Cercetări Asupra Variaţiilor Farmacocinetice Ale Unor Preparate Antiinflamatoare Folosite Topic

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE CRAIOVA
REZUMAT TEZ DOCTORAT
CERCETRI ASUPRA VARIAIILOR FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC
CONDUCTOR TIINIFIC Prof. univ. dr. FLORICA POPESCU
DOCTORAND ANI-SIMONA SEVASTRE
CRAIOVA 2011
UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE - CRAIOVA
REZUMAT TEZ DOCTORAT
CERCETRI ASUPRA VARIAIILOR FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC
CONDUCTOR TIINIFIC Prof. univ. dr. FLORICA POPESCU
DOCTORAND ANI-SIMONA SEVASTRE
CRAIOVA 2011
2
CUPRINS
I. Introducere....................................................................................................................................5 II. Parte teoretic - Stadiul cunoaterii...........................................................................................7 II.1. Pielea, cale de administrare a formelor farmaceutice semisolide................................................7 II.2. Administrarea topic a medicamentelor..........................................................................7 II.2.1. Forme farmaceutice folosite topic n terapeutic..............................................7 II.2.2. Penetrarea medicamentelor administrate topic.................................................8 II.2.3. Metode de testare a difuziei..............................................................................8 II.2.3.1. Metode in vitro...................................................................................8 II.2.3.2. Metode in vivo....................................................................................9 II.3. Antiinflamatoarele nesteroidiene - date actuale din literatur..........................................9 II.3.1. Clasificarea antiinflamatoarelor nesteroidiene.................................................10 II.3.2. Efecte adverse...................................................................................................10 II.3.3. Metabolizarea AINS - retragerea de pe pia a Vioxx i Bextra..........................11 II.3.4. Aplicarea topic a antiinflamatoarelor nesteroidiene stadiul cunoaterii actuale.......................................................................................................................................11 II.4. Meloxicamul substan medicamentoas test................................................................11 II.4.1. Meloxicamul reprezentant al inhibitorilor de COX2......................................11 II.4.2. Proprieti farmacologice ale Meloxicamului....................................................12 II.4.2.1. Farmacocinetica..............................................................................................12 II.4.2.2. Farmacodinamia..............................................................................................12 II.4.3. Proprieti fizico-chimice...................................................................................13 II.4.4. Modaliti de cretere a difuziei Meloxicamului prin membrane artificiale i piele animal promotori fizici i chimici........................................................................................13 II.4.4.1. Promotori chimici ai absorbiei...........................................................13 II.4.4.2. Promotori fizici ai absorbiei...............................................................13 II.4.5. Formulri Meloxicam.........................................................................................14 II.5. Controlul unguentelor.......................................................................................................14 III. Cercetri personale......................................................................................................................15 III.1. Motivarea alegerii subiectului cercetat............................................................................15 III.2. Design experimental........................................................................................................15 III.3. Studiul I Contribuii personale la obinerea i controlul formelor farmaceutice semisolide pentru aplicare topic pe baz de Meloxicam. Metode de optimizare a gradului de solubilizare a Meloxicamului................................................................................................................16 III.3.1. Motivaia i obiectivele studiului......................................................................16 III.3.2. Material i metod.............................................................................................17 III.3.3. Rezultate............................................................................................................18 III.3.4. Discuii...............................................................................................................19 III.3.5. Concluzii............................................................................................................20
III.4. Studiul II - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro a Meloxicamului prin membrane artificiale din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pH-ului............................................................................................................................................21 III.4.1. Motivaia i obiectivele studiului......................................................................21 III.4.2. Material i metod.............................................................................................21 III.4.3. Rezultate............................................................................................................23 III.4.3.1. Studiu comparativ: Influena agentului de solubilizare asupra vitezei de difuzie i procentului de Meloxicam difuzat..................................................................23 III.4.3.2. Studiu comparativ: Influena pH-ului asupra vitezei de cedare..........26 III.4.3.3. Studiu comparativ: Influena pH-ului asupra procentului de Meloxicam difuzat.............................................................................................................................27 III.4.3.4. Studiu comparativ: Distribuia Meloxicamului n cele trei compartimente: unguent hidrofil membran - soluie receptoare................................28 III.4.4. Discuii................................................................................................................29 III.4.5. Concluzii.............................................................................................................30 III.5. Studiul III - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro a Meloxicamului prin piele animal din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pH-ului.........31 III.5.1. Motivaia studiului..............................................................................................31 III.5.2. Material i metod..............................................................................................31 III.5.3. Rezultate.............................................................................................................32 III.5.3.1. Studiu comparativ: Distribuia Meloxicamului n cele trei compartimente: unguent hidrofil membran - soluie receptoare................................33 III.5.3.2. Studiu comparativ: Influena agentului de solubilizare i a pH-ului asupra vitezei de cedare..................................................................................................34 III.5.3.3. Studiu comparativ: Influena agentului de solubilizare i a pH-ului asupra procentului de Meloxicam difuzat.......................................................................35 III.5.4. Discuii................................................................................................................39 III.5.5. Concluzii.............................................................................................................40 III.6. Studiul IV Compararea difuziei in vitro a Meloxicamului prin membran artificial i prin piele animal....................................................................................................................................41 III.6.1. Variaia vitezei de difuzie a Meloxicamului n funcie de timp..........................41 III.6.2. Variaia procentului de Meloxicam difuzat n funcie de timp...........................42 III.7. Studiul V - Evaluarea farmacocinetic in vivo a unor preparate cu antiinflamatoare nesteroidiene aplicate topic folosind experimente pe animale................................................................42 III.7.1. Motivaia studiului..............................................................................................42 III.7.2. Material i metod...............................................................................................43 III.7.3. Rezultate..............................................................................................................44 III.7.4. Discuii................................................................................................................45 III.7.5. Concluzii.............................................................................................................46 IV. Concluzii finale.....................................................................................................................46 V. Bibliografie selectiv..............................................................................................................50 4
I. INTRODUCERE
n prezent se acord un interes din ce n ce mai crescut medicaiei antiinflamatoare. S-a observat tendina de a evita administrarea antiinflamatoarelor pe cale oral datorit efectelor adverse multiple i nlocuirea acestei ci pe ct posibil cu o alt cale de administrare. De cele mai multe ori, pentru tratarea afeciunilor reumatismale se prefer administrarea local, topic a antiinflamatoarelor nesteroidiene. Numrul studiilor avnd ca interes durerea a crescut semnificativ n ultimul deceniu, ceea ce arat c acest domeniu are foarte multe resurse neexploatate nc la nivel mondial. Numrul de apariii n perioada 2000-2010 raportat la numrul de apariii din 1990-2000 este cu aproximativ 25% mai mare. Din problematica foarte vast a antiinflamatoarelor, aceast tez de doctorat se axeaz pe studiul farmacocineticii antiinflamatoarelor nesteroidiene. Teza are o partea teoretic ce reprezint aproximativ 30% din volumul total i o parte experimental intitulat Cercetri Personale, care ocup 70% din tez. Partea teoretic este mprit n 5 subcapitole. n primul subcapitol sunt prezentate date de actualitate referitoare la piele, ca i cale de administrare a formelor farmaceutice semisolide. Al doilea subcapitol al prii teoretice aduce informaii din literatura de specialitate folosite la studierea administrrii topice a medicamentelor, cu punctarea metodelor de testare a difuziei i a factorilor care controleaz absorbia dermic i transdermic. n al treilea subcapitol s-a pus accent pe datele actuale din literarur referitoare la antiinflamatoarele nesteroidiene, rezervndu-se apoi un ntreg subcapitol unui reprezentant al acestei clase Meloxicamul un antiinflamator nesteoidian inhibitor de COX2. Ultimul subcapitol al prii teoretice se axeaz pe prezentarea metodelor utilizate n controlul unguentelor, ca i reprezentante ale formelor farmaceutice semisolide. A doua parte a tezei intitulat Cercetri Personale este structurat n 7 subcapitole. Contribuiile personale sunt justificate n primul subcapitol n care se motiveaz alegerea subiectului cercetat. n ara noastr, Meloxicamul (cod ATC M01AC06) se gsete doar sub form de comprimate, supozitoare i soluii injectabile potrivit ANM Romnia, nu i n preparate topice. Designul experimental face obiectul celui de-al doilea subcapitol. Prin varierea parametrilor: form farmaceutic, agent de gelificare, agent solubilizant, promotor de absorbie, pH form farmaceutic, pH soluie receptoare, temperatur, membran utilizat, au fost planificate 21 experimente, dintre care doar 16 experimente au fost efectuate, utiliznd doar formele farmaceutice cu Meloxicam care s-au dovedit a fi optime calitativ. Fiecare dintre cele 5 studii reprezint cte un subcapitol: 1. Studiul I Contribuii personale la obinerea i controlul formelor farmaceutice semisolide pentru aplicare topic pe baz de Meloxicam. Metode de optimizare a gradului de solubilizare a Meloxicamului; 5
2. Studiul II - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro al Meloxicamului prin membrane artificiale din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pHului; 3. Studiul III - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro al Meloxicamului prin piele animal din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pH-ului; 4. Studiul IV Compararea difuziei in vitro a Meloxicamului prin membran atificial i prin piele animal; 5. Studiul V - Evaluarea farmacocinetic in vivo a unor preparate cu antiinflamatoare nesteroidiene aplicate topic folosind experimente pe animale; Concluziile finale i bibliografia fac obiectul ultimelor dou capitole. Lucrarea de fa este un rspuns la necesitatea observat prin studierea literaturii de specialitate n ceea ce privete formularea unor preparate cu antiinflamatoare aplicate topic. Acest domeniu este n continuu cercetat i are foarte multe aspecte neexploatate nc. La finalizarea acestei teze, vreau sa exprim sincere mulumiri Doamnei Prof. univ. dr. FLORICA POPESCU, conductorul meu de doctorat, un om deosebit care m-a ndrumat la fiecare pas n elaborarea prezentei lucrri. Experimentele din cadrul acestei teze de doctorat nu ar fi fost posibile fr ajutorul unor persoane speciale crora le aduc mulumiri pe aceast cale. Mulumesc din suflet Domnului Prof. univ. dr. farm. DUMITRU LUPULEASA Decanul Facultii de Farmacie UMF Carol Davila Bucureti, Domnului Prof. univ. dr. JOHNY NEAMU Decanul Facultii de Farmacie UMF Craiova, Domnului Prof. univ. dr. FLORIN GORUNESCU i Doamnei ef lucr. IONELA BELU de la disciplina Tehnologie Farmaceutic. Mulumesc persoanelor speciale pe care le am n jurul meu care ma ncarc n fiecare moment cu optimism i de la care am n fiecare zi cte ceva nou de nvat.
Cuvinte cheie: Meloxicam, topic, difuzie, poteniatori de penetrare.
II. PARTE TEORETIC - STADIUL CUNOATERII

II.1. PIELEA, CALE DE ADMINISTRARE A FORMELOR
FARMACEUTICE SEMISOLIDE
Pielea este un esut particular, accesibil ce cntarete pn la 20% din greutatea total a organismului. Din punct de vedere al compoziiei chimice, pielea conine aproximativ 70% ap, 25% proteine i 2% lipide, restul de 3% fiind reprezentat de minerale, acizi nucleici, glicozaminoglicani, proteoglicani i alte substane chimice. Pielea este format din 3 straturi principale: epiderm, derm i hipoderm. pH-ul suprafeei pielii unde hidratatrea este uor de reglat prin secreia glandelor sudoripare, are valoarea de aproximativ 4,5. Aceasta reprezint de fapt mantaua acid a pielii. Valoarea pH-ului este influenat de diferii factori precum: sex, vrst, temperatur corporal, transpiraie excesiv, lumin solar, alimentaie, digestie. Pielea sntoas are capacitatea de a tampona variaiile de pH provocate n special de produsele alcaline prin intermediul secreiilor naturale i produse de metabolism care refac mantaua acid, dar aceasta constituie un efort care poate provoca oboseala i mbatrnirea precoce a pielii [1]. Exist chiar i variaii individuale ale structurii i aspectului pielii. Dupa coninutul n lipide, aceste diferene se pot clasifica n patru tipuri de piele: piele normal; piele uscat (alipidic i deshidratat); piele seboreic i piele mixt [1].
II.2. ADMINISTRAREA TOPIC A MEDICAMENTELOR

II.2.1. FORME FARMACEUTICE FOLOSITE TOPIC N TERAPEUTIC
Pentru utilizare topic, se folosesc urmtoarele forme clasice, tradiionale: forme lichide: soluii, loiuni, emulsii, supensii, tincturi, aerosoli, spunuri lichide, spume [2]; forme semisolide: unguente, spume rigide, spunuri moi, linimente semisolide; forme solide: pulberi, microsfere, comprimate, granulate. Datorit caracteristicii comune de a adera pe piele sau pe mucoase, rmnnd un timp mai lung sau mai scurt pe zona de tratat, au fost denumite forme bioadezive sau sisteme de eliberare bioadezive a substanelor medicamentoase [1, 3, 4]. Din categoria formelor farmaceutice cu aplicare topic, experimentele din aceast tez s-au orientat asupra formelor farmaceutice semisolide pentru aplicaii cutanate (unguente). Unguentele sunt forme farmaceutice semisolide destinate administrrii pe piele sau pe mucoase, n scop terapeutic sau de protecie. Sunt constituite din excipieni sau baze de unguent n care se disperseaz substane medicamentoase [4]. 7
Substanele active sunt ncorporate n baza de unguent, iar prin aplicarea local se dorete exercitarea unui efect terapeutic la nivelul muchilor i esutului nvecinat. n cazul aplicrii locale a antiinflamatoarelor nesteroidiene (AINS) sub forma unor unguente, concentraia local a substanei active este mult mai mare dect n esutul netratat. Cantitatea necesar de AINS pentru a produce efect terapeutic prin administrare local este mult mai mic dect la administrarea oral. Pot totui s apar efecte secundare la aplicare topic de genul iritaiilor locale. Formele farmaceutice topice cu antiinflamatoare nesteroidiene sunt foarte raspndite n ntreaga lume. Printre cele mai folosite antiinflamatoare se regsesc: diclofenacul, indometacinul, piroxicamul, fenilbutazona, ibuprofenul, ketoprofenul. Asigurarea unei aciuni terapeutice optime depinde foarte mult de alegerea vehiculului i a poteniatorilor de penetrare, substane care faciliteaz penetrarea prin alterarea reversibil a structurii pielii [5].
II.2.2. PENETRAREA MEDICAMENTELOR ADMINISTRATE TOPIC

