IV.

APA. SOLUII APOASE.

Viaa este cunoscut numai n soluii apoase. Pe Pmnt viaa a aprut n apa mrii, fapt ce s-a dovedit prin studiul fosilelor, iar adaptarea la uscat a vieii este un fenomen destul de recent. Asemnarea remarcabil a compoziiei fluidelor intracelulare i extracelulare cu compoziia apei de mare ne sugereaz ipoteza apariiei vieii n apa de mare. Apa ne este att de familiar, nct noi o considerm mai degrab un lichid banal cu proprieti simple, dar cu toate acestea apa este un lichid cu o structur complex, reactiv din punct de veder chimic i cu proprieti fizice extraordinare. Proprietile apei au o profund semnificaie biologic. Structurile complexe ale moleculelor pe care se bazeaz viaa, proteinele, acizii nucleici, lipidele membranare i hidraii de carbon sunt rezultante a interaciunii lor cu apa nconjurtoare (din mediul nconjurtor). Complexitatea structurii solventului este responsabil de formarea asociaiilor moleculare i intermoleculare la aceste substane. Aceast proprietate este caracteristic la ap, nefiind cunoscut ntr-o msur att de pregnant i la ali solveni. O alt ipotez plauzubil presupune c viaa se bazeaz pe polimeri organici cum ar fi proteinele i acizii nucleici, dar i n acest caz trebuie s inem seama de organizarea complex a structurii i reaciilor chimice a sistemelor vii ce nu se pot desfura dect n soluii apoase. Procesele i structurile biologice pot fi nelese numai n limita cunoaterii proprietilor fizice i chimice ale apei.

IV.1. PROPRIETI FIZICE. IV.1.1. Constante fizice

21

Tabel nr. IV.1. Principalele constante fizice ale apei

Proprietatea presiunea de vapori temperatura critic volum molar punctul triplu - temperatura - presiunea cldura molar, Cp cldura latent de vaporizare cldura latent de topire constanta ebulioscopic constanta crioscopic tensiunea superficial Conductibilitatea specific constanta dielectric momentul dielectric produsul ionic
entalpii i entalpii libere de formare: H2(g) + 1/2O2(g) = H2O(g) H2(g) + 1/2O2(g) = H2O(l) Sursa: C. D. Neniescu Chimie General E. D. P. Bucureti p. 627

U/M (torr) (o C) (cm3) (o C) (atm) (cal/grad.mol) (cal/mol) (cal/mol) (o C) (o C) (dyn/cm) (1/ ) (D) Ionigram/l
(kcal/mol)

4,68

Valoarea la 0o C 374 57 0,01 4,6 7,98 la 0o, 1 atm 9726 la 100o C 1440 la 0o C 0,52 1,86 72,7 la 20o C -8 4.10 C 78,54 la 25o C 1,84 1,008-14 la 25o C
H298 = -57,80 G298 = -54,63 H298 = -68,32 G298 = -56,69

IV.1.2. Punctul de fierbere i de topire Punctele de topire i de fierbere ale apei au valori anormal de ridicate, comparativ cu combinaiile hidrogenului cu elementele nvecinate oxigenului din sistemul periodic dup cum se vede din tabelul nr. IV.2. Anomaliile privind punctele de fierbere i de topire se mai ntlnesc i la alte combinaii ale hidogenului, dar mult mai puin evidente, cum ar fi n cazul acidului fluorhidric i a amoniacului, n timp ce celelalte hidruri nu prezint aceste anomalii. Tabel nr. IV.2. Punctele de fierbele ale apei i ale combinaiilor hidrogenului cu elementele nvecinate oxigenului.
CH4 NH3 H2O 22 p.t. (o C) -184 -78 0 p.f. (o C) -164 -33 +100

HF SiH4 PH3 SH2 HCl

-83 -185 -133 -85 -115

+19,5 -112 -87 -61 -85

Aceste diferene mari privind punctele de topire i de fierbere raportate la masele moleculare apropiate nu pot fi explicate numai dac admitem drept cauzalitate asociaiile moleculare ce se formeaz n cazul combinaiilor cu hidrogenul a oxigenului, azotului i fluorului. IV.1.3. Densitatea Curba variaiei densitii apei cu temperatura nu descrete monoton ca la alte lichide, ci nti crete de la 0oC la 4oC, apoi scade. Gheaa la 0oC are densitatea 0,91 g/cm3. La nghearea apei are loc o scdere brusc a densitii, respectiv o cretere a volumului, cu 10%. Anomaliile densitii apei au o mare influen asupra climei planetei i asupra vieii plantelor i animalelor. Apa la 4oC, avnd densitatea mai mare dect apa mai cald sau mai rece, se adun la fundul mrilor i oceanelor, motiv pentru care apele mai adnci nu nghea niciodat pn la fund, fapt ce permite meninerea vieii. Tabel nr. IV.3. Variaia densitii apei n funcie de temperatur Tenperatura 0oC 4oC 10oC 15oC 20oC Densitatea 0,998660 1,000000 0,999727 0,999127 0,999046
Sursa: C. D. Neniescu Chimie General E. D. P. Bucureti p. 627

