3.30.):

H2N(CH2)5 NH2 + O2 + H2O Cadaverina

H2N(CH2)4CHO + NH3 + H2O2

Fig.3.30. Exemplu de reacie catalizat de diaminoxidaze

1.3.4. Reacii catalizate de xantin-oxidaz i xantin-dehidrogenaz Xantin-oxidaza i xantin-dehidrogenaza sunt forme diferite ale aceleiai enzime i sunt interconvertibile, ntlnindu-se adesea sub denumirea de xantinoxidoreductaz (XOR). Aceste enzime joac un rol important n metabolizarea unor citostatice purinice, dar i n formarea de specii reactive de oxigen n timpul biotransformrii alcoolului etilic, radicalii hidroxil rezultai fiind implicai n inducerea cancerului de sn (Fig.3.31.).

2. Reacii de reducere Unele grupri funcionale cum ar fi gruprile nitro, diazo, carbonil, disulfur, sulfoxid, alchene, sunt susceptibile s sufere reacii de reducere. n funcie de localizarea subcelular a enzimelor implicate, aceste reacii pot fi clasificate n:

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 65

E ta n o l A DH

NAD

A c e ta ld eh id a

NADH + H

X O R OX
A c e ta t N AD
+

XO RR

O2 O2 + H 2O 2 F e ++ O2

.F er itin a F e + ++

OH

M o d ific a r i A D N s i c a r c in o g e n e z a

Fig.3.31. Biotransformarea alcoolului etilic catalizat de xantin-oxidoreductaz

A) Reduceri microzomale 2.1.1. Reducerea nitroderivailor la amine primare este catalizat de nitroreductaze, probabil cu formarea de intermediari cum ar fi nitrozaminele i hidroxilaminele (Fig. 3.32.):

66 TOXICOLOGIE GENERAL

NO2

NO

NHOH

NH2

Nitrobenzen

Nitrozobenzen

Fenil-hidroxilamina

Anilina

Fig.3.32. Exemple de reacii de reducere a nitroderivailor

2.1.2 Reducerea azoderivailor de ctre azoreductaze este dependent de NADPH i implic probabil participarea citocromului P450 (Fig.3.33.):

H2N H2N N N SO2NH2

Prontosil

NH2

NH2 NH2

SO2NH2 Sulfanilamida

NH2

Fig.3.33. Exemplu de reducere a azoderivailor

B) Reduceri nemicrozomiale 2.2.1. Reducerea aldehidelor i cetonelor printr-o reacie invers a alcooldehidrogenazelor i aldehid-dehidrogenazelor.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 67

2.2.2. Reducerea disulfurilor la componenii tiolici prin reacii care se desfoar adesea n trei etape, ultima fiind catalizat de glutation reductaz, i necesit glutationul (GSH) drept cofactor: RSSR + GSH RSSG + RSH RSSG + GSH GSSG + RSH + GSSG + NADPH + H+ 2GSH + NADP+ Un exemplu de astfel de reacie este reducerea disulfiramului (Antabus), folosit n tratamentul alcoolismului, la acid dimetil-ditiocarbamic. 2.2.3. Reducerea chinonelor prezint un interes toxicologic deosebit deoarece aceast reacie desfurat n mai multe etape poate conduce la obinerea de semichinone i hidrochinone, care la rndul lor pot fi autooxidate de oxigenul molecular, iniiindu-se formarea de specii reactive de oxigen.

3. Reacii de hidroliz n general, esterii i amidele sunt hidrolizate de enzime care se gsesc n snge, microzomii hepatici, rinichi i alte esuturi. Esterii i anumite amide sunt hidrolizai rapid de un grup de enzime numite carboxilesteraze. Din acest grup fac parte: colinesteraza, arilcarboxiesterazele, carboxilesterazele din microzomii hepatici i alte enzime neclasificate. n cele mai multe cazuri, hidroliza gruprilor ester sau amid din molecula substanelor toxice conduce la bioinactivarea acestora, deoarece metaboliii rezultai sunt mai hidrofili, iar n unele cazuri pot forma glucuronoconjugai. Un exemplu este inactivarea miorelaxantului succinilcolin sub aciunea pseudocolinesterazei plasmatice (Fig. 3.34.):
O N(CH 3)3 O O N(CH3)3 O Succinilcolina COOH COOH + 2 HO N(CH 3)3

Fig.3.34. Exemplu de reacie de hidroliz catalizat de colinesteraz

68 TOXICOLOGIE GENERAL

REACII DIN FAZA II Reaciile de conjugare reprezint probabil cele mai importante reacii de biotransformare a xenobioticelor, deoarece conduc la creterea hidrosolubilitii i deci la creterea posibilitii de eliminare prin urin sau prin bil. n mod tradiional, s-a considerat c principalele reacii de conjugare determin dispariia activitii farmacologice, deoarece metaboliii polari formai, pe lng eliminarea lor crescut, au o difuziune redus n celule i o afinitate sczut pentru receptori. Aceast opinie a fost infirmat de descoperirea faptului c morfin-6-glucuronida are o aciune analgezic mai puternic dect a morfinei, iar unii compui pot forma reactivi intermediari, care au fost implicai n inducerea cancerelor, a reaciilor alergice sau a leziunilor tisulare. Unele substane pot urma mai multe ci secveniale de conjugare (Fig.3.35.), iar enzimele care catalizeaz aceste reacii pot prezenta stereospecificitate pentru un anumit enantiomer.

acetilare glucuronoconjugare

H2N

COOH glucuronoconjugare sulfoconjugare OH

glucuronoconjugare conjugare cu glicina

Fig.3.35. Cile secveniale de conjugare pentru acidul p-aminosalicilic

1. Glucuronoconjugarea Glucuronoconjugarea este calea major de conjugare a xenobioticelor i este responsabil de formarea majoritii metaboliilor conjugai eliminai prin urin i prin bil. Reacia are loc prin condensarea direct ntre substana toxic, sau un metabolit al acesteia rezultat din faza I, cu acidul uridin difosfat glucuronic (UDPGA) (Fig.3.36.) i este catalizat de enzimele UDP-glucuronozil transferaze, care sunt localizate n reticulul endoplasmatic din ficat i din alte esuturi ca rinichi, intestin, piele, creier, splin i mucoasa nazal. Glucuronidarea are loc n general la nivelul unui heteroatom nucleofil bogat n electroni: oxigen, azot sau sulf. Compuii care pot fi metabolizai prin glucuronoconjugare sunt deci:

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 69

alcooli alifatici i fenoli (formeaz O-glucuronide eteri) acizi carboxilici (formeaz O-glucuronide esteri) amine aromatice i alifatice secundare (formeaz N-glucuronide) grupri tiol libere (formeaz S-glucuronide) Anumite xenobiotice cum ar fi fenilbutazona sau sulfinpirazona au n molecul atomi de carbon suficient de nucleofili pentru a forma Cglucuronide.
UTP-glucoza 2NAD UDPG-dehidrogenaza UDP-glucuronat (UDPGA)

Glucozo-1-fosfat + UTP

HO COO UGT OH N H C O Paracetamol CH3 HO OH O O N H CH3 O

Fig.3.36. Exemplu de glucuronoconjugare catalizat de UDP-glucuronozil transferaze (UGT)

2. Sulfoconjugarea Sulfoconjugarea crete solubilitatea n ap i deci excreia xenobioticelor, deoarece gruprile sulfonice au un pKa de 1-2. Sulfoconjugaii vor fi deci aproape total ionizai n condiii fiziologice i vor avea un volum de distribuie mai mic dect cel al compuilor neconjugai. Reacia este catalizat de sulfotransferaze. Acestea pot fi localizate n citosol sau n membrana aparatului Golgi a majoritii celulelor. Doar sulfotransferazele citosolice, care se gsesc n principal n ficat, mucoasa gastrointestinal i rinichi, sunt implicate n sulfoconjugarea xenobioticelor. Procesul de sulfoconjugare necesit activarea prealabil a ionilor sulfat, cu formarea de 3-fosfo-adenozin-5-fosfosulfat (PAPS), reacie care decurge cu consum de ATP i de energie (Fig.3.37). Xenobioticele care pot suferi reacii de sulfoconjugare sunt: alcoolii aminele aromatice fenolii hidroxilaminele aromatice

70 TOXICOLOGIE GENERAL

SO4

2-

+ ATP

1. ATP-sulfurilaza 2. APS-fosfokinaza 3-Fosfoadenozin-5'-fosfosulfat + ADP + PPi (PAPS)

NH2 N O N O3SO P OH H2O3PO PAPS OSO2O OH O O N

OH

HN

CH3

O Paracetamol

Sulfotransferaza

PAP

HN

CH3

Fig.3.37. Cile de sulfoconjugare

3. Conjugarea cu aminoacizi Conjugarea cu aminoacizi este o cale metabolic important a xenobioticelor acizi carboxilici, care formeaz cu glicina sau cu glutamina conjugai ionici solubili n ap ce pot fi excretai uor n urin i n bil. Substanele ce pot suferi aceast reacie sunt: acizii carboxilici aromatici acizii carboxilici aril-alifatici acizii carboxilici heterociclici Reacia presupune formarea unei legturi amidice sau peptidice ntre xenobiotic i gruparea amino a unui aminoacid. Xenobioticul este iniial activat prin formarea unui tioester cu coenzima A (Fig.3.38.). Conjugaii rezultai sunt de obicei mai puin toxici dect precursorul acid.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 71
R-COOH + ATP + CoA acil sintetaza R-CO-S-CoA + AMP

R-CO-S-CoA + R'-NH2

transacetilaza R-CO-NH-R' + CoASH

COOH

NH2CH2COOH Glicina Acid benzoic

acil sintetaza

N H

COOH

Acid hipuric

Fig.3.38. Cile de conjugare cu aminoacizi

4. Acetilarea Aminele exogene sunt acetilate de ctre N-acetil transferaze, donorul de grupri acetil fiind coenzima A. Enzimele se gsesc n citosolul celulelor din ficat, mucoasa gastric i limfocite iar la om, la care au fost identificate dou acetil transferaze distincte, exist un polimorfism genetic. Xenobioticele metabolizate pe aceast cale sunt: amine aromatice primare hidrazine hidrazide sulfonamide unele amine alifatice primare Reacia de acetilare presupune iniial acetilarea enzimei, urmat de adiia substratului i apoi de transferul gruprii acetil la substrat. Produsul conjugat poate s fie mai puin hidrosolubil dect compusul printe, ceea ce determin o cretere a toxicitii (ex. acetilarea izoniazidei, Fig.3.39.):
CONHNH2 CO-NH-NH-COCH3

N Izoniazida

N Acetil-izoniazida

Fig.3.39. Exemplu de reacie de acetilare

72 TOXICOLOGIE GENERAL

5. Conjugarea cu glutation Conjugarea cu glutation (GSH, -glutamilcisteinil glicina) mai poart denumirea de conjugare mercapturic, deoarece metaboliii excretai n final prin urin sau bil sunt derivai de N-acetilcistein. Reacia presupune iniial adiia glutationului la molecula de xenobiotic, care este catalizat de glutation-Stransferaze, enzime solubile ce se gsesc n citosolul hepatocitelor, dar care au fost detectate i n microzomi. Conjugaii sufer ulterior o scindare enzimatic i o acetilare, rezultnd derivai de N-acetilcistein sau acizi mercapturici (Fig.3.40.). n compartimentul extracelular, glutationul poate reaciona cu compuii reactivi electrofili i n absena enzimelor dependente de GSH. Glutationul are un rol protector major n organism datorit proprietilor sale oxido-reductoare i inactiveaz diferite tipuri de compui reactivi care conin grupri electrofile i prezint o mare reactivitate fa de proteinele tisulare sau acizii nucleici. Pentru acest motiv, aceast reacie de conjugare a fost considerat o cale de detoxifiere, dar recent s-a dovedit c poate fi implicat i n bioactivarea unor substane. Compuii care se pot biotransforma prin conjugare mercapturic sunt: epoxizi derivai aromatici halogenai nitroderivai aromatici halogenuri de alchil compui alifatici nesaturai 6. Metilarea Gruprile hidroxil, amino i tiol ale compuilor endogeni, dar i ale xenobioticelor, pot fi metilate de mai multe metiltransferaze. Aceste enzime se gsesc n mod normal n citosol, dei au fost descrise i O-metiltransferaze i Smetiltransferaze microzomiale. Donorul de grupri metil este n general S-adenozil metionina (SAM), format din metionin i ATP (Fig.3.41.). La fel ca i acetilarea, reacia de metilare are mai degrab efect de reducere a hidrosolubilitii dect de cretere a acesteia. Unele metale, cum ar fi mercurul, plumbul, staniul, taliul, sau nemetale ca arsenul, seleniul, telurul, pot de asemenea s fie metilate sub aciunea microorganismelor, fapt care este deosebit de important n toxicologia mediului, deoarece compuii metilai sunt absorbii din tractul gastrointestinal i pot strbate barierele hemato-encefalic i placentar mult mai uor dect formele anorganice.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 73

O Glutation (GSH) Naftalina

OH

pierdere rest glutamil pierdere rest glicinil S CH2 OH CHCOOH NHCOCH3 OH S CH2 CH NH2 COOH

Acid premercapturic H+ S

Conjugat cu cisteina

CH2

CHCOOH NHCOCH3

H2O

Acid mercapturic

Fig.3.40. Exemplu de conjugare mercapturic

N H N

S-Adenozil metionina (SAM) N

N CH3 S-Adenozil homocisteina

Fig.3.41. Exemplu de reacie catalizat de metiltransferaze

74 TOXICOLOGIE GENERAL

REZULTATUL BIOTRANSFORMRII XENOBIOTICELOR 1. Inducia enzimatic Multe medicamente, poluani din mediu sau alte xenobiotice, stimuleaz propriul metabolism sau pe cel al altor compui administrai concomitent, modificndu-le efectele toxice. Fenomenul se produce printr-o cretere aparent a activitii enzimelor de metabolizare i poart denumirea de inducie enzimatic, fiind util n interpretarea rezultatelor studiilor de toxicitate cronic, a mutagenezei sau carcinogenezei, sau n explicarea unor interaciuni medicamentoase. Deoarece pot fi induse i propriile enzime de metabolizare, acest proces poate explica instalarea toleranei dup administrarea cronic a unor substane, cum ar fi de exemplu derivaii barbiturici. Cele mai importante enzime ce pot fi induse sunt izoenzimele citocromului P450, dar fenomenul a fost observat i n cazul UDPglucuronozil transferazelor, glutation transferazelor sau al unor reductaze. Se cunosc dou tipuri de inducie enzimatic: Inducia mediat de derivaii barbiturici, care se pare c induc transcripia ARN-ului mesager specific al CYP450, ceea ce determin creterea sintezei enzimelor de metabolizare la nivelul reticulului endoplasmatic neted din ficat sau alte esuturi extrahepatice. Inducia mediat de hidrocarburile aromatice policiclice (HAP), care se pare c are loc prin legarea inductorului de o protein specific din citosol, care funcioneaz ca o molecul receptor. Complexul inductor-receptor determin formarea n nucleu a unui ARN mesager specific, iar citocromul nousintetizat este ncorporat n reticulul endoplasmatic. Printre inductorii citocromului P450 se numr, n afar de derivaii barbiturici i de hidrocarburile aromatice policiclice: - fumul de igare - etanolul - compui din alimente (indoli, flavone, safrol, eucaliptol, xantine, peroxizi organici) - medicamente (carbamazepin, clotrimazol, eritromicin, glucocorticoizi, griseofulvin, izoniazid, omeprazol, fenitoin, primidon, rifampicin, etc.) - insecticide organoclorurate (DDT), bifenili policlorurai Evoluia n timp a fenomenului de inducie enzimatic variaz n funcie de agentul inductor i de izoenzimele implicate. Astfel, dup tratamentul cu fenobarbital efectul inductor maxim se observ dup 48-72 ore, dup HAP n 24 de ore, iar n cazul inductorilor mai puin eficieni sunt necesare 6-10 zile pentru a se atinge nivelul maxim de inducie. UDP-glucuronozil transferazele pot fi induse de 3-metilcolantren, fumul de igare sau barbiturici.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 75

2. Inhibiia enzimatic Inhibiia enzimelor de metabolizare a xenobioticelor poate avea consecine majore asupra toxicitii, iar interaciunile medicamentoase care se explic prin acest mecanism au importan clinic mai mare dect cele produse prin inducie enzimatic. Impactul inhibiiei asupra substanelor toxice din mediu este mai redus, dar poate avea relevan n situaia expunerii la locul de munc. Inhibiia se poate produce n majoritatea cazurilor dup administrarea unei singure doze de inhibitor. Au semnificaie toxicologic inhibiia citocromului P450, inhibiia esterazelor de ctre insecticidele organofosforice, sau a monoaminoxidazelor de ctre antidepresivele IMAO. n funcie de mecanismul prin care se produce, inhibiia citocromului P450 este de trei tipuri: Inhibiie reversibil- rezult n urma interaciunii reversibile a xenobioticului cu ionul Fe3+ din gruparea heminic a citocromului P450 sau cu situsurile lipofile ale apoproteinei. Interaciunea are loc nainte de etapa de oxidare a ciclului catalitic, iar efectele dispar rapid dup oprirea administrrii inhibitorului. Dintre substanele care interacioneaz reversibil cu CYP450 fac parte: fluorochinolonele, cimetidina, unele antifungice, chinidina. Inhibiie prin complexarea CYP450. Unele alchilamine, care nu prezint ca atare activitate inhibitorie, pot fi oxidate de CYP450 la nitrozoalcani, care pot forma compleci stabili cu forma redus (feroas) a unor izoenzime. Ca urmare, enzima nu mai este disponibil pentru activitatea catalitic i este necesar sinteza de novo a acesteia. Efectul inhibitor este de lung durat i poate fi responsabil de numeroase interaciuni medicamentoase. Substane care pot induce acest tip de inhibiie sunt: antibioticele din clasa macrolidelor (troleandomicina, eritromicina, claritromicina, care sunt inhibitori selectivi ai CYP3A4), unele antiparkinsoniene (orfenadrin). Compuii metilendioxifenil, de exemplu insecticidul piperonil butoxid, pot genera metabolii intermediari care formeaz compleci stabili att cu forma feric ct i cu cea feroas a CYP450. Inhibiie prin formarea de substraturi suicidare. Anumite substane care nu sunt inhibitori ai CYP450 conin grupri funcionale ce pot fi oxidate de sistemul enzimatic la metabolii care se leag ireversibil de enzim. Alchenele i alchinele pot inactiva CYP450 prin generarea de intermediari radicalici care alchileaz structura hemului. Medicamente care acioneaz prin acest mecanism sunt: estrogenii 17 -acetilenici, cloramfenicolul care prin declorurare oxidativ genereaz un fragment acil, ciclofosfamida care poate forma acrolein i spironolactona, prin metabolitul su 7-tio. - i compuii care lezeaz membrana reticulului endoplasmatic n care este localizat citocromul P450 pot aciona ca inhibitori enzimatici.

76 TOXICOLOGIE GENERAL

Un tip particular de inhibiie este inhibiia competitv, care apare atunci cnd se administreaz concomitent doi compui metabolizai de aceeai enzim. Gradul de inhibare a metabolizrii depinde de afinitatea fiecrui compus pentru enzim. Un exemplu cu semnificaie toxicologic este tratamentul intoxicaiilor cu etilenglicol sau metanol, substane care i datoreaz toxicitatea metaboliilor formai, prin administrarea de alcool etilic, care are o afinitate mai mare pentru alcool dehidrogenaz, mpiedicnd bioactivarea alcoolilor toxici. 3. Bioactivarea Metabolizarea xenobioticelor poate conduce la obinerea unor metabolii mai puin toxici, mai hidrofili i deci mai uor excretabili (detoxifiere), dar i a unor metabolii cu o toxicitate mai mare dect a compusului printe (Fig.3.42.). Biotransformarea xenobioticelor relativ inerte, cu formarea de metabolii intermediari reactivi, poart denumirea de bioactivare i reprezint adesea evenimentul iniial care declaneaz un efect toxic.
Xenobiotic Metabolit lipsit de toxicitate Eliminare

Metabolit reactiv

Legare de moleculele celulare (enzime, receptori, membrane, ADN)

Toxicitate (Lezare tisulara, cancer, modificari fiziologice)

Reparare celulara (repararea ADN, sinteza proteica etc.)

Fig.3.42. Relaia ntre metabolismul, bioactivarea, detoxifierea i toxicitatea unui xenobiotic

Natura i stabilitatea metaboliilor reactivi Metaboliii reactivi sunt epoxizi, chinone, radicali liberi, specii reactive de oxigen, conjugai instabili. Datorit marii lor reactiviti, aceti metabolii sunt

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 77

adesea considerai a avea o durat de via scurt. ns, datorit transportului lor de la un esut la altul, durata de via poate crete. Ei pot fi clasificai n: Metabolii cu durat de via foarte scurt: sunt metabolii care se leag n principal de enzima care i genereaz, cum este cazul substraturilor suicidare, sau de proteinele adiacente. Metabolii cu durat de via scurt: sunt metabolii care rmn n celul sau se deplaseaz doar n celulele nvecinate. Leziunile celulare sunt localizate i se produc la locul de bioactivare. Un exemplu ar fi necroza hepatic centrolobular indus de tetraclorura de carbon n urma bioactivrii sale la radical triclormetil. Metabolii cu durat lung de via: sunt metabolii care pot fi transportai i n alte celule i esuturi dect cele unde sunt produi; ei pot fi transportai nu numai ca atare, ci i sub form de conjugai, din care intermediarul reactiv este eliberat n esutul int n condiii specifice. De exemplu, aminele aromatice cancerigene sunt metabolizate n ficat la derivai N-hidroxilai care, dup glucuronoconjugare, sunt transportai n vezica urinar unde sunt eliberai metaboliii N-hidroxi la un pH acid al urinei.

Soarta n organism a metaboliilor reactivi Aceasta depinde de natura speciilor reactive i de fiziologia organismului i poate fi: Legarea de macromoleculele celulare : proteine, polipeptide, ARN, ADN. Aceast legare covalent este considerat a fi evenimentul iniial n procese toxice cum ar fi: mutageneza, carcinogeneza, necroza celular. Peroxidarea lipidelor poate conduce la distrugerea membranelor i la iniierea necrozei celulare. Captarea i inactivarea: n general se realizeaz prin conjugarea cu glutationul.

Reacii prin care are loc bioactivarea 1. Reacii de oxidare 1.1. Reacia de epoxidare Monooxigenazele microzomiale pot converti numeroi compui aromatici n epoxizi. Datorit caracterului electrofil, acetia pot reaciona cu gruprile nucleofile ale macromoleculelor biologice, cum ar fi proteinele i acizii nucleici, inducnd necroz sau cancere. Un exemplu interesant de bioactivare pe aceast cale este biotransformarea brombenzenului (Fig.3.43). Epoxidul brombenzenului se poate lega covalent de

78 TOXICOLOGIE GENERAL

macromolecule producnd leziuni tisulare, dar metabolizarea pe celelalte ci poate preveni acest efect. Calea cea mai important de metabolizare o constituie conjugarea cu glutationul, ea servind drept un mecanism de protecie; doar dup ce nivelele hepatice ale glutationului redus sunt mult diminuate, epoxidul se va lega semnificativ de macromolecule, producnd necroz hepatic. Depleia de glutation poate s apar n prezena unor doze mari de brombenzen sau dup inducia enzimelor microzomale. Ali compui care pot forma epoxizi n cursul biotransformrii sunt: aflatoxina B1 , benzenul, benzpirenul, bifenilii policlorurai, tricloretilena, clorura de vinil, furosemidul. Formarea acestor metabolii are loc n principal la nivel hepatic.
Br Br

microzomi NADPH + O2 brombenzen O H

ne-enzimatic

legare covalenta de macromolecule

epoxidul brombenzenului rearanjare ne-enzimatica GSH transferaza Br hidrolaza Br

Br

OH H OH p-bromfenol GS H HO H

OH H

3,4-dihidro-3-hidroxi-4S-glutationil-brombenzen

3,4-dihidro3,4-dihidroxibrombenzen

Fig.3.43. Biotransformarea brombenzenului

1.2. Reacii de N-oxidare Aminele teriare sunt transformate n N-oxizi, care sunt n general mai puin toxici, n timp ce aminele primare i secundare sunt metabolizate la hidroxilamine. Acestea, prin eliminare sau prin esterificare urmat de eliminare, pot forma ioni de

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 79

nitreniu foarte reactivi. Aceti ioni, gsindu-se n echilibru cu formele mezomere carbocationice, au o mare afinitate pentru macromoleculele nucleofile, cum ar fi acizii nucleici. Metaboliii N-hidroxilai pot fi la rndul lor conjugai. Conjugaii cu acid glucuronic sunt uor excretabili, n timp ce sulfoconjugaii pot fi instabili, avnd efecte mutagene, cancerigene sau puternic toxice. Acest mecanism este responsabil de hepatocarcinogenitatea acetilaminofluorenului (Fig.3.44.).
OH CH3 O2 O acetilaminofluoren CYP450 NADPH PAPS sulfotransferaza SO3H O N O CH3 O N CH3

H N

HSO4

N O ion 1-carbeniu

CH3

N O ion nitreniu

CH3

N O ion 3-carbeniu

CH 3

INTERACTIUNE CU MACROMOLECULELE CELULARE (ADN)

GENOTOXICITATE

Fig.3.44. N-oxidarea acetilaminofluorenului

80 TOXICOLOGIE GENERAL

1.3. Reacii de oxidare nemicrozomial sub aciunea alcool-dehidrogenazei i a aldehid dehidrogenazei Aceste reacii sunt responsabile de aciunea toxic a unor alcooli ca alcoolul metilic, sau glicoli ca etilenglicolul. Aceste substane i datoreaz aciunea toxic n principal metaboliilor lor reactivi, aldehide sau acizi, i doar n mic msur compusului printe. 2. Formarea radicalilor liberi i a speciilor active de oxigen Speciile reactive de oxigen se pot forma n timpul ciclurilor redox ale unor xenobiotice cum ar fi chinonele sau nitroderivaii aromatici. Radicalii liberi rezult n urma acceptrii sau pierderii unui electron, sau n urma clivajului homolitic al unei duble legturi. Aceste entiti foarte reactive pot ataca componente celulare, inducnd diferite fenomene toxice, iar aspectele legate de toxicologia lor vor fi tratate ntr-un capitol separat. 3. Reacii de reducere 3.1. Reducerea nitroderivailor are loc n mai multe etape, formndu-se iniial anionul radical nitro, apoi nitrozo derivatul, radicalul nitroxil, hidroxilamina i n final amina primar (Fig.3.45.). Fiecare din aceti intermediari poate avea aciune toxic. Hidroxilaminele sunt responsabile de inducerea methemoglobinemiei, n timp ce mutagenitatea i carcinogenitatea se datoreaz interaciunii anionului radical nitro, nitrozoderivailor sau hidroxilaminelor esterificate cu macromoleculele celulare. n timpul metabolizrii se pot forma i specii reactive de oxigen. 4. Reacii de conjugare Dei mult vreme s-a crezut c reaciile din faza II, cu excepia reaciilor de metilare, sunt exclusiv reacii de detoxifiere, n ultima perioad s-a demonstrat c i n urma conjugrii pot rezulta intermediari reactivi, capabili s induc toxicitate. 4.1. Glucuronoconjugarea n general, glucuronidele au reactivitate biologic i chimic mai redus dect a compuilor printe, fiind eliminate rapid din organism. Exist ns i excepii, un exemplu notabil fiind cel al morfinei, care este glucuronoconjugat n intestin i n ficat formnd morfin-3-O-glucuronida i morfin-6-O-glucuronida. Metabolitul principal este 3-O-glucuronida, care are o concentraie sanguin de 20 de ori mai mare dect a morfinei i care din punct de vedere farmacologic este un antagonist opiaceu i are proprieti excitante. 6-O-Glucuronida, cu o concentraie sanguin de 2 ori mai mare dect a morfinei, are o activitate analgezic de 650 de ori mai mare dect a acesteia. Astfel, efectele analgezice ale morfinei sunt rezultatul interaciunii complexe a medicamentului i a celor doi metabolii asupra receptorului opiaceu. De asemenea, se pare c morfin-6-glucuronida este capabil

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 81

s ptrund n creier, n ciuda hidrofiliei sale, prin plierea moleculei i folosirea unui sistem activ de transport al anionilor.

e O Ar N Ar N nitroderivat O aromatic O Ar N O anion radical O nitro nitrozoderivat e , H O O OH HO OH LEZAREA COMPONENTELOR CELULARE (proteine, acizi nucleici) Ar O O H N O

radical nitroxil e , H

H Ar N OH arilhidroxilamina 2e , 2H H2O Ar NH2

amina aromatica

Fig.3.45. Bioactivarea nitroderivailor aromatici

Glucuronoconjugarea este de asemenea capabil s promoveze lezarea celular prin facilitarea formrii unor intermediari reactivi electrofili i transportul lor la esuturile int. Astfel, aminele aromatice pot fi N-hidroxilate i transformate n ficat n N-glucuronide care sunt excretate n urin. La nivelul vezicii urinare, datorit pH-ului acid, pot fi hidrolizate, elibernd N-hidroxilaminele care la rndul lor se pot transforma n compui electrofili capabili s reacioneze cu macromoleculele tisulare inducnd tumori locale (Fig.3.46.).

82 TOXICOLOGIE GENERAL

ficat H NH2 UDPGA N OH

glucuronida N OH

urina glucuronida N OH H+

acid glucuronic H N OH

intermediar reactiv electrofil

Fig.3.46. Bioactivarea aminelor aromatice

O alt clas de glucuronide reactive sunt acil glucuronidele, formate prin esterificarea acizilor carboxilici cu acidul glucuronic. Acestea au semnificaie toxicologic important datorit numrului mare de medicamente care conin grupri carboxilice i a rolului major pe care l are glucuronidarea n eliminarea lor. Astfel de medicamente fac parte din clasa antiinflamatoarelor nesteroidiene, a hipolipemiantelor (clofibrat), sau a anticonvulsivantelor (acid valproic), iar

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 83

utilizarea lor clinic a fost asociat cu diferite manifestri cum ar fi hepatotoxicitatea, nefropatia sau reaciile alergice. Se pare c aceste efecte toxice sunt mediate de acil glucuronide, care pot suferi reacii de migrare a gruprii acil n timpul crora are loc atacul macromoleculelor celulare nucleofile. Glucuronoconjugaii estrogenilor sunt considerai a fi responsabili de colestaza intrahepatic care poate fi asociat cu utilizarea contraceptivelor orale, printr-un mecanism care nu a fost complet elucidat. 4.2. Sulfoconjugarea Sulfoconjugarea poate conduce la formarea de reactivi intermediari capabili s genereze metabolii electrofili. Substane care pot fi bioactivate pe aceast cale sunt alcoolii benzilici (Fig.3.47.), hidroxilaminele aromatice (ex. hidroxilamina acetilaminofluorenului, Fig.3.44.), acizii hidroxamici aromatici, nitroalcanii, unii compui aromatici policiclici. Sulfoconjugaii rezultai sunt instabili i reactivi. Ei pot pierde gruparea sulfat fie prin hidroliz spontan, fie prin aciunea sulfatazelor, formnd n final ioni nitreniu sau carboniu, capabili s reacioneze cu proteinele i cu acizii nucleici i s conduc la necroz sau cancere. De asemenea, se crede c unele aziridine, analogi azotai ai epoxizilor care sunt mutageni foarte puternici, sar putea forma pe cale metabolic din aminoalcooli, prin intermediul sulfotransferazelor.

R2 N OSO3 R1

R1

R2

+
ion nitreniu

SO42-

H2 C

OSO3

H2 C

+
R3 R3 ion carboniu

SO4

2-

Fig.3.47. Bioactivarea acizilor hidroxamici i a alcoolilor benzilici

84 TOXICOLOGIE GENERAL

4.3. Conjugarea cu glutationul Dei aceast reacie de conjugare este considerat mai degrab o modalitate eficient de inactivare a intermediarilor reactivi, ea poate totui conduce la toxicitate prin mai multe ci: - formarea de conjugai ce pot pune n libertate ioni de sulfoniu extrem de reactivi. Acest mecanism explic mutagenitatea i carcinogenitatea dibrometanului, folosit ca insecticid, fungicid i aditiv n combustibilii lichizi, precum i a altor compui dihalogenai vicinali (Fig.3.48.)

X H X S [Glutation] S [Glutation] X INTERACTIUNE CU MACROMOLECULE NUCLEOFILE

S [Glutation] Ion sulfoniu

Fig.3.48. Bioactivarea la ion sulfoniu

- formarea unui conjugat cu cisteina care este activat de -liaz, obinndu-se intermediari reactivi ca: tioli, tiocetene, tiolactone, halogenuri de tionoacil, dependent de structura conjugatului (Fig.3.49.). Un exemplu este activarea hexaclorobutadienei, care se metabolizeaz la un tiol reactiv.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 85

Gly R S Cys Glu R S C C NH3 liaza


+

COO

conjugat cu glutationul

N-acetilare

SH

C HN

COO C O

CH3

Fig.3.49. Bioactivarea dependent de -liaz

- conjugarea chinonelor i chinoniminelor, care a fost implicat n nefrotoxicitatea unor compui aromatici cum ar fi brombenzenul i paminofenolul. n cazul brombenzenului, nefrotoxicitatea se datoreaz conjugailor cu glutation ai bromhidrochinonei format n faza I de metabolizare. Restul glutation este responsabil de alegerea rinichiului ca organ int, deoarece conjugatul se elimin renal, iar la acest nivel hidrochinona este oxidat la o chinon reactiv, care se poate lega covalent direct de macromoleculele celulare sau poate produce specii reactive de oxigen prin intermediul unui ciclu redox. - conjugarea reversibil, care permite eliberarea speciilor reactive ce au fost iniial detoxifiate. Conjugaii cu glutationul servesc n acest caz pentru transportul la int sau pentru intirea unor anumite organe. Clasele de compui la care conjugarea cu glutationul este reversibil sunt izocianaii, izotiocianaii i alfa-beta cetonele sau aldehidele nesaturate. 4.4. Acetilarea Reacia de acetilare a fost implicat n carcinogenitatea unor amine aromatice, care dup acetilare pot fi oxidate la aril-N-hidroxiamide, care formeaz n final ioni de aril nitreniu (Fig.3.50.):

86 TOXICOLOGIE GENERAL
Ar Ar NH2 Ar NH COCH3 N OH aril-N-hidroxiamide COCH3

Ar Ar NH N H

O C O

CH3

ion arilnitreniu

aril-acetoxi-amide

Fig.3.50. Bioactivarea aminelor aromatice acetilate

n cazul tuberculostaticului izoniazid, acetilarea urmat de hidroliz i de oxidare microzomial conduce la formarea de radicali liberi acetil i de carbocationi, care sunt responsabili de hepatotoxicitatea medicamentului (Fig.3.51.): 5. Bioactivarea n tubul digestiv - n mediul acid stomacal, nitriii i anumite amine pot forma nitrozamine, care sunt carcinogene puternice. - Nitraii, n anumite condiii, se pot transforma n nitrii i pot produce methemoglobinemie. - Ciclamatul este convertit de bacteriile intestinale n ciclohexilamin, care produce atrofie testicular.

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 87

H O N NH2 acetil CoA Polimorfism acetilator O

H N N H

O O C H N H2N OH

N izoniazida

O acetilhidrazina

N acid izonicotinic

N-acetil izoniazida

H N N O O

H N N H O

acetil nitrozamina

diacetilhidrazina

HO N

EXCRETIE URINARA

O acetil diazohidroxid

DETOXIFIERE

N O O radical acetil Proteina O cation acil Nu Proteina Nu O PROTEINA ACETILATA INTOXICATIE

N2

Fig.3.51. Bioactivarea izoniazidei

RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE


Relaia ntre doza unui compus i toxicitatea sa este un concept fundamental n toxicologie, care a fost enunat pentru prima dat de Paracelsus. Aceast relaie implic cuantificarea efectului toxic i stabilirea unei legturi de cauzalitate cu expunerea la xenobiotic. Toxicitatea reprezint capacitatea unei substane de a produce efecte toxice. Ea este o calitate intrinsec a moleculei, dar n acelai timp are o valoare relativ, deoarece intensitatea efectelor produse depinde de doz, de individ i de circumstanele n care s-a produs intoxicaia. Efectul toxic este rezultatul duntor sau advers al aciunii substanei toxice asupra organismului, consecutiv alterrii mecanismelor biochimice sau a echilibrelor fiziologice. Toxicitatea depinde deci de expunerea la compusul toxic, iar aceasta este la rndul ei determinat de doz i de durata expunerii. Dac se ine cont de aceste aspecte, toxicitatea poate fi definit (Rozman & Doull, 2000) ca fiind acumularea de leziuni pe perioade scurte sau lungi de timp, care fac organismul incapabil s funcioneze n limitele de adaptare. Doza este cantitatea de substan care ptruns n organism ntr-un anumit interval de timp (n general 24 de ore), produce un anumit efect. Ea poate face ca efectul substanei s varieze n limite foarte largi. Astfel, dac ne referim la medicamente, se disting trei tipuri de doze: doze terapeutice, doze toxice i doze letale. n ceea ce privete noiunea de timp, pentru toxicologie este important faptul c evoluia n timp a unei substane toxice n organism (toxicocinetica) este adesea foarte diferit de evoluia n timp a toxicitii (toxicodinamica). De aceea, relaiile farmacocinetic-farmacodinamic, care descriu la acelai individ relaia cantitativ ntre efectul indus de compus i concentraia corespunztoare n timp a acestuia, sunt foarte importante pentru evaluarea diagnosticului i a prognosticului intoxicaiilor. Efectul poate fi apreciat prin intensitatea sa, adic prin rspuns. Rspunsurile la substanele toxice pot fi de dou tipuri: Rspunsuri gradate, care pot fi msurate pe o scal continu, de la un rspuns minim la un rspuns maxim; pot fi o modificare farmacologic, biochimic sau patologic care prezint o variaie procentual sau proporional Rspunsuri cuantale, sau rspunsuri de tip totul sau nimic, cnd intensitatea efectului este msurat prin numrul indivizilor care rspund dintr-un grup de indivizi care au fost expui n mod egal. Exemple de astfel de rspunsuri sunt moartea sau inducerea tumorilor.

RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 89

Indiferent de tipul de rspuns care se folosete pentru aprecierea toxicitii, relaia doz-rspuns se bazeaz pe urmtoarele ipoteze: - a) rspunsul toxic depinde de concentraia compusului la locul de aciune - b) concentraia la locul de aciune este determinat de doz - c) rspunsul este n raport de cauzalitate cu compusul administrat Reprezentarea grafic a procentului de rspuns n funcie de doza la care a fost expus organismul poart denumirea de curba doz-rspuns, iar forma ei depinde de tipul de efect toxic msurat i de mecanismul prin care acesta se produce. De exemplu, ionul cianur se leag foarte puternic de citocromul a3, ntrerupnd funcionarea lanului transportor de electroni din mitocondrii i stopnd astfel respiraia celular. Deoarece aceast funcie este vital pentru viaa celulei, curba doz-rspuns va fi foarte abrupt. Un alt aspect important al relaiei doz rspuns este conceptul de prag, respectiv o doz sub care probabilitatea de rspuns este egal cu zero. De exemplu, n unele cazuri este necesar ocuparea unui anumit numr de receptori pentru ca rspunsul s devin evident. Un prag poate s apar i atunci cnd receptorul este complet ocupat sau saturat. De exemplu, o enzim implicat n biotransformarea unei substane toxice poate fi saturat, permind astfel compusului s urmeze o alt cale de metabolizare, care este responsabil de apariia toxicitii. Un astfel de caz este cel al paracetamolului, care la doze terapeutice are o hepatotoxicitate foarte redus; chiar dac se formeaz metabolitul toxic N-acetil-p-benzochinonimina, acesta este rapid detoxifiat prin conjugare cu glutationul. La doze mari ns, glutationul intracelular este consumat, metabolitul toxic se acumuleaz n celul i produce toxicitate hepatic fatal. n principiu, curba doz-rspuns este derivat din curba Gaussian care descrie o distribuie normal n sistemele biologice (Fig.4.1.). Aceast curb n form de clopot este rezultatul variaiei biologice, ceea ce nseamn c la dozele mici i la dozele mari rspund puine animale, majoritatea rspunznd n jurul dozei medii. O distribuie Gaussian perfect permite obinerea unei curbe doz-rspuns de forma unei sigmoide simetrice (Fig.4.2.). Cu ct se utilizeaz mai multe animale, cu att curba este mai apropiat de o sigmoid adevrat. Poriunea curbei ntre procentul de rspuns de 16% i cel de 84% este cea mai apropiat de liniaritate i permite determinarea unor parametrii cum ar fi doza medie letal (DL50 ), sau doza medie eficient (DE50). Liniaritatea curbei poate fi mbuntit prin reprezentarea logaritmului dozei, care este o metod empiric. Uneori, curba poate fi liniarizat i prin alte metode, cum ar fi metoda probit, care convertete procentul de letalitate n uniti probit. Procentul de letalitate de 50% corespunde probitului 5, doza care corespunde procentului de letalitate de 84% reprezint + 1 DS (deviaia standard) de la DL50, iar cea care corespunde letalitii de 16% reprezint 1 DS.

90 TOXICOLOGIE GENERAL

25

20

Frecventa letalitatii (%)

15

10

20

40

60

80

100

Doza (mg/kg) scara logaritmica

Fig.4.1. Relaia doz rspuns exprimat ca frecvena distribuiei

100

% Letalitate sau % Raspuns

80

60

40

20

0 10 15 20 25 30 35 40

Doza (mg/kg) scara logaritmica

Fig.4.2. Curba doz-rspuns

Rspunsul toxic cel mai uor de msurat este letalitatea, care reprezint un rspuns de tip cuantal. De aceea, pentru aprecierea toxicitii acute a substanelor se folosete doza medie letal (DL50), a crei determinare este de obicei primul experiment care se realizeaz pentru substanele chimice noi. DL50 este doza de compus care produce moartea a 50% din animalele expuse. Ea este o valoare virtual, obinut prin calcul statistic, nu o constant biologic. Numeroi factori pot influena toxicitatea, afectnd astfel estimarea DL50 . Astfel de factori pot fi:

RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 91

rasa animalului, vrsta i greutatea, natura hranei, condiiile de vivariu, oprirea alimentelor nainte de efectuarea testului, metoda de administrare, volumul i natura mediului de condiionare, durata observrii animalelor. Datorit acestor variabile, pentru multe scopuri este suficient doar determinarea ordinului de mrime a DL50 (ex. ntre 5 i 50 mg/kg, ntre 50 i 500 mg/kg, etc.), nu i a valorii absolute. Doza medie letal este exprimat n mg/kg greutate corporal, precizndu-se specia pe care s-a fcut determinarea, calea de administrare i timpul de urmrire a animalelor. Metodele de testare sunt foarte bine standardizate de reglementrile internaionale pentru a evita diferenele ntre laboratoare i pentru a reduce la minim erorile. Pentru substanele toxice din aer sau din ap se determin concentraia letal medie (CL50), care reprezint concentraia ce produce moartea a 50% din animalele expuse, precizndu-se n mod obligatoriu i timpul de expunere. Rezultatele obinute n experimentele pe animale sunt apoi extrapolate la om inndu-se cont de anumii factori de securitate. Pentru o evaluare mai exact a toxicitii, Luckey i Venugopal au introdus conceptul de potenial de toxicitate: pT = - log T unde T este doza molar de substan, exprimat n moli/kg. Acest parametru ine cont de numrul de molecule, respectiv numrul de atomi implicai n procesele fiziopatologice i se poate aplica oricrui tip de efect. Conceptul poate contribui la explicarea i cuantificarea mecanismelor de toxicitate i a toxicitii proprii a substanei, deoarece ia n calcul numrul de atomi sau molecule prezeni la locul de aciune. Se face astfel o apreciere mai precis a toxicitii, dar conceptul este mai ales teoretic, deoarece n practic se folosete n continuare aproape exclusiv DL50 pentru aprecierea toxicitii n scopuri reglementare. Relaia doz-rspuns permite i compararea ntre diferite rspunsuri, ntre diferite substane sau ntre diferite specii animale. Astfel, pe baza valorii DL50, substanele toxice pot fi mprite n diferite clase de toxicitate: Extrem de toxice DL50 1 mg/kg Foarte toxice 1mg/kg DL50 50 mg/kg Moderat toxice 50mg/kg DL50 500 mg/kg Slab toxice 500mg/kg DL50 5000 mg/kg Practic netoxice 5000mg/kg DL50 15000 mg/kg Lipsite de toxicitate DL50 15000 mg/kg

92 TOXICOLOGIE GENERAL

RISCUL I EVALUAREA RISCULUI Riscul de producere a unei intoxicaii prin substane chimice nu depinde numai de toxicitatea intrinsec a moleculei, ci i de numeroi ali factori, dintre care cel mai important este gradul de expunere. n msura n care expunerea omului la aceste molecule nu poate fi evitat, este indispensabil evaluarea toxicologic, ce urmrete determinarea gradului de expunere care este asociat cu absena riscului. Riscul este definit ca frecvena presupus cu care apar efecte nedorite ca urmare a expunerii la o substan toxic. El poate fi exprimat ca un risc absolut, corelat direct cu substana toxic, sau ca un risc relativ, care reprezint raportul dintre riscul observat la o populaie expus la toxic i cel observat la o populaie neexpus. Anumite efecte toxice pot fi observate doar de la o doz-prag, sub care nu exist rspuns detectabil. Acest nivel la care nu se observ efect (NOEL= No Observed Effect Level) se poate aplica att la un rspuns cuantal, cum ar fi moartea sau o leziune patologic, ct i la un rspuns ca inhibiia unei enzime sau legarea de un receptor. Existena acestui prag poate fi explicat prin saturarea unei enzime sau a unui sistem de reparare fiziologic. Nivelul cel mai ridicat de doz care nu produce nici o cretere semnificativ a rspunsului advers este NOAEL (No Observed Adverse Effect Level). Acest nivel de doz nu trebuie considerat a fi complet lipsit de risc i valoarea sa depinde de numrul nivelelor de doze testate, de numrul animalelor incluse n test i de incidena de fond a rspunsurilor adverse la lotul martor neexpus. O alt doz folosit este LOAEL, nivelul de doz cel mai redus la care se observ efecte adverse (Lowest Observed Adverse Effect Level). Conceptul de doz-prag este un concept important n toxicologie, deoarece permite extrapolarea dozelor toxice obinute n experimentele pe animale i evaluarea ulterioar a riscului la om. Astfel, NOAEL se utilizeaz pentru stabilirea limitelor de expunere, cum ar fi dozele de referin (DRf) i dozele zilnice admisibile (DZA). Dozele de referin (DRf) sau concentraiile de referin (CRf) estimeaz expunerea zilnic la o substan care este presupus a fi lipsit de efecte adverse asupra sntii populaiei umane. Doza zilnic admisibil (DZA) este doza de substan care poate fi ingerat de un individ zilnic, pe parcursul ntregii sale viei, fr a produce, pe baza cunotinelor actuale, efecte nedorite. Termenul a fost introdus de Comitetul de Experi FAO/OMS pentru aditivii alimentari n 1962. Iniial a fost utilizat pentru evaluarea aditivilor alimentari i a reziduurilor de pesticide din alimente, iar ulterior folosirea sa a fost extins la substanele chimice din alimente i la ap. DZA se exprim n mg compus per kg greutate corporal per zi i poate fi calculat plecnd de la valorile NOAEL prin divizarea acestora cu anumii factori de securitate. Valorile NOAEL se determin ntr-un studiu corespunztor de

RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 93

toxicitate la animal (ex. un studiu de administrare repetat timp de 90 de zile) n care se obin dozele zilnice n alimente la care nu se observ efecte adverse (NOAEDD = No Observed Adverse Effect Daily Dose). [consumul zilnic de alimente x NOAEDD (mg/kg aliment)] greutatea corporal a animalului (kg)

NOAEL = DZA

= [NOAEL] / [factor de securitate (FS)]

Factorii de securitate permit extrapolarea rezultatelor de la animal la om i in cont de variaia ntre specii, de numrul de animale din experiment, de mecanismul de aciune, de toxicocinetic i de relevana rspunsului la animal pentru riscul la om. Valoarea factorului de securitate variaz ntre 10 i 2500, dependent de natura substanei i de datele disponibile cu privire la toxicitate; ea este n general de 100. Pentru substanele carcinogene genotoxice se calculeaz pa baza unor modele matematice. Pentru alimente se mai calculeaz i Nivelul Permis (NP) care poate fi obinut din DZA: [DZA x greutatea corporal a omului (kg)] Consumul alimentar zilnic x FS adiionali

NP (mg/kg) =

Pentru evaluarea la om a toxicitii aditivilor alimentari sau a poluanilor, se recomand ca 90% din DZA s fie atribuit alimentelor, 10% aerului (20 m3/ zi) i 1% apei de but. Pentru mediul nconjurtor se calculeaz Doza Zilnic Medie pe Durata Vieii (LADD = Lifetime Average Daily Dose), care se poate aplica att la om ct i la celelalte specii din mediu: Concentraia toxicului x frecvena x fracia x durata expunerii n mediu contactului contactului (greutatea corporal) x (durata vieii)

LADD =

Pentru mediul de munc se calculeaz concentraii ce poart denumirea de valori prag limit. Se disting trei tipuri de praguri: - valori-prag - medie ponderal n timp, care sunt concentraiile medii la care un muncitor poate fi expus timp de 8 ore zilnic sau 40 de ore pe sptmn, fr a se constata efecte adverse

94 TOXICOLOGIE GENERAL

- valori plafon, care sunt concentraiile ce nu pot fi depite n nici un moment pe parcursul zilei de munc. Se stabilesc n special pentru substanele ale cror efecte principale se datoreaz cumulrii n urma expunerii repetate la concentraii curente (ex. metale grele, solveni organici). - Valori prag limit pentru perioade scurte de timp (15 minute), care nu trebuie s depeasc media ponderal zilnic i care nu pot fi atinse de mai mult de 4 ori pe zi sau la un interval mai mic de o or. O alt valoare des ntrebuinat n mediul de munc, dar i n cel comunal, este Concentraia Maxim Admisibil (CMA), care reprezint concentraia de substan la care muncitorii pot fi expui continuu, timp de 8 ore zilnic, ani n ir sau chiar ntreaga via, fr a produce, cu excepia cazurilor de hipersensibilizare, nici un simptom de boal sau condiie fizic proast. CMA se stabilesc pentru aer, ap, sol, att n mediul industrial ct i n cel comunal. CMA din mediul comunal au valori mai mici dect cele din mediul industrial, deoarece n acest mediu se triete timp de 24 de ore pe zi i de asemenea triesc i copii i persoane cu diferite afeciuni, care au o sensibilitate mai mare la aciunea substanelor toxice. Pentru aer, CMA se exprim n mg/m3 aer, mg/l aer sau p.p.m. Pentru mediul nconjurtor i pentru mediul de munc, riscul pe care l prezint o substan mai poate fi caracterizat i cu ajutorul unor Indici Biologici de Expunere sau Biomarkeri, care sunt parametri ce permit evidenierea absorbiei sau a acumulrii xenobioticului n organism. Acetia pot servi ca i criterii de apreciere a gradului de afectare i pot fi: - a) parametri chimici: concentraia substanei toxice sau a metaboliilor si n lichidele biologice sau n esuturile organismului - b) parametri biochimici ce pot fi modificai de expunerea la substana toxic: ioni, glucoz, activitate enzimatic - c) parametri funcionali: modificri ale funciilor fiziologice capacitate respiratorie, reflexe, diurez - d) parametri histologici: leziuni tisulare Pentru medicamente, aprecierea riscului, respectiv a securitii utilizrii lor se face cu ajutorul urmtorilor parametri: 1. Indicele terapeutic = factor relativ de securitate care este raportul dintre doza medie letal i doza medie eficient (DE50): IT = DL50 / DE50

RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 95

El d indicaii asupra securitii utilizrii medicamentului i anume cu ct este mai mare, cu att securitatea relativ este mai mare. Cnd IT este mai mic dect 1, substana nu poate fi utilizat ca medicament, cnd IT este 1, utilizarea este periculoas, iar cnd IT este mai mare de 1, ea poate fi utilizat ca medicament. Dac IT este sub 10, riscul terapeutic este ns pronunat (ex. glicozizii cardiotonici). 2. Marja de securitate = factorul de securitate cert este un parametru care apreciaz mai exact securitatea medicamentului deoarece ine cont de forma i panta curbei doz-rspuns (fig.4.3.): Marja de securitate = DL1 / DE99

Fig. 4.3. Curbele doz-rspuns pentru efectul farmacologic i pentru efectul letal

3. Limita de securitate standard (Lss): Lss = [(DL1 DE99) / DE99] x 100 Limita de securitate standard apreciaz de cte ori trebuie mrit doza eficient pentru a se ajunge la o doz toxic. 4. Coeficientul de securitate: CS = DL50 / CMA

96 TOXICOLOGIE GENERAL

Coeficientul de securitate indic timpul ct poate aciona substana toxic fr a produce efecte nocive. El se refer la toate substanele, nu numai la medicamente, iar valorile depind de tipul de substan i de mecanismul prin care acioneaz, precum i de frecvena expunerii: - pentru medicamente: ntre 10 i 100 - pentru aditivi alimentari: ntre 100 i 1000 - pentru contaminani metale grele: ntre 1000 i 15000 - pentru contaminani organici: ntre 15000 i 20000 - pentru substane cancerigene i mutagene: > 50.000 Toxicitatea cronic a substanelor poate fi cuantificat n mod asemntor cu toxicitatea acut, utiliznd conceptele de doz medie toxic (DT50) sau de doz medie letal (DL50 ). Acestea se determin msurnd rspunsul toxic pe o perioad de timp, de obicei de 90 de zile, dup care se reprezint grafic procentul rspunsului n funcie de doza exprimat n mg/kg/zi, obinndu-se curba dozrspuns. Compararea msurtorilor de toxicitate cronic cu cele de toxicitate acut poate evidenia acumularea compusului n organism, permind o aproximare destul de grosier a timpului su de njumtire. Acumularea n organism poate fi exprimat cantitativ prin factorul de cronicitate, care este raportul dintre DL50 dup o doz i DL50 dup 90 de doze (exprimat n mg/kg/zi). Dac valoarea factorului de cronicitate este de 90, compusul este absolut cumulativ, dac este mai mare de 2, substana este relativ cumulativ, iar dac este mai mic de 2, este relativ necumulativ.

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA


Dac toxicitatea este o proprietate intrinsec a unei substane toxice, natura i intensitatea manifestrilor care apar la nivelul organismului expus sunt condiionate de o serie de factori care trebuie luai n considerare atunci cnd se face extrapolarea rezultatelor testelor de toxicitate de la animal la om, sau cnd se interpreteaz rezultatele testrii clinice a medicamentelor. Aceti factori pot fi clasificai n: - factori chimici, dependeni de substana toxic - factori biologici, dependeni de organismul expus - factori de mediu, determinai de condiiile n care a avut loc expunerea

I.

FACTORI CHIMICI CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA

1. Doza Unul din factorii majori care influeneaz potenialul toxic al substanelor chimice este doza. ntre cantitatea de substan administrat i efectul observat exist o corelaie, pentru marea majoritate a compuilor constatndu-se o proporionalitate ntre doz i efect ntre anumite limite. Relaia este reprezentat grafic printr-o sigmoid. Pentru substanele cumulative, aceast proporionalitate este valabil numai pn la o anumit valoare a dozei, peste aceasta creterea efectului fiind mult mai mare. Relaia se reprezint grafic printr-o hiperbol. 2. Structura chimic Un efect biologic este rezultatul ultim al interaciunii dintre o substan i o molecul int din organism, motiv pentru care efectele toxice ale unui compus pot fi corelate cu anumite caracteristici structurale ale acestuia. De asemenea, structura moleculei este responsabil de proprietile fizico-chimice ale acesteia, dintre care unele sunt determinante pentru transportul moleculei n organism, pentru metabolizarea acesteia sau pentru interaciunea cu inta molecular, cum ar fi: lipofilia, mrimea, pKa-ul, ionizarea, chiralitatea. Atunci cnd se sintetizeaz o nou substan chimic, indiferent de domeniul viitor de utilizare a acesteia, este important s se cunoasc potenialul ei toxic asupra sntii omului, dar i asupra mediului nconjurtor. Datorit numrului mare de compui noi, dar i a costurilor foarte ridicate ale testelor toxicologice, a devenit necesar studierea relaiilor care exist ntre structur i activitatea biologic i au fost elaborate diferite tehnici

98 TOXICOLOGIE GENERAL

cunoscute sub denumirea de Relaii Cantitative Structur-Activitate (QSAR = Quantitative Structure-Activity Relationships). Aceste tehnici permit prevederea activitii biologice a unei substane, plecnd de la structura acesteia, chiar naintea sintetizrii ei. Ele au fost iniial elaborate pentru prevederea efectelor farmacologice, dar utilizarea lor s-a extins tot mai mult n domeniul toxicologiei, n special n toxicologia mediului. La ora actual exist programe informatice de screening computerizat, n special pentru clasele de compui al cror mecanism de aciune poate fi corelat cu anumite caracteristici structurale, cum este cazul substanelor mutagene i carcinogene. Se pot stabili astfel relaii ntre structura chimic i tipul de efect observat pe de o parte, i ntre proprietile fizico-chimice i intensitatea efectelor toxice pe de alt parte. Relaii ntre structura chimic i tipul de efect Efectul toxic al unei substane se bazeaz pe interaciunea dintre aceasta, sau unul din metaboliii si, i o molecul din organism care reprezint inta molecular. De exemplu, pentru compuii cu caracter electrofil inta molecular este o molecul care conine grupri nucleofile: -NH2, -NH-, -O-, de care se pot lega covalent. Deoarece principalele molecule de interes biologic care conin astfel de grupri nucleofile sunt ADN-ul i proteinele, efectul ultim al unui compus electrofil poate fi mutagenitatea, necroza sau inhibiia enzimatic. Totui, datorit complexitii sistemelor biologice, numrul substanelor toxice al cror mecanism de aciune la nivel molecular este cunoscut este foarte redus, ceea ce face dificil stabilirea unor relaii structur-toxicitate. Relaii ntre proprietile fizico-chimice ale substanelor i intensitatea efectelor toxice Diferii compui chimici pot induce efecte de acelai tip, dar care difer sub aspectul intensitii lor. Aceast comportare diferit poate fi explicat prin faptul c activitatea biologic este influenat de dou tipuri de procese: - a) Procese toxicocinetice: transport, legare de proteinele plasmatice, metabolizare, care influeneaz la rndul lor concentraia final a substanei n forma sa activ la nivelul intei moleculare - b) Procese toxicodinamice, care implic interaciunea compusului cu inta molecular. Diferenele de comportament toxicocinetic, precum i diferenele de afinitate pentru inta molecular se bazeaz pe diferene de proprieti fizico-chimice. Prin urmare, activitatea biologic va depinde de: probabilitatea (Pr1) ca molecula s-i ating inta (transport) probabilitatea (Pr2) ca molecula s interacioneze cu inta molecular (legare)

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 99

Probabilitatea total (Pr) ca molecula s interacioneze cu inta va fi deci egal cu produsul Pr1 x Pr2. Concentraia intei moleculare (C) care interacioneaz cu substana toxic va fi deci proporional (constanta de proporionalitate a) cu cele dou probabiliti Pr1 i Pr2 i cu concentraia de compus (C) la care este expus organismul: C = a x Pr1 x Pr2 x C (ecuaia 1)

unde C este concentraia care produce un anumit efect (ex. letalitate). Deoarece o anumit intensitate a efectului este dependent de C, ecuaia (1) poate fi reformulat astfel: log 1/C = log Pr1 + log Pr2 + constant (ecuaia 2)

aceasta reprezentnd ecuaia fundamental pentru QSAR. Transportul unui compus chimic spre locul su de aciune se realizeaz n principal prin difuzie pasiv. Constanta de difuzie depinde de anumite proprieti ale moleculei cum ar fi: hidrofobia, polaritatea, gradul de ionizare, forma i mrimea moleculei. Parametrul care reflect cel mai fidel hidrofobia unei substane este coeficientul de partiie lipide-ap, sau coeficientul de partiie octanol-ap (Kow), care permite aprecierea transportului prin membrane. Legarea substanei toxice de inta sa molecular se poate face prin legturi hidrofobe, legturi electrostatice i fore van der Waals. Impedimentele sterice au i ele un rol n interaciunea cu inta molecular, iar compusul se poate lega i covalent, cum este cazul reaciei dintre agenii electrofili i gruprile nucleofile. Proprietile fizico-chimice importante pentru QSAR pot fi deci clasificate n: - proprieti hidrofobe - proprieti electronice - proprieti sterice Anumite studii QSAR ncorporeaz i indici structurali sau topologici cum ar fi conectivitatea molecular, care reflect caracterul mai mult sau mai puin ramificat al moleculei. Ali parametri care pot fi utilizai sunt: punctul de topire, punctul de fierbere, numrul de atomi de carbon, constanta vitezei de reacie pentru anumii compui (ex. compuii alchilani). Tehnici QSAR 1. Metoda Hansch se bazeaz pe ecuaia (2): log 1/C = log Pr1 + log Pr2 + constant

100 TOXICOLOGIE GENERAL

Probabilitatea Pr1 (de transport) fiind dependent de hidrofobia moleculei, poate fi exprimat prin coeficientul de partiie lipide-ap (Kow): log 1/C = log Kow + log Pr2 + constant (ecuaia 3)

Probabilitatea Pr2 (de legare) este proporional cu constanta de echilibru (K) pentru interaciunea cu inta molecular: log Pr2 = log K + constant Ecuaia (2) se poate deci rescrie sub forma: log 1/C = a x log Kow + log K + constant (ecuaia 5) (ecuaia 4)

Pentru a realiza estimri QSAR este necesar determinarea Kow i a K. Hansch a observat c acelai substituent induce aceeai modificare a Kow ntr-o serie de derivai analogi. Astfel, el a elaborat n 1964 o tehnic de calcul a valorii Kow pentru compuii nrudii structural, utiliznd o constant de substituent , care poate fi calculat pentru un substituent X cu formula: (X) = log Kow(C6H5X) - log Kow(C6 H6) Aceast constant de substituent este aditiv i aproximativ aceeai pentru numeroi compui nrudii structural. Pentru interaciunile electrostatice i legtura de hidrogen este important sarcina atomilor. Substituenii influeneaz distribuia sarcinilor ntr-o molecul prin intermediul induciei i mezomeriei. Pentru a descrie efectele substituenilor asupra distribuiei sarcinilor, Hammett a introdus o constant de substituent , a crei determinare se bazeaz pe echilibrul de ionizare a acidului benzoic: C6 H5COOH C6 H5 COO - + H +

Substituenii de pe nucleul fenil influeneaz sarcina negativ a anionului i n consecin afinitatea acestui anion pentru protoni. Constanta lui Hammett se calculeaz pentru un substituent X cu ajutorul formulei: (X) = pKa (C6H4XCOOH) - pKa (C6 H5COOH) Valoarea constantei lui Hammett este pozitiv cnd substituentul este mai electroatrgtor dect hidrogenul i negativ cnd substituentul are caracter

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 101

electroatrgtor mai slab dect hidrogenul. Valoarea constantelor depinde i de poziia substituentului pe nucleul fenil (o, m, sau p). Pentru a descrie impedimentul steric, Taft a introdus constanta lui Taft Es, care poate fi corelat cu constanta de vitez (K) pentru hidroliza acetatului de metil: CH3 COOCH3 + H2 O CH3COOH + CH3OH

Ea se poate calcula pentru un substituent X cu formula: Es (X) = log K(XCH2 COOCH3) - log K(CH3 COOCH3) Cu ct substituentul este mai voluminos, cu att valoarea Es este mai mic. Parametrii , i Es pot fi utilizai pentru estimarea valorilor Kow i K din ecuaia (5). Valoarea log K poate fi nlocuit cu: log K = b + c Es obinndu-se Ecuaia lui Hansch: log 1/C = a log Kow + b + c Es + d (ecuaia 6)

Cnd aceast ecuaie este aplicat pentru o serie de analogi structurali, Kow poate fi nlocuit cu . Dac se cunosc valorile experimentale ale log 1/C pentru un numr limitat de compui, ecuaia lui Hansch poate fi rezolvat introducnd constantele de substituent Kow, i Es corespunztoare. Dintr-un sistem de ecuaii cu mai multe necunoscute se calculeaz valoarea constantelor a, b, c i d, iar ulterior, innd cont de structura substanelor, se pot determina concentraiile care pot induce un anumit efect. Tehnica poate fi deci utilizat pentru prevederea activitii biologice a unor compui care nc nu au fost sintetizai. Pot fi evaluate rspunsuri biologice cum ar fi: DL50, concentraia care produce inhibiia cu 50% a activitii unei enzime (ex. acetilcolinesteraza), etc. 2. Tehnica Free-Wilson Aceast tehnic se bazeaz n ntregime pe structura compusului. Ea se aplic doar la substanele care sunt analogi structurali i pornete de la ipoteza c efectul unui substituent asupra activitii biologice este aditiv i independent de prezena altor substitueni. Rspunsul biologic (RB) este descris de urmtoarea ecuaie:

102 TOXICOLOGIE GENERAL

RB = (Aij Sij) + K Unde: Aij este contribuia la rspunsul biologic al unui substituent i aflat n poziia j a unei molecule Sij indic dac un substituent i este prezent n poziia j (S = 1) sau nu (S = 0)

3. Tehnicile de recunoatere a unui model Aceste tehnici sunt utilizate pentru a stabili relaii ntre structura unei substane i prezena sau absena unui anumit efect, fr a lua n considerare aspectele cantitative. Studiaz deci relaiile structur-activitate. Fiecare molecul este caracterizat printr-un numr de descriptori moleculari, care pot fi parametri ce indic prezena anumitor fragmente, sau eventual unele proprieti fizico-chimice. Descriptorul molecular care determin prezena sau absena unui anumit efect este pus n eviden prin analiz statistic. Factori chirali Importana factorilor chirali pentru toxicitatea substanelor a fost recunoscut doar relativ recent, dar cercetrile n acest domeniu sunt tot mai numeroase. Prezena n molecul a unui centru de asimetrie, care este responsabil de formarea de izomeri, poate influena cinetica unui compus i n consecin i toxicitatea sa. De asemenea, n urma metabolizrii se poate obine un izomer specific pornind de la o molecul care nu este asimetric. Toate etapele toxicocinetice pot fi influenate de chiralitate. Absorbia este afectat doar atunci cnd ea se realizeaz printr-un transport activ. De exemplu, L-DOPA este mai uor absorbit din tractul gastrointestinal dect izomerul D. Excreia renal este influenat ca urmare a secreiei active a moleculei, iar excreia biliar poate de asemenea prezenta stereoselectivitate. Metabolizarea este ns procesul care este cel mai semnificativ afectat de prezena centrilor chirali. Astfel, pot s apar urmtoarele efecte: - a) stereoselectivitatea de substrat, care se refer la efectul unui centru chiral preexistent n molecul - b) stereoselectivitatea de produs, cnd se obine un metabolit care prezint centri chirali - c) inversarea configuraiei - d) pierderea asimetriei ca rezultat al metabolizrii. Atunci cnd se administreaz amestecuri racemice, cum este cazul majoritii medicamentelor, metabolismul selectiv semnific faptul c fie se formeaz doi sau mai muli metabolii izomeri diferii, fie c doar unul din izomeri este metabolizat.

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 103

Un exemplu notabil este cel al talidomidei, n cazul creia doar acidul glutaramic format din enantiomerul S(-) este embriotoxic, nu i cel format din enantiomerul R(+). Ali factori dependeni de substan care pot influena toxicitatea sunt: - concentraia: acizii corosivi sunt mult mai toxici n soluie concentrat dect sub form diluat - solubilitatea i ionizarea: intervin n etapa de absorbie - volatilitatea: condiioneaz ptrunderea pe cale respiratorie i influeneaz absorbia.

II.

FACTORI BIOLOGICI CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA

1. Specia Toxicitatea unei substane poate s difere mult de la o specie la alta, animalele superioare fiind n general mai sensibile dect cele inferioare. Noiunea de toxicitate selectiv a fost exploatat pentru obinerea unor antibiotice sau a unor pesticide mai toxice pentru bacterii i pentru duntori dect pentru om i pentru alte mamifere. n clasa mamiferelor, efectele toxice sunt destul de asemntoare, pe acest fapt bazndu-se extrapolarea la om a rezultatelor unor studii de toxicitate efectuate pe alte specii ca: obolan, oarece, iepure, cine sau maimu. Nu exist ns nici un model animal perfect; pentru unele substane comportarea la om este similar cu cea la obolan, pentru altele cu cea la cine. De aceea, din ce n ce mai des se urmrete efectuarea de studii de metabolizare a noilor medicamente pe culturi celulare umane, n dorina de a se obine ct mai curnd n dezvoltarea unui nou compus profilul metabolic la om. Sunt cunoscute numeroase cazuri n care metabolizarea s-a dovedit a fi diferit la subiecii umani fa de animalele de experien. Astfel, pentru medicamentul utilizat n tratamentul SIDA, zidovudina (AZT), studiile in vivo pe animale au sugerat c substana nu era metabolizat, pe cnd n studiile pe om s-a observat c este glucuronidat n proporie de 70-80%. Aceast constare a avut impact asupra frecvenei de administrare n clinic, respectiv o dat la 4 ore i nu de 2 ori pe zi cum se preconizase iniial pe baza studiilor pe animale. Interaciunile medicamentoase sunt de asemenea dificil de detectat la animal datorit profilurilor metabolice diferite ale medicamentelor de la o specie la alta. n general, diferenele de toxicitate ntre specii sunt determinate de diferene de cinetic sau de metabolizare a compusului, a cror nelegere este esenial pentru evaluarea corect a siguranei i a riscului.

104 TOXICOLOGIE GENERAL

1. Diferene de absorbie, distribuie i excreie 1.1. Absorbia compuilor exogeni este dependent de condiiile fiziologice i fizice de la locul de absorbie. Absorbia prin piele prezint variaii considerabile de la o specie la alta. n general, pielea este mai puin permeabil pentru substanele chimice la om comparativ cu iepurii, oarecii sau obolanii. Absorbia digestiv depinde de pH-ul tractului gastrointestinal, care variaz n limite destul de largi de la o specie la alta. De exemplu, rodenticidul clorur de pirviniu are aceeai toxicitate acut la oareci i la obolani dup administrare intraperitoneal, n timp ce dup administrare oral este mult mai toxic la oareci (DL50 15 mg/kg) fa de obolani (1550 mg/kg). Absorbia pe cale respiratorie poate fi influenat de diferenele de fiziologie pulmonar. De exemplu, la animalele mici, cu frecven pulmonar mai mare dect a omului, cum ar fi oarecii, vrbiile sau canarii, toxicitatea compuilor cu solubilitate mare n snge, la care absorbia este limitat de ventilaie, va fi mai mare dup expunere la aceeai doz. 1.2. Distribuia compuilor exogeni variaz de la o specie la alta ca urmare a diferenelor n ceea ce privete distribuia lipidelor n organism, viteza de metabolizare i excreie, prezena unor sisteme de captare specifice la nivelul unor organe. De exemplu, porcul suport doze mari de arsen, stibiu sau compui organoclorurai datorit depozitrii acestora n esutul adipos, care este bine dezvoltat. Concentraia proteinelor plasmatice n funcie de specie este o alt variabil care, prin influenarea gradului de legare a substanei toxice i deci a concentraiei compusului liber n plasm, poate modifica toxicitatea. 1.3. Excreia Excreia renal difer de la o specie la alta n ceea ce privete volumul i viteza de producere a urinei, precum i pH-ul acesteia. Pentru compuii care nu sunt excretai printr-un proces activ, diferenele sub aspectul legrii de proteine pot conduce indirect la diferene de excreie urinar. Excreia biliar este condiionat mai ales de greutatea molecular a substanei, deoarece pragul greutii moleculare de la care o substan poate fi excretat prin bil difer mult de la o specie la alta. 2. Diferene de metabolizare Efectul biologic al unei substane depinde de concentraia formei sale active i de timpul ct aceasta se menine n organism. La rndul lor, acestea sunt determinate de vitezele de biotransformare i excreie, de natura i proporia legrii de macromoleculele tisulare. Cel mai frecvent, diferenele de metabolizare ntre specii sunt diferene cantitative, deci sub aspectul vitezei de metabolizare, i mai rar diferene calitative, sub aspectul unor ci diferite de biotransformare. n general, animalele mici, oarecii de exemplu, metabolizeaz compuii exogeni cu o vitez

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 105

mai mare dect animalele mari, cum ar fi omul. Astfel, la om fenilbutazona are un timp de njumtire de aproximativ 3 zile, n timp ce la maimu, obolan, cine, cobai, iepure, acesta variaz ntre 3 i 6 ore. Diferenele de metabolizare pot fi observate att la reacii din faza I, ct i la reacii din faza II. Reacii din faza I Reaciile de oxidare. Diferenele cele mai frecvent observate se refer la viteza cu care are loc oxidarea i mai puin la calea de metabolizare urmat. Hidroxilarea aromatic a anilinei este supus unei astfel de variabiliti. La anilin, att poziia orto ct i cea para sunt susceptibile s sufere un atac oxidativ, cu formarea aminofenolilor corespunztori. La carnivore, cum ar fi pisica sau cinele, se formeaz n principal metabolitul orto, n timp ce la ierbivore, ca iepurele sau cobaiul, se obine n principal metabolitul para. Omnivorele sunt intermediare, la acestea formndu-se ambii metabolii, cu o preferin totui pentru metabolitul para. Deoarece p-aminofenolul este mai puin toxic, speciile care vor metaboliza anilina n principal la acest metabolit vor avea o susceptibilitate mai redus la aciunea toxic a acestei substane. Un alt exemplu de diferene cantitative se refer la etilenglicol, care este metabolizat n final la acid oxalic. Toxicitatea compusului se datoreaz parial acidului oxalic rezultat din calea oxidativ i este proporional cu procentul n care are loc formarea acestui metabolit. Pisica este cea mai sensibil la aciunea toxic a etilenglicolului, deoarece formeaz oxalat n proporia cea mai mare, iar toxicitatea scade la obolan i la iepure, la acesta din urm procentul fiind cel mai mic. N-hidroxilarea paracetamolului prezint de asemenea diferene cantitative de metabolizare de la o specie la alta, fapt responsabil de variaia hepatotoxicitii. Astfel, obolanul este mai rezistent la toxicitate deoarece metabolizeaz mai puin paracetamol pe calea de bioactivare, n timp ce hamsterul este foarte susceptibil. n schimb, obolanul poate N-hidroxila acetilaminofluorenul, etap necesar n manifestarea aciunii carcinogene a compusului. La maimu are loc hidroxilare aromatic n loc de N-hidroxilare i efectul carcinogen nu se manifest. Reacii de hidroliz. Exist numeroase esteraze i amidaze responsabile de hidroliza esterilor i a amidelor, i care sunt ntlnite la majoritatea speciilor. Activitatea lor poate ns varia considerabil de la o specie la alta, ceea ce conduce la diferene de toxicitate. Un exemplu este insecticidul malation, care este rapid hidrolizat la mamifere, formndu-se un acid dicarboxilic ce se poate conjuga i elimina prin urin. La insecte, la care carboxiesteraza este absent, calea principal de metabolizare este cea oxidativ, formndu-se malaoxonul, un inhibitor puternic al acetilcolinesterazei (Fig.5.1.). Aceast diferen de metabolizare explic selectivitatea remarcabil a acestui insecticid.

