ACADEMIA DE TIINE A MOLDOVEI

GRDINA BOTANIC (INSTITUT)

Cu titlu de manuscris
CZU:581.8:581.19: 576.311:576.535:581.145.2:633.88

CALALB TATIANA

STRUCTURA I COMPOZIIA BIOCHIMIC A FRUCTELOR

DE ARONIA MELANOCARPA (MICHX.) ELLIOT
IN VIVO I IN VITRO

03.00.05. BOTANICA

Autoreferatul tezei de doctor habilitat n biologie

CHIINU, 2010
Teza a fost elaborat n Laboratorul de Genetica Rezistenei Plantelor al Institutului de Genetic
i Fiziologie a Plantelor al Academiei de tiine a Moldovei.

Boris Matienco
Consultani tiinifici: dr. hab. biol., prof. univ., acad. al AM.
Anatol Jacot
dr. hab. biol., prof. univ., acad. al AM.
.
Refereni oficiali:
Codreanu Valentin, dr. hab. biol., conf. cercet., Grdina Botanic (Institut) a AM;
Grati Vasile, dr. hab. biol., prof. univ., Universitatea de Stat din Tiraspol;
Florea Vasile, dr. hab. biol., conf. cercet., Institutul de Genetic i Fiziologie a Plantelor a AM.

Componena Consiliului tiinific specializat:

Ciubotaru Alexandru, preedinte, dr. hab.biol., prof. univ., acad.,
al AM, Grdina Botanic (Institut) a AM;
Miron Aliona, secretar, dr. biol., Grdina Botanic (Institut) a AM;
Todera Lidia, dr. hab. biol., conf. cercet., Universitatea AM;
Topal tefan, dr. hab. biol., prof. cercet., Grdina Botanic (Institut) a AM;
Diug Eugen, dr. hab. farm., prof. univ., Universitatea de Stat de Medicin i
Farmacie Nicolae Testemianu

Susinerea va avea loc la 24 decembrie, 2010, ora 10oo, n edina Consiliului tiinific
specializat DH 11.03.00.05 09 n cadrul Grdinii Botanice (Institut) a Academiei de tiine
a Moldovei, MD 2002, str. Pdurii 18, Chiinu, tel./fax: (+373 22) 550443.

Teza de doctor habilitat i autoreferatul pot fi consultate la biblioteca Grdinii Botanice

(Institut) a Academiei de tiine a Moldovei i pe pagina web a C.N.A.A. (www.cnaa.md).

Autoreferatul a fost expediat la 17 noiembrie, 2010

Secretar tiinific al Consiliului tiinific pecializat,

Miron Aliona, dr n biol. ______________________

Autor,
Calalb Tatiana ______________________

( Calalb Tatiana, 2010)

2
 REPERELE CONCEPTUALE ALE CERCETRII
Actualitatea temei: La rspntia dintre mileniile II i III a crescut interesul fa de fructele
bogate n compui naturali utili. Fructele de A. melanocarpa (Michx.) Elliot se deosebesc prin
coninut de compui fenolici (CF), acizi organici, vitamine, substane minerale, hidrai de carbon
[28] i reprezint o valoroas surs alimentar i farmaceutic cu virtui terapeutice:
vasoprotectoare, hipotensiv, antioxidant, antiarterosclerotic, chimiopreventiv, antiviral,
hipoglicemiant, antiinflamatoare, gastroprotectoare, antimutagenic, antimicrobian [34].
Fructele de A. melanocarpa (Michx.) Elliot sunt solicitate pe piaa mondial n calitate de produs
dietetic, binevenit n raia alimentar zilnic pentru fortificarea organismului i promovarea
modului sntos de via [30].
A. melanocarpa (Michx.) Elliot este o plant originar din America de Nord i graie
calitilor gustative i curative ale fructelor a fost cultivat pe arii extinse n rile europene i
asiatice. n Republica Moldova plantaiile ocup o suprafa de 157,8 ha n ocolurile silvice.
Pentru satisfacerea necesitilor mereu crescnde de fructe au fost fondate plantaii de aronie,
adaptate la tehnologii mecanizate de ngrijire i recoltare a fructelor, care, cu regret, au impact
negativ asupra viabilitii plantelor. Colectarea fructelor calitative i n proporii mari nu este
ntotdeuna posibil din diferite motive, observate n ultimile decenii: cataclismele naturale
frecvente (ngheuri i ploi reci n perioada de nflorire; secet, canicule estivale ndelungate pe
parcursul maturrii fructelor); poluarea (ploi acide, gaz de ser, elemente nocive), care se reflect
negativ asupra biologiei plantei; lucrri sezoniere agrotehnice, de profilaxie i protecie
anevoioase i costisitoare; dificulti la colectare, transportare i pstrre [6, 9]. Aceste
impedimente pot fi nlturate prin aplicarea microtehnicilor de culturi in vitro, cu avantaje
evidente: independena de factorii ecologo-climatici i rotaia sezonier; posibilitatea dirijrii
factorilor fizici i chimici; producerea n proporii, flux continuu, condiii ecologic controlate;
vectorizarea direciei metabolice i dirijarea acumulrii metaboliilor utili; reducerea riscului
contaminrii cu patogeni; izolarea i purificarea mai eficace a compuilor utili. Una din
preocuprile tiinei biologice moderne este valorificarea noilor ci i surse de alternativ pentru
obinerea materiei prime prin culturi celulare i esulare in vitro [16, 30].
Lucrri tiinifice, privind iniierea culturilor in vitro din fructe suculente, sunt puine.
Fructele, ca i alte organe, ndeplinesc n cadrul organismului vegetal multe funcii, inclusiv cea
de perpetuare a speciei. Fructele sunt organe cu anumit nivel de autoreglaj, relativ autonome,
pstrnd vitalitatea n condiii extramaterne o perioad ndelungat, graie acumulrii rezervei
trofice, una din particularitile specifice, formate pe parcursul evoluiei [38]. Carpocultura in

3
vitro, n viziunea academicianului B.Matienco [31], reprezint un nou domeniu de cercetare n
biotehnologia vegetal, cu perspective aplicative promitoare n viitorul apropiat.
Descrierea situaiei n domeniul de cercetare i identificarea problemelor de cercetare:
Fructele de A.melanocarpa (Michx.) Elliot aparin carpotipului pommum cu particulariti
specifice histoanatomice i specializare metabolic fenolic, ce necesit aplicarea
microtehnicilor biotehnologice individuale. Antrenarea fructelor acestei specii n culturi in vitro
necesit studii biologice complexe la nivel celular, tisular, organospecific i organismal prin
prisma cilor metabolice de biosintez. Anatomia fructului de aronie este studiat puin, lipsesc
date privind: dezvoltarea structural-biochimic n carpoontomorfogenez; fluctuaiile structural-
biochimice n carpoecogenez; structurile anatomice n asigurarea integritii fructului suculent.
Nu este studiat ultrastructura pericarpului i nu sunt dezvluite suficient mecanismele
ultrastructurale de biosintez, translocare i acumulare a compuilor fenolici. Studii
citomorfologice ale biomaselor calusale, n general, i ale celor carpocalusale, n special, sunt
puine. Datele structural-biochimice comparate ale celulelor n 2 biosisteme in vitro i in vivo,
ilustreaz corelaia structural-metabolic, necesar pentru dezvluirea legitilor biologice ale
carpogenezei i elucidarea unor aspecte ale evoluiei fructelor suculente.
Scopul lucrrii: Elucidarea criteriilor biologice, chimice, fizice pentru elaborarea strategiilor
biotehnologice de inducere i acumulare a carpomaselor in vitro din fructele suculente de A.
melanocarpa (Michx.) Elliot i evaluarea lor anatomic, ultrastructural i biochimic
comparativ cu fructele, crescute in vivo.
Obiective: Studiul anatomic, cito-, histochimic i ultrastructural al pericarpului n
carpoontomorfogenez i carpoecogenez; optimizarea condiiilor biologice, chimice, fizice,
pentru inducerea i acumularea carpomaselor in vitro i elucidarea factorilor-vectori n
stimularea sintezei i acumulrii coninutului fenolic; studiul comparat al particularitilor
morfoanatomice i ultrastructurale ale celulelor carpomaselor in vitro i fructelor in vivo;
evaluarea citochimic i ultrastructural a incluziunilor fenolice n vederea elaborrii schemei
verosimile de biosintez, translocare i acumulare intra- i extracelular; efectuarea screening-
ului biochimic calitativ al celulelor carpomaselor in vitro si fructelor; analiza calitativ i
cantitativ a CF; determinarea activitii antioxidante i antimicrobiene a extractelor fructelor i
carpomaselor in vitro de aronie.
Metodologia cercetrii tiinifice: Reperul metodologic al investigaiilor comparate
citoanatomice al fructelor in vivo i carpomaselor in vitro la aronie a servit concepia
carpoecogenezei i principiile evolutive ale transformrilor ultrastructurale n celulele vegetale.

4
Noutatea i originalitatea tiinific: Pentru prima dat a fost obinut carpocultura in vitro din
fructul suculent de tip pommum la A. melanocarpa (Michx.) Elliot i realizat evaluarea morfo-
anatomic, ultrastructural, biochimic, antioxidant i antimicrobian a carpomaselor, obinute
in vitro, comparativ cu fructul in vivo. A fost elaborat schema verosimil a organitelor celulare
implicate n biosinteza, translocarea i acumularea CF.
Semnificaia teoretic: Rezultatele studiului citomorfologic i biochimic al celulelor
carpomaselor in vitro i fructelor in vivo la aronie se nscriu n concepiile carpoecogenezei i
principiile evolutive ale transformrilor ultrastructurale: zonalitatea histoanatomic specific
carpotipului pommum servete n calitate de reper teoretic la selectarea histogenului n culturi in
vitro; rolul structural adaptiv, bazat pe intercorelaia compensator-sinergist a epi- i
endostructurilor n carpoontomorfogenez i carpoecogenez; deponenta imobilizat a
substanelor de rezerv ca strategie de baz a evoluiei fructelor i a proliferrii carpoculturii in
vitro; expresia memoriei structurale n inducerea programului de modulare a proceselor
carpoproliferative n culturi in vitro; aciunea principiilor evolutive (intensificrii, substituiei,
compartimentalizrii, diversificrii, compensaiei funciilor i ritmul diferit al modificrior;
integritii fragmentare n organizarea celular; autonomizrii n dezvoltarea organelor)
confirm paralelismul evolurii transformrilor structurale n celulele fructelor in vivo i
carpomaselor in vitro.
Valoarea aplicativ a lucrrii: S-au stabilit condiiile optime de inducere i acumulare a
carpomasei in vitro la aronie i s-au determinat factorii-vectori de dirijare n acumularea
carpomaselor, bogate n CF. Activitatea antioxidant i antimicrobian a fructelor i
carpomaselor in vitro poate sta la baza elaborrii noilor remedii farmaceutice. Carpocultura in
vitro la aronie servete model la elaborarea schemei biotehnologice de producere dirijat a
biomaselor bogate n metabolii secundari n calitate de materie prim de alternativ la culturile
tradiionale in vivo, pentru industriile farmaceutic, alimentar, tinctorial i farmaceutic.
Rezultatele tiinifice principale naintate spre susinere: Strategiile biotehnologice de
obinere a biomasei frutiere din pericarpul fructului suculent de aronie ca direcie non-
embriogenic de dezvoltare tisular in vitro; specificul anatomiei, activitatea complimentar i
sinergist a epi- i endostructurilor pericarpului n carpoontomorfogenez i carpoecogenez i n
asigurarea integritii fructului suculent de aronie; paralelismul modificrilor ultrastructurale prin
prisma principiilor evolutive n procesul maturrii carpocelulelor in vivo i in vitro; schema
fenilpropanoid a implicrii organitelor n biosinteza, translocarea i depozitarea CF; corelaia
potenialului fenolic cu activitatea antioxidant i antimicrobian al carpomaselor in vitro i
fructelor in vivo.

5
Implimentarea rezultatelor tiinifice n: Programul de studii la disciplina Botanica
farmaceutic pentru pregtirea i educaia biotehnologic a studenilor i n cadrul ciclurilor de
perfecionare a farmacitilor Utilizarea plantelor medicinale i a fitopreparatelor autorizate n
R.Moldova cu tematica Microtehnici de culturi in vitro la plante medicinale, catedra
Farmacognozie i Botanic farmaceutic, USMF Nicolae Testemianu; manualul Botanic
farmaceutic, Calalb, Bodrug, 2009 i Indicaii metodice la lucrri de laborator la Botanica
farmaceutic Calalb, 2004, 2005; cursul universitar pentru masterat a disciplinei Morfologie i
anatomie comparat, catedra Biologie, Facultatea tiine ale naturii, UnAM.
Aprobarea rezultatelor tiinifice la: Conferina VI-a Republican de Microscopie Electronic
(Chiinu, 1998); The 14th International Congress on Electron Microscopy (Mexico,1998);
Conferina Anual ULIM Symposia Professorum (Chiinu, 1998, 1999, 2000, 2002);
M e.
(, 2003, 2004); Congres XII Naional de Farmacie (Bucureti, 2002); Congresul
II Fiziologia i biochimia plantelor (Chiinu, 2002); Conferina Ziua medicamentului
(Chiinu, 2003); Conferina Societii de medici i naturaliti (Iai, 2003); The 8th National
Symposium Medicinal plants present, perspetives (Piatra Neam, 2003); Conferina anual
USMF NicolaeTestemianu (Chiinu, 2004-2009); The 12th Eurasia Environment Conference,
(Istanbul, 2005); Conferina Naional cu participare Internaional Probleme actuale ale
geneticii, fiziologiei i ameliorrii plantelor (Chiinu, 2008), inclusiv comunicri tiinifice n
edinele plenare ale: Simpozionului I Internaional .
(, 2002); Conferinei anuale USMF Nicolae Testemianu
Probleme medico-biologice (Chiinu, 2003); Conferinei internaionale
(, 2008); Congresului
Internaional The XXXth Balcan Medical Week (Chiinu, 2008).
Publicaii la tema tezei: Rezultatele cercetrilor tiinifice au fost editate n 57 titluri tiinifice,
inclusiv: 4 monografii; 1 manual; 4 articole tiinifice n reviste internaionale; 10 articole n
reviste naionale recenzate; 8 articole n culegeri naionale recenzate; 7 articole n culegeri
internaionale; 4 articole n culegeri naionale; 14 rezumate ale comunicrilor tiinifice la
conferine i simpozioane tiinifice; 3 brevete de invenii i 3 articole n alte publicaii.
Volumul i structura tezei: Introducere, 7 capitole, concluzii generale i recomandri,
bibliografie din 388 titluri tiinifice, 8 anexe, 199 pagini text de baz, 30 tabele, 102 figuri.
Cuvinte cheie: Aronia melanocarpa, anatomie, ultrastructur, fruct, biochimie, carpomas,
compui fenolici, in vitro, in vivo.
.

6
 CONINUTUL TEZEI
1. ASPECTE ANATOMICE, ULTRASTRUCTURALE, BIOCHIMICE I
BIOTEHOLOGICE ALE FRUCTELOR SUCULENTE IN VIVO I IN VITRO
Fructele, n viziunea academicianului A.Taktajean reprezint cununa evoluiei
organismelor vegetale. Fructele suculente se caracterizeaz prin particulariti structural-
biochimice specifice, graie deponentei de substane nutritive i rolului important n perpetuarea
speciiei. Evaluarea lucrrilor tiinifice naionale i mondiale privind structura, biochimia
fructelor suculente i a biomaselor calusale, obinute n condiii in vitro, a pus n eviden un
complex de indici, care au servit ca reper pentru efectuarea experimentelor tiinifice i
interpretarea datelor obinute la studierea comparat a anatomiei, ultrastructurii, biochimiei
fructelor in vivo i carpomaselor generate in vitro la specia A. melanocarpa (Michx.) Elliot.
2. CARACTERISTICA MATERIALULUI FITOBIOLOGIC I METODE DE
CERCETARE
n calitate de obiecte de cercetare au servit fructele de aronie din: colecia Grdinii
Botanice (Institut) a AM; colecia Centrului de Cultivare a Plantelor Medicnale a USMF
Nicolae Testemianu (s.Bardar); plantaiile diferitor zone ecologo-geografice (Sud, Centru i
Nord) din R.Moldova i carpomasele pigmentate, generate pe medii nutritive (MN) Murashighe
i Scoog (1962), suplimentate cu diferite combinaii i doze de kinetin (K), acid naftilacetic
(ANA) i acid 2,4-diclorfenoxiacetic (2,4-D). Investigaiile au fost efectuate printr-un complex
de metode microscopice: fotonic (MBC3, Micros, Studart), electronic prin transmisie (Tesla
BS500 i EM 125K) i electronic cu baleiaj (Tesla BS300) cu aplicarea cito- i historeaciilor,
studiul morfometric al electronomicrografiilor, realizat pe reele cu pas ntmpltor; metode
biochimice: reacii de identificare specifice i generale, cromatografie n strat subire (CSS),
spectrofotometrie, titrimetrie, cromatografie de lichide de nalt performan cuplat cu
specrometria de mas (CLIP-SM) i metode de determinare a activitii biologice (capacitatea de
captare a radicalilor liberi, exprimat prin echivalentul acidului galic i antimicrobian
bacteriostatic i bactericid) i de prelucrare statistic a rezultatelor obinute.
3. PARTICULARITILE ANATOMICE ALE FRUCTELOR DE ARONIA
MELANOCARPA (MICHX.) ELLIOT
3.1. Organizarea histoanatomic a pericarpului n ontomorfogeneza fructului
Morfogeneza fructelor este un proces complex, cu aspecte specifice pentru pericarpul
suculent, ce asigur: acumularea substanelor nutritive, protejarea i diseminarea seminelor,
pigmentarea, care induce aspectul atractiv pentru psri, animale i om. Pentru specia A.
melanocarpa (Michx.) Elliot este caracteristic carpotipul pommum cu o anumit zonalitate