Pentru ca substanele medicamentoase s ajung n straturile profunde ale epidermei i dermului sau n circulaia sistemic, trebuie ca n prima etap s se produc penetrarea acestora. Datorit permeabilitii reduse a pielii, o mic fraciune din substane este realmente absorbit, deci numai substanele foarte active pot avea o aciune general, dup administrarea topic. Ptrunderea medicamentelor n, i prin piele se poate face pe dou ci: 1. fie prin pori pereii foliculilor piloi (transfolicular) i mai puin prin glandele sudoripare; 2. fie transepidermal strbtnd epiderma [1, 6]. Factorii care influeneaz penetrarea medicamentelor administrate topic i implicit biodisponibilitatea i aciunea formei farmaceutice sunt n numr de trei: 1. factori legai de structura i condiiile pielii; 2. factori legai de caracteristicile substanei active; 3. factori legai de compoziia formulei topice aplicate, un rol special avndu-l vehiculul excipientul sau baza de unguent. Un caz deosebit l reprezint preparatele transdermice, urmrindu-se ca viteza de difuziune din vehicul s fie cea care controleaz absorbia, iar pielea s acioneze numai ca un canal de scurgere, meninnd la zero concentraia substanei active care penetreaz i trece rapid n circulaie
[1, 6]
II.2.3. METODE DE TESTARE A DIFUZIEI

II.2.3.1. METODE IN VITRO Studiile de eliberare i penetrare transdermic in vitro sunt cele mai simple i mai necostisitoare metode de a caracteriza absorbia i profilurile de penetrare la nivelul pielii. Ele sunt efectuate n timpul formulrii formelor farmaceutice topice pentru selectarea celor cu profil optim de absorbie i 8
cedare a substanei active. Prima etap n cazul aplicrii topice este etapa eliberrii substanei active din forma farmaceutic aplicat. Celulele de difuzie simuleaz difuzia transdermic. Acestea sunt constituite din dou compartimente separate de membrana de difuzie. Compartimentul donor este cel care permite aplicarea formei farmaceutice de testat, iar cel receptor este umplut cu lichidul n care trebuie s difuzeze substana activ. Ca membrane de difuzie pot fi folosite membranele artificiale (de nylon sau celuloz), sau naturale (pielea de animal sau cea uman). Aceste studii pot fi efectuate n condiiile asigurrii i meninerii viabilitii pielii animale folosite sau se poate folosi piele moart de animal. n studiile din literatur, au fost efectuate comparaii ntre difuzia transdermic prin mai multe tipuri de piele animal. Difuzia depinde de tipul de substan testat. n general, difuzia crete n urmtoarea ordine: om=porc<iepure<obolan<oarece [7]. Pentru un test de penetrare topic clasic, pielea este montat pe celula de difuzie cu partea epidermic spre zona donoare. La nivelul zonei cu suprafa standard se aplic forma farmaceutic testat ntr-o cantitate precis, iar n partea receptoare se introduce mediul receptor. Din mediul receptor se preleveaz volume fixe de fluid, care este mprosptat cu aceeai cantitate de fluid dup fiecare prelevare. Substana activ este determinat prin diverse metode (metode cu markeri radioactivi, HPLC, spectrofotometrie UV-Vis) din fraciile de fluid colectate la intervale regulate[8,9]. II.2.3.2. METODE IN VIVO Testele de difuzie in vivo presupun folosirea modelelor animale. Dup aplicarea cutanat a substanei active, aceasta este decelat prin determinarea concentraiei tisulare locale sau plasmatice, precum i prin decelarea metaboliilor si [9]. Mai rar, substanele testate i metaboliii lor pot fi determinai calitativ i cantitativ n fluidele de excreie: urin, fecale, transpiraie, aer expirat. Ca animale se pot folosi: oarece, obolan, iepure, cine, cobai. Experimentele trebuie efectuate n conformitate cu normele europene de testare pe animale vii.
II.3. ANTIINFLAMATOARELE NESTEROIDIENE - DATE ACTUALE DIN LITERATUR

Inflamaia este un proces patologic care particip n manifestarea multiplelor maladii i care apare ca rspuns la aciunea diverilor factori nocivi. Sub influena ultimelor, n esuturi are loc formarea, eliminarea i activatea mediatorilor inflamaiei, adic a substanelor biologic active care genereaz simptome ale inflamaiei locale tisulare i generale sistemice. Cei mai activi mediatori ai inflamaiei sunt bradikinina, eicosanoizii (inclusiv prostaglandinele) i aminele biogene (histamina i serotonina). n funcie de structur i de mecanismul de aciune, antiinflamatoarele sunt clasificate n steroidiene i nesteroidiene.
Antiinflamatoarele nesteroidiene sunt folosite n farmacoterapia durerii alturi de alte clase de medicamente, avnd un efect analgezic moderat, dar i antiinflamator i antipiretic puternic. Acioneaz favorabil n dureri reumatice, tromboflebite, abcese, dismenoree. Formele orale se administreaz dup mese, deoarece sunt puternic iritante gastric. Mecanismul de aciune principal al AINS este reprezentat de blocarea ciclooxigenazei (COX), cu inhibarea sintezei de mediatori proinflamatori (leucotriene, tromboxani, prostaglandine).
II.3.1. CLASIFICAREA ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE[10,11]

n funcie de selectivitatea pentru enzima ciclooxigenaza 2, antiinflamatoarele nesteroidiene pot fi clasificate astfel: -Antiinflamatoare nesteroidiene clasice (generaia I) -Acizi carboxilici: -Derivai de acid salicilic: acid acetilsalicilic, diflunisal, benorilat. -Derivai de acid acetic: -derivati de acid fenilacetic: diclofenac, alclofenac -derivai de acizi carbociclici i heterociclici acetici: indometacin, sulindac, lonazolac, ketorolac -Derivai de acid propionic: ibuprofen, flurbiprofen, naproxen, ketoprofen, dexketoprofen. -Derivai de acid fenamic: acidul flufenamic, acid mefenamic, acid niflumic, acid tolfenamic, etofenamat. -Acizi enolici -Pirazolone: fenilbutazona -Oxicami: piroxicam,tenoxicam, lornoxicam.
-Antiinflamatoare nesteroidiene inhibitoare selective sau specifice de COX2 (generaia a II-a) -Blocante selective:Meloxicam, nimesulid, nabumeton, etodolac -Blocante specifice (coxibi):rofecoxib(retras de pe pia), celecoxib,parecoxib, etoricoxib, valdecoxib, lumiracoxib
II.3.2. EFECTE ADVERSE

Efectele adverse menionate n literatur sunt efecte gastro-intestinale[12], efecte hematologice[13], efecte cardiorenale[14], efecte hepatice[15], efecte asupra aparatului respirator, efecte asupra vindecrii plgilor i asupra esutului osos[16], reacii de hipersensibilitate [17].
10
II.3.3. METABOLIZAREA AINS - RETRAGEREA DE PE PIA A VIOXX I BEXTRA

La puin timp dup introducerea lor pe pia, datorit efectelor adverse aprute, au fost retrase dou dintre antiinflamatoarele nesteroidiene: rofecoxib (Vioxx) i valdecoxib (Bextra). Acest fapt a dus la o mai mare atenie acordat efectelor adverse a AINS, chiar si a celor mai puin agresive inhibitori COX2 selectivi [18].
II.3.4. APLICAREA TOPIC A ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE STADIUL CUNOATERII ACTUALE

n general, n zilele noastre prescrierea antiinflamatoarelor nesteroidiene intr n responsabilitatea medicilor, iar responsabilitatea eliberrii lor aparine farmacitilor care, din punct de vedere farmacologic, trebuie s cunoasc n amnunt medicamentele eliberate i s sftuiasc pacienii referitor la modul de administrare, contraindicaii, efecte adverse posibile i co-asocierea cu alte medicamente. Spre deosebire de formele farmaceutice cu administrare oral, formele farmaceutice semisolide pentru aplicare topic cu antiinflamatoare nesteroidiene pot fi eliberate fr prescripia medicului i pot constitui o prim masur aplicat n cazul unor dureri acute i chiar cronice [19]. Aplicarea topic de antiinflamatoare nesteroidiene ofer mijloace atractive de a reduce reaciile adverse prim maximizarea eliberrii locale a substanei active cu minimizarea rspndirii ei sistemice[20].
II.4. MELOXICAMUL SUBSTAN MEDICAMENTOAS TEST

II.4.1. MELOXICAMUL REPREZENTANT AL INHIBITORILOR DE COX2
Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian (AINS) din clasa oxicamilor cu proprieti antiinflamatoare, analgezice, antipiretice si uricozurice. Este o enolcarboxamid nrudit cu piroxicamul. Solubilitatea, timpul de njumtire biologic i utilizarea n boli inflamatorii cronice, l fac un candidat potrivit pentru forme farmaceutice cu cedare prelungit. n tratamentul afeciunilor reumatice se pot utiliza capsule sau comprimate cu cedare modificat cu Meloxicam administrate oral. Pentru aplicrile topice, Meloxicamul ar putea fi formulat n forme farmaceutice cu aplicare local. n ara noastr nu exist nici o form farmaceutic cu aplicare topic pe baz de Meloxicam. Meloxicamul are o activitate terapeutic ridicat n doze sczute i o tolerabilitate mai bun dect a altor AINS. 11
Putnd fi administrat pe majoritate cilor de administrare, Meloxicamul este indicat n tratamentul simptomatic de lung sau de scurt durat al afeciunilor precum: reumatismul, rahnoidita, artrita, lombalgiile, sciatica, Zona Zoster si alte tulburri dureroase care afecteaz pielea, dureri de intervenie chirurgical, dureri n zona temporomandibular, posttraumatice.
II.4.2. PROPRIETI FARMACOLOGICE ALE MELOXICAMULUI

II.4.2.1. FARMACOCINETICA n studiile anterioare de farmacocinetic s-au folosit ca indicatori ai inflamaiei: temperatura local, testele de locomoie, volumul edemului de la nivelul labuei. Biodisponibilitatea Meloxicamului la administrare topic a fost de 1.05% fa de administrarea oral. Aceste concentraii mici fac aceast cale optim pentru evitarea efectelor adverse gastrointestinale i de prim pasaj hepatic [21]. Majoritatea AINS se leag puternic de albumin, n cazul Meloxicamului, acesta avnd un procent de 99% de legare (cu preferin n snge, ficat, rinichi). Acest procent mare de legare duce la restricionarea volumului de distribuie. 40-45% din concentraia steady state plasmatic se regsete n lichidul sinovial adiacent. n literatur s-a observat o concentraie mai mare a Meloxicamului n esutul inflamat dect n zonele neafectate de inflamaie
[22]
Meloxicamul este aproape n totalitate eliminat sub form de metabolii. Eliminarea are loc n mod egal la nivel renal si digestiv, i doar 0.25% eliminat prin urin. Meloxicamul este metabolizat prin reacii din faza I, fr a fi detectai metabolii conjugai ai acestuia [23]. Meloxicamul administrat oral are un clearance total de 0.42-0.48 1/h i un timp de eliminare t de 20 ore [24]. Afeciunile care nsoesc procesul inflamator pot influena farmacocinetica meloxicamului n oricare dintre etape n sensul grbirii sau ncetinirii proceselor, cu apariia efectelor adverse sau toxice ori a pierderii efectului terapeutic [25, 26].
II.4.2.2. FARMACODINAMIA Comparativ cu alte AINS, Meloxicamul prezint o activitate sczut asupra COX 1, el avnd o aciune de 18 ori mai slab dect a Indometacinului i de 29 ori mai slab dect a Diclofenacului. Aceste studii au fost efectuate pe celule macrofage peritoneale de cobai prin inducerea expresiei COX1 i COX2 cu ajutorul lipopolizaharidelor (LPS) [27]. Inhibiia preferenial a COX2 de ctre Meloxicam este strns legat de structura sa. Modificarea structurii Meloxicamului prin schimbarea poziiei gruprii metil de pe grupul tiazolic din poziia 5 n poziia 4 duce la o scdere semnificativ a selectivitii sale pentru COX2 i preferarea enzimei COX1 [28]. 12
II.4.3. PROPRIETI FIZICO-CHIMICE

Meloxicamul, un derivat de oxicam, este un AINS cu grupare acid enolic. Denumirea chimic a Meloxicamului este 4-hidroxi-2-metil-N-(5-metil-2-tiazolil)-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxamid-1,1dioxid. Are masa molecular 351,4. Formula sa empiric este C 14H13N3O4S2. Din punct de vedere al proprietilor fizice, Meloxicamul are structur cristalin, de culoare galben deschis, practic insolubil n apa, cu o solubilitate crescut n acizi i baze puternice. Este foarte puin solubil n metanol. Meloxicamul are un coeficient de partiie aparent (log P) app = 0.1 n noctanol/tampon pH 7.4. Valorile pKa ale Meloxicamului sunt 1.1 i 4.2
[29]
Solubilitatea sczut a Meloxicamului la pH acid poate sugera existena unor efecte secundare gastrice mult diminuate n comparaie cu alte AINS. La pH-uri sczute, Meloxicamul este mult mai lipofilic decat AINS cele mai apropiate ca structur: piroxicamul i tenoxicamul
[30]
II.4.4. MODALITI DE CRETERE A DIFUZIEI MELOXICAMULUL PRIN MEMBRANE ARTIFICIALE I PIELE ANIMAL PROMOTORI FIZICI I CHIMICI
Pentru a avea o difuzie optim a unei substane printr-o membrana artificial sau natural trebuie ca substana medicamentoas sa fie cedat cu uurin de ctre forma farmaceutic n care este ncorporat i n acelai timp, s fie uor absorbit de ctre esutul receptor. Creterea difuziei la nivelul pielii se poate face cu ajutorul promotorilor chimici i fizici (enhanceri chimici i fizici).
II.4.4.1. PROMOTORI CHIMICI AI ABSORBIEI Solubilitatea Meloxicamului crete cu creterea pH-ului. Unul din factorii responsabili de dizolvarea unui compus organic este capacitatea sa de a disocia n ioni, fapt care la rndul su depinde de pH. Deoarece Meloxicamul este un acid, solubilitatea sa e dependent de gradul de disociere n ioni i deci de pH. Solubilitatea Meloxicamului poate fi mbuntit i prin folosirea unor ageni de cretere a solubilitii precum: alcooli (alcool laurilic, alcool stearilic, hexidecanol, octildodecanol, alcool izostearilic), acizi grai (acid caproic i stearic), esteri (dietil cebacat, diizopropil adipat, izopropil miristat, triacetin), terpene (eucaliptol, mentol), amine (di i trietanolamina, di i triizopropanolamina), surfactani (glicerinmonocaprilat, polisorbat 80)[31].
II.4.4.2. PROMOTORI FIZICI AI ABSORBIEI Din categoria promotorilor fizici ai absorbiei face parte metoda aplicrii curentului electric pentru facilitarea transportului transdermic, metoda numit iontoforez. Alturi de iontoforez, din aceast clas mai fac parte i electroporaia, magnetoforeza i undele fotomecanice.
13
II.4.5. FORMULRI MELOXICAM

Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian ce inhib selectiv COX2. Dei a fost demonstrat selectivitatea sa, efectele adverse gastrointestinale nedorite pot s apar dup administrare oral. Aplicarea topic a Meloxicamului poate s ofere avantaje prin eliberarea medicamentului direct la locul dureros, cu producerea unui efect local. Cu toate acestea, funcia de barier a pielii limiteaz difuzia multor substane active. Pentru a contracara aceste neajunsuri, este necesar stabilirea unei formulri pe baz de Meloxicam care s conin un vehicul optim din care substana activ s fie cedat dup un profil prestabilit. Recent au fost efectuate studii pe diferite forme farmaceutice de genul: microemulsii, lipogeluri, hidrogeluri [32]. Studiile anterioare efectuate n diverse centre universitare sunt axate pe determinarea efectului promotorilor de permeabilitate asupra difuziei transdermice, efectul diverselor amestecuri de solveni asupra cedrii substanei active i pe obinerea unor matrici din care Meloxicamul s fie cedat ntr-un mod controlat. La momentul actual, nu exist la noi pe pia nici o formul pe baz de Meloxicam care s fie aplicat topic [33].
II.5. CONTROLUL UNGUENTELOR

Controlul organoleptic: omogenitate, culoare i miros caracteristic componentelor. Omogenitatea se controleaz prin ntinderea unguentului pe o plac i observarea cu lupa 4.5X. Se determin mrimea particulelor pentru unguentele suspensii (obinuite i oftalmice). Determinarea pH-ului se realizeaz poteniometric, n faz apoas i trebuie s fie cuprins ntre 4,5-8,5. Pentru a aprecia consistena unguentelor sunt patru tipuri de probe reologice: probe de viscozitate; probe de penetraie; probe de ntindere i probe de elasticitate. [1].
14
III. CERCETRI PERSONALE

III.1. MOTIVAREA ALEGERII SUBIECTULUI CERCETAT
Folosind anumite cuvinte cheie (pain, year) i motoarele de cutare www.pubmed.com, www.google.com i www.interscience.wiley.com am analizat evoluia interesului artat studierii proceselor fizio-patologice ale durerii.
Evolutia studiilor despre durere (2)
2 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 pain 2003 pain 2004 pain 2005 pain 2006 pain 2007 pain 2008 pain 2009 pain 2010
Procent studii legate de durere din din totalul studiilor
Perioada
w w w .interscience.w iley.com
GRAFIC 1 - EVOLUIA ANUAL A STUDIILOR DESPRE DURERE N PERIOADA 2003-2010 (surse: www.interscience.wiley.com) Numrul studiilor avnd ca interes durerea a crescut semnificativ n ultimul deceniu, ceea ce arat c acest domeniu are foarte multe resurse neexploatate nc la nivel mondial. Numrul de apariii n perioada 2000-2010 raportat la numrul de apariii din 1990-2000 este semnificativ mai mare, raportul fiind de 1,244845, adic cu aproape 25% mai mult. n ara noastr antiinflamatoarele nesteroidiene administrate topic pot fi formulate sub forma de unguente lipofile, creme, geluri, spray-uri cutanate, ape de gur, picturi oftalmice. Avnd ca surs siteul Ageniei Naionale a Medicamentului, am centralizat informaiile referitoare la formele farmaceutice ce conin antiinflamatoare nesteroidiene aplicate topic utilizate n ara noastr [159-162]. Mergnd mai departe, am observat c nu exist nici o form farmaceutic aplicat topic avnd ca substan activ Meloxicamul. Meloxicamul (cod ATC M01AC06) se gsete doar sub form de comprimate, supozitoare i soluii injectabile [34] Aceast tez are ca interes principal obinerea unor forme farmaceutice semisolide originale i stabile, coninnd ca substan activ un antiinflamator nesteroidian COX2 selectiv Meloxicamul, formulate astfel nct s aib un profil farmacocinetic optim de cedare.
III.2. DESIGN EXPERIMENTAL

Experimentele efectuate n cadrul aceastei teze s-au desfurat n mai multe etape care au urmrit:
15
1.
gsirea unor ageni de cretere a solubilitii Meloxicamului, substan test cu un grad de
dizolvare foarte mic n solvenii uzuali de genul: ap, tampoane fosfat, citrat, borat, solveni lipofili; 2. includerea soluiilor de Meloxicam preparate n etapa 1 n forme farmaceutice
semisolide hidrofile i hidrofobe, cu pstrarea gradului de dispersie molecular; 3. controlul formelor farmaceutice obinute din punct de vedere organoleptic, al aspectului,
al vscozitii i al plasticitii; 4. obinerea standardelor de Meloxicam i a curbei de calibrare utilizat n determinrile
calitative i cantitative cu ajutorul spectrofotometrului UV-Vis; 5. efectuarea studiilor de farmacocinetic care au constat n determinarea profilului
farmacocinetic de cedare i difuzie al Meloxicamului in vitro prin 6. prin membran artificial; prin piele animal efectuarea de studii comparative ale profilului farmacocinetic de de cedare i difuzie al
Meloxicamului in vitro la pH fiziologic 7.5 i la pH-ul acid al pielii 4.5 utiliznd aceleai membrane: artificial i animal; 7. efectuarea studiilor in vivo, pe experimente pe animal.
n urmtoarele dou tabele este prezentat designul experimental, care a inut cont de urmtorii parametrii:. Prin varierea parametrilor: form farmaceutic, agent de gelificare, agent solubilizant, promotor de absorbie, pH form farmaceutic, pH soluie receptoare, temperatur, membran utilizat, au fost planificate 21 experimente, dintre care doar 16 experimente au fost efectuate, utiliznd doar formele farmaceutice cu Meloxicam care s-au dovedit a fi optime n urma controlului de calitate.
III.3. STUDIUL I CONTRIBUII PERSONALE LA OBINEREA I CONTROLUL FORMELOR FARMACEUTICE SEMISOLIDE PENTRU
APLICARE TOPIC PE BAZ DE MELOXICAM. METODE DE OPTIMIZARE A GRADULUI DE SOLUBILIZARE A MELOXICAMULUI

III.3.1. MOTIVAIA I OBIECTIVELE STUDIULUI
n aceasta tez unul dintre obiective a fost acela de a prepara forme farmaceutice semisolide din categoria unguentelor hidrofile i lipofile cu o concentraie de 0.3% Meloxicam substan activ. Deoarece mai departe, s-a urmrit profilul farmacocinetic al Meloxicamului i innd cont c acesta este mult mai uor eliberat din forme farmaceutice n care se gsete dispersat la nivel molecular, un alt scop al acestei teze a fost obinerea unor forme farmaceutice unguente de tip soluie (substana activ s fie dizolvat n baza de unguent) [35]. 16
S-a cercetat ncorporarea Meloxicamului cu ajutorul diverilor ageni de cretere a solubilitii n formele farmaceutice semisolide hidrofile i lipofile mai sus amintite.
III.3.2. MATERIAL I METOD

Substanele i soluiile folosite au fost: Meloxicam (Unichem Laboratories LTD), Carbopol 990 (Medchim T.M.), Metilceluloz (Medchim T.M.), Lanolin (Medchim T.M.), Vaselin (Medchim T.M.), Tween 80 (Merck), Trietanolamin (Fluka Chemie AG), Polietilenglicol 400 (Merck), Polietilenglicol 4000 (Merck), Glicerin (SC Chimreactiv SRL), Hidroxid de sodiu (Merck), Fenosept (Medchim T.M.), Ser fiziologic 0,9% m/v (BBraun), Nipagin (Medchim T.M.), Nipasol (Medchim T.M.). Ca aparatur i ustensile, s-au folosit: mojare farmaceutice, balane electronice, pipete electronice 1-5 ml, seringi 1 ml 20 ml, vscozimetru Thermo Scientific HAAKE, Tester de determinare a plasticitaii dispozitivul Ojeda i Arbussa, pH-metru Consort. Unguentele obinute au fost condiionate n cutii de polietilen bine nchise, la cel mult 25 0C. Pentru preluarea imaginilor fotografice acestea au fost transferate n seringi cu o capacitate de 20ml. S-a folosit un aparat foto CANON PowerShot G9. Pentru prepararea unguentelor s-a folosit metoda manual de pulverizare a substanei active, obinerea soluiei i omogenizarea manual cu restul componentelor. S-au folosit: -agent de cretere a solubilitii: tween 80, polietilenglicol 400 i 4000, trietanolamina, octilsulfat de sodiu; -agent de gelificare: Carbopol 990, metilceluloz; -agent de meninere a umiditii: glicerin; -agent conservant: borat de fenilmercur; -vehicul: ap distilat. 2.1. CONTROLUL ORGANOLEPTIC: omogenitate, culoare i miros caracteristic
componentelor. Omogenitatea se controleaz prin ntinderea unguentului pe o plac i observarea cu lupa 4.5X. Se determin mrimea particulelor pentru unguentele suspensii. 2.2. DETERMINAREA pH-ULUI se realizeaz poteniometric, n faz apoas i trebuie s fie cuprins ntre 4,5-8,5. 2.3. CONTROLUL REOLOGIC: n acest studiu am cuantificat vscozitatea i plasticitatea. Determinarea vscozitii. Unguentele sunt corpuri plastice i tixotrope, vscozitatea modificndu-se dependent de temperatur i forele de forfecare aplicate. S-a folosit vscozimetrul rotaional Thermo Scientific HAAKE 550 [4]. Determinarea plasticitii. Se folosete dispozitivul Ojeda i Arbussa, alctuit din 2 plci de sticl de anumite dimensiuni. Se obin date numerice (curba extensiometric reprezint suprafaa 17
ocupat n funcie de greutatea aplicat), care permit aprecierea valorilor orientative ale plasticitii unguentelor.
III.3.3. REZULTATE
S-au obinut nou formulri cu o concentraie de 0.3% Meloxicam:gelurile: G1, G2P1, G2P2, G3, G4, G5, G6 i unguentele U1 i U2. Metodele de preparare i control au avut la baza principiile de preparare i control ale unguentelor prevzute n FRX i utilizate n literatur
[1, 36]
Unguentele preparate au fost transvazate n seringi transparente cu o capacitate de 20ml, au fost analizate din punct de vedere organoleptic, al pH-ului, al vscozitii i al plasticitii. Toate unguentele preparate au fost captate fotografic. Formulrile G1, G2P2 i G4 cu un coninut de 0.3 % Meloxicam au fost translucide, fr particule n suspensie i cu o consisten bun. Spre deosebire de acestea, restul formulrilor cu acelai coninut de Meloxicam s-au prezentat sub forma unor unguente de tip suspensie, n care s-au putut observa particule aflate n suspensie i care au avut o consisten mai mic.
FIGURA 1 GEL FORMULA G1 (1% CBP 990, 0.3% Meloxicam, 0.1%Tween 80) pH-ul s-a ncadrat n prevederile Farmacopeei Romne a X-a ntre 4.5 i 8.5. Formul pH
G1 G2P1 G2P2 G3 G4 G5 G6 U1 U2
8.4
8.2
8.2
8.1
8.1
8.3
7.3
6.8
TABEL 1 - pH-UL FORMULELOR PREPARATE

Variatia vascozitatii unguentelor utilizate, in functie de temperatura
Vascozitatea (mPAs)
25 20 15 10 5 0
Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Mx Mx Mx Mx Mx Mx Mx Mx Mx G1 G2P1 G2P2 G3 G4 G5 G6 U1 U2
Tipul formularii
Vascozitatea la 23.5C Vascozitatea la 37.5C
GRAFIC 2 VARIAIA VSCOZITII N FUNCIE DE FORMULARE I TEMPERATUR 18
Se poate observa c unele din preparate precum G2P1, G3, G5 i G6 au valori ale vscozitii mult mai mici dect ale celorlaltor formulri. Acest lucru poate fi datorat unui pH inadecvat, la care gelificrile Carbopolului respectiv Metilcelulozei nu au loc n totalitate.
VARIATIA SUPRAFETEI DE INTINDERE IN FUNCTIE DE GREUTATEA APLICATA SI DE TIPUL DE FORMULARE
5000
SUPRAFATA DE INTINDERE (mm2)
4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 50 g 100g 200g 250g 500g 750g
GREUTATE APLICATA (g)