IV.1.4. Alte anomalii a)Cldura de vaporizare a apei este anormal de mare dup cum reiese din tabelul nr. IV.1. b) Capacitatea caloric a apei este anormal de ridicat, comparativ cu alte hidruri covalente (tabel nr. IV.1.). c) Tensiunea superficial este considerabil mai mare dect a celorlalte lichide. Aceste anomalii ale proprietilor fizice ale apei se datoresc asociaiei moleculelor de ap prin legturi de hidrogen.
23

IV.2. STRUCTURA APEI. n stare de vapori, apa este compus din molecule de H 2O, neasociate (masa molecular, M = 18). Molecula H2O are o structur angular, cu cele dou distane OH egale, de 0,958 i unghiul de valen de 104,5 o conform figurii IV.1. atomul de oxigen nu pstreaz n ap configuraia electronic din starea fundamental (1s2. 2s2. 2px2. 2py. 2pz) cci, n acest caz, unghiul de valen dintre cele dou legturi O-H ar trebui s fie un unghi drept, iar orbitalii neparticipani ar trebui s ocupe orbitalul de nelegtur 2s i unul din orbitalii p. n molecula de ap atomul de oxigen este hibridizat sp3 i n felul acesta molecula de ap dobndete o structur tetraedric.

Diferena mare de electronegativitate dinte O i H confer legturii O - H 33% caracter ionic ce este indicat prin dipolmomentul mare al apei de 1,85 uniti Debye. n mod cert apa are o molecul polar, fenomen care are implicaii enorme n sistemele vii.

24

Figura nr. IV.1. Structura moleculei de ap. Linia de margine indic razele van der Waals ce nconjoar molecula (unde componenta de atracie a interaciunilor van der Waals este compensat cu repulsia). Sursa: D. Voet, J. G. Voet
Biochemistry John Wiley - 1990

n reeaua cristalin a gheii obinuite, aa cum a fost determinat prin difracia razelor X, fiecare molecul de ap este nconjurat de alte patru molecule, aa nct atomii de oxigen a celor patru molecule s formeze un tetraedru. (figura IV.2) Fiecare atom de hidrogen a moleculei centrale formeaz o legtur de hidrogen cu cte o pereche de electroni neparticipani ai altor dou molecule de ap i fiecare pereche de electroni neparticipani ai altor dou molecule de ap, i fiecare pereche de electroni neparticipani ai moleculei centrale formeaz o legtur de hidrogen cu un atom de H a unei alte molecule de ap. n aceast structur oxigenul are numr de coordinaie 4, iar hidrogenul numr de coordinaie 2, continuat la infinit, structura aceasta duce la o reea hexagonal. Anomaliile propreitilor fizice ale apei se explic prin faptul c apa lichid nu este format din molecule H2O independente, ci din molecule asociate prin legturi de hidrogen, dei nu exist nc o unanimitate de preri asupra structurii asociate a apei, este sigur c la topirea gheii nu se rup toate legturile de hidrogen ale reelei, ci numai o parte din ele. Apa lichid este
25

deci compus din fragmente de structur tetraedric, dar i din asociaii cu structuri mai compacte. Apariia, n apa lichid, a unor structuri mai compacte n echilibru cu structura mai afnat explic creterea abrupt a densitii la topire urmat de o cretere mai lent a densitii pn la 4 oC. Peste aceast temperatur densitatea scade monoton.

Sursa: L. Pauling Chimie General Bucureti 1972

Figura IV.2. Structura gheii

Atracia electrostatic ntre dipolii a dou molecule de ap au tendina de a se orienta de-a lungul legturii O - H a unei molecule cu atomul de O dintr-o alt molecul de ap. Aceste rezultate referitoare la direcionarea asociaiilor intermoleculare se numesc legturi de hidrogen (figura IV.3.) i au implicaii cruciale n biologie. Apa fiind un solvent ideal i pentru substane capabile s formeze legturi de hidrogen.

