1.4.

PERIFERIA CELULAR (NVELIUL CELULAR) Pe baza ideilor fundamentale din cadrul teoriei celulare a lui Schleiden i Schwann i a unor observaii individuale s-a postulat nc din secolul trecut faptul c trebuie s existe o structur de sine stttoare care s realizeze frontiera dintre celul aceast unitate morfo-funcional de sine stttoare i mediul extracelular. Datorit existenei unor mijloace tehnice de studiu modeste, periferia celular sau nveliul celular a fost descris iniial ca o simpl membran. Schimbarea de concepie a adus-o microscopia electronic care a oferit posibilitatea studiului seciunilor ultrafine la rezoluii mai mici de 50 nm. Datele obinute au relevat faptul c nveliul celular este o structur morfo-funcional complex format din plasmalem sau membran plasmatic, glicocalix i citoschelet membranar. Aceast structur definete limitele unei celule, meninnd n acelai timp diferenele eseniale ntre citosol i mediul extracelular. Elementul central al acestei structuri i de o deosebit importan pentru funcionarea normal a unei celule l reprezint plasmalema sau membrana celular extern. A. Funciile membranei 1. Fucia de barier i compartimentarea Membranele sunt structuri continui ce delimiteaz coninutul ntregii celule de mediul extracelular i realizeaz compartimentarea celulelor. Astfel, plasmalema separ celulele de mediul nconjurtor i le confer individualitate, iar membrana nuclear i sistemul de endomembrane delimiteaz o serie de structuri intracelulare meninnd individualitatea i compoziia lor molecular specific, realiznd compartimentarea funcional a celulei. Datorit acestei compartimentri activitile specializate se pot desfura cu un minim de interferene externe i pot fi reglate independent una de alta. 2. Sediul unor activiti biochimice membranele nu numai delimiteaz interiorul celular dar sunt i compartimente distincte i importante. Datorit structurii lor reprezint o reea intracelular n care o serie de componente se pot aranja ordonat n vederea interaciunii i/sau a unor activiti metabolice. 3. Realizarea unei bariere cu permeabilitate selectiv Membranele previn schimbul necontrolat de molecule ntre cele dou medii pe care le separ. Membrana ce nconjur celulele poate fi comparat cu acel an cu ap din jurul castelelor: ambele reprezint o barier general, ambele au poduri mobile ce permit trecerea. 4. Transportul substanelor Membrana celular conine mecanismele pentru transportul substanelor de pe o parte pe cealalt, adesea n sensul gradientului de concentraie. Aceste mecanisme permit unei celule s acumuleze substane cum ar fi glucide,

aminoacizi, necesare metabolismului i edificrii macromoleculelor necesare activitilor celulare. Plasmalema prin intermediul componentelor sale realizeaz i transportul ionilor avnd rol important n stabilirea gradientelor ionice. Aceast proprietate este esenial pentru neuroni i celulele musculare. 5. Rol n transmiterea, recepionarea i rspunsul la semnale Plasmalema are rol esenial n rspunsul celular la stimuli i mesaje externe, proces numit transducia semnalului. Ele conin receptori care recunosc i leag molecule specifice numite liganzi cu o structur complementar i genereaz apoi un semnal care influeneaz activitile interne celulare ex.: sinteza unor cantiti sporite de glicogen, pregtirea pentru diviziunea celular, eliberarea Ca2+ din rezervele interne sau chiar intrarea n apoptoz. 6. Interaciuni intercelulare Plasmalema mediaz interaciunile ntre o celul i vecinii si: semnalizare, adezivitate, schimb de substane. 7. Transducia energiei Membranele sunt implicate n procesele prin care un tip de energie este convertit n alt tip. De exemplu: n timpul fotosintezei, sau n cazul sintezei de ATP, procese localizate la nivelul membranei interne a cloroplastelor, respectiv mitocondriei. B. PLASMALEMA I. Evoluia conceptului de membran celular. Modele de organizare a membranei celulare Apariia i dezvoltarea plasmalemei, membrana celular limitant, a reprezentat unul din momentele cheie n apariia primei forme de via, celula ancestral. Aa cum menionam, ea reprezint elementul esenial a structurii complexe ce este nveliul celular, numeroi cercettori lansnd nc din secolul trecut o serie de ipoteze, susinute de dovezi experimentale, privind existena acestui strat limitant, distinct, dotat cu proprieti specifice datorate nsi poziiei sale, considernd-o una din structurile celulare specializate ce limiteaz cantitativ i calitativ schimburile dintre cele dou medii (extra i intracelular) i care i desfoar activitatea numai n cadrul unitii ntregului sistem. Legat de conceptul de membran biologic, botanistul german W. Pfeffer afirma n 1890: celula este nconjurat de o membran limitant iar aceasta este o barier universal exceptnd trecerea apei i a soluiilor. 1. Cea mai timpurie ipotez o faptului c membrana plasmatic conine molecule lipidice a aprut n 1895 i aparine lui Overton. Unul din punctele eseniale ale cercetrilor sale a fost i descoperirea faptului c moleculele substanelor solubile n lipide intr n celule mult mai uor dect cele de substane polare, hidrofile. n urma acestor observaii el formuleaz n 1902 teoria conform creia plasmalema este format dintr-un strat lipidic continuu ce acoper ntreaga suprafa celular.