106 TOXICOLOGIE GENERAL


CH3O P CH3O malation Insecte CH3O P CH3O malaoxon O S CHCOOC2H5 CH2COOC2H5 S S CHCOOC2H5 CH2COOC2H5 Mamifere CH3O CH3O P S malation diacid S CHCOOH CH2COOH

conjugare si excretie

Fig.5.1. Metabolismul malationului

Reacii din faza II Unele reacii din faza II prezint diferene ntre specii care au fost bine caracterizate. Rezultatele unor studii sugereaz existena unei relaii ntre poziia evolutiv a speciei i mecanismele de conjugare (Tabel V.1.). La om i la majoritatea mamiferelor, principalul mecanism este conjugarea cu acid glucuronic, glicin, glutamin, sulfoconjugarea, conjugarea cu glutation, acetilarea, metilarea i sinteza de tiocianat. La unele specii de psri i reptile, conjugarea cu ornitin nlocuiete conjugarea cu glicin; la plante, bacterii i insecte, conjugarea cu glucoz n loc de acid glucuronic determin formarea de glucozide. Unele reacii de conjugare se realizeaz cu anumii compui doar la un numr redus de specii. Este vorba de conjugarea cu fosfat, taurin, N-acetil-glucozamin, riboz, gliciltaurin, serin, arginin, acid formic, succinat. Anumite specii de pianjeni folosesc pentru conjugarea acizilor aromatici acidul glutamic i arginina. n ceea ce privete conjugarea acizilor organici, carnivorele prefer conjugarea cu acid glucuronic, n timp ce ierbivorele pe cea cu aminoacizi, iar omnivorele le utilizeaz pe ambele. Deficienele n reaciile din faza II pot fi cauza unor diferene notabile n ceea ce privete cinetica unui xenobiotic. Cauza acestor variaii poate fi absena enzimelor sau a cofactorilor, sau prezena lor n cantiti reduse. Glucuronoconjugarea este unul din mecanismele de detoxifiere cele mai ntlnite la mamifere. Pisica ns, la fel ca i speciile nrudite, are un sistem de glucuronoconjugare deficitar. Dei pisica nu formeaz glucuronide ale: oaminofenolului, fenolului, p-nitrofenolului, 1- sau 2-naftolului i morfinei, sau le formeaz n cantitate foarte mic, ea poate glucuronoconjuga cu uurin

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 107

fenolftaleina, bilirubina, tiroxinul i anumii steroizi. innd cont de polimorfismul care se ntlnete la nivelul glucuronozil transferazelor, este posibil ca aceste deficiene s se datoreze mai degrab absenei glucuronozil-transferazelor corespunztoare dect a acidului uridin difosfat glucuronic. n ceea ce privete acetilarea, obolanii au o capacitate de N-acetilare foarte mare, n timp ce la cine aceasta este absent. Omul este din acest punct de vedere o specie intermediar, dar polimorfismul acetil-transferazelor este foarte frecvent.

Tabel V.1. Reacii de conjugare uzuale sau neobinuite la diferite specii

Gruparea cu care se produce conjugarea Glucidic

Uzual

Neobinuit

Aminoacizi

Acetil Formil Sulfat Fosfat

Acid glucuronic (animale) N-acetilglucozamin (iepure) Glucoz (insecte, plante) Riboz (obolani, oareci) Glutamin (insecte, om) Glicin Ornitin (psri) Glutation Arginin (cpue, Metionin pianjeni) Gliciltaurin (pisici) Glicilglicin (pisici) Serin (iepuri) Gruparea acetil din acetilCoA Formilare (cini, obolani) Grupri sulfat din PAPS Formarea de fosfat monoesteri (cini, insecte)

Se poate deci concluziona c majoritatea diferenelor ntre specii sunt de natur cantitativ i se datoreaz variaiilor n ceea ce privete concentraia sau parametrii cinetici ai enzimelor, disponibilitatea cofactorilor, prezena enzimelor care catalizeaz reacia invers sau a inhibitorilor, concentraia substratului n esut. Aceste diferene cantitative se pot datora ns i faptului c la specii diferite pot fi preferate ci metabolice diferite, ceea ce determin diferene de aciune farmacologic sau toxic.

108 TOXICOLOGIE GENERAL

n general, omul este capabil s realizeze toate transformrile metabolice ntlnite i la alte mamifere i nu prezint diferene particulare cu privire la prezena sau absena unei anumite ci metabolice.

3. Diferene fiziologice i unii factori fiziologici pot influena aciunea toxic. De exemplu, obolanii sunt sensibili la aciunea unor rodenticide cum ar fi alcaloizii din Scilla maritima deoarece, spre deosebire de alte mamifere, nu au capacitatea de a vomita i astfel nu pot elimina substana toxic, care este absorbit i i produce efectul toxic cardiac. 2. Rasa Diferite rase ale aceleiai specii animale pot prezenta variaii ale metabolizrii substanelor toxice i deci ale toxicitii lor. n cazul raselor umane, diferenele se datoreaz n principal variaiilor sub aspectul metabolizrii, care sunt determinate de polimorfismul unor enzime implicate n biotransformarea xenobioticelor, dar i unor diferene sub aspectul practicilor culturale. Sursa major de diferene culturale este probabil dieta, dar pot fi importani i ali factori, cum ar fi consumul de alcool, fumatul, mediul urban sau utilizarea medicamentelor. Exist de asemenea i diferene farmacologice mediate de receptori. S-au constatat astfel diferene ntre subiecii africani i cei de origine european n ceea ce privete rspunsul la agonitii -adrenoceptorului. La rasa neagr, rspunsul la terapia antihipertensiv este mai pronunat. De asemenea, chinezii au un rspuns farmacodinamic la propranolol de dou ori mai mare dect caucazienii. 3. Sexul Metabolizarea xenobioticelor poate varia n funcie de sexul organismului. Diferenele legate de sex devin aparente la pubertate i se menin pe parcursul vieii adulte. Dependena de sex a biotransformrii este o form de control genetic, dar care se manifest prin intermediul influenelor hormonale. Din punct de vedere biochimic, diferenele de biotransformare a xenobioticelor ntre cele dou sexe se datoreaz unei combinaii de factori, printre care se numr diferenele n concentraia i activitatea enzimelor, precum i modificrile mediului lipidic n care se gsesc aceste enzime. Astfel, s-a constatat c mai multe izoenzime ale citocromului P450 sunt dependente de sex. Se pare c glanda pituitar elibereaz la femele, sub controlul hipotalamusului, un aa-numit factor feminizant, care este responsabil de o comportare specific a ficatului la mamifere. La masculi, funcia hipotalamusului este inhibat de hormoni i glanda pituitar nu elibereaz factorul feminizant.

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 109

Efectul sexului asupra biotransformrii xenobioticelor este adesea foarte pronunat la animalele de experien, ns pare a avea o semnificaie foarte redus la om. Astfel, s-a constatat c obolanii masculi aduli metabolizeaz unii compui exogeni mult mai repede dect femelele. Un exemplu este susceptibilitatea diferit la leziunile hepatice induse de cloroform la obolanii masculi i obolanii femele, acestea din urm fiind mai sensibile. Se consider c aceste diferene s-ar datora efectului testosteronului asupra activitii enzimelor microzomiale hepatice. De aceea, tratamentul femelelor cu testosteron scade DL50, n timp ce administrarea de estradiol la masculi crete DL50 a cloroformului. n ceea ce privete nefrotoxicitatea cloroformului la oareci, s-a observat c oarecii masculi sunt mai susceptibili. Aceast diferen poate fi anulat prin castrare i poate fi restabilit prin administrare de androgeni la masculi. Explicaia poate consta n faptul c testosteronul crete metabolizarea mediat de enzimele microzomiale a cloroformului la metabolii toxici. i alte dezechilibre hormonale, n afara celor sexuale, pot modifica rspunsul animalelor la unele substane toxice. Este cazul hipertiroidismului, hiperinsulinemiei, stimulrii axului hipofizo-corticosuprarenalian. Starea de gestaie poate influena i ea rspunsul la xenobiotice, activitatea multor enzime cum ar fi catecol-O-metiltransferaza i monoaminoxidaza scznd n aceast perioad. obolanul femel gestant este mai sensibil la aciunea cancerigen a etilnitrozureei, tumorile aprnd cu o frecven mai mare i avnd o evoluie mai rapid. 4. Vrsta n general, diferenele de toxicitate sunt observate la extremele de vrst: nou-nscui sau btrni, i se datoreaz unor diferene de cinetic sau de metabolizare. Diferene de cinetic La nou-nscui, absorbia pe cale oral este mult alterat, deoarece evacuarea gastric este lent, iar absorbia intestinal este crescut, datorit unei permeabiliti mai mari a mucoasei. Acest aspect este responsabil de alergiile alimentare, care sunt frecvente la copii i care se datoreaz absorbiei de proteine i de peptide exogene. Absorbia cutanat i cea la nivelul conjunctivelor sunt de asemenea crescute, ceea ce se reflect n frecvena mai mare a reaciilor cutanate. Distribuia la nou-nscut este diferit datorit permeabilitii vasculare mai mari i a procentului de ap crescut. Procentul de proteine plasmatice este redus, modificnd legarea xenobioticelor i crescnd fraciunea liber, care i poate manifesta aciunea farmacologic sau toxic. Astfel, lidocaina este legat doar 20% de proteinele plasmatice fa de 70% la aduli. Distribuia compuilor n anumite compartimente poate fi de asemenea modificat. De exemplu, morfina este de 3 pn la 10 ori mai toxic la obolanii nou-nscui, din cauza unei permeabiliti

110 TOXICOLOGIE GENERAL

crescute a barierei hemato-encefalice. n plus, esuturile i organele noului-nscut sunt constituite n proporie mai mare din ap i lipide, procentul de proteine i de os fiind mai mic, iar encefalul reprezint un procent mai mare din greutatea corporal, ceea ce favorizeaz ptrunderea substanelor n SNC. Eliminarea renal este de asemenea mai redus, deoarece funcia renal este insuficient dezvoltat. De aceea, penicilinele i teraciclina, care sunt excretate mai lent, pot fi mai toxice la nou-nscui. Incidena mai mare a methemoglobinemiei la copiii mici a fost explicat prin faptul c aciditatea gastric este mai redus, ceea ce face ca flora bacterian intestinal s se poat dezvolta n regiuni superioare, favoriznd reducerea bacterian a nitrailor la nitrii i formarea methemoglobinei. La btrni, absorbia pare a nu fi semnificativ afectat, dei se observ o cretere a pH-ului sucului digestiv, o diminuare a motilitii intestinale i o atrofie a mucoasei cu scderea numrului de celule care particip n procesul de absorbie. Distribuia este considerabil modificat fat de aduli. Astfel, la persoanele peste 65 de ani se observ o diminuare cu 30-40% a volumului minut cardiac, ceea ce influeneaz absorbia substanelor administrate intramuscular i distribuia celor care au fost deja absorbite, indiferent de calea de ptrundere. Se constat de asemenea existena unei cantiti mai mici de albumine plasmatice i de alte proteine transportoare. Prin urmare, cantitatea de substan liber, capabil s se lege de receptori, este mai mare cu 15-30%, fiind favorizat apariia unor efecte mai intense la doze mai mici de xenobiotic dect la adult. Pe de alt parte, o dat cu naintarea n vrst crete proporia de esut adipos i scad masa muscular i apa total, ceea ce determin modificarea volumelor de distribuie. Pentru compuii lipofili aceste volume cresc, fiind favorizat reinerea n organism i prelungirea efectului, n timp ce pentru substanele hidrofile volumele de distribuie scad, crescnd concentraiile plasmatice. n ceea ce privete excreia, fluidul renal se diminueaz cu aproximativ 1,5% pe an i n acelai timp se deterioreaz filtrarea glomerular i secreia tubular, reducndu-se treptat eliminarea pe aceast cale. Acest fapt poate fi agravat de patologiile care sunt frecvente la aceast vrst, cum ar fi insuficiena cardiac sau afeciunile renale, care pot crete timpul de njumtire biologic a medicamentelor eliminate prin urin. Diferene de metabolizare Animalele cu vrste extreme au n general un metabolism redus al compuilor xenobiotici comparativ cu adulii. Nou-nscui. La mamifere, imediat dup natere se iniiaz creterea activitii multor enzime hepatice implicate n biotransformarea compuilor exogeni. n timpul gestaiei, capacitatea ficatului de a desfura reacii catalizate de sistemul monooxigenazelor microzomiale este foarte redus. Ea ncepe s creasc dup natere i nu se observ diferene evidente ntre femelele i masculii imaturi.

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 111

i reaciile din faza II pot fi dependente de vrst. Astfel, glucuronoconjugarea multor substraturi este redus sau absent n esuturile fetale, dar crete o dat cu naintarea n vrst. La multe specii, incapacitatea mamiferelor nou-nscute de a forma glucuronoconjugai este asociat cu deficiena de glucuroniltransferaze i de cofactor, acid uridin difosfat glucuronic. Aceast deficien, alturi de ali factori cum ar fi excreia lent a conjugatului bilirubinei i prezena n snge a pregnandiolului, un inhibitor al glucuronidrii, sunt responsabili de apariia icterului neo-natal. S-a constatat de asemenea o deficien a conjugrii cu glicin i cu glutation la obolanii i la cobaii nou nscui. n schimb, sulfoconjugarea i acetilarea par s nu fie afectate de vrst. Efectul btrneei asupra metabolismului xenobioticelor a fost mai puin studiat. Se pare totui c la obolani activitatea monooxigenazelor microzomiale i a glucuroniltransferazelor scade, n timp ce activitatea monoaminoxidazei crete. Aceste modificri ale metabolismului xenobioticelor se reflect adesea n modificri ale toxicitii lor. De exemplu, hepatotoxicitatea paracetamolului, care este activat de enzimele CYP450, este mai sczut la nou-nscui dect la aduli. 5. Factori genetici Factorii genetici care pot influena toxicitatea au fost foarte mult studiai n ultimele decenii i se estimeaz c ei ar putea fi responsabili de 20 pn la 40% din diferenele inter-individuale care se semnaleaz n metabolizarea i rspunsul la unele medicamente sau factori de mediu. Principalii factori genetici cu implicaii toxicologice sunt polimorfismul enzimelor de metabolizare a xenobioticelor i enzimopatiile. 1. Polimorfismul enzimelor de metabolizare a xenobioticelor Polimorfismul poate fi definit ca apariia n aceeai populaie a dou sau mai multe alele diferite situate pe acelai locus al unei gene, fiecare din ele cu o frecven apreciabil. Polimorfismul genetic conduce deci la apariia unor forme diferite ale unei gene i ale produsului codificat de acestea, dintre care varianta cea mai puin ntlnit trebuie s aib o frecven n populaia respectiv de cel puin 1%. Se estimeaz c aproximativ 30% din genele umane prezint polimorfisme. Variaia structurii proteinelor influeneaz rspunsul la substanele toxice prin cel puin trei mecanisme: - afectarea fenomenelor toxicocinetice de absorbie, distribuie, metabolizare sau excreie - afectarea receptorilor i a secvenei de reacii biochimice care decurg din legarea xenobioticului de acetia - afectarea mecanismelor de aprare, n special a susceptibilitii de declanare a unui fenomen carcinogen

112 TOXICOLOGIE GENERAL

Unele din enzimele implicate n metabolizarea xenobioticelor prezint un astfel de polimorfism genetic, ceea ce face ca n populaie s existe subgrupuri (fenotipuri) care difer considerabil n ceea ce privete activitatea enzimatic. Polimorfismul enzimelor de metabolizare a xenobioticelor poate avea implicaii toxicologice n urmtoarele cazuri: Cnd toxicitatea se datoreaz compusului printe i biotransformarea la un metabolit inactiv, uor excretabil, este dependent de un sistem enzimatic polimorf. n acest caz, indivizii cu un deficit enzimatic vor fi mai susceptibili s dezvolte o intoxicaie. Dac organismul este expus concomitent la alt substan care inhib enzima n cauz, indivizii cu un fenotip normal vor suferi mai uor o intoxicaie. Cnd calea metabolic pe care o catalizeaz enzima polimorf este calea principal de detoxifiere-eliminare, iar inhibarea sau saturarea acesteia deviaz metabolismul pe o cale ce conduce la formarea unui compus reactiv; indivizii cu un deficit enzimatic vor fi mai susceptibili s dezvolte o intoxicaie Cnd toxicitatea este mediat de un metabolit reactiv, care se obine pe o cale metabolic n care intervine enzima polimorf; indivizii normali vor fi mai susceptibili s dezvolte toxicitate, n timp ce aceia cu enzima deficitar vor fi protejai. Sunt cunoscute i caracterizate polimorfisme ale enzimelor din ambele faze de metabolizare. 1. Polimorfismul enzimelor citocromului P450 Izoenzimele citocromului P450 cu importan toxicologic sunt CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1, CYP2B6, CYP2A6, CYP2E1 i CYP3A4/5. Exist studii care au evideniat existena unui polimorfism genetic (Tabel V.2.), dar nu n toate cazurile semnificaia funcional a fost suficient documentat. Tabel V.1. Exemple de izoenzime ale citocromului P450 polimorfe i substraturile lor Enzim CYP1B1 CYP2A6 CYP2C9 CYP2C19 CYP2D6 CYP2E1 Exemple de substraturi Hidrocarburi aromatice polinucleare metilate Cumarin s-warfarin, tolbutamid, AINS Omeprazol, proguanil Neuroleptice, antidepresive Etanol, nitrozamine

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 113

Un exemplu de citocrom al crui polimorfism a fost bine studiat este CYP2D6, care este considerat a fi al doilea ca importan ntre izoformele umane implicate n metabolismul medicamentelor. Printre principalele substraturi se numr majoritatea antidepresivelor i neurolepticelor, multe antiaritmice i betablocante lipofile, opioide i inhibitori ai recaptrii serotoninei. Enzima nu este aparent inductibil i absena ei face ca subiectul s fie incapabil s metabolizeze substraturile. Consecina este atingerea unor niveluri plasmatice crescute dup doze obinuite, cu posibilitatea apariiei efectelor adverse. Aproximativ 7% din caucazieni sunt metabolizatori leni, n timp ce la asiatici frecvena este n jur de 1%. Chinezii au o capacitate redus de metabolizare a substraturilor CYP2D6, dei ei nu au fost clasificai drept metabolizatori leni. Pentru acest motiv, dozele de haloperidol sau alte substraturi ale acestei izoenzime prescrise n China sunt mai reduse. n populaia uman exist ns i metabolizatori ultrarapizi, care au gene CYP2D6 duplicate, multiplicate sau amplificate, la care dozele de neuroleptice necesare sunt chiar de 3 ori mai mari dect cele uzuale. Cea mai mare frecven a acestui tip de polimorfism se ntlnete n Etiopia (29%) i n Arabia Saudit (20%), pe cnd n Spania ea este de 7%. O alt consecin a acestui fenomen, pe lng necesitatea creterii dozelor terapeutice, este posibilitatea formrii unor concentraii crescute din metabolitul primar. n cazul codeinei, al crei metabolit primar este morfina, exist riscul instalrii farmacodependenei n urma tratamentului cu antitusiv. 2. Polimorfismul alcool dehidrogenazei i aldehid dehidrogenazei Polimorfismul acestor enzime are importan toxicologic n special prin implicarea lor n metabolizarea alcoolului etilic. Polimorfismul alcool dehidrogenazei implic izoenzima ADH2. Forma atipic a enzimei are capacitatea de a metaboliza mult mai rapid etanolul, iar incidena ei n populaia uman este de 90% la chinezi i japonezi, fa de 5% la caucazieini. Asiaticii vor metaboliza deci alcoolul mai repede dect europenii. n ceea ce privete aldehid dehidrogenaza, forma activ a enzimei lipsete la aproximativ 50% din japonezi i chinezi, ceea ce explic incidena mai mare la acetia a nroirii feei, palpitaiilor i tahicardiei dup consumul de alcool. Deficiena de aldehid dehidrogenaz nu a fost observat la caucazieni i la rasa neagr. 3. Polimorfismul colinesterazei plasmatice Acest polimorfism a fost descoperit n urma unor accidente terapeutice la folosirea n anestezie a relaxantului muscular succinilcolina. Enzima atipic are o activitate hidrolitic sczut, ceea ce conduce la creterea considerabil a timpului de njumtire al medicamentului i n consecin la apnee prelungit care poate fi fatal.

114 TOXICOLOGIE GENERAL

4. Polimorfismul paraoxonazei Paraoxonaza este o arilesteraz seric care hidrolizeaz paraoxonul, metabolitul activ al parationului, la para nitrofenol i dietilfosfat, compui inactivi. Forma polimorf are o activitate hidrolitic sczut, care corespunde la a treia sau a asea parte din activitatea catalitic normal. La persoanele cu enzim atipic, riscul de producere a intoxicaiilor cu paration este mult mai mare, fapt important n special n cazul expunerii profesionale. 5. Polimorfismul epoxid hidrolazei Epoxid hidrolazele (EH) reprezint o familie de enzime care hidrateaz epoxizii simpli la dioli vicinali i epoxizii arenelor la trans-dihidrodioli. La mamifere au fost caracterizate cinci clase de epoxid hidrolaze, din care cea mai important din punct de vedere toxicologic este forma microzomial, care prezint o larg specificitate de substrat. Enzima are rolul de a inactiva printre altele epoxizii hidrocarburilor polinucleare cancerigene, prevenind iniierea procesului cancerigen. Forma polimorf are o activitate hidrolitic sczut, iar cercetrile recente au evideniat o corelaie ntre genotipul EH i frecvena carcinomului hepatocelular, a cancerului ovarian sau a unor afeciuni pulmonare. 6. Polimorfismul acetiltransferazelor Polimorfismul acestor enzime a fost mult studiat i a condus la mprirea populaiei umane n dou fenotipuri: fenotipul acetilator lent i fenotipul acetilator rapid. Fenotipul acetilator lent, care se ntlnete n proporie diferit n populaia uman dependent de originea rasial (Tabel V.3.), se afl la originea a numeroase reacii adverse la medicamente (Tabel V.4.).

Tabel V.3. Distribuia fenotipului acetilator n diferite grupuri etnice Grupul etnic Eschimoi Japonezi Latino-americani Americani rasa neagr Americani rasa alb Africani Indieni Britanici Egipteni Acetilatori rapizi (%) 95-100 88 70 52 48 43 39 38 18 Medicament Izoniazid Izoniazid Izoniazid Izoniazid Izoniazid Sulfametazin Izoniazid Sulfametazin Izoniazid

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 115

Fenotipul acetilator este un factor important n toxicitatea izoniazidei. Astfel, la acetilatorii leni are loc o inactivare mai lent a medicamentului, care se poate astfel acumula producnd o neuropatie periferic. De asemenea, la acetilatorii leni s-a observat o inciden crescut a cancerului n cazul expunerii la amine aromatice i heterociclice, datorit capacitii reduse de detoxifiere.

Tabel V.4. Efecte adverse corelate cu fenotipul acetilator Xenobiotic Izoniazida Izoniazida Procainamida Hidralazina Fenelzin Amine aromatice Efectul advers Neuropatie periferic Lezare hepatic Lupus eritematos Great, ameeal Cancerul vezicii urinare Incidena Mai mare la acetilatorii leni Mai mare la acetilatorii leni Mai mare la acetilatorii leni Mai mare la acetilatorii leni Mai mare la acetilatorii leni

7. Polimorfismul altor enzime din faza II i alte enzime din faza II pot prezenta un polimorfism care permite explicarea unor diferene de toxicitate. Astfel, diferenele de conjugare cu glutationul a metabolitului activ al paracetamolului, N-acetil-p-bezochinonimina, ar putea explica parial diferenele de susceptibilitate la efectele hepatotoxice ale acestui medicament. S-au semnalat de asemenea i polimorfisme ale sulfotransferazelor sau ale glucuronoziltransferazelor, dar implicaiile toxicologice ale acestora nu sunt complet elucidate. 2. Enzimopatiile determin o modificare a rspunsului la substana toxic. Un exemplu este Deficiena de glucozo-6-fosfat dehidrogenaz, care este o maladie genetic, gena responsabil fiind localizat pe cromozomul X. Ea este asociat cu susceptibilitatea apariiei crizelor hemolitice la persoanele afectate crora li se administreaz substane oxidante (medicamente, nitroderivai sau aminoderivai aromatici): primachin, sulfanilamid, acetanilid, fenilhidrazin. Frecvena enzimopatiei este mai mare la indivizii de ras alb din regiunea mediteranean i la cei din rasa neagr. Deoarece rolul enzimei n eritrocit este de a menine un nivel de NADPH care s asigure cantitatea de glutation redus necesar protejrii hemoglobinei de aciunea agenilor oxidani, deficitul su fragilizeaz hematiile i favorizeaz hemoliza.

116 TOXICOLOGIE GENERAL

6. Starea patologic Existena unor leziuni sau a unor deficiene organice poate afecta considerabil cinetica i metabolismul compuilor exogeni, influennd toxicitatea acestora. n plus, expunerea cronic la o substan toxic poate induce leziuni patologice care pot modifica cinetica acesteia la o expunere ulterioar. 1. Afeciunile digestive i sindromul de malabsorbie pot afecta absorbia xenobioticelor din tractul gastrointestinal. 2. Afeciunile hepatice Deoarece ficatul este sediul major al biotransformrii xenobioticelor, afeciunile hepatice au efectul cel mai semnificativ asupra toxicitii. Leziunile hepatice pot influena cinetica substanelor exogene prin urmtoarele mecanisme: - modificarea activitii enzimatice de la acest nivel - modificarea fluxului sanguin - modificarea concentraiilor de albumin plasmatic i deci a legrii substanei a) Modificarea activitii enzimatice poate s apar n cazul unor afeciuni de tipul hepatitelor i cirozei, care reduc reaciile de metabolizare din faza II, cum ar fi acetilarea, glucuronoconjugarea i sulfoconjugarea, precum i nivelul de citocrom P450. Consecina este creterea nivelelor sanguine ale xenobioticelor. Icterul obstructiv poate scdea metabolismul xenobioticelor ca o consecin a acumulrii de sruri biliare, care acioneaz ca inhibitori ai unor enzime. Deoarece ficatul este sediul sintezei colinesterazelor, leziunile hepatice au drept consecin reducerea metabolizrii substraturilor acestei enzime: aspirin, procain, succinilcolin. b) Modificarea fluxului sanguin care se ntlnete n afeciunile colestatice poate afecta clearance-ul unor medicamente c) Modificarea concentraiilor de albumin plasmatic poate s apar n cazul unor afeciuni hepatice cronice, deoarece ficatul reprezint sediul sintezei acestor compui. Pentru xenobioticele puternic legate de proteinele plasmatice, consecina este creterea semnificativ a concentraiilor plasmatice ale formei libere, cu posibilitatea apariiei de fenomene toxice, n special la medicamentele cu indice terapeutic mic. De exemplu, anestezia cu tiopental poate fi prelungit la persoanele cu afeciuni hepatice cronice, care au un nivel redus de albumine plasmatice. 3. Afeciunile renale pot modifica efectele toxice ale xenobioticelor prin: - mecanism direct, ca urmare a alterrii funciilor de excreie i de metabolizare ale rinichiului

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 117

- mecanism indirect, consecutiv efectului insuficienei renale asupra metabolismului hepatic. Astfel, la animalele cu insuficien renal s-a constatat o scdere a coninutului de citocrom P450 din ficat. S-a observat c timpii de njumtire ai tolbutamidului, tiopentalului, hexobarbitalului i cloramfenicolului sunt prelungii la pacienii cu afectare renal. 4. Afeciunile cardiovasculare severe influeneaz circulaia hepatic i renal, perturbnd funciile de metabolizare i de excreie ale acestor organe, fapt care se reflect n modificarea toxicitii unor substane. 5. Afeciunile osoase cresc toxicitatea unor substane care se acumuleaz la acest nivel, cum ar fi plumbul. 6. Afeciunile cilor respiratorii, cum ar fi astmul, cresc sensibilitatea la aciunea unor poluani atmosferici ca dioxidul de sulf. 7. Deshidratarea crete sensibilitatea la aciunea toxic a compuilor hidrosolubili (staniu, plumb), dar nu influeneaz toxicitatea acut a substanelor liposolubile. 8. Bolile infecioase pot afecta metabolismul, n special ca urmare a creterii nivelelor de interferon endogen, care modific activitatea unor enzime de metabolizare. 7. Ali factori dependeni de organism care influeneaz toxicitatea substanelor sunt: bioritmul i efortul fizic.

III. FACTORI DE MEDIU CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 1. Substane din mediu Omul este expus, concomitent sau secvenial, la un mare numr de substane din mediu, care pot ptrunde n organism pe ci diferite. Poate cele mai cunoscute exemple de amestecuri chimice sunt cele din fumul de igar sau din apa, aerul i solul din zonele de depozitare a deeurilor. Amestecurile de substane chimice sunt ubicuitare n aerul pe care l respirm, n alimentele pe care le consumm i n apa pe care o bem. Printre amestecurile de substane chimice din mediu cele mai importante din punct de vedere toxicologic se numr gazele de eapament ale automobilelor, produii secundari rezultai n urma dezinfectrii apei de but prin clorurare sau ozonare, dioxina i compuii nrudii care se formeaz prin arderea incomplet a deeurilor. Xenobioticele din mediu pot interaciona ntre ele sau pot modifica toxicitatea substanelor medicamentoase. Alte surse de substane exogene sunt alimentele i medicamentele. Componenii alimentari pot influena toxicitatea medicamentelor sau a poluanilor

118 TOXICOLOGIE GENERAL

din mediu, iar medicamentele pot interaciona ntre ele atunci cnd sunt administrate concomitent. Cu excepia interaciunilor medicamentoase, pentru care exist protocoale de studiu deja validate, studiul interaciunilor cu substanele din mediu, sau a acestora ntre ele, este dificil de realizat i presupune dezvoltarea unor protocoale experimentale inovatoare i eficiente, n vederea examinrii concomitente a tuturor organelor int i a elucidrii mecanismelor de aciune. n acest sens, folosirea unor modele farmacocinetice-farmacodinamice elaborate pe baze fiziologice s-a dovedit a fi deosebit de util. Consecinele interaciunilor dintre substane Toxicitatea unui compus poate fi modificat prin expunerea prealabil, simultan sau consecutiv la o alt substan, efectele putndu-se adiiona, amplifica sau anula. n Fig.5.2. sunt prezentate situaiile posibile n cazul interaciunii dintre dou substane. Reprezentarea este cunoscut sub denumirea de izobologram.

doza A (

DA DE50A

antagonism absenta interactiunii Ef. partial aditiv

Ef. aditiv

potentare

doza B (

DB DE50B

Fig.5.2. Izobolele corespunztoare pentru mai multe situaii posibile de interaciune ntre dou substane

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 119

1. Efectul aditiv presupune c rspunsul toxic rezultat n urma administrrii a dou substane este suma rspunsurilor individuale. n aceast situaie practic nu are loc o interaciune. 2. Sinergismul presupune c rspunsul toxic al celor dou substane, administrate concomitent sau secvenial, este mai mare dect suma rspunsurilor individuale, iar pentru unul din compui toxicitatea sa intrinsec este nul sau foarte redus. Un exemplu l constituie folosirea sinergitilor insecticidelor, cum ar fi piperonil butoxidul (sesamex), care cresc toxicitatea insecticidelor la insecte prin inhibarea citocromului P450 al acestora, mpiedicnd astfel detoxifierea. Acest compus are de fapt o aciune bifazic, el fiind att inhibitor ct i inductor al CYP450, dar efectul inhibitor se manifest mult mai rapid dect cel inductor, ceea ce face posibil utilizarea sa. 3. Potenarea conduce i ea la creterea rspunsului toxic peste suma rspunsurilor individuale, dar n acest caz ambii compui au o toxicitate apreciabil atunci cnd sunt administrai separat. Un exemplu este cel al interaciunii dintre malation, insecticid organofosforic cu toxicitate redus la mamifere datorit hidrolizei rapide, cu un alt insecticid organofosforic, EPN. Asocierea determin creterea semnificativ a toxicitii malationului, deoarece EPN inhib carboxiesteraza responsabil de inactivarea prin hidroliz. 4. Antagonismul are loc atunci cnd una din substane scade efectul toxic al celeilalte. Acest fenomen este exploatat n tratamentul intoxicaiilor prin folosirea de antidoturi. 5. Inducia i inhibiia enzimatic pot conduce la modificarea metabolismului uneia din substane, cu consecine asupra toxicitii acesteia. Nivelele la care se produc interaciunile dintre substane Interaciunile dintre substane pot avea loc la diferite nivele, care includ absorbia, distribuia, metabolizarea, excreia, locul aciunii toxice sau mecanismele de reparare. Exemple de astfel de interaciuni sunt prezentate n Tabelul V.4.. Interaciuni medicamentoase Aceste interaciuni au drept consecin fie apariia de reacii adverse, unele foarte grave, la doze terapeutice ale medicamentelor administrate, fie reducerea rspunsului farmacologic i ineficiena tratamentului. Interaciunile medicamentoase se pot produce prin mecanism chimic, farmacocinetic sau farmacodinamic i pot fi influenate de vrst i de factori genetici. Cele mai numeroase sunt interaciunile farmacocinetice i pot avea loc la nivelul absorbiei din tractul gastrointestinal, la nivelul legrii de proteinele

120 TOXICOLOGIE GENERAL

plasmatice, la nivelul excreiei i la nivelul metabolizrii. Interaciunile la nivelul metabolizrii se explic prin inducie sau prin inhibiie enzimatic i conduc adesea la reacii foarte serioase. Interaciunile la nivelul receptorilor sunt n general interaciuni antagoniste i sunt exploatate pentru obinerea de antidoturi care acioneaz prin mecanism competitiv. Tabel V.4. Bazele chimice i biologice ale interaciunilor dintre substanele toxice
Bazele interaciunii Chimic Sinergism sau potenare Formarea nitrozaminelor din nitrii i amine Antagonism Dimetihidrazina reacioneaz in vivo cu piridoxal fosfatul, formnd o hidrazon i inducnd o depleie a depozitelor tisulare ale acestui cofactor enzimatic Zincul din alimente inhib parial toxicitatea plumbului i prin scderea procentului de plumb absorbit din alimente Seleniul protejeaz mpotriva toxicitii cadmiului prin scderea concentraiilor de cadmiu din ficat i rinichi i prin redistribuirea cadmiului din testicule, de pe proteinele de legare cu mas molecular mic pe cele cu mas molecular mare. Arsenul antagonizeaz parial efectele seleniului, prin creterea excreiei biliare a acestuia. Seleniul inhib leziunile hepatice i incidena tumorilor hepatice induse de 2-acetilaminofluoren prin deplasarea metabolismului pe o cale de detoxifiere. Blocarea receptorilor acetilcolinei de ctre atropin n intoxicaiile cu insecticide organofosforice Interaciunea histaminei i a nordrenalinei, cu efecte asupra vasodilataiei i a presiunii sanguine Inducia reparrii ADN-ului dup expunere la ageni alchilani

Absorbia

Distribuia

Neurotoxicitatea insecticidului organofosforic EPN este crescut de hidrocarburile alifatice cu 6 atomi de carbon i datorit creterii absorbiei prin piele Dup tratamentul cu derivai de ditiocarbamat, tiuram cresc nivelele cerebrale de plumb

Excreia

Scderea excreiei renale de penicilin la asocierea cu probenecid Compuii organofosforici profenfos, sulprofos, poteneaz toxicitatea malationului prin inhibarea esterazei care l detoxific.