7
histoanatomic, care rezult, evolutiv, din fuzionarea componentelor florale extraovariene i
ovariene, participante la formarea pericarpului suculent pentacarpelar [34]. n geneza
pericarpului au fost evideniate 3 zone histologice: epicarpul, mezocarpul (difereniat n 4
subzone) i endocarpul, care se contureaz la etapele iniiale i se stabilesc n ontomorfogenez.
Epicarpul reprezint continuitatea epidermei receptaculului. Iniial, celulele epidermale
se divid anticlinal, dar pe msur ce cresc, diviziunea diminueaz, are loc extinderea periclinal
i formarea celulelor poligonale, bine mpachetate. Mezocarpul reprezint parenchimul cortical
cu 2 rnduri de fascicole conductoare, corespunztoare sepalelor i petalelor. Mezocarpul
extern, de origine extraovarian, rezultat n urma transformrilor succesive ale receptaculului i
tubului floral i mezocarpul intern de origine carpelar, care reprezint transformrile
parenchimului carpelar. Dividerea celular nceteaz la etapa de 40 zile: iniial, n partea intern,
apoi peste 10 zile n cea extern. Urmeaz extinderea celulelor, ngroarea celulozic a pereilor
celulari, selectiv la unele celule impregnarea cu lignin i formarea sclereidelor. n partea
adiacent epicarpului, prevaleaz extinderea periclinal a celulelor, care formeaz hipoderma,
alctuit din straturi de celule uor alungite tangenial, mpachetate compact, cu pereii celulozici
ngroai, iar citoplasma bogat n granule de amidon i vacuolele mici. Urmtoarele straturi de
celule ale mezocarpului se extind anticlinal i periclinal i formeaz subzona extern a celulelor
oval-rotungite cu perei celulozici subiri, spaii intercelulare mici i citoplasm vacuolizat. n
partea median a mezocarpului prevaleaz extinderea anticlinal a celulelor, fapt ce conduce la
formarea subzonei celulelor oval-alungite radiar. Aceste celule sunt compact mpachetate,
comparativ cu cele din subzona anterioar, graie formei i modului de ancorare a celulelor
parenchimatice pe sclereide. n partea adiacent endocarpului celulele se extind periclinal i
anticlinal i formeaz subzona intern a celulelor oval-rotungite, mici, compact aranjate n esut,
cu multe sclereide. Endocarpul se dezvolt din epiderma intern a carpelei, const dintr-un rnd
de celule, care se divid anticlinal, apoi se extind periclinal, compacte, pereii celulari lignific i
formeaz, ulterior, peretele lojelor seminale.
Diferenierea mezocarpului n 4 subzone histologice, este bazat pe geneza pericarpului,
stabilit evolutiv i se accetueaz la acutizarea factorilor ecologo-climatici.
3.2. Dinamica transformrilor indicilor structurali n ontomorfogeneza fructului
Transformrile histoanatomice ale pericarpului survin succesiv de la o etap la alta a
ontomorfogenezei (tabelul 3.1). Cuticula este subire la 20 zile i valoarea ei se dubleaz la 60
zile, urmeaz o cretere lent i la maturarea fructelor, atinge maximul. Gradul de rspndire a
cuticulei evolueaz: la fructele juvenile tip extern, iar la cele mature extern-intern. Fructele

8
 Tabelul 3.1. Valorile unor indici histoanatomici ai pericarpului n ontomorfogeneza fructelor de A. melanocarpa (Michx.) Elliot

Epicarpul Mezocarpul (parenchimul

fundamental)
(zile de la nflorire)
ontomorfogenetic

Dimensiunile

n s/zona celulelor oval-

Densitatea sclereidelor
Grosimea celulelor Dimensiunile celulelor parenchimatice (m)

Depuneri cerifere
cuticulei epidermale (m)
Etapa

periorilor

stomatelor
Densitatea

Densitatea

rotungite intern
(m)
tangenial radial S/zona S/zona celulelor oval-
Hipoderma celulelor alungite
oval- Diametrul Diametrul
rotungite mare mic
20 3,80,2 10,20,1 3,40,2 - 14,11,2 3,10,1 18,22,1 17,51,3 30,62,1 12,41,1 -
9

40 4.50,1 12,50,3 4.40,3 - 10,11,4 2,80,1 26,41,9 29,91,9 48,82,2 24,51,8 8,21,3

60 7,70,4 22,80,4 12.40,2 + 5,11,3 2,40,2 44,62,1 48,22,7 82,92,4 45,72,2 14,11,3

80 7,80,2 38,31,2 21.20,3 ++ 2,41,2 1,50,2 57,62,3 69,82,1 122,44,4 58,12,6 15,31,2

Maturare
deplin 8,90,2 40,21,4 23.10,2 +++ 0,31,1 2,1*0,2 67,12,6 110,13,8 218,83,4 65,82,1 15,60,9

Legend: Depuneri cerifere: + nensemnate; ++ moderate; +++ maxime. Densitatea periorilor, stomatelor, sclereidelor pe unitate de suprafa
ecivalent cu cmpul de vedere la combinaia: ocular 10x i obiectiv 20x , * lenticele suberificate.

9
juvenile sunt pubescente, la 60 de zile periorii tectori se reduc i la fructele mature densitatea lor
este minim. Pubescena diminueaz n ontomorfogenez, iar alt element anatomic, ceara, este n
ascensiune, ncepnd cu 40 zile i caracterizeaz fructele mature, unde este reprezentat prin 3
tipuri de cristaloizi ceriferi: granular, lamelar i tubular. Densitatea stomatelor se reduce, graie
extinderii celulelor i dup 60 de zile, sunt nlocuite cu lenticele, cptuite cu suber i cear.
Dimensiunile celulelor epidermei sunt de 2 ori mai mari la etapa de 60 zile, fa de cea iniial i
de 2 ori mai mici, fa de fructele mature. Pn la 60 zile, n celule sunt prezente granulele de
amidon, care dispar treptat la etapele ulteriaore, iar n sucul vacuolar apar antocianii.
Creterea grosimii pericarpului pn la 60 zile se realizeaz din contul diviziunii celulelor
i mririi numrului de straturi de celule parenchimatice, urmeaz o stabilitate, iar dup 60 zile i
pn la maturarea deplin, constatm o sporire lent, doar n baza extensiei dimensiunilor
celulelor. Sclereidele nu se observ n parenchimul fructelor juvenile, ncep s se contureze la 40
zile i se difereniaz odat cu maturarea pericarpului. Este specific distribuirea sclereidelor:
sporadic, solitare ori n grupuri mici n hipoderm i subzona celulelor oval-rotungite extern; n
grupuri mari n subzona celulelor oval-alungite radiar; n fii compacte, nentrerupte, n
subzona intern a celulelor oval-rotungite. Druzele de oxalat de calciu, localizate n hipoderm,
subzonele extern i intern a celulelor oval-rotungite, sunt caracteristice fructelor juvenile, iar n
cele mature dispar.
Retrospectiva carpoontomorfogenezei la aronie evideniaz fluctuaia succesiv i
consecvent a structurilor anatomice cu caracter adaptiv, adecvate aciunii factorilor climatici pe
perioada maturrii, n calitate de indici anatomici specifici anumitor etape de dezvoltare [17].
Modificrile epi- i endostructurilor n procesul carpomaturrii asigur rezistena pericarpului i
constituie o necesitate vital. n schimbul unor epistructuri cu caracter adaptiv-protector (periori
tectori unicelulari i lungi, cuticul subire de tip extern, stomate) a fructelor juvenile, survin
altele (cuticul groas de tip extern-intern, cear polimorf, lenticele) la fructele mature.
Potenialul protector la fructele mature suculente este suplinit i de endostructuri (hipoderm,
sclereide i druze de oxalat de calciu cu mod specific de distribuire). Etapa de 60 zile de la
nflorire, caracterizat printr-un echilibru al dividerii i extensiei celulelor, precum i al
particularitilor structural-metabolice, este de tranziie a indicilor anatomici att cantitativi, ct
i calitativi.
3.3. Caracteristica histoanatomic a pericarpului fructului matur
Pericarpului fructului matur de A. melanocarpa (Michx.) Elliot este specific succesiunea
zonalitii histoanatomice, exprimat prin epi-, mezo-, difereniat n 4 subzone (hipoderma,
subzona extern a celulelor oval-rotungite, subzona celulelor oval-alungite radiar i subzona

10
intern a celulelor oval-rotungite) i endocarp. Aceast zonalitate histoanatomic este
caracteristic multor specii din s/familia Pomoideae, descris n lucrrile colii de anatomie a
plantelor a Academiei de tiine a Moldovei, care, cu anumite specificri anatomice pentru
fructul de aronie, se nscrie ntr-un plan general de structur i confirm principiul identitii
zonalitii histoanatomice [38]. Formaiuni anatomice specifice pericarpului fructului de aronie
sunt n: epicarp policite, periori tectori unicelulari, lungi, cu celule bazale, polimorfismul
formaiunilor cerifere, exprimat prin apartenena la 3 tipuri de cristaloizi ceriferi (lamelar,
granular, tubular), cuticula de tip extern-intern, stomate de tip anomocitic; mezocarp
hipoderma, druze de oxalat de calciu, sclereide; endocarp periori tectori, policite (fig. 3.1).

a b

c d1 d2 d3

e f

g
h

Fig. 3.1. Structuri anatomice specifice pericarpului fructului de A .melanocarpa (Michx.) Elliot:
a policite; b periori tectori unicelulari; c perior tector cu celule bazale; d1 formaiuni
cerifere lamelare, d2 granulare, d3 tubulare; e cuticul de tip intern-extern; f hipoderm
antocianifer; g druze de oxalat de calciu; h sclereide.

11
3.4. Modificrile structurale ale fructului n funcie de gradientul ecologo-geografic al
Republicii Moldova
Caracteristicile histoanatomice ale organelor vegetale sunt ntr-o interdependen cu
gradientul ecologic i coreleaz cu apartenena sistematic [36, 38]. Studiile anatomice i
ultrastructurale carpoecologice au valoare aplicativ, servind ca reper la: dirijarea proceselor de
cretere, selectare i calibrare ale fructelor, ecologic polimorfe de pe terenuri versante i n
funcie de relieful ecologo-geografic [36] i la determinarea duratei de pstrare pe perioada post-
maturrii [39] n scopul obinerii fructelor cu caliti nalt gustative i aspect calitativ comercial.
Studiul fructelor de aronie, n funcie de 3 regiuni ecologo-geografice (Sud, Centru,
Nord) ale R.Moldova, denot c valorile indicilor biometrici (masa, grosimea pericarpului i a
lojei seminale) se mresc de la Sud spre Nord i sunt condiionate de stabilirea unui regim mai
leger de temperaturi i hidratare mai mare, care cauzeaz prolongarea perioadei de dezvoltare a
fructelor cu 10 zile. S-au evideniat fluctuaii graduale xeromorfe ale epidermei ca prima barier
cu rol protector [10] de la Nord spre Sud, exprimate prin: ngroarea i formarea cuticulei de tip
extern-intern; cerificarea polimorf; sporirea densitii i longevitii pubescenei; cerificarea i
suberificarea lenticelelor. Micromorfologia i distribuirea cristaloizilor ceriferi constituie
strategiile de adaptare i rezisten a fructului suculent la aciunea factorilor nefavorabili ai
mediului ambiant. Sunt i schimbri graduale ale endostructurilor: micorarea dimensiunilor
celulelor i sporirea gradului de mpachetare; ngroarea pereilor celulari; sporirea numrului de
sclereide i druze de oxalat de calciu, care coreleaz cu topografia n pericarp, fiind mai
accentuate n regiunea periferic, dovad a semnificaiei lor adaptive. Funcia adaptiv-
protectoare a fructelor suculente de aronie este realizat de modificrile graduale ale epi- i
endostructurilor, ce alctuiesc un complex histoanatomic protector al pericarpului, care
funcioneaz sinergic n baza principiului compensator la aciunea factorilor ecologici
nefavorabili.
3.5. Structuri citoanatomice suport potenial n asigurarea calitii fructelor suculente de
aronie
Fructele de aronie sunt solicitate pe piaa mondial n calitate de produs alimentar,
medicinal i tinctorial [16, 28, 30] de aceea necesit aspect calitativ comercial. Fructele sunt
mici, suculente i este dificil de asigurat integritatea lor n procesele de recoltare, transportare,
ambalare, pstrare n proporii mari i pe perioad de lung durat. Sau determinat structurile
anatomice, ce constituie suportul de baza n integritatea pericarpului suculent la fructele de
aronie. Un rol nsemnat n acest sens revine epicarpului i hipodermei, ele constituind prima
barier de contact cu mediul extern: prezena policitelor n epiderm, dimensiunile mici ale

12
celulelor hipodermei permit mpachetarea compact i asigur rezistena la presiuni mecanice n
procesele de recoltare i transportare; periorii tectori formeaz un nveli dens i plastic i
protejeaz fructul de variaii termice i aciuni mecanice; ceara compact i aderent constituie
un ecran reflector al razelor ultraviolete (UV), reduce aciunea excesului factorilor fizici i
protejeaz de aciunea destructiv a patogenilor; cuticula groas extern-intern i stomatele
cerificate i suberiziate diminueaz deshidratarea accelerat a pericarpului succulent.
Mezocarpul, alctuit din celule mari i vacuolizate, cu pereii subiri, formeaz endostructuri cu
aport n asigurarea integritii pericarpului suculent: druze de oxalat de calciu, sclereide grupate,
care faciliteaz angrenarea compact a celulelor parenchimatice, iar distribuirea lor dens n
hipoderm i formarea fiilor nentrerupte n subzona intern a celulelor oval-rotungite conduce
la micorarea spaiilor intercelulare i constituirea unui cordon dens, ce sporete rezistena
fructelor succulente la presiuni mecanice [10].
Complexul structurilor anatomice evideniate servesc ca criterii de apreciere a viabilitii,
rezistenei i longevitii fructelor suculente. E dificil de determinat ponderea fiecrui element
structural n asigurarea integritii fructelor suculente n procesele de recoltare, ambalare,
transportare i pstrare, dar este relevant, c toate elementele complexului de structuri contribuie
la asigurarea rezistenei i calitii fructelor.
4. STUDII BIOTEHNOLOGICE I PARTICULARITILE STRUCTURALE ALE
CARPOMASELOR PIGMENTATE IN VITRO DE ARONIA MELANOCARPA ELLIOT
4.1. Optimizarea compoziiei chimice a mediului nutritiv pentru inducerea i acumularea
carpocalusului la aronie
Pentru iniierea i dezvoltarea biomaselor in vitro este important selectarea adecvat a
MN i a balanei hormonale. Este demonstrat [4, 5, 21, 31] necesitatea studiilor individuale
pentru fiecare specie n iniierea carpoculturilor in vitro. Reeind din histoanatomia i
specializarea metabolic fenolic a fructului de aronie, s-au tatonat 100 variante, bazate pe
combinarea dozelor de hormoni citokininici i auxinici a 2 grupe hormonale KD (K i 2,4-D) i
KN (K i ANA), adiionate MN de baz. Screening-ul a permis optimizarea a 20 variante
nutriionale n vederea inducerii i acumulrii carpomasei [4-6, 23]. Carbonul reprezint
elementul chimic necesar creterii i activitii vitale a celulei, iar sursa benefic pentru
carpoproliferare in vitro i biosinteza CF este zaharoza. Dozele administrate n MN au efecte
individuale pentru fiecare specie, de aceea s-a studiat influena gradientului zaharozei, de la
1,0% pn la 7,0%, asupra carpocalusrii in vitro la aronie. Inducerea calusrii nu depinde de
concentraia zaharozei, dar mrirea concentraiei sporete intensitatea carpocalusrii n corelaie
cu variantele hormonale ale ambelor grupe hormonale (KD i KN) ale MN (fig. 4.1).