26

Figura IV.3. Legtura de hidrogen ntre dou molecule de ap. Fora de legtur a acestei interaciuni este maxim atunci cnd legtura covalent O H este direcionat coliniar cu o pereche de electroni neparticipani ai atomului de O cu care formeaz legtura covalent n general legtura de hidrogen poate fi reprezentat D - H.A, unde D - H este un acid slab (grupare donor de tip N - H sau O - H) i A este componenta bazic (atomul acceptor, cum ar fi N i O). Nu exist polimeri definii ale apei, ci fiecare molecul de ap tinde s se nconjoare tetraedric cu alte molecule. n apa lichid se formeaz asociaii de pn la ase molecule de H2O, care exist individual numai pentru un timp foarte scurt. Asociaiile moleculare se desfac i se refac necontenit, n aa mod nct numrul total, statistic, de molecule asociate, dintr-o cantitate dat de ap, s rmn constant (la temperatur constant). Se apreciaz c la topire se rup 15% din legturile de hidrogen din cristalul de ghea; la 40oC sunt desfcute aproximativ jumtate din legturi, iar n stare de vapori sunt desfcute toate legturile de hidrogen. IV.3. APA CA SOLVENT Apa este cel mai important dintre toi solvenii utilizai n tehnic sau aprut n natur. Se spune c apa este un dizolvant universal. Apa dizolv substanele cele mai variate, dizolv electrolii (acizi, baze i sruri) formnd soluii n care aceti compui sunt ionizai. De asemenea, apa dizolv numeroase substane att anorganice ct i organice, care conin atomi capabili de a forma legturi de hidrogen cu moleculele H 2O. Substanele care se dizolv n ap se numesc hidrofile iar cele nepolare care sunt virtual insolubile n ap se numesc hidrofobe. Substanele nepolare se dizolv, totui, n solveni nepolari cum ar fi tetraclorura de carbon sau hexanul. Srurile, cum ar fi NaCl sau K2HPO4, sunt substane ce s-au format prin legturi ionice. Ionii dintr-o sare sunt atrai de sarcinile opuse, dup legea lui Coulomb:
27

F=

kq1 q 2 Dr 2

(1)

unde F este fora de atracie dintre sarcinile q1 i q2, care sunt separate prin raza r, D este constanta dielectric a mediului i k este o constant de proporionalitate (8,99.109 J.m.C-2). Constantele dielectrice a ctorva solveni comuni sunt prezentate n tabelul IV.4.. Tabel nr. IV.4. Constantele dipolare i dipolmomentele permanente a ctorva solveni comuni
Substana Formamid Ap Dimetilsulfoxid Metanol Etanol Aceton Amoniac Cloroform Dietileter Benzen Tetraclorur de carbon Hexan Constanta dielectric 110,0 78,5 48,9 32,6 24,3 20,7 16,9 4,8 4,3 2,3 2,2 1,9 Dipolmomentul (Debye) 3,37 1,85 3,96 1,66 1,68 2,72 1,47 1,15 1,15 0,00 0,00 0,00

Sursa: W. S. Brey Physical Chemistry and its Biological Application Academic Press, 1978.

Numeroase reacii au loc n soluie apoas. Printre acestea o semnificaie deosebit o au reaciile biochimice din organismele vii, care la un loc constituie mersul vieii. Solvatare. Hidratare. Solubilitatea se datoreaz formrii unor legturi slabe ntre moleculele solvatului si ale solventului. Fenomenul se numete solvatare, iar cnd solventul este apa, hidratare. Hidratarea se datoreaz fie formrii unor legturi de hidrogen, ca n cazul substanelor neionizate, fie unor atracii ion - dipol, cnd substana dizolvat (solvatul) este un compus ionic. Datorit constantei dielectrice mari a apei, n soluiile compuilor ionici, ionii de semn contrar rmn, ntr-o mare msur desprii (nu formeaz perechi sau asociaii de ioni). Constanta dielectric a apei este printre cele mai ridicate dintre lichidele polare n comparaie cu moleculele nepolare a hidrocarburilor, care au dipolmomentul relativ sczut. Acesta nu este, ns, singurul factor care determin solubilitatea mare a electroliilor n ap. Unele lichide a cror constant dielectric este mai mare dect a apei nu
28

sunt solveni buni pentru electrolii. Solubilitatea n ap a compuilor ionici este determinat de puterea mare de a solvata ionii. Un ion imersat ntr-un solvent polar va atrage sarcina opus din dipol ca i n figura IV.4. Fiecare ion se nconjoar de o atmosfer de molecule de ap. Moleculele apei, datorit momentului lor electric ( = 1,84 D) sunt orientate, n cazul cationilor, cu oxigenul (polul negativ) spre ion, iar n cazul anionilor cu un atom de hidrogen spre ion. n aceste interaciuni solvat - solvent, se degaj clduri de hidratare considerabile, de acelai ordin de mrime cu energia de reea.

Figura IV.4. Solvatarea ionilor i orientarea moleculelor de ap Un ion se solvateaz cu att mai puternic (numrul de legturi i cldura degajat sunt cu att de mari) cu ct volumul ionului este mai mic i sarcina electric mai mare. Numrul de molecule de ap, legate de fiecare ion dizolvat, poate fi evaluat cu o oarecare aproximaie din experienele de transport al ionilor n electrolize. Datele sunt prezentate n tabelul nr. IV.5. Tabel nr. IV.5. Numrul de molecule de ap care hidrateaz principalii ioni.
Ionul Nr. molec. ap Li+ 13 Na+ 8 K+ 4 NH4+ 4 H3 O+ 3 Mg+2 14 Ca+2 10 Cl8 Br4 I3