Metabolizarea

Interaciunea la nivelul receptorilor Interaciunea la alt nivel dect cel al receptorilor (antagonism funcional) Interaciune cu ADN-ul

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 121

Interaciuni cu compui din diet Regimul alimentar, prin coninutul su n diferii compui nutritivi sau nu, poate modifica toxicitatea substanelor. Mecanismele prin care componenii din diet pot modula toxicitatea xenobioticelor sunt: - efectele asupra absorbiei - efectele asupra metabolismului - inactivarea metaboliilor reactivi - inducia reparrii ADN - inhibarea proliferrii celulelor canceroase prin modularea comunicrii intracelulare, a expresiei oncogenelor i a reglrii hormonale - toxicitatea selectiv - inducerea diferenierii - imunomodulare 1. Proteinele n general, o diet srac n proteine scade activitatea OFMM n ficatul de obolan, efectele fiind dependente de sex i de substrat. De exemplu, N-demetilarea aminopirinei i hidroxilarea hexobarbitalului sunt sczute n principal la masculi, n timp ce hidroxilarea anilinei este redus la ambele sexe. De asemenea, s-a observat o scdere a activitii azoreductazelor, consecina fiind creterea gravitii efectelor carcinogene ale dimetilaminoazobenzenului. Stricnina, care este detoxifiat de OFMM, este mai toxic la animalele cu o diet srac n proteine, n timp ce tetraclorura de carbon, care este bioactivat de aceleai enzime, este mai puin toxic. i reaciile din faza II pot fi afectate. Astfel, glucuronidarea cloramfenicolului este redus la cobaii cu deficit de proteine. 2. Lipidele O diet deficitar n acizi grai nesaturai conduce n general la o reducere a activitii citocromului P450 la obolan. Lipidele par a fi necesare pentru ca efectul inductorilor enzimatici, cum ar fi fenobarbitalul, s fie complet exprimat. Totui, la animalele cu o diet bogat n lipide s-a observat o inciden crescut a cancerelor de sn i de colon, care pare a fi corelat n special cu evenimentele din faza de promovare. 3. Glucidele O diet bogat n glucide are la obolan un efect asemntor cu cel al unui aport proteic sczut, scznd activitatea unor enzime ale citocromului P450. Deoarece obolanii tind s echilibreze aportul caloric total, aceast constatare ar putea reflecta mai degrab un aport sczut de proteine. 4. Vitaminele Deficienele vitaminice conduc de obicei la o reducere a activitii OFMM, dei exist i unele excepii. Deficiena de riboflavin determin o cretere a hidroxilrii anilinei, cu toate c n acelai timp produce o scdere a hidroxilrii

122 TOXICOLOGIE GENERAL

benzpirenului. Deficiena de vitamin C scade activitatea att a enzimelor din faza I ct i a glucuronoziltransferazelor. Deficienele de vitamine A i E scad activitatea OFMM, n timp deficiena de tiamin produce o cretere a acestei activiti. 5. Mineralele Modificarea aportului de minerale prin diet poate afecta activitatea OFMM. Astfel, un exces de cobalt, cadmiu, mangan i plumb n diet poate produce o cretere a nivelurilor hepatice de glutation i o scdere a coninutului n citocrom P450. Un aport sczut de calciu i fier n diet favorizeaz absorbia cadmiului i a plumbului. Seleniul are un rol important n procesele de detoxifiere, deoarece intr n compoziia unor enzime cum ar fi glutation peroxidaza, cu rol n inactivarea peroxidului de hidrogen i a peroxizilor organici. 6. Factori ne-nutritivi din diet Unii compui din alimente cum ar fi cafeina, etanolul, anumite flavonoide (tangeretin, nobiletin), pot induce enzimele citocromului P450, dintre care unele sunt implicate n formarea de metabolii reactivi, mutageni. Sulfura de dialil din usturoi, precum i metabolitul su dialil sulfona, inhib ireversibil CYP2E1, acesta fiind probabil mecanismul prin care este blocat procesul carcinogen. Fenetil izotiocianatul, un produs de degradare a unor vegetale din familia cruciferelor, are de asemenea aciune blocant, iar naringeninul din grapefruit inhib CYP1A2. Vanilina, aldehida cinamic i cumarina induc unele mecanisme de reparare a ADN, iar componentele din ceai, printre care acidul galic, protejeaz mpotriva mutaiilor induse de radiaiile UV n culturi bacteriene. Catechinele i galocatechinele din ceaiul verde au efecte antimutagene i anticarcinogene prin prevenirea inhibrii comunicrii intracelulare induse de unele carcinogene. Fitoestrogenii au rol protector mpotriva tumorilor dependente de hormonii sexuali, n special mpotriva tumorilor mamare i de prostrat. Beta carotenul i cantaxantina au efecte anticarcinogene i imunomodulatoare. 2. Temperatura Variaiile de temperatur reprezint o form de stres i de aceea pot produce modificri mediate prin interaciuni hormonale. Temperatura poate determina: - creterea toxicitii att la temperaturi sczute ct i la temperaturi ridicate, de exemplu creterea toxicitii cafeinei la oareci; - creterea toxicitii o dat cu creterea temperaturii, cum este cazul Damfetaminei, a crei toxicitate este mai redus la temperaturi joase. 3. Radiaiile ionizante n general, radiaiile ionizante reduc viteza de metabolizare a xenobioticelor, att in vivo, ct i n preparate enzimatice.

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 123

4. Lumina 5. Umiditatea 6. Altitudinea 7. Factorii de stres (zgomotul)

MECANISME DE ACIUNE TOXIC


n ultimii 30 de ani, toxicologia a progresat rapid, transformndu-se dintr-o tiin descriptiv ntr-o disciplin capabil s explice efectele toxice. Aceast modificare a fost iniiat de scandalul talidomidei, iar printre moleculele care au contribuit la nelegerea mecanismelor toxicitii se numr paracetamolul, brombenzenul i paraquatul. Explicarea mecanismelor prin care se produc efectele toxice este deosebit de important deoarece: - permite identificarea cauzei toxicitii - contribuie la prevenirea toxicitii prin metode chimice sau biologice - furnizeaz o baz raional pentru extrapolarea datelor de toxicitate de la animalele de experien la om i pentru evaluarea riscurilor asociate cu expunerea la anumite xenobiotice. Efectele exercitate de substanele toxice asupra organismului sunt foarte variate i destul de dificil de sistematizat. Ele pot fi clasificate dup locul unde se produc, dup reversibilitatea sau nu a fenomenelor, dup momentul n care apar. a) Efecte locale i efecte sistemice Efectele locale sunt cele care se exercit imediat, la locul de contact ntre substana toxic i organism. Ele se pot datora aciunii moleculelor caustice asupra tubului digestiv, a materialelor corosive asupra pielii, sau a gazelor iritante asupra mucoasei cilor respiratorii, i sunt consecina unei distrugeri generalizate a celulelor. Efectele sistemice se manifest dup ce xenobioticul a fost absorbit i distribuit n organism. Substana toxic nu afecteaz n mod egal toate organele, ci acioneaz mai specific la nivelul unuia sau a ctorva organe care poart denumirea de organe int. Organul int este fie organul care are o sensibilitate mai mare la aciunea compusului toxic, fie organul n care acesta se gsete n concentraie mai mare. De exemplu, neuronii i miocardul, la nivelul crora au loc schimburi transmembranare rapide i care sunt n consecin dependeni de ATP-ul rezultat n urma oxidrilor mitocondriale, sunt deosebit de sensibili la aciunea substanelor care induc hipoxie, cum este monoxidul de carbon. De asemenea, celulele cu diviziune rapid, cum sunt cele ale mduvei hematoformatoare sau ale mucoasei intestinale, sunt foarte sensibile la aciunea toxicilor mitotici ca medicamentele citostatice.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 125

O concentraie mai mare a substanei toxice la nivelul unui organ poate fi determinat de particularitile toxicocinetice ale acesteia. Deoarece prin ficat i prin rinichi trece cea mai mare parte a volumului sanguin, aceste organe sunt expuse la concentraii mari de xenobiotice. Metilmercurul, o substan lipofil, poate strbate bariera hemato-encefalic, producnd efecte la nivelul SNC, spre deosebire de compuii anorganici ai mercurului care acioneaz toxic n principal la nivelul tractului gastrointestinal i al rinichilor. n ochi i n urechea intern se gsesc cantiti mai mari de melanin. Substanele cu afinitate mare pentru melanin, cum sunt clorochinul i kanamicina, se pot acumula la aceste nivele, unde dup expunere prelungit pot induce leziuni. Bioactivarea conduce la formarea unor metabolii mai reactivi, care sunt mai susceptibili s acioneze asupra celulelor adiacente locului de producere. Deoarece ficatul este locul major de biotransformare, el poate fi lezat de numeroase substane toxice. De exemplu, tetraclorura de carbon produce necroz hepatic centrolobular, care poate fi corelat cu un coninut mai mare de citocrom P450 n aceast regiune a ficatului. b) Efecte reversibile i efecte ireversibile Efectele reversibile sunt cele care dispar dup ntreruperea expunerii la substana toxic. Efectele ireversibile sunt efectele care persist, sau chiar progreseaz, dup ntreruperea expunerii. n categoria efectelor ireversibile se ncadreaz cancerul, mutaiile, distrugerea neuronilor i ciroza hepatic. c) Efecte imediate i efecte tardive Efectele imediate apar rapid, dup o expunere unic la substana toxic, de exemplu cele observate n intoxicaiile acute cu substane caustice, cu cianuri sau stricnin. Efectele tardive sunt efectele care apar dup o perioad de laten, mai mult sau mai puin lung. Exemple sunt efectele carcinogene sau efectele observate n intoxicaia cu paraquat. Datorit multitudinii de substane toxice existente, i cile prin care acestea ajung s produc efecte toxice sunt diferite (Fig.6.1.). Uneori simpla prezen a substanei la anumite nivele critice din organism este suficient pentru a produce toxicitate, cum ar fi precipitarea unor compui n tubii renali cu instalarea insuficienei renale (calea A). Alteori, xenobioticul trebuie s interacioneze cu un receptor (calea B), sau dup bioactivare interacioneaz cu molecule endogene, perturbnd funcia sau structura celular (calea C). Afectarea celular poate declana mecanisme de reparare la nivel molecular, celular sau tisular (calea D), iar

126 TOXICOLOGIE GENERAL

atunci cnd aceste mecanisme sunt depite se instaleaz toxicitatea. Necroza celular, cancerul i fibroza sunt fenomene toxice care urmeaz aceste 4 etape.

S ubstanta toxica

1 E xpunere

2 Interactiune cu molecula tinta

3 Disfunctie celulara Lezare

4 E secul repararii

T O X I C I T A T E

Fig.6.1. Etapele poteniale ale dezvoltrii toxicitii dup expunerea la xenobiotice

Efectele toxice se produc deci n majoritatea cazurilor ca urmare a interaciunii moleculei de xenobiotic sau a unui metabolit activ cu inte moleculare care pot fi: proteine, coenzime, lipide, acizi nucleici.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 127

1. Proteinele a) Proteinele de structur cum ar fi cele din membranele organitelor celulare sunt frecvent lezate. Proteinele din colagen sunt ns afectate mult mai rar. b) Proteinele cu funcie enzimatic sunt frecvent inta aciunii substanelor toxice. Efectele asupra enzimelor pot fi specifice, reversibile sau nu, cnd xenobioticul trebuie s ndeplineasc anumite cerine structurale pentru a se putea lega de centrul activ al enzimei (ex. insecticidele organofosforice care inhib acetilcolinesteraza), sau nespecifice, cum este cazul unor metale ca plumbul i mercurul ce pot inhiba foarte multe enzime, indiferent de activitatea lor, datorit legrii de gruprile tiolice ale acestora. c) Transportori, cum ar fi hemoglobina, a crei funcie de transport al oxigenului poate fi afectat prin legarea monoxidului de carbon sau prin oxidarea la methemoglobin. 2. Coenzimele Coenzimele sunt indispensabile pentru funcionarea enzimelor. Unele substane toxice le pot inhiba sinteza, n timp ce altele pot chelata ionul metalic al coenzimei (ex. ditiocarbamaii care chelateaz ioni de Zn sau Cu). 3. Lipidele Lipidele pot fi atacate de radicalii liberi care iniiaz peroxidarea acizilor grai din compoziia lor, producnd necroz. De asemenea, unele anestezice liposolubile ca halotanul sau eterul se pot acumula n membrana celular prin dizolvare n fraciunea lipidic a acesteia i determin perturbri ale transportului transmembranar de oxigen sau de glucoz. 4. Acizii nucleici Formarea de legturi covalente ntre acizii nucleici n curs de replicare i substana toxic sau metaboliii activi ai acesteia poate conduce la mutaii, cancere sau teratogenez. Antimetaboliii ca aminopterina pot fi ncorporai n molecula acizilor nucleici i interfereaz n replicarea acestora. Aceste inte moleculare trebuie s fie accesibile i s prezinte o anumit reactivitate sau configuraie spaial care s le permit interaciunea cu substana toxic (Fig.6.2.). Consecina interaciunii poate fi distrugerea moleculei int, modificarea funciei acesteia sau formarea unui antigen. Deoarece intele moleculare care sunt afectate de substanele toxice sunt eseniale pentru viaa sau buna funcionare a celulelor, aceste interaciuni se vor reflecta la nivel celular prin distrugerea structurii celulare sau prin modificarea funciei celulare. Aceste modificri sunt strns corelate, o leziune celular putnd antrena un deficit funcional, iar o alterare funcional putnd conduce la afectarea integritii structurale.

128 TOXICOLOGIE GENERAL

TIPURI DE REACTII Legare necovalenta Legare covalenta Sustragerea H Transfer de electroni Reactie enzimatica

CONSECINTE TOXIC FINAL MOLECULA TINTA Functie anormala Distrugere Formare de antigeni

CARACTERISTICI ALE TINTEI Reactivitate Accesibilitate Functie critica

Fig.6.2. Reacia toxicului final cu molecula int

I. AFECTAREA STRUCTURII CELULARE Aciunea substanelor toxice asupra structurii celulare poate conduce la: distrugere celular total (moartea celulei), sau doar la lezarea membranei celulare sau a organitelor celulare. MOARTEA CELULAR Moartea celulelor se poate produce prin dou mecanisme: necroza i apoptoza.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 129

1. Necroza este consecina aciunii unor factori externi asupra celulei: cldur, anoxie, substane toxice, i are urmtoarele caracteristici morfologice i funcionale: Este un proces pasiv Afecteaz de obicei mai multe celule individuale adiacente Membrana plasmatic este pierdut n fazele incipiente ale morii celulare Se produce umflarea citoplasmei cu degenerarea organitelor celulare Cromatina nuclear devine mai puin dens Conduce de obicei la inflamaie exudativ datorit eliberrii resturilor celulare n esutul adiacent Are loc degenerarea celulei 2. Apoptoza este o form de moarte celular programat, care are rolul de a ndeprta celulele nedorite, deci de a menine homeostazia normal a esuturilor. Apoptoza are urmtoarele caracteristici: Moartea celulei nu se produce sub aciunea direct a unor factori lezionali, dar stimulii externi pot induce n celula afectat procese metabolice care declaneaz apoptoza Este un proces activ Afecteaz de obicei celule izolate dintr-un esut sau un organ Are loc condensarea citoplasmei, structura organitelor celulare fiind puternic afectat Se produce condensarea cromatinei nucleare Nu este nsoit de inflamaie Se produce fragmentarea celulei, cu apariia corpilor apoptotici n moartea celular prin apoptoz sunt implicate nite enzime specifice denumite caspaze, care sunt nite proteaze intracelulare latente. Semnalul de moarte celular determin clivajul pro-enzimei, formndu-se caspaza activ tetrameric. Tiolii celulari, cum ar fi glutationul i tioredoxina, favorizeaz activitatea caspazei inductibile. Celulele nedorite pot fi sensibilizate la moartea celular de anumite substane nutritive oxidoreductoare ca acidul -lipoic. Acidul lipoic ptrunde n celul i este redus la acid dihidrolipoic, un reductor puternic ce poate regla activitatea caspazei inductibile. n anumite condiii, speciile reactive de oxigen (ROS) i speciile reactive de azot (RNS), pot inhiba funcia caspazei inductibile, oprind executarea morii celulare (Fig.6.3.). Dei mult vreme s-a crezut c apoptoza nu este implicat n procesele de origine toxic, tot mai multe date susin rolul stresului oxidativ n iniierea apoptozei, iar stresul oxidativ la rndul su poate fi indus i de substane toxice. Stresul oxidativ, aa cum s-a vzut, poate fie promova, fie inhiba apoptoza, dependent de nivelul la care are loc lezarea.

130 TOXICOLOGIE GENERAL

Fig.6.3. Reglarea redox a activitii caspazei inductibile

Moartea celulelor se poate produce ca urmare a aciunii caustice, sau ca urmare a legrii ireversibile a unor intermediari reactivi. A) Aciunea caustic Efectul caustic const dintr-o arsur chimic, diferit de cea termic, produs la locul de contact ntre substana toxic i esut, care poate fi: pielea, mucoasele externe, digestive, respiratorii, rinichiul, nervul optic, etc. Agenii caustici dezorganizeaz sau chiar distrug arhitectura celular n urma denaturrii proteinelor i pot fi: - substane care creeaz un pH acid sau bazic diferit de cel fiziologic - substane oxidante - substane deshidratante - soluiile unor cationi organici sau anorganici - anioni aromatici (acid salicilic) - detergeni cationici. B) Formarea de intermediari reactivi Intermediarii reactivi sunt : structurile electrofile, radicalii liberi i speciile reactive de oxigen. 1. Structurile electrofile se formeaz de obicei prin reacii catalizate de izoenzimele citocromului P450 i pot fi epoxizi, chinone sau ioni de nitreniu.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 131

2. Radicalii liberi sunt molecule sau fragmente moleculare care conin unul sau mai muli electroni nepereche n orbitalul extern. Radicalii liberi se formeaz prin: I. Acceptarea sau pierderea unui electron II. Clivajul homolitic al unei duble legturi I. a) Reducerea prin acceptarea unui electron, un mecanism prin care multe substane formeaz radicali liberi, este catalizat de NADPH citocrom P450 reductaza microzomial. Xenobiotice ca paraquatul (Fig.6.4.), doxorubicina, nitrofurantoina, accept un electron de la reductaze pentru a forma radicali. De obicei, aceti radicali transfer electronul suplimentar oxigenului molecular, formnd radicalul anion superoxid (O2 .-) i regenernd compusul printe, care este astfel disponibil pentru a ctiga un nou electron. Se iniiaz astfel un ciclu redox, n care o molecul de xenobiotic acceptoare de electroni poate genera mai multe molecule de O2.-. Alternativ, radicalul xenobiotic cu un electron suplimentar poate reduce i n consecin elibera Fe3+ din feritin, producnd ioni Fe2+ care sunt toxici.

NADPH

citocrom P450 reductaza forma oxidata

H3C

CH3

O2

NADP

citocrom P450 reductaza forma redusa

H3C e

+ N

CH3

Paraquat

O2

.-

Fig.6.4. Bioactivarea paraquatului

I. b) Pierderea unui electron. Xenobioticele nucleofile: fenoli, hidrochinone, aminofenoli, amine, hidrazine, fenotiazine, tioli, sunt susceptibile s piard un electron ntr-o reacie catalizat de peroxidaze, formnd radicali liberi. Unele din aceste substane, de exemplu catecoli, hidrochinone, pot suferi o oxidare n dou etape, producndu-se nti radicali semichinone, apoi chinone. Chinonele la rndul lor pot participa la cicluri redox, cu generarea de radical anion superoxid (Fig.6.5.). II. Formarea de radicali liberi prin clivajul homolitic al legturii covalente (clivaj reductor): poate fi indus prin transferul electronului la molecul. Acest mecanism este implicat n conversia CCl4 la radical triclormetil printr-un transfer de electroni

132 TOXICOLOGIE GENERAL

de la citocromul P450 sau de la lanul mitocondrial de transport al electronilor (dehalogenare reductoare) (Fig.6.6.).

Clx

Clx CYP450, O2 NADPH CYP450 O2 NADPH

Formare directa de aducti cu ADN

OH Clx OH Clx CYP450, O2 NADPH HO OH Clx OH Cu(I) O Clx Cu(II) Peroxidaze

O O2 Cu(I) + H2O2 + O2

.-

HO + HO + Cu(II) Clx

ADN O Formare directa de aducti cu ADN (hidroxilare) ADN

Formare directa de aducti cu ADN

Formare directa de aducti cu ADN

Fig.6.5. Bioactivarea bifenililor policlorurai (PCB)

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 133

CCl3

.
P-450-Fe3+ CCl4

P-450-Fe3+.......CCl4 Cl
-

P-450-Fe3+.......CCl3

Fig.6.6. Mecanismul posibil al dehalogenrii tetraclorurii de carbon mediate de citocromul P450

3. Speciile reactive de oxigen. Numeroase substane toxice, pe lng faptul c se pot transforma n radicali liberi n cursul metabolizrii, pot participa la ciclurile redox, genernd radical anion superoxid, care la rndul su determin formarea altor specii reactive de oxigen (ROS) implicate n numeroase procese citotoxice. Substanele toxice care particip la ciclurile redox sunt de obicei chinone i hidrochinone, iar ciclul redox ncepe cu o etap de reducere care implic un singur electron i care este catalizat de citocrom P450 reductaza NADPH dependent. Speciile reactive de oxigen sunt prezentate n Tabelul VI.1. Generarea peroxidului de hidrogen are loc prin dismutaia superoxidului. De aceea, orice sistem biologic care genereaz radical anion superoxid va produce peroxid de hidrogen. Exist ns i enzime localizate n peroxizomi care produc peroxid de hidrogen fr a necesita radicalul anion superoxid (O2.-) ca intermediar. Spre deosebire de O2.-, peroxidul de hidrogen este capabil s traverseze membranele, reacionnd n celul cu Fe2+ sau Cu+ pentru a forma radicali hidroxil prin Reacia Fenton (Fig.6.7.). Reacia Fenton este catalizat de ioni ai metalelor tranziionale, de obicei Fe(II) sau Cu(I), Cr(V), Ni (II) sau Mn(II), i reprezint un mecanism major al toxicitii H2 O2 i al precursorului su O2.-, precum i al metalelor tranziionale, deoarece radicalul hidroxil este unul dintre cei mai puternici i mai reactivi oxidani cunoscui, reacionnd imediat cu orice compus biologic disponibil.

134 TOXICOLOGIE GENERAL

Tabel VI.1. Specii reactive de oxigen Specia reactiv de oxigen Oxigen singlet (1O2) Radical anion superoxid (O2.-) Radicalul perhidroxil (.O-OH) Anionul peroxid (O22-) Radicalul hidroxil (OH.) Modul de formare Excitarea O2 Reducerea oxigenului prin adiia unui electron; cicluri redox Protonarea radicalului anion superoxid Reducerea radicalului anion superoxid prin adiia unui electron Din ap, sub aciunea radiaiilor ionizante i din peroxidul de hidrogen, prin dezintegrare catalizat de metale Din O2, prin fotoliz

Ozonul (O3)

Alt surs de peroxid de hidrogen n afar de dismutaia spontan sau cea catalizat de superoxiddismutaz (SOD) a radicalului anion superoxid, este aceea de produs secundar, direct sau indirect, al mai multor reacii catalizate de enzime ca: monoaminoxidaza, xantinoxidaza, acil-coA oxidaza.
.SOD HOOH 2H+ Fe(II), Cu(I), Mn(II), Cr(V), Ni(II)

O2 O2

O2

.-

Fe(III), Cu(II), Mn(III), Cr(VI), Ni(III)

HO

OH

Fig. 6.7. Reacia Fenton

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 135

O alt reacie ce permite formarea radicalului hidroxil este Reacia HaberWeiss (Fig.6.8.), care este probabil catalizat de ionii de fier liberi (b), sau de fierul sechestrat n feritin, lactoferin, hemoglobin i mioglobin.
..

a) O2

+ H2O2

HO + OH + 1O2

b)

O2

.-

Fe3+

OH + HO

O2

Fe2+

H2O2

Fig. 6.8. Reacia Haber-Weiss

Mecanisme de aprare mpotriva speciilor reactive de oxigen Organismul dispune de mecanisme care i permit s se apere mpotriva agresiunii speciilor reactive de oxigen. Ele pot fi mecanisme enzimatice sau mecanisme neenzimatice. Mecanismele enzimatice, alturi de modul de generare a acestor compui reactivi, sunt prezentate n Fig.6.9. a) Mecanismele enzimatice sunt reprezentate de: Superoxiddismutaze (SOD), proteine ce conin metale i care catalizeaz conversia radicalului anion superoxid la oxigen molecular i peroxid de hidrogen: a) O2.- + SOD-Cu2+ b) O2.- + SOD-Cu+ + 2H+ O2 + SOD-Cu+ H2O2 + SOD-Cu2+

Catalaza (CAT), o enzim ce conine hem i care transform peroxidul de hidrogen n ap i oxigen. Ea acioneaz numai asupra peroxidului de hidrogen, nu i asupra peroxizilor organici. Se gsete n majoritatea esuturilor, n peroxizomi. Glutation peroxidaza (GPX) catalizeaz i conversia peroxizilor organici (ex. hidroperoxizii lipidici). Enzima este specific pentru glutation, nu pentru substraturile detoxifiate. Se gsete n majoritatea esuturilor, att n citosol ct i n mitocondrii.

136 TOXICOLOGIE GENERAL

b) Mecanismele neenzimatice constau n reacia radicalilor cu substane care i inactiveaz. Astfel de substane sunt: Vitamina E: lipofil, ncorporat n membrane Vitamina C: hidrosolubil, se gsete n citosol.

RE P450 oxidaza

PEROXIZOMI GR oxidaze GPX

GSSG
H2O O2

GSH
NADPH oxidaza NADP+ H+ xantin oxidaza

O2
NADPH

O2.-

Cu,Zn-SOD

CAT

H2O2
H2O Fe /Cu
2+ +

O2

.-

O2 dismutatie MPO spontana


1

.
O2

O2

.Fe /Cu
3+ 2+

OH

O2

O2

lantul mitocondrial de transport al e


-

.O2

Mn-SOD

H2O2

GPX CAT

H2O O2

Fig. 6.9. Generarea speciilor reactive de oxigen i principalele mecanisme enzimatice de aprare

4. Speciile reactive de azot. O alt specie reactiv care poate induce leziuni ale acizilor nucleici este oxidul nitric, mai ales n prezena superoxidului, cu care formeaz specii secundare mai reactive. Speciile secundare pot reaciona la rndul lor cu ali constitueni celulari formnd specii teriare, care pot de asemenea leza ADN-ul (Fig.6.10.).

2NO + O2

2NO2

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 137

NO2 + NO

N 2 O3

Anhidrida nitroas este mai reactiv i mai susceptibil s produc leziuni dect oxidul nitric. N2O3 + amine nitrozamine + tioli nitrozotioli N2O3 + H2O2 2HNO2 NO + O2- ONOO(peroxid) (peroxinitrit) Reacia este mai eficient dect cea a superoxidului cu superoxid dismutaza. Candidaii majori la lezarea ADN-ului sunt: anhidrida nitroas i peroxinitritul. Donori de oxid nitric sunt: nitrozureele ex. streptozocina nitroglicerina Oxidul nitric se mai gsete i n atmosfer, unde provine din gazele de eapament ale automobilelor sau din fumul de igar.

SPECII SECUNDARE

SPECII TERTIARE

NITROZAMINE ADUCTI AI GLUCOZEI

N2 O 3 +O2 OXID NITRIC ONOO

+O2

NITOZOTIOLI

LEZARE ADN

Fig. 6.10. Aciunea oxidului nitric ca mutagen primar, secundar sau teriar

138 TOXICOLOGIE GENERAL

Implicaiile toxicologice ale interaciunii intermediarilor reactivi cu intele moleculare Acestea constau n: Legarea covalent de intele moleculare Peroxidarea lipidelor Inducerea stresului oxidativ 1. Legarea covalent de intele moleculare (acizi nucleici, proteine, cofactori, lipide) poate avea drept consecine: - scderea producerii de energie - modificarea permeabilitii membranei - inhibarea sintezei de macromolecule - inhibarea unor enzime - mutagenez, carcinogenez 2. Peroxidarea lipidelor Este un proces iniiat de atacul speciilor reactive de oxigen (radical hidroxil, oxigen singlet) asupra acizilor grai polinesaturai din componena membranelor biologice, care poate duce la lezarea acestora i n final la moarte celular. Procesul decurge n 3 etape (Fig.6.11.): I. sustragerea de ctre radicalul hidroxil sau oxigenul singlet a unui atom de hidrogen de pe catena unui acid gras nesaturat, la nivelul ntlnirii a dou grupri alil. (iniiere = formarea radicalului) II. reacia radicalului acidului gras format cu oxigenul molecular (peroxidare) III. oprirea reaciei n lan (terminare) 3. Stresul oxidativ Este situaia n care producerea speciilor reactive de oxigen depete eliminarea lor prin sistemul antioxidant natural de aprare, sau cnd acesta din urm este afectat, n organism existnd o interaciune continu cu ageni oxidani. n aceast situaie se utilizeaz mai muli echivaleni reductori dect ar fi cazul pentru funcionarea normal a celulei. Echivalenii reductori depozitai n celule sunt NADPH-ul, glutationul, proteinele cu grupri tiol, vitaminele C i E. Cauzele principale ale stresului oxidativ sunt speciile reactive de oxigen i structurile chinoidice. Exist tot mai multe dovezi care vin n sprijinul ipotezei implicrii stresului oxidativ n inducerea unor boli neurodegenerative, moartea celular producndu-se prin apoptoz indus de speciile reactive de oxigen. Boli neurodegenerative n care

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 139


I. initierea

LH + OH

L + H2O

II. propagarea L + O2

LOO

LOOH III. terminarea L + L

LH

. . .
produsi lipsiti de activitate

L + LO2

LO2 + LO2

LH = acid gras polinesaturat . L = radical lipidic

Fig.6.11. Etapele peroxidrii lipidelor

exist date cu privire la implicarea stresului oxidativ sunt : Boala Alzheimer, Boala Parkinson, Boala Hungtington, scleroza lateral, diskinezia tardiv indus de neuroleptice, tulburrile neurologice induse de substane toxice ca metilmercurul, cadmiul, toluenul, solvenii organici.

II. TULBURRI ALE FUNCIEI CELULARE INDUSE DE SUBSTANELE TOXICE Tulburrile induse de substanele toxice la acest nivel depind de rolul moleculei int n funcionarea celulei. Astfel, dac molecula int este implicat n reglarea funciei celulare, afectarea ei poate conduce la disfuncii ale exprimrii genice sau la disfuncii ale activitii celulare n desfurare. Dac molecula int este implicat n homeostazia celular, afectarea ei poate compromite supravieuirea celulei.

140 TOXICOLOGIE GENERAL

1. Disfuncii ale exprimrii genice Acestea se pot produce la nivelul: - elementelor responsabile de transcripie - componentelor cii de transducie a semnalelor - sintezei, depozitrii sau eliberrii moleculelor de semnalizare: hormoni, citokine, factori de cretere, neuromeditori, oxid nitric. Disfuncii la nivelul transduciei semnalelor Celulele individuale dintr-un organism multicelular trebuie s comunice ntre ele pentru a coordona funcia diferitelor esuturi i sisteme de organe. Comunicarea intercelular const n secreia de ctre o celul a unei molecule care se leag apoi de receptorii unei a doua celule, inducnd o modificare a activitii biologice a acesteia. Mecanismul prin care legarea unei molecule de receptorul su din celula int induce o modificare a activitii biologice a acesteia din urm poart denumirea de transducie a semnalelor. Moleculele de semnalizare, hormonii sau neuromediatorii, nu ptrund n celulele crora le este adresat mesajul pe care l transport. Mesajele sunt comunicate prin membrana plasmatic prin intermediul unor proteine receptoare integrate membranei, care pot fi receptori cuplai cu proteine G, receptori cuplai cu canale ionice sau receptori cuplai cu enzime cum sunt tirozin kinazele. Legarea moleculei de semnalizare de receptor va determina eliberarea n citosolul celulei a unor molecule numite mesageri secundari, care transfer la rndul lor semnalele unor enzime sau altor proteine din celul, cum ar fi protein kinazele. Principalii mesageri secundari din celule sunt inozitol trifosfatul (IP3 ), 3,5-adenozin monofosfatul ciclic (cAMP) i guanin monofosfatul ciclic (cGMP). Perturbarea transduciei semnalelor indus de substanele toxice este probabil responsabil de modificarea exprimrii genice dup expunerea celulelor la stres oxidativ, la metale grele i la compui ce formeaz aduci prin legturi covalente. De exemplu, s-a dovedit c mecanismul de producere a neurotoxicitii plumbului poate fi explicat prin interferarea n transducia semnalelor. Plumbul poate mima aciunea calciului sau i poate perturba homeostazia, calciul fiind un cofactor n multe procese celulare implicate n transducia semnalelor. Astfel, plumbul poate activa protein kinaza C (PKC) i o poate transloca din citosol n membrane, fiind chiar mai activ dect calciul. Datorit activrii susinute a enzimei, se poate produce un fenomen de reglare negativ, care n final determin scderea activitii PKC. Aceast scdere a activitii a fost corelat cu deficitul de memorie i cu scderea capacitii de nvare care sunt observate la persoanele expuse cronic la plumb.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 141

2. Disfuncii ale activitii celulare n desfurare Celulele cele mai afectate sunt celulele excitabile, cum ar fi neuronii i celulele musculare din muchii scheletici, cardiac i netezi. Funciile acestor celule, ca eliberarea neuromediatorilor i contracia muscular, sunt controlate de transmitori i de modulatori care sunt sintetizai i eliberai de celulele adiacente. Substanele toxice pot perturba funcia acestor celule prin alterarea: - nivelelor de neuromediatori - funciei receptorului (legare de receptori) - procesului de transducie a semnalelor - procesului de ntrerupere a semnalului Prin acest mecanism de aciune se explic toxicitatea unor medicamente, pesticide sau toxine din bacterii, plante i animale. 3. Afectarea homeostaziei celulare 3.1. Decuplarea fosforilrii oxidative Necesarul energetic al organismului este asigurat de oxidarea glucidelor i lipidelor, cuplat cu sinteza adenozin trifosfatului (ATP) prin fosforilare oxidativ. Energia chimic este eliberat prin hidroliza ATP la ADP sau AMP. ADP este refosforilat n mitocondrie de ctre enzima ATP-sintetaz. Acest proces este cuplat cu oxidarea hidrogenului la ap, necesitnd oxigen (Fig.6.12.). n reducerea oxigenului la ap intervine un sistem de transport al electronilor, care const dintr-o serie de reacii redox. Substanele toxice care interfereaz n sinteza mitocondrial a ATP au fost mprite n patru clase: I) Substane care interfereaz n furnizarea hidrogenului ctre lanul de transport al electronilor. Un exemplu este fluoroacetatul, care se formeaz n locul acetatului n intoxicaiile cu fluoruri i care inhib ciclul acidului citric i producerea de cofactori redui. II) Substane care inhib transferul electronilor ctre oxigen de-a lungul lanului de transport, cum este cazul cianurii. III) Substane care afecteaz eliberarea oxigenului ctre citocrom oxidaz, transportorul ultim al electronilor. Toate substanele toxice care produc hipoxie acioneaz n final n acest mod. IV) Substane care inhib activitatea ATP-sintetazei sau sinteza ATP-ului la acest nivel, cum ar fi DDT-ul, pesticidele dinitrofenolice, salicilaii.

142 TOXICOLOGIE GENERAL

Substraturi Produsi GLUCOZA ACIZI GRASI O2 2H2O piruvat acizi grasi-CoA Pi ADP ATP

AP
PDH acetil-CoA CICLUL ACIDULUI CITRIC OX

NAD+

NADH + H+

H+

LTE

O24

4H+

SY

Inhibitori

II

III

IV

Fig.6.12. Fosforilarea oxidativ n mitocondrii (AP = transportorul ATP, ADP, LTE = lanul de transport al electronilor, SY = ATP sintetaza, Pi = fosfat anorganic, Ox = -oxidarea acizilor grai)

3.2. Afectarea homeostaziei calciului Ionii de calciu au un rol foarte important n funcionarea celulelor, iar nivelele i localizarea lor sunt strict controlate de procese de compartimentare i de mecanisme de transport. Diferite substane toxice pot perturba aceste mecanisme, producnd efecte duntoare grave la nivel celular. Creterea concentraiilor intracelulare ale calciului liber poate produce modificri ale citoscheletului, umflarea i n final perforarea membranei plasmatice, afectarea funciei mitocondriale i activarea unor enzime de degradare dependente de calciu (proteaze, fosfolipaze, endonucleaze). Substanele toxice pot crete concentraia intracelular a calciului fie prin favorizarea ptrunderii n celul (substane care acioneaz prin intermediul unor

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 143

receptori citosolici care cresc sinteza proteinelor), fie prin impedimentarea transportului calciului. Prin acest ultim mecanism acioneaz majoritatea compuilor chimici care induc leziuni oxidative, cum ar fi radicalii liberi, chinonele i peroxizii.

