Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Sinteza Proteinelor La Eucariote
Sinteza Proteinelor La Eucariote
Sinteza Proteinelor La Eucariote
Teoria
semantica
a
fluxului
informatiei
genetice
Biopolimerii celulari pot fi clasificati dupa gradul semnificatiei genetice
si participarea la edificarea caracterului(Zuckernandl si Pauling).
CODUL GENETIC
Exceptii de la
nestandardizati
universalitatea
codului
genetic-Aminoacizii
Aminoacizi nestandardizati
Marea majoritate a proteinelor este asamblata din cei 20 de
aminoacizi, chiar daca unii pot fi alterati prin fosforilare uneori;
Cu toate acestea, au fost identificate doua cazuri in care un
aminoacid care nu face parte dintre cei douazeci este inserat
printr-un ARNt in lantul polipeptidic:
Selenocisteina(aa 21) Acest aminoacid este codificat prin UGA.
UGA este utilizat si ca terminator al lantului, dar complexul
ribozomal este capabil sa discearna cand trebuie folosit ca
selenocisteina, respectiv secventa terminator.
Aceasta utilizare diferita a codonului a fost semnalata la Archea,
eubacteria.
La om s-au evidentiat 25 de proteine diferite continand seleniu.
Pirolizina(aa 22) La cateva specii de Archea si de bacterii acest
aminoacid este codificat prin UAG, dar poate actiona ca un codon
stop si opreste si sinteza lantului proteic.
Repetitii trinucleotidice
Boala Huntington: insertii CAG care adauga serii de glutamina
SINTEZA
DE
PROTEINE
SI
POLIPEPTIDE
ARN polimeraza
Sinteza ARN implica existenta unei enzime
Enzima
capabila
sa
ARNpolimeraza(ARNpol),
dependenta;
sintetizeze
mai exact
ARN
se
numeste
ARN-polimeraza-ADN-
Tipuri de ARN-polimeraze
Procariote Toate cele 3 tipuri de ARN sunt transcrise de aceeasi
ARN-polimeraza
Eucariote Fiecare tip de ARN este transcris de catre un tip diferit
de ARN-polimeraza
ARN-pol I(localizata n nucleol): ARNr 45 S
ARN-poI II(localizata n nucleoplasma): ARNm, ARNsn
ARN-pol III(localizata n nucleoplasma): ARNt si ARN 5S, ARNsn.
TRANSCRIPTIA INFORMATIEI GENETICE
Prin asamblarea ribonucleotidelor in structura ARN-m, respectandu-se
principiul complementaritatii bazelor se reproduce fidel, in negativ,
informatia
genetica
din
segmentul
cistronului
de
ADN.
Transcriptia ARN-m are loc in 3 etape:
Initierea;
Elongatia;
Terminarea.
FAZA DE INITIERE A TRANSCRIPTIEIIncepe cu o secventa
particulara de ADN denumita situs promotor, unde se ataseaza
enzima
ARN-polimeraza-ADN-dependenta,
care
initiaza
transcriptia;
subunitati
2 subunitati alfa;
1 beta;
1 beta prim;
1 omega
Subunitatea sigma-asigura legarea specifica a ARN-pol la anumite
secvente de ADN numite promotor fata de care creste afinitatea
ARN-pol si scade afinitatea enzimei pentru catena non-matrita;
Primele 5 subunitati sunt strans unite in miezul enzimei
Enzima miez se poate lega nespecific la ADN;
Holoenzima ARN polimeraza recunoaste secventa initiala a unei
gene, regiunea de start, care este cunoscuta sub denumirea de
regiunea promotor;
Informatia continuta de promotor face enzima ARN polimeraza
capabila sa recunoasca precis punctul initial de la care incepe
transcriptia;
Structura promotorului
e alcatuit din regiunea de recunoastere situata in pozitia -35 pb
fata de situsul initial de transcriptie(tss).