13
 Calusarea % Calusarea %
100 70
90 Zaharoz
60 6%
80
70 50
60 Zaharoz Zaharoz
40
50
6% 3%
40 30
30
Zaharoz 20
20
10 3% 10
0
0
1 1,5 2 2,5 3 3,5 4
1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5
Variantele hormonale ale 2,4-D (mg/l )
Variantele hormonale ale ANA (mg/l )

a. b.
Fig. 4.1. Intensitatea carpocalusrii n funcie de concentraia zaharozei i variantele hormonale
ale grupelor hormonale: a. KD; b KN.
4.2. Criteriile biologice ale expresiei potenei proliferative a carpoexplantului
Caracteristicile structural-biochimice ale carpotipului pommum la aronie coreleaz cu
zonalitatea histoanatomic [10,12,17] i sunt specifice fiecrei etape ontomorfogenetice. Aceasta
justific necesitatea determinrii: vrstei optime a organului-donator de explant, naturii
histogenului n calitate de explant i poziiei lui n raport cu MN, pentru iniierea i acumularea
carpomasei in vitro.
Vrsta optim i histogenul fructului-donator de explant s-a determinat prin tatonarea
histogenilor de la 10 zile de la nflorire pn la fructele mature. Explantele, decupate din fructele
juvenile (10-40 zile), inoculate pe MN, necrotizeaz. CF sunt prezeni n diferite compartimente,
dar cu precdere, n zona mural a celulelor de pe inciziile explantului, care formeaz o barier i
constituie o reacie imediat de aprare la aciunea condiiilor in vitro asupra celulelor fine. n
scopul resorbiei excesului de CF din celule s-a administrat pulberea de crbune activ n MN,
care, doar, a frnat necroza cu 2 zile. Explantele, prelevate la etapele de 50-60 zile, posed
caliti proliferative cu valori maxime ale intensitii calusrii pe ambele grupe hormonale ale
MN, dar pe KD cu un prag mai superior, dect pe KN. Explantele, caracterizate prin coraport
echilibrat al indicilor citoanatomici i biochimici (dimensiunile celulelor, gradul de vacuolizare,
potenialul fenolic, rezerva trofic de granule amilacee, necesar la dediferenierea incipient)
asigur viabilitatea celulelor n condiii in vitro i dezvluirea potenei proliferative [11, 24].
Specificul histoanatomic al inoculilor din fructele etapelor de 70-80 zile de la nflorire i mature
(celulele mari i vacuolizate duc la pierderea integritii) a determinat soarta similar explantelor
din fructele juvenile, necroza.
Specificul zonalitii histoanatomice a pericarpului la aronie coreleaz cu etapa
ontomorfogenetic [17] i reprezint un factor decisiv n inducerea carpocalusrii in vitro,
servind n calitate de reper n selectarea histogenului optim. Reacia morfogenetic a histogenilor
(epicarpul, epicarpul cu hipoderma, mezocarpul i endocarpul) a fost diferit, n funcie de
orientarea explantului fa de MN. Epicarpul manifest capacitate de calusare doar la inocularea

14
cu partea intern n contact cu MN, inducnd un calus cu viabilitate redus. La amplasarea
epicarpului cu partea extern n contact cu MN au fost iniieri sporadice ale calusrii pe inciziile
marginal-laterale, deoarece cuticula groas, pubescena, ceara, constituie o barier mecanic i
nu permite extruzia calusului. Epicarpul, ca zon histogenic, are menirea de protecie, dobndit
evolutiv [10,39], graie formrii cuticulei i cerei i n condiiile in vitro manifest capacitate
proliferativ redus.
Epicarpul cu hipoderma dezvluie potenialul proliferativ maxim, iar intensitatea calusrii
coreleaz cu grupa hormonal a MN, KD, mai favorabil, n raport cu KN. n ambele cazuri,
hipoderma n contact cu MN favorizeaz inducerea calusrii, graie caracteristicilor
citoanatomice i rolului histogenilor constituieni. Epicarpul asigur viabilitatea prin ndeplinirea
fireasc a funciei de aprare, protejnd celulele hipodermei de impactul negativ al procesului de
pregtire pentru inoculare in vitro. Hipoderma, alctuit din celule mici cu vacuom dezvoltat
moderat, nu reprezint impedimente ale viabilitii i integritii celulare n condiii in vitro, iar
rezerva trofic asigur sursa energetic pentru iniierea proliferrii. Se atest calusare pe inciziile
intern i laterale ale hipodermei, dar naintarea calusrii spre interior ntmpin rezistena
mecanic a MN. Proliferarea, pe inciziile laterale, prevaleaz, favoriznd acumularea biomasei
pe orizontal. Aceste 2 pri constituiente (epicarpul cu hipoderma) ale explantului, prin
mbinarea complimentar a funciilor i particularitilor structurale, determin dezvluirea
maxim a potenei proliferative i intensitii calusrii. Mezocarpul, alctuit din celule mari i
vacuolizate, pierde integritatea la decupare, iar endocarpul, fiind din celule sclerificate cu
peretele celular ngroat i protoplast redus, nu prolifereaz.
Dezvluirea potenialului proliferativ al carpoexplantului are caracter individual
histospecific, organospecific i taxonospecific i coreleaz cu poziia explantului i balana
hormonal, adiionat MN [5, 21,23, 32]. Vrsta, natura i poziia carpohistogenului, n raport cu
MN, sunt condiii biologice, bazate pe un complex de indici structurali: forma, dimensiunile,
gradul de vacuolizare i mpachetare a celulelor, coraportul citoplasm/vacuole, natura chimic
i grosimea pereilor celulari, cutinizarea i cerificarea epidermei; rezerva trofic imobilizat, cu
rol decisiv n expresia potenialului carpoproliferativ in vitro.
4.3. Aciunea regimului de lumin asupra calusogenezei
Lumina reprezint factorul exogen cu rol esenial n dezvoltarea morfofuncional a
celulelor vegetale in vivo i activitii metabolice fenolice. S-a studiat aciunea regimurilor de
lumin: fotoperiodism natural (zi/noapte 16/8 ore), n calitate de martor; iluminare continu;
obscuritate (7 zile), urmat de fotoperiodism natural; obscuritate; lumina roie; lumina UV
asupra carpocalusrii in vitro la aronie pe MN cu 2 grupe hormonale KD i KN. Explantele,

15
inoculate pe MN a grupei KD, iniieaz calusarea mai rapid, iar intensitatea calusrii este mai
mare, fa de grupa KN, n toate regimurile de lumin. S-a demonstrat c prezena luminii nu
este obligatorie pentru inducerea carpocalusrii, dar calitatea luminii influeneaz termenul de
inducere (lumina roie retardeaz, iar UV sporete cu 2 zile, fa de martor), este obligatorie i
decisiv n dezvoltarea ulterioar a carpomaselor pe perioada calusogenezei. Fotoperiodismul
natural este benefic pentru iniierea i acumularea carpomasei verde pe MN cu KD i doar pentru
iniierea calusrii pe MN cu KN, dar lumina roie faciliteaz intensitatea calusrii i acumulrii
carpomasei violacee pe MN cu KN.
4.4. Perioada calusogenezei i dinamica acumulrii carpomasei
Durata perioadei carpocalusogenezei la aronie este de 40 zile i divizat n 4 faze
succesive: lag, logaritmic de cretere, staionar i senescen (fig. 4.2). Carpomasa are
anumite caracteristici, detereminate de procesele citobiosintetice, care coreleaz cu faza
calusogenezei [4, 6, 7]. n faza lag (durata 4-5 zile) au loc procese de adaptare i pregtire a
celulelor explantului pentru iniierea proliferrii. n faza logaritmic (pn la a 17 zi), diviziunea
celular, iniiat la sfritul fazei lag, deruleaz intens i rezult n mrirea numrului de celule n
I jumtate a fazei. n a 2 jumtate a fazei are loc, concomitent, diminuarea diviziunii celulare i
sporirea extinderii celulelor. Pn la mijlocul fazei, prevaleaz culoarea verde n toate
carpomasele, iar n a 2 jumtate apar diferene n pigmentaie, care coreleaz cu grupa
hormonal: pe KD, culoarea verde, iar pe KN, culoarea este crem-violacee, ce denot
biosinteza metaboliilor secundari, n special a antocianilor. n faza staionar (a 18-a 34-a zi)
valorile cantitative sporesc uor n baza extinderii celulare, care continu lent la nceputul fazei,
dar, preponderent, din contul elaborrii substanelor de rezerv i CF [2,4,26]. Maximul de
acumulare a carpomaselor revine fazei staionare pentru ambele grupe hormonale ale MN, dar
valorile sunt mult superioare pentru KD, fa de KN (fig. 4.3).
120 g/flacon
8
2,4-D
100 7
masa calusala, %

6 ANA
80
5
60
4

40 3

20 2

1
0
0 5 10 15 18 20 25 30 35 40 41 42 43 44 45 0
ag
L

zile

Fig. 4.2. Durata perioadei de calusogenez Fig. 4.3. Acumularea carpomasei de A.

la carpocultura tisular in vitro de A. melanocarpa (Michx.) Elliot n funcie de fazele
melanocarpa (Michx.) Elliot. perioadei de calusogenez i grupele hormonale
ale MN.

16
 n faza de senescen se atest o pierdere uoar n mas, determinat de deshidratarea
celulelor. De la periferie spre centru carpomasele devin mate, friabile i pierd viabilitatea,
procese, care se produc mai intens pe MN cu grupa KN, fa de cea cu KD.
Regimul de lumin, balana hormonal a MN pot frna sau stimula transformrile
structurale i biosintetice n celulele carpomaselor, astfel, modificnd doar coraportul duratei
fazelor, dar succesiunea se menine. n ciclul carpocalusogenezei la aronie are loc fluctuaia
succesiv a 4 faze, fiecare cu specificri structural-biosintetice, care servesc reper la
determinarea termenului subcultivrii pe MN proaspete pentru asigurarea continuitii i
viabilitii carpomaselor.
4.5. Frecvena i condiiile subcultivrilor
Multiplicarea celulelor explantului, inoculat in vitro pe MN adecvate, n rezultatul
dediferenierii i proliferrii formeaz calusul primar static. Celulele au ciclul ontogenetic, care
prevede succesiunea proceselor de extindere, maturare, senescen i moarte. Pentru evitarea
senescenei calusului este necesar subcultivarea lui pe MN proaspete, la sfritul fazei
logaritmice, cnd celulele nc au poten proliferativ. Administrarea unui coraport echilibrat al
auxinelor i citokininelor n MN i pasarea periodic reglat pe MN proaspete permite
meninerea calusului viabil pe perioade ndelungate. Pentru indentificarea formulelor hormonale
optime n asigurarea proliferrii i acumulrii carpomasei la pasarea pe MN proaspete s-au
utilizat 2 procedee: transferarea calusului pe MN cu formula hormonal identic celui, pe care s-
a iniiat i transferarea calusului pe MN cu formule hormonale noi (fig. 4.4.). Subcultivrile
stimuleaz intensitatea calusrii n cazul meninerii regimului nutriional al MN pe grupa
hormonal KD, cu 2 praguri mai superioar, dect pe KN. La iniierea calusului pe MN a grupei
KD i primele 2 subcultivri pe MN identic, apoi transverarea pe MN a grupei KN, sporete
proliferarea cu un prag, iar, la a 3-a subcultivare, carpomasa capt caracteristicile celor, de pe
MN a grupei KN. Sreening-ul rezultatelor obinute au permis elaborarea schemei modelului
biotehnologic de obinere a carpomasei pigmentate cu coninut bogat fenolic din fructele de A.
melanocarpa (Michx.) Elliot (fig. 4.5).
Transferul reglat al calusului n faza logaritmic pe MN proaspete sporete intensitatea
calusrii i acumularii carpomasei, iar balana hormonal acioneaz selectiv, dozele de 2,4-D
stimuleaz acumularea carpomaselor, iar cele de ANA, faciliteaz acumularea CF [13, 23].
4.6. Reacia morfogenetic a carpoexplantelor n funcie de regimul nutriional al mediului
Reacia de baz a carpoexplantului, inoculat pe MN cu grupele hormonale KD i KN, a
fost calusarea, dar cu diferite intensiti i caracteristici morfologice, n funcie de varianta
hormonal. S-au obinut carpomase polimorfe, bazate pe reaciile morfogenetice diverse ale

17
 KD ++ KD +++ KD ++++ KD +++++ KD+++++
Calus Crem-verde Verde, viabil Verde, viabil Verde, viabil
translucid
KN ++ KN ++++
KN +++
Crem-verde Violacee, viabil
Crem-roz
Subcultivrile
I. II. III. IV. V.

KN ++ KN +++ KN +++
18

KN + KN ++
Violaceu, mat,
Calus Crem-roz Violaceu, viabil Violaceu, viabil friabil
translucid

KD ++ KD +++ KD ++++
Verde, viabil
Crem-roz Roz-verde

Fig. 4.4. Aciunea frecvenei subcultivrilor i a regimului nutriional asupra intensitii carpocalusrii la A. melanocarpa (Michx.) Elliot.
Legend: intensitatea calusrii: + minim; ++ relativ; +++ moderat; ++++ bun; +++++ maxim; .
meninerea regimului hormonal; schimbarea regimului hormonal al mediului nutritiv.

18
 Recoltarea fructelor
de Decuparea
A. melanocarpa (Michx.) Splarea cu H20 explantului,
Elliot donatoare de distilat, apoi cu agent constituit din
explant chimic Diacid, timp de epicarp i
Etapa 7 min i de 3 ori cu H2O hipoderm cu
ontomorfogenetic bidistilat steril dimensiunile
60 zile de la nflorire de 4x4 mm

Inocularea explantului Obinerea

cu poziia incizia calusului I subcultivare Carpomas
intern n contact cu primar spongioas
MN de baz MS (1962), La a 18 zi de culoare
suplimentat cu 2,0 mg/l (sfritul fazei verde
de 2,4-diclorfenoxiacetic Durata logaritmice de
i 0,5 mg/l Kinetin i perioadei de cretere),
60g/l zaharoz, pH5,7; caluspgenez pe MN identic
Fotoperiodism normal 40 zile
(16 ore zi/8 ore noapte),
temperatura 22-24oC
III subcultivare
[Brevet MD 3763]. La a 18 zi (sfritul
fazei logaritmice de
cretere), pe MN
suplimentat cu 3,5
II mg/l ANA, 0,5 mg/l K Carpomas
subcultivare i 60 g/l zaharoz, spongioas
Carpomas pH 5,7; de culoare
La a 18 zi (sfritul spongioas Fotoperiodism normal verde-
fazei logaritmice de de culoare (16 ore zi/8 ore violacee
cretere), verde noapte), temperatura
pe MN identic 22-24oC
[Brevet MD 46]

IV subcultivare V
Carpomas Subcultivare Carpomas
La a 18 zi de culoare de
(sfritul fazei violacee La a 18 zi culoare
logaritmice de (sfritul fazei violacee,
cretere), logaritmice de cu coninut
pe MN identic cretere), fenolic sporit
pe MN identic

Fig. 4.5. Schema modelului biotehnologic de obinere a carpomasei pigmentate cu coninut

fenolic din fructele de A. melanocarpa (Michx.) Elliot.

19
explantelor n funcie de balana hormonal a MN, concentraia zaharozei, regimul de lumin. S-
a elaborat un sistem de criterii pentru descrierea i evaluarea polimorfismului carpomaselor:
vectorul de cretere (vertical, orizontal), gradul de mpachetare (compact, moale, spongios) i de
friabilitate (dezagregabil, nedezagregabil), aspectul suprafeelor (mat, lucios), culoarea (mono-,
policromatic, alternana culorilor).
Carpoexplantele, de pe variantele hormonale ale grupei KD, au manifestat o intensitate a
calusrii, cu precdere, mai mare, dect ale grupei KN (fig. 4.6). Variabilitatea morfologic a
carpomaselor demonstreaz labilitatea morfogenetic a explantului i reprezint o expresie a
potenialului genetic, dirijat de aciunea factorilor chimici exogeni.

100 KD
64

80 100
%
66

KN 90 72
Inte nsita te a
c a lus r ii %

60 80

70

40 60

50
Biomasa verde
20 40

30
Biomasa crem-
alb
0 20

10 Biomasa crem-

1 2 3 4 5 6 7 0
1 Biomasa
roz

violacee

Fig. 4.6. Intesitatea calusrii n funcie de grupa Fig. 4.7. Variaia valorii indicelui de
i varinata hormonal a MN: 1 1 (mg/l) de 2,4-D calusare n funcie de pigmentaia
i ANA; 2 1,5 de KD i ANA; 3 2,0 de 2,4-D i carpomaselor in vitro la A.melanocarpa
ANA; 4 2,5 de 2,4-D i ANA; 5 3,0 de 2,4-D i ANA; (Michx.) Elliot. .
6 3,5 de 2,4-D i ANA; 7 4,0 de 2,4-D i ANA.
Variantele hormonale, n baza combinaiilor dozelor de hormoni auxinici i citokininici
au condiionat dezvoltarea carpomaselor pigmentate, caracterizate prin indicele de calusare (fig.
4.7): 2,0-2,5 mg/l de 2,4-D i 0,5 mg/l K carpomas verde cu indicele de calusare de 99%; 2,5-
3,5 mg/l ANA i 0,5 mg/l K carpomas violacee cu 72%; 4,0 5,0 mg/l i 0,5 mg/l K
carpomas crem-roz cu 66% i 1,0-2,0 mg/l ANA i 0,5 K carpomas crem-alb cu 64%.
4.7. Studiul citomorfologic al carpomaselor pigmentate
S-a efectuat evaluarea citomorfologic comparat a carpomaselor pigmentate (violacee,
crem-roz, crem-alb i verde) n funcie de formula hormonal a MN. Rezultatele studiului
demonstreaz c carpomasele reprezint biomase heterogene de celule, cu unele specificri n
corelaie cu balana hormonal, adiionat MN. n seciunea transversal a carpomasei se
contureaz 3 straturi de celule, condiional denumite: cortical superior, median i cortical inferior
(fig. 4.8). Stratul cortical superior const din 4-5 rnduri de celule parenchimatice, compact
mpachetate, iar celulele rndului periferic sunt puin vacuolizate, au o ngroare a pereilor
celulari mai pronunat spre exterior. Celulele urmtoarelor rnduri sunt bogate n cloroplaste,
aranjate parietal i amintesc un parenchim asimilator. Stratul median a carpomasei este alctuit

20
din celule parenchimatice oval-rotungite, aranjate neregulat i cu mici spaii intercelulare.
Celulele au vacuol central, relativ mare, numrul cloroplastelor e mai redus, dect n stratul
exterior. Colorarea n violet, la aplicarea reactivului Lugol, denot prezena amidonului n toate
carpomasele pigmentate i reprezint un parenchim de depozitare. Stratul cortical inferior, n
contact cu MN, const din celule alungite cu perei subiri, aranjate perpendicular pe axa
orizontal a carpomasei.