IV.4. LEGTURA DE HIDROGEN IV.4.1. Asociaii moleculare

29

nc de mult s-a remarcat c proprietile anumitor lichide pure nu pot fi explicate dect printr-o interaciune puternic a moleculelor lor. Anumite lichide, cum sunt apa, acidul fluorhidric, amoniacul i mai puin acidul clorhidric, prezint anomalii n comparaie cu hidrurile elementelor vecine din sistemul periodic. Aceste anomalii constau n puncte de topire i fierbere mai nalte, densiti, capaciti calorice i clduri de vaporizare mai ridicate, comparativ cu ale unor hidruri ca: CH4, PH3, H2S, H2Se, HBr etc. anomaliile similare au fost observate la studiul proprietilor multor substane organice, coninnd grupele HO, COOH i NH2. Aceste anomalii sunt datorate unor asociaii ale moleculelor lichidelor respective, prin fore slabe, n forme ca (HF)x, (H2O)x, (CH3OH)x, etc. Lichidele astfel formate sunt solveni buni pentru compuii organici care conin grupele C - OH, COOH, C=O i NH2 (alcooli, fenoli, acizi, cetone i amine), care, n schimb, se dizolv slab n lichide cum ar fi hexanul. Solubilitatea mare a alcoolilor, fenolilor, acizilor i aminelor n ap se datoreaz unor asociaii dipol - dipol, cci, de exemplu, nitrobenzenul, care are un moment electric ( = 4,20) mai mare dect fenolul ( = 1,56) i anilina ( = 1,53) este insolubil n ap ( = 1,84), n timp ce ultimele dou substane menionate sunt solubile. Solubilitatea este datorat, n aceste cazuri, unei legturi de tip special ntre solvent i solvat. IV.4.2. Natura legturilor de hidrogen La examinarea structurii moleculelor lichidelor asociate, s-a constatat c toate conin hidrogen legat covalent de unul dintre elementele cele mai electronegative: F, O, N sau mai rar Cl. Tria legturii descrete n ordinea electronegativitii : F<O<N<Cl. Legtura se face prin atomul de hidrogen, aa c formula general a unei legturi de hidrogen este: X - H.....Y sunt: O H.O N H.O F H.F (3) (2)

Cele mai des ntlnite legturi de hidrogen, n ordinea importanei,

Hidrogenul este legat covalent de unul dintre atomii electronegativi i printr-o legtur de tip special (marcat prin puncte) de cellalt. Legtura de hidrogen nu este o legtur covalent (cum s-a considerat naintea apariiei mecanicii cuantice), fiindc atomul de hidrogen nu poate folosi, ntr30

o legtur cu alt element, dect orbitalul 1s, care este ocupat complet cu doi electroni. Atomul de hidrogen legat covalent se deosebete, ns, de toi ceilali atomi prin particularitatea c norul electronic din jurul su este foarte subire; sarcina pozitiv a nucleului de H este ecranat spre exterior numai de un singur electron. Pe de alt parte, dac atomul de care este legat hidrogenul este puternic electronegativ, norul electronic este atras spre acesta (legtura X - H este polarizat), iar nucleul de H, mai puin ecranat, poate exercita o for de atracie electrostatic asupra unui atom electronegativ Y. Atracia este cu att mai puternic, cu ct Y are volum mai mic. Atracia protonului slab ecranat se exercit asupra unei perechi de electroni neparticipani ai atomulu Y. Din aceast cauz legtura de hidrogen este, de obicei, liniar. Cnd structura moleculei nu permite liniaritatea ea poate adopta i o form angular (de exemplu, legturile de hidrogen intramoleculare). Legtura de hidrogen este, deci, de natur statistic, dar de tip special, depinznd de prezena unui atom de hidrogen legat covalent i a doi atomi foarte electronegativi IV.4.3. Dovezi pentru existena legturilor de hidrogen Distane interatomice. Prin metoda difraciei razelor X nu pot fi localizai cu precizie atomii de hidrogen, fiindc densitatea norului de electroni din jurul acestui atom este prea mic pentru a produce o difracie bine observabil a razelor X. De aceea prin metoda difraciei razelor X se msoar, de obicei, numai distana X.Y, de exemplu, distana O.O, n legtura O - H.O. distanele astfel msurate sunt mai scurte dect n cazul legturilor van der Waals. Doi atomi de oxigen unii printr-o legtur de hidrogen se afl la distane interatomice de 2,55 - 2,77 , n timp ce atomii de oxigen unii n cristale prin atracii van der Waals, prezint distanele interatomice de ordinul 3,01 - 3,20 . Rezultate bune pentru msurarea distanelor interatomice n hidruri se obin prin metoda difraciei de neutroni n cristale. S-a pus ntrebarea dac atomul de hidrogen este situat la mijlocul distanei dintre cei doi atomi electronegativi pe care i leag sau este mai apropiat de unul dintre ei (de care este legat covalent). Datele experimentale pledeaz n favoarea celei de-a doua ipoteze. n molecula de ap asociat distana HO este de 0,96 . n moleculele neasociate ale apei, distana HO este de 0,99 (distana O..O din ap fiind de 2,76 ).