2. n 1925, Grter i Grendel imagineaz pentru prima dat, dispoziia bimolecular a stratului lipidic. Ei au extras lipidele din membrana eritrocitar, au calculat aria celular total i au gsit c aria minim msurat a lipidelor totale comprimate pe o depresiune monostratificat este dublul acestei valori ceea ce a condus la conceptul de bistrat. Procedeul folosit nu a reuit extragerea tuturor lipidelor membranare dar acest aspect a fost compensat prin subestimarea ariei celulare. Pe baza rezultatelor acestor studii se sugera pentru prima dat faptul c bistratul lipidic ar putea fi trstura fundamental a membranelor biologice. Ideea bistratului lipidic, drept baz structural a membranelor biologice s-a meninut pn astzi dar, modelul lui Grter i Grendel, dei valoros pentru aceste timpuri are ca principal deficien faptul c nu ia n considerare posibilitatea existenei proteinelor alturi de lipide n structura membranelor. 3. n 1932, Cole a msurat tensiunea superficial a membranelor oulor de stea de mare gsind valori de aproximativ 0,1 dyne/cm; Harvey i Shapiro (1932-1933) msoar tensiunea superficial la nivelul membranelor celulare n diferite condiii experimentale constatnd c exist largi variaii ale valorilor tensiunii superficiale ntre plasmalemele diferitelor celule dar oricum, ele erau foarte sczute (aprox. 0,2 dyne/cm). Aceste valori sczute erau neconcordante cu ipoteza conform crora, membranele celulare erau alctuite din pelicule subiri de molecule lipidice a cror tensiune superficial este mult mai mare. 4. Danielli i Harvey (1934) au studiat tensiunea superficial a unor picturi lipidice provenind din oule de scrumbie i au gsit c dup o splare extensiv, aceasta are valori de aprox. 9 dyne/cm. Atunci cnd au adugat un extract citoplasmatic, acestor picturi lipidice, tensiunea lor superficial a sczut iar agentul responsabil a fost gsit ca fiind o protein. De asemenea, Danielli a gsit c proteinele se disperseaz la nivelul unei interfee ulei-ap determinnd o scdere iniial marcat a tensiunii superficiale care se refcea cu timpul, ajungnd ns la valori finale mult mai mici de cea de la interfaa ulei-ap. Avnd n vedere rezultatele acestor experimente, n 1935, Danielli i Davson au prezentat un model general de structur a membranei celulare pe care l-au generalizat ulterior prin teoria pauci-molecular care afirm c toate membranele biologice au un miez lipoid mrginit de monostraturi de lipide ce au capetele polare ndreptate extern, acoperite de monostraturile proteice. n modelul original, ei nu indic numrul de monostarturi lipidice din interiorul membranei deoarece, lipseau datele privind grosimea membranei celulare; de asemenea, nu se specific dac proteinele ce tapeteaz lipidele pe cele dou fee ale membranei sunt globulare sau extinse sub forma unui film monomolecular. 5. n 1950 Danielli i Davson revizuiesc acest model i innd seama de prezena permeabilitii selective sugereaz c n plus fa de stratul intern i