Fig. 4.8. Seciune transversal prin carpocalusul de A. melanocarpa (Michx.) Elliot: 1 strat
cortical superior; 2 strat median; 3 strat cortical inferior; 4 celule alungite; 5 rnduri
celulare uniserate; 6 centru proliferativ.
Celulele periferice formeaz rnduri uniserate, cu rol de ancorare n MN i fiind rsfirate,
mresc suprafaa de contact cu MN, favoriznd nutriia eficient i amintesc un parenchim de
absorbie. n zonele periferice laterale sunt centrele proliferative, ce faciliteaz extinderea
calusului, alctuite din celule sferice, cu pereii celulari subiri, citoplasm dens i multe
vacuole mici. Carpomasele pigmentate au diferit expresie a gradului de stratificare, n
descenden: carpomasa violacee>crem-roz>verde>crem-alb. Biomasele calusale sunt descrise
ca acumulri celulare amorfe [21, 31], iar stratificarea n 3 zone la carpomasa de aronie [6, 7]
confirm datele la calusul generat din rdcini [32], din flori i frunze [37] la alte specii.
Topografia centrelor proliferative determin vectorul de cretere a biomaselor, care are caracter
organospecific, coreleaz cu apartenena sistematic a plantei i nu se ncadreaz n anumite
tipologii. Vectorul de cretere a carpomaselor la aronie depinde de formula hormonal a MN:
orizontal i vertical la carpomasele violacee, crem-roz i crem-alb, dezvoltate pe MN cu
diferite doze de ANA i, preponderent, pe vectorul orizontal la cea verde, pe MN cu doze 2,4-D.
Studiul citomorfologic demonstreaz tendina stratificrii carpomaselor de aronie ca
rezultat al specializrii morfofuncionale: stratul cortical extern cu funcie de protecie; stratul
intern median, cu funcie de asimilare sau depozitare a materiilor de rezerv; stratul marginal cu
funcie proliferativ; stratul periferic la contactul cu MN, are funcie de nglobare i absorbie a
substanelor nutritive. Polimorfismul celular al carpomaselor de aronie reprezint o specializare

21
morfofuncional, care coreleaz cu formula hormonal a MN: carpomasa verde, clorofilian cu
funcia de asimilare fotosintetic; carpomasa violacee, antocianifer are funcia de biosintez i
acumulare a CF; carpomasele crem-roz i crem-alb de depozitare a amidonului i a CF.
5. STUDII BIOCHIMICE COMPARATE ALE FRUCTELOR I CARPOMASELOR
PIGMENTATE IN VITRO DE ARONIA MELANOCARPA (MICHX.) ELLIOT
5.1. Screening-ul biochimic al fructelor i carpomaselor in vitro
n scopul identificrii compoziiei chimice a carpomaselor in vitro s-a recurs la
screening-ul chimic calitativ, bazat pe separarea principalelor grupe de compui chimici prin
extracia succesiv i selectiv cu solveni de diferite polariti: chloroform, soluie alcoolic, ap
i aplicarea reaciilor specifice, comparativ cu fructele. S-a demonstrat c n carpomasele
pigmentate i n fructele de aronie sunt prezente aceleai grupe de compui naturali, dar cu
expresie diferit a intensitii reaciilor de identificare (tabelul 5.1).
Tabelul 5.1. Compuii chimici prezeni n carpomasele i fructele de A. melanocarpa Elliot
Compuii chimici Specimenele analizate
identificai Fructe Carpomas Carpomas Carpomas Carpomas
violacee crem-roz crem-alb verde
Uleiuri volatile + + + + -
Uleiuri grase ++ + + + -
Carotenoide ++ ++ ++ + ++
Clorofile + + + + +++
Taninuri ++ +++ +++ ++ ++
Flavonoide ++++ ++++ +++ ++ +
Proantocianidoli +++ +++ +++ +++ +++
Antociani ++++ ++++ +++ + +
Pectine ++ +++ +++ +++ ++
Amidon ++ ++ +++ ++++ ++
Legend: Intensitatea expresiei reaciilor specifice: absen; + slab; ++ moderat; +++
pronunat; ++++ foarte pronunat.
Rezultatele screening-ului biochimic denot prezena unui spectru de CF, ce a justificat
efectuarea studiului calitativ i cantitativ prin diferite metode: CSS, spectofotometrice,
titrimetrice, CLIP-SM [15, 24, 25] n scopul elucidrii calitii biochimice a carpomaselor [16],
temei argumentat pentru studii complexe n vederea posibilitii valorificrii lor [14, 18, 19].
5.2. Studiul calitativ i cantitativ al acidului ascorbic
Prezena acidului ascorbic a fost identificat prin metoda CSS n fructele in vivo i n
toate carpomasele pigmentate in vitro. Acidul ascorbic a fost determinat cantitativ prin metoda
titrimetric cu coninutul maxim n carpomasa violacee (24,53 mg/100 g), de 2 ori mai mult
dect n fructe (12,8 mg/100 g), apoi n descenden: crem-roz (21,0 mg/100 g)>crem-alb
(18,1 mg/100 g)>verde (13,5 mg/100 g), dar n toate, superior fa de fructe.

22
5.3. Studiul biochimic al compuilor fenolici n fructele in vivo i carpomasele in vitro
Prin reacii specifice i generale de colorare/sedimentare i CSS, analizate la lumina zilei
i n raze UV s-a identificat prezena flavonoidelor (rutozida, quercitozida, quercetolul),
antocianilor (cianidina, pelargonidina), compuilor fenilpropanici (acidul clorogenic i cafeic),
taninurilor hidrolizabile i condensate n extractele fructelor i carpomaselor in vitro [13].
Prezint interes prezena spoturilor neidentificate n extractele in vitro, care coreleaz cu
pigmentaia. Specrofotometric s-a determinat coninutul flavonoidelor (tabelul 5.2), care denot
aproape o echivalen n fructe i carpomasa violacee; n crem-roz i crem-alb scade puin, iar
n cea verde, coninutul este njumtit, fa de carpomasa violacee i fructe. Coninutul
antocianic maxim revine fructelor, puin cedeaz, carpomasa violacee, apoi crem-roz i crem-
alb, iar n cea verde de 2 ori mai puin, dect n fructe. Totalul acizilor fenilpropanici a variat
astfel: n carpomasa violacee i crem-roz, cantitate dubl fa de fructe; n crem-alb, coninut
intermediar, iar n verde minim. Coninutul taninurilor a fost determinat titrimetric n
descretere conform consecutivii: carpomasa violacee>crem-roz>fructe>crem-alb>verde.
Tabelul 5.2. Coninutul diferitor compui fenolici n fructele de aronie i carpomasele pigmentate
Specimenele analizate
Fructe Carpomas Carpomas Carpomas Carpomas
Compui chimici violacee crem-roz crem-alb verde
Flavonoide % 0,4780,003 0,4830,001 0,4300,009 0,4010,015 0,2300,023
Antociani
mg/100 g 818,318,2 680,512,4 540,910,1 430,610,3 401,610,1
Compui
fenilpropanici % 0,1780,001 0,3750,008 0,3410,011 0,2950,014 0,2350,021
Taninuri % 7,70,1 11,30,3 9,20,1 4,70,6 2,60,4
Totalul
polifenolic mg/kg 631231153 65 570800 52 910720 51 170400 36 780880
Totalul polifenolic n extractele carpomaselor i a fructelor de aronie a fost determinat
prin metoda Folin-Ciocalteu. Maximul se nregistreaz n carpomasa violacee, puin redus n
fructe, iar carpomasele crem-roz i crem-alb cu coninut aproape echivalent, dar mai puin, fa
de carpomasa violacee. Coninutul minim este n carpomasa verde [14, 16].
Analiza calitativ a CF (flavonoide, antociani, compui fenilpropanici, totalul polifenolic)
a demonstrat prezena constituienilor similari n extractele fructelor i carpomaselor, ns n cele
in vitro sunt unele spoturi neidentificate cu diferite valori ale Rf n corelaie cu pigmentaia [13].
Astfel, celulele carpomaselor in vitro pstreaz potena de biosintez fenolic, caracteristic
celor in vivo, ns condiiile in vitro induc biosinteza unei palete mai largi de CF i balana
hormonal adiionat MN are rol selectiv n dezvluirea acestei potene. Administrarea
hormonilor auxinici de tip ANA favorizeaz biosinteza CF i carpomasele violacee i crem-roz

23
se caracterizeaz cu valori maxime n raport cu carpomasa verde de pe MN cu 2,4-D i fructele
in vivo, astfel reprezentnd surse de materie prim cu coninut fenolic de alternativ [16, 18, 24].
5.4. Studiul compuilor fenolici n fructele i carpomasele pigmentate prin metoda
cromatografie de lichide de nalt performan cuplat cu spectrometria de mas
Pentru prima dat a fost realizat studiul carpomaselor in vitro prin metoda CLIP-SM cu
18 substane de referin [15], care a permis identificarea, dozarea CF i completarea informaiei,
obinut prin alte metode [13, 24, 25]. Au fost identificai 5 CF (acidul clorogenic, hiperozida,
isoquercitrina, rutozida i quercetolul), iar SM a pus n eviden 3 CF suplimentari (acizii
gentisic, cafeic i quercitrina). Acizii gentisic i cafeic au fost depistai calitativ n toate probele
analizate; cantitativ n-a fost posibil, deoarece exist 2 perechi de substane incomplet separabile:
acid caftaricacid gentisic i acid clorogenicacid cafeic. Menionm prezena acidului p-
cumaric doar n carpomasele in vitro i a 2 constituieni neidentificai cu timpii de retenie 6,2
min i 14,9 min. Coninutul procentual maxim pentru majoritatea constituienilor fenolici revin
carpomaselor violacee i crem-roz, care se distribuie astfel (n descretere): acidul clorogenic>
izoquercitrina> hiperozida>acidul p-cumaric>rutozida>quercetolul (tabelul 5.3).

Tabelul 5.3. Estimarea cantitativ a compuilor fenolici n extractele metanolice analizate

Fructe Carpomasele pigmentate

violacee crem-roz crem-alb verde
Compui
Cota Cota Cota Cota Cota
fenolici parte parte% parte% parte% parte%
(g/ml) % din (g/ml) din (g/ml) din (g/ml) din (g/ml) din
totalul totalul totalul totalul totalul
fenolic fenolic fenolic fenolic fenolic
Acid clorogenic 18,319 71,91 21,037 58,08 19,682 57,84 12,901 63,55 10,636 73,37
Acid p-cumaric - - 1,334 3,69 1,755 5,16 0,221 1,08 calitativ calitativ
Hiperozid 2,016 7,93 3,638 10,06 3,571 10,49 0,927 4,56 0.409 2,83
Quercitrin 2,102 8,25 3,212 8,86 2,148 6,31 2,104 10,36 1,990 13,72
Isoquercitrin 1,947 7,64 5,795 16,02 5,030 14,78 3,411 16,80 1,254 8,65
Rutozid 0,948 3,72 0,948 2,62 1,393 4,09 0,429 2,11 0,206 1,43
Quercetol 0,142 0,55 0,252 0,69 0,445 1,33 0,307 1,51 - -

Totalul CF 25,474 100 36,216 100 34,024 100 20,300 100 14,495 100

Rezultatele studiului flavonoidelor n fructele de aronie prin metoda CLIP-SM sunt

similare cu cele din literatur, dar cu unele devieri: n investigaiile proprii n-a fost identificat
kaempferolul [15] analog lucrrii [27], unde flavonolii principali sunt izoquercitrina i
hiperozida, iar quercitrina, identificat doar calitativ, pe cnd n alte studii [28], flavonolul
principal este quercitrina, iar kaempferolul i mirecitrina cu coninut redus.
Studiul CF prin metoda CLIP-SM [15] a confirmat i completat datele, obinute prin alte
metode [13, 14, 24]. Balana nutriional a MN este un factor, care dirijeaz expresia potenei de

24
biosintez fenolic i are rol stimulator, dar selectiv asupra biosintezei CF i a totalului
polifenolic, n general. Condiiile de cultur in vitro induc biosinteza unor constituieni fenolici
n carpomasele pigmentate, necaracteristici fructelor de A. melanocarpa (Michx.) Elliot.
6. ULTRASTRUCTURA FRUCTULUI IN VIVO I A CARPOMASELOR IN VITRO DE
ARONIA MELANOCARPA (MICHX.) ELLIOT I PRINCIPIILE EVOLUTIVE
6.1. Ultrastructura pericarpului n ontomorfogeneza fructului
Studiile ultrastructurale constituie o parte esenial i complimentar a complexului
tiinific de elucidare a mecanismelor de evoluare a celulelor n culturi in vitro, comparativ cu
cele in vivo [11, 31, 35]. Organizarea ultrastructural a celulelor fructului de aronie este, n
general, similar multor specii din fam. Rosaceae, ns cu specificri, induse de specializarea
metabolic fenolic [13-16, 24, 25], accentuate n evoluia carpomaturrii [17].
Odat cu maturarea fructelor se atest polimorfismul organitelor celulare, exprimat prin
forme atipice, cu invaginri i sinuri, ramificaii, protuberane, care faciliteaz contactul
interorganelar i asigur acitivitatea metabolic intens, caracteristic fructelor mature i
ilustreaz principiul intensificrii funciilor (Severov). Modificrile ultrastructurale ale
organitelor au loc n rezultatul includerii mecanismelor funcionale anabolice i catabolice ale
carpomaturrii, bazate pe corelaia dezvoltrii asincron a activitilor diferitor componente
celulare. Ribozomii, protosintetic activi n fructele imature, elaboreaz proteinele structurale i
enzimatice i asigur substratul respirator pentru activitatea mitocondriilor la etapele ulterioare.
Substituirea mitocondtriilor ortodoxali cu cei condensai denot activitatea intens respiratorie
pentru generarea energiei, necesar proceselor metabolice ale maturrii fructelor. Plastidele cu
organizare ultrastructural flexibil [35, 36, 39], sunt vulnerabile la aciunea factorilor endo- i
exogeni [38] i reprezint structuri informative n ontogeneza fructului (tabelul 6.1).
Tabelul 6.1. Volumul parial al constituenilor plastidieni n carpocelulele in vitro i in vivo
Volumul parial (%) al
Specimenul incluziunilor
granelor

stromei

analizat
totale amilacee fenolice lipidice proteice
Violacee 19,40,3 22,51,6 58,13,1 17,20,4 12,60,5 16,21,5 16,11.8
Carpomase

Crem- 13,40,4 9,00,7 76,64,2 38,21,2 4,10,4 20,21,2 14,10,4

roz
Crem- 11,20,7 6,00,9 82,82,8 40,10,9 1,20,1 26,11,6 15,40,2
alb
Verde 40,40,8 32,52,1 27,13,4 12,40,8 6,90,8 7,80,9 -
imature 39,92,4 29,60,9 30,51,2 14,51,8 13,50,9 5,00,8 -
Fructe

mature 20,21,8 26,81,1 53,02,2 28,12,4 8,40,6 16,51,4 -

25
 Evoluia plastidelor n perioada maturrii pericarpului are loc prin modificri
ultrastructurale la 3 nivele: lamelar, stromal i al incluziunilor de diferit natur chimic.
Sistemul lamelar fotosintetic se reduce covritor, respectiv, diminueaz fotosinteza n schimbul
progresiei funciei de depozitare, exprimat prin dublarea volumului amilaceu i triplarea celui
lipidic. Astfel se formeaz deponenta substanelor imobilzate, o tendin fireasc a fructelor
suculente, care ilustreaz principiul autonomizrii n dezvoltarea organelor (Scripcinski).
Volumul incluziunilor fenolice se reduce uor i se schimb topografia: din spaiile
intratilacoidale ale plastidelor n fructele imature, trec n stroma plastidelor fructelor mature (fig.
6.1). Fluctuaia modificrilor plastidiene decurge prin dezvoltarea polifuncionalitii, care
confirm principiul extinderii funciilor (Plate). Polifuncionalitatra plastidelor este exprimat
prin depozitarea materiilor de diferit natur chimic (53,0%) i rezult n plastide de tranziie
(amilocloroplaste, amilocromoplaste, amilotaninoplaste, clorotaninoplaste). Unele plastide de
tranziie evolueaz n categorii calitative noi (taninoplaste, amiloplaste, cromoplaste) i confirm
principiul substituiei funciei (Dorn).
% %
25

Pericarpul imatur 40
(60 zile de la
20 nflorire) Pericarpul imatur
35
(60 zile de la
Pericarpul matur nflorire)
30 Pericarpul matur
15
25

20
10

15

5 10

0
0
I. II. I. II.

Fig. 6.1. Volumule pariale ale incluziunilor Fig. 6.2. Volumele pariale ale incluziunilor
fenolice n plastide: I intratilacoidale; II fenolice n vacuom: I pe tonoplast; II n
stromatice. lumenul vacuolar.
Odat cu dezvoltarea fructelor are loc progresia vacuolizrii i fragmentrii vacuolei
centrale, formrii sistemelor multivacuolare i se atest schimbarea funciei de turgor n cea de
depozitare a CF. Vacuolele ca colector de baz a CF au volumul maxim al incluziunilor fenolice
pe tonolast n fructele imature, iar n cele mature, n lumenul vacuolar (fig. 6.2). Sunt vizualizate
transformri graduale de dezorganizare, dezintegrare i destrucie ale organitelor i reorganizarea
n grupri poliveziculare, corpi mielinici i paramurali, care ilustreaz principiul integritii
fragmentare n organizarea celular (Matienco). Dezvoltarea celulelor este nsoit de sporirea
volumului deponentei fenolice n fructele mature, ce exprim tendina de formare a fondului
antioxidant, specific fructelor de aronie [13, 14], cu maximul n vacuom i preavalarea valorilor
n zona mural (formaiuni membranice, plasmalem, perete celular), comparativ cu fructele
imature (fig. 6.3).