Are structura TTGACA si la nivelul ei se ataseaza ARN
polimeraza.
Aceasta structura se refera la catena superioara care nu va fi
transcrisa.
Polimeraza paraseste secventa -35 si se deplaseaza in aval spre
o alta regiune conservata.
Aceasta este a doua secventa de consens(TATAAT) si este situata
in pozitia -10 fata de tss.
Este denumita PRIBNOW BOX(PB)
Faza de elongatie
In timp ce polimeraza se deplaseaza de-a lungul catenei antisens,
pe lantul de ARN sunt adaugate resturi de ribonucleozid
monofosfati(AMP, CMP, GMP, sau UMP) la capatul 3;
Aceste nucleotide rezulta din clivarea precursorilor ribonucleozid
trifosfati(ATP, CTP, GTP si UTP) de o molecula de pirofosfat(PPi);
Subunitatea sigma se detaseaza de pe restul enzimei dupa ce s-au
format 6-10 legaturi fosfodiesterice de NTP si se poate atasa la un
alt complex polimerazic;
Regiunea deschisa a ADN-ului se extinde pe o portiune de aprox.
15pb, deoarece dublul helix de ADN se reface in spatele enzimei
sub actiunea topoizomerazei;
Fiecare transcript in crestere va avea un capat 3 liber la care se
poate atasa capatul 5 al unui nou nucleotid
Etapa de terminare a transcriptiei
Se realizeaza prin doua mecanisme:
Ro dependent
Situsuri ter
Mecanismul ro dependent
Ro este o helicaza ATP-dependenta care are rolul de a desface
duplexul ADN-ARN;
ARN-pol intalneste o zona bogata in GC si incetineste transcrierea;
Proteina ro ajunge ARN-pol si disociaza ARN de ADN.
Mecanismul ro independent:
Situsurile ter sunt bogate in secvente palindromice GC cu
structura simetrica in oglinda urmate de regiuni bogate in secvente
AT(aprox. 6-8 resturi A) pe catena codificatoare);
Transcriptia la eucariote
Diferita fata de procariote
Eucariotele au 3 ARN-polimeraze diferite, in vreme ce procariotele
au decat una
Eucariotele nu sintetizeaza ARNm policistronic;
ARNm eucariot este prelucrat inainte de a fi utilizat pentru sinteza
proteinelor.
Diferita fata de procariote
Eucariotele au 3 ARN-polimeraze diferite, in vreme ce procariotele
au decat una
Eucariotele nu sintetizeaza ARNm policistronic;
Secventa TATA
determina situsul
transcriptiei, dar nu este singurul;
exact
pentru initierea
si este
Matisarea ARNm
Termen care semnifica innadirea a doua capete
Se descriu urmatoarele Secvente de semnal
5GT(GU in ARN) situs donor
3AG situs acceptor
Situsul de conexiune sau de legatura(branch site) cu nucleotidul A
Etape
1. Sectionarea jonctiunii exon intron 5GU
2. Atasarea nucleotidului terminal G la nucleotidul A al situsului de
bransare(transesterificare) si formarea unei structuri lasou/bucla
3. Sectionarea intronului la jonctiunea 3AG, indepartarea lui si
unirea segmentelor de ARN exonic.
Reactiile
sunt
mediate
printr-un
proteine(spliceozomi)
format
din
ARNsn(U1,U2,U4,U5,U6) si proteine
complex
5
tipuri
ARNde
Matisarea alternative
Ordinea exonilor in ADN si transcriptul primar sunt pastrate in
ARNm matur
Exista, cu toate acestea, o flexibilitate in utilizarea exonilor, in
sensul ca in celule diferite vor fi retinuti in ARNm numai o parte din
exoni, restul fiind eliminati odata cu intronii Matisare alternativa
Aceasta duce la tipuri diferite de ARN din aceeasi gena, deci tipuri
diferite de polipeptide
Aceste proteine pot fi inrudite(izoforme) ca in cazul mielinei sau
troponinei C sau complet diferite(de exemplu gena calcitoninei
produce in celulele C tiroidiene precursorul calcitoninei iar in creier
precursorul unui neuromediator CGRP.
