Metod HPLC de determinare a unor colorani alimentari sintetici din preparate de carne Cromatografia de lichide de nalt performan nlocuiete

!"# vechile metode

cromatografice de analiz a coloranilor alimentari (cromatografia n strat subire, cromatografia pe hrtie) furniznd rezultate precise, reproductibile i rapide [ 6.1. Stabilirea naturii colorantului i extracia sa din proba de analizat $%a aplicat o metod& de testare calitativ a produselor alimentare pentru a putea determina natura colorantului introdus n procesul de fabricaie# 'etoda permite stabilirea naturii colorantului folosit i anume( natural sau sintetic# )ac colorantul este sintetic, acesta este e*tras rapid din prob ntr%un amestec ap%metanol +,!# $e observ vizual o colorare intens a amestecului de e*tracie, situaie care nu apare n cazul n care colorantul este natural# )ac n urma acestei testri calitative, se constat prezena n prob a unui colorant sintetic, se trece la e*tracia acestuia n vederea dozrii lui cantitative# Determinarea coloranilor alimentari sintetici - fost adaptat o metod ./0C preluat din literatur la determinarea unor colorani alimentari sintetici, i anume( tartrazin, ponceau 1 2, allura red i galben de chinolin [ 34"# $%a ncercat mai nti separarea coloranilor sintetici menionai utiliznd o coloan cromatografic /ecosphere C 3, 5 6m, 57 * 1,8 mm (9ro:n0ee), o faz mobil constituit& dintr%un amestec acetat de amoniu(metanol (+(!, v,v) i un debit al fazei mobile de 7,+ m0,min# )etecia coloranilor alimentari sintetici separai a fost efectuat spectrofotometric, cu a;utorul detectorului diode arra< al sistemului ./0C# Coloranii ponceau 1 2 i galbenul de chinolin au timpii de retenie foarte apropiai i nu se separ&# Cu toate c cei doi colorani nu s%au separat cromatografic, ei pot fi totui determinai prin efectuarea de m&sur&tori de absorban& la lungimea de und de 57+ nm pentru determinarea ponceau 1 2 (galbenul de chinolin nu absoarbe la aceast lungime de und) i la 1 ! nm pentru galben de chinolin# )e asemenea, n cazul analizei unor probe reale, n vederea identificrii compusului separat, este recomandat compararea spectrelor de absorbie ale compuilor separai

(cu timpii de retenie n ;urul valorii de ! min) cu spectrul fiecruia din cei doi colorani (ponceau 1 2 i galben de chinolin)# =olosindu%se o coloan cromatografic cu aceleai caracteristici generale, dar produs de alt firm ($upelco), s%a reuit obinerea unor picuri cromatografice bine separate pentru coloranii alimentari sintetici ponceau 1 2 i galben de chinolin# /arametrii metodei cromatografice utilizate sunt prezentai n tabelul # >abel # /arametrii metodei cromatografice cu faz invers folosit la analiza coloranilor sintetici# Coloan( Coloan cu faz invers $upelcosil C 3 5 6m, 57 * 1,8 mm# =aza mobil ( -cetat de amoniu 7, ' ( metanol ( + ( ! (v,v)# )ebit ( 7,+ m0,min# >emperatura coloanei( !7 ?C# )etector( @A B Ais tip )iode -rra<# Aolum de in;ecie( 7 60# Cn figurile 1+ i 13 sunt prezentate cromatogramele obinute pentru tartrazin i galbenul de chinolin folosind cea de a doua coloan cromatografic ($upelcosil), precum i spectrele de absorbie corespunz&toare acestora, spectre trasate cu detectorul diode arra< al aparatului ./0C# $pre deosebire de cromatogramele obinute pentru ponceau 12, allura red i tartrazin, n care s%a obinut cte un pic cromatografic bine definit corespunztor fiecruia din coloranii menionai, pentru colorantul galben de chinolin cromatograma este constituit din cinci picuri cromatografice# Colorantul sintetic galben de chinolin se prezint sub forma unui amestec de sruri de sodiu ale unor acizi di i trisulfonici, aa cum indic productorul (=luDa)# Eumrul i poziia gruprilor sulfonice pe nucleul benzenic, e*plic comportamentul cromatografic diferit al componentelor prezentai n tabelul !4#