31

Figura IV.5. Formarea legturilor de hidrogen ntre ap i (a) grupri hidroxil, (b) grupri carbonil, (c) grupri carboxil i (d) grupri amino. Energiile de legtur variaz ntre 4 i 7 kcal/mol i sunt mult mai mici dect energiile legturilor covalente (30 - 100 kcal/mol). Dovezi din spectre infraroii. Prin formare de legturi de hidrogen vibraia de intindere a unei legturi H - O este deplasat spre frecvene mai mici, totodat banda este mai lit. Aa, de exemplu, n spectrul alcoolilor neasociai, n stare gazoas, vibraia de ntindere a legturii HO se manifest printr-o band ngust la 3690 cm-1. n alcoolii lichizi, nediluai aceast band dispare i apare o band lat, cu un maxim la 3350 cm-1. Solubilitatea unor substane n ap datorate formrii de legturi de hidrogen. O serie de substane se pot dizolva n ap nu numai datorit forelor de atracie de tip dipol-dipol sau ion-dipol ci datorit faptului c molecula conine grupri funcionale polare capabile s formeze legturi de hidrogen cum ar fi gruprile hidroxil (OH), aldehid sau ceton (>C=O), carboxil (-COOH) sau amino (NH2). Modul de formare a acestor legturi este prezentat n figura IV.5. IV.5. FORMAREA DE MICELII

32

Multe molecule biologice pot conine att grupri polare (sau ionice) ct i segmente nepolare, ce vor fi simultan att hidrofile ct i hidrofobe, care se numesc amfifile. Asemenea molecule sunt, de exemple, ionii acizilor grai: CH3CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2COOpalmitat (C15H31COO-) CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOoleat (C17H33COO-) Cum interacioneaz aceste aceste molecule n soluie apoas? Apa va avea tendina de hidratare a poriunii hidrofile a unei molecule de amfifil, alturi de tendina de a exclude poriunea hidrofobic. n consecin amfifilele vor avea tendina de a forma agregate cu structuri disperse cu apa. Aceste agregate pot fi sub form de micelii, care sunt globulare cu aranjarea gruprilor hidrofile la suprafaa de contact cu mediul apos. Gruprile hidrofobe se asociaz n interiorul micelei excluznd solventul. O alternativ a acestui fenomen este formarea de pelicule n care gruprile polare fac separaia cu faza apoas.

IV.6. MOBILITATEA PROTONULUI Dac curentul electric este plasat ntr-o soluie ionic, ionii migreaz la electrozii cu polaritatea opus cu o vitez proporional cu cmpul electric i invers proporional cu fora de frecare. Valorile sunt prezentate n tabelul nr. IV.5. de unde se vede c mobilitatea ionilor de hidroniu i hidroxil sunt anormal de mari n comparaie cu ali ioni. Tabel nr. IV.6. Mobilitatea ionilor n soluie apoas la 25oC.
Ionul H3O+ Li+ Na+ K+ Mobilitatea x 10-5 (cm2.V-1.s-1) 362,4 40,1 51,9 76,1 33

NH4+ Mg+2 Ca+2 HOClBrCH3COOSO4-2

76,0 55,0 197,6 76,3 78,3 40,9 79,8

Pentru ionul de hidroniu (abreviat H+, protonul liber fiind inexistent n soluie), aceast vitez mare de migrare se datoreaz abilitii protonului de a se deplasa conform diagramei:

IV.7. PRODUSUL IONIC AL APEI Apa fiind un compus amfiprotic, att n stare pur ct i n soluie apoas are loc o reacie de transfer de protoni ducnd la un echilibru: H2O + H2O H3O+ + HO(4)

De aici constanta de aciditate a apei va fi: K=

34

a H O + .a HO
3

a H 2O

(5)

Cum echilibrul este mult deplasat spre stnga (gradul de ionizare este foarte mic), concentraia apei (de la numitor) rmne practic constant (55,5 moli H2O la un litru de ap la 25oC) i deci poate fi inclus n constanta de aciditate. Astfel ecuaia (5) devine: K w = aH + .aHO (6)

Aadar, n ap produsul actvitii ionilor de hidroniu i al ionilor de hidroxil este constant. Constanta Kw este numit produsul ionic al apei sau constanta de autoprotoliz a apei. n apa pur, nu ns n soluiile apoase ale electroliilor, activitile sunt practiv egale cu concentraiile: K w = cH + .cHO (7)

Concentraiile (activitile) ionilor de hidrogen i a ionilor hidroxil (n moli/l) sunt, prin natura nsi a procesului, egale ntre ele. De aici se deduce uor c, concentraia ionului de hidroniu i de hidroxil este egal cu radical din Kw. La temperatur ordinar produsul ionic al apei pure este aproximativ 1.10-14, de unde concentraia ionilor de hidrogen este egal cu 1.10-7(ionigram/l). Produsul ionic al apei are, la diferite temperaturi, urmtoarele valori:

Tabel nr. IV.7.. Valorile produsului ionic al apei n funcie de temperatur

Temperatura 1014.Kw 0oC 0,133 10oC 0,292 20oC 0,681 25oC 1,008 30oC 1,470 50oC 5,470

IV.8. SCARA pH A ACTIVITII (SAU A CONCENTRAIEI) IONILOR DE HIDROGEN Definiie. n soluiile diluate, acizii tari pot fi considerai complet ionizai. Aa, de exemplu, nu greim mult dac admitem c, ntr-o soluie apoas 0,1 N de HCl concentraia ionilor de hidroniu este egal cu concentraia total a acidului, [H+] = [HCl]. Dac soluia conine un electrolit tare inert, de exemplu NaCl, concentraia ionilor de hidrogen este aceeai ca n absena acestuia. Este practic s se exprime concentraiile ionilor de hidroniu dintr-o soluie apoas n forma logaritmic. Se numete exponent a
35

concentraiei ionilor de hidroniu sau pH, logaritmul cu semn schimbat a concentraiei ionilor de hidroniu din soluie (Srensen, 1906). 1 pH = log cH + = log cH + (8)

Mai trziu, cnd semnificaia termodinamic a noiunii de activitate a fost bine neleas, definiia de mai sus a fost modificat astfel: pH = log aH + (9)

Pentru soluii diluate, activitile sunt practic egale cu concentraiile. De aceea ecuaia n funcie de concentraie este utilizat mai frecvent dei cea de a doua ecuaie este fundamentat mai bine teoretic. Prin metodele poteniometrice se determin, de fapt, activitile, a. Scara pH al activitii (concentraiei) ionilor hidroxil. S-ar putea defini o mrime pentru a exprima concentraiile sau activitile ionilor de hidroxil. Este ns mai practic s se exprime aciditile i bazicitile soluiilor apoase, n aceeai scar. Pentru aceasta se poate scrie: log cH + log cHO = log Kw Cum la 25oC, Kw = 10-14, se poate scrie: pH + pOH = 14 sau pH = 14 pOH (11) (10)

Punctul neutru. O soluie apoas este neutr cnd concentraiile ionilor de hidroniu i ionilor de hidroxil sunt egale, conform relaiei:
7 cH + = cOH = 10 ionigram /l

(12)

Punctul neutru, n soluiile apoase, este la pH = 7. O soluie cu pH < 7 este acid; o soluie cu pH > 7 este bazic. Cnd pH-ul unei soluii scade cu o unitate, concentraia ionilor de hidroniu din acea soluie crete cu factorul 10. Tabel nr. IV.8. Scara pH-ului n soluie apoas
36

[H+] (HO-] pH pOH soluie

10-1 10-13 1 13 acid

10-3 10-11 3 11

10-5 10-9 5 9

10-7 10-7 7 7 neutr

10-9 10-5 9 5

10-11 10-3 11 3

10-13 10-1 13 1 bazic

Aplicaii n biologie. Scara pH este utilizat mai ales pentru soluii slab acide sau slab bazice (ntre pH 3 i 10). Multe reacii biochimice se petrec n soluii neutre, slab acide sau slab bazice. pH-ul sngelui omenesc este de 7,35 la 25oC. La temperatura corpului, de 37oC, pH este la 6,75. Lichidele din mediul intern al organismului sunt deci bazice. sucul stomacal este puternic acid (pH = 1,7); sucul intestinal este bazic (pH = 8). IV.9. ACIZI, BAZE I SOLUII TAMPON Acizii i bazele au fost definite n 1880 de ctre Svante Arrhenius ca substane capabile s doneze protoni ionilor de hidroxil. Aceast definiie este foarte limitat, nu explic de ce amoniacul are caracter bazic. ntr-o definiie mult mai general formulat n anul 1923 de ctre Johannes Brnsted i Thomas Lowry, un acid este o substan care poate s doneze un proton (ca i n definiia Arrhenius) i baz este o substan capabil s accepte protoni. Definiia este ilustrat de reacia de mai jos: HA + H2O H3O+ + A-

Un acid (HA) reacioneaz cu o baz (H2O) i formeaz baza conjugat acidului (A-) i acidul conjugat bazei (ionul de hidroniu). Aceast reacie se poate abrevia HA H+ + HO-, participarea apei se subnelege. Respectnd afirmaia de mai sus nseamn c ionul acetat (CH3COO-) este baza conjugat acidului (CH3COOH) i ionul amoniu (NH4+) este acidul conjugat amoniacului (NH3). O definiie mult mai cuprinztoare a acizilor i bazelor a fost elaborat de Gilbert Lewis n care se spune c acizii sunt acele substane care pot s accepte o pereche de electroni, iar bazele sunt substane care pot s doneze o pereche de electroni. Aceast definiie este valabil att n soluii apoase ct i n sisteme neapoase dar pentru sisteme biologice nu este necesar descrierea procesului. Tabel nr. IV.9. Constantele de disociere i valorile pK la 25oC a ctorva acizi de uz comun n laboratoarele de biochimie.
Acidul K pK 37