26
 % 70
Pericarpul imatur
60
(60 zile de la
50 nflorire)
40 Pericarpul matur
30
20

10
0

ic

r
e

at

la
tid

uo
m

lu
as

ac
as

ce
Pl

V
pl

te
do

re
en

Pe
ul
ic
et
R

Fig. 6.3. Volumele pariale ale incluziunilor fenolice n diferite compartimente celulare ale
fructelor imature i mature de A. melanocarpa (Michx.) Elliot.
Transformrile ultrastructurale n carpoontogenez se succed gradual n organite,
implicate, selectiv, cu diferit amplitud i ritm, care determin heterogenitatea celulelor n
pericarpul matur o expresie a proceselor structual-metabolice gerontologice.
6.2. Ultrastructura celulelor carpomaselor pigmentate in vitro
Carpomasele nonembriogenice reprezint celule mai sincronizate din punct de vedere
structural-funcional, dect cele embriogenice, dar se atest i structuri cu ritm diferit de
dezvoltare, fapt menionat i n alte lucrri [7, 21, 31, 32, 37]. Studiul ultrastructural, mbinat cu
analiza morfometric [8, 11, 12, 25] a carpocelulelor in vitro arat, c dei este eviden existena
unui plan comun de organizare, totui sunt anumite specificri structurale, care exprim
sensibilitatea celulelor in vitro fa de balana hormonal a MN. Organizarea ultrastructural a
plastidomului este un indicator n dezvluirea proceselor metabolice i fiziologice ale
carpomaselor pigmentate [11, 22, 26]. Plastidomul este heterogen i datele morfometrice arat
evoluia modificrilor ultrastructurale n corelaie cu pigmentaia carpomasei. Volumul maxim al
granelor revine carpomasei verde, minim, crem-roz i crem-alb, pe cnd volumul incluziunilor,
invers, minim n carpomasa verde i maxim n crem-roz i crem-alb. Reticulul periferic
dezvoltat n cloroplastele carpomasei verde, denot traficul intens al asimilatelor n exterior, n
zonele de necesitate i nu permite acumularea surplusului n strom. Interes prezint distribuirea
incluziunilor de diferit natur chimic: amilacee i lipidice - maximul n carpomasele crem-roz
i crem-alb; fenolice - n violacee; iar proteice - valori echivalente n toate carpomasele, cu
excepia celei verde, exprimnd o reacie specific a regimului nutriional i una general fa de
condiiile in vitro, deoarece nu se atest n celulele in vivo. Un indicator citologic reprezint
succesiunea categoriilor de plastide n carpomasele pigmentate: de la cloroplaste n carpomasa
verde, prin intermediul formelor de tranziie (cloroamiloplaste, clorotaninoplaste,
cromoproteoplaste n violacee i crem-roz) i amiloplaste, proteoplaste, cromoplaste n

27
carpomasa crem-alb, ce atest transformarea unui tip calitativ, n altul. Prezint interes
granulele de amidon: numrul redus, de form ovat n carpomasa verde; numr moderat i ovate
n carpomasa violacee i sunt numeroase, polimorfe n carpomasele crem-roz i crem-alb.
Pentru toate carpomasele volumul maxim al amidonului este la sfritul fazei staionare, ce
exprim tendina fireasc a celulelor mature, dobandit pe parcursul evoluiei, de a forma rezerve
nutriionale conform principiului autonomizrii (Scripcinski). Granulele amilacee se formeaz pe
centru amilogen prin depuneri succesive de straturi, ce rezult n granule mari, ovate n
carpomasa verde i violacee. Granulele mici amilacee, aranjate mozaicat, marginal sau distal n
plastidele carpomaselor crem-alb i crem-roz, ilustreaz o alt cale de formare, prin
defragmentarea celor mari, etap premrgtoare depolimerizrii, determinat de necesitile
celulare. MN, srcit n rezerva nutriional i granele reduse, n plastidele acestor carpomase, nu
satisfac necesitile nutritive i celulele consum amidonul deponat.
Se observ, sporadic, elemente de dezorganizare, dezintegrare i destrucie la nivelul
plastidelor, n funcie de pigmentaia carpomasei: n verde, se observ doar dezorganizarea,
asociat cu umflarea stromei i paralel meninerea sistemului tilacoidal integru; n violacee,
dezorganizarea i dezintegrarea este exprimat prin dilatarea tilacoidelor i pierderea integritii.
n carpomasa crem-roz i, mai frecvent, n cea crem-alb se atest i destrucia, remarcat prin
pierderea integritii plastidei. Procesele structural-destructive ale diferitor organite celulare i
reorganizarea lor n corpi mielinici i agregate multiveziculare, determinate de progresia
proceselor i extinderii ariilor litice duc la rarefierea i reducerea citoplasmei, concomitent cu
creterea excesiv a vacuolelor, ce ilustreaz prevalarea proceselor catabolice n celulele
carpomaselor crem-alb i crem-roz. Vacuolizarea este diferit n funcie de pigmentaia
carpomasei: o vacuol mare, n celulele carpomasei verde i un sistem multivacuolar n cele ale
carpomaselor crem-alb, crem-roz i violacee. Numrul de vacuole este un indicator al
rezistenei, deoarece celulele cu multe vacuole, dar mici, greu deshidrateaz i mai leger se
adapteaz la condiiile nefavorabile. Succesiunea gradual ale etapelor deteriorrii are loc cu ritm
diferit n carpomasele pigmentate: crem-alb>crem-roz>verde>violacee, provocnd senescena.
Un criteriu gradual informativ reprezint incluziunile fenolice, care difer cantitativ (n
descretere) carpomasa violacee>crem-roz>crem-alb>verde i prin expresia morfologic: n
carpomasa violacee incluziunile sunt polimorfe, de la o fie ngust la una groas, nentrerupt
pe membrane, de la contur sferic la neregulat n lumenul vacuolei, de la o fie pe formaiuni
membranice la conglomerate aforme n agregatele multivacuolare; apoi polimorfismul se reduce
n carpomasele crem-roz, crem-alb i este slab pronunat n cea verde) i aria de distribuire
variaz (fig. 6.4). Carpomasa violacee reprezint o biomas specializat n acumularea fondului
fenolic, confirmat biochimic [13, 15, 16]. Valoarea maxim a volumului CF din zona mural

28
revine carpomaselor (n descretere): crem-alb>violacee>crem-roz>verde. Volumul maxim al
incluziunilor fenolice n carpomasa verde revine plastidelor i reticulului endoplasmatic.

% 70

60
Carpomas
violace e
Carpomas cre m-
50
roz
Carpomas cre m-
aa alb
40 Carpomas ve rde

30

20

10

0
I. II. III. IV. V. VI.

Fig. 6.4. Volumul parial al incluziunilor fenolice n compartimentele celulare ale carpomaselor
pigmentate: I plastide; II reticul endoplasmatic; III vacuom; IV formaiuni membranice;
V plasmalem; VI perete celular.

Vezicularea citoplasmei de diferit genez (plasmalem, tonoplast, RE, dictiozomi sau

alte organite) n vecintatea organitelor denot existena unui transport accelerat, care asigur
procesele metabolice celulare intense n carpomasele violacee, crem-roz i crem-alb. Migrarea
veziculelor este direcionat de elementele citoscheletului pe 2 vectori: 1) n interiorul celulei,
unde se pot intercala n continuitatea membranelor organitelor i ultima verig o reprezint
vacuomul centrul atractiv i colector al diferitor metabolii; 2) mural-apoplastic cu expulzarea
diferitor compui chimici, inclusiv a CF din protoplast.
Balana nutriional a MN favorizeaz specializarea morfo-funcional a carpomaselor:
verde (2,0-2,5 mg/l, 2,4-D), una asimilatoare, datorit prezenei cloroplastelor; violacee (2,5-3,5
mg/l, ANA) cu funcia de depozitare a materiilor fenolice; crem-roz (4,0-5,0 mg/l, ANA) i
crem-alb (1,0-20 mg/l, ANA), depoziteaz substanele de rezerv n amiloplaste,
cloroamiloplaste, cromoproteoplaste.
Celulele fructelor in vivo i carpomaselor in vitro au plan comun de organizare
ultrastructural, iar maturarea are loc prin mecansime ale transformrii ultrastructurale similare,
care n celulele in vitro deruleaz cu amplitud i ritm mai mare, dect n cele in vivo. Modificri
ultrastructurale asemntoare au fost descrise n celulele fructelor suculente la aciunea
gradientului complexului ecologic al terenurilor versante i al reliefului geografic [36, 39], n
perioada de post-maturare [39], ce denot c celulele reacioneaz la aciunea factorilor externi i
celor de carpomaturare i post-maturare analoag, prin mecanisme ultrastructurale similare, dar cu
unele specificri relevante.

29
6.3. Ultrastructura celulelor fructului i carpomaselor pigmentate in vitro i principiile
evolutive
Culturile tisulare in vitro reprezint sisteme biologice noi, adaptate la anumite condiii de
via, prin intermediul diferitor modificri structural-funcionale i stuctural-biochimice. Analiza
celulelor in vivo i in vitro la aronie prin prisma principiilor evolutive, permite elucidarea rolului
modificrilor structural-funcionale n asigurarea progresului biologic, care corespund anumitor
principii evolutive la nivel ultrastructural [38]. Principiul intensificrii funciilor (Severov) se
manifest n celulele in vitro i in vivo prin: sporirea contactelor organitelor, bazat pe
dezvoltarea lor atipic, cu invaginri, sinuri i protuberane. Principiul substituiei funciei
(Dorn) n dezvoltarea celulelor in vivo i in vitro este exprimat prin: diminuarea funciei de
fotosintez a cloroplastelor i sporirea celei de depozitare; transformarea cloroplastelor n
amiloplaste i proteoplaste; evoluia vacuolelor cu funcia de turgor n cele de depozitare a CF;
reticulul endoplasmatic cu rol de transport i contact se transform n cel de depozitare.
Formarea amilocloroplastelor i taninocloroplastelor are loc printr-un mecanism universal
de adaptare celular in vivo i in vitro, cnd funciile secundare, de sintez i acumulare a
diferitor compui, sunt prezente, paralel cu funcia principal de fotosintez i ilustreaz
principiul extinderii funciilor (Plate). Principiul compartimentrii organelor (Severov) este
exprimat prin fragmentarea vacuolei centrale n mai multe compartimente vacuolare i formarea
sistemelor multivacuolare n celulele in vitro i in vivo. Principiul compensaiei funciilor i
ritmul diferit al modificrior (Voronov) se manifest n celulele in vitro i in vivo prin plastide,
care dezvolt un diapazon larg de restructurri intraplastidiale i mitocondrii cu transformri
structurale mai rezervate, formnd acela sistem funcional, aceste organite n anumite condiii se
compenseaz. Principiul integritii fragmentare n organizarea celular (Matienco) este ilustrat
prin pierderea integritii unor organite i formarea structurilor concentrice, graie nsuirilor
membranelor de reorganizare structural. Principul autonomizrii (Scripcinski) se refer la
acumularea materiilor de rezerv n organitele celulelor in vivo i in vitro ca deponent
imobilizat, formarea sistemului tilacoidal ca suport al nutriiei autotrofe, care asigur autonomia
relativ a celulelor. Acestea ilustreaz continuitatea activitilor metabolice, bazate pe specificul
autoreglrii i autonomizrii relative ale celulelor fructelor.
Analiza comparat a ultrastructurii celulelor in vitro i in vivo prin prisma principiilor
evolutive [38] permite dezvluirea mai profund a mecanismelor de adaptare, precum i
determinarea nivelului de modificri tipice i elementare, care conduc, n final, la adaptri
idiogene i prezint interes pentru determinarea gradientului transformrilor ultrastructurale ale
celulelor in vivo i prognozarea modificrilor ultrastructurale n celulele in vitro. Transformrile
structural-funcionale n celulele in vitro i in vivo la A. melanocarpa (Michx.) Elliot corespund

30
anumitor principii evolutive la nivel de organizare ultrastructural i demonstreaz existena
paralelismului n modificrile elementare de organizare.
7. ASPECTE CITO-, HISTOCHIMICE, ULTRASTRUCTURALE, BIOCHIMICE I
ACTIVITATEA BIOLOGIC A COMPUILOR FENOLICI N CARPOMASELE I
FRUCTELE DE ARONIA MELANOCARPA (MICHX.) ELLIOT
7.1. Studiul histochimic i biochimic al compuilor fenolici n ontomorfogeneza fructului
CF sunt metabolii secundari, larg rspndii n lumea vegetal i constituie categoria de
compui naturali cu rol deosebit n activitatea metabolic a celulei. CF se sintetizeaz i se
acumuleaz n diferii histogeni n carpoontomorfogenez [17], iar dinamica acumulrii diferitor
grupe de CF poart un caracter specific individual, cu maximul de acumulare n fructele mature,
excepie constituie compuii fenilpropanici (fig. 7.1). CF au rol deosebit n reaciile sistemice de
adaptare ale plantelor la aciunea factorilor stresani i agenilor patogeni; ei constituie baza unui
mecanism complex i sistemic de protecie a organismelor vegetale, care deruleaz n
ontomorfogenez. Compuii fenilpropanici se sintetizeaz la primele etape ontomorfogenetice,
fiind o reacie de protecie a fructelor juvenile, apoi prin biotransformare particip la formarea
unei game largi de derivai fenolici, ce conduce la diminuarea coninutului lor n
carpoontomorfogenez, dar, paralel, sporete coninutul de flavonoide, antociani i taninuri [17].
Dinamica
Dinamica acumulrii
acumulrii compuilor
acizilor fenilpropanici Dinamica acumulrii flavonoidelor
%
0,4 fenilpropanici % Dinamica acumulrii flavonoidelor
0,35 0,6
0,3 0,5
0,25
0,4
0,2
0,15 0,3
0,1 0,2
0,05 0,1
0
0
20 zile 40 zile 60 zile 80 zile fructe 20 zile 40 zile 60 zile 80 zile fructe
mature mature

mg/100 g %
Dinamica acumulrii
Dinamica acumulrii taninurilor
taninurilor
900
Dinamica
Dinamica acumulrii
acumulrii antocianilor
antocianilor 9
8
800
7
700
6
600
5
500
400
4
300 3
200 2
100 1
0 0

20 zile 40 zile 60 zile 80 zile fructe 20 zile 40 zile 60 zile 80 zile fructe
mature mature

Fig. 7.1. Dinamica acumulrii compuilor fenolici n ontomorfogeneza fructelor de aronie.

Flavonoidele, inclusiv antocianii, se acumuleaz intens la etapele tardive, inducnd

pigmentaia pericarpului matur. Caracterul cumulativ al CF, cu maximul n fructele mature,
sporete rezistena i supraveuirea n condiii de secet i atac patogenic, asigur calitile
gustative i aspectul atractiv prin coloritul viu al pericarpului, constituie o condiie biologic
pentru diseminarea i asigurarea perpeturii speciei [26]. Historeaciile specifice denot c
31
biosinteza i distribuirea CF n carpoontogenez coreleaz cu histogenul pericarpului (tabelul
7.1).
Tabelul 7.1. Efectele historeaciilor pe seciunile pericarpului n ontomorfogeneza fructelor de
A. melanocarpa (Michx.) Elliot
Efectele historeaciilor pe etapele ontomorfogenetice

identificai
Compuii
Reacia Expresia

mature
morfologic,

Fructe
aplicat

20 zile

30 zile

40 zile

50 zile

60 zile

80 zile
culoarea

Soluie de 1% Mas + ++ ++ +++ +++ +++ ++++

Taninuri
Fe2(SO4)3 n granulat, * * *
HCl 0,1H verde-brun.

Soluie 1% de Taninuri
++ +++ +++ +++ +++ +++ +++++
clorur fieric Mas uor * * *
i alun de fier- granulat,
amoniu negru-verde.
Soluie de 5- + ++ ++ +++ +++ +++ +++
Taninuri

10% K2Cr2O7 Sediment * * *

verzui, brun.
granulat.
Acid ++ ++ ++ +++ + +++ ++++
Taninuri

tetraosmic Sediment * * *
negru.

Soluie de Culoare + ++ ++ ++++ ++++ ++++ ++++

Flavonoide

amoniac galben, la * * *
temperatur
r oie.
Soluie ++ +++ +++ ++++ ++++ ++++ ++++
Flavonoide

alcoolic de Sediment * * *
acetat de plumb galben-
oranj.
Reactivul
fenilpropanici

Arnow, HCl Soluie ++ +++ ++++ ++++ +++ ++ ++

Compui

0,5H, NaOH roie

1H

Legend: Efectele historeaciilor: + redus; ++ moderat; ++ bun; ++++ foarte bun;

distribuire n toate zonele histologice ale pericarpului; distribuire n regiunea extern-
periferic (epicarp i hipoderm); * distribuire n regiunea extern-periferic (epicarp,
hipoderm i subzona extern a celulelor oval-rotungite).

n fructele juvenile (10 i 20 zile) CF sunt distribuii uniform n pericarp, alctuit din
celule cu pereii subiri, care necesit mecanisme suplimentare de protecie la aciunea factorilor
externi. Epistructurile protectoare (cuticula subire i periorii) nu satisfac necesitile de aprare
i se includ mecanismele interne, exprimate prin biosinteza CF, care contribuie la protecia
celulelor mezocarpului suculent. La etapele urmtoare (30 i 40 zile) efectele historeaciilor se
intensific n regiunea periferic a pericarpului. Capacitatea de protecie a complexului
32
epistructurilor scade la aceste etape (densitatea periorilor se reduce, ceara nc nu e format) i
CF, localizai la periferia fructului, completeaz aportul protector al epistructurilor, constituind o
barier de rezisten la aciunea factorilor mediului. Flavonoidele periferice i exudarea lor n
exterior permite o interpretare individual a rolului lor, constituind un cordon barieric protector,
dar i un inductor pentru stabilirea contactului organului cu mediul, fapt demonstrat, n cazul
polurii excesive i a sporirii infeciei patogene [29]. La etapele de 50 i 60 zile de la nflorire
reperul localizrii CF rmne regiunea periferic a pericarpului, dar arealul lor se extinde n
subzona extern a celulelor oval-rotungite; efectele reaciilor diminueaz din interior spre
periferie. La etapa de 60 zile, potenialul fenolic periferic al pericarpului se completeaz cu o
grup nou de CF, antocianii, metabolii secundari cu efecte antiradiante, contribuind la
fortificarea capacitii de protecie a fructului suculent.
La etapa de 80 zile a carpoontogenezei, efectele historeaciilor pentru toi CF identificai
sunt similare etapei anterioare, doar c arealul se extinde n mezocarp. Culoarea violet-purpurie a
antocianilor este mai intens, dar localizarea rmne periferic. n fructele mature CF sunt
localizai n toate zonele histologice ale pericarpului, dar efectele historeaciilor sunt foarte bune
n regiunea periferic i bune n restul pericarpului. Excepie prezint compuii fenilpropanici, cu
efecte moderate i sporadic reduse. Se observ diminuarea lent a intensitii culorii antocianilor
spre regiunea median a pericarpului, ca rezultat a vacuolizrii excesive a celulelor, a subierii
pereilor celulari i sporirii dimensiunilor celulelor subzonei oval-alungite radiar, n raport cu
celulele subzonelor oval-rotungite extern i intern i a hipodermei.
Maturarea fructelor are loc n a 2-a jumtate a lunii august, cu canicule estivale de durat,
stresante pentru fructele de A.melanocarpa (Michx.) Elliot, ele necesitnd atmosfer umed, ca
factor decisiv n dezvoltarea normal. Pericarpul, alctuit din celule mari, vacuolizate, cu perei
subiri, necesit protecie pentru a rezista i a supraveui. De aceea pe lng mecanismele de
adaptare a epistructurilor (formaiunile cerifere, ngroarea cuticulei i trecerea calitativ de la
tipul extern la cel extern-intern) [10] i a endostructurilor (celule mici, compact mpachetate, cu
pereii celulari uor ngroai, distribuirea compact a sclereidelor) se includ cele structural-
metabolice, care rezult n formarea fondului fenolic, toate funcionnd sinergic [17].
7.2. Aspecte citochimice i ultrastructurale ale biosintezei, localizrii, translocrii i
acumulrii compuilor fenolici
Studiul ultrastructural al incluziunilor CF n sistemele comparative in vivo i in vitro a
pus n eviden particularitile ultrastrucurale ale dinamicii biosintezei, distribuirii i acumulrii
lor. Ultrastructural, acumulrile fenolice apar ca incluziuni electrondense la reacia cu tetraoxid
de osmiu. Lipidele posed afinitate fa de acest reactiv i pentru evitarea dubiilor n privina
naturii chimice, s-a aplicat reacii cu soluii de aluni de fier i de acetat de plumb, prin