G1 G1 cu Mx 0.3% G2P2 G2P2 cu Mx 0.3% G4 G4 cu Mx 0.3% U1 U1 cu Mx 0.3% U2 U2 cu Mx 0.3%
GRAFIC 3 VARIAIA SUPRAFEEI DE NTINDERE N FUNCIE DE GREUTATEA APLICAT Curba extensiometric arat c la adugarea de Meloxicam, ntinderea are loc pe o suprafa uor mai mare (p=4.83191E-07 <0.05). Dintre toate formulrile, cele mai mici suprafee de ntindere au fost observate n cazul unguentului hidrofil U2, iar cele mai mari, n cazul formulei G2P2, ceea ce demonstreaz importana excipienilor n formularea formelor farmaceutice semisolide.
III.3.4. DISCUII
n acest studiu s-a dorit obinerea unor unguente hidrofile i hidrofobe n care s se ncorporeze cu uurin un antiinflamator nesteroidian (Meloxicamul) i care s corespund calitativ normelor n vigoare (F.R. X, Farmacopeea European). Din punct de vedere organoleptic, unguentele au avut un aspect caracteristic componentelor. n cazul formulelor care au coninut Meloxicam ca substan activ, culoarea a fost mai intens glbuie dect cele fr substan activ. Determinarea organoleptic a fost efectuat utiliznd metodele de evaluare ntlnite n literatura de specialitate[32]. n urma analizelor, preparatele obinute n cadrul acestei teze au avut un pH care s-a ncadrat n intervalul impus de Farmacopeea Romn a X-a [4]. S-a putut observa c pH-ul crescut a fost dat n special de soluia de NaOH cu care s-a efectuat gelificarea. De asemenea, o contribuie la un pH ridicat l-a avut i Trietanolamina folosit ca agent de cretere a solubilitii. pH-ul unguentului hidrofil pe baz de PEG 400 i PEG 4000 este foate puin influenat de prezena Meloxicamului. La aceleai concluzii a ajuns i Nagia et al. care a folosit n studiul su ca ageni de cretere a solubilitii Tween 80 i Trietanolamina 19
[32]
pH-ul este important pentru stabilitatea sistemului dispers i a substanelor active. El poate influena vscozitatea gelurilor i poate scdea activitatea conservanilor. Dac se gsete n afara limitelor impuse de FRX, pH-ul preparatelor semisolide aplicate topic poate influena negativ structura pielii. Din punct de vedere reologic, au fost analizate vscozitatea i plasticitatea. Aceste caracteristici sunt strns legate de bazele de unguent folosite, dar pot fi cu uurin influenate de excipienii utilizai. Hidrogelurile pe baz de Carbopol se obin prin neutralizarea dispersiilor macromoleculelor mbibate anterior cu vehicul, cu ajutorul soluiilor alcaline. Carbomerii cunoscui i ca acizi poliacrilici sau polimeri carboxivinilici sunt ntlnii cel mai frecvent cu denumirea de Carbopoli. Sunt polimeri sintetici ai acidului acrilic, cu caracter anionic i mas molecular mare. Se prezint ca pudre de culoare alb, fine, cu densitate foarte mic. Vscozitatea maxim este obinut la pH ntre 6 i 11. Ea scade n prezena electrolizilor i crete n prezena glicerolului, propilenglicolului sau alcoolului
[35]
Analiznd valorile vscozitii tuturor preparatelor, se poate trage concluzia c adugarea unei cantiti mici de Meloxicam (0.3%) duce la o scdere uoar a vscozitii preparatelor (p=0.134034). n cazul preparatelor G1, G2P2, G4, U1 i U2, aceasta ramne totui n valori optime. Preparatele cu vscozitate bun au fost selectate pentru a fi studiate n urmtoarea etap, din punctul de vedere al profilului farmacocinetic de cedare al Meloxicamului. n studiul publicat n 2010 de Shashikant et al. care folosete baz de unguent gelul de Carbopol, iar ca agent de cretere a solubilitii Trietanolamina, testele de reologie au condus la obinerea unor rezultate asemntoare cu cele obinute n aceast tez, suprafaa de ntindere fiind n intervalul 17-28 cm2[37].
III.3.5. CONCLUZII
n urma acestui studiu pot fi trase mai multe concluzii: 1. n absena unor ageni de cretere a solubilitii atent alei, Meloxicamul nu poate fi formulat sub forma unor preparate semisolide hidrofile sau lipofile cu aplicare topic; 2. n urma numeroaselor testri, am determinat c Tween-ul 80 n concentraie 0.1%, Trietanolamina 30% i Polietilenglicol-ul 400 3% au capacitatea de a crete gradul de solubilizare al Meloxicamului. Acetia au fost singurii dintre cei testai, care adugai n unguente alturi de substana activ, au dus la solubilizarea Meloxicamului i la obinerea unor unguente transparente, de tip soluie; 3. Dintre agenii presupui a crete solubilitatea, octilsulfatul de sodiu, un agent tensioactiv cu proprieti umectante i de scdere a tensiunii superficiale lichid - solid, nu a reuit s solubilizeze Meloxicamul; 4. Au fost formulate 9 unguente hidrofile i lipofile, de tip soluie (geluri: G1, G2P2, G4 i unguentul U2), dar i de tip suspensie (gelurile: G2P1, G3, G5, G6 i unguentul U1);
20
5. Foarte important n procesul de solubilizare este protocolul de lucru, drept urmare, folosind exact aceleai componente n aceleai cantiti, am obinut dou formule diferite ca grad de dispersie: formula G2P1 hidrogel tip suspensie, iar formula G2P2 hidrogel tip soluie; 6. Din punct de vedere organoleptic, unguentele obinute au caracteristicile componentelor. pH-ul lor s-a ncadrat n limitele impuse de Farmacopeea Romn a X-a; 7. Analiznd vscozitatea preparatelor obinute, doar formulele G1, G2P2, G4, U1 i U2 au fost considerate a fi corespunztoare. Restul preparatelor nu au avut o consisten potrivit; 8. Vscozitatea preparatelor a sczut uor dup adugarea substanei medicamentoase testate Meloxicam 0.3%; 9. Din punct de vedere al capacitii de ntindere, toate preparatele pe baz de Carbopol au avut un comportament asemntor; 10. Pentru a determina profilului cinetic de cedare al Meloxicamului, n urmtoarea etap au fost alese preparatele cu caracteristicile optime, i anume: G1, G2P2, G4, U1 i U2.
III.4. STUDIUL II - PROFILUL FARMACOCINETIC DE CEDARE IN VITRO AL MELOXICAMULUI FARMACEUTICE PRIN MEMBRANE ARTIFICIALE DIN
FORMELE
SEMISOLIDE
HIDROFILE.
INFLUENA
PROMOTORILOR DE ABSORBIE I A pH-ULUI

III.4.1. MOTIVAIA I OBIECTIVELE STUDIULUI
Studiul a avut n vedere observarea profilului farmacocinetic prin determinarea concentraiei Meloxicamului n soluia receptoare dup aplicarea pe membran artificial de celuloz a celulei de difuzie Franz. Prin adugarea de ageni de cretere a solubilitii, s-a putut ncorpora Meloxicamul n hidrogel, obinndu-se un unguent hidrofil de tip soluie din care substana activ se elibereaz mult mai uor comparativ cu unguentele de tip emulsie sau suspensie. Am optat pentru obinerea unor unguente hidofile datorit proprietilor fizice ale agenilor de solubilizare, precum i datorit rspndirii mult mai largi n ultima perioad a acestei forme farmaceutice. Dintre formulrile obinute n cadrul Studiului I, doar cteva dintre ele au fost selectate pentru studierea profilului farmacocinetic al Meloxicamului prin membran artificial. Acestea sunt gelurile G1, G2P2, G4 i unguentul U2, pastrndu-se codificarea din studiul anterior.

Substanele i soluiile folosite au fost: Meloxicam (Unichem Laboratories LTD), Carbopol 990 (Medchim T.M.), Tween 80 (Merck), Trietanolamin (Fluka Chemie AG), Polietilenglicol 400 21
(Merck), Glicerin (SC Chimreactiv SRL), Hidroxid de sodiu (Merck), Fenosept (Medchim T.M.), Ser fizioliogic 0,9% m/v (BBraun). S-a folosit o celul de difuzie vertical Hanson Research 58-001-455 cu o capacitate de 7ml, un orificiu de difuzie de 15 mm (recomandat FDA i SUPAC SS) i cu agitator Helix, iar absorbiile au fost citite la spectofotometrul UV-Vis JASCO V530. Au fost folosite membrane metilcelulozice cu un diametru de 25 mm i o dimensiune a porilor de 0,45 m, suprafa de cedare 3.14cm2 Teknokroma. S-a folosit celula de difuzie vertical Hanson Research 58-001-455 cu o capacitate de 7ml, un orificiu de difuzie de 15mm (recomandat FDA i SUPAC SS) i cu agitator Helix. Toate experimentele au fost efectuate n triplicat.
FIGURA 2 CELUL DE DIFUZIE
FIGURA 3 SCHEMA APARATURII DE DIFUZIE IN VITRO
Soluia receptoare pentru testele de difuziune efectuate pe celula de difuzie cu o capacitate de 7ml a fost Serul fiziologic 0.9%, steril i apirogen, cu un adaos de Tween 0.1% pentru a favoriza umectarea substanei de difuzat. Toate experimentele au fost efectuate n triplicat. Timpul 0 este considerat momentul n care a fost aplicat forma farmaceutic pe membran, cu asamblarea imediat a celulei de difuzie. Pentru fiecare experiment s-au aplicat cte 0.3g gel cu un coninut de 0.3% substan activ Meloxicam. La 5min, 10min, 15min, 30min, 1h, 2h, 3h, 6h, 24h de la nceperea experimentului, au fost prelevate probe de cte 0.5ml. Fiecare prob prelevat a fost diluat pn la 2.5ml cu soluie receptoare. Cantitatea prelevat a fost nlocuit cu soluie receptoare, aa nct volumul receptor din celula de difuzie s rmn neschimbat. Cantitatea de gel rmas pe membran la finalul experimentului a fost diluat cu soluie receptoare i a fost citit la spectofotometrul JASCO V530 alturi de probele prelevate la intervalul de timp specificat. Probele au fost citite la spectofotometru JASCO V530 la lungimea de und 362nm specificat n literatur. S-a determinat media triplicatelor, deviaia standard, iar gradul de ncredere a fost evaluat folosind testul TTEST Microsoft Excel. Standardele au fost obinute folosind Meloxicam n diverse concentratii la un pH alcalin.
22
III.4.3. REZULTATE
Soluiile standard au fost obinute prin dizolvarea a 0.01g Meloxicam n 10g Ser fiziologic alcalinizat cu 0.1g NaOH20%. n funcie de absorbiile diluiilor la lungimea de und 362nm, a fost trasat curba de calibrare (slope= 0.182418223).
FIGURA 4-. SPECTRUL MELOXICAMULUI (Picul se observ la 362nm)
Absorbtia in functie de concentratie Valori sem nificative 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 Absorbtia 3.5 Concentratia m g/100m l
GRAFIC 4 - VALORILE SEMNIFICATIVE ALE ABSORBIEI STANDARDELOR SLOPE = 0.0279931
III.4.3.1. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE VITEZEI DE DIFUZIE I PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT Graficele prezint evoluia vitezei de difuzie a Meloxicamului, precum i procentul difuzat, pentru toate cele 4 formulri studiate.
Absorbtia
23
Influenta agentului de solubilizare asupra vitezei de difuzie a Meloxicamului din unguente hidrofile pH fiziologic 7.5
0.02 0.018 0.016 0.014 0.012 0.01 0.008 0.006 0.004 0.002 0 0 5 10 15 30 60 120
EXP EXP EXP EXP
Viteza de difuzie (mg/min)
180
360
1440
Timp (min)
1 G1 (DESIGN 1) 2 G2P2 (DESIGN 2) 3 E14 PEG 400 CBP (DESIGN 14) 4 E16 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 16)
GRAFIC 5 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI DIN UNGUENTE HIDROFILE PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5 Viteza maxim de difuzie a Meloxicamului se poate observa n cazul formulei care conine ca agent de cretere a solubilitii Trietanolamina. Viteza atinge valori maxime de aprox 0.018mg/min la 10 minute de la aplicare. n cazul formulei care conine Tween 80, picul este observat tot la 10 minute, dar este mult sczut comparativ cu cel al formulei G2P2. Cele mai mici valori ale vitezei de difuzie sunt atinse n cazul hidrogelului cu Polietilenglicol 400. Comparnd din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului la pH 7.4 G2P2 cu G1, G4 i U2, utiliznd TTEST au fost obinute valorile 0.001843, 0.00477282, 0.00537582 (p<0.05).
Influenta agentului de solubilizare asupra vitezei de difuzie a Meloxicamului din unguente hidrofile pH 4.5
0.018 0.016
0.014 0.012 0.01 0.008 0.006 0.004 0.002 0 0 5 10 15 Timp (min) 30 60 120 EXP EXP EXP EXP 180 360 1440 9 G1 (DESIGN 5) 10 G2P2 (DESIGN 6) 11 E15 PEG 400 CBP (DESIGN 15) 12 E19 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 19)
GRAFIC 6 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI DIN UNGUENTE HIDROFILE PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH-UL PIELII 4.5 24
Comparnd formularea G2P2 din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului difuzat la pH 4.5 cu G1, G4 i U2, folosind TTEST au fost obinute valorile 0.00141029, 0.00365196, 0.00485342 (p<0.05). Evoluia vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu pH 4.5 este asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, picurile aprnd ceva mai trziu, cu o laten de 1015 minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5. De asemenea, valorile pe care le ating vitezele sunt i ele mai sczute comparativ cu cele determinate n cadrul experimentelor desfurate la pH 4.5. Concentraiile de Meloxicam decelate n soluiile receptoare la pH 7.5 i 4.5 sunt eficiente pentru a asigura aciune terapeutic local i sunt suficient de mici pentru a minimaliza efectele sistemice.
Influenta agentului de solubilizare asupra procentului de Meloxicam difuzat din unguente hidrofile pH fiziologic 7.5
100 90 80
Procent difuzat (%)
70 60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 30 60 120 EXP EXP EXP EXP 180 360 1440 Timp (min) 1 G1 (DESIGN 1) 2 G2P2 (DESIGN 2) 3 E14 PEG 400 CBP (DESIGN 14) 4 E16 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 16)
GRAFIC 7 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT DIN UNGUENTE HIDROFILE PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5 Comparnd formularea G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat la pH 7.4 cu G1, G4 i U2, folosind TTEST au fost obinute valorile 0.00071999, 0.00018932, 0.00016125 (p<0.05). Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24 ore de la aplicarea unguentului) este ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%), formul la care s-au observat i cele mai mari valori ale vitezei de difuzie. Restul formulelor au avut un procent de Meloxicam difuzat n medie de 40%.
25
Influenta agentului de solubilizare asupra procentului de Meloxicam difuzat din unguente hidrofile pH fiziologic 4.5
90 80
Procent difuzat (%)
70 60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 Timp (min) 30 60 120 EXP EXP EXP EXP 180 360 1440 9 G1 (DESIGN 5) 10 G2P2 (DESIGN 6) 11 E15 PEG 400 CBP (DESIGN 15) 12 E19 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 19)
GRAFIC 8 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT DIN UNGUENTE HIDROFILE PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH-UL PIELII 4.5 Comparnd formularea G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat la pH 4.5 cu G1, G4 i U2, folosind TTEST au fost obinute valorile 0.00082431, 0.00024356, 0.00018774 (p<0.05). Procentul de Meloxicam difuzat la pH 4.5 atinge valori mai mici comparativ cu cele ntlnite la pH acid 4.5. Procentul difuzat total maxim atins este de aproximativ 80%, tot pentru formula G2P2.
III.4.3.2. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE

Influenta pH-ului asupra vitezei de cedare FORMULA G4
0.005 0.0045 0.004
0.0035 0.003 0.0025 0.002 0.0015 0.001 0.0005 0 0 5 10 15 Tim p (m in) 30 60 120 180 360 1440
EXP 3 E14 PEG 400 CBP (DESIGN 14)

EXP 11 E15 PEG 400 CBP (DESIGN 15)
GRAFIC 9 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA G4 p=0.0071359 Din graficele anterioare se poate observa c valorile vitezelor de difuzie sunt mai mari n cazul folosirii ca soluie receptoare a soluiei saline cu pH 7.5, comparativ cu soluia salin pH 4.5. Evoluia 26
vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu pH 4.5 este asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, picurile aprnd ceva mai trziu, cu o laten de 10-15 minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5.
III.4.3.3. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT

Influenta pH-ului asupra procentului de Meloxicam difuzat FORMULA G2P2 90 80
Procentul difuzat (%)
70 60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Tim p (m in)
EXP 2 G2P2 (DESIGN 2)
EXP 10 G2P2 (DESIGN 6)
GRAFIC 10 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G2P2 p=6.28864E-05 Se poate observa c n toate experimentele, procentul de Meloxicam difuzat este mai mic n cazul folosirii soluiei saline cu pH 4.5 dect n cazul folosirii soluiei saline cu pH 7.5. Procentul mai mic difuzat n cazul soluiilor receptoare cu pH acid 4.5 poate fi datorat unei mai mici solubiliti a Meloxicamului n aceste soluii, dar i unei posibile degradri a acestuia la acest pH. Orientarea ctre o ipotez sau alta, trebuie s in cont i de cantitatea de Meloxicam care nu a fost regsit n nici unul dintre compartimente: gel, membran, soluie receptoare. Aceast cantitate neregsit poate fi datorat pierderilor inevitabile din timpul manipulrii, dar i unor eventuale procese de degradare ale Meloxicamului, care astfel nu mai poate fi detectat la lungimea de und corespunztoare (362nm). Procentul de Meloxicam difuzat la pH 4.5 atinge valori mai mici comparativ cu cele ntlnite la pH fiziologic 7.5. Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24 ore de la aplicarea unguentului) este ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%),comparativ cu 80% ntlnit pentru aceeai formulare n cazul folosirii unui pH acid 4.5. n studii asemntoare n care s-a lucrat cu geluri de Meloxicam, cantitatea de substan activ difuzat in vitro prin membran artificial a atins valori pn la 500 g/cm 2, n condiiile aplicrii unei cantiti de 0.5g Meloxicam 0.3% [38].
27
III.4.3.4. STUDIU COMPARATIV: DISTRIBUIA MELOXICAMULUI N CELE TREI COMPARTIMENTE: UNGUENT HIDROFIL MEMBRAN - SOLUIE RECEPTOARE Dintre toate formulrile, formularea G2P2 a avut cel mai mic procentaj de Meloxicam rmas n forma farmaceutic aplicat.
Procentul de Meloxicam ramas in unguentul aplicat
70 60
Procent (%)
50 40 30 20 10 0 G1 G2P2 G4 U2
Tipul de formulare
pH 7.5
pH 4.5
GRAFIC 11 PROCENT DE MELOXICAM RMAS N UNGUENTUL APLICAT p=0.15937284
Evolutia Meloxicamului la pH 7.5

100% 90%
Procentaj (%)
80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% G1 G2P2 G4 U2
Tip formulare
pH 7.5 procent difuzat pH 7.5 procent nedifuzat pH 7.5 procent pierdut
GRAFIC 12 EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH 7.5

100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% G1 G2P2 G4 U2
Procentaj (%)
Tip formulare
GRAFIC 13 EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH 4.5 28
III.4.4. DISCUII
La fel ca i celelalte antiinflamatoare nesteroidiene, Meloxicamul a ridicat probleme la ncorporarea n forma farmaceutic datorit solubilitii sczute n baza de unguent. Studiile arat c solubilitatea AINS poate fi crescut cu ajutorul alcoolilor, propilenglicolului, DMSO. Concentraia n substan activ nu depete 10 % n cazul antiinflamatoarelor nesteroidiene formulate pentru aplicare topic si comercializate pe pia
[39]
. Pentru aplicrile topice Meloxicamul ar putea fi formulat n forme
farmaceutice cu aplicare local. n ara noastr nu exist nici o form farmaceutic cu aplicare topic pe baz de Meloxicam. Agenii folosii n acest studiu pentru creterea difuziei prin membrana artificial au mai multe mecanisme de aciune: 1. Trietanolamina crete solubilitatea substanei active n vehicul. Creterea solubilitii compuilor greu solubili se bazeaz uneori pe transformarea lor n sruri mult mai uor solubile, cu condiia pstrrii efectelor terapeutice. Pe acest gen de mecanism se bazeaz folosirea etanolaminelor pentru creterea solubilitii compuilor antiinflamatori nesteroidieni 2. Polietilenglicolii cresc coeficientul de partiie, 3. Tween 80 crete gradul de dizolvare al Meloxicamului, dar poate aciona i prin solubilizarea lipidelor din stratum corneum n cazul administrrii pe piele. Studiul a constat n determinarea in vitro a vitezei de cedare, a procentului de Meloxicam difuzat, precum i a modului de repartizare a substanei active n cele trei compartimente. Viteza de difuzie (mg/ml) a Meloxicamului prin membrana artificial a crescut n toate experimentele foarte mult n intervalul de timp 0 - 30 minute, dup care a sczut treptat, cantiti de Meloxicam putnd fi decelate chiar i dup o perioad de 24 ore de la aplicarea unguentului pe membrana artificial. Aceste rezultate au fost n concordan cu cele gsite n literatura de specialitate[132]. n studiul efectuat de Nagia et al. n 2006 folosind diferite geluri cu Meloxicam, cantitatea de substan activ difuzat prin membran artificial a atins cote maxime pn la 2 ore de la momentul aplicrii, iar la 9 ore dup aplicare, aceasta a fost de 133.6 g/cm2 pentru un gel de carbopol cu 0.5% Meloxicam[32]. n alt studiu efectuat de Jantharaprapap et al. n 2007, cantitatea difuzat a atins valori de 500g/cm2 n condiiile aplicrii a 0.5g gel Meloxicam 0.3% [38]. Vitezele de difuzie obinute n cadrul Studiului II au putut fi optimizate prin testarea mai multor ageni de cretere a difuziei prin membran. Dintre toi agenii, trietanolamina a avut cea mai mare influen asupra vitezei de difuzie, aceasta atingnd valori de 0.018mg/min la 10 minute de la aplicare. Picurile vitezelor de difuzie prin membrana artificial utiliznd soluia salin cu pH 4.5 apar ceva mai trziu, cu o laten de 10-15 minute comparativ cu cele aprute cnd s-a utilizat soluia salin pH 7.5.
[31]
29
Studiile recente arat continua preocupare a cercettorilor pentru creterea gradului de solubilizare i de difuzie prin diferite membrane artificiale i naturale a Meloxicamului, un antiinflamator cu un potenial ridicat din punct de vedere al aciunii terapeutice la aplicare topic [31] .
III.4.5. CONCLUZII
1. Viteza de difuzie (mg/ml) a Meloxicamului prin membrana artificial a crescut n toate cazurile foarte mult n intervalul de timp 0 - 30 minute, dup care a sczut treptat, cantiti de Meloxicam putnd fi decelate chiar i dup o perioad de 24 ore de la aplicarea unguentului pe membrana artificial. 2. Viteza maxim de difuzie a Meloxicamului se nregistreaz n cazul formulei care conine ca agent de cretere a solubilitii Trietanolamina. Viteza atinge valori maxime de aprox 0.018mg/min la 10 minute de la aplicare. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea fi explicat prin transformarea Meloxicamului n sarea sa, un compus mai uor solubil i deci care poate difuza mai uor prin membrana artificial. 3. Adugarea de PEG 400 solubilizeaz Meloxicamul i duce la formarea unui unguent de tip soluie, dar evoluia vitezei de difuzie sugereaz o afinitate foarte mare a Meloxicamului pentru agentul de solubilizare PEG 400, respectiv PEG 4000 n cazul formulrilor G4, respectiv U2. 4. Evoluia vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu pH 4.5 este asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, valorile maxime aprnd ceva mai trziu, cu o laten de 10-15 minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5. 5. Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24 ore de la aplicarea unguentului) este ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%), formul la care s-au observat i cele mai mari valori ale vitezei de difuzie. Restul formulelor au avut un procent de Meloxicam difuzat n medie de 40%. 6. Procentul mai mic difuzat n cazul soluiilor receptoare cu pH acid 4.5 poate fi datorat unei solubiliti mai reduse a Meloxicamului n aceste soluii, dar i unei posibile degradri a acestuia la acest pH. Orientarea ctre o ipotez sau alta, trebuie s in cont i de cantitatea de Meloxicam care nu a fost regsit n: gel, membran sau soluia receptoare. Aceast cantitate neregsit poate fi datorat pierderilor inevitabile din timpul manipulrii. 7. Dintre toate formulele, hidrogelul pe baz de Carbopol 990 cu agent de cretere a solubilitii Trietanolamin a avut cel mai bun profil farmacocinetic, comparativ cu celelalte 3 formulri.
30
III.5. STUDIUL III - PROFILUL FARMACOCINETIC DE CEDARE IN VITRO AL MELOXICAMULUI PRIN PIELE ANIMAL DIN FORMELE FARMACEUTICE SEMISOLIDE HIDROFILE. INFLUENA PROMOTORILOR DE ABSORBIE I A pH-ULUI
III.5.1. MOTIVAIA STUDIULUI
Foarte multe dintre studiile in vitro efectuate au ca scop corelarea valorilor obinute cu cele determinate prin studiile in vivo, aa nct treptat s poat fi eliminate studiile ce implic animale vii. Uneori aceste corelri sunt dificil de realizat. Acest experiment are ca obiectiv determinarea profilului farmacocinetic al Meloxicamului ca reprezentant al clasei antiinflamatoarelor nesteroidiene, utiliznd metoda in vitro din studiul anterior, dar prin folosirea unei membrane naturale (pielea de oarece). Din gama variat a preparatelor utilizate n studiul anterior, au fost selectate pentru a fi testate n acest studiu formulele cu cele mai bune profile de cedare a substanei active. Diferenele care au aprut n profilul de cedare al Meloxicamului s-au datorat prezenei unor substane cu rol de promotori de absorbie. Am determinat influena diferitelor substane auxiliare asupra difuziei Meloxicamului la dou pH-uri diferite: unul acid, asemntor cu al pielii - 4.5 i unul neutru, fiziologic, asemntor cu al plasmei - 7.5.

Substanele i soluiile folosite au fost: Meloxicam (Unichem Laboratories LTD), Carbopol 990 (Medchim T.M.), Tween 80 (Merck), Trietanolamin (Fluka Chemie AG), Polietilenglicol 400 (Merck), Polietilenglicol 4000 (Merck) Glicerin (SC Chimreactiv SRL), Hidroxid de sodiu (Merck), Fenosept, Ser fizioliogic 0,9% m/v (BBraun), Nipagin, Nipasol, Lanolin, Vaselin, Metilceluloz. Pentru testele de difuzie in vitro s-a folosit celula de difuzie Franz termostatat ntr-o baie de ap cu recirculare, meninndu-se o temperatur de 320C. Ca membrane biologice naturale au fost folosite poriuni de piele proaspt recoltat de la oarece adult. Pielea dorsal a fost obinut de la oareci Swiss albino aduli cu o greutate de aproximativ 30g. Toate experimentele au fost efectuate n acord cu regulile bioetice de cercetare tiinific de la nivelul instituiei noastre Universitatea de Medicin i Farmacie Craiova. oarecii au fost anesteziai cu eter i apoi sacrificai prin tierea venei jugulare. Pielea dorsal a fost prelevat, iar blana a fost ndeprtat prin radere cu ajutorul unui aparat de ras. Grosimea pielii abdominale de oarece a fost de 1.83x10-2cm. Pielea fost secionat n fracii de cte 15 mm diametru. nainte de fixarea pe celula de
31
difuzie, fiecare fracie de piele a fost analizat din punct de vedere al integritii fizice, urmrindu-se s nu fie prezente zone de piele prin care cederea s se fac neuniform.
FIGURA 5 - OARECE SWISS ALBINO UTILIZAT N EXPERIMENTE
FIGURA 6 ZON INTEGR DE PIELE DORSAL
FIGURA 7 ZON DE PIELE UTILIZAT N TESTELE DE DIFUZIE
Protocolul de difuzie a fost identic cu cel utilizat n Studiul II anterior.
III.5.3. REZULTATE
Absorbtia in functie de concentratie
3 2.5
Absorbtia
1.5 1
0.5 0 0 20 40 60 80 100 120 Absorbtia concentratia m g/100 m l
GRAFIC 14 - ABSORBIA STANDARDELOR N FUNCIE DE CONCENTRAIE
32
III.5.3.1. STUDIU COMPARATIV: DISTRIBUIA MELOXICAMULUI N CELE TREI COMPARTIMENTE: UNGUENT HIDROFIL MEMBRAN - SOLUIE RECEPTOARE n cazul experimentului efectuat, se poate observa c formularea G2P2, are cea mai mic valoare a procentului de Meloxicam rmas n piele (aproximativ 20%). Chiar i n condiiile unui pH acid 4.5, dei valorile sunt ceva mai mari, se pstreaz aceeai tendin, formula G2P2 avnd cel mai mic procent nedifuzat(aproximativ 25%).
Procentul de Meloxicam ramas in unguentul aplicat pe piele
70 60
Procent (%)
50 40 30 20 10 0 G1 G2P2 G4 U2
Tipul de formulare
pH 7.5
pH 4.5
GRAFIC 15 - PROCENT DE MELOXICAM RMAS N UNGUENTUL APLICAT p=0.14526511
100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% G1 G2P2 G4 U2
Procentaj (%)
Tip formulare
GRAFIC 16 - EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN PIELE ANIMAL LA pH 7.5