acid oxalic acid fosforic acid citric acid formic acid succinic acid oxalic acid acetic Acid citric acid succinic acid 2-(N-morfolino)-etan sulfonic (MES) acid cacodilic acid carbonic acid citric acid N-(acetamido)-iminodiacetic (ADA) acid piperazin-N,N-bis(2-etansulfonic) (PIPES) acid N-(2-acetamido)-2-aminoetansulfonic (ACES) acid N-morfofilopropan sulfonic (MOPS) acid fosforic acid N-2-hidroxietilpiperazin-N-2-etansulfonic acid N-2-hidroxietilpiperazin-N-2-propansulfonic Tris (hidroximetil) aminometan (TRIS) N-[Tris(hidroximetil)metil]-glicin (tricin) N,N-bis((2-hidroxietil) glicin (bicin) Glicilglicin acid boric Amoniu (ion) Glicin acid carbonic Piperidin acid fosforic

5,37.10-2 7,08.10-3 7,41.10-4 1,78.10-4 6,17.10-5 5,37.10-5 1,74.10-5. 1,74.10-5 2,29.10-6 7,94.10-7 5,37.10-7 4,47.10-7 3,97.10-7 2,82.10-7 1,78.10-7 1,58.10-7 6,76.10-8 6,31.10-8 3,31.10-8 1,10.10-8 8,32.10-9 8,91.10-9 5,50.10-9 5,50.10-9 5,75.10-10 5,62.10-10 1,66.10-10 4,68.10-11 7,58.10-12 4,17.10-13

1,27 (pK1) 2,15 (pK1) 3,13 (pK1) 3,75 4,21 (pK1) 4,27 (pK2) 4,76 4,76 (pK2) 5,64 (pK2) 6,10 6,27 6,35 (pK1) 6,40 (pK3) 6,55 6,75 6,80 7,17 7,20 (pK2) 7,48 7,96 8,08 8,05 8,26 8,26 9,24 9,25 9,78 10,33 (pK2) 11,12 12,38 (pK3)

Tria acizilor este caracterizat de constanta de disociere. Reacia de disociere a apei prezentat mai sus este caracterizat de constanta de echilibru, care pentru reacii acido-bazice, este cunoscut ca i constant de disociere. [H 3O+ ][ A] K= [HA ][ H 2O] (13)

Concentraiile n aceast relaie sunt exprimate n moli/l. n soluii diluate concentraia apei este constant [H2O] = 1000 g.l-1/18,015 g.mol-1 = 55,5 M, de unde acest termen va intra n valoarea constantei de disociere dnd relaia:
38

[H + ][ A] Ka = [HA ]

(14)

Constantele de disociere a acizilor utilizai frecvent n experimentele biochimice sunt prezentate n tabelul IV.9. pH-ul soluiei este determinat de concentraiile relative a acizilor i bazelor. Relaia dintre pH-ul soluiei i concentraia acidului sau bazei sale conjugate va fi urmtoarea: [H + ] = K de unde rezult: [A ] pH = log K + log [HA ] [HA ] [A ] (15)

(16)

Definind pK = -log K se obine ecuaia Henderson-Hasselbalch: [A ] pH = pK + log [HA] (17)

Ecuaia indic c la valoarea numeric a pK este egal cu pH-ului soluiei atunci cnd concentraiile molare ale acidului i ale bazei conjugate sunt egale. IV.9.1. Soluii tampon Dac se adaug 0,01 ml acid clorhidric 1M la 1 litru ap pur, aceast ap i schimb pH-ul de la 7 la 5, care reprezint o cretere a concentraiei ionilor de hidrogen de 100 de ori. n schimb la substanele biologice se constat o foarte mic variaie de aciditate la un mic adaos de acid sau baz. n figura IV.7. se arat variaia pH-ului unui litru de soluie 1 M de acid acetic, fosfat monosodic i ion de amoniu, la diferite cantiti de hidroxizi. Curbele au configuraii similare dar au nlimi diferite pe axa pH.
39

pH-ul la punctul de echivalen la aceast titrare (ionul de amoniu) (cnd echivalenii de HO- adugai este egal cu echivalenii iniiali de acid) este mai mare de 7 din cauza reaciei A- cu apa se formeaz HA + HOsimilar pentru situaiile unde pH<7. pH-ul soluiei la punctul de inflexiune a titrrii este numeric egal cu valoarea pK; aici conform ecuaiei lui Henderson-Hasselblach [HA] = [A-]. Panta curbei fiecrei titrri este mai mic n zona medie de titrare dect n alt regiune. Acest fapt indic c atunci cnd [HA] [A-], pH-ul soluiei este relativ insensibil la adaos de acizi sau baze tari. De asemenea, o soluie, care este cunoscut ca i tampon acido-bazic, este rezistent la variaii de pH la mici adaosuri de acizi sau baze.