>abel !4# /arametrii metodei cromatografice cu faz invers folosit la analiza coloranilor sintetici [ 4 "# Coloan( Coloan cu faz invers $upelcosil C 3 5 6m, 57 * 1,8 mm# =aza mobil ( -cetat de amoniu 7, ' ( metanol ( + ( ! (v,v)# )ebit ( 7,+ m0,min# >emperatura coloanei( !7 ?C# )etector( @A B Ais tip )iode -rra<# Aolum de in;ecie( 7 60# Cn figurile 1+ i 13 sunt prezentate cromatogramele obinute pentru tartrazin i galbenul de chinolin folosind cea de a doua coloan cromatografic ($upelcosil), precum i spectrele de absorbie corespunz&toare acestora, spectre trasate cu detectorul diode arra< al aparatului ./0C# $pre deosebire de cromatogramele obinute pentru ponceau 12, allura red i tartrazin, n care s%a obinut cte un pic cromatografic bine definit corespunztor fiecruia din coloranii menionai, pentru colorantul galben de chinolin cromatograma este constituit din cinci picuri cromatografice# Colorantul sintetic galben de chinolin se prezint sub forma unui amestec de sruri de sodiu ale unor acizi di i trisulfonici, aa cum indic productorul (=luDa)# Eumrul i poziia gruprilor sulfonice pe nucleul benzenic, e*plic comportamentul cromatografic diferit al componentelor galbenului de chinolin# Colorantul galben de chinolin livrat de firma =luDa, este de fapt un amestec de mai multi compusi#

=ig # Cromatograma pentru colorantul tartrazin i spectrul de absorbie corespunztor acestuia

)ac se compar alura spectrelor de absorbie corespunztoare picurilor cromatografice obinute la separarea componentelor galbenului de chinolin (figura F), se observ c forma acestora este asemntoare# -cest lucru se poate e*plica prin faptul c& este prezent& aceeai grupare cromofor& n toate componentele amestecului, dar numrul i poziia gruprilor sulfonice din molecula acestora determin un comportament cromatografic diferit pentru fiecare component# Cn figura ! este prezentat cromatograma obinut pentru amestecul format din cei patru colorani alimentari sintetici analizai( ponceau 12, allura red, tartrazin, galben de chinolin# $tudiind cromatograma prezentat n figura ! se observ c& se obin picuri cromatografice bine definite pentru tartrazin, ponceau 12 i allura red#

=ig F # Cromatograma pentru colorantul galben de chinolin i spectrele de absorbie corespunztoare diferitelor componente ale acestuia#

Cn cazul colorantului sintetic galben de chinolin, se obine un singur pic cromatografic mai mic, care corespunde picului cel mai proeminent din cromatograma obinut pentru proba etalon a acestuia# -cest lucru se poate e*plica prin faptul c determinrile s%au efectuat la 157 nm, unde absorbana corespunztoare acestui colorant este mic# /icurile corespunztoare celorlalte forme sub care se gsete colorantul, fie nu sunt puse n eviden&, fiind foarte mici, fie se suprapun peste picul tartrazinei (picul cu timpul de retenie F,73 min, figura F ), sau al ponceau 12 (picul cu timpul de retenie !, 4 min, figura F)# )in acest motiv considerm c metoda studiat dei permite identificarea celor patru colorani n amestec nu este adecvat pentru determinarea lor cantitativ (atunci cnd sunt prezeni toi patru ntr%un amestec)# /ot fi ns efectuate determinri cantitative pentru urmtoarele amestecuri de colorani( tartrazin, ponceau 12 i allura red sau galben de chinolin i allura red# )e cele mai multe ori, acest lucru este suficient deoarece ntr%un produs alimentar se introduc un numr redus de colorani, de cele mai multe ori unul singur#

=igura !# Cromatograma amestecului format din cei patru colorani sintetici analizai#

naliza unor probe reale Cn figura 1, se prezint un e*emplu de analiz calitativ a unui colorant sintetic dintr%o prob de cabanos# $e prezint cromatogramele (figura 1 a i 1 b) i spectrele de absorbie (figura 5! c) ale unui standard de colorant sintetic i ale colorantului din proba de cabanos [ 33, 47"# $%a identificat prin metoda ./0C ntr%un preparat de carne (cabanos) prezena colorantului sintetic ponceau 12 comparnd valorile timpilor de retenie pentru un standard care conine ponceau 12 i pentru colorantul e*tras din proba de analizat# $%a confirmat prezena colorantului ponceau 12 n proba analizat& prin compararea spectrelor nregistrate pentru compuii corespunztori cele dou picuri i anume( al colorantului ponceau 12 i al colorantului din proba analizat# $pectrele nregistrate sunt foarte asem&natoare, ceea ce confirm prezena colorantului /onceau 12 n preparatul de carne analizat Gste important& determinarea coloranilor sintetici din preparate de carne, chiar la concentraii foarte mici, deoarece n ara noastr este interzis folosirea acestei clase de compui n carne i preparate din carne#

=ig 1#Cromatogramele i spectrele de absorbie pentru colorantul dintr%o prob de cabanos i pentru un standard de colorant sintetic (/onceau 12)#

a) cromatograma obinut pentru standardul de /onceau 12H b) cromatograma obinut pentru colorantul din proba decabanosH c) spectrul de absorbie al standardului de /onceau 12, precum i al colorantului din proba de cabanos