33
excluderea tetraoxidului de osmiu, iar analizele au artat c incluziunile fenolice au acela contur
morfologic. Deoarece CF sunt hidrofili, exist pericolul deteriorrii imaginii reale n cursul
pregtirii pentru ultramicroscopie, iar pentru identificarea sigur i impiedicarea redistribuirii CF
s-a aplicat reacia cu soluie de cafein. Ultrastructural, acumulrile fenolice au un spectru larg al
expresiei morfologice n compartimentele celulei [11]. n celulele imature in vivo i in vitro, ele
se observ pe membranele plastidelor, retucululuiRE, dictiozomilor, vacuolelor. Sporadic, n
cantiti reduse, se observ pe plasmalem, iar pe peretele celular lipsesc [11, 12]. La maturarea
celulelor topografia incluziunilor CF se schimb: le vizualizm n stroma plastidelor, n
veziculele detaate de la reticulul endoplasmatic i dictiozomi, n vacuom foarte heteromorfe, n
agregatele multiveziculare, pe peretele celular i n spaiile intercelulare (tabelul. 7.2).
Volumul maxim al CF n spaiile intratilacoidale ale plastidelor din celulele imature in
vivo i in vitro, denot c, iniial, n biosintez se implic membranele sistemului tilacoidal al
plastidelor. Mult timp prioritate n biosinteza CF se ddea plastidelor, confirmat n studiile
ulterioare [20, 31, 35, 36, 39]. Biosinteza i metabolismul fenolic, frecvent, sunt asociate cu
membranele biologice [26]. Depozitele CF pe membranele plastidelor, canalelor, veziculelor RE
i golgiene, agregatelor multiveziculare, pe tonoplast, plasmalem corealeaz cu locul de
biosintez a compuilor fenilpropanici [26] prezeni n carpomase i n fructul de aronie [13].

Tabelul 7.2. Volumul parial al acumulrilor fenolice n compartimentele celulare ale

carpomaselor i fructelor de A. melanocarpa (Michx.) Elliot
Volumul parial (%) al CF n compartimentele celulare
Plastide Vacuom
Specimenul

Perete celular
endoplasmatic

membranice
analizat

Plasmalem

Formaiuni
Intratilacoidal

Incluziuni

Tonoplast
n strom

vacuolar
Lumenul
Reticul
Total

Total

Fructul
41,11,9

40,12,3

imatur
23,91,1 16,21,1 13,21,9 23,11,6 17,00,9 3,10,4 0,90,1 1,60,1

Fructul
matur
68,12,5

4,90,2
5,80,3

1,90,2 3,90,1 28,12,1 40,01,3 4,00,1 5,10,3 12,12,1

Explant
51,33,3

(5 zile)
4,80,4

1,80,2 3,00,1 3,10,1 24,91,3 26,40,9 21,42,2 18,31,4 3,10,2

Calus
40,11,7

37,42,1

(15 zile)
24,21,5 15,91,4 14,92,1 20,41,1 17,00,2 4,10,6 2,30,1 2,10,1

Calus
51,53,3

(30 zile)
6,10,4

1,80,2 4,30,2 6,21,1 19,50,9 32,02,1 15,31,1 13,92,2 9,12,1

34
 Graie proprietilor antioxidante ale CF [14], localizarea lor pe membrane constituie un
avantaj, protejnd fosfolipidele de peroxidarea lipidic sub aciunea radicalilor liberi i asigurnd
integritatea membranelor ca o condiie vital pentru activitatea metabolic normal a celulei.
Iniial, biosinteza fenolic ncepe pe membranele tilacoidelor plastidelor, apoi succesiv se
implic membranele canalelor RE, dictiozomilor, mitocondriilor i vacuolelor. Implicarea
mitocondriilor, complexului Golgi, RE n biosinteza fenolic au fost abordat n diferite lucrri
tiinifice [20, 22, 29, 31, 36]. Studiul ultrastructural, bazat pe citoreacii, confirm implicarea
membranelor biologice n biosinteza fenolic, ele fiind asociate cu enzimele-cheie ale biosintezei
i reprezint reperul de baz a formrii potenialului fenolic [26].
Prezena veziculelor cu coninut electrondens, detaate de la diferite organite celulare,
presupune implicarea lor n biosintez, ns rolul lor major este de translocare fenolic la locul
depozitrii prin migrare, dirijat de elementele citoscheletului. Surplusul CF se poate depozita
sau evacua din organitele de biosintez i este translocat de vezicule spre colectorul de baz,
vacuomul; el reprezentnd centru de atragere fenolic i determin vectorul vacuolar, care se
intensific odat cu maturarea celulelor att n celulele in vivo [20, 36], ct i in vitro [22, 31].
Acumularea CF n vacuole este o caracteristic a celulei vegetale i ei reprezint, nu doar
reziduri, dar influeneaz activitatea diferitor enzime i au rol protector.
La maturarea celulelor in vivo i in vitro, se observ prevalarea acumulrilor CF pe
plasmalem, peretele celular i n spaiile intercelulare o alt tendin a vectorului de
translocare fenolic, numit mural-apoplastic [11, 22], cu rol de evacuare extracelular a CF,
confirmat la carpocultura de V.vinifera [31]. Localizarea apoplastic a CF este o caracteristic i
a celulelor seminale, n perioada de laten [29]. Formarea barierei fenolice mural-apoplastice n
celulele explantului, inoculat n condiii in vitro, reprezint o reacie de protecie la condiiile noi,
iar n celulele mature ale fructelor in vivo, o bariera fenolic ce sporete rezistena pericarpului.
Studiul citochimic i ultrastructural al CF n carpoontogeneza in vivo i in vitro la
A.melanocarpa (Michx.) Elliot a permis elaborarea schemei verosimile de biosintez, translocare
i acumulare fenolic (fig. 7.2), bazat pe includerea individual, selectiv i succesiv a
organitelor celulare, implicate n metabolismul fenolic.
n translocarea fenolic intra- i extracelular a celulelor, sunt impicate diferite
formaiuni membranice citoplasmatice, inclusiv veziculele dinamice, de diferit genez, care
sunt din abunden att n celulele in vitro, ct i in vivo [13, 31], fapt descris i n celulele
seminale [29]. Dei mult timp vezicularea, corpii paramurali i mielinici au fost descrise ca
artefacte, ele reprezint formaiuni structurale cu rol biologic, fiind implicate i n translocare
[11]. Indiferent de genez, veziculelor li se atribuie rolul determinant n transportul precursorilor,

35
 Plastide
(tilacoidele granale, stroma)

Vectorul mural-apoplastic
Reticul endoplasmatic
(canalele i veziculele
I.{ detaate)
Mitocondrii
(criste, stroma)
Complexul Golgi
(veziculele golgiene)

Vacuole
(tonoplast, lumenul vacuolar )

II.{ Plasmalem

Peretele celular pectocelulozic

III.{ Spaiul intercelular

Fig. 7.2. Schema verosimil a organitelor celulare implicate n biosinteza i translocarea

fenolic: I. Zona central-citoplasmatic; II. Zona mural; III. Zona apoplastic
vectorul vacuolar; vectorul mural-apoplastic.

enzimelor i substanelor elaborate. Veziculele sunt direcionate de proteinele-motore, angrenate

n microtubuli i microfilamente [25, 29, 31]. Este important vectorul fluxului de micare a
veziculelor n interiorul celulei cu rol de conexiune interorganelar, care denot prezena unei
translocri metabolice. Vectorul fluxului veziculelor spre sistemul vacuolar contrubuie la lrgirea
vacuomului i explic fenomenul de vacuolizare cu acumularea maxim a CF. Vectorul fluxului
mural-apoplastic se realizeaz, la fel, prin vezicule de diferit genez, care, ajungnd la
plasmalem, expulzeaz coninutul cu precursori celulozici n afara protoplastului i contribuie la
formarea peretelui, iar ele se intercaleaz n continuitatea plasmalemei. n cazul veziculelor cu

36
coninut fenolic, are loc evacuarea din protoplast, intercalarea n peretele celular sau penetrarea
n exteriorul lui i formarea unui cordon fenolic apoplastic de protecie.
Tendina vectorizrii mural-apoplastice sporete n ontogeneza celulei i reprezint
interes n aspectul aplicativ biotehnologic. Este cunoscut c evacuarea n exteriorul celulei a
substanelor sintetizate de protoplast ntlnete barierele membranice, depirea crora creaz
mari dificulti la izolare. Vezicularea abundent i direcionarea mural-apoplastic a fluxului
vezicular n celulele carpocalusale mature constituie fenomenul, ce faciliteaz evacuarea mai
uoar i mai eficace a substanelor elaborate, inclusiv a celor fenolice i reprezint un reper
structural-metabolic pentru elaborarea mecanismelor de izolare reuit i eficace, cu puine
pierderi i eforturi, ale metaboliilor secundari utili din celule.
7.3. Coninutul polifenolic i activitatea biologic a extractelor fructelor in vivo i
carpomaselor in vitro de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot
Activitatea antioxidant a extractelor din carpomasele in vitro i fructele de aronie.
Activitatea antioxidant a polifenolilor din carpomasele pigmentate i fructele de A.
melanocarpa (Michx.) Elliot a fost determinat n baza capacitii de captare a radicalilor liberi,
exprimat prin echivalentul acidului galic n M, n raport cu rezidiu uscat al extractelor
analizate n grame (MGAE/g), iar activitatea antiradicalic determinat n %. Capacitatea de
captare a radicalilor liberi a extractelor analizate este ntr-o corelaie direct cu coninutul
totalului polifenolic (fig.7.3) i se amplific odata cu creterea coninutului polifenolic,
coeficientul de corelare Pearson fiind de 0,8944 [14, 16].
450 Activitatea
400 Capacitatea de captare a radicalilor liberi antiradicalic %
450
350
MGAE/g

400
300 350 Capacitatea de
300 captarea a
250 250 radicalilor n
200 y = 742,96x - 104,19 200 MGAE/g RU
2 150
150 R = 0,8944 100
100 50
0
0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8
oz
te

de
e
ce
uc

-r

er
la

m
Fr

V
io

Continutul substantelor fenolice, mg/ml

re
V

Carpomase pigmentate
C

Fig. 7.3. Depenedena capacitii de captare Fig. 7.4. Capacitatea de captare a radicalilor i
a radicalilor liberi i totalul polifenolic. activitataea antiradicalic n fructele i
carpomasele pigmentate de aronie.
Comparnd capacitatea de captare a radicalilor i activitatea antiradicalic a probelor
analizate, constatm c ele prevaleaz n carpomasa violacee, fa de carpomasele crem-roz i
crem-alb, care au valori aproape egale i de 2 ori mai mult dect n cea verde cedeaz i fructe
(fig. 7.4). Toate carpomasele pigmentate se caracterizeaz prin capacitate de captare a radicalilor
liberi i pot servi n calitate de surs potenial de produs vegetal cu proprieti antioxidante.
Carpomasele pigmentate de culoare violacee, crem-roz i crem-alb reprezint o surs

37
mbogit cu coninut polifenolic i activitate antioxidant superioar fructelor de A.
melanocarpa (Michx.) Elliot, crescute prin tehnologii agrotehnice tradiionale.
Activitatea antimicrobian a extractelor din carpomasele in vitro i fructele de
aronie. n ultimul timp, tot mai frecvent, se ntlnesc tulpini ale microorganismelor cu rezisten
sporit la aciunea antibioticilor. Un obiectiv al farmaciei contemporane este elaborarea noilor
remedii antimicrobiene de origine vegetal, eficiente mpotriva patogenilor viruleni. Pentru
studiul activitii antimicrobiene a carpomaselor pigmentate in vitro i fructelor de aronie s-au
utilizat culturi de referin de Staphylococcus aureus (tulpina 209-P), Enterococcus faecalis,
Escherichia coli (t.ATCC 25822), Pseudomonas aeruginosa (t.ATCC 27853), Proteus vulgaris
(t.MX 19222) i alcool etilic de 20% (tabelul 7.3). Activitatea bactericid a extractului etanolic
fa de S.aureus (t.209-P), P.aeruginosa (t.ATCC 27853) E. coli (t.ATCC 25822) din carpomasa
violacee este mai mare de 2 ori, n raport cu extractul din fructe. Extractul carpomasei violacee
manifest sensibilitate i fa de P. vulgaris (t.MX 19222), n diluie de 1:4, pe cnd la fructele
de aronie, sensibilitatea lipseste. Extractele etanolice din carpomasele crem-alb i verde au
manifestat activitate antimicrobian aproape similar, cu mici excepii, dar puin mai redus
dect carpomasele violacee i crem-roz. Activitatea antimicrobian a probelor analizate
coreleaz cu coninutul polifenolic [3, 19].

Tabelul 7.3. Activitatea antimicrobian a extractelor carpomaselor pigmentate i fructelor de

A. melanocarpa (Michx.) Elliot.
Culturile de referin
Extractele

analizate
etanolice

(t.ATCC
20%

S. aureus E. faecalis P.aeruginosa P. vulgaris

(t. 209-P) E. coli 25822) (t.ATCC 7853) (t.MX 19222)

CMI CMB CMI CMB CMI CMB CMI CMB CMI CMB
Fructe 1:2 1:2 1:2 1:1 1:2 1:1 1:4 1:2 - -
violacee 1:4 1:4 1:2 1:2 1:2 1:2 1:4 1:4 1:4 1:4
Carpomase

crem-roz 1:4 1:4 1:2 1:2 1:2 1:2 1:2 1:2 1:2 1:2
crem-alb 1:2 1:2 1:2 1:1 1:2 1:1 1:2 1:2 1:2 1:2
verde 1:2 1:2 1:1 1:1 1:1 1:1 1:2 1:2 1:2 1:2
Alcool etilic 20% 1:1 1:1 1:1 1:1 1:2 1:1 1:2 1:1 1:1 1:1
Legend: CMI concentraia minim de inhibiie; CMB concentraia minim bactericid.
Este evident, c doar carpomasele pigmentate se caracterizeaz prin sensibilitate fa de
P. vulgaris (t.MX 19222), un patogen cu rezisten nalt: carpomasa violacee cu sensibiltate mai
pronunat (n diluie 1:4), iar cele crem-roz, crem-alb i verde, mai redus (n diluie de 1:2)
(tabelul 7.3). Aciunea bacteriostatic i bactericid a carpomaselor pigmentate fa de P.
vulgaris (t.MX 19222) se datoreaz coninutului sporit al unor CF fa de fructe, a prezenei
acidului p-cumaric, a CF neidentificai cu timpii de retenie 20,5 i 24,1 min prin metoda CLIP-
SM [15] i a multiplelor spoturi fenolice neidentificate cu diferite valori al Rf pe CSS [13].