Figura nr. IV.7. Curbele de titrare acido-bazice a 1 l soluie de acid acetic 1 M, H2PO4- i NH4+ cu baze tari. La punctul de start a fiecrei titrri, forma acid a perechii conjugate acido-bazice predomin. La punctul de echivalen a titrrii, unde pH = pK concentraia acidului este egal cu concentraia bazei
40

conjugate. n final concentraia bazei va fi n exces. Banda din diagram indic intervalul de pH unde soluia are un efect tampon evident Curba de titrare din figura IV.8., precum i curba (figura IV.9) arat distribuia care poate fi calculat i dup ecuaia Henderson-Hasselblach. La nceputul titrrii, o fraciune semnificativ de A- este prezent n urma disocierii lui HA. Similar, n jurul punctului final, rezult mai mult HA din reacia A- cu apa. Aproape pe tot parcursul titrrii, HO- adugat reacioneaz n principal complet cu HA, pentru a forma A- de unde: x V

[A ] =

(18)

unde x reprezint echivalenii de HO- adugai i V este volumul soluiei. n continuare co reprezint concentraia iniial normal a H + -lor: c x [HA ] = o V (19)

41

Fifura IV.8. Curba de distribuie a acidului acetic i a ionului acetat. Fracia speciilor prezente este dat de raportul concentraiilor CH3COOH sau a ionului CH3COO- fa de concentraia total a acestor dou specii Incorpornd aceste date n ecuaia lui Henderson-Hasselblach se obine: x pH = pK + log co x (20)

care descrie o curb de titrare (fig IV.8). Capacitatea soluiei tampon de a rezista la variaii ale pH-ului este direct proporional cu concentraia perechii acid conjugat-baz, [HA] + [A-]. Ea este maxim atunci cnd pH = pK i scade rapid cu ndeprtarea pHului de acest punct. Fluidele biologice, att cele intracelulare ct i cele extracelulare sunt puternic tamponate. De exemplu, pH-ul sngelui la un individ sntos este limitat n jur de 7,4. Ionii fosfat i carbonat sunt componente a multor lichide biologice. De altfel, multe molecule organice, ca i proteinele, acizii nucleici poart multiple grupri acido-bazice care sunt efectiv componente de tampon pentru pH biologic. Ideea c proprietile biomoleculelor se schimb cu aciditatea soluiei n care este dizolvat a preocupat foarte mult cercetare biochimic (n secolul in care traim.(XX-XXI)). IV.9.2. Acizi politropici Substanele care poart mai multe grupri acido-bazice, ca i acidul fosforic sau acidul carbonic, ca i mai multe biomolecule sunt cunoscute sub denumirea de acizi politropici. Curba de titrare a acestor acizi este caracterizat prin valori multiple ale pK-ului, n funcie de treapta de ionizare. Calculele exacte ale concentraiilor de specii ionice diferite la un pH dat este, evident, mult mai complex dect n cazul acizilor monoprotici. Valorile pK a dou grupe asociate de acid i baz nu sunt independente. ncrctura ionic rezultat de o disociaie ionic este inhibat de prezena protonului rezultat de la o alt disociere. De exemplu, pK-urile acidului oxalic pentru cele dou grupe carboxil adiacente difer cu trei uniti de pH fa de acidul succinic unde carboxilii sunt separai de dou grupe metilen, unde diferena ntre pK-uri este de numai 1,4 uniti. De asemenea, ionizarea succesiv de la acela centru, ca i n acid fosforic sau acid carbonic, formeaz pK-uri diferite cu 4 pn la 5 uniti de pH. Dac pKurile pentru ionizri succesive a diferiilor acizi protolitici difer cu mai mult
42

de 3 uniti atunci se poate admite c pH-ul este dat numai de membrii perechii conjugate acid-baz. Dac pK-urile unui acid politropic este mai mare de 2 uniti, ca i n cazul majoritii biomoleculelor, constanta de ionizare se msoar prin titrare. Constantele de ionizare rezultate sunt cunoscute ca i constante moleculare de ionizare. Considernd echilibrul din figura IV.10. n care sunt plasate dou protonri neechivalente, valorile KA, KB, KC i KD sunt constante de ionizare pentru fiecare grup i sunt denumite constante microscopice de ionizare.

Figura IV.10. Ionizarea unui acid n stare de protonare neechivalent Constanta de ionizare pentru primul proton de la acidul HAH este: [H + ]{[ AH ]+ [HA ]} K1 = = KA +KB [HAH] (21)

Similar, constanta de ionizare pentru al doilea proton este: K2 = [H + ][ A 2 ] [AH ]+ [HA ] = K C .K D 1 = (22) (1/ K c ) + (1/ K D ) (K C + K D )

dac KA >> KB, cnd K1 KA atunci constanta primei trepte de ionizare este egal cu constanta microscopic de ionizare a grupei mai mult acide. De asemenea, dac KD>> KC, cnd K2 KC (K D ) atunci treapta a doua de disociere este constanta microscopic de disociere a acestei grupe.

43

44