GENOTOXICITATEA Genotoxicitatea reprezint efectul substanelor toxice asupra materialului genetic. Acesta este alctuit din acizii nucleici, acidul dezoxiribonucleic (ADN) i acidul ribonucleic (ARN). ADN-ul este o macromolecul gigantic, a crei structur permite stocarea exact a unei mari cantiti de informaii. Codul genetic este compus din patru litere: dou baze azotate pirimidinice (timina i citozina) i dou baze purinice (guanina i adenina), care sunt aranjate n codoni, sau triplei, fiecare codon constnd dintr-o combinaie de trei litere. Molecula de ADN este alctuit din dou catene, bazele de pe o caten fiind legate ntre ele printr-un schelet de fosfat dezoxiriboz. Cele dou catene sunt legate prin intermediul legturilor de hidrogen stabilite ntre baze. Adenina de pe o caten este ntotdeauna legat de timina de pe catena sor, iar guanina de citozin. Molecula dublu catenar de ADN are proprietatea unic de a realiza copii identice, n prezena precursorilor, enzimelor corespunztoare i a cofactorilor. Aceasta presupune separarea celor dou catene prin ruperea legturilor de hidrogen, urmat de mperecherea unitilor de dezoxiribonucleotid trifosfat sub aciunea ADN polimerazei, n procesul de replicaie. Un alt proces n care este implicat ADN-ul este transcripia, care presupune sinteza unei molecule de ARN mesager pornind de la ADN, sub aciunea enzimei ARN polimeraz. ARN-ul mesager este monocatenar i este constituit din uracil n loc de timin, i riboz n loc de dezoxiriboz. ARN-ul mesager are rolul de a transmite informaia de la ADN la maina de sintez a proteinelor, acionnd ca o copie cu durat scurt de via a genelor exprimate. n continuare are loc translaia moleculelor de ARN mesager n polipeptide, proces care implic intervenia ARNului de transfer i a ARN-ului ribozomal. Mutageneza reprezint inducerea unor leziuni ale ADN-ului, sau a altor alterri genetice care se manifest sub forma mutaiilor. Mutaiile sunt modificri ereditare ale materialului genetic, care determin schimbri ereditare de la o celul la alta ntre celulele somatice, sau de la un organism la descendeni, atunci cnd sunt afectate celulele germinale. Mutaiile pot fi clasificate n: - 1) Mutaii genice, cnd se modific prin pierdere, deleie sau transformare, o singur pereche de baze

144 TOXICOLOGIE GENERAL

- 2) Aberaii cromozomiale, cnd se produc modificri majore ale structurii cromozomilor, sau ale numrului de cromozomi. 1) Mutaiile genice se mai numesc i mutaii punctuale, deoarece implic transformarea unei singure perechi de baze. Ele sunt invizibile n microscopia clasic i pot fi detectate doar pe baza unor modificri fenotipice. Se pot datora substituiei unor perechi de baze sau adiiei sau deleiei unor perechi de baze. a) Substituia unei perechi de baze poate fi o: - tranziie, atunci cnd o baz purinic este nlocuit cu o alt baz purinic, sau o baz pirimidinic cu o baz pirimidinic - transversie, cnd o purin este nlocuit cu o pirimidin Mutaiile punctiforme se pot produce prin trei mecanisme: Transformarea chimic a bazelor, de exemplu sub aciunea acidului azotos, care este capabil s transforme citozina n uracil sau adenina n hipoxantin (Fig.6.13.):

NH2

HNO2 N O

HN

N dezoxiriboza

dezoxiriboza

Fig.6.13. Deaminarea citidinei la uridin

ncorporarea unor analogi anormali ai bazelor. Majoritatea substanelor toxice care acioneaz n acest mod sunt din clasa citostaticelor, care i datoreaz eficiena capacitii lor de a induce mutaii letale n celulele canceroase cu diviziune rapid (Fig.6.14.). Exemple de astfel de compui sunt: 2-aminopurina, 6-mercaptopurina.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 145

C-G A-T G-C

Bu

C-G A - Bu G - Bu

G-C Bu - A Bu - A

G-C Bu - G Bu - A

C-G A-T A-T Fig.6.14. Replicarea unui acid nucleic n prezena analogului bromouracil (Analogul va forma perechi de baze att cu adenina ct i cu guanina, rezultatul fiind o tranziie G C la A T)

Aciunea agenilor alchilani. Agenii alchilani sunt substane chimice care pot introduce o grupare alchil n molecula ADN-ului. Ei conin ioni pozitivi de carboniu (ex. CH3 +), care se combin cu bazele azotate bogate n electroni din ADN. Un exemplu de reacie de alchilare cu semnificaie toxicologic este acela al dimetilnitrozaminei (Fig.6.15.).

H3C N H3C N O

H3C N HOH2C N O

- HCHO

H3C N H N O

CH3N2OH

LEGARE DE ADN

Fig.6.15. Generarea unui agent de metilare din dimetilnitrozamin

Pentru alchilare sunt disponibile mai multe poziii ale bazelor purinice i pirimidinice (Fig.6.16.), i de asemenea i gruprile fosfat din ADN pot fi alchilate.

146 TOXICOLOGIE GENERAL

NH2 1 N N 7 H N

6 O N 7

3 N Adenina

H2N

Guanina

NH2 H 3 N 3 N Citozina O 2 N

4 O CH3

O 2

Timina

Fig.6.16. Poziiile de alchilare a ADN-ului n condiii fiziologice

b) Adiia sau deleia unei baze determin modificarea grilei de lectur a codului genetic (Fig.6.17.) i are consecine mai drastice deoarece, dup locul mutaiei, fiecare triplet din ARN-ul mesager este modificat.

ACA* AAG AGU CCA

UCA

ACA AGA GUC

CAU CA

Fig.6.17. Modificarea grilei de lectur prin deleia bazei A*

1) Aberaiile cromozomiale constau n modificri majore ale cromozomilor, care pot fi detectate n microscopia clasic, prin examinarea cromozomilor n metafaz. Substanele care produc aberaii cromozomiale poart

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 147

denumirea de substane clastogene. Aceste mutaii se datoreaz unor rupturi, deleii, modificri i rearanjri ale materialului cromozomial n cursul ciclului celular, unele din ele fiind letale pentru celul. Sunt de dou tipuri: a) de tip cromatid, cnd o singur cromatid prezint aberaii, sau b) de tip cromozom, cnd ambele cromatide sunt afectate. Majoritatea agenilor chimici clastogeni produc aberaii de tip cromatid. Aberaiile numerice, care constau n modificarea numrului de cromozomi, sunt consecina diviziunii inegale a cromozomilor i conduc la formarea unor celule ce au fie mai muli, fie mai puini cromozomi dect normal. Aneuploidia const n ctigarea sau pierderea unuia sau a ctorva cromozomi i se ntlnete n unele boli genetice cum ar fi sindromul Down (mongolism), care este asociat cu trisomia cromozomului 21. Poliploidia const n prezena n celule a unui multiplu al echipamentului cromozomial complet. Substane chimice care produc poliploidie sunt colchicina, vincristinul, vinblastinul. TESTE DE MUTAGENEZA Pentru evaluarea potenialului mutagen al substanelor se folosesc teste de mutagenez. La ora actual sunt disponibile peste 100 de teste, att in vivo ct i in vitro, care se realizeaz pe diferite organisme: - teste in vitro: pe bacterii, culturi de celule de mamifere i culturi de celule umane - teste in vivo: pe Drosophila, mamifere, organisme umane Deoarece multe substane acioneaz ca mutageni numai dup bioactivare i transformare n metabolii electrofili foarte reactivi, iar multe teste de mutagenez se efectueaz in vitro, pentru mimarea metabolizrii se utilizeaz o fraciune a ficatului de obolan, S9. S9 este supernatantul obinut dup centrifugarea timp de 20 de minute la 9000g a unui omogenat de ficat de obolan i conine sistemele enzimatice implicate n metabolizarea xenobioticelor (OFMM). Deoarece enzimele de origine microzomal sunt inductibile, se prefer utilizarea unui omogenat de ficat care provine de la animale tratate n prealabil cu inductori enzimatici (bifenili policlorurai, 3-metil colantren, fenobarbital). Dup tipul de efect asupra materialului genetic pe care l evideniaz, testele de mutagenez se clasific n: A) Teste care msoar mutaiile genice 1) Teste microbiene in vitro Deoarece mutaiile de acest tip nu sunt vizibile la microscop, aceste teste se bazeaz pe utilizarea de variante biologice cu un caracter specific, sau pe

148 TOXICOLOGIE GENERAL

producerea de mutaii letale recesive. Mutaiile la nivelul unui situs specific se pot produce n 2 sensuri: n sensul direct: de la un tip slbatec la un tip mutant; mutaiile sunt puse n eviden prin rezistena lor la un agent toxic, care traduce modificarea unei enzime n sens revers: de la tipul mutant la tipul slbatec de origine. Se utilizeaz sue auxotrofe, care necesit deci un factor de cretere i care pierd aceast cerin prin mutaie, redevenind prototrofe, deci capabile s creasc pe un mediu lipsit de acest factor de cretere. Un exemplu clasic este Testul Ames, care msoar reversia mutantelor histidin-dependente de Salmonella typhimurium la tipul slbatec, histidinindependent. Se incubeaz suele mutante cu substana de testat ntr-un mediu de cultur srac n histidin, care nu permite deci dezvoltarea mutantelor. Dac substana produce mutaii reverse, se formeaz sue histidin-independente, care se pot dezvolta pe mediul srac n histidin i pe plac se observ coloniile bacteriene. 2) Teste pe celule de mamifere Se folosesc celule de limfom de oarece, limfoblati umani, celule de plmn sau ovar de hamster chinezesc. De exemplu, se pot folosi linii celulare de fibroblati de ovar de hamster chinezesc femel sau linii celulare de fibroblati de plmn de hamster chinezesc mascul. Aceste dou linii celulare au avantajul de a avea un nivel redus de mutaii spontane, iar cariotipul lor este bine definit. Celulele prezint locusul HPRT, care codific enzima hipoxantin-guanin-fosforibozil transferaza, ce intervine n fosforilarea guaninei. Celulele care vor prezenta o mutaie la nivelul locusului HPRT i vor pierde activitatea enzimatic, sau aceasta va fi redus, deci din 6-tioguanin nu se va sintetiza o nucleotid letal, iar colonia se va dezvolta. Testul const n msurarea numrului de colonii rezistente la 6tioguanin n prezena i n absena agenilor mutageni. 3) Teste microbiene in vivo 4) Teste ce utilizeaz insecte Se folosete musca Drosophila melanogaster deoarece: - este bine caracterizat din punct de vedere genetic - metabolizeaz substanele toxice asemntor cu mamiferele - timpul de producere a unei generaii este doar de 12-14 zile 5) Teste ce evideniaz mutaii genice la oareci B) Teste care detecteaz mutaiile cromozomiale 1) Teste pe insecte 2) Studii citogenetice pe celule de mamifere: pot fi teste in vitro sau teste in vivo.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 149

Teste in vitro: Se utilizeaz celule de limfom de oarece, ovar de hamster chinezesc sau limfocite umane. Substana se testeaz paralel cu doi martori pozitivi cu activitate mutagen cunoscut, unul care acioneaz direct (sulfonat de etilmetan) iar altul care acioneaz dup bioactivare (dimetilnitrozamin). Dup o perioad de incubare corespunztoare, diviziunea celular este oprit prin adugare de colchicin, celulele sunt preparate i se evalueaz anomaliile care apar la nivelul cromatidelor sau cromozomilor. Teste in vivo: Testul micronucleilor se efectueaz pe mduv hematogen de oarece i se bazeaz pe evidenierea unor formaiuni citoplasmatice rotunde, asemntoare ca form, structur i proprieti tinctoriale cu nucleul, motiv pentru care au fost denumite micronuclei. ntre formarea micronucleilor i aberaiile cromozomiale exist o strns legtur, deoarece ei pot lua natere fie din fragmente cromozomiale acentrice, care n anafaz nu se mai pot deplasa spre nucleii n formare, fie din cromozomi ntregi, care nu mai sunt inclui n nucleii fii datorit retardrii anafazice produse prin lezionarea aparatului mitotic. 3) Testul letalitii dominante la roztoare Evideniaz efectele toxice asupra celulelor germinale ale masculilor sntoi (oareci sau obolani). Efectele se pot manifesta sub forma unor implantaii care nu sunt viabile, sau sub forma pierderii pre-implantaiilor la femelele fecundate de masculii tratai. C) Teste care detecteaz repararea i recombinarea ADN-ului 1) Sinteza neprogramat a ADN-ului Indic o reparare a ADN-ului care este definit prin cantitatea de timidin radioactiv ncorporat per unitatea de greutate de ADN, n raport cu valorile determinate la martori. 2) Schimbul ntre cromatidele surori Msoar schimbul reciproc de ADN ntre dou cromatide surori ale unui cromozom n timpul duplicaiei. Celulele sunt marcate cu 5-BRDU (5-bromodezoxi-uridin). Dup dou cicluri de replicare, celulele sunt colorate i se analizeaz i compar frecvena schimburilor per celul i per cromozom. Celulele folosite pot fi limfom de oarece, ovar de hamster chinezesc, limfocite umane. Nici unul din testele cunoscute nu prezint fiabilitate total, nefiind capabil s detecteze toate tipurile de mutaii. De aceea, se prefer utilizarea mai multor teste din categorii diferite, care sunt grupate n baterii de teste. Testele de mutagenez sunt mprite n 3 niveluri:

150 TOXICOLOGIE GENERAL

Nivelul unu 1) un test de mutaie genic la Salmonella/ microzomi (Ames + activare) 2) un test de mutaie genic pe celule de mamifere 3) un test care evideniaz rupturi cromozomiale pe celule de mamifere (testul micronucleilor) Dac toate testele sunt negative, se presupune absena potenialului mutagen la mamifere. Nivelul doi: se realizeaz dac este pozitiv un singur test din nivelul 1, cu ajutorul testului mutaiei letale la Drosophila Nivelul trei: pentru evaluarea aprofundat a compuilor care ridic semne de ntrebare: Testul locusului specific (test de mutaie genic la oarece) pentru produii care posed potenial mutagen pe celule germinale de mamifere Testul letalitii dominante pentru produii cu efecte cromozomiale.

CARCINOGENEZA CHIMIC Carcinogeneza este un proces n mai multe etape care se produce prin mai multe mecanisme incomplet elucidate i care conduce la apariia cancerului, un tip special de leziune a bolii denumite neoplazie. Neoplazia, sau leziunea sa constitutiv neoplasmul sau tumoarea, reprezint o cretere anormal a unui esut, care este ereditar i relativ autonom. Prin definiie, neoplazia nu poate s apar dect n organismele multicelulare, iar caracterul ereditar se poate manifesta la nivelul celulelor somatice, de la o celul la alta, sau la nivelul celulelor germinale, de la un organism la altul. Neoplasmele se clasific n: - Neoplasme benigne, care sunt clar delimitate, adesea ncapsulate, bine difereniate i neinvazive. Creterea lor este relativ sczut, modificarea organizrii celulare este redus i nu formeaz metastaze. - Neoplasme maligne, care sunt mai puin bine definite i de obicei mai puin ncapsulate. Ele sunt relativ nedifereniate, creterea lor este rapid i sunt invazive, formnd n final metastaze. Metastaza reprezint diseminarea sau creterea secundar a neoplasmului la distan de tumoarea primar. Cancerele sunt neoplasme maligne. Nomenclatura neoplasmelor depinde de caracterul benign sau malign al neoplasmului, iar n ultimul caz de tipul de esut, epitelial sau mezenchimal, din care acestea deriv. De exemplu:

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 151

- pentru neoplasmele benigne, denumirea se formeaz din denumirea esutului de origine + sufixul om: fibrom, lipom, iar pentru neoplasmele de origine glandular + prefixul adenom: adenom hepatocelular, adenom pituitar. - pentru neoplasmele maligne o A) derivate din esutul mezenchimal, denumirea se formeaz din denumirea esutului descriptor + sufixul sarcom: fibrosarcom, osteosarcom o B) derivate din esutul epitelial, denumirea se formeaz din cea a esutului descriptor + carcinom: carcinom hepatocelular, adenocarcinom gastric. Carcinogeneza chimic reprezint inducerea sau creterea frecvenei leziunilor neoplazice sub aciunea compuilor chimici, iar carcinogenul este un agent care induce neoplazie.

PATOGENEZA CANCERULUI Carcinogeneza este un proces n mai multe etape, care este influenat n mare msur de variabile cum ar fi vrsta, dieta, balana hormonal, specia animal i rasa. S-a constatat de asemenea c exist o anumit predispoziie genetic pentru anumite tipuri de cancere, ceea ce sugereaz faptul c neoplazia ar rezulta dintr-o mutaie recesiv ereditar a ADN-ului. Procesul carcinogenic poate fi divizat n dou secvene (Fig.6.18.) i anume transformarea neoplazic i dezvoltarea neoplazic. Prima secven de evenimente a fost denumit iniiere. 1. Iniierea este prima etap a unui proces carcinogen i const n transformarea unei celule normale ntr-o celul iniiat prin apariia unor defecte genetice. Defectele genetice constau n mutaii de tipul mperecherii defectuoase a bazelor, deleiilor sau translocaiilor, i se produc n urma aciunii carcinogenului genotoxic, sau iniiator, asupra moleculei de ADN. Celula rezultat, n care carcinogenul a indus o mutaie, poate evolua n mai multe direcii (Fig.6.19.): - a) repararea ADN-ului, cnd legtura covalent cu iniiatorul este distrus i populaia celular rmne normal - b) eliminarea celulelor modificate prin procesul de apoptoz - c) legtura covalent se pstreaz, dar la nivelul unor locuri de legare n ADN care nu sunt importante pentru iniierea unei tumori - d) celula iniiat intr ntr-un proces de replicare i mutaia este fixat

152 TOXICOLOGIE GENERAL

Secventele carcinogenezei
Transformarea neoplazica
celula normala Initiere modificari ale ADN aducti cu ADN efecte epigenetice replicarea celulei

Dezvoltarea neoplazica
celula neoplazica Promovare expansiune clonala replicarea celulelor

celula preneoplazica

neoplasm benign

Transformare modificare genetica

activarea oncogenelor inactivarea genelor supresoare de tumori replicarea celulelor reducerea apoptozei

Progresie modificare genetica heterogenitate

replicarea celulelor reducerea apoptozei neoangiogeneza

celula neoplazica

neoplasm malign

Fig.6.18. Secvenele carcinogenezei

Dei numrul de gene din ADN este foarte mare, doar un numr redus de gene celulare reprezint inte ale modificrilor genetice ce pot iniia transformarea neoplazic. Acestea sunt proto-oncogenele i genele supresoare de tumori. Mutaia proto-oncogenelor. Proto-oncogenele sunt gene care codific proteine cu rol n stimularea progresiei celulare n cursul ciclului celular. Produii codificai sunt: - 1) factori de cretere - 2) receptori ai factorilor de cretere - 3) transductori ai semnalelor intracelulare, cum ar fi proteinele G i protein kinazele - 4) factori de transcripie nuclear. Creteri tranzitorii ale activitii proteinelor codificate de proto-oncogene sunt necesare pentru reglarea creterii n cursul embriogenezei sau a regenerrii tisulare. Gena mutant rezultat n urma aciunii carcinogenului poart denumirea de oncogen i codific o protein mutant, care prezint o cretere a activitii ce poate iniia transformarea neoplazic a celulei. Mutaii ale genelor supresoare de tumori. Genele supresoare de tumori codific proteine care inhib progresia celulelor n cursul diviziunii celulare. Gena

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 153

mutant codific o protein inactiv, care nu mai poate suprima diviziunea celular i n acest caz apare o proliferare necontrolat a celulelor. Cea mai cunoscut gen supresoare de tumori este gena p53, care codific o protein cu masa molecular de 53000 daltoni. Aceast protein poate opri diviziunea celular in faza G1 permind repararea ADN-ului i de asemenea promoveaz apoptoza, mpiedicnd acumularea de erori genetice i procesul care duce la transformarea neoplazic.

CA RC IN O G E N G E N O T O XIC
S U P R A V I E T U I R E A C E L U L E I

lez a r ea A D N rep a ra r e rep lica r ea A D N rep a ra r e M u ta tie silen tio a sa

M O A R T E A C E L U L E I

A ctiv a re a p ro te in elo r o n c o g e n e

In a ctiv a rea p r o te in e lo r su p re so a r e d e tu m o ri

T R A N SF O R M A R E A N E O P L A ZIC A A C E LU L E I

e xp a n s iu n e c lo n a la TUM O ARE

Fig.6.19. Procesul carcinogenezei

Acumularea de leziuni genetice sub forma proto-oncogenelor mutante (care codific proteine activate) i a genelor supresoare de tumori mutante (care codific proteine inactive) este principala cauz a transformrii celulelor normale, cu o proliferare controlat, n celule maligne, cu o proliferare necontrolat. Deoarece

154 TOXICOLOGIE GENERAL

numrul de celule din esut este controlat de balana dintre mitoz i apoptoz, proliferarea necontrolat rezult din perturbarea acestei balane (Fig.6.20.).
SUBSTANTA TOXICA formarea de aducti esecul repararii replicare transcriptie PROTEINA PROTOONCOGENA
(activata de semnal)

reparare gresita
PROTOONCOGENA

transcriptie PROTEINA translatie ONCOGENA


(activata permanent)

translatie

MUTATIE

ONCOGENA

+ APOPTOZA MITOZA PROLIFERARE CONTROLATA PROLIFERARE NECONTROLATA APOPTOZA

+ + +
MITOZA

PROTEINA SUPRESOARE DE TUMORI


(activa)

translatie

GENA SUPRESOARE DE TUMORI

MUTATIE reparare gresita replicare esecul repararii

GENA SUPRESOARE DE TUMORI MUTANTA

transcriptie

PROTEINA SUPRESOARE DE TUMORI translatie MUTANTA (inactiva) transcriptie

formarea de aducti SUBSTANTA TOXICA

Fig.6.20. Cooperarea ntre o proto-oncogen i o gen supresoare de tumori nainte i dup mutaie

Modificrile produse de iniiator pot fi latente sptmni sau luni i sunt considerate ireversibile. O celul care a suferit o modificare ireversibil, ce i permite transformarea neoplazic, poate fi imposibil de distins din punct de vedere fenotipic de celulele parenchimului normal adiacent. Se crede c majoritatea neoplasmelor deriv din proliferarea clonal a unei singure celule iniiate. La un anumit moment n expansiunea clonal precoce, celulele devin diferite din punct de vedere fenotipic de celulele parenchimului normal nconjurtor. Dei astfel de

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 155

leziuni nu au nc suficiente caracteristici pentru a fi calificate drept neoplasme, ele sunt considerate drept celule pre-neoplazice. 2. Promovarea este etapa procesului carcinogen n care are loc selecia i expansiunea clonal a celulelor iniiate, fiind posibil formarea unui neoplasm. Expansiunea clonal este consecina creterii proliferrii sau a reducerii morii celulare programate prin apoptoz. O dat cu creterea proliferrii se produc modificri progresive ale comportamentului biologic al neoplasmului (Fig.6.21.). Procesul are un grad crescut de reversibilitate, o celul iniiat trebuind s fie expus mai mult sau mai puin regulat la un promotor pentru a continua s se multiplice.

Tesut normal

Celula initiata

RASPUNS REGENERATIV

Proliferare Moarte celulara Toxicitate

Hiperplazie stationara

Tumoare benigna

Fig.6.21. Conceptul promovrii tumorale

3. Progresia este ultima faz a procesului carcinogen, n care expansiunea clonal a celulelor iniiate crete probabilitatea apariiei unor modificri genetice suplimentare care sunt necesare pentru progresia ctre cancer. Aceast acumulare de leziuni genetice este corelat cu modificri morfologice distincte, care progreseaz de la leziuni pre-neoplazice la leziuni pre-maligne i apoi maligne. esuturile sntoase pot fi invadate, aprnd metastaze. Ca i iniierea, progresia este un proces ireversibil.

156 TOXICOLOGIE GENERAL

CARCINOGENE CHIMICE Dup mecanismul lor de aciune, carcinogenele se clasific n: carcinogene genotoxice, care reacioneaz cu ADN-ul formnd aduci ce pot iniia transformarea neoplazic carcinogene epigenetice, care nu au reactivitate chimic i nu pot forma aduci cu ADN-ul, dar induc n celulele esutului int modificri care conduc indirect la transformarea neoplazic sau favorizeaz dezvoltarea tumorilor din celulele modificate genetic. 1. Carcinogenele genotoxice posed grupri electrofile reactive n molecul, sau pot fi biotransformate la metabolii electrofili. Au fost astfel identificate o serie de grupri responsabile de aciunea genotoxic, sau grupri toxofore (Fig.6.22.-6.23.), care au permis realizarea de studii de relaie structuractivitate i elaborarea unor programe informatice pentru prevederea carcinogenitii noilor compui. Marea majoritate a carcinogenelor genotoxice sunt substane organice de sintez sau substane naturale i, n funcie de necesitatea sau nu a bioactivrii, sunt subclasificate n carcinogene primare, sau cu aciune direct, i n pro-carcinogene.

Electrofili

H R R C H Ion carboniu 1 R N H Ion nitreniu 2 Ion diazoniu 3 Ion aziridiniu 4 Ion episulfoniu 5 R N N OH N R S R

Fig.6.22. Structuri electrofile ce pot reaciona cu ADN

1.1. Carcinogenele primare sunt substane electrofile, care se pot lega direct de ADN sau de alte molecule. Exemple de astfel de substane sunt epoxizii, cum ar fi oxidul de etilen, lactonele, clorambucilul. Datorit reactivitii lor deosebite, aceste molecule sunt adesea mai active in vitro dect in vivo.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 157


Precursori 1 CH3 O O P CH2 alchil esteri ai acidului fosfonic NO2 6 CH2 7 NO2 CH2 1 N(CH2CH2Cl)2 Cl grupari nitro aromatice 11 N N grupari nitro alifatice CH2 N 2 CH2 Carbamati 3 CH2 H2 C 1 CH2 alchil N-nitrozamine grupari azo aromatice O 12 N H3C N CH3 2 O S O N-oxizi aromatici 5 Br 1,2-dibromalcani grupari mono si dialchilamino aromatice 2 CH2 NH N CH3 derivati aziridinil aromatici si alifatici CH3 O CH2 4 NH Br HC X = H, F, Cl, Br, I metani halogenati CH -propiosultone epoxizi de arene O CH 1 CH2 O O -propiolactone 1 1 O N N O CH3 CH2 1 H2N O C O O O 1 CH3 O S CH2 alchil esteri ai acidului sulfonic O NH 2 CH2OH 1 CH2Cl

derivati N-(hidroximetil) halogenuri de alchil aromatice si alifatice substituite

N-cloramine

epoxizi ai alchenelor C(X)4 1

HC

alchil hidrazine

Fig.6.23. Structurile unor precursori ai gruprilor electrofile

158 TOXICOLOGIE GENERAL

1.2. Pro-carcinogenele sunt substanele care necesit o bioactivare pentru a deveni carcinogene finale. Din aceast clas fac parte majoritatea carcinogenelor cunoscute: hidrocarburi aromatice polinucleare (benzpiren), amine aromatice (benzidina), halogenuri alifatice (clorura de vinil), nitroderivai aromatici (1-nitropiren), azocolorani (dimetilaminoazobenzen), nitrozamine (dimetil-nitrozamina), micotoxine (aflatoxina B1), toxine din plante (alcaloizii pirolizidinici, cycasin), medicamente (ciclofosfamid, tamoxifen). Ele pot fi iniiatori puri sau substane genotoxice complete, ce acioneaz att ca iniiatori ct i ca promotori (ex. 2-acetilaminofluorenul). 1.3. Carcinogenele anorganice includ unele metale: crom, nichel, cadmiu, cobalt, i nemetale ca arsenul. Mecanismul lor de aciune nu este complet elucidat, ele avnd att proprieti genotoxice ct i epigenetice. Astfel, se presupune c metalele pot induce leziuni oxidative ale ADN, fie prin generarea de specii reactive de oxigen n reacii de tip Fenton, fie prin inactivarea enzimelor implicate n aprarea celulelor mpotriva speciilor reactive de oxigen. De asemenea, metalele pot aciona prin mecanism epigenetic deoarece mpiedic repararea ADN-ului, pot inactiva transcripia anumitor gene, au efecte imunosupresoare sau pot inactiva proteine supresoare de tumori, cum este proteina p53. Prin acest ultim mecanism se poate explica parial carcinogenitatea cadmiului care, avnd similitudine chimic cu zincul, l poate nlocui n anumite procese. Legarea zincului este crucial pentru stabilizarea proteinei p53 n forma slbatec activ. n prezena cadmiului este perturbat conformaia proteinei, care este astfel inactivat (Fig.6.24.). 2. Carcinogenele epigenetice fac parte n general din clasa pesticidelor sintetice, a aditivilor alimentari i a medicamentelor i nu prezint structurile moleculare care sunt necesare pentru a forma electrofili, neavnd reactivitate fa de ADN. Structurile lor sunt foarte diferite, ceea ce face dificil stabilirea unor relaii structur-activitate, i de obicei necesit bioactivare metabolic. Efectele unui anumit compus sunt de obicei limitate la un organ sau la o anume specie. Ele produc cancer prin promovarea carcinogenezei iniiate de carcinogenele genotoxice sau de leziunile spontane ale ADN-ului. Mecanismele prin care acioneaz (Fig.6.25.) sunt diverse i includ: - inhibarea comunicrii intercelulare - inhibarea polimerizrii tubulinei - inhibarea apoptozei - inducerea proliferrii celulare n concluzie, carcinogenele epigenetice par s acioneze prin stimularea diviziunii celulare i/sau blocarea apoptozei.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 159

Supresor activ
1620

C N - Oxidare - Cadmiu - Chelatare - Deficienta de Zn

- Reducere - Zn 240

Pierderea activitatii supresoare


Fig.6.24. Inactivarea proteinei supresoare de tumori p53 de ctre cadmiu

Carcinogenele epigenetice pot fi clasificate n mai multe grupe: 2.1. Promotorii sunt substane care poteneaz efectul iniiatorilor la administrare simultan sau ulterioar, dup luni sau chiar ani de zile de la expunere. Ei pot favoriza producerea de tumori la nivelul: - ficatului: clordan, DDT, pentaclorofenol, fenobarbital, bifenilii polibromurai, bifenilii policlorurai - rinichiului: acidul nitriloacetic - vezicii: zaharina - stomacului: butil hidroxianisolul 2.2. Modulatorii endocrini pot fi: - hormoni estrogeni: 17-estradiol, 4-hidroxi-estradiol - agoniti estrogeni: 17-etinil estradiol, dietilstilbestrol - inductori ai prolactinei - antiandrogeni: finasterid, vinclozolin - inhibitori ai tiroperoxidazei: sulfametazina

160 TOXICOLOGIE GENERAL

- inductori ai conjugrii hormonilor tiroidieni: fenobarbital - antagoniti ai receptorilor H2: lansoprazol, omeprazol, pantoprazol

CARCINOGEN EPIGENETIC
S U P R A V I E T U I R E A C E L U L E I

Leziuni spontane ale ADN reparare replicarea ADN reparare Mutatie silentioasa

M O A R T E A C E L U L E I

Activarea proteinelor oncogene

Inactivarea proteinelor supresoare de tumori

TRANSFORMAREA NEOPLAZICA A CELULEI

expansiune clonala TUMOARE

Fig.6.25. Promovarea carcinogenezei de ctre carcinogenele epigenetice

2.3. Imunosupresoare: ciclosporina, analogi purinici 2.4. Citotoxine la nivelul ficatului, rinichiului, vezicii la obolani, care favorizeaz apariia de tumori cu localizare specific la anumite specii de roztoare. 2.5. Carcinogenele n stare solid cum sunt implantele de materiale plastice, metale, sticl, determin de obicei tumori de origine mezenchimatoas printrun mecanism de aciune insuficient cunoscut.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 161

2.6. Proliferatorii de peroxizomi constituie o familie de hepatocarcinogene negenotoxice active la oarece, care includ: - medicamente hipolipemiante: clofibrat, ciprofibrat, benzafibrat, gemfibrozil - plastifiani ca ftalatul de dietilhexil Aceste substane induc n ficatul de oarece o cretere marcat a numrului de peroxizomi, nsoit de inducerea proliferrii celulare, cu mrirea ficatului i suprimarea apoptozei hepatocitelor. Efectele sunt mediate prin intermediul unui receptor, identificat n 1990, receptorul proliferator de peroxizomi alfa (PPAR). Dei acest receptor a fost identificat att la om ct i la oarece, la om nu se observ proliferarea peroxizomilor i efect hepatocarcinogen dup administrarea hipolipemiantelor. Aceast diferen de reactivitate ntre specii poate fi explicat prin variaia cantitativ a receptorului i printr-o diferen de secven n regiunea promotoare a genelor responsabile de efectul la roztoare.

TERATOGENEZA Teratogeneza nseamn n traducere literar producerea de organisme monstruoase i provine din limba greac, de la teras sau teratos, care semnific monstru sau minune. n diferite culturi din antichitate, apariia copiilor neobinuii sau diformi a fost atribuit unor cauze cum ar fi hibridizarea dintre oameni i zei sau dintre oameni i demoni. Definiia modern a teratogenezei este fenomenul de apariie a defectelor de natur structural, iar tiina care studiaz aceste defecte este teratologia, termen introdus n 1832 de ctre Geoffroy St. Hilaire. Efectele teratogene se ncadreaz n toxicitatea dezvoltrii, care include efectele adverse induse nainte de atingerea vrstei adulte, adic cele care se manifest n perioada embrionar i fetal, dar i dup natere. Toxicitatea reproducerii reprezint efectele adverse ale diferiilor ageni asupra progeniturii i/sau afectarea funciilor reproductive la masculi i la femele. Se accept la ora actual c aproximativ 2-4% din nou-nscui prezint un defect la natere. Aceast cifr poate crete n lunile de dup natere, cnd devin evidente tulburrile la nivelul organelor interne sau sistemului nervos central. Mai puin de 1% din aceste defecte pot fi atribuite consumului de medicamente, restul de 99% datorndu-se unor condiii materne cum ar fi diabetul, infeciile, abuzul de alcool (9%), unor cauze genetice clare (20-25%), n timp ce 65% sunt de origine necunoscut. Pentru ca o substan chimic s fie considerat teratogen, ea trebuie s creasc semnificativ incidena anomaliilor (fie structurale, fie funcionale) n rndul descendenilor, dup ce a fost administrat la unul din prini nainte de concepie, femelei n timpul sarcinei, sau direct ftului n dezvoltare. Efectul advers

162 TOXICOLOGIE GENERAL

trebuie s se produc la doze care nu induc toxicitate sever la mam. Compuii care conduc la moartea embrionului sunt considerai mai degrab embriotoxici dect teratogeni. Teratologia i toxicologia dezvoltrii au cunoscut o evoluie exploziv dup incidentul talidomidei. La nceputul anilor 1960, n lumea ntreag s-au nscut mai mult de 10.000 de copii cu defecte grave la natere, i n special cu tip foarte rar de malformaie a membrelor. Indivizii afectai prezentau amelie (absena membrelor) i focomelie (reducerea lungimii oaselor membrelor), braele fiind afectate mai frecvent dect picioarele i fiind atinse att partea dreapt ct i cea stng, n msur diferit. Alte defecte observate au fost: afeciuni cardiace congenitale, anomalii oculare, intestinale i renale, malformaii ale urechii externe. Studiile epidemiologice efectuate au identificat n 1961 agentul etiologic, i anume talidomida, un sedativ-hipnotic introdus n Germania n 1956. Pentru c studiile experimentale pe specii de roztoare i testarea clinic evideniaser lipsa unor efecte adverse i un indice terapeutic mare (doza terapeutic 100-200 mg/zi, iar doza toxic de ordinul gramelor), medicamentul a fost utilizat pe scar larg de femeile nsrcinate deoarece, n afara faptului c avea efect hipnotic, era eficient i n combaterea senzaiei de grea matinal. Acest incident a fost posibil pentru c talidomida are o aciune teratogen care este dependent de specie, respectiv este teratogen la om, la primate i la iepuri i nu prezint acest efect la roztoarele care fuseser folosite pentru testare, oarecii i obolanii. n ciuda interesului suscitat de talidomid, mecanismul de producere a efectelor teratogene nu a fost elucidat complet nici pn n prezent. Se presupune mai nou c n acest mecanism ar putea fi implicai produii de hidroliz ai talidomidei, respectiv acidul ftalimidoglutaramic, care s-ar putea intercala n molecula de ADN la nivelul situsurilor bogate n guanin. Stabilirea mecanismului de aciune prezint interes datorit potenialului interesant al substanei n tratamentul eritemului nodular lepros, rejeciei grefelor, scderii ponderale n tuberculoz, replicrii virusului HIV, cancerului. Tipuri de dezvoltare anormal Exist patru manifestri ale dezvoltrii anormale: - moartea - malformaia - retardarea creterii - anomalia funcional Defectele structurale, sau malformaii congenitale, sunt considerate de obicei principalul criteriu de estimare a riscului teratogen, deoarece sunt mai evidente. Totui, anomaliile funcionale pot fi la fel de incapacitante i prezint o rat de mortalitate la fel de mare ca i anomaliile morfologice. Defectele funcionale sunt mai greu de corelat cu un anumit agent etiologic, deoarece ntre

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 163

momentul expunerii i detectarea patologiei funcionale se pot interpune diferii factori care pot masca agentul cauzator. De multe ori ns, unii teratogeni comportamentali au putut fi identificai deoarece efectele comportamentale nsoesc alte malformaii congenitale. De exemplu, printre copiii cu retardare a creterii, la 33-50% exist riscul de apariie a unor deficiene de nvare, iar la 26-61% din copiii cu retardare mental au fost asociate anomalii congenitale. Printre teratogenii care induc anomalii comportamentale se numr alcoolul, metilmercurul i plumbul. Perioadele critice pentru aciunea agenilor teratogeni Dezvoltarea organismului uman este un ciclu care dureaz ntreaga via. Etapele acestei dezvoltri sunt: 1) Gametogeneza care este procesul de formare a celulelor germinaleovulul i sperma. 2) Fertilizarea const din fuziunea gameilor pentru a forma un zigot diploid Expunerea la unele substane chimice cum ar fi oxidul de etilen, etilnitrozoureea, pe o perioad scurt de timp (6 ore) imediat dup fertilizare, a condus la formarea unor fetui malformai. 3) Preimplantarea implic n principal creterea numrului de celule printro serie rapid de diviziuni celulare, formndu-se blastocitul. Se consider c expunerea n timpul preimplantrii are efecte reduse sau nule asupra creterii sau poate produce moartea. Tratamentul cu unele substane n aceast perioad poate conduce ns la malformaii fetale, cum este cazul metilnitrozureei. 4) Gastrularea urmeaz dup implantarea blastocitului n peretele uterin i const n formarea celor trei straturi germinale: ectoderm, mezoderm i endoderm. Aceast perioad este un preludiu al organogenezei i este susceptibil la aciunea teratogenilor. Malformaiile care apar dup expunerea la unii compui pot fi localizate la nivelul ochiului, creierului i feei. 5) Organogeneza este perioada n care se formeaz rudimente ale principalelor structuri din organism i dureaz aproximativ ntre sptmnile a treia i a opta de gestaie. Este perioada de maxim susceptibilitate la producerea de malformaii. 6) Perioada fetal (din ziua 56 pn la natere) se caracterizeaz prin diferenierea esuturilor, cretere i maturare fiziologic. Expunerea n aceast perioad determin cel mai probabil efecte asupra creterii i maturrii funcionale. Rezultatele cele mai probabile sunt anomaliile la nivelul SNC i a organelor reproductive, incluznd deficiene comportamentale, motorii, mentale i scderea fertilitii.