38
 CONCLUZII GENERALE I RECOMANDRI
Concluzii generale
1. -au elaborat strategiile biotehnologice de iniiere i acumulare a biomasei frutiere in vitro din
pericarpul suculent al fructului de A. melanocarpa (Michx.) Elliot, bazate pe criterii biologice
(natura histogenic a explantului, poziia explantului n raport cu mediul nutritiv, vrsta fructului
donator de explant), chimice (tipul, doza i combinaiile hormonilor auxinici i citokininici, sursa
de carbon) i fizice (regimul de lumin i temperatur), care determin direcia non-
embriogenic de dezvoltare a carpoculturilor tisulare in vitro.
2. Capacitatea de inducere a carpocalusogenezei i a acumulrii carpomaselor in vitro este
taxonospecific, determinat de particularitile structurale specifice histogenului n calitate de
carpoexplant (gradul integritii celulare, nivelul rezervei trofice imobilizate, gradul de
vacuolizare, natura chimic i grosimea pereilor celulari, specializarea biosintetic-metabolic) n
corelaie cu optimizarea balanei hormonale adiionate mediului nutriv de cultivare in vitro, a
regimului de lumin i temperatur. Doze de 2,0-2,5 mg/l de 2,4-D n combinaie cu 0,5 mg/l K
stimuleaz inducerea carpocalusului asimilator, iar dozele de 3,5 i 4,0 mg/l de ANA cu 0,5 mg/l
K, celui antocianifer.
3. Investigaiile ultrastructurale comparate ale celulelor n perioada carpocalusogenezei in vitro
i pe parcursul maturrii fructului in vivo de A. melanocarpa (Michx.) Elliot denot prezena
unui plan similar de organizare ultrastructural, dar cu un complex de specificri relevante,
exprimate prin amplitud, ritm i rat de desfurare a transformrilor ultrastructurale; mai
accelerate i mai accentuate fiind n celulele carpomaselor in vitro, comparativ cu celulele
fructului, constituind un indicator al expresiei adaptabilitii, vitalitii i specializrii structural-
metabolice.
4. Transformrile ultrastructurale i metabolice ale carpocelulelor de aronie n cele 2 biosisteme
in vivo i in vitro corespund anumitor principii evolutive la nivel ultrastructural: intensificrii,
substituiei, diversificrii, compartimentalitii, compensaiei funciilor i ritmul diferit al
modificrilor; autonomizrii n dezvoltare; integritii fragmentare n organizarea celular, care
demonstreaz existena paralelismului n modificrile elementare de organizare celular.
5. Rezultatele investigaiilor proprii i a datelor din literatura de specialitate asupra aspectelor
structurale, ultrastructurale i biochimice ale CF, relevate din analizele dislocrii spaiale a CF n
compartimentele celulare i histogenii pericarpului n corelaie cu specificul dinamicii acumulrii
n carpoontomorfogenez i carpoecogenez, comparativ cu dislocarea spaial a CF la nivel
structural i ultrastructural n celulele carpomaselor in vitro, ne-am permis s elaborm schema
verosimil de biosintez, translocare i depozitare a CF, bazat pe implicarea individual,
selectiv i succesiv a diferitor organite membranice:

39
a) biosinteza CF se realizeaz la nivelul membranelor organitelor n urmtoarea consecutivitate:
plastidele, canalele i veziculele reticulului endoplasmatic, mitocondriile; membranele i
veziculele golgiene, vacuomul, corpii paramurali, plasmalema;
b) acumularea excesului de CF sub form de incluziuni electrondense n spaiile intratilacoidale
i stroma plastidelor, n lumenul canalelor i veziculelor reticulului endoplasmatic, veziculele
golgiene, pe tonoplast i n lumenul vacuolar, n peretele celular i n spaiile intercelulare;
c) translocarea fenolic se realizeaz prin intermediul veziculelor de diferit genez,
direcionate de elementele citoscheletului celulei pe 2 vectori: unul spre vacuom ca un
colector de baz i altul mural-apoplastic, cu rol de expulzare i depozitare extracelular.
6. Investigaiile complexe citochimice, ultrastrucurale, biochimice calitative i cantitative au
stabilit c celulele carpomaselor pigmentate in vitro pstreaz potena de biosintez a CF,
caracteristic celulelor fructelor de A.melanocarpa (Michx.) Ellior in vivo, dar condiiile de
cultur in vitro favorizeaz biosinteza unor CF nespecifici fructelor in vivo (acidul p-cumaric i
compui neidentificai, cu timpii de retenie 20,5 i 24,1 min, prin CLIP-SM i multiple spoturi
neidentificate prin CSS). Balana hormonal acioneaz selectiv asupra expresiei potenei
biosintetice i reprezint factorul-vector n acumularea carpomasei mbogit cu CF.
7. Balana hormonal, suplimentat MN, are aciune selectiv asupra capacitii proliferative ale
explantului i acumulrii carpomaselor cu indici calitativi valoroi, inducnd specializarea
structural-funcional a carpomaselor pigmentate: carpomasa verde, obinut pe MN cu 2,0-2,5
mg/l 2,4-D, ca asimilatoare prin prezena cloroplastelor; carpomasa violacee, specializat n
depozitarea materiilor fenolice, iar carpomasele crem-roz i crem-alb n acumularea materiilor
de rezerv de natur amilacee, proteic, lipidic, fenolic n heteroplaste.
8. Carpocalusurile reprezint biomase celulare cu tendina de stratificare, ca rezultat al
specializrii morfo-funcionale: stratul extern, alctuit din celule, mpachetate compact, cu pereii
celulari ngroai cu funcia de protecie; stratul median, format din celule parenchimatice cu
funcia depozitare a materiilor de rezerv; zonele periferice centre proliferative; stratul intern
cu funciile de ancorare n MN i de absorbie a substanelor nutritive.
9. Zonalitatea histoanatomic a pericarpului fructului matur de A. melanocarpa (Michx.) Elliot
exprimat prin: epicarp, mezocarp, difereniat n 4 subzone (hipoderm, subzona extern a
celulelor oval-rotungite, subzona celulelor radiar-alungite, subzona intern a celulelor oval-
rotungite) i endocarp confirm principiul identitii histoanatomice a carpotipului pommum.
Zonele i subzonele histologice ale pericarpului au particulariti structurale i biochimice, care
determin reacia morfogenic specific in vitro.
10. Transformrile selective i succesive ale structurilor citoanatomice n ontomorfogeneza
fructului au caracter adaptiv, bazat pe mecanismul compensator al flexibilitii epistructurilor

40
(gradul de pubescen, grosimea i tipul cuticulei, tipul i distribuirea formaiunilor cerifere) i
endostructurilor (grosimea hipodermei, prezena i modul de distribuire a druzelor de oxalat de
calciu, a sclereidelor, a granulelor de amidon i incluziunilor fenolice).
11. Transformrile graduale citoanatomice i biochimice ale pericarpului suculent de aronie
coreleaz cu etapele carpoontomorfogenezei, topografia histogenilor pericarpului suculent i cu
gradientul ecologo-geograrfic al reliefului R. Moldova, exprimnd tendina de xeromorfozare la
acutizarea factorilor climatici de la Nord spre Sud.
12. Activitatea antioxidant a fructelor in vivo i carpomaselor in vitro la A. melanocarpa
(Michx.) Elliot coreleaz cu coninutul polifenolic. Extractele carpomaselor pigmentate violacee,
crem-roz i crem-alb posed activitate antioxidant superioar fructelor.
13. Activitatea antimicrobian a fructelor in vivo i carpomaselor in vitro la aronie coreleaz cu
coninutul cantitativ i calitativ polifenolic, iar sensibilitatea mai mare fa de patogeni i
spectrul bactericid i bacteriostatic mai larg al carpomaselor in vitro este facilitat de coninutul
sporit i de biosinteza unor constituien fenolici, nespecifici fructelor.
14. Studiile biochimice ale carpomaselor au evideniat prezena diferitor grupe de CF de interes
farmaceutic, n cantiti, ce justific realizarea culturilor in vitro ca alternativ real la
tehnologiile tradiionale. Criteriile ultrastructural-biochimice elucidate constituie un suport
argumentat pentru elaborarea strategiilor biotehnologice in vitro de producere profitabil a
carpomasei garantate, mbogit cu compui naturali, n condiii controlate, cu factori fizici i
chimici manipulabili.
Recomandri
Optimizarea proceselor structural-biosintetice din biosistemul experimental in vitro poate
fi realizat prin utilizarea rezultatelor obinute la carpocultura de A. melanocarpa (Michx.)
Elliot: indicii structurali i biochimici ai histogenului carpogen pentru inducerea i acumularea
carpomaselor in vitro; regimul hormonal nutriional optim, pentru suplimentarea MN, n vederea
inducerii i acumulrii carpomasei [1]; factorii-vectori i dirijabili (regimul de lumin i
nutriional) n acumularea celei, bogate n CF de interes alimentar, farmaceutic i tinctorial [2].
Carpomasele pigmentate violacee, crem-roz, crem-alb obinute in vitro, caracterizate
prin activitate antioxidant superioar fructelor in vivo pot servi ca surs alternativ antioxidant,
i ca remediu antimicrobian cu aciune bactericid fa de P. vulgaris (t.MX 1922), caracterizat
prin rezisten sporit i similar fructelor de A. melanocarpa Elliot, fa de S. aureus (t.209-P),
P.aeruginosa (t.ATCC 27853); bacteriostatic, fa de E. faecalis, E.coli (t. ATCC 25822) [3].
Schema biotehnologic de obinere a carpomasei pigmentate violacee, bogat n compui
fenolici valoroi la A. melanocarpa (Michx.) Elliot se recomand ca model pentru elaborarea
strategiilor biotehnologice de producere a biomaselor ca materie prim de alternativ la

41
tehnologiile tradiionale de interes farmaceutic, alimentar, tinctorial. Rezultatele investigaiilor
celulelor carpomaselor in vitro i fructelor in vivo, carpocultura la A. melanocarpa (Michx.)
Elliot pot fi introduse n programele i planurile de studii ale facultilor de biologie, tehnologie
alimentar, tehnologie farmaceutic i cosmetic.
BIBLIOGRAFIE
1. Brevet de invenie. 3763MD, A01H 4/00; C12N 5/04. Procedeu de obinere in vitro a
biomasei de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. /Calalb T., Jacot A., Bujoreanu
N., Chirilova E. (MD). Cererea depus 27.06. 2008, BOPI nr. 12/2008.
2. Brevet de invenie. 46MD, A01H 4/00; C12N 5/04; A01N 27/00. Procedeu de obinere in
vitro a biomasei de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. /Calalb T., Jacot A.,
Bujoreanu N., Chirilova E., Bejan N. (MD). Cererea depus 03.03.2009, BOPI nr. 7/ 2009.
3. Brevet de invenie. 83MD, A61K 36/28; A01H 4/00; C12N 5/04; A01N 27/00; A61P 31/04.
Biomasa de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot, obinut in vitro pentru utilizare
n calitate de produs cu proprieti antimicrobiene. /Calalb T., Jacot A., Bujoreanu N.,
Chirilova E., Bejan N. (MD). Cererea depus 26.03.2009, BOPI nr. 9/2009.
4. Calalb T. Inducerea carpocalusului n culturi in vitro la Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot.
n: Fiziologia i biochimia plantelor la nceput de mileniu: realizri i pespective. Mater.
Congr. II. Chiinu, 2002, p. 217-220.
5. Calalb T. Iniierea calusului n culturi in vitro i carpocalusogeneza la Aronia melanocarpa
(Michx.) Elliot. n: Rezumatele lucrrilor tiinifice la XII-lea congres Naional de Farmacie.
Bucureti, 2002, vol. 1, p. 223-225.
6. Calalb T. Obinerea produsului vegetal prin microtehnica biotehnologiilor moderne. n:
Mater. Conf. Ziua medicamentului. Chiinu, 2003, p. 36-44.
7. Calalb T. Polimorfismul carpocalusului de A.melanocarpa Elliot. n: Revista medico-
chirurgical a Societii de medici i naturaliti. Iai, 2003, vol. 107, nr. 2, p. 102-105.
8. Calalb T. Unii indicii citobiochimici ai carpocalusului de A. melanocarpa (Michx.) Elliot. n:
Analele tiinifice ale USMF Nicolae Testemianu. Vol. I. Chiinu, 2003, p. 261-265.
9. Calalb T. Biotehnologiile moderne i plantele medicinale. n: Analele tiinifice ale USMF
Nicolae Testemianu. vol. I. 2004, p. 318-325.
10. Calalb T. Structuri anatomice ale fructelor de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. suport
potential in asigurarea calitatii. n: Analele tiinifice ale USMF Nicolae Testemianu.
Vol. I. Chiinu, 2005, p.480 - 483.
11. Calalb T. Investigaii ultrastructurale comparative ale biomasei frutiere in vitro i a fructului
in vivo de Aronia melanocarpa (Michx.) Ellliot. In: Buletinul Academiei de tiine a
Moldovei. tiinele vieii. 2008, nr. 2 (305), p. 54-62.

42
12. Calalb T. Aspecte ultrastructurale i biochimice ale potenialului fenoilic din carpomasele
calusale de aronie. In: Mater. Conf. Naion. cu participare internaional Probleme actuale
ale geneticii, fiziologiei i ameliorrii plantelor. Chiinu, 2008, p. 286-290.
13. Calalb T. Potenialul fenolic comparativ al maselor calusale i fructelor de aronie Aronia
melanocarpa Michx. (Elliot). In: Revista farmaceutic. 2008, nr. 1-4, p. 23-28.
14. Calalb T. Proprietile antioxidante comparative ale fructelor de aronie Aronia melanocarpa
(Michx.) Elliot. i carpomaselor obinute in vitro. n: Analele USMF, 2009, p. 338 392.
15. Calalb T. Studiul comparativ al polifenolilor din fructele de Aronia melanocarpa (Michx.)
Elliot. in vivo i in vitro prin metoda CLIP-MS. n: Buletinul Academiei de tiine a
Moldovei. tiinele vieii, 2009, nr.2 (308), p. 31 - 39.
16. Calalb T. Carpomasele generate in vitro, real alternativ la fructele de A.melanocarpa
(Michx.) Elliot in vivo. n: Sntate public, economie i management n medicin, 2009, nr.
2 (29), p. 38-42.
17. Calalb T. Studiul histochimic i biochimic al coninutului fenolic n ontomorfogeneza
fructului Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. n: Buletinul A a Moldovei. tiine medicale.
2010, 1 (24), p. 56-63.
18. Calalb T., Bodrug M. Botanica farmaceutic. Chiinu: CEP Medicina, 2009. 498 p.
19. Calalb T., Priscaru V., Jacot A. Studiul comparativ al coninutului fenolic i a activitii
antimicrobiene ale extractelor fructelor in vivo i biomaselor frutiere pigmentate in vitro de
Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. In: Buletinul Academiei de tiine a Moldovei. tiinele
vieii, 2009, nr. 1 (307), p. 49-55.
20. Codreanu V. Anatomia comparat a viei de vie (Vitis L).Chiinu: Combinatul Poligrafic,
2006. 252 p.
21. Zubcov I., icanu G., Zagorneanu E. Analiza comparativ morfo-funcional a sistemului
carpoexplant-carpocalus in vivo i in vitro la tomate (L. esculentum Mill.). n: Buletinul
Academiei de tiine a Moldovei. Stiinele vieii, 2007, nr.1 (301), p. 41-46.
22. Calalb T. Utrastructural aspects of synthesis, transport and deposition of phenolic substances
in the fruit callus. In: Proceedings of the 14th International Congress on Electron Microscopy.
Cancun (Mexico), 1998, vol. IV, p. 61-62.
23. Calalb T. A. melanocarpa Elliot tissue culture in vitro. In: Proceedings of the 8th National
Symposium Medicinal plants present and perspectives, Piatra Neam, 2003, p. 40-43.
24. Calalb T. Carpocalli masses of black chokeberry Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot
source of natural anthocyanins. In: . . . . . .
. , 2008, . 248-251.

43
25. Calalb T. The dynamic of structure modifications and phenolic acumulation in carpoculture
of Aronia melanocarpa Elliot in vitro. In: Archives of the Balkan Medical Union The
XXXth Balcan Medical Week, 2008, vol. 43, nr. 3, p. 326-328.
26. Dixon R., Paiva N. Stress-induced phenylpropanoid metabolism. In: Plant Cell, 1995, nr. 7,
p. 243-255.
27. Hkkinen S., Heinonen M., Krenlampi S., et al. Content of the flavonols quercetin,
myricetin, and kaempferol in 25 edible berries. In: Jornal of Agriculture Food Chemistry.,
1999, vol. 47, p. 2274-2279.
28. Jakobek L., Seruga M., Medvidovic-Kosanovic M., et al. Antioxidant Activity and
Polyphenols of Aronia in comparision to other berry species. In: Agriculture Conspects
Scientificus, 2007, vol. 72, nr. 4, p. 301-306.
29. Kuras M., Stefanowska-Wronka M., Lynch J., et al. Cytochemical Localization of Phenolic
Compounds in Columella Cells of the Root Cap in Seeds of B.napus. Changes in the
Localization of Phenolic Compounds during Germination. In: Annals of Botany, 1999, vol.
84, p. 135-143.
30. Lila M. Valuable Secondary Products from In vitro Culture. In: Food technol., 2008, vol. 21,
nr. 1, p. 8.
31. Matienco B., Brezeanu A., Maximova E., et al. Carpoculture in vitro. Non-morphogenic
pathway. Chishinu: tiina, 2004. 130 p.
32. Mello O., Melo M., Appezzatoda-Glyria B. Histological analysis of the callogenesis and
organogenesis from root segments of Curcuma zedoaria Roscoe. In: Braz. Arch. Biol.
Technol., 2001, vol. 44, nr. 2, p. 116-125.
33. Rohrer J., Kenneth R., Phipps R., et al. Variation in Structure among fruits of Maloideae
(Rosaceae). In: American Journal of Botany, 1991, vol. 78, nr. 12, p. 1617-1635.
34. Valcheva-Kuzmanova S., Belcheva A. Current knowledge of Aronia melanocarpa as a
medicinal plant. In: Folia Med. (Plovdiv), 2006, vol. 48, nr. 2, p. 11-17.
35. Zagorneanu E., Zubcov I. The ultrastructure of plastids of tomato fruits in vitro in Electron
Microscopy. n: Biol. Sci. Research. Inter. Cong. (Mexico), YI, 1998, vol. 14, p. 233-234.
36. ., ., .
. : , 1972. 50 .
37. ., . :
- . : . . . -, 2004, 2, . 12-14.
38. ., ., ., ., ., .
. : , 1988, 237 .

44
39. ., ., ., ., ., . .
. : , 1995, 152 .
LISTA LUCRRILOR TIINIFICE PUBLICATE LA TEMA TEZEI
I. Monografii:
1. ., ., ., ., ., .,
., ., ., ., ., .,
., . .
: , 1988. 238 .
2. ., ., .
. : , 1992. 50 .
3. ., ., ., ., ., .,
., ., ., ., .
. : , 1995. 152 .
4. Calalb T. Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot (structura, biochimia i biotehnologia
fructelor). Chiinu: dPrim, 2010, 156 p.
II. Articole n reviste de circulaie internaional:
5. ., ., .
. B:
, 1989, nr 5, . 36-39.
6. Calalb T. Polimorfismul carpocalusului de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. n: Revista
medico-chirurgical a Societii de medici i naturaliti, Iai. 2003, vol. 107, nr 2,
supliment I, p. 102 105.
7. Calalb T. Particularitile morfo-anatomice ale plantei de anghinarie Cynara scolymus L. In:
Romanian Biological Sciences, Piatra-Neamt, 2007, vol. V, nr 1-2, p. 21-22.
8. Calalb T. The dynamic of structure modifications and phenolic acumulation in carpoculture
of Aronia melanocarpa Elliot in vitro. n: Archives of the Balkan Medical Union, 2008, vol.
43, nr 3, p.326-328.
III. Articole n reviste naionale recenzate:
9. ., ., .
. B: ,
. 1988, nr 1, . 16-19.
10. ., .
. B: ,
.. , nr 6, . 25-32.