extern de proteine exist pori liniari delimitai de proteine ce strbat bistratul lipidic i ofer posibilitatea de intrare i ieire soluiilor polare i ionilor. 6. n 1957 J. D. Robertson propune modelul unitii structurii membranelor cu urmtoarele caracteristici: - toate membranele au ca structur de baz bistratul lipidic - proteine diferite tapeteaz intern i extern bistratul lipidic 7. Perfecionarea tehnicilor de microscopie electronic i de biologie molecular au condus dup 1960 la revizuirea acestui model. De exemplu, criofractura a permis cercettorilor vizualizarea particulelor din interiorul hidrofobic al membranelor, considerndu-se c acestea sunt proteine i sunt prezente nu numai la nivelul suprafeei interne i externe a membranelor. Deasemenea cercetrile de biologie molecular au demonstrat c proteinele pot executa micri n planul membranei. Toate aceste rezultate i-au determinat n 1975 pe Singer i Nicholson de la Universitatea San Diego, California s propun modelul membranar n mozaic fluid care timp de trei decade a fost dogma central a biologiei membranelor. n cazul acestui model atenia este concentrat mai puin pe aspectul morfologic i mai mult pe aspectele moleculare, funcionale i starea fizic a lipidelor. Acest model are urmtoarele caracteristici: - bistratul lipidic reprezint structura de baz a membranelor cu proteine ataate intern, extern i transmembranar; - membranele sunt structuri dinamice n care componentele sunt mobile i se pot agrega tranzitoriu pentru diferite interaciuni; - membranele sunt structuri asimetrice datorit distribuiei asimetrice a moleculelor componente. II. Structura molecular a plasmalemei n structura molecular a plasmalemei intr: proteine 52%; lipide 40%; glucide 8%. Lipidele confer membranelor rolul de barier, iar proteinele funcionalitate. Raportul lipide proteine variaz n funcie de specie, tipul celular, tipul de membran i de funciile ndeplinite de aceasta. De exemplu n membrana mitocondrial intern procentul proteinelor (75%) este mult mai mare fa de cel al lipidelor (25%) comparativ cu teaca de mielin care conine doar ~ 25% proteine i restul glicolipide. Aceste diferene se datoreaz faptului c membrana mitocondrial intern este o structur cu funcii importante (ex. sinteza de ATP) n timp ce teaca de mielin are ca principal rol cel de izolator electric. II.1. Lipidele membranare n membranele biologice se regsesc trei categorii principale de lipide: fosfolipide, glicolipide i colesterol. Diferite ca structur, aceste molecule au o proprietate comun, sunt amfipatice, termen introdus n 1936 de Hartley. Ele sunt constituite dintr-o zon hidrofil i una hidrofob.

Zona hidrofil reprezentat de: - o grupare polar n cazul fosfolipidelor - rest glucidic n cazul glicolipidelor - gruparea OH de la C3 din primul inel al moleculei de colesterol Zona hidrofob reprezentat de : - dou lanuri sau cozi de acizi grai n cazul fosfolipidelor - un lan de acid gras i unul de sfingozin n cazul glicolipidelor - ntreaga molecul format din patru inele de C n cazul colesterolului membranar. Fosfolipidele membranare cuprind fosfogliceridele i sfingolipidele. Fosfogliceridele sunt digliceride la care dou grupri hidroxil din molecula de glicerol sunt esterificate cu acizi grai iar cea de a treia este esterificat cu o grupare fosfat hidrofil. Fosfogliceridele membranare prezint o grupare adiional legat la cea fosfat. Aceasta poate fi: colina rezultnd fosfatidilcolina, serina rezultnd fosfatidilserina, etanolamina rezultnd fosfatidiletanolamina i inozitolul rezultnd fosfatidilinozitolul. Acizii grai din cozile hidrofobe sunt unul saturat, unul nesaturat cu 16 pn la 20 de atomi de carbon. Prezena dublei legturi determin existena unei cuduri la nivelul lanului de acizi grai. Sfingolipidele sunt derivai de sfingozin, un aminoalcool cu lan lung de atomi de carbon. Molecula de baz este ceramida. Diferite lipide bazate pe sfingozine au grupri adiionale esterificate la alcoolul terminal al sfingozinei. Cea mai rspndit molecul sfingolipidic este sfingomielina. Glicolipidele membranare se mpart n funcie de gruparea ce este esterificat la alcoolul terminal al sfingozinei n cerebrozide i gangliozide. n multe cerebrozide gruparea polar este reprezentat de un singur rest glucidic, de exemplu glucoz sau galactoz. De exemplu galactocerebrozida, prezent n teaca de mielin n proporii de 40% n monostratul extern al bistratului lipidic al plasmalemei celulei Schwann. Gangliozidele conin unul sau mai multe resturi de acid sialic. Glicolipidele sunt molecule lipidice care fac dovada unei asimetrii frapante i stabile n distribuia lor n cadrul membranelor plasmatice a celulelor animale: gsim aceste molecule n special n jumtatea extern a dublului strat lipidic. Variaz remarcabil de la o specie la alta i chiar ntre esuturile unei specii. Gangliozidele localizate la nivelul plasmalemei celulelor epiteliale, n zona apical, au un rol de protejare a acesteia n cazul unor condiii deosebite: ph sczut, enzime litice, etc. Colesterolul membranar este o molecul mare n form discoidal, cu patru inele de carbon i o grupare hidroxil la carbonul trei. Plasmalemele eucariotelor conin cantiti relativ importante de colesterol, cu rol n reglarea fluiditii i creterea stabilitii bistratului lipidic, conferind un anumit grad de rigiditate plasmalemelor. Proporia este mai mare n membranele care predomin funcia de barier i mai mic n membranele celulare.