164 TOXICOLOGIE GENERAL

La om, perioada cea mai sensibil la aciunea substanelor teratogene este situat ntre sptmna a treia i luna a treia de gestaie. Dependent de momentul precis al expunerii, pot s apar malformaii cu anumite localizri, corelate cu stadiul de dezvoltare a organului afectat (Fig.6.26.).

Maturarea functionala Histogeneza Organogeneza

Sistemul nervos central Inima Urechea Ochii Membrele

Palatul Organele genitale saptamani 5 6

12-16

20-38

Implantare Moarte prenatala

Perioada embrionara Anomalii morfologice majore

Perioada fetala Defecte fiziologice si functionale

Fig.6.26. Secvena evenimentelor n dezvoltarea intrauterin la om i perioadele sensibile pentru defectele congenitate (regiunile haurate)

Mecanismele de iniiere a dezvoltrii anormale sunt: mutaiile, anomaliile cromozomiale, interferena n procesul mitotic, interferena n funcia acizilor nucleici, deficienele nutriionale, deficienele energetice, modificrile osmolaritii sau modificrile la nivelul membranei, inhibiia enzimatic.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 165

Substane teratogene la om Principale substane teratogene la om sunt medicamentele, dar i alte droguri sau compui din mediu. Clasele recunoscute sunt: - anticonvulsivante: hidantoine (fenitoin), primidon, dione (trimetadona), acidul valproic, carbamazepina - citostatice: ageni alchilani (busulfan, ciclofosfamid, clorambucil, mecloretamin), antimetabolii (aminopterin, metotrexat, citarabin) - hormoni androgeni: danazol - antitiroidiene: propiltiouracil - antibiotice aminoglicozidice: streptomicin - anticoagulante cumarinice: warfarina - acizi retinoici: izotretinoin - inhibitori ai enzimei de conversie a angiotensinei: captopril - tetracicline - alte medicamente: dietilstilbestrol, talidomid, penicilamin, litiu - alte substane: etanol, cocain, mercurul organic

IMUNOTOXICITATEA Imunotoxicologia este o ramur a toxicologiei care studiaz efectele adverse ce rezult din interaciunea sistemului imunitar cu xenobioticele. Imunotoxicitatea este consecina aciunii directe sau indirecte a unui agent chimic sau fizic asupra sistemului imunitar. Funcia i componentele sistemului imunitar Sistemul imunitar are rolul de a proteja organismul mpotriva infeciilor, a proteinelor strine de organism sau a celulelor neoplazice. El este alctuit din organele limfoide i celulele specializate. Organele limfoide primare: sunt mduva osoas i timusul i au rolul de a favoriza transformarea celulelor precursoare (stem) n celulele efectoare mature. secundare: sunt nodulii limfatici, splina i esutul limfoid asociat mucoasei, care formeaz uniti imunoreactive ce rspund la ptrunderea antigenilor. Celulele specializate sunt: Limfocitele T - sunt generate n timus din celule precursoare care au migrat din mduva osoas. Acestea reprezint aproximativ 80% din limfocitele din snge i 60% din limfocitele din esutul limfoid periferic i au rolul de a activa limfocitele B i macrofagele i de a recunoate antigenul legat de complexul major de histocompatibilitate. O populaie de limfocite T a fost

166 TOXICOLOGIE GENERAL

implicat n combaterea celulelor infectate cu virusuri, printr-un mecanism citotoxic direct. Limfocitele B sunt generate de celulele precursoare din mduva osoas i sunt capabile s sintetizeze i s secrete anticorpi (imunoglobuline) care sunt de mai multe tipuri: IgM, IgA, IgD, IgG i IgE. IgM i majoritatea subclaselor de IgG activeaz complementul dup legarea de antigen. Dac acest complex antigen-anticorp este fixat pe suprafaa unei celule strine, cum este un bacil gram-negativ, activarea va produce liza i moartea celulei. Anticorpii IgE se pot lega de receptori specifici de pe suprafaa mastocitelor i a bazofilelor. Deoarece terminaia moleculei de IgE care permite legarea antigenului rmne disponibil, n momentul n care acesta se cupleaz cu anticorpul are loc eliberarea unor mediatori farmacologici cum ar fi histamina. Rolul major al IgE nu const n protejarea imunitar, ci n acela de mediator al reaciei de hipersensibilitate imediat sau anafilaxie. Celulele ucigae naturale (NK = natural killer) sunt limfocite granulare mari, care nu conin imunoglobuline i care sunt capabile s lezeze anumite celule int. Una din funciile lor este aprarea mpotriva infeciilor virale i de asemenea pot secreta diferite limfokine, printre care interferonul. Macrofagele sunt celule mononucleare fagocitare cu origine comun. Sursa principal este esutul hematopoetic din mduva osoas. n afar de fagocitarea particulelor i a eritrocitelor uzate, mai au i funcia de prezentare a antigenilor. Celulele dendritice sunt celule fr rol fagocitar, care se gsesc n esuturile limfoide i n esutul interstiial al unor organe ne-limfoide, cum ar fi epiteliul. Ele au printre altele rol n proliferarea limfocitelor indus de antigeni i n prezentarea antigenilor limfocitelor B. Alte componente ale sistemului imunitar sunt: Citokinele, care sunt mediatori ai sistemului imunitar i sunt produse de celulele sistemului imunitar, dar i de celulele din mediul adiacent sistemului imunitar. Ele au rol n meninerea funciei imunitare normale i n controlarea rspunsului imun la antigeni. Complementul este alctuit din proteine secretate n snge i n limf, care particip n reaciile ce mediaz liza celulelor strine. Procesul de liz determin producerea de componente active biologic, care induc migrarea limfocitelor i un rspuns inflamator. Efectele substanelor toxice asupra sistemului imunitar Substanele imunotoxice pot produce dou tipuri de efecte (Fig.6.27.): Imunosupresia, care const n deprimarea sau inhibarea funciei sistemului imunitar i care poate conduce la o cretere a susceptibilitii la apariia tumorilor sau a bolilor infecioase.

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 167

Stimularea rspunsului imun, care poate conduce la hipersensibilitate sau la autoimunitate.

Interactiune cu imunizarea profilactica

Cresterea sensibilitatii la infectii

Cresterea incidentei tumorilor

interactiune cu raspunsurile imune

pierderea supravegherii imunitare

efecte endocrine

stres

imunosupresie

expunere la xenobiotice

interactiune cu macromoleculele (direct sau dupa bioactivare)

disfunctii imunitare lezare tisulara

conjugati ai haptenelor

modificari ale proteinelor din organism reactii autoimune

raspuns imun impotriva proteinelor normale

reactii imune (de tip I, II, III, IV)

activarea complementului

hipersensibilitate dupa expunerea repetata la substanta toxica

leziune tisulara

Fig.6.27.Interaciunea substanelor imunotoxice cu sistemul imunitar

IMUNOSUPRESIA Unele medicamente sau alte xenobiotice pot inhiba funcia sistemului imunitar, proprietate care a fost utilizat n clinic pentru a nltura respingerea grefelor sau a transplantelor de organe. Acest efect este ns considerat toxic,

168 TOXICOLOGIE GENERAL

deoarece crete susceptibilitatea la infecii, reduce eficacitatea imunizrii prin vaccinuri, favorizeaz dezvoltarea neoplaziei i diseminarea cancerelor i poate chiar facilita apariia bolilor autoimune. Exist probabil mai multe mecanisme prin care se produce imunosupresia, dar este implicat cu certitudine lezarea organelor limfoide primare sau secundare, mpiedicndu-se sinteza sau maturarea celulelor sistemului imunitar. Substane imunosupresoare pot fi: Medicamente antineoplazice ageni alchilani, cum ar fi ciclofosfamida. Acestea acioneaz asupra esuturilor cu capacitate crescut de proliferare, cum ar fi mduva osoas i esutul limfoid. Hidrocarburi: hidrocarburi aromatice policiclice, hidrocarburi aromatice halogenate (bifenili policlorurai, bifenili polibromurai, dioxina) Metale grele, compui organometalici: plumb, arsen, mercur, cadmiu, compui organostanici Pesticide: DDT, dieldrin, carbaryl, carbofuran, clordan, maneb Substane ce ptrund pe cale inhalatorie: uretan, fumul de igar, azbestul, iritanii pulmonari, gazele oxidante (O3 , SO2, NO2) Solveni organici i substane nrudite: benzen, nitrotolueni monosubstituii Medicamente: imunosupresoarele corticosteroizi, azatioprin, rapamicina, etc.; medicamentele utilizate n tratamentul SIDA zidovudina (AZT), zalcitabina, stavudina Droguri: canabinoide, cocaina, heroina, morfina, alcoolul Siliconii STIMULAREA RSPUNSULUI IMUN Acest tip de rspuns la un xenobiotic este adesea denumit i reacie alergic sau reacie de hipersensibilitate. Rspunsul poate s apar la nivelul unor organe diferite i poate s fie minor (prurit cutanat), sau fatal (ocul anafilactic). Rspunsul imunotoxic are la baz o reactivitate specific modificat a organismului. Substana toxic trebuie s fie recunoscut de limfocitele cu competen imunologic a fi strin de organism, adic antigen. Antigenii sunt n general molecule mari, cu mas peste 1000-3000 daltoni. i molecule mai mici, cu molecule sub 1000 Da, pot induce un rspuns imun, cu condiia s se lege covalent de proteine cu mas molecular mare (peste 50.000 Da). Aceste xenobiotice poart denumirea de haptene. Aducii cu proteinele se pot forma prin dou modaliti: reacia direct a xenobioticului cu proteina sau formarea iniial a unor metabolii electrofili, care pot reaciona cu gruprile nucleofile ale proteinelor (Fig.6.28.). Aducii haptenelor cu proteinele au dou funcii importante: - de semnal imunogen, care stimuleaz proliferarea limfocitelor T

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 169

- de semnal antigenic

XENOBIOTIC detoxifiere bioactivare METABOLIT REACTIV

HIPERSENSIBILITATE

LEZARE CELULARA/TISULARA

CONJUGAT XENOBIOTIC-PROTEINA

IMUNOGEN

ANTIGEN celula tinta

ACTIVARE IMUNA

ANTICORPI IgE AUTOANTICORPI LIMFOCITE-T

Fig.6.28. Implicarea haptenelor n reaciile de hipersensibilitate

Un numr redus de substane, cum ar fi penicilinele, cefalosporinele i citostaticele, pot interaciona direct cu gruprile nucleofile ale proteinelor n condiii fiziologice. n cazul penicilinei, rspunsul anafilactic nu este dirijat mpotriva penicilinei ca atare, ci mpotriva unor determinani haptenici care se formeaz prin reacia penicilinei cu proteinele (Fig. 6.29.). Determinantul antigenic major este restul peniciloil. Dei ciclul -lactamic poate reaciona direct cu gruprile lizin din proteine, penicilina poate suferi o rearanjare intramolecular la acid penicilenic, care nu numai c este mai reactiv dect penicilina ca atare, dar i mai imunogen. S-a demonstrat c legarea a mai puin de 0,1 din doza de penicilin administrat poate provoca un rspuns prin IgG. Antigenul interacioneaz cu sistemul imunitar n dou etape (Fig.6.30.): Etapa de sensibilizare care presupune expunerea iniial la antigen. Acesta este recunoscut de ctre sistemul imunitar ca fiind strin, i organismul va rspunde prin producerea de anticorpi sau activarea celulelor T.

170 TOXICOLOGIE GENERAL

Etapa de inducere a rspunsului imun care se declaneaz dup o nou expunere la xenobiotic. Exist patru tipuri de rspuns imun, primele trei fiind umorale, ce implic producerea de anticorpi, iar ultimul fiind mediat celular, prin intermediul limfocitelor T sensibilizate specific.

S CH 2 CON H O Benzilpenicilina HC C N

CH 3 CH 3 COO H

S CH 2 CON H O Determinant benzilpeniciloil HC C NH lys proteina HN

CH 3 CH 3 COO H

raspu ns IgE Eliberarea mediatorilor din m astocite histam in a leucotriene Sim p tom e clinice urticatie angioedem astm soc Fig.6.29. Schema reaciei de hipersensibilitate indus de penicilin

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 171

Tipuri de reacii de hipersensibilitate (Fig.6.31.): Reacia alergic de tip I (anafilaxie, hipersensibilitate imediat). n aceast reacie sunt implicate cel mai adesea IgE. Ca urmare a legrii antigenului de anticorpii care se gsesc fixai pe suprafaa mastocitelor, sunt eliberai mediatori ca: histamina, serotonina, bradikinina, heparina, calicreina, prostaglandinele, care sunt responsabili de unele efecte fiziologice cum ar fi inflamaia, edemul, vasodilataia. Reacia se poate manifesta la diferite nivele: aparat respirator, piele, tract gastro-intestinal, sistem vascular.

EXPUNEREA INITIALA Compusul sau metabolitul (HAPTENA)

EXPUNEREA ULTERIOARA Compusul sau metabolitul (HAPTENA)

Conjugare cu proteinele (ANTIGEN)

Conjugare cu proteinele (ANTIGEN)

Antigenul determina formarea de proteine celulare sau umorale (ANTICORPI)

REACTIA ANTIGEN-ANTICORP

Raspuns celular Fig.6.30. Mecanismul rspunsului de sensibilizare

Reacia alergic de tip II (citolitic), implic reacia dintre anticorpii liberi (IgG, IgA, IgM) i antigeni legai de celule ca leucocitele, eritrocitele, trombocitele. Prin legarea anticorpului, celulele sunt aglutinate. Dac inta este reprezentat de celulele sanguine, se pot produce discrazii sanguine. Aglutinarea poate activa complementul, determinnd eliberarea de kinine, histamin, enzime lizozomale, care lezeaz celulele. Reacia alergic de tip III (Arthus) implic interaciunea dintre antigeni liberi i anticorpi liberi, in special IgG, formndu-se un complex imun care poate precipita n vasele sanguine. i n acest caz poate fi activat sistemul complement. Depunerea complecilor i activarea complementului pot

172 TOXICOLOGIE GENERAL

conduce la tromboz, inflamaie i lezare vascular. Principalele inte sunt: pielea, rinichii, plmnii, sistemul circulator, articulaiile. Reacia alergic de tip IV (hipersensibilitate ntrziat) este mediat celular. O membran celular alterat este inta pentru o celul T activat (limfocit ucigae NK), care atac i distruge celula antigenic. Sunt eliberai mediatori ca limfokinele, care pot produce agregarea limfocitelor, macrofagelor i bazofilelor. inta poate fi reprezentat de orice organ sau esut, iar dac acesta este un organ vital, consecinele pot fi severe. n astfel de reacii pot fi implicai poluani din mediu sau substane utilizate n dermatologie sau n cosmetologie.

Fig.6.31. Mecanismele de stimulare a rspunsului imun (Timbrell J.A., 1991)

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 173

Substane care pot produce reacii de hipersensibilitate la diferite nivele: Cardiovascular o Miocardite: antidepresive triciclice, hidroclorotiazid, vaccinuri o Vasculite: barbiturici, cefalosporine, dapsona, griseofulvina, hidantoinul, insulina, penicilina, fenilbutazona, sulfamidele, vaccinurile, antiveninurile Hematologic o Anemie hemolitic: cefalosporine, alfa-metildopa, procainamida, sulfamidele Hepatic o Halotan, acid p-aminosalicilic, alfa-metildopa, sulfamide Renal o Nefrite interstiiale: meticilin, peniciline, fenitoin Respirator o Astm: aspirin, cefalosporine, penicilin, sulfamide, diizotiocianai, anhidrid ftalic, formaldehid, sruri de cobalt, sruri de nichel, sruri de platin Piele o Dermatite de contact: benzocain, sruri de beriliu, clorpromazin, sruri de crom, izoniazid, neomicin, sruri de nichel, fenoli, piretrine, chinidin o Erupii: numeroase medicamente o Exantem multiform: penicilin, salicilai, fenitoin, fenilbutazon, sulfamide o Erupii medicamentoase: barbiturici, fenolftalein, fenilbutazon, chinin, sulfamide, tetraciclin o Vasculite cutanate: peniciline, fenitoin, pirazolone, sulfamide o Purpur: fenitoin, chinin, chinidin, sulfamide o Eritem nodular: contraceptive o Epidermoliz: alopurinol, fenitoin, sulfamide

AUTOIMUNITATEA Termenul de autoimunitate se refer la rspunsurile autoimune i la bolile autoimune. Rspunsurile autoimune sunt rspunsuri imune dirijate mpotriva componentelor normale ale organismului, sau autoantigeni. Bolile autoimune sunt condiii patologice n care rspunsurile imune mpotriva autoantigenilor produc leziuni structurale i /sau funcionale. Leziunile structurale se observ atunci cnd

174 TOXICOLOGIE GENERAL

sunt prezente inflamaia i repararea ca urmare a aciunii autoanticorpilor citotoxici, complexelor imune sau limfocitelor T citotoxice. Afectarea funcional se manifest prin stimularea (hipertrofie i /sau hiperplazie) sau inhibarea (atrofie) celulelor int ca urmare a aciunii autoanticorpilor asupra receptorilor celulari. Autoanticorpii pot fi clasificai n autoanticorpi mpotriva unor antigeni specifici pentru un anumit organ sau celul (ex, anticorpi anti-eritrocite, antitiroidieni), i n autoanticorpi mpotriva unor antigeni ubicuitari, care nu au specificitate de organ (ex. anticorpi anti-ADN). Autoanticorpii pot produce leziuni prin urmtoarele mecanisme (Fig.6.32.): 1. Liza celulelor mediat de complement, cnd autoanticorpii se leag de antigenii lor fixai pe suprafaa celulei i activeaz complementul, producnd liza celulei. Trombocitele i eritrocitele pot fi lezate prin acest mecanism. 2. Fagocitoz sau citotoxicitate autoanticorpii favorizeaz fagocitoza celulelor de ctre macrofage i celulele polimorfonucleare. Celulele pot fi distruse i datorit citotoxicitii celulare dependente de anticorp. Acest mecanism este de obicei implicat n anemia hemolitic autoimun. 3. Formarea de complexe imune ntre autoanticorpi i antigenii corespunztori in situ, la nivelul organului int, sau n sngele n care se gsesc antigeni circulani. Complexele imune circulante sunt distribuite n organism i pot afecta diferite organe cum ar fi pielea, rinichii i vasele sanguine. n momentul n care se depun, ele activeaz complementul i celulele polimorfonucleare. Leziunile sunt induse n special de mediatorii inflamatori generai n timpul acestor procese. Acest mecanism se observ n lupusul eritematos. 4. Inhibarea sau activarea receptorilor. Autoanticorpii pot reaciona cu receptori endogeni, producnd diferite disfuncii. De exemplu, n forma insulin-rezistent a diabetului zaharat, autoanticorpii blocheaz aciunea insulinei prin legare de receptorul acesteia. Autoanticorpii legai de receptorii celulari pot i s activeze funcia celulei, cum este cazul tireotoxicozei, cnd receptorul hormonului tiroidian este stimulat. 5. Interaciune cu peptidele sau proteinele. Autoanticorpii care se leag de co-factori sau enzime pot modifica activitatea fiziologic, de exemplu absorbia vitaminei B12 n anemia pernicioas. Boli autoimune La ora actual se cunosc cel puin 30 de boli care pot fi definite ca autoimune sau care au unele manifestri autoimune. Bolile autoimune afecteaz aproximativ 5% din populaia rilor occidentale industrializate, iar n ultimii ani se constat o cretere a frecvenei unor maladii autoimune cum ar fi diabetul zaharat insulinodependent. Cauza acestor boli poate fi de natur infecioas, dar i o serie de xenobiotice au fost implicate n producerea lor. Manifestarea lor este condiionat

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 175

de o serie de factori genetici, rasiali i hormonali i multe din ele se observ mai frecvent la femei dect la brbai. Bolile autoimune sistemice sunt: lupusul eritematos sistemic, artrita reumatoid, polimiozita, dermatomiozita, scleroza sistemic i vasculitele. Lupusul eritematos este probabil una din maladiile autoimune frecvent asociate cu expunerea la medicamente i se ntlnete mai ales la femeile tinere, fiind mai des

Fig.6.32. Patogeneza autoanticorpilor

observat la anumite grupuri etnice cum ar fi afro-caraibienii i orientalii. Manifestrile clinice includ: artrit, erupie pe obraji i pe nas n form de fluture, fotosensibilitate, proteinurie, psihoz i tulburri hematologice. n jur de 70 de medicamente au fost asociate cu inducerea unor tulburri de tip lupus eritematos, dar numai procainamida i hidralazina au fost studiate mai aprofundat. Exist dovezi care susin implicarea i a altor substane cum ar fi chinidina, carbamazepina, clorpromazina, hidrazina, izoniazida, metildopa, minociclina, penicilamina, fenitoinul. Alte boli autoimune i xenobioticele care le induc sunt: Anemia hemolitic autoimun: alfa-metildopa, penicilin, penicilamin Boli tiroidiene autoimune: bifenili polibromurai, bifenili policlorurai, litiu, penicilamin, amiodaron

176 TOXICOLOGIE GENERAL

Hepatite autoimune: alfa-metildopa, oxifenacetin, halotan Glomerulonefrite prin depunere de imunocomplexe: cadmiu, aur, mercur Miastenia gravis: penicilamin, trimetadona Pemfigus: alfa-mercaptopropionilglicina, captopril, penicilamina Polimiozit: penicilamina Sclerodermie: ulei de rapi contaminat cu aniline, praful de siliciu, clorura de vinil.

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC


PATOLOGIA TOXIC A SISTEMULUI NERVOS Structura i funcia sistemului nervos Sistemul nervos este un sistem complex implicat n comunicarea intercelular, care este alctuit din creier, mduva spinrii i o reea vast de nervi i de organe senzoriale, ce controleaz funciile majore ale organismului. Micarea gndirea, vederea, auzul, vorbirea, funcia cardiac, respiraia i numeroase alte procese fiziologice, sunt controlate de aceast reea complex de procese nervoase, neuromediatori, hormoni, receptori i canale. Sistemul nervos este separat anatomic n dou componente: sistemul nervos central (SNC) i sistemul nervos periferic (SNP). Sistemul nervos central cuprinde creierul i mduva spinrii, iar sistemul nervos periferic include nervii care vin spre sau pleac de la mduva spinrii, organele senzoriale, glande, vasele sanguine i muchi. Tipurile de celule din sistemul nervos Sistemul nervos este alctuit din patru tipuri de celule: neuronii, celulele gliale (astrocite, oligodendrocite, celule ependimale), microglia i celulele mezenchimale din compoziia capilarelor sanguine. Neuronii sunt singurele celule excitabile din sistemul nervos, funcia lor fiind de a transmite i analiza informaia. Ei sunt responsabili de primirea informaiei senzoriale din exteriorul organismului, de integrarea i depozitarea acesteia i de controlarea activitii muchilor i a glandelor. Un neuron (Fig.7.1.) este alctuit dintr-un corp celular (sau pericarion), care reprezint partea cea mai mare a celulei i conine nucleul, i din axon i dendrite. Dendritele sunt structuri ramificate, care primesc informaia ce vine la neuroni, iar axonul, care se gsete la partea opus a celulei, este o structur neramificat, care conduce informaia de la neuron. Un neuron poate avea mai multe dendrite, dar doar un singur axon. Proteinele structurale ale axonului, n special neurofilamentele i microtubulii, sunt adesea inte pentru substanele toxice. Axonul este de obicei acoperit de un strat de material lipidic ce poart denumirea de teac de mielin, care este o extensie a unui tip special de celule gliale ce se nfoar n jurul axonului. Celulele gliale a) Astrocitele sunt celulele cele mai numeroase din creierul adult. Ele au rol structural, dar i numeroase alte funcii: n metabolismul neuronal, n meninerea nivelurilor de cationi care s asigure polarizarea membranei,

178 TOXICOLOGIE GENERAL

Fig.7.1. Structura unui neuron (McKimm W., 2000)

n sinteza unor substane utilizate de neuroni, precum i n transportul intracerebral, deoarece fac parte din bariera hemato-encefalic. b) Oligodendrocitele din sistemul nervos central sunt corespondentele celulelor lui Schwann din sistemul nervos periferic. Ambele tipuri de celule formeaz teaca de mielin prin nfurarea progresiv a citoplasmei n jurul axonului, alctuind o structur concentric bogat n lipide. Coninutul ridicat n lipide favorizeaz trecerea compuilor foarte lipofili din snge spre sistemul nervos. c) Microglia este reprezentat de celule mici, care n mod normal nu se gsesc n sistemul nervos, dar al cror numr poate crete ca rspuns la leziuni ale esutului. Celulele ependimale cptuesc suprafaa ventriculilor cerebrali. Ele nu prolifereaz ca rspuns la aciunea substanelor toxice, dar pot fi lezate n anumite condiii care produc edem cerebral. Bariera hemato-encefalic are rolul de a proteja fa de ptrunderea substanelor toxice n sistemul nervos. Astrocitele formeaz cu celulele endoteliului capilar jonciuni inter-celulare ngroate, care mpiedic trecerea moleculelor voluminoase

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 179

sau ionizate din snge n creier. Ftul este parial lipsit de bariera hematoencefalic, aceasta nefiind complet dezvoltat dect dup a doua jumtate a primului an de via. Sinapsa. Comunicarea inter-celular n sistemul nervos se realizeaz prin intermediul sinapsei (Fig.7.2.), care este spaiul dintre axon i o anumit int, de exemplu un alt neuron, un muchi sau o gland. Mesajele sunt transmise de ctre neuromediatori, cei mai cunoscui fiind: acetilcolina, catecolaminele, serotonina, acidul gama aminobutiric, glutamatul, encefalinele, endorfinele, etc. Neuromediatorii eliberai de axon strbat fanta sinaptic i se leag de receptorul post-sinaptic din celula int, ceea ce conduce la un rspuns din partea acesteia. Numeroase substane toxice pot interfera n transmiterea impulsurilor la nivelul sinapsei.

Fig.7.2. Reprezentarea unei sinapse (Niesink, et al, 1996)

Vulnerabilitatea sistemului nervos n ciuda existenei barierei hemato-encefalice i a barierei nervoase periferice, sistemul nervos este deosebit de sensibil la aciunea a numeroase substane toxice din mai multe motive:

180 TOXICOLOGIE GENERAL

Neuronii aduli sunt celule care nu se divid, deci o dat pierdui nu se pot regenera, iar leziunile sunt de obicei permanente Bariera hemato-encefalic poate fi strbtut de substane toxice liposolubile, sau acestea pot fi transportate n creier prin mecanisme de transport activ. De asemenea, exist regiuni ale sistemului nervos care sunt lipsite de aceast barier. Neuronii au un necesar energetic foarte ridicat, lipsa oxigenului sau a glucozei putnd conduce la moartea celular selectiv. Lungimea considerabil a axonului unor neuroni ofer o suprafa mare de aciune pentru substanele toxice. Datorit excitabilitii electrice foarte pronunate, integritatea membranelor neuronale este afectat cu uurin. Deoarece funcionarea normal a sistemului nervos necesit aciunea unei reele integrate complexe, lezarea chiar i a unei mici poriuni din sistemul nervos poate determina o afectare grav. Leziunile toxice pot progresa o dat cu naintarea n vrst, datorit pierderii de neuroni i a altor modificri ce au loc treptat n a doua jumtate a vieii. Tipuri de efecte toxice la nivelul sistemului nervos Neurotoxicitatea este definit ca orice modificare duntoare a structurii sau a funciei sistemului nervos, care apare consecutiv expunerii la o substan chimic. Substanele toxice pot afecta n principal sistemul nervos central sau sistemul nervos periferic, sau pot produce fenomene neurotoxice nsoite de alterri ale altor organe i sisteme. Efectele toxice observate sunt foarte variate (Tabel VII.1.) i se datoreaz inducerii unor leziuni structurale directe sau a afectrii metabolismului celulei neuronale. Leziuni structurale Leziunile structurale constau n modificarea celulelor i a structurilor subcelulare sau n distrugerea celulelor. La nivel morfologic, substanele toxice par s acioneze selectiv asupra unor componente ale sistemului nervos, cum ar fi: corpul celular, axonul, teaca de mielin sau moleculele receptor de la nivelul sinapselor. Datorit incapacitii de regenerare a sistemului nervos, expunerea la compui chimici poate produce o deteriorare tardiv i progresiv. n tabelul VII.2. sunt prezentate exemple de substane neurotoxice i principalele inte ale aciunii lor.

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 181

Tabel VII.1. Exemple de efecte neurotoxice

Efecte motorii Convulsii Slbiciune Tremurturi, tresriri Ataxie Paralizie Reflexe anormale Efecte asupra dispoziiei i personalitii Tulburri de somn Excitabilitate Depresie Iritabilitate Agitaie Delir, halucinaii Nervozitate, tensiune

Efecte cognitive Tulburri de memorie Confuzie Dificulti de vorbire Dificulti de nvare Efecte senzoriale Tulburri vizuale Tulburri auditive Afectarea senzaiei de durere Efecte generale Narcoz Oboseal Pierderea apetitului Stupoare

Afectarea metabolismului celulei neuronale Multe substane toxice pot produce lezarea celulelor prin interferen cu cile metabolice celulare. Pentru a transmite impulsurile nervoase, neuronii necesit nivele energetice ridicate, fiind deosebit de sensibili la lipsa oxigenului, i nu sunt capabili s susin o producere adecvat a ATP-ului. 1. Hipoxia i ischemia Creierul nu dispune de un metabolism anaerob care s i permit s supravieuiasc n caz de hipoxie sau anoxie, situaie n care poate s survin coma. Anoxia total conduce la moarte n cteva minute, datorit stopului respirator prin moarte bulbar, urmat de stop cardiac. O parte din neuroni mor nainte de ncetarea complet a transportului de oxigen. Reanimarea cardiac i reoxigenarea tardiv nu permit rentoarcerea la via a celulelor nervoase, subiectul aflndu-se n stare de moarte cerebral. Dac anoxia a fost doar parial i tratamentul s-a instituit rapid, moartea cerebral este parial, supravieuind celulele care nu au suferit de pe urma anoxiei.

182 TOXICOLOGIE GENERAL

Tabel VII.2. Substane neurotoxice i intele aciunii lor

Toxici la nivelul pericarionului Compui ai mercurului Mangan Aluminiu Glutamat Cianur MPTP Plumb Toxici la nivelul tecii de mielin Hexaclorofen Trietilstaniu Plumb Telur

Toxici la nivelul axonului n-Hexan Sulfur de carbon Taxol Colchicin Acrilamid Piretroizi Toxici la nivelul neuromediatorilor Nicotin Compui organofosforici Insecticide carbamice Amfetamine Cocain Aminoacizi excitani

n funcie de mecanismul prin care se produc, hipoxiile se clasific n: A) Hipoxia anemic. Se datoreaz unui deficit n transportul oxigenului de ctre snge ca urmare a: - blocrii hemoglobinei de ctre substana toxic de exemplu prin formarea carboxihemoglobinei, a methemoglobinei, sau a sulfhemoglobinei - hemolizei (ex. hidrogenul arseniat) B) Hipoxia stagnant. Este consecina unor deficiene circulatorii i poate s apar n cazul instalrii strii de oc. C) Hipoxia hipoxic. Se poate datora unor factori externi sau interni. - Factori externi: lipsa oxigenului din aerul inspirat prezena substanei toxice n concentraii mari n aer = hipoxie toxic de aport - Factori interni = hipoxii toxice prin alterarea difuziei oxigenului la diferite niveluri: blocarea centrilor bulbari de ctre substana toxic (ex. derivaii barbiturici, morfina) leziuni bronhopulmonare induse de edemul pulmonar

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 183

paralizia musculaturii implicate n respiraie (ex. meprobamatul) D) Hipoxia histotoxic rezult n urma imposibilitii utilizrii oxigenului n procesul respiraiei celulare, ca urmare a interferenei substanei toxice n metabolismul celular prin blocarea unor enzime cheie ale respiraiei celulare (ex. acidul cianhidric, hidrogenul sulfurat, care blocheaz citocromoxidaza). 2. Hipoglicemie i interferen n procesul glicolizei n caz de hipoglicemie sever apar leziuni regionale ale creierului. Citotoxicitatea selectiv asociat hipoglicemiei a fost explicat prin mai multe mecanisme, printre care coninutul crescut de glicogen al unor zone cerebrale, sensibilitatea mai mare a unor zone la neuromediatorii excitani, sau diferene ale necesarului energetic fa de densitatea capilarelor n regiune, deci un aport insuficient de glucoz i oxigen comparativ cu cererea. 3. Afectarea homeostaziei ionilor Unele substane toxice care produc activitate convulsiv crescut determin o ptrundere a calciului n celul, fiind depit capacitatea de sechestrare a ionului n membrana plasmatic, mitocondrie sau reticulul endoplasmatic. Creterea concentraiei citosolice a calciului pare a fi cauza activrii fosfolipazelor i proteazelor, ceea ce conduce la lezarea celulei. Tipuri de patologii induse de substanele toxice Nu exist o clasificare standard a bolilor neurotoxice, dar cea mai frecvent ntlnit se bazeaz pe inta celular la nivelul creia se produce leziunea (Fig.7.3.). Astfel, se pot distinge mai multe tipuri de patologii: 1. NEURONOPATII Neuronopatiile sunt patologiile asociate cu leziuni care apar la nivelul corpului neuronal. Ele se pot explica, aa cum s-a vzut, fie prin deficiene nutriionale sau respiratorii, fie prin lezarea direct a structurilor celulare. Anumite substane toxice acioneaz specific asupra neuronilor, sau uneori asupra unui grup particular de neuroni, producnd lezarea sau chiar moartea lor. Pierderea neuronului este ireversibil i include degenerarea tuturor extensiilor exoplasmatice, dendritele i axonul, precum i a tecii de mielin. Printre substanele care lezeaz corpul neuronal se numr: Metilmercurul. Neurotoxicitatea acestui compus organic al mercurului a fost descoperit n mod tragic n urma unor intoxicaii colective soldate cu numeroi mori n Japonia (Golful Minamata) i n Irak. Metilmercurul reacioneaz cu cisteina, formnd un conjugat care mimeaz aminoacidul neutru

184 TOXICOLOGIE GENERAL

Fig. 7.3. Tipuri de leziuni neurotoxice

metionina i este astfel transportat activ prin bariera hemato-encefalic. Mecanismul de producere a toxicitii nu a fost complet elucidat, dar se pare c se formeaz radicali liberi i este afectat profund funcia celular. Consecina este encefalopatia difuz, unele grupe de neuroni fiind mai afectate dect altele. Distribuia leziunilor neuronale pare a nu fi corelat cu distribuia metilmercurului sau cu cea a ionului de mercur, ci mai degrab cu o sensibilitate crescut a unor neuroni, cum ar fi celulele granulare din cerebel. Aluminiul poate produce o encefalopatie nsoit de degenerarea neurofibrilelor, cu manifestri asemntoare celor din boala Alzheimer. Doxorubicina se intercaleaz n molecula de ADN, distrugnd structura dublu elicoidal, ceea ce determin inhibarea sintezei ARN i a proteinelor neuronale. Sensibilitatea selectiv a neuronilor fa de alte celule poate fi corelat cu incapacitatea acestora de a repara leziunile ADN. MPTP (1-metil-4-fenil-1,2,5,6-tetrahidropiridina) este un contaminant al meperidinei, sau heroina sintetic, ce produce simptome asemntoare cu cele din boala Parkinson. Dup ce trece bariera hemato-encefalic, substana este metabolizat de MAO-B la nivelul astrocitelor, formnd ionul de metil piridiniu corespunztor, MPP+. Acesta din urm ptrunde n neuronii dopaminergici din substantia nigra prin intermediul sistemului de captare a dopaminei i acioneaz ca o toxin mitocondrial, blocnd respiraia celular la nivelul complexului I (Fig.7.4.). Se produce n final lezarea sau moartea neuronilor.