45
11. ., ., .

. B: , ,
1991, nr 4, . 27-35.
12. Calalb T. Medicinal plants and some problematic aspects in the Republic of Moldova. n:
Revista farmaceutica. 2006, nr 1-4, p. 36-42.
13. Chiru T., Nistreanu A., Calalb T. Studiul compuilor fenilpropanici din specia Centaurea
cyanus L. n: Medicina Tradiional i Sanocreatologia, 2008, vol. 13, p. 42-45.
14. Calalb T. Investigaii ultrastructurale comparative ale biomasei frutiere in vitro i a fructului
in vivo de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. n: Buletinul A a Moldovei. tiinele vieii.
2008, 4 (302), p. 54-62.
15. Calalb T. Carpomasele generate in vitro o real concuren pentru fructele de Aronia
melanocarpa (Michx.) Elliot in vivo. n: Sntate Public, Economie i Management n
Medicin. 2009, 4 (31), p. 38-44.
16. Calalb T., Priscaru V., Jacot A. Studiul comparativ al coninutului fenolic i a activitii
antimicrobiene ale extractelor fructelor in vivo i biomaselor frutiere pigmentate in vitro de
Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. n: Buletinul A a Moldovei. tiinele vieii. 2009, 1
(307), p. 49-55.
17. Calalb T. Studiul comparativ al polifenolilor din fructele de Aronia melanocarpa (Michx.)
Elliot in vivo i in vitro prin metoda CLIP-MS. n: Buletinul A a Moldovei. tiinele vieii.
2009, 2 (308), p. 31-39.
18. Calalb T. Studiul histochimic i biochimic al coninutului fenolic n ontomorfogeneza
fructului Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. n: Buletinul A a Moldovei. tiine medicale.
2010, 1 (24), p. 56-63.
IV. Articole n culegeri naionale recenzate:
19. Calalb T. Unii indicii citobiochimici ai carpocalusului de Aronia melanocarpa (Michx.)
Elliot. n: Analele tiinifice ale USMF Nicolae Testemianu. Probleme medico-biologice,
farmaceutice, de sntate public i management. 2003, vol.1, p. 261-265.
20. Calalb T. Biotehnologiile moderne i plantele medicinale. n: Analele tiinifice ale USMF
Nicolae Testemianu. Probleme medico-biologice, farmaceutice, de sntate public i
management. 2004, vol.1, p. 318-325.
21. Calalb T. Structuri anatomice ale fructelor de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot suport
potential n asigurarea calitii. n: Analele tiinifice ale USMF Nicolae Testemianu.
Probleme medico-biologice si farmaceutice. 2005, vol.1, p. 480-483.

46
22. Calalb T., Bejan N. Studiul macro- i microscopic al fructelor de gutui japonez
Chaenomeles japonica Lindl. n: Analele tiinifice ale USMF Nicolae Testemianu.
Probleme medico-biologice i farmaceutice. 2006, vol.1, p. 287-291.
23. Calalb T., Dolghier S. Unele aspecte ale utilizrii plantelor medicinale n zona rural a
Moldovei. n: Analele tiinifice ale USMF Nicolae Testemianu. Probleme medico-
biologice i farmaceutice. 2007, vol. 2, p. 265-269.
24. Calalb T. Potenialul fenolic comparativ al maselor calusale i fructelor de aronie Aronia
melanocarpa Michx. (Elliot). n: Revista farmaceutic. 2008, nr. 1-2, p. 35-39.
25. Calalb T., Dolghier S. Culturile celulare i tisulare in vitro surse de substane biologic
active. n: Analele tiinifice, USMF Nicolae Testemianu. Probleme medico-biologice i
farmaceutice. 2008, vol. 2, p. 336-338.
26. Calalb T. Proprietile antioxidante comparative ale fructelor de aronie Aronia melanocarpa
Michx. (Elliot) i carpomaselor obinute in vitro. n: Analele tiinifice, USMF Nicolae
Testemianu. Probleme medico-biologice i farmaceutice. 2009, vol. 1, p. 388-392.
V. Articole n culegeri internaionale:
27. Calalb T. Utrastructural aspects of synthesis, transport and deposition of phenolic substances
in the fruit callus. In: Proceedings of the 14th International Congress on Electron Microscopy,
Cancun (Mexico), vol. IV, 1998, p. 61-62.
28. Calalb T. Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot
.B:M I M C
. . . , 2002, . 415-417.
29. Calalb T. Iniierea calusului n culturi in vitro i carpocalusogeneza la Aronia melanocarpa
(Michx.) Elliot. n: Rezumatele lucrrilor tiinifice al XII Congres Naional de Farmacie,
Bucureti, 2002, vol.I, p. 223-225.
30. Calalb T. Aronia melanocarpa Elliot tissue culture in vitro. In: Proceedings of the 8th
Nation. Sympos. Medicinal plants present and perspectives, Piatra Neam,2003, p. 40-43.
31. . in vitro . B:
III , 1,
. . , , 2004, .534-535.
32. Calalb T., Gisca A. Medicinal plants and folk medicine in the Republic of Moldova. B:
IV M , .
. , , 2005, c. 791-794
33. Calalb T. Carpocalli masses of black chokeberry Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot
source of natural anthocyanins. B:

47

, , 2008, . 248-251.
VI. Articole n culegeri naionale:
34. Calalb T. Inducerea carpocalusului n culturi in vitro la Aronia melanocarpa. n: Mater.
Conf. Anual ULIM Symposia Professorum, Seria Medicin. Chiinu, 2002, p. 378-382.
35. Calalb T. Inducerea carpocalusului n culturi in vitro la Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot.
Fiziologia i biochimia plantelor la nceput de mileniu: realizri i pespective. n: Mater.
Cong. II, Chiinu, 2002, p. 217-220.
36. Calalb T. Obinerea produsului vegetal prin microtehnica biotehnologiilor moderne. n:
Mater. Conf. Ziua medicamentului, Institut Naional de Farmacie, Chiinu, 2003, p.36-44.
37. Calalb T. Aspecte ultrastructurale i biochimice ale potenialului fenoilic din carpomasele
calusale de aronie. n: Mater. Conf. Naion. cu participare internaional Probleme actuale
ale geneticii, fiziologiei i ameliorrii plantelor, Chiinu, 2008, p. 286-290.
VII. Rezumate ale comunicrilor tiinifice la conferine i simpozioane tiinifice:
38. . . B: M. VI
, , 1988, . 84.
39. ., ., .
. B: M. VI
a, , 1988, . 57.
40. . -
. B: M.
, , 1989, . 52-53.
41. ., .
. B: M. .
. , , 1989, . 207-208.
42. ., . -
. B. . K , , 1990, . 60.
43. Calalb T. Heterogenitatea morfo-funcional a mitocondriilor fructelor de mr, cultivate pe
pant. n: Rezumatele Conf. a V de Microscopie electronic, Probleme curente n
microscopia electronic, Chiinu, 1994, p. 22.
44. Calalb T. Modificrile ultrstructurale ale pericarpiului fructelor de mr n dependen de
condiiile microclimaterice. n: Rezumate Cong. I Problemele fiziologiei i biochimiei
plantelor, Chiinu, 1994, p. 23-24.
45. Calalb T. Heterogenitatea citomorfofuncional a carpocalusului la Aronia melanocarpa
Elliot. n: Mater. Conf. a VI Republican de Microscopie Electronic, Chiinu, 1998, p. 25.

48
46. Calalb T. Consideraii ultrastructurale privind localizarea, translocarea i depozitarea
fenolilor n dinamica carpocalusogenezei. n: Mater. Conf. a VI Republican de Microscopie
Electronic, Chiinu, 1998, p. 24.
47. Calalb T. Utrastructural aspects of phenolic substance translocations in the fruit callus cells.
In: Proceeding of the Xth Cong.of Federal Europ. Soc.of Pl. Physiol., Varne, 1998, p. 91-92.
48. Calalb T. Aspecte ultrastructurale ale compuilor fenolici n carpocultura Aronia
melanocarpa (Michx.) Elliot. n: Mater. Conf. tiinifico-didactic Anuala ULIM,
Chiinu, 1998, p. 194-195.
49. Calalb T. Analiza citomorfologic a carpocalusului mbogit cu substane active din plante
medicinale. n: Mater. Conferina tiinifico-didactic Anual ULIM, Chiinu, 1999, p. 74.
50. Calalb T. Principiile active fenolice n carpocalusul Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. n:
Mater. Conferina tiinifico-didactic Anual ULIM Symposia Professorum, Seria
Medicin, Chiinu, 2000, p.141-142.
51. Calalb T. Obinerea produsului vegetal ecologic pur mbogit cu PA prin culturi de esuturi
in vitro. n: Mater. Conf. Corpului didactico-tiinific a USM, Chiinu, 2003, p.86-87.
VIII. Brevete de invenie:
52. Brevet de invenie MD3763. Procedeu de obinere in vitro a biomasei de fructe de Aronia
melanocarpa (Michx.) Elliot / Calalb T., Jacot A., Bujoreanu N., Chirilova E. (MD), data
de depozit 06.27.2008.
53. Brevet de invenie 46MD. Biomasa frutier in vitro de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot
cu proprieti antimicrobiene / Calalb T., Jacot A., Bujoreanu N., Chirilova E., Bejan N.
(MD), data de depozit 03.03.2009, BOPI nr 7/ 2009.
54. Brevet de invenie 83MD. Procedeu de obinere in vitro a biomasei de fructe de Aronia
melanocarpa (Michx.) Elliot / Calalb T., Jacot A., Bujoreanu N., Chirilova E., Bejan N.
(MD), data de depozit 26.03.2009, BOPI nr 9/2009.
IX. Alte publicaii:
55. ., .
. : . 1991, . 33, nr 5, . 103.
56. . . B:
. 1992, nr 5, . 74.
57. Calalb T. Metode microscopice i biotehnologice privind compuii fenolici n cultura in
vitro a unor plante medicinale. n: Analele tiinifice ULIM, Medicina, Chiinu, 1999, p.6-8.
58. Calalb T., Bodrug M. Botanica farmaceutic. Chiinu: CEP Medicina, 2009. 498 p.
59. Calalb T. Indicaii metodice pentru lucrri de laborator i lucrul independent la botanica
farmaceutic. Centrul Editorial-Poligrafic Medicina, Chiinu, 2005, p.250.

49
 ADNOTARE
Calalb Tatiana, Structura i compoziia biochimic a fructelor de Aronia melanocarpa
(Michx.) Elliot in vivo i in vitro, teza de doctor habilitat n biologie, Chiinu, 2010.
Structura tezei: Introducere, 7 capitole, concluzii generale i recomandri, bibliografie din 388
titluri, 8 anexe,199 pagini text de baz, 30 tabele, 102 figuri. Rezultatele obinute sunt publicate
n 57 lucrri tiinifice. Cuvinte-chee: Aronia melanocarpa, anatomie, ultrastructur, fruct,
biochimie, carpomas, compui fenolici, in vitro, in vivo. Domeniu de studiu: Botanica.
Scopul lucrrii: Elucidarea criteriilor de inducere i acumulare a biomaselor in vitro din fructele
de A. melanocarpa (Michx.) Elliot i evaluarea structural, ultrastructural i biochimic a
carpomaselor in vitro, comparativ cu fructele in vivo. Obiectivele: studiul histoanatomic n eco-
i carpogeneza fructelor; optimizarea condiiilor de inducere i acumulare a carpomaselor;
elucidarea factorilor-vectori n stimularea biosintezei compuilor fenolici n carpomase;
cercetarea comparat a structurii i ultrastructurii carpomaselor in vitro i a fructelor in vivo;
studiul coninutului fenolic n corelaie cu activitatea antioxidant i antimicrobian a
carpomaselor in vitro i a fructelor de A. melanocarpa (Michx.) Elliot. Noutatea tiinific i
originalitatea lucrrii: Pentru prima dat a fost obinut carpomasa in vitro din pericarpul
suculent al fructului de A.melanocarpa (Michx.) Elliot i realizat evaluarea comparat
morfologic, anatomic, ultrastructural, biochimic; determinat activitatea antioxidant i
antimicrobian a carpomaselor in vitro i fructelor in vivo. Semnificaia teoretic: Rezultatele
studiului citomorfologic i biochimic comparativ al carpomaselor in vitro i fructelor in vivo de
A. melanocarpa (Michx.) Elliot se nscriu n concepia carpoecogenezei i confirm principiile
evolutive ale transformrilor structurale. Valoarea aplicativ: S-a stabilit condiiile de iniiere i
acumulare a carpomaselor in vitro i s-au determinat factorii-vectori de obinere a carpomaselor,
bogate n compui fenolici. S-a stabilit corelaia activitii antioxidante i antimicrobiene cu
coninutul fenolic din carpomasele in vitro i fructele de aronie. Carpocultura in vitro la
A.melanocarpa (Michx.) Elliot poate servi ca model la elaborarea schemei biotehnologice de
producere dirijat a biomaselor ca surs de materie prim de alternativ. Implimentarea
rezultatelor tiinifice: Sunt incluse n: programul de studii la disciplina Botanica farmaceutic
pentru studeni i n ciclu de perfecionare a farmacitilor Utilizarea plantelor medicinale i a
fitopreparatelor autorizate n R.Moldova cu tematica Microtehnici de culturi in vitro la plante
medicinale, catedra Farmacognozie i Botanic farmaceutic, USMF Nicolae Testemianu;
manualul Botanic farmaceutic, Calalb .a.,2009; Indicaii metodice la lucrri de laborator
la Botanica farmaceutic Calalb, 2005; cursul universitar Morfologie i anatomie comparat
pentru masterat, catedra Biologie, Facultatea tiine ale naturii, UnAM.

50
 ANNOTATION
Calalb Tatiana, Structure and biochemical composition of Aronia melanocarpa (Michx.)
Elliot fruits in vivo and in vitro, a thesis of doctor habilitat in biology, Chisinau, 2010.
The thesis consists: of introduction, 7 chapters, general conclusions and recommendations, 199
pages, 30 tables, 102 figures, 8 attachments, 388 bibliography references. Results of the study
were published in 57 scientific works. Key words: Aronia melanocarpa, anatomy, ultrastructure,
fruit, biochemistry, carpomass, phenolic compounds, in vitro, in vivo. Domain of study: Botany
Aim of the study: Identification the indices for induction and accumulation of carpomass of
A.melanocarpa fruits, investigation of their structure, ultrastructure and biochemical composition
in comparison with their analogs, obtained in vivo. Tasks: hictoanatomical study in eco- and
carpogenesis; optimization of the conditions for carpomass induction and accumulation;
elucidation of vector-factors for stimulation of phenol biosynthesis in carpomass; comparative
study of structure and ultrastructure of carpomass in vitro and fruits in vivo; qualitative and
quantitative determination of phenols; carry out a correlation analysis between phenol content of
A.melanocarpa (Michx.) Elliot carpoextracts, obtained in vivo and in vitro and its antioxidant
and antibacterial activities. Scientific innovation and originality: For the first time was
obtained carpomass in vitro from succulent fruit of A.melanocarpa, which was evaluated with
morphological, celullar and biochemical methods, also were determinated its antioxidant and
antibacterial activities in comparison with fruits in vivo. Theoretic significance: Comparative
cytoanatomical and biochemical results of investigation of carpocallus cells in vitro and fruit of
A.melanocarpa reflect the carpogenesis and ecocarpogenesis conception and confirm principles
of the structure modifications in evolution. Application value: The conditions of carpomass
induction and accumulation in vitro were established and the vector-factors to obtain the
carpomass-rich in phenol compounds were determined. The correlation between antioxidant,
antibacterial activity against virulent microorganisms, and phenolic content of A.melanocarpa
was established. A. melanocarpa carpoculture in vitro may be the model of the biotechnological
scheme for manipulating produce of biomass as a source of alternative raw material.
Application of the scientific results: The results are applied in: the Program of pharmaceutical
education of the students of SUMP N.Testemitanu; manual Pharmaceutical Botany, Calalb
Bodrug, 2009; Indications for laboratory works of Pharmaceutical Botany, Calalb, 2005; the
Program of raising the level of ones skill of pharmacists of SUMP N.Testemitanu with the
course Medicinal plant cell and tissue culture in vitro; Universitary course Comaparative
mophology and anatomy for masterat, Biology chair, Nature science Faculty of University of
Academy of sciences of Moldova.

51

, Aronia melanocarpa
(Michx.) Elliot in vivo in vitro,
, , 2010.
: , 7 , , 388 . , 8
, 199 . , 30 , 102 a.
57 . : Aronia melanocarpa, ,
, , , , , in vitro, in vivo.
: . :
in vitro A.melanocarpa ,
in vivo. :
- ;
; -
; in vitro
in vivo; ,

. :
in vitro
(, , , ,
) . :
in vitro

. :
in vitro - ,
.
.


. : B
,
in vitro , USMF Nicolaie Testemianu;
, ., 2005;
Botanic farmaceutic, Calalb T., Bodrug M., 2009;
,
.

52
 CALALB TATIANA

STRUCTURA I COMPOZIIA BIOCHIMIC A FRUCTELOR

DE ARONIA MELANOCARPA (MICHX.) ELLIOT
IN VIVO I IN VITRO

03. 00. 05. BOTANICA

Autoreferatul tezei de doctor habilitat n biologie

Aprobat spre tipar: data Formatul hrtiei (60x84 1/16

Hrtie ofset. Tipar ofset. Tirajul 100 ex.
Coli de tipar: ... Comanda nr...
_____________________________________________________________________________
Tipografia Elena-V.I. S.R.L., MD2028, Chiinu, str. Academiei 3.

53