TRANSLATIA/TRADUCTIA INFORMATIEI GENETICE
Elementele implicate in realizarea translatiei sunt:
ARN-r
ARN-t
Aminoacizi
Enzime
Donatorii de energie
Elementele
implicate
ARN-t, aminoacizi
in
realizarea
translatiei:
NH2
NH2
aminoacid
aminoacid activat
ARN-t:
R-CH-CO-O-AMP-E + ARN-t = R-CH-CO-O-ARN-t + AMP + E
NH2
aminoacil-ARN-t
Elementele
ARN-t
implicate
in
realizarea
translatiei:
Elementele
implicate
ARN-r, ribozomi
in
realizarea
translatiei:
Ribozomii, descrisi de E. Pallade in 1953, au un diametru de 150200 , fiind formati din doua subunitati inegale, cuplate intre ele
prin legaturi stabilizate de ionii de Mg+;
La bacterii sunt formati din doua subunitati, diferite prin constanta
de sedimentare: marea subunitate are 50S(ARNr 23S, 5S, 34
proteine) iar mica subunitate are constanta 30S(ARNr 16S, 21
tipuri de proteine);
La om, subunitatile sunt 60S(ARNr 5S, 5,8S, 28S, 46 tipuri de
proteine) si 40S(ARNr 18S, 33 tipuri de proteine).
Fiecare subunitate este constituita din complexe de proteine(40%)
si ARN-r(60%);
Ribozomii au 4 situsuri functionale:
Pe subunitatea mica situsul de fixare al extremitatii 5 a ARNm
Pe subunitatea mare situsul P(peptidil) si A(aminoacil) unde se
fixeaza moleculele de ARNt incarcate cu aminoacizi specifici si
situsul de iesire E (exit)
INFORMATIEI
GENETICE
reglatoare
care
blocheaza
SINTEZEI
ACTIVITATII
PROTEICE
ENZIMATICE
Inhibitie non-competitiva;
Inhibitie competitiva.
Inhibitia noncompetitiva prin enzime allosterice
Produsul final (inhibitor) al caii metabolice se combina cu situsul
allosteric al enzimei, aceasta altereaza situsul activ al enzimei
astfel incit ea nu se mai poate lega la substratul initial al caii;
regiuni
CONTROL TRANSCRIPTIONAL
Punctul primar de control este reglarea activitatii ARNpolimerazei II
Activitatea ei este controlata de:
Elemente cis-reglatoare
Factori de transcriptie transreglatori
Controlul la distanta al expresiei genice prin enhancers sau
silencers
Reglare ca raspuns la semnalele extracelulare liganzi - sunt
receptori intracelulari la care se ataseaza diferiti hormoni si au
efect de factori de transcriptie)
Selectarea promotorilor pentru gene care au mai multi
promotori(gena distrofinei, cu cel putin 8 promotori: initiali-cortex,
mm, cerebel,limfocite; interni-rinichi retina)
CONTROL POSTTRANSCRIPTIONAL
Sunt mecanisme secundare care controleaza expresia genica
dupa transcriptie.
Acestea cuprind:
Controlul procesarii ARN;
Controlul translational;
Controlul degradarii mRNA;
Controlul activitatii proteice;
I.
Controlul procesarii ARN
Este limitat la eucariote si determina cum si cand este splitat sau
procesat transcriptul primar pentru a forma ARNm;
De exemplu, unele transcripturi de ARN produc diferite tipuri de ARNm
din aceeasi gena, in diferite tipuri de celule numai prin folosirea
selectiva a exonilor-matisare alternativa(gena calcitoninei cu 2 variantecalcitonina in cel. tiroidei si peptidul neuromodulator in hipotalamus)