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 185

Bariera hematoencefalica

MAO-B

N CH3 MPTP

N CH3

N CH3 MPDP+

N CH3 MPP+

Astrocite

Neuroni dopaminergici

Captare activa Q10 Citocromi O2

NADH

NADH DHaza

Mitocondrie

Fig.7.4. Activarea metabolic i mecanismul neurotoxicitii MPTP

Glutamatul este un neuromediator care stimuleaz dendritele anumitor neuroni, producnd depolarizare continu sau repetitiv a membranelor excitabile. Aceasta determin epuizarea resurselor de energie, ceea ce conduce la modificarea permeabilitii membranei celulare, cu acumularea ionului de calciu i n final moartea celulei. Acest mecanism este considerat a fi responsabil de aa-numitul sindrom al restaurantului chinezesc produs de glutamatul de sodiu folosit ca potenator de arom, i manifestat prin arsur i mncrime la nivelul feei, gtului i prii superioare a corpului.

186 TOXICOLOGIE GENERAL

2. AXONOPATII Axonopatiile sunt tulburrile de origine toxic n care locul principal de aciune a substanei toxice este axonul. Axonul degenereaz, la fel i teaca de mielin, dar corpul neuronal rmne intact. Axonopatiile pot fi clasificate n: - a) Axonopatiile proximale, care se produc la nivelul bazei axonului i n prima poriune a axonilor mielinizai. Aceast poriune a axonului este mai vulnerabil, datorit capacitii sale de a genera i propaga potenialele de aciune i a capacitii de a sintetiza proteine. Acest tip de axonopatii este rar ntlnit. - b) Axonopatiile distale sunt cel mai frecvent ntlnite. Axonopatiile distale pot fi considerate ca o secionare chimic a axonului, partea acestuia situat distal fa de leziune fiind separat biologic de corpul celular, ceea ce conduce la degenerare. Axonii mai lungi sunt mai susceptibili s sufere astfel de leziuni. Regenerarea poate avea loc atunci cnd leziunile se limiteaz la nervii periferici i poate fi complet n axonopatiile n care poate fi identificat i ndeprtat evenimentul iniial. Pe plan clinic, axonopatiile toxice sunt asociate cu slbiciune muscular la nivelul extremitilor i cu ataxie. Ele mai sunt denumite i nevrite (polinevrite, dac afecteaz mai muli nervi) sau neuropatii periferice, iar n cazurile grave evolueaz cu parestezii (furnicturi i amoreal), durere, anestezie, pierderea reflexelor, hipotonie, parez i n final paralizie i atrofie. i substanele toxice care produc carene vitaminice (B1, B6) pot induce polinevrite. Unele substane toxice ce sunt responsabile de producerea axonopatiilor distale sunt prezentate n Tabelul VII.3..

Tabelul VII.3. Substane toxice care pot induce axonopatii distale Acrilamida n-Hexanul p-Bromfenilacetilureea Zinc piridintiona Triortocresil fosfatul Esterii organofosforici Izoniazida Sulfura de carbon Disulfiramul Leptofos -Dicetonele

Acrilamida este un monomer vinilic solubil n ap care are numeroase aplicaii n industria chimic i n extragerea minereurilor. Este toxic numai ca monomer, nu i dup polimerizare. Se crede c toxicitatea se datoreaz inhibrii producerii de energie la nivelul axonului, modificrii vitezei i cantitii

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 187

transportului i a depunerii materialelor transportate din corpul celular, precum i afectrii structurii i funciei citoscheletului. Modificrile la nivelul axonului se produc numai dup expunerea cronic, ceea ce sugereaz faptul c nu axonul este inta primar a aciunii neurotoxice a acrilamidei. -Dicetonele sunt metabolii ai n-hexanului i ai n-butil cetonei, substane utilizate pe scar larg n industrie, n special n producerea de nclminte, i care intr n compoziia adezivilor. Axonopatia se instaleaz lent i nu este complet reversibil dup ntreruperea expunerii. n expunerea cronic se observ apariia la nivelul axonilor a unor umflturi determinate de agregarea neurofilamentelor, sistemul nervos central i cel periferic fiind afectate concomitent. Mecanismul probabil const n formarea, prin oxidare sub aciunea citocromului P450, a unui metabolit -dicetonic ce se poate cicliza n prezena unei grupri aminice, rezultnd un compus pirolic. n acest mod se produce o inhibiie ireversibil a terminaiilor aminice (lizin) ale proteinelor fibrilare din axon (Fig.7.5.). Sulfura de carbon se utilizeaz ca solvent n diferite industrii i mai ales pentru obinerea mtsii artificiale. Ea produce o axonopatie care implic att fibrele senzitive ct i cele motorii, mecanismul de aciune fiind asemntor cu cel al n-hexanului, respectiv presupune metabolizarea la ditiocarbamai i formarea unor legturi covalente ntre neurofilamente. Izoniazida produce n expunerea cronic degenerarea nervilor periferici prin interferare n metabolismul vitaminei B6 . Astfel, ea reacioneaz cu piridoxal fosfatul, formnd o hidrazon (Fig. 7.6.) care este un inhibitor puternic al piridoxal fosfat kinazei. Hidrazona are o afinitate mult mai mare pentru enzim dect substratul normal, piridoxalul, consecina fiind depleia esuturilor de piridoxal fosfat. Acest cofactor este deosebit de important n esutul nervos, fiind implicat n reaciile de decarboxilare i transaminare, iar rezultatul este instalarea unei polinevrite cu caracter senzitiv. Esterii organofosforici includ o serie de insecticide i de aditivi utilizai n masele plastice i n produsele petroliere, care inhib acetilcolinesteraza, inducnd o cretere a activitii colinergice. Triortocresil fosfatul produce axonopatie distal care nu este nsoit ns de fenomene colinergice. Aceste substane induc o polineuropatie tardiv, caracterizat prin degenerarea axonilor lungi, cu diametru mare, din sistemul nervos central i din cel periferic. Se crede c molecula int care intervine n inducerea acestei neuropatii este o protein neuronal cu activitate esterazic, a creia activitate la nivel cerebral dup administrare acut a fost bine corelat cu activitatea la nivelul leucocitelor, acestea din urm fiind considerate biomarkeri adecvai ai posibilitii de apariie a afectrii cerebrale. Unii inhibitori ai acestei esteraze in a neuropatiei, cum ar fi carbamaii i tiocarbamaii, care nu produc polineuropatie tardiv, pot preveni apariia acesteia dac sunt administrai nainte de compuii organofosforici, fenomen denumit promovarea axonopatiilor.

188 TOXICOLOGIE GENERAL

Mecanismul promovrii pare a fi diferit de cel implicat n progresia leziunilor iniiale.

H3C-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3 hexan OFMM O O

H3C-C-CH2-CH2-C-CH3 2,5-hexandiona RNH2 R N

R N

2,5-dimetil pirol R'SH R N R'NH2 R N

R'S

NHR'

Fig.7.5. Mecanismul de aciune a n-hexanului asupra proteinelor neurofibrilare

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 189

O C NHNH2 HO CHO CH2OP

O C NHN HO

H C CH2OP

N Izoniazida

H3C

N Piridoxal fosfat

H3C Hidrazona

Fig.7.6. Mecanismul de aciune neurotoxic a izoniazidei

3. MIELINOPATII Mielina asigur izolarea electric a proceselor neuronale, distrugerea sa conducnd la afectarea sever sau la absena transmisiei pulsatile. Distrugerea tecii de mielin are loc consecutiv lezrii directe a acesteia, sau n urma afectrii selective a oligodendrocitelor sau a celulelor Schwann, care sunt responsabile de producerea mielinei n SNC i respectiv n SNP. De asemenea, exist substane toxice care produc o separare a lamelelor de mielin, inducnd edem intramielinic. Compui care produc demielinizare sunt: Trietilstaniul. Compuii organostanici sunt utilizai ca i stabilizatori n polimerii de material plastic, ca i conservani pentru lemn i textile, ca fungicide, bactericide i insecticide. Trietilstaniul produce edem cerebral cu o vacuolizare a materiei albe, dar care se extinde i n sistemul nervos periferic, i care poate fi atribuit separrii lamelelor de mielin. Hexaclorofenul a fost adugat n spunuri i n detergenii lichizi pentru proprietile sale antimicrobiene. El se absoarbe prin pielea intact i prin membranele mucoase i se cunosc cazuri de neurotoxicitate, n special la nounscui prematuri care au fost mbiai n ap cu aceste produse pentru a evita infeciile stafilococice. Simptomele constau n tulburri vizuale i slbiciune muscular, care progreseaz spre paralizie i se datoreaz unor leziuni identice cu cele produse de trietilstaniu. Plumbul produce neuropatie periferic cu demielinizare pronunat, fiind afectai n principal axonii neuronilor motori.

190 TOXICOLOGIE GENERAL

n cursul unor intoxicaii care decurg cu anoxie, cum ar fi intoxicaia cu monoxid de carbon, degenerescena mielinic poate mbrca un aspect diferit, n special la nivelul sistemului nervos central, decurgnd cu un edem ce disociaz nveliul mielinic i produce vacuolizare. Fenomenul poart denumirea de degenerescen spongioas. Aceast anomalie poate preceda simptome retard ca sindromul post-interval, care apare la 7-21 de zile dup intoxicaia acut cu monoxid de carbon. 4. TULBURRI ALE TRANSMITERII IMPULSULUI NERVOS Substanele toxice pot afecta transmiterea impulsului nervos prin aciune: A) la nivelul sinapselor ca urmare a o Modificrii nivelurilor de neuromediatori o Interaciunii cu receptorii o Interferenei cu nucleotidele ciclice B) la nivelul axonului prin o Alterarea tecii de mielin o Dereglarea balanei ionice i energetice. Unii compui, datorit similitudinii structurale cu neuromediatorii endogeni, pot mima procesele de neurotransmisie din sistemul nervos simpatic, fiind denumii compui simpatomimetici. Substane care pot afecta transmiterea impulsului nervos sunt prezentate n Tabelul VII.4. Tabel VII.4. Medicamente i toxine care produc neuropatii de transmisie Medicamente i toxine ce acioneaz pre-sinaptic ACTH, corticosteroizi Azatioprin Toxina botulinic Veninul de Crotalidae Magneziul Verapamilul Medicamente i toxine ce acioneaz post-sinaptic d-Penicilamina Blocanii neuromusculari Nicotina Insecticidele organofosforice i carbamice Fenotiazinele Medicamente i toxine ce acioneaz att pre- ct i postsinaptic Antibiotice Aminoglicozide Clindamicin Polimixine Antagoniti beta-adrenergici Clorochin Litiu Fenitoin Procainamid Chinidin

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 191

5. MIOPATII n urma unei leziuni nervoase este afectat i musculatura inervat de nervii respectivi. Ca urmare a aciunii substanei toxice, muchiul fie nu mai primete stimuli i se atrofiaz, fie primete un stimul exagerat, este hiperpolarizat i meninut contractat. 6. VASCULOPATII TOXICE Uneori, o dat cu afectarea esutului nervos se produce i o alterare secundar a endoteliului vaselor sanguine care l irig. Astfel, compuii arsenului, aluminiului, cadmiului, mercurului, plumbului, taliului, staniului, se pot lega de gruprile tiolice ale celulelor endoteliale, crescnd permeabilitatea peretelui vascular. Consecina este ieirea n spaiul extracelular a sngelui, cu producerea hemoragiei, sau a plasmei, cu apariia edemului, ceea ce conduce la encefalopatie i moartea neuronilor. Edem cerebral mai pot produce i substane ca etanolul, monoxidul de carbon i acidul cianhidric.

PATOLOGIA TOXIC A FUNCIEI PULMONARE Principala funcie a plmnilor este schimbul de gaze, adic furnizarea de oxigen esuturilor i ndeprtarea dioxidului de carbon. Deoarece suprafaa plmnului este foarte mare, iar volumul de aer care este implicat n acest schimb este semnificativ (n medie 10.000-20.000 l/zi pentru un adult), acest organ reprezint principala interfa dintre organism i mediu, permind ptrunderea oricrei substane toxice prezente n aer sub form de gaze, vapori sau particule solide sau lichide de diferite dimensiuni (Tabel VII.5.). La nivelul sistemului respirator exist o serie de mecanisme de aprare, cum ar fi aparatul muco-ciliar i sistemul macrofagelor alveolare, dar acestea sunt frecvent insuficiente, permind producerea diferitelor tipuri de leziuni. Localizarea leziunii i tipul acesteia este rezultatul interaciunilor complexe ntre agentul toxic i gazd. - n ceea ce privete substana toxic, sunt importante caracteristicile fizicochimice ale acesteia, doza i tipul de expunere, acut sau cronic. - Sub aspectul particularitilor anatomice i funcionale ale plmnului, sunt importante mai multe aspecte: Sistemul respirator este alctuit dintr-o gam larg de populaii celulare cu compoziie diferit i cu rspuns diferit la factorii de stres din mediu. n plus, se pare c toate populaiile celulare

192 TOXICOLOGIE GENERAL

rspund la stres atunci cnd o singur subpopulaie este afectat. Astfel, nu numai compartimentele celulare care se afl n contact direct cu agentul lezional sau cu un alergen vor reaciona, ci vor avea loc modificri semnificative i n alte compartimente. Volumul sanguin circulant trece prin plmn ntre o dat i de cinci ori pe minut, organul fiind astfel expus i la substanele toxice din circulaia sistemic. Plmnul prezint o capacitate semnificativ de metabolizare a xenobioticelor, putnd juca un rol n bioactivarea sau detoxifierea acestora. Rspunsul la substana toxic poate fi modulat de diferii factori: - Vrsta. Nou-nscuii sunt mult mai susceptibili la substanele toxice care sunt bioactivate la nivelul plmnului, probabil corelat cu diferenierea populaiei celulelor int i cu inducerea sistemelor enzimatice corespunztoare. n acelai timp, se pare c se manifest o deficien a enzimelor de detoxifiere, a cror evoluie urmeaz un tipar diferit. - Sexul pare a reprezenta un factor de difereniere n unele boli pulmonare umane, cum ar fi cancerul pulmonar i reaciile de hipersensibilitate. Se cunoate c bolile autoimune afecteaz femeile ntr-o proporie mai mare dect brbaii. - Tipul de expunere. Expunerea la aceeai substan n mod repetat modific rspunsul acut la leziune i rezultatul final al proceselor de reparare. Astfel, o expunere repetat care are loc n timpul procesului de reparare declanat de lezarea acut iniial reduce susceptibilitatea populaiilor celulelor int la leziuni ulterioare. n schimb, dac expunerea repetat a avut loc dup ncheierea procesului de reparare, efectul este contrar, adic de cretere a susceptibilitii. Aceast constatare este adevrat att pentru expunerea la gazele oxidante, ct i la hidrocarburile bioactivate. Substanele toxice ptrunse pe cale pulmonar pot induce efecte locale sau, dup absorbie i distribuie, efecte sistemice. De asemenea, cile respiratorii pot fi afectate i atunci cnd substana a ptruns n organism pe o alt cale. A. Efecte sistemice Numeroase substane prezente n aerul inspirat pot fi absorbite i transportate de sngele circulant n diferite regiuni ale organismului, unde i exercit efectele, cum este cazul anestezicelor generale.

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 193

Tabel VII.5. Substane toxice pulmonare din mediu i leziunile asociate Substana toxic Praf de aluminiu Amoniac Arsen Azbest Beriliu Oxid de cadmiu Clor Crom Praf de crbune Acid fluorhidric Sursa Materiale ceramice, vopsele, artificii Prepararea fertilizanilor, explozibililor, amoniacului Prepararea pesticidelor, sticlei, pigmenilor, aliajelor Minerit, construcii, construcii navale Extracia minereului, materiale ceramice, aliaje Sudur, topire, produse electronice, aliaje, pigmeni Obinerea hrtiei, maselor plastice, a compuilor clorurai Prepararea compuilor cromului, pigmeni pentru culori Minerit Prepararea unor substane chimice, materiale plastice, filme fotografice, solveni Sudur, prepararea oelului, minerit, topitorii Extracia nichelului i topire, galvanizare Leziunea Fibroz Iritaie Cancer pulmonar, bronite Azbestoz, cancer pulmonar Fibroz, cancer pulmonar Emfizem Iritaie Cancer pulmonar Fibroz Iritaie, edem

Oxizi de fier Nichel

Fibroz

Oxizi de azot Ozon Fosgen Siliciu Dioxid de sulf Talc Tetracloretilen

Cancerul nasului, cancer pulmonar, edem Emfizem Sudur, producerea explozibililor Emfizem Sudur, albire, dezodorizare Prepararea pesticidelor, materialelor Edem plastice Fibroz (silicoz) Minerit, cariere Iritaie Albire, refrigerare, fumigaii, arderea crbunilor Industria cauciucului, cosmeticelor Fibroz Edem Curare la rece, degresarea metalelor

194 TOXICOLOGIE GENERAL

B. Efecte pulmonare 1. IRITAIA Iritaia este probabil efectul cel mai frecvent sesizat al unor compui cum ar fi amoniacul sau clorul. Aceast iritaie, n special dac este grav sau persistent, determin constricia cilor respiratorii, sau conduce la edem pulmonar i complicaii bacteriene. Ali ageni iritani care produc frecvent edem pulmonar sunt oxizii de azot, ozonul i fosgenul. 2. EDEMUL PULMONAR Edemul pulmonar este o leziune de tip acut, care poate s apar ca urmare a modificrii hemodinamicii la nivelul vascularizaiei pulmonare (n insuficien cardiac =edem pulmonar cardiogen, sau n lezarea acut a sistemului nervos = edem pulmonar neurogen), sau ca urmare a creterii permeabilitii endoteliale, datorit efectului lezional al unor substane toxice (Fig.7.7.). Lichidul seroalbuminos din capilare trece n spaiul interstiial, producnd edem interstiial, sau n spaiul alveolar producnd edem alveolar. Se reduce volumul de aer din plmn i este profund perturbat schimbul de gaze, instalndu-se insuficiena respiratorie. Prin amestecarea acestui lichid sero-albuminos cu aerul se formeaz o spum persistent. Cel mai adesea, edemul pulmonar atrage dup sine complicaii de natur infecioas, care contribuie la prognosticul negativ al intoxicaiei. i substanele aflate n atmosfer sub form de particule, cum ar fi unii compui ai beriliului, borului i nichelului, pot induce apariia edemului pulmonar. 3. ATELECTAZIA Deschiderea alveolelor pulmonare ce permite schimbul de oxigen necesit o structur biochimic particular, care s evite adeziunea peretelui alveolar. Aceasta este surfactantul, un film bogat n lipide, care reduce tensiunea superficial la o valoare apropiat de zero. El se comport ca un echivalent acelular al membranei i este alctuit din proteine fixate pe lipide. n cursul anumitor procese toxice, cum ar fi anoxia, hiperoxia, inhalarea de dioxid de carbon, surfactantul poate s dispar, producndu-se o lipire a celulelor care poart denumirea de atelectazie, sau se poate desprinde de pe suprafaa celular sub presiunea edemului, n acest ultim caz leziunile avnd un anumit grad de reversibilitate.

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 195

Capilara

Interstitiu

Alveola

o Arterial
o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o

o o o Trecerea lichidului si proteinelor prin spatiul interendotelial o Edem interstitial o o Surfactant o o o Trecerea prin jonctiunile intercelulare dintre celulele epiteliale o o o o Edem alveolar

o o o o o o o o

o o o o o o

o o
o o o o o

Venos

o o o o o

Lichid si proteine o o o

Fig.7.7. Edemul pulmonar

4. PNEUMOPATIILE INTERSTIIALE Pneumopatiile interstiiale constau n intoxicaiile acute din invadarea esutului interstiial de ctre celulele cu funcie imunitar, ca rspuns la o stare inflamatorie sau iritativ. n intoxicaiile cronice are loc o lezare predominant a esutului interstiial interalveolar. 5. PLEUROPATIILE TOXICE Pleuropatiile constau dintr-o ngroare a pleurei, cazul cel mai spectaculos observndu-se dup inhalarea prelungit de fibre de silicat, cnd are loc nu numai afectarea pleurei ci i formarea de colagen i degenerescen canceroas. 6. FIBROZA PULMONAR Fibroza const ntr-o cretere a cantitii de colagen din parenchimul pulmonar, nsoit de modificarea acestuia i transformarea n esut fibrotic. Este o

196 TOXICOLOGIE GENERAL

boal grav, n care sunt implicai cel mai frecvent siliciul, azbestul i beriliul dup expunere inhalatorie, i paraquatul i bleomicina dup expunere sistemic. Silicoza, care este produs de inhalarea dioxidului de siliciu, este iniiat de captarea particulelor de ctre macrofage i ncorporarea lor n lizozomi. Consecutiv ruperii membranei lizozomale, n citoplasma macrofagelor sunt eliberate enzimele lizozomale, iar celula este digerat de propriile enzime. Dup liza celulei, particulele de siliciu sunt eliberate i pot fi fagocitate de alte macrofage, relunduse ciclul. Se pare c macrofagele lezate ar elibera unele substane care stimuleaz formarea colagenului n plmn. Att silicoza ct i azbestoza sunt considerate a reprezenta condiii premaligne. Alte substane fibrogene sunt: praful de crbune, caolinul, talcul, aluminiul, carbura de titan. 7. EMFIZEMUL PULMONAR Emfizemul const din apariia unor spaii de aer ca urmare a dilatrii alveolelor sau a dispariiei pereilor despritori. Suprafaa de schimb al gazelor este distrus, plmnul este dilatat i nu mai poate realiza n mod eficient schimbul de gaze datorit pierderii esutului i a capacitii de a reine aerul. Dei cauza major a emfizemului pulmonar este fumul de igar, i alte substane pot avea acest efect: aluminiul, oxidul de cadmiu, oxizii de azot, ozonul. 8. RSPUNSURI ALERGICE Acest tip de rspuns este n general indus de spori de mucegaiuri, contaminani bacterieni, scame de bumbac, detergeni ce conin enzime derivate din Bacillus subtilis. i unele pulberi organice pot declana reacii alergice de tip I, determinnd apariia rinitei, bronhospasmului, vasodilataiei. 9. CANCERE PULMONARE Cancerele pulmonare spontane sunt o boal destul de rar, att la om ct i la animale. n urm cu mai bine de un secol, cancerul pulmonar reprezenta doar 0,5% din cancerele detectate la autopsie. La nceputul secolului XX, s-a constatat o cretere dramatic a incidenei acestei forme de cancer, mai ales dup cel de-al doilea rzboi mondial, iniial la brbai i mai apoi i la femei. La ora actual, cancerul pulmonar este prima cauz de deces datorit neoplaziei maligne la brbai, iar la femei ncepe s ia locul cancerului de sn.

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 197

Studiile epidemiologice au artat c principalul factor de risc este inhalarea fumului de igar. Alte substane capabile s induc apariia cancerului pulmonar sunt azbestul, arsenul, cromaii, nichelul, uraniul. Se pare c un rol important n iniierea procesului carcinogen, att de ctre particule, ct i de alte substane, l are rspunsul inflamator al plmnului, care conduce la stres oxidativ n celulele expuse. Speciile reactive de oxigen sunt eseniale pentru activarea proto-oncogenelor de ctre fibrele carcinogene. De asemenea, carcinogenii pot fi activai la nivel pulmonar de atacul speciilor reactive de oxigen sau al celulelor care produc aceste specii, cum sunt celulele activate de inflamaie, macrofagele i leucocitele polimorfonucleare. C. Efecte asupra cilor respiratorii superioare Unele substane, prin iritarea nervului vag, produc constricie i ngreuneaz ptrunderea aerului. Toxicii iritani pot induce edem laringian sau laringospasm, care au drept consecin asfixia. Afectarea mucusului i a cililor vibratili de ctre unii compui toxici poate determina apariia unor procese obstructive la nivelul broniilor i broniolelor. Astfel, iritantele induc o hipersecreie de mucus care face dificil ptrunderea aerului, n timp ce dioxidul de sulf fluidific mucusul. Oxizii de azot, de sulf, formaldehida, vaporii de cadmiu, crom, nichel, fumul de igar, acioneaz toxic asupra celulelor ciliate, producnd iniial o paralizie a vibraiei i apoi dispariia cililor, ceea ce antreneaz moartea celulelor. D. Efecte pulmonare consecutiv expunerii pe o alt cale Exist din ce n ce mai multe date care confirm faptul c unele medicamente pot induce lezare pulmonar care este responsabil de tulburri funcionale sau chiar de decese. Reaciile pulmonare produse de medicamente pot fi: bronhospasm, edem, hemoragie, fosfolipidoz, fibroz sau efecte asupra sistemului vascular ce irig plmnii. Mecanismele prin care se produc aceste reacii sunt diferite: 1. Generarea de specii reactive de oxigen Prin acest mecanism se explic toxicitatea pulmonar a unor medicamente cum sunt nitrofurantoinul i bleomicina i toxicitatea ierbicidului paraquat, substane care induc fibroz pulmonar. Aceste molecule sufer, n condiii aerobe i n prezena NADPH, o reducere cu un electron, rezultnd un radical liber care reacioneaz imediat cu oxigenul pentru a regenera compusul printe i intr astfel ntr-un ciclu redox, care genereaz specii reactive de oxigen. n cazul bleomicinei, toxicitatea pulmonar este mediat, cel puin parial, de formarea unui complex bleomicin-fier care genereaz specii toxice de oxigen. Se pare c plmnul devine

198 TOXICOLOGIE GENERAL

inta toxicitii acestor substane datorit concentraiilor crescute de oxigen de la acest nivel. i alte citostatice, ca ciclofosfamida i metotrexatul, pot produce fibroz pulmonar. 2. Inducerea edemului pulmonar i a insuficienei respiratorii Supradozarea antidepresivelor triciclice de tipul amitriptilinei poate conduce la edem pulmonar i sindrom de insuficien respiratorie. Dei deprimarea respiraiei a fost ntlnit n 11% din cazurile de intoxicaie acut cu antidepresive triciclice, mecanismul responsabil de efectele pulmonare nu este nc elucidat, dar se pare c aceste substane ar determina o cretere a permeabilitii endoteliului. 3. Fosfolipidoza indus de medicamente Fosfolipidoza reprezint o acumulare excesiv a fosfolipidelor n esut, nsoit de infiltrarea macrofagelor n alveole. Medicamentele care produc acest efect au anumite caracteristici structurale, care implic prezena unei poriuni lipofile la un capt al moleculei i a unei grupri aminice cationice la cellalt capt. Mecanismul de producere a fosfolipidozei nu este cunoscut cu certitudine, dar pare a fi direct proporional cu gradul de acumulare a acestor substane n plmn. Datorit proprietilor fizico-chimice, ele se leag probabil de fosfolipide i le reduc degradarea metabolic, sau au rol direct n inhibarea fosfolipazelor. Din aceast clas fac parte medicamente cu aciune farmacologic diferit: - anorexigene: clorfentermin, cloforex, fenfluramin - antiaritmice: amiodaron - antimalarice: clorochin - neuroleptice: clorpromazin.

PATOLOGIA TOXIC A FICATULUI Ficatul, cel mai mare organ din organism, este adesea inta aciunii substanelor toxice. Vulnerabilitatea sa se datoreaz mai multor factori: majoritatea xenobioticelor ptrund n organism prin tractul gastrointestinal i, dup absorbie, sunt transportate de ctre vena port n ficat, care este astfel primul organ expus la substanele toxice la nivelul ficatului se ntlnete cea mai mare concentrare de enzime de metabolizare a xenobioticelor, iar metaboliii activi formai sunt mai susceptibili s reacioneze cu celulele adiacente locului de producere Ficatul are ns o capacitate imens de auto-reparare i regenerare, de aceea multe din leziuni se refac dup ncetarea expunerii la substana toxic. Totui, n

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 199

unele situaii mecanismele de aprare sunt depite i se instaleaz insuficiena hepatic, ciroza hepatic n cazul expunerii repetate, sau cancerul hepatic. Fiziologia ficatului Structura ficatului const din rnduri de celule hepatice (hepatocite sau celule parenchimatoase), care sunt strbtute de capilare specializate, numite sinusoide. Pereii sinusoidelor conin celule cu capacitate de fagocitoz, celulele Kupffer, al cror rol este de a ngloba i distruge particulele solide, bacteriile, celulele sanguine moarte, etc. Principalul aport de snge din ficat provine din vascularizaia intestinal. Aceste vase, mpreun cu cele care vin dinspre splin i stomac, se unesc pentru a forma vena port. La intrarea n ficat, vena port se divide, irignd sinusoidele (Fig.7.8.). Sngele perfuzeaz ficatul i iese prin venele hepatice, care se unesc n vena cav inferioar, ajungnd apoi n inim. Artera hepatic asigur ficatului sngele arterial oxigenat. Acizii biliari i multe xenobiotice trec din hepatocit n canaliculele care transport bila i care se unesc formnd canale ce urmeaz ramurile venei porte. Aceste canale converg n canalul hepatic, prin care bila se vars n duoden. Vezica biliar reine bila pn n momentul cnd este golit n intestin. Ficatul are trei funcii principale: de depozitare, de metabolism i de sintez: - glucoza este convertit n glicogen i este depozitat, iar atunci cnd apare un necesar energetic este convertit din nou n glucoz - lipidele, vitaminele liposolubile i alte substane nutritive sunt depozitate n ficat - acizii grai sunt metabolizai i transformai n lipide, care se conjug cu proteinele sintetizate n ficat, fiind eliberai n circulaie sub form de lipoproteine - sunt sintetizate unele proteine funcionale, cum ar fi enzimele i factorii de coagulare - este principalul sediu al metabolismului xenobioticelor. Tipuri de leziuni hepatice Substanele toxice pot afecta toate funciile majore ale ficatului. Tipul de rspuns depinde de substana toxic, de doz, de populaia celular afectat i de tipul de expunere, acut sau cronic (Tabel VII.6.). i n cazul ficatului exist tot mai multe date care sugereaz rolul inflamaiei n producerea hepatotoxicitii. Astfel, leziunea iniial determin necroz localizat i activeaz macrofagele fixate n esut. Acest eveniment declaneaz eliberarea de produi inflamatori, printre care i factorul necrozant tumoral, care stimuleaz apoptoza i proliferarea celular, dar i eliberarea sau producerea de specii reactive de oxigen.

200 TOXICOLOGIE GENERAL

Fig.7.8. Circulaia sanguin i biliar n ficat (Niesink et al., 1996)

A. Leziuni citotoxice acute 1. STEATOZA Steatoza hepatic reprezint acumularea n citoplasma celulelor parenchimului hepatic a unor vezicule de lipide, ficatul ajungnd s conin mai mult de 5% lipide. Mecanismul de producere a acestei leziuni poate fi diferit, dar n principiu este corelat cu tulburri ale sintezei sau secreiei lipoproteinelor. Rolul steatozei n lezarea hepatic nu este clar neles. Infiltrarea lipidelor poate induce degenerare hepatocelular, iar acidul valproic poate produce steatoz asociat cu letalitate. 2. DEGENERAREA PARENCHIMATOAS Aceasta este cea mai blnd form de degenerare hepatic. Hepatocitele se umfl i citoplasma prezint granulaii eozinofile, ca urmare a umflrii mitocondriilor. Dac lezarea este mai sever, n celule este reinut apa, uneori chiar i proteinele plasmatice, iar celulele hepatice se umfl considerabil. Acest tip special de

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 201

degenerare poart denumirea de degenerare hidropic. Un exemplu de substan care produce un astfel de efect este halotanul Tabel VII.6. Exemple de substane hepatotoxice i leziunile asociate Necroz i steatoz Tetraclorur de carbon Cloroform Tricloretilen Tetracloretilen Brombenzen Tioacetamid Etionin Colestaz Clorpromazin Promazin Tioridazin Mepazin Amitriptilin Hepatite Iproniazid Izoniazid Imipramin 6-Mercaptopurin Carcinogenez (la animale de experien) Aflatoxina B1 Alcaloizii pirolizidinici Cycasin Safrol

Dimetilnitrozamin Ciclohexilamid Tetraciclin Paracetamol Mitomicin Puromicin Acid tanic Imipramin Diazepam Metandrolon Mestranol Estradiol Metoxifluoran Papaverin Fenilbutazon Colchicin

Fosfor Beriliu Alcool etilic Galactozamin Aflatoxin Alcaloizi pirolizidinici Acid valproic Carbazon Clorotiazid Metimazol Sulfanilamid Faloidin Halotan Zoxazolamin Indometacin Metildopa

Dimetilbenzantracen Dialchil nitrozamine Bifenili policlorurai Clorur de vinil

Acetilaminofluoren Uretan

B. Leziuni colestatice COLESTAZA este rezultatul suprimrii sau ntreruperii fluxului biliar, ce poate avea cauze hepatice sau extrahepatice: Inflamarea sau blocarea canalelor biliare, care conduc la reinerea srurilor biliare i la acumularea bilirubinei, fapt ce poate produce icter

202 TOXICOLOGIE GENERAL

Modificarea permeabilitii membranei hepatocitelor sau a canaliculelor biliare Diagnosticul biochimic este uor de realizat. C. Hepatopatii cronice 1. HEPATITE CRONICE ACTIVE Acestea se caracterizeaz printr-o inflamaie extins n zona portal i periportal, cu infiltraii de limfocite i celule plasmatice, asociat adesea cu o necroz unicelular. Sindromul apare n general dac, dup producerea unei leziuni hepatice, se continu tratamentul cu aceste medicamente. 2. FOSFOLIPIDOZA Fosfolipidoza se caracterizeaz prin prezena unor hepatocite umflate, spumoase. Apare numai dup administrare prelungit i poate evolua la ciroz. 3. CIROZA Ciroza este o boal progresiv care se caracterizeaz prin depunerea de colagen n ntreg ficatul. Arhitectura hepatic normal este transformat n noduli hiperplastici, cu structur anormal. Acumularea de material fibros determin modificri severe ale circulaiei sanguine i ale proceselor metabolice i de detoxifiere normale. Aceast situaie poate la rndul ei antrena leziuni suplimentare, putndu-se ajunge la insuficien renal. Ciroza nu este reversibil i are un prognostic de supravieuire foarte redus. Rezult de obicei n urma expunerii cronice la substane chimice, printre care: etanolul, arsenul, alcaloizii pirolizidinici, vitamina A. 4. TUMORI Adenoamele hepatocelulare sunt tumori benigne, care au fost asociate cu utilizarea contraceptivelor orale. Riscul este minim, dar poate crete cu creterea duratei de utilizare (peste 5 ani) i cu doza administrat. Carcinomul hepatocelular este forma tipic de tumoare hepatic primar, dei mai pot fi observate i angiosarcom, carcinom glandular sau carcinom nedifereniat al celulelor hepatice. Se caracterizeaz printr-o mare capacitate de a produce metastaze. Substane care pot induce astfel de cancere, identificate n principal la animale de experien, sunt prezentate n Tabelul VII.6.

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 203

PATOLOGIA TOXIC A RINICHIULUI Rinichiul este un organ extrem de complex, att din punct de vedere anatomic ct i fiziologic. Funcia primar a rinichiului este excreia produilor de degradare, dar el are un rol important i n reglarea homeostaziei organismului, n reglarea volumului lichidului extracelular i a balanei electrolitice. Alte funcii se refer la formarea hormonilor care influeneaz funciile metabolice, cum ar fi renina, implicat n producerea angiotensinei i a aldosteronului, precum i a unor prostaglandine. Substanele toxice renale pot afecta toate aceste funcii. Susceptibilitatea rinichiului la aciunea substanelor toxice Aceasta poate fi atribuit, cel puin parial, trsturilor fiziologice i anatomice unice ale acestui organ: Dei rinichiul constituie doar aproximativ 0,5% din masa corporal, el primete ntre 20 i 25% din fluxul cardiac, ceea ce face ca orice substan din circulaia sistemic s ajung n acest organ n cantitate relativ mare. Procesele care intervin n concentrarea urinei servesc i la concentrarea potenialelor substane toxice n lichidul tubular, astfel nct concentraii plasmatice netoxice pot conduce la concentraii renale toxice. Concentrarea progresiv a substanelor toxice n nefron poate determina precipitarea n lumen a compuilor relativ insolubili, producnd insuficien renal acut ca urmare a obstruciei tubulare. Existena unor sisteme de transport activ la nivelul celor trei segmente ale tubului renal poate contribui la acumularea substanelor toxice. Astfel, la nivel renal exist dou sisteme de transport al anionilor: transportorul anionilor organici 1 (OAT1), care este specific pentru rinichi, i transportorul anionilor organici 3 (OAT3), care se ntlnete att n rinichi, ct i n ficat i creier, precum i dou sisteme de transport al cationilor: transportorul cationilor organici 1 (OCT1), regsit n rinichi i ficat, i transportorul cationilor organici 2 (OCT2), specific rinichiului. OAT1 a fost implicat n acumularea la nivel renal a unor substane nefrotoxice cum ar fi antibioticul cefalosporinic cefaloridina, sau a micotoxinei ochratoxina A, n transportul acesteia din urm intervenind i OAT3. Deoarece majoritatea nefrotoxinelor sunt compui hidrofili care ajung n rinichi sau ca substane printe, sau dup metabolizare n ficat, relaia ficat-rinichi trebuie luat ntotdeauna n considerare n cazul nefrotoxicitii (Fig.7.9.). Posibilitatea bioactivrii compuilor exogeni la nivel renal, datorit prezenei unor sisteme de metabolizare a xenobioticelor, dei n concentraii mai reduse dect n ficat. Datorit instabilitii unor metabolii reactivi, capabili s se lege covalent de macromoleculele tisulare din proximitatea locului de

204 TOXICOLOGIE GENERAL

activare, este posibil ca formarea lor s aib loc mai degrab la nivel renal dect hepatic. Deoarece rinichiul se afl sub controlul sistemului nervos simpatic, substanele care acioneaz direct asupra nervilor simpatici pot modifica rezistena vascular la nivel renal sau secreia de renin, afectnd funcia renal. i rinichiul, ca i ficatul de altfel, prezint o capacitate remarcabil de regenerare.