100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% G1 G2P2 G4 U2
Procentaj (%)
Tip formulare
GRAFIC 17 - EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN PIELE ANIMAL LA pH 4.5
33
II.5.3.2. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE I A pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE Graficele reprezint evoluia vitezei de cedare a Meloxicamului pentru cele patru formulri cu compoziie diferit n dou condiii de lucru diferite: pH 4.5 i pH 7.4.
Influenta pH-ului asupra vitezei de cedare EXP 5 vs EXP 13 - G1 PIELE
0.0007
0.0006 0.0005 0.0004 0.0003 0.0002 0.0001 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Timp (min)
EXP 5 G1 PIELE (DESIGN 9)
GRAFIC 18 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA G1 p=0.0322959

Influenta pH-ului asupra vitezei de cedare EXP 6 vs EXP 14 - G2P2 PIELE
0.0016 0.0014 0.0012 0.001 0.0008 0.0006 0.0004 0.0002 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Timp (min)
EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8)
GRAFIC 19 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA G2P2 p=0.029771

Influenta pH-ului asupra vitezei de cedare EXP 7 vs EXP 15 - PEG 400 CARBOPOL - PIELE
0.0014 0.0012
0.001 0.0008 0.0006 0.0004 0.0002 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Timp (min)
EXP 7 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 17) EXP 15 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 20)
GRAFIC 20 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA G4 p=0.0002639
34
Influenta pH-ului asupra vitezei de cedare EXP 8 vs EXP 16 - PEG 400 PEG 4000 - PIELE
0.0014
0.0012 0.001 0.0008 0.0006 0.0004 0.0002 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Timp (min)
EXP 8 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 18) EXP 16 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 21)
GRAFIC 21 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA U2 p=0.0006772
Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei vitezei de difuzie in vitro a Meloxicamului din unguente hidrofile prin piele animala la pH 7.5
0.0016
VITEZA DE DIFUZIE (mg/min)
0.0014 0.0012 0.001 0.0008 0.0006 0.0004 0.0002 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440 TIMP (MIN) EXP 5 G1 PIELE (DESIGN 9) EXP 7 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 17) EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8) EXP 8 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 18)
GRAFIC 22 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI DIN UNGUENTE HIDROFILE PRIN PIELE ANIMAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5 Comparnd G2P2 din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului prin piele de oarece, cu G1, G4 i U2 la pH 7.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p: 0.0002864, 0.0090254, 0.0140013.
35
Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei vitezei de difuzie in vitro a Meloxicamului din unguente hidrofile prin piele animala la pH 4.5
0.0014 0.0012 0.001 0.0008 0.0006 0.0004 0.0002 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440 TIMP (MIN) EXP 13 G1 PIELE (DESIGN 12) EXP 15 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 20) EXP 14 G2P2 PIELE (DESIGN 11) EXP 16 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 21)
GRAFIC 23 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI DIN UNGUENTE HIDROFILE PRIN PIELE ANIMAL LA pH-UL PIELII 4.5 Comparnd G2P2 din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului prin piele de oarece, cu G1, G4 i U2 la pH 4.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p: 7.06278E-05, 0.000316052, 1.53073E-05 (p<0.05).
III.5.3.3. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE I A pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT
Influenta pH-ului asupra procentului de Meloxicam difuzat EXP 5 vs EXP 13 - G1 PIELE
30 25 20 15 10 5 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Timp (min)
GRAFIC 24 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G1 p=0.0276794 36
Influenta pH-ului asupra procentului de Meloxicam difuzat EXP 6 vs EXP 14 - G2P2 PIELE
70
60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Timp (min)
GRAFIC 25 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G2P2 p=0.0188565
Influenta pH-ului asupra procentului de Meloxicam difuzat EXP 7 vs EXP 15 - PEG 400 CARBOPOL - PIELE
50
45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Timp (min)
EXP 7 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 17)
EXP 15 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 20)
GRAFIC 26 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G4 p=0.0226368
37
Influenta pH-ului asupra procentului de Meloxicam difuzat EXP 8 vs EXP 16 - PEG 400 PEG 4000 - PIELE
50 40
30 20 10 0 1440
Timp (min)
EXP 8 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 18)
EXP 16 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 21)
GRAFIC 27 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA U2 p=0.0181545
Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei procentului de Meloxicam difuzat in vitro din unguente hidrofile prin piele animala la pH 7.5
70
PROCENT DIFUZAT (%)
60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440 TIMP (MIN) EXP 5 G1 PIELE (DESIGN 9) EXP 7 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 17) EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8) EXP 8 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 18)
GRAFIC 28 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT DIN UNGUENTE HIDROFILE PRIN PIELE ANIMAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5 Comparnd G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat prin piele de oarece, cu G1, G4 i U2, la pH 7.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p: 0.0193025, 0.0520875, 0.0652805 (p<0.05).
38
Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei procentului de Meloxicam difuzat in vitro din unguente hidrofile prin piele animala la pH 4.5
60
50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440 TIMP (MIN) EXP 13 G1 PIELE (DESIGN 12) EXP 15 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 20) EXP 14 G2P2 PIELE (DESIGN 11) EXP 16 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 21)
GRAFIC 29 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT DIN UNGUENTE HIDROFILE PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH-UL PIELII 4.5 Comparnd G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat prin piele de oarece, cu G1, G4 i U2, la pH 4.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p: 0.020147496, 0.063803846, 0.047039375 (p<0.05).
III.5.4. DISCUII
n ultimii ani, cercettorii au ncercat s demonstreze c unele antiinflamatoare precum ketoprofenul, naproxenul, tenoxicamul i celecoxibul au un profil foarte bun de cedare la administrare topic [40]. Pentru testele in vitro se pot folosi trei tipuri de piele: membrana epidermic (de o grosime de 0.1 mm, obinut prin tratament termic, chimic sau enzimatic), piele cu grosime variabil (splitthickness skin) ntre 0.2 0.5mm, obinut cu ajutorul dermatomului, sau pielea ntreag cu o grosime ntre 0.5 i 1mm. Din toat structura pielii, cel mai important rol l are stratum corneum. Un posibil dezavantaj al pielii ntregi este constituit de faptul c zona lipofilic de la nivelul dermului poate reine substanele active, fcndu-le inaccesibile soluiei receptoare. Pe de alt parte, membranele epidermice sunt foarte fragile i supraestimeaz absorbia in vivo. Metoda de lucru utilizat n aceast tez a avut la baz studiile recente din domeniu. Durata de expunere este considerat a fi optim n general n intervalul 6-8-24 ore. O expunere un timp mai scurt nu ofer informaii suficiente pentru a stabili un profil farmacocinetic de absorbie, iar un timp mai ndelungat de contact nu este necesar deoarece majoritatea substanelor active administrate topic nu necesit un timp mai mare de 24 ore pentru exercitarea efectului terapeutic
[40]
Difuzia in vitro a Meloxicamului prin piele animal a fost mai dificil dect prin membrana artificial. Acest aspect a fost evideniat i de ali cercettori. Spre exemplu, n studiul efectuat n India n 2010 de ctre Shashikant et al, fluxul prin pielea abdominal de obolan a variat n jurul valorii de 39
200 g/cm2/h, n condiiile utilizrii unor geluri de Carbopol 934P cu adaos de trietanolamin, propilenglicol sau DMSO[195]. n acelai studiu, procentul de Meloxicam difuzat a atins valori de 90%. Studiul a decelat Meloxicamul din soluia receptoare doar pn la 12 ore de la aplicare. Comparativ cu acesta, rezultatele obinute n cadrul prezentei teze au fost satisfctoare, procentul de Meloxicam difuzat atingnd i valori de 70% n cazul formulei G2P2. n literatur sunt menionate i procente mai mici de 70% de Meloxicam difuzat prin piele animal. Viteza de cedare a Meloxicamului atinge valori mai mari cnd se lucreaz la pH fiziologic comparativ cu pH-ul acid unde se obin valori de aproximativ 1.1g/min. Fluxul se ncadreaz n valorile gsite n literatur de aprox 50-100 g/cm2/h [32]. Comportamentul la cele dou pH-uri diferite a fost similar, observndu-se pierderi aproximativ egale. Pierderile de Meloxicam observate n anumite cazuri, ar putea fi datorate afinitii foarte mari a Meloxicamului pentru agentul de solubilizare polietilenglicolul 4000. n aprilie 2010, un studiu publicat n Scientia Pharmaceutica a artat o posibil afinitate a substanei active pentru polietilenglicoli [41].
III.5.5. CONCLUZII
1. Formele farmaceutice topice cu piroxicam, substan cu structur i aciune farmacologic similar cu a Meloxicamului, au un coninut n substan activ de 0.5 1.5%. Deoarece Meloxicamul este de 2-3 ori mai puternic din punct de vedere al aciunii terapeutice, am optat pentru o concentraie de 0.3% Meloxicam n formele farmaceutice studiate. 2. Factorii care au variat n experimentele efectuate au fost: agentul de solubilizare i pH-ul (7.4 i 4.5). 3. Formula la care s-au obinut cele mai mari valori ale vitezei de cedare a Meloxicamului (mg/min) a fost G2P2 (gel de carbopol cu adaos de trietanolamin), fapt explicat prin creterea gradului de solubilizare a Meloxicamului. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea fi explicat prin transformarea Meloxicamului n sarea sa cu Trietanolamina, un compus mult mai uor solubil i deci care poate difuza mai uor prin membran natural. 4. n cazul difuziei prin piele de oarece, se remarc dou valori maxime ale vitezei de difuzie: la 5-10 minute i la 3 ore de la nceperea experimentului. Aceste picuri apar n cazul tuturor celor patru formulri testate, maximele fiind atinse tot n cazul formulrii G2P2. Ele s-ar putea datora
mecanismelor diferite de difuzie implicate n transportul substanei active. Concentraiile de Meloxicam obinute n soluia receptoare sunt n concordan cu cele gsite n literatur. 5. Procentul de Meloxicam difuzat prin pielea de oarece s-a ncadrat ntre 30 i 70%, cu valori mai bune n cazul utilizrii pH-ului neutru i a agentului de solubilizare trietanolamina (formula G2P2). Totui, comparativ cu datele din literatur, procentele difuzate in vitro au fost mai mici. 40
III.6.
STUDIUL
IV
COMPARAREA
DIFUZIEI
IN
VITRO
MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ATIFICIAL I PRIN PIELE ANIMAL

Folosind datele obinute n cadrul studiilor anterioare efectuate pe membran artificial i pe piele dorsal de oarece, se pot trage cteva concluzii referitoare la profilul farmacocinetic al Meloxicamului difuzat prin diferite tipuri de membrane naturale sau artificiale utiliznd teste in vitro. Se poate analiza variaia vitezei de difuzie, a procentului de Meloxicam difuzat i a distribuiei Meloxicamului n cele trei compartimente: form farmaceutic, membran i soluie receptoare. Suprafaa de difuzie a fost n toate experimentele aceeai.
III.6.1. VARIAIA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI N FUNCIE DE TIMP Formularea farmaceutic cu cele mai bune rezultate s-a dovedit a fi G2P2 care are n compoziie Meloxicam 0.3%, Trietanolamin 3%, Carbopol 990 1%, Glicerin 12 %, Soluie NaOH 10% - 6.5% i Soluie Fenosept 1% (g/g).
Variatia vitezei de difuzie a Meloxicamului in functie de timp
0.02
0.018 0.016 0.014 0.012 0.01 0.008 0.006 0.004 0.002 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Timp (min)
EXP 2 G2P2 (DESIGN 2) EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8)
GRAFIC 30 - VARIAIA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI N FUNCIE DE TIMP PENTRU FORMULA G2P2 pH 7.4 p=0.003375384 Comparnd difuzia prin cele dou tipuri de membran, se poate observa c viteza de difuzie ia valori mult mai mari n cazul difuziei prin membrana artificial dect prin cea animal, ceea ce era de ateptat, innd cont de caracteristicile celor dou tipuri de membran: grosime, compoziie, tipuri de difuzie implicate. Se mai poate remarca faptul c n cazul difuziei prin piele animal, viteza de difuzie are dou picuri la 5-10min i la 3 ore dup aplicare, spre deosebire de membrana artificial unde aceasta crete pn la 15 minute, dup care ncepe s scad pn la 24 ore. Trebuie avut n vedere i faptul c membrana artificial poate avea o grosime cu pn la de 10 ori mai mic dect pielea recoltat de la oarece. 41
III.6.2. VARIAIA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT N FUNCIE DE TIMP

Variatia procentului de Meloxicam difuzat in functie de timp
100 90
Procent difuzat (%)
80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440
Timp (min)
EXP 2 G2P2 (DESIGN 2) EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8)
GRAFIC 31 - VARIAIA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT N FUNCIE DE TIMP PENTRU FORMULA G2P2 pH 7.4 p=0.0002125 Procentul de Meloxicam difuzat a atins valori asemntoare cu cele din literatur pentru experimente similare, el incadrndu-se n jurul valorii de 80-90% pentru difuzia prin membran artificial i 60% pentru cele ce au utilizat pielea animal. Procentul de Meloxicam neregsit n cazul experimentelor prin piele animal a fost ceva mai mare, oferind ipoteza unei retenii a substanei active n mostra de piele utilizat, fracia aceasta putnd avea i rol dept. Nu au aprut diferene semnificative la utilizarea unui pH 4.5 diferit de cel fiziologic. Urmtoarea etap ar fi efectuarea unor teste in vivo cu aplicarea acestei forme farmaceutice direct pe pielea unui animal viu, cu determinarea variaiei concentraiei plasmatice.
III.7. STUDIUL V - EVALUAREA FARMACOCINETIC IN VIVO A UNOR PREPARATE CU ANTIINFLAMATOARE NESTEROIDIENE APLICATE TOPIC FOLOSIND EXPERIMENTE PE ANIMALE
III.7.1. MOTIVAIA STUDIULUI
Antiinflamatoarele nesteroidiene aplicate topic prezin efecte terapeutice locale similare, dar efectele adverse gastrice sunt mult reduse comparativ cu efectele secundare aprute dup administrare oral sau injectabil. n acest studiu s-a dorit determinarea concentraiilor plasmatice a ctorva dintre antiinflamatoarele nesteroidiene dup administrarea percutan n doz unic la animale de laborator i
42
monitorizarea acestor concentraii plasmatice n decurs de 24 ore. Determinrile cantitative i calitative au fost efectuate prin cromatografie de lichide. Studiul i-a mai propus s determine: - dac la administrarea cutanat AINS se absorb i ating nivele plasmatice similare cu nivelele plasmatice descrise n literatur ca fiind terapeutice; - dac preparatele cu eliberare lent administrate cutanat n priz unic prezint o eficien i o tolerabilitate bun. Proporia de AINS absorbit prin piele depinde de timpul de contact, de aria acoperit, precum i de doza total i de hidratarea pielii. S-a determinat cantitatea de substan activ absorbit prin piele, prin determinarea concentraiilor plasmatice.