Proprietile lipidelor membranare: 1. structur amfifil sau amfipatic; formeaz n mod spontan n ap micele, forma cea mai stabil fiind bistratul lipidic. 2. micarea lipidelor membranare are un rol esenial n fluiditatea membranelor i implic: - micri n interiorul moleculei fosfolipidelor - micri ale ntregii molecule de fosfolipide: micarea de difuzie lateral sau translaie, micarea de rotaie n jurul axei longitudinale a moleculei, micarea de difuzie transversal sau flip flop. 3. asimetria bistratului lipidic ce implic distribuia asimetric a principalelor fosfolipide membranare, exemplu: fosfatidilinozitolul este concentrat n monostratul intern al bistratului lipidic, fosfatidilserina situat tot n monostratul intern n plasmalema plachetelor sanguine i eritrocitelor, etc. Lipidele membranare sunt mai mult dect simple elemente structurale, ele au efecte importante asupra proprietilor biologice ale membranei: - compoziia n lipide determin starea fizic a membranei, iar aceasta influeneaz activitatea unor proteine membranare - furnizeaz precursorii pentru o serie de mesageri activi cu rol n reglarea unor funcii celulare - flexibilitatea bistratului face ca membranele s fie structuri deformabile - faciliteaz fuziunea sau mugurirea membranei (n cursul procesului de secreie celular, n fertilizare, etc). Proteinele membranare Funcie de tipul celular sau organitul celular o membran poate conine sute de proteine diferite. Acestea au funcii diferite printre care se numr: transportul ionilor i a unor molecule, recunoaterea i legarea unor molecule semnal i transducia semnalului prin membran, rol n realizarea zonelor de cuplaj celular, etc. Raportul proteinei lipide dintr-o membran difer funcie de tipul membranei i rolurile ndeplinite de aceasta deoarece proteinele confer funcionalitate membranei n timp ce lipidele asigur n primul rnd funcia de barier. De exemplu: mielina care are rol de izolator electric conine 25% proteine comparativ cu membrana mitocondrial intern cu funcii metabolice importante conine aproximativ 75% proteine. Proteinele membranare pot fi grupate funcie de poziia fa de bistratul lipidic, n: a) proteine periferice (extrinseci) asociate cu suprafaa membranei prin intermediul unei componente a bistratului lipidic sau de prile polare ale unor proteine intrinseci. Unele proteine periferice de pe faa intern a plasmalemei funcioneaz ca enzime sau factori ce transmit semnale transmembranare sau formeaz o reea fibrilar ce reprezint un suport mecanic al membranei. n cadrul proteinelor periferice o categorie aparte reprezint proteinele periferice ancorate de lipide (ex: cel puin dou proteine asociate n

acest mod la faa intern a membranei Src i Ras sunt implicate n transformarea unei celule normale n celul tumoral). b) proteine integrale (intrinseci)