Fig.7.9. Relaia hepato-renal ntre principalii transportori prin mecanism activ

Mecanismele fiziopatologice ale proceselor nefrotoxice Dei substanele toxice pot leza oricare parte a nefronului, ele afecteaz de obicei segmentul cel mai activ din punct de vedere metabolic, i anume tubii renali. Se ntlnesc ns i leziuni la nivel glomerular. Leziunile se produc de obicei prin: - 1) contact de tip caustic cu pereii diferitelor segmente ale nefronului, care determin alterarea permeabilitii, consecina fiind ieirea proteinelor i a hematiilor sau reducerea procesului de filtrare ca urmare a formrii unor zone sclerotice de esut cicatrial - 2) mecanisme obstructive, ca urmare a depunerii substanei toxice, a metaboliilor sau a unui imunocomplex n nefron sau n uretere; - 3) alterarea proceselor enzimatice locale implicate n metabolizare sau n secreia sau reabsorbia activ.

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 205

Principalele sindroame toxice renale (Fig. 7.10.) 1. INSUFICIENA RENAL ACUT Insuficiena renal acut este una din cele mai frecvente manifestri ale lezrii nefrotoxice. Ea se caracterizeaz prin deteriorarea brusc a funciei renale, cu incapacitatea rinichiului de a menine balana metabolic. Se poate datora urmtorilor factori: - 1. Insuficienei acute pre-renale, cum ar fi pierderea sngelui sau lichidelor, ocului sau insuficienei cardiace congestive - 2. Necrozei acute tubulare, care este fenomenul nefrotoxic cel mai frecvent i este asociat cu o necroz patologic, localizat de obicei la nivelul tubilor proximali. Ea se poate datora lezrii toxice directe, lezrii ischemice consecutive hipoperfuziei renale sau pigmenturiei (mioglobinurie datorit rabdomiolizei sau hemoglobinurie ca urmare a hemolizei). Toxicitatea direct este cauza a aproximativ 35% din cazurile de necroz tubular. Funcia renal se deterioreaz rapid, aprnd azotemie. Evoluia este n general trifazic, cu o faz de iniiere ca urmare a expunerii la toxic, cnd se produc modificri importante ale funciei renale, urmat de faza de stare, caracterizat prin deprecierea continu a funciei renale, i n final, dac leziunea nu a fost prea sever, de faza de recuperare, nsoit de proliferare celular. - 3. Obstruciei tractului urinar ca urmare a cristaluriei, cum este cazul oxalatului de calciu depus n intoxicaia cu etilenglicol - 4. Nefritei interstiiale acute, care are similitudini clinice cu necroza tubular acut, dar care se caracterizeaz printr-un infiltrat celular ce separ structurile tubulare. Majoritatea nefritelor interstiiale acute sunt cauza hipersensibilitii i pot fi nsoite de reacii alergice sistemice, cum ar fi febr, eritem sau eozinofilie. Cei mai muli pacieni prezint hematurie i leucociturie. - 5. Vasculitelor acute, care de obicei sunt tot de natur alergic. 2. INSUFICIENA RENAL CRONIC Insuficiena renal cronic este definit ca orice boal care determin scderea progresiv a funciei renale pe o perioad lung de timp. Cauzele insuficienei renale cronice pot fi: - 1. Nefrita interstiial cronic. Aceasta implic distrugerea tubilor renali ntr-o perioad lung de timp, fiind nsoit de atrofie tubular, fibroz i un infiltrat celular variabil, uneori asociat cu necroza papilar. Tubii renali nu se pot adapta la modificarea funciei renale i se produc tulburri metabolice,

206 TOXICOLOGIE GENERAL

Arteriola aferenta Glomerul Parenteral Amfotericina Antihipertensive Ciclosporine Diuretice AINS Vasculite (hipersensibilitate) Amfetamine Peniciline Sulfamide AINS Nefrita interstitiala acuta Antibacteriene beta-lactamice rifampicina vancomicina sulfamide AINS Alopurinol Tub proximal

Arteriola eferenta Sindrom nefrotic Metale (Au, Hg) AINS Penicilamina Necroza tubulara acuta (proximala) Metale (As, Bi, Cr, Hg, U) Aminoglicozide Glicoli Anestezice fluorurate Substante de contrast Pigmenti Citostatice

A N S A L U I H E N L E

Necroza tubulara acuta (distala) Amfotericina Glicoli Cisplatin

Nefrita interstitiala cronica Combinatii de analgezice Metale (Pb, Cd, Be, Li, Ge) Ciclosporine Nitrozuree

Tub distal

C A N A L C O L E C T O R

Obstructie Anticolinergice Bromcriptina Ergotamina Fluorochinolone Metotrexat Sulfamide Aciclovir

Fig.7.10. Procesele nefrotoxice majore i segmentul din nefron implicat

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 207

cum ar fi acidoza metabolic hipercloric, depleia de sodiu, sau hiperkalemia n faza de debut. Fiind lezate celulele ce secret eritropoetina, apare anemia. Se observ proteinurie moderat. - 2. Necroza papilar - 3. Glomeruloscleroza cronic 3. SINDROMUL NEFROTIC Sindromul nefrotic se caracterizeaz prin proteinurie masiv (mai mult de 3 g/zi la adult), hipoalbuminemie, edem i hiperlipidemie. Mecanismul const n lezarea barierei glomerulare care n mod normal mpiedic trecerea acestor macromolecule din lumenul capilar n urin. Leziunile glomerulare pot progresa la insuficien renal dac procesul patologic continu. Substanele toxice induc acest sindrom prin eliberarea n snge de antigeni mascai sau prin dereglarea balanei imunitare. PATOLOGIA TOXIC A SNGELUI I A MDUVEI HEMATOFORMATOARE Substanele toxice pot aciona asupra sngelui prin: Afectarea mduvei osoase hematoformatoare Afectarea elementelor figurate din sngele circulant Ambele procese. A. Afectarea hematopoezei Datorit timpului de via redus al celulelor sanguine, la nivelul mduvei osoase are loc un proces intens de producere a celulelor, care este foarte sensibil la aciunea substanelor toxice. Proliferarea celulelor n mduva osoas poate fi afectat de deficiene nutriionale, de factori imunologici, sau de efecte directe ale substanelor toxice. Rezultatul poate fi : - o producie anormal a elementelor figurate = displazie - o producie sczut = hipoplazie - inhibarea complet a produciei = aplazie sau pancitopenie - producia unor celule maligne, datorit modificrilor ADN. Uneori sunt afectate toate liniile celulare, alteori este afectat una singur.

208 TOXICOLOGIE GENERAL

1. INHIBAREA HEMATOPOEZEI Inhibarea hematopoezei are drept rezultat reducerea numrului celulelor sanguine circulante, cel mai adesea ca urmare a incapacitii celulelor precursoare din mduv de a produce elemente mature. 1. 1. Anemia aplastic Anemia aplastic este definit drept sindromul de pancitopenie (anemie, leucopenie, trombocitopenie), determinat de hipoplazia mduvei hematoformatoare, n care celulele hematopoetice normale sunt nlocuite de celule adipoase. n mod normal, nici n sngele periferic, nici n mduv nu se regsesc celule anormale. Substane care induc anemie aplastic sunt: cloramfenicolul, fenilbutazona, srurile de aur, benzenul. Alte substane care au fost corelate cu apariia acestei afeciuni sunt: antitiroidienele, unele anticonvulsivante (difenilhidantoin, trimetadon), sulfamidele, antimalaricele (mepacrin), antidiabeticele (clorpropamid, tolbutamid), lindanul, toluenul. 1.2. Aplazia hematiilor se caracterizeaz prin anemie i este observat consecutiv unor infecii virale, n special cu membri ai familiei parvovirusurilor, dar i dup administrarea unor medicamente i substane chimice. Patogeneza bolii nu este cunoscut. 1.3. Aplazia liniei albe produce n general o reducere semnificativ a numrului granulocitelor, nsoit de creterea sensibilitii la infecii. 1.4.Absena megacariopoezei conduce la trombocitopenie nsoit de tendin crescut de apariie a hemoragiilor cu diferite localizri: piele, rinichi, retin, creier. 2. BOLI MALIGNE ALE SNGELUI 2.1. Leucemia acut se caracterizeaz printr-o acumulare de celule medulare tinere (mieloblati, promielocite, monoblati, limfoblati) la nivelul mduvei hematoformatoare i de obicei i n snge sau chiar n alte organe. Acestea provin din mutaia unei singure celule tinere. Proliferarea celulelor leucemice n mduv suprim hematopoeza normal, simptomele care se observ fiind: anemia, sensibilitatea crescut la infecii, creterea tendinei de producere a hemoragiilor. n absena unui tratament corespunztor, decesul poate surveni n cteva sptmni. 2.2. Leucemia cronic apare de obicei la o vrst mai trzie i pacienii pot supravieui mai mult de 10 ani fr tratament. Este aproape invariabil fatal, deoarece se transform n leucemie acut.

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 209

2.3. Limfoamele maligne constau ntr-o proliferare a celulelor limfatice n nodulii limfatici sau n esutul limfatic extranodal. Primele semne ale bolii sunt inflamarea de obicei nedureroas a nodulilor limfatici periferici i boala poate evolua rapid sau poate rmne asimptomatic perioade lungi de timp. Limfoamele maligne pot disemina n aproape toate organele, iar exemple de astfel boli sunt: boala Hodgkin, mieloamele multiple, limfoamele nonHodgkin. Substane care produc boli maligne ale sngelui sunt: benzenul, azbestul, oxidul de etilen, metalele grele, stirenul, clorofenolii, clorura de vinil, citostaticele, acestea din urm n special la asociere cu radioterapia. B. Afectarea sngelui periferic Celulele cele mai afectate din sngele periferic sunt hematiile. Substanele toxice pot produce distrugerea rapid a celulelor din circulaie prin hemoliz, sau pierderea funciei de transport al oxigenului prin aciune asupra hemoglobinei. 1. HEMOLIZA const n distrugerea rapid a hematiilor din circulaie i poate fi intravascular sau extravascular. Ea se poate produce datorit: - formarii unei hemoglobine anormale - formarii unor hematii cu structur anormal a membranei - deficienei enzimelor glicolitice - legrii antigenului de membrana eritrocitar urmat de fixarea complementului i reacia cu anticorpii, prin intermediul complexelor imune sau datorit producerii de autoanticorpi - lezrii fizice sau chimice a membranei hematiilor prin mecanism oxidativ. Substane care pot induce anemie hemolitic prin mecanisme neimunitare sunt: hidrogenul arseniat, sulfatul de cupru, plumbul, veninurile de arpe sau de pianjeni. Deficitul de glucozo-6-fosfat dehidrogenaz joac de asemenea un rol important n producerea anemiilor hemolitice. 2. ACIUNE ASUPRA HEMOGLOBINEI Aceasta se poate produce prin: - transformarea hemoglobinei n compui care nu mai pot transporta oxigenul: carboxihemoglobin (CO), cianhemoglobin (HCN), methemoglobin (oxidani), sulfhemoglobin (H2 S), sau descompunerea hemoglobinei sub aciunea acizilor - perturbarea sintezei hemului de ctre substane toxice cum ar fi plumbul, care produce anemie saturnin.

210 TOXICOLOGIE GENERAL

PATOLOGIA TOXIC A PIELII Pielea, care acoper aproape n ntregime corpul uman i cel al animalelor, este expus la numeroase substane chimice cum sunt: produsele cosmetice, produsele menajere, medicamentele de uz topic, poluanii industriali. Leziunile la nivelul pielii apar n urma expunerii cutanate la substana toxic, sau sunt efecte ce apar consecutiv ptrunderii substanei toxice pe o alt cale. Majoritatea compuilor acioneaz numai asupra pielii, dar unii pot s afecteze i structurile anexe: prul, glandele sebacee, glandele sudoripare. Principalele leziuni induse de substanele toxice la nivelul pielii sunt: 1. IRITAIA PRIMAR Iritaia primar const dintr-un rspuns inflamator al pielii, cu caracter local i reversibil, ce apare n urma contactului cu o substan chimic care are una din urmtoarele caracteristici: - produce un pH diferit de cel fiziologic - are aciune oxidant - are aciune deshidratant - are aciune degresant Astfel de compui sunt acizii i bazele caustice, solvenii i detergenii. Iritaia se produce la locul de contact, gravitatea fiind variabil, de la hiperemie, edem sau apariia de vezicule, pn la ulceraie. 2. COROZIUNEA Coroziunea const din dezintegrarea sau alterarea ireversibil a pielii n regiunea de contact cu substana toxic, producndu-se ulcere, necroz i cicatrici. Substanele incriminate sunt aceleai ca i n cazul iritaiei primare, dar se gsesc n concentraii mai mari i timpul de contact este mai lung. 3. DERMATITELE ALERGICE Aceste leziuni se produc printr-un proces imun n care substana toxic acioneaz ca un antigen sau o hapten. Consecina este apariia unei reacii la locul de contact (eritem, eczem), sau a unei urticarii generalizate. Dermatitele alergice de contact sunt diagnosticate n aproximativ 25% din bolile de piele profesionale, iar mecanismul de producere implic o reacie imun de tip IV. Substane care pot produce astfel de reacii sunt: neomicina, antihistaminicele, anestezicele locale (benzocaina), antisepticele (mertiolat)

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 211

aplicate local, unele vegetale, compui metalici (nichel, beriliu), colorani, cosmetice, produse industriale. 4. URTICARIA Urticaria este o reacie n general local, care apare la cteva minute sau ore de la contactul cu pielea a anumitor substane chimice i care produce hiperemie i plac urticarian ce dispare de obicei dup 24 de ore. Ea se poate explica printr-un mecanism imun sau nu. Cnd reacia este mediat de un mecanism imunologic, leziunea poate fi localizat sau situat i n alte zone, i poate fi nsoit de simptome respiratorii sau gastrointestinale i chiar de anafilaxie. Substane care pot determina apariia urticariei sunt: animale i plante (unii peti, usturoiul, latexul de cauciuc, lichenii, henna), unele alimente (ou, nuci, fructe de mare), metale (clorura de cobalt, nichelul, cuprul), balsamul de Peru, salicilatul de metil, esterii acidului nicotinic, acidul benzoic, formaldehida, terebentina, aspirina, unele antibiotice. 5. LUPUSUL ERITEMATOS DE ORIGINE TOXIC Este o boal considerat autoimun, care se manifest sub forma unor plci eritematoase localizate cu predilecie pe obraji, ce au aspectul de fluture sau de liliac. 6. REACII TOXICE INDUSE DE LUMIN Aceste reacii implic expunerea la lumin i se manifest la nivel cutanat, n urma ptrunderii pe o alt cale sau a aplicrii topice a substanei toxice. Dup mecanismul prin care se produc, pot fi de dou tipuri: fotoalergie sau fototoxicitate. 6.1. Fototoxicitatea este mai frecvent ntlnit. Substana toxic, n urma absorbiei de radiaii UV, genereaz specii reactive de oxigen, care la rndul lor declaneaz o cascad de reacii ce implic activarea protein kinazei C i a tirozin kinazei, apoi a ciclooxigenazei i n final producerea de prostaglandine care determin apariia unui proces inflamator la nivelul pielii. Reaciile cutanate care se observ sunt eritemul tardiv, urmat de hiperpigmentare i de descuamare. Substane care acioneaz n acest mod sunt: chinolonele, clorotiazida, fenotiazinele, unele sulfamide, derivaii acidului aminobenzoic. 6.2. Fotoalergia presupune transformarea substanei toxice n prezena luminii ntr-un antigen sau o hapten. Clinic se observ uneori apariia imediat a urticariei, n timp ce n alte cazuri apar papule sau eczeme dup o perioad de laten.

212 TOXICOLOGIE GENERAL

Substane incriminate sunt : clorpromazina, prometazina, clorpropamidul, sulfanilamida, unele tiazide. Se pare c expunerea concomitent la radiaii UV poate favoriza i apariia unor cancere cutanate n cazul antibioticelor chinolonice sau a psoralenului. 7. CANCERE CUTANATE Acestea pot fi induse de substane de tipul gudroanelor, derivailor de creozot, arsenului, hidrocarburilor aromatice policiclice. 8. EFECTE ASUPRA STRUCTURILOR ANEXE ALE PIELII 8.1. Efectele asupra prului, constau n pierderea acestuia (alopecie) i sunt determinate de citostatice, arsen, hormoni androgeni, antitiroidiene, captopril, carbamazepin, cimetidin, clorochin, hexaclorobenzen, sruri de aur, plumb, mercur, tiocianai, acid valproic, unele AINS. 8.2. Efectele asupra glandelor sebacee constau n general dintr-o cretere a capacitii lor de a secreta sebumul, ceea ce conduce la apariia acneei. Substanele cele mai frecvent implicate sunt hidrocarburile clorurate, care produc cloroacnee dup contact sau n urma expunerii sistemice.

BIBLIOGRAFIE
1. ANDERSEN H.R., NIELSEN J.B., GRANDJEAN P.: Toxicologic evidence of developmental neurotoxicity of environmental chemicals, Toxicology, 144:121-127, 2000 AQUILANTE C.L., LETRENT S.P., POLLACK G.M., BROUWER K.L.R.: Increased brain P-glycoprotein in morphine tolerant rats, Life Sciences, 66(4):47-51, 2000 BALLANTYNE B., MARRS T., TURNER P.: General & Applied Toxicology. Abridged Edition, MacMillan Press, London, 1995, p.1-1005 BARTHE L., WOODLEY J., HOUIN G.: Gastrointestinal absorption of drugs: methods and studies, Fundam.Clin.Pharmacol., 13:154-168, 1999 BAUD F.J.: Pharmacokinetic-pharmacodynamic relationships. How are they useful in human toxicology?, Toxicology Letters, 102-103:643-648, 1998 BHATNAGAR V.K., TALASKA G.: Carcinogen exposure and effect biomarkers, Toxicology letters, 108:107-116, 1999 BIGAZZI P.E.: Autoimmunity caused by xenobiotics, Toxicology, 119:1-21, 1997 BOOBIS A.R.: Interindividual variability in metabolic activation in humans in vivo, Environmental Toxicology and Pharmacology, 2:161-163, 1996 BORM P.J.A., DRISCOLL K.: Particles, inflammation and respiratory tract carcinogenesis, Toxicology Letters, 88:109-113, 1996 BOUNIAS M.: Trait de toxicologie gnrale, Springer-Verlag France, 1998, 777p. BURCHELL B., SOARS M., MONAGHAN G., CASSIDY A., SMITH D., ETHELL B.: Drug-mediated toxicity caused by genetic deficiency of UDP-glucuronosyltransferases, Toxicology Letters, 112-113:333-340, 2000 CALABRESE E.J.: Toxicological consequences of multiple chemical interactions: a primer, Toxicology, 105:121-135, 1995 COLLINS J.M.: Inter-species differences in drug properties, Chemico-Biological Interactions, 134:237-242, 2001 COMBES R.D.: The use of structure-activity relationships and markers of cell toxicity to detect non-genotoxic carcinogens, Toxicology in Vitro, 14:387-399, 2000 COSTA L.G., GUIZZETTI M., LU H., BORDI F., VITALONE A., TITA B., PALMERY M., VALERI P., SILVESTRINI B.: Intracellular signal transduction pathways as targets for neurotoxicants, Toxicology, 160:19-26, 2001 COSTA L.G.: Biochemical and molecular neurotoxicology: relevance to biomarker development, neurotoxicity testing and risk assessment, Toxicology Letters, 102103:417-421, 1998 COTRAU M., POPA L., STAN T., PREDA N., KINCSES-AJTAY M.: Toxicologie, Editura Didactica si Pedagogica, Bucuresti, 1991, 63 p. DARCY P.F., MCELNAY J.C., WELLING P.G.: Mechanisms of Drug Interactions, Springer-Verlag, Berlin, 1996, 363p. DCRUZ D.: Autoimmune diseases associated with drugs, chemicals and environmental factors, Toxicology Letters, 112-113:421-432, 2000

2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11.

12. 13. 14. 15.

16.

17. 18. 19.

214 TOXICOLOGIE GENERAL 20. DALY A.K., FAIRBROTHER K.S., SMART J.: Recent advances in understanding the molecular basis of polymorphism in genes encoding cytochrome P450 enzymes, Toxicology Letters, 102-103:143-147, 1998 21. EMMENDOERFFER A., HECHT M., BOEKER T., MUELLER M., HEINRICH U.: Role of inflammation in chemical-induced lung cancer, Toxicology Letters, 112113:185-191, 2000 22. ENDOU H.: Recent advances in molecular mechanisms of nephrotoxicity, Toxicology Letters, 102-103:29-33, 1998 23. EYSTER K.M.: Introduction to Signal Transduction, Biochemical Pharmacology, 55:1927-1938, 1998 24. FONNUM F., LOCK E.A.: Cerebellum as a target for toxic substances, Toxicology Letters, 112-113:9-16, 2000 25. FOURNIER E.: Toxicologie, Ellipses, Paris, 1993, 848 p. 26. GANEY P.E., ROTH R.A.: Concurrent inflammation as a determinant of susceptibility to toxicity from xenobiotic agents, Toxicology, 169:195-208, 2001 27. GHERSI-EGEA J.F., LEININGER-MULLER B., CECCHELLI R., FENSTERMACHER J.D.: Blood-brain interfaces: relevance to cerebral drug metabolism, Toxicology Letters, 82/83:645-653, 1995 28. GILGUN-SHERKI Y., MELAMED E., OFFEN D.: Oxidative stress-induced neurodegenerative diseases: the need for antioxidants that penetrate the blood brain barrier, Neuropharmacology, 40:959-975, 2001 29. GLATT H., ENGELKE C.E.H., PABEL U., TEUBNER W., JONES A.L., COUGHTRIE M.W.H., ANDRAE U., FALANY C.N., MEINL W.: Sulfotransferases: genetics and role in toxicology, Toxicology Letters, 112-113:341-348, 2000 30. GLATT H.: Sulfotransferases in the bioactivation of xenobiotics, Chemico-Biological Interactions, 129:141-170, 2000 31. GLOOR S.M., WACHTEL M., BOLLINGER M.F., ISHIHARA H., LANDMANN R., FREI K.: Molecular and cellular permeability control at the blood-brain barrier, Brain Research Reviews, 36:258-264, 2001 32. GOLDFRANK L.R., FLOMENBAUM N.E., LEWIN N.A., WEISMAN R.S., HOWLAND M.A., HOFFMAN R.S.: Goldfranks Toxicologic Emergencies, 6th edition, Appleton&Lange, Stamford, 1998, p.1-513 33. GUSTAFSSON J.-A.: Receptor-mediated toxicity, Toxicology Letters, 82/83:465-470, 1995 34. HALL A.H.: Computer modeling and computational toxicology in new chemical and pharmaceutical product development, Toxicology Letters, 102-103:623-626, 1998 35. HALLIDAY A.J., BARTLETT S.E., COLDITZ P., SMITH M.T: Brain region-specific studies of the excitatory behavioral effects of morphin-3-glucuronide, Life Sciences, 65(2):225-236, 1999 36. HALSTENSEN T.S.: Why we are not all allergic: basic mechanisms for tolerance development, Environmental Toxicology and Pharmacology, 4:25-31, 1997 37. HARTWIG A.: Carcinogenicity of metal compounds: possible role of DNA repair inhibition, Toxicology letters, 102-103:235-239, 1998 38. HASCHEK W.M., ROUSSEAUX C.G.: Handbook of Toxicologic Pathology, Academic Press, San Diego, 1991, 1047p. 39. HEIN D.W.: N-Acetyltransferase genetics and their role in predisposition to aromatic and heterocyclic amine-induced carcinogenesis, Toxicology Letters, 112-113:349-356, 2000

BIBLIOGRAFIE 215 40. HELLEDAY T.: Signal Transduction, Toxicology in Vitro, 12:519-522, 1998 41. HODGSON E., LEVI P.: A Textbook of Modern Toxicology, Appleton &Lange, Stamford, 1997, 496 p. 42. HODGSON E., RYU D.-Y., ADAMS N., LEVI P.E.: Biphasic responses in synergistic interactions, Toxicology, 105:211-216, 1995 43. INGELMAN-SUNDBERG M.: Functional consequences of polymorphism of xenobiotic metabolizing enzymes, Toxicology Letters, 102-103:155-160, 1998 44. INGELMAN-SUNDBERG M.: Genetic variability in susceptibility and response to toxicants, Toxicology Letters, 120:259-268, 2001 45. IONESCU C.: Biotransformarea medicamentelor, Editura Medicala Universitara Iuliu Hatieaganu Cluj/Napoca, 2001, 171p. 46. JAEGER A., VALE J.A.: Intoxications aigus, Elsevier, Paris, 1999, p.13-61 47. JAMES N.H., GILL J.H., BRINDLE R., WOODYATT N.J., MACDONALD N., ROLFE M., HASMALL S.C., TUGWOOD J.D., HOLDEN P.R., ROBERTS R.A.: Peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) alpha-regulated growth responses and their importance to hepatocarcinogenesis, Toxicology Letters, 102-103:91-96, 1998 48. JONES D.P., BROWN L.A.S., STERNBERG P.: Variability in glutathione-dependent detoxication in vivo and its relevance to detoxication of chemical mixtures, Toxicology, 105:267-274, 1995 49. KARARLI T.T.: Gastrointestinal absorption of drugs, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carriers Systems, 6(1):39-86, 1989 50. KLAASEN C.D., AMDUR M.O., DOULL J.: Casarett and Doulls Toxicology. The Basic Science of Poisons 5th edition, McGraw-Hill, New York 1996, 1111 p 51. LETRENT S.P., POLLI J.W., HUMPHREYS J.E., POLLACK G.M., BROUWER K.R., BROUWER K.L.R.: P-Glycoprotein-mediated transport of morphine in brain capillary endothelial cells, Biochemical Pharmacology, 58:951-957, 1999 52. LEWIS D.F.V., DICKINS M.: Factors influencing rates and clearance in P450mediated reactions: QSAR for substrates of the xenobiotic-metabolizing hepatic microsomal P450s, Toxicology, 170:45-53, 2002 53. LEWIS D.F.V.: On the Recognition of Mammalian Microsomal Cytochrome P450 Substrates and Their Characteristics, Biochemical Pharmacology, 60:293-306, 2000 54. LISON D.: Importance of biotransformation pathways for interpreting biological monitoring of exposure, Toxicology Letters, 108:91-97, 1999 55. LO E.H., SINGHAL A.B., TORCHILIN V.P., ABBOTT N.J.: Drug delivery to damaged brain, Brain Research Reviews, 38:140-148, 2001 56. LOOMIS T.A., HAYES A.W.: Loomiss Essentials of Toxicology, 4th edition, Academic Press, San Diego, 1996, 263 p. 57. LOPACHIN R.M.: Redefining toxic distal axonopathies, Toxicology Letters, 112113:23-33, 2000 58. LOTTI M.: Mechanisms of toxicity and risk assessment, Toxicology Letters, 77:9-14, 1995 59. LU F.C: Basic Toxicology, 2nd edition, Hemisphere Publishing Corporation, Washington, 1991, 361 p. 60. LUSTER M.I., SIMEONOVA P.P., GALLUCCI R.M., BRUCCOLERI A., BLAZKA M.E., YUCESOY B.: Role of inflammation in chemical-induced hepatotoxicity, Toxicology Letters, 120:317-321, 2001

216 TOXICOLOGIE GENERAL 61. MANSON M.M., BENFORD D.J: Factors influencing the carcinogenicity of food chemicals, Toxicology, 134:93-108, 1999 62. MARKS F., MLLER-DECKER K., FRSTENBERGER G.: A causal relationship between unscheduled eicosanoid signaling and tumor development: cancer chemoprevention by inhibitors of arachidonic acid metabolism, Toxicology, 153:11-26, 2000 63. MASTERS C.J.: On the Role of the peroxisome in the Metabolism of Drugs and Xenobiotics, Biochemical Pharmacology, 56:667-673, 1998 64. MATES J.M., SANCHES-JIMENEZ F.M.: Role of reactive oxygen species in apoptosis: implications for cancer therapy, International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 32:157-170, 2000 65. MCCONKEY D.J.: Biochemical determinants of apoptosis and necrosis, Toxicology Letters, 99:157-168, 1998 66. MCKIM W.A.: Drugs and Behavior. An introduction to behavioral pharmacology, 4th edition, Prentice-Hall, New Jersey, 2000, p.1-115 67. MEPLAN C., RICHARD M-J, HAINAUT P: Redox signaling and transition metals in the control of the p53 pathway, Biochemical Pharmacology, 59:25-33, 2000 68. MORETTO A.: Promoters and promotion of axonopathies, Toxicology Letters, 112113:17-21, 2000 69. NAKADATE M.: Toxicity prediction of chemicals based on structure-activity relationships, Toxicology Letters, 102-103:627-629, 1998 70. NELSON B.K.: Evidence for Behavioral Teratogenicity in Humans, Journal of Applied Toxicology, 11(1):33-37, 1991 71. NEUBERT R., MERKER H.-J., NEUBERT D.: Developmental model for thalidomide action, Nature, 400:419-420, 1999 72. NIESINK R.J.M., VRIES D., HOLLINGER M.A.: Toxicology. Principles and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1996, 1284 p. 73. OMIECINSKI C.J., HASSETT C., HOSAGRAHARA V.: Epoxide hydrolasepolymorphism and role in toxicology, Toxicology Letters, 112-113:365-370, 2000 74. OPPERMANN U.C.T., MASER E.: Molecular and structural aspects of xenobiotic carbonyl metabolizing enzymes. Role of reductases and dehydrogenases in xenobiotic phase I reactions, Toxicology, 144:71-81, 2000 75. PALLARDY M., KERDINE S., LEBREC H.: Testing strategies in immunotoxicology, Toxicology Letters, 102-103:257-260, 1998 76. PARK B.K., KITTERINGHAM N.R., POWELL H., PIRMOHAMED M.: Advances in molecular toxicology-towards understanding idiosyncratic drug toxicity, Toxicology, 153:39-60, 2000 77. PARK B.K., NAISBITT D.J., GORDON S.F., KITTERINGHAM N.R., PIRMOHAMED M.: Metabolic activation in drug allergies, Toxicology, 158:11-23, 2001 78. PLOPPER C.G., BUCKPITT A., EVANS M., VAN WINKLE L., FANUCCHI M., SMILEY-JEWELL S., LAKRITZ J., WEST J., LAWSON G., PAIGE R., MILLER L., HYDE D.: Factors modulating the epithelial response to toxicants in tracheobronchial airways, Toxicology, 160:173-180, 2001 79. RAVINDRANATH V., BHAMRE S., BHAGWAT S.V., ANANDATHEERTHAVARADA H.K., SHANKAR S.K., TIRUMALAI P.S.: Xenobiotic metabolism in brain, Toxicology Letters, 82/83:633-638, 1995

BIBLIOGRAFIE 217 80. RAVINDRANATH V.: Metabolism of Xenobiotics in the Central Nervous System, Biochemical Pharmacology, 56:547-551, 1998 81. RENWICK A.G.: Inter-ethnic differences in xenobiotic metabolism, Environmental Toxicology and Pharmacology, 2:165-170, 1996 82. REPETTO M.: Toxicologia avanzada, Diaz de Santos, Madrid, 1995, p.87-116 83. REPETTO M.: Toxicologia fundamental, Segunda edicin, Editorial cientifico-medica, Barcelona 1988, 407 p 84. RITTER J.K.: Roles of glucuronidation and UDP-glucuronosyltransferases in xenobiotic bioactivation reactions, Chemico-Biological Interactions, 129:171-193, 2000 85. ROBERTS R.A., JAMES N.H., HASMALL S.C., HOLDEN P.R., LAMBE K., MACDONALD N., WEST D., WOODYATT N.J., WHITCOME D.: Apoptosis and proliferation in nongenotoxic carcinogenesis: species differences and role of PPAR, Toxicology Letters, 112-113:49-57, 2000 86. ROZMAN K.K., DOULL J.: Dose and time as variables in toxicity, Toxicology, 144:169-178, 2000 87. SCHLEDE E., MISCHKE U., ROLL R., KAYSER D.: A national validation study of the acute-toxic-class method an alternative to the LD50 test, Arch Toxicol, 66:455470, 1992 88. SCHOFIELD P.N., JOYCE J., LAM W.K., GRANDJEAN V., FERGUSON-SMITH A., REIK W., MAHER E.R.: Genomic imprinting and cancer; new paradigms in the genetics of neoplasia, Toxicology Letters, 120:151-160, 2001 89. SEN C.K., ROY S.: Redox control of caspases, Environmental Toxicology and Pharmacology, 10:215-220, 2001 90. SHIMODA K.: Mechanisms of quinolone phototoxicity, Toxicology Letters, 102103:369-373, 1998 91. SIMMONS J.E.: Chemical mixtures: challenge for toxicology and risk assessment, Toxicology, 105:111-119, 1995 92. SQUADRITO G.L., PRYOR W.A.: Oxidative chemistry of nitric oxide: the roles of superoxide, peroxynitrite and carbon dioxide, Free Radical Biology & Medicine, 25(4/5):392-403, 1998 93. STEPHENS T.D., BUNDE C.J.W., FILLMORE B.J.: Mechanism of Action in Thalidomide Teratogenesis, Biochemical Pharmacology, 59:1489-1499, 2000 94. STERN R.S.: Photocarcinogenicity of drugs, Toxicology Letters, 102-103:389-392, 1998 95. STERN R.S.: Photocarcinogenicity of drugs, Toxicology Letters, 102-103:389-392, 1998 96. STOPPER H., MLLER S.O.: Micronuclei as a Biological Endpoint for Genotoxicity: A Minireview, Toxicology in Vitro, 11:661-667, 1997 97. THOMAS S., LOWE J.E., KNOWLES R.G., GREEN I.C., GREEN M.H.L.: Factors affecting the DNA damaging activity of superoxide and nitric oxide, Mutation Research, 402:77-84, 1998 98. TIMBRELL J.A.: Principles of Biochemical Toxicology, 2nd edition, Taylor&Francis, London, 1991, 415 p. 99. TROSKO J.E., CHANG C-C., UPHAM B., WILSON M.: Epigenetic toxicology as toxicant-induced changes in intracellular signaling leading to altered gap junctional intercellular communication, Toxicology Letters, 102-103:71-78, 1998 100. VAN BLADEREN P.J.: Glutathione conjugation as a bioactivation reaction, ChemicoBiological Interactions, 129:61-76, 2000

218 TOXICOLOGIE GENERAL 101. VASILIOU V., PAPPA A., PETERSEN D.R.: Role of aldehyde dehydrogenases in endogenous and xenobiotic metabolism, Chemico-Biological Interactions, 129:1-19, 2000 102. VERDIER F., PATRIARCA C., DESCOTES J.: Autoantibodies in conventional toxicity testing, Toxicology, 119:51-58, 1997 103. VIALA A.: Elments de Toxicologie, Tec&Doc Lavoisier, Paris, 1998, p.1-141 104. WALKER J.R., KING M., IZZO M., KOOB G.F., PASTERNAK G.W.: Antagonism of heroin and morphine self administration in rats by morphine-6-glucuronide antagonist 3-O-methyl naltrexone, European Journal of Pharmacology, 383:115-119, 1999 105. WALKER R.: Modulation of toxicity by dietary and environmental factors, Environmental Toxicology and Pharmacology, 2:181-188, 1996 106. WEBSTER W.S., FREEMAN J.A.D.: Is this drug safe in pregnancy, Reproductive Toxicology, 15:619-629, 2001 107. WELTZIEN H.U., MOULON C., MARTIN S., PADOVAN E., HARTMANN U., KOHLER J.: T cell immune responses to haptens. Structural models for allergic and autoimmune reactions, Toxicology, 107:141-151, 1996 108. WENNING R.: Threshold values in toxicology- useful or not?, Forensic Science International, 113:323-330, 2000 109. WERMUTH C.G.: The Practice of Medicinal Chemistry, Academic Press, London, 1996, p. 615-670 110. WILLIAMS D.A., LEMKE T.L.: Foyes Principles of Medicinal Chemistry, Lippincott Williams&Wilkins, 2002, p.174-233 111. WILLIAMS G.M., ARUOMA O.I.: Molecular Drug metabolism and Toxicology, OICA International, London, 2000, 277 p. 112. WILLIAMS G.M.: Mechanism of chemical carcinogenesis and application to human cancer risk assessment, Toxicology, 166:3-10, 2001 113. XXX: Environmental Health Criteria 212: Principles and methods for Assessing Allergic Hypersensitization Associated with Exposure to Chemicals, World Health Organization, Geneva, 1999 114. YANG R.S.H.: Some current approaches for studying combination toxicology in chemical mixtures, Food and Chemical Toxicology, 34:1037-1044, 1996 115. ZIMNIAK P., PIKULA S., BANDOROWICZ-PIKULA J., AWASTHI Y.C.: Mechanisms for xenobiotic transport in biological membranes, Toxicology Letters, 106:107-118, 1999