Au fost folosii: iepuri aduli cu greuti aproximativ identice (3kg), de sex masculin; Diclofenac - Diclac 5% gel HEXAL, lot 8C7627; Indometacin - Indometacin 4% crem MARK PHARMACEUTICS, lot 008; pansamente sterile; seringi; ace de unic folosin pentru recoltarea probelor; vat; pansamente sterile; recipiente sterile pentru recoltarea probelor de snge; ser fiziologic 90mg/10ml ZENTIVA; main de tuns electric; fosfat monopotasic Merck; acetonitril Merck; cloroform Merck; naproxen; balan electronic; centrifug; cromatograf de lichide FINNIGAN SURVEYOR cu coloan BDS - HYPERSIL C18, 250X4,6 i dimensiunea particulelor de 5m. Metoda de lucru a folosit iepuri aduli crora li s-a aplicat n zona dorsal o anumit cantitate de form farmaceutica semisolida produs industrial i distribuit pe piaa farmaceutic din Romnia. Animalele de laborator au fost 10 iepuri masculi aduli, fiecare cu o greutate de aproximativ 3kg. Iepurii au fost mparii n dou loturi: 5 iepuri au fost tratai cu cte 2g Diclac 5% gel HEXAL, iar ceilali 5 iepuri au fost tratai cu cate 2g Indometacin 4% crem MARK PHARMACEUTICS. Formele farmaceutice respective au fost aplicate pe suprafaa ras anterior, care nu prezenta leziuni de continuitate. Probele de snge (3ml) au fost recoltate la intervale de 2 ore pe parcursul primelor 12 ore de la nceperea experimentului, ultima prob fiind prelevat la 24 ore. Probele au fost pstrate pn la separarea plasmei i apoi centrifugate 10min la 4800rpm. Din probele recoltate de la fiecare iepure, s-au prelevat cte 500l ser. Probele s-au analizat cromatografic folosindu-se un cromatograf de lichide FINNIGANSURVEYOR cu coloan BDS- Hypersil C18, 250 X 4,6 mm i cu dimensiunea particulelor de 5 m folosindu-se metoda eluiei izocratice.
43
III.7.3. REZULTATE
Dup analiz cromatografic, rezultatele obinute au fost reprezentate mai jos.
FIGURA 8 - CROMATOGRAMA DICLOFENACULUI
FIGURA 9 - CROMATOGRAMA INDOMETACINULUI
GRAFIC 32 - VARIAIA CONCENTRAIEI PLASMATICE MEDII A DICLOFENACULUI N FUNCIE DE TIMP (ORE) 44
GRAFIC 33 - VARIAIA CONCENTRAIEI PLASMATICE MEDII A INDOMETACINULUI N FUNCIE DE TIMP (ORE)
III.7.4.DISCUII
Aciunea analgezic i antiinflamatoare, ct i toxicitatea sunt corelate cu concentraia plasmatic a medicamentului i se afl n strns legtur cu inhibarea ciclooxigenazei COX1 cu scderea succesiv a nivelului de prostaglandine. Prin studiul efectuat, am determinat concentraia plasmatic a Indometacinului i Diclofenacului, ca parametru important de farmacocinetic, dup aplicarea topic a celor dou antiinflamatoare la iepure. Diclofenacul i Indometacinul au avut o cretere progresiv a concentraiilor plasmatice, asemntoare pn la 12 ore, cu scdere progresiv dar meninndu-se i la 24 de ore de la aplicare pentru ambele preparate folosite. Ambele substane au realizat concentraii asemntoare n plasm. Avnd n vedere c testarea s-a facut pe iepuri de acelai sex, cu greutate corporal aproximativ egal, la care administrarea s-a efectuat folosind aceeai cale, cutanat, nivelul plasmatic al substanelor nu a fost influenat de variaii ale absorbiei sau ale primului pasaj. Tegumentul animalelor nu a prezentat escoriaii care ar fi putut s influeneze absorbia prin untarea tegumentului. La finalul studiului starea general a animalelor de experien a fost bun, la nivelul locului de administrare neaprnd fenomene de iritaie, hematoame sau semne de infecie. Pe parcursul experimentului nici un iepure nu a prezentat reacii adverse (erupii cutanate, tulburri digestive, reacii anafilactoide). Comparnd cu datele din literatur obinute dup administrarea oral a Diclofenacului i Indometacinului, concentraiile plasmatice din studiul acesta, dup administrare cutanat au fost puin mai mici (0,35158g/ml la Diclofenac i respectiv 0,35404 g/ml la Indometacin n raport cu datele din literatur de 0,45 0,5g/ml la administrarea oral la om) i obinute la intervale de timp mai mari (concentraia maxim a fost obinut n acest studiu la 12 ore, n raport cu studiile din literatur, unde la administrarea oral concentraiile maxime au fost obinute la 4 ore de la administrarea a 100 mg 45
compus antiinflamator la om). n studii la om, concentraia plasmatic maxim pentru plasturii cu Diclofenac a fost: 376, 1562, 2953, 2902, 2864, i 2948 ng/ml, dup 2, 4, 8, 24, 30, i 48 ore de la aplicarea plasturilor care conineau 50mg diclofenac dietilamin. Concentraia plasmatic maxim dup administrarea oral a 50mg Diclofenac sodic, valorile raportate sunt: 383.7, 2569, 3693.5, 162.5 i 55.3ng/ml la 2, 4, 8, 24, i 30 ore dup adiministrare unic. Valorile Cmax dup administrare oral sunt 3693.5 ng/ml, respectiv 2953.8 ng/ml dup administrare transdermic [42]. n studiul efectuat de Magnette JL i colab. (2004) s-au obinut concentraii plasmatice mari la om datorit suprafaei mari de aplicare (15% din suprafaa corpului) a Indometacinului (eritem indus de ultraviolete). Aplicarea topic pe zone limitate de piele a antiinflamatoarelor nesteroidiene la om nu realizeaz totui concentraii plasmatice mari [43].
III.7.5. CONCLUZII
1. Rezultatele acestui studiu susin ideea c antiinflamatoarele nesteroidiene (Diclofenac, Indometacin) administrate cutanat la iepure realizeaz concentraii plasmatice apropiate de nivelele obinute la administrarea oral, dar mai tardiv. 2. Experimentul efectuat aduce argumente suplimentare asupra eficienei terapeutice a preparatelor topice cu antiinflamatoare nesteroidiene n tratamentul afeciunilor inflamatorii cronice, cu localizare cutanat, articular (unguente, geluri), sfera genital (unguente, geluri, ovule) [44] etc. 3. Datorit mecanismului de aciune al antiinflamatoarelor nesteroidiene, chiar i n cazul aplicrii topice, trebuie meninute contraindicaiile digestive i luate msuri de protecie gastric deoarece concentraiile plasmatice sunt suficient de mari pentru a realiza efecte sistemice terapeutice, dar i adverse.
IV. CONCLUZII FINALE

Numrul studiilor avnd ca interes durerea generat de inflamaie a crescut semnificativ n ultimul deceniu, ceea ce arat c acest domeniu are foarte multe resurse neexploatate nc la nivel mondial. Numrul de apariii bibliografice n perioada 2000-2010 raportat la numrul de apariii din 1990-2000 este semnificativ mai mare, raportul fiind de 1,244845, adic cu aproape 25% mai mult. Meloxicamul (cod ATC M01AC06) se gsete formulat n ara noastr doar sub form de comprimate, supozitoare i soluii injectabile. n urma cercetrii preclinice au putut fi trase urmtoarele concluzii: 1.Creterea solubilitii Meloxicamului (o substan cu o slab solubilitate n solveni lipofili i hidrofili) s-a remarcat la Tween 80 0.1%, Trietanolamina 30% i Polietilenglicolul 400 3%. Acetia au fost singurii excipieni dintre cei testai, care adugai n unguente alturi de substana activ, au dus la solubilizarea Meloxicamului i la obinerea unor unguente de tip soluie transparente; 46
2.Dintre agenii presupui a crete solubilitatea, octilsulfatul de sodiu, un agent tensioactiv cu proprieti umectante i de scdere a tensiunii superficiale lichid solid, nu a reuit s solubilizeze Meloxicamul; 3.Au fost formulate 9 unguente din categoria unguentelor hidrofile i lipofile, de tip soluie (gelurile G1, G2P2, G4 i unguentul U2), dar i de tip suspensie (gelurile G2P1, G3, G5, G6 i unguentul U1); 4.Din punct de vedere organoleptic, unguentele obinute au caracteristicile componentelor. pH-ul lor s-a ncadrat n limitele impuse de FR X; 5.Analiznd vscozitatea preparatelor obinute, doar formulele G1, G2P2, G4, U1 i U2 au fost considerate a fi corespunztoare unui unguent ideal, restul preparatelor avnd o consisten mult prea sczut; 6.Vscozitatea preparatelor a fost slab influenat, n sensul scderii ei, de ctre substana medicamentoas testat - Meloxicam 0.3%; 7.Din punct de vedere al capacitii de ntindere, preparatele pe baz de carbopol au avut un comportament asemntor. 8.In vederea determinrii profilului cinetic de cedare a Meloxicamului prin membrana artificial, au fost alese preparatele cu caracteristicile optime i anume: gelurile G1, G2P2, G4 i unguentele U1 i U2. 9.S-a putut observa c viteza de difuzie (mg/ml) a Meloxicamului prin membrana artificial crescut n toate cazurile foarte mult n perioada de timp 0-30 minute, dup care a sczut treptat, cantiti de Meloxicam putnd fi decelate chiar i dup o perioad de 24 ore de la aplicarea unguentului pe membrana artificial. 10. Viteza maxim de difuzie a Meloxicamului s-a nregistrat n cazul formulei care conine ca agent de cretere a solubilitii Trietanolamina. Viteza a atins valori maxime de aproximativ 0.018mg/min la 10 minute de la aplicare. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea fi explicat prin transformarea Meloxicamului n sarea sa cu Trietanolamina, un compus mult mai uor solubil i deci care poate difuza mai uor prin membrana artificial. 11. PEG-ul 400 a solubilizat Meloxicamul i a dus la formarea unui unguent de tip soluie, dar evoluia vitezei de difuzie a sugerat o afinitate foarte mare a Meloxicamului pentru agentul de solubilizare PEG 400, respectiv PEG 4000, n cazul formulrilor G4, respectiv U2. 12. Evoluia vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu pH 4.5 este asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, valorile maxime n soluia receptoare aprnd ceva mai trziu, cu o laten de 10-15 minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5. De asemenea, valorile pe care le ating vitezele sunt i ele mai sczute comparativ cu cele determinate n cadrul experimentelor desfurate la pH 7.5. 47
13. Concentraiile de Meloxicam decelate n soluiile receptoare la pH 7.5 i 4.5 sunt eficiente pentru a asigura aciune terapeutic local i sunt suficient de mici pentru a minimaliza efectele sistemice. 14. Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24 ore de la aplicarea unguentului) a fost ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%), formul la care s-au observat i cele mai mari valori ale vitezei de difuzie. Restul formulelor au avut un procent de Meloxicam difuzat n medie de 40%. 15. Procentul mai mic difuzat n cazul soluiilor receptoare cu pH acid 4.5 poate fi datorat unei solubiliti mai reduse a Meloxicamului n aceste soluii, dar i unei posibile degradri a acestuia la pH acid. Orientarea ctre o ipotez sau alta, trebuie s in cont i de cantitatea de Meloxicam care nu a fost regsit n nici unul dintre compartimente: gel, membran, soluie receptoare. 16. Dintre toate formulele, hidrogelul pe baz de Carbopol 990 cu agent de cretere a solubilitii Trietanolamin a avut cel mai bun profil farmacocinetic, comparativ cu celelalte 3 formulri
[45]
17. n experimentele in vitro de difuzie a preparatelor cu Meloxicam prin pielea de oarece formula la care s-au obinut cele mai mari valori ale vitezei de cedare a Meloxicamului (mg/min) a fost G2P2 (gel de carbopol cu adaos de trietanolamin), fapt explicat prin creterea gradului de solubilizare a Meloxicamului. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea fi explicat prin transformarea Meloxicamului n sarea sa cu Trietanolamina, un compus mult mai uor solubil i deci care poate difuza mult mai uor prin membrana natural 18. n cazul difuziei prin piele de oarece, s-au remarcat dou picuri ale vitezei de difuzie: la 5-10 minute i la 3 ore de la nceperea experimentului. Aceste picuri au aprut n cazul tuturor celor patru formulri testate, maximele fiind atinse tot n cazul formulrii G2P2. Ele s-ar putea datora mecanismelor diferite de difuzie implicate n transportul substanei active. Concentraiile de Meloxicam obinute n soluia receptoare au fost n concordan cu cele gsite n literatura de specialitate. 19. Prin folosirea membranei naturale, procentul de Meloxicam difuzat s-a ncadrat ntre 30 i 70%, cu valori mai bune n cazul utilizrii pH-ului neutru i a agentului de solubilizare trietanolamina (formula G2P2). Totui, comparativ cu datele din literatur, procentele difuzate au fost mai mici. 20. Comparnd difuzia prin cele dou tipuri de membran, s-a observat c viteza de difuzie a atins valori mult mai mari n cazul difuziei prin membrana artificial dect prin cea animal, ceea ce era de ateptat, innd cont de caracteristicile celor dou tipuri de membran: grosime, compoziie, tipuri de difuzie implicate. S-a mai putut remarca faptul c n cazul difuziei prin piele animal, viteza de difuzie a avut dou picuri la 5-10 min i la 3 ore dup aplicare, spre deosebire de membrana artificial unde aceasta a crescut pn la 15 minute, dup care a sczut pn la 24 ore. Trebuie avut n
48
vedere i faptul c membrana artificial poate avea o grosime cu pn la de 10 ori mai mic dect pielea recoltat de la oarece. 21. Procentul de Meloxicam difuzat a atins valori asemntoare cu cele din literatur pentru experimente similare, el ncadrndu-se n jurul valorii de 80-90% pentru difuzia prin membran artificial i n medie de 60% pentru cele ce au utilizat pielea animal. Procentul de Meloxicam neregsit n cazul experimentelor prin piele animal a fost ceva mai mare, oferind ipoteza unei retenii a substanei active n mostra de piele utilizat, fracia aceasta putnd avea i rol dept. 22. In urma studiului in vivo, cu determinarea concentraiei plasmatice prin metoda lichid cromatografic de nalt presiune, dup aplicarea topic a unor unguente cu diclofenac i indometacin la iepure, s-a observat c se realizeaz concentraii plasmatice apropiate de nivelele obinute la administrarea oral, dar mai tardiv. 23. Datorit mecanismului de aciune a antiinflamatoarelor nesteroidiene, chiar n cazul aplicrii topice, trebuie meninute contraindicaiile digestive i luate msuri de protecie gastric, deoarece concentraiile plasmatice sunt suficient de mari pentru a realiza efecte sistemice terapeutice, dar i adverse.
49
V. BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. Popovici I., Lupuleasa D., Tehnologie Farmaceutica vol II, Polirom, Iai, (2008), 657- 664; 2. Dumitru Lupuleasa, Ionela Belu, Ani Simona Sevastre, Mirela Mitu, ndreptar practic pentru prepararea medicamentelor, Vol I Ediia a II-a, Editura Medical Universitar Craiova, (2009), 171; 3. Popovici I., Lupuleasa D., Tehnologie Farmaceutica vol I, Editura Polirom, (2001), 171-219; 4. Farmacopeea Romn a X-a, Editura Medical,(1996), p 951 1003; 5. R. Jantharaprapap, G. Stagni, Effects of penetration enhancers on in vitro permeability of Meloxicam gels, International Journal of Pharmaceutics 343 (2007) 2633; 6. Michael S. Roberts, Kenneth A. Walters, Dermal Absorption and Toxicity Assessment, DRUGS AND THE PHARMACEUTICAL SCIENCES vol 177, Informa healthcare (2008), p37 -117; 7. Pao-Chu Wu, Yaw-Bin Huang, Jia-You Fang and Yi-Hung Tsa,i In vitro percutaneouus absorption of captopril, International Journal of Pharmaceutics Volume 148, Issue 1 (1997), 41-46; 8. Glgn Yener, zlem Dal and Melike ner, Effect of Vehicles on Release of Meloxicam from Various Topical Formulation,s The Open Drug Delivery Journal (2009), 3, 19-23; 9. Paul C. Mills, Sheree E. CrossThe effects of equine skin preparation on transdermal drug penetration in vitro, The Canadian Journal of Veterinary Research, (2006);70:317320; 10. Aurelia Nicoleta Cristea, Tratat de Farmacologie Ediia I, Editura Medical Bucureti 2008, p617-635 ; 11. Farmacologie general Aurelia Nicoleta Cristea Ed Didactic i Pedagogic Bucureti (1999), p 46-76; 12. Laine L. Nonsteroidal anti-inflammatory drug gastropathy. Gastrointest Endosc Clin North Am (1996); 6: 489504; 13. Mitchell JA, Akarasereenont P, Thiemermann C, Flower RJ, Vane JR., Selectivity of nonsteroidal anti-inflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase. Proc Natl Acad Sci U S A. (1993);90:11693-11697; 14. Catella-Lawson F, Reilly M, Kapoor S, et al., Cyclooxygenase inhibitors and the antiplatelet effects of aspirin. N Engl J Med (2001); 345: 180917; 15. Fitzgerald G., Cardiovascular pharmacology of nonselective nonsteroidal antiinflammatory drugs and coxibs: clinical considerations. Am J Cardiol (2002); 89: 2632; 16. Simon A, Manigrasso M, OConnor J., Cyclo-oxygenase 2 function is essential for bone fracture healing. J Bone Miner Res (2002); 17: 96376; 17. Walley T, Coleman J., Allergic drug reactions: incidence and avoidance. Clin Immunother (1994); 1: 1019; 18. Howard S. Smith, (2006);4:277287; 50 Arachidonic Acid Pathways in Nociception, J Support Oncol
19. Saravana Kumar, Karen Grimmer, Nonsteroidal antiinflammatory drugs (NSAIDs) and physiotherapy management of musculoskeletal conditions: a professional minefield? Australia Therapeutics and Clinical Risk Management (2005):1(1) 6976; 20. Towheed T, Shea B, Wells G, Hochberg M:, Analgesia and nonaspirin, non-steroidal antiinflammatory drugs for osteoarthritis of the hip., Cochrane Database Syst Rev (2000), 2:CD000517; 21. Bing XIN, Yoshihito YOKOYAMA, Tatsuhiko SHIGETO, Hideki MIZUNUMA, Anti-Tumor Effect of Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs on Human Ovarian Cancers, PATHOLOGY ONCOLOGY RESEARCH (2007) Vol 13, No 4, http://www.webio.hu/por/ 2007/13/4/0365; 22. Muller M,Mascher H, Kikuta C, Schtier S, Brunner M, Dorner G, Eichler HG., Diclofenac concentrations in defined tissue layers after topical administration. Clin Pharmacol Ther (1997); 62: 2939; 23. Hui X, Anigbogu A, Singh P, Xiong G, Poblete N, Liu P, Maibach HI., Pharmacokinetic and local tissue disposition of [14C]sodium Diclofenac following iontophoresis and systemic administration in rabbits. J Pharm Sci (2001); 90: 126976; 24. Busch U, Engelhardt G., Distribution of [14C]Meloxicam in joints of rats with adjuvant arthritis. Drugs Exp Clin Res (1990);16:49-52; 25. Turck D, Busch U, Heinzel G, Narjes H,. Clinical pharmacokinetics of Meloxicam. Eur J Rheumatol Inflamm (1995);15:22-34; 26. Schmid J, Prox A, Busch U, Kaschke S, Sauter T., The biotransformation of Meloxicam in man and rat, Scand J Rheumatol (1994);Suppl 9, A118; 27. Engelhardt G., Meloxicam inhibits preferentially COX-2. Eur J Clin Pharmacol (1994);47:A98; 28. Pairet M, Engelhardt G., The preferential inhibition of COX-2 by Meloxicam is highly dependent on the structure of the drug. Rheumatol Eur (1995);24(suppl. 3):272; 29. http://www.rxlist.com/mobic-drug.htm; 30. Peter Luger, Klaus Daneck, Wolfhard Engel, Gnter Trummlitz, and Klaus Wagner, Structure and physicochemical properties of Meloxicam, a new NSAID, European Journal of Pharmaceutical Sciences 1996, Vol, 4, 3, 175-187; 31. Ki HM, Choi HK., The effect of Meloxicam/ethanolamine salt formation on percutaneous absorption of Meloxicam, Arch Pharm Res. (2007) Feb;30(2):215-21; 32. Nagia A. El-Megrab, Hanan M. El-Nahas and Gehan F.Balata Saudi,Formulation and evaluation of meloxicam gels for topical administration, Pharmaceutical Journal (2006), Vol. 14, Nos. 3-4; 33. Deepika Jain and Kamla Pathak, Design, Characterization, and Evaluation of Meloxicam Gel Prepared by Suspension and Solution Polymerization Using Solubility Parameter as the Basis for Development, AAPS PharmSciTech (2010), Vol. 11, No. 1; 51
34. http://www.anm.ro/anm/anm_list.asp; 35. Lenua - Maria Miclea, Lavinia Vlaia, V. Vlaia, C. Mircioiu, Formulation and quality evaluation of some hydrogels containing piroxicam 1% or Meloxicam 0,5%, Journal of Agroalimentary Processes and Technologies (2010), 16 (1), 7-12; 36. Magdalena Mititelu, L. Hincu, Prepararea i caracterizarea unor unguente cu rol protector, Craiova Medical (2007) Vol 9, Nr2; 37. Shashikant D. Barhate, Mrugendra B. Potdar, Prashant Nerker, Development of meloxicam sodium transdermal gel, International Journal of Pharma Research and Development, 2010, vol-2, ISSUE-5, 11 38. R. Jantharaprapap, G. Stagni, Effects of penetration enhancers on in vitro permeability of Meloxicam gels, International Journal of Pharmaceutics 343 (2007) 2633; 39. http:// www.rpsgb.org; 40. Yener, G.; Gnll, .; ner, M.; Deim, T.; Araman, A., Effect of vehicles and penetration enhancers on the in vitro percutaneous absorption of celecoxib through human skin. Pharmazie, (2003), 58, 330-333; 41. Babatunde Akinlade, Amal A. Elkordy, Ebtessam A. Essa, Sahar Elhagar, Liquisolid Systems to Improve the Dissolution of Furosemide, Sci Pharm.(2010); 78: 325344 42. B. Mukherjee., S. Mahapatra., S. Das., G. Roy., S. Dey, HPLC detection of plasma concentrations of diclofenac in human volunteers administered with povidone-ethylcellulose based experimental transdermal matrix-type patches, .Methods and Findings Methods Find Exp Clin Pharmacol, Prous Science, 2006, ISSN 0379-0355, 28(5): 301; 43. Magnette JL, Kienzler JL, Sallin D, Mnart C, Nollevaux F, Knops A., Diclofenac systemic exposure is not increased when topical diclofenac is applied to ultraviolet-induced erythema, Eur J Clin Pharmacol., (2004);60(8):591-4; 44. Ani-Simona Sevastre, Florica Popescu, Anca Berbecaru, O. Croitoru, Mihaela Baniceru, Pharmacokinetic Evaluation after Percutaneous Administration of Some Non-Steroidal
AntiinflamatoryDrug Preparations Using Animal Experiments, Therapeutics, Pharmacology and Clinical Toxicology, Vol XIII, Number 2, (2009), 161-166; 45. Ani-Simona Sevastre, R. Cazacincu, D. Lupuleasa, Ionela Belu, Florica Popescu, Influence Of Some Dissolution Enhancing Agents On The Pharmacokinetic Profile Of Meloxicam Delivered From Hydrophilic Ointments, Current Health Sciences Journal Vol. 36, No. 3, (2010), 151-157.
52

Cercetări Asupra Variaţiilor Farmacocinetice Ale Unor Preparate Antiinflamatoare Folosite Topic

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Cercetări Asupra Variaţiilor Farmacocinetice Ale Unor Preparate Antiinflamatoare Folosite Topic

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE CRAIOVA

REZUMAT TEZ DOCTORAT

CONDUCTOR TIINIFIC Prof. univ. dr. FLORICA POPESCU

DOCTORAND ANI-SIMONA SEVASTRE

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE - CRAIOVA

REZUMAT TEZ DOCTORAT

CONDUCTOR TIINIFIC Prof. univ. dr. FLORICA POPESCU

DOCTORAND ANI-SIMONA SEVASTRE

Cuvinte cheie: Meloxicam, topic, difuzie, poteniatori de penetrare.

II. PARTE TEORETIC - STADIUL CUNOATERII

II.2. ADMINISTRAREA TOPIC A MEDICAMENTELOR

II.2.2. PENETRAREA MEDICAMENTELOR ADMINISTRATE TOPIC

II.2.3. METODE DE TESTARE A DIFUZIEI

II.3. ANTIINFLAMATOARELE NESTEROIDIENE - DATE ACTUALE DIN LITERATUR

II.3.1. CLASIFICAREA ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE[10,11]

II.3.2. EFECTE ADVERSE

II.3.3. METABOLIZAREA AINS - RETRAGEREA DE PE PIA A VIOXX I BEXTRA

II.3.4. APLICAREA TOPIC A ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE STADIUL CUNOATERII ACTUALE

II.4. MELOXICAMUL SUBSTAN MEDICAMENTOAS TEST

II.4.2. PROPRIETI FARMACOLOGICE ALE MELOXICAMULUI

II.4.3. PROPRIETI FIZICO-CHIMICE

II.4.5. FORMULRI MELOXICAM

II.5. CONTROLUL UNGUENTELOR

III. CERCETRI PERSONALE

Procent studii legate de durere din din totalul studiilor

III.2. DESIGN EXPERIMENTAL

gsirea unor ageni de cretere a solubilitii Meloxicamului, substan test cu un grad de

al vscozitii i al plasticitii; 4. obinerea standardelor de Meloxicam i a curbei de calibrare utilizat n determinrile

APLICARE TOPIC PE BAZ DE MELOXICAM. METODE DE OPTIMIZARE A GRADULUI DE SOLUBILIZARE A MELOXICAMULUI

III.3.2. MATERIAL I METOD

TABEL 1 - pH-UL FORMULELOR PREPARATE

Vascozitatea la 23.5C Vascozitatea la 37.5C

GRAFIC 2 VARIAIA VSCOZITII N FUNCIE DE FORMULARE I TEMPERATUR 18

SUPRAFATA DE INTINDERE (mm2)

GREUTATE APLICATA (g)

PROMOTORILOR DE ABSORBIE I A pH-ULUI

III.4.2. MATERIAL I METOD

FIGURA 2 CELUL DE DIFUZIE

FIGURA 3 SCHEMA APARATURII DE DIFUZIE IN VITRO

FIGURA 4-. SPECTRUL MELOXICAMULUI (Picul se observ la 362nm)

GRAFIC 4 - VALORILE SEMNIFICATIVE ALE ABSORBIEI STANDARDELOR SLOPE = 0.0279931

Viteza de difuzie (mg/min)

Viteza de difuzie (mg/min)

Procent difuzat (%)

Procent difuzat (%)

III.4.3.2. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE

Viteza de difuzie (mg/min)

EXP 3 E14 PEG 400 CBP (DESIGN 14)

III.4.3.3. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT

Procentul difuzat (%)

70 60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

EXP 2 G2P2 (DESIGN 2)

EXP 10 G2P2 (DESIGN 6)

GRAFIC 11 PROCENT DE MELOXICAM RMAS N UNGUENTUL APLICAT p=0.15937284

Evolutia Meloxicamului la pH 7.5

80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% G1 G2P2 G4 U2

GRAFIC 12 EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH 7.5

Evolutia Meloxicamului la pH 4.5

GRAFIC 13 EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH 4.5 28

. Pentru aplicrile topice Meloxicamul ar putea fi formulat n forme

III.5.2. MATERIAL I METOD

FIGURA 5 - OARECE SWISS ALBINO UTILIZAT N EXPERIMENTE

FIGURA 6 ZON INTEGR DE PIELE DORSAL