Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
OBIECTUL BIOFIZICII
Biofizica este ştiinţa care s-a dezvoltat la graniţa dintre fizică şi biologie în scopul cercetării şi
explicării însuşirilor fizice ale organismelor vii. Având ca obiect de studiu un domeniu interdisciplinar,
biofizica este o disciplină relativ nouă. Legătura dintre diferitele forme de mişcare ale materiei, ce derivă
din diversitatea formelor ei de existenţă, a făcut necesară apariţia uunor ştiinţe de graniţă, aşa cum este
biofizica sau biochimia. Metodele de cercetare proprii fizicii sau chimiei se aplică pentru studiul
sistemelor biologice. In lumea vie găsim o legătură foarte strânsă între fenomenele fizice şi chimice.
Viaţa însă nu poate fi redusă la aspectele fizico-chimice ale materiei vii, dar fără cunoaşterea acestor
aspecte nu este posibilă înţelegerea vieţii.
Termenul de biofizică a apărut la sfârşitul secolului al XIX-lea odată cu denumirile de biologie
fizico-chimică, biofizică chimică etc.
Cu toate dificultăţile de a cuprinde într-o definiţie suficient de cuprinzătoare obiectul unei ştiinţe,
dificultăţi care apar şi la ştiinţele tradiţionale, vom încerca să expunem câteva aspecte legate de definiţia
biofizicii. Profesorul Walter Beier în lucrarea “Introducere în biofizica teoretică” defineşte biofizica drept
o ştiinţă care se ocupă cu analiza fizică a structurilor funcţionale şi a comportării biologice. Pe de altă
parte profesorul ungur J. Ernst din Pecs, într-un volum intitulat “Introducere în biofizică” arată că
biofizica nu este o formă a fizicii aplicate ci o ştiinţă independentă, care lucrând cu metode fizice, tinde să
ridice biologia la nivelul ştiinţelor exacte.
Profesorul Vasile Vasilescu de la Universitatea de Medicină din Bucureşti subliniază că biofizica”
este ştiinţa care studiază fenomenele fizice din sistemele biologice, în lumina şi cu ajutorul teoriilor şi
tehnicilor fizice”.
Deci biofizica studiază fenomenele fizice care stau la baza funcţionării sistemelor biologice. De
aceea ea foloseşte tehnicile fizico-chimice precum şi aparatul matematic pentru cercetarea fenomenelor
fizice ale lumii vii.
Biofizica abordează următoarele probleme :
1) studiul fenomenelor fizice (mecanice, termice, electrice) prin care se realizează fenomenelor
biologice precum şi energetica proceselor vitale
2) cercetarea efectelor biologice ale factorilor fizici ambianţi cu scopul de a-i utiliza pe cei favorabili ca
factori terapeutici sau de a realiza prevenirea acţiunii lor nocive asupra organismului
3) folosirea tehnicilor fizice în abordarea problemelor biologice.
Biofizica utilizează, pentru explicarea fenomenelor biologice, multe capitole ale fizicii şi biologiei.
Astfel, de exemplu biomecanica se ocupă de aspectele mecanice începând de la locomoţia animală
până la proprietăţile moleculare ale fibrelor musculare.
Biotermodinamica se ocupă de generarea şi conversia energiei de către organism, de sistemele
termodinamice deschise. Fenomenele electrice au cea mai deplină aplicabilitate în studiul unor procese
biologice ce constituie punctul de plecare al unor investigaţii clinice. Procesele celulare îşi găsesc
explicaţia pe baza cunostinţelor de mecanică cuantică, fizica corpului solid şi mai ales fizica stării lichide,
starea lichidă ocupând un loc aparte în componenţa materiei vii.
Radiobiologia este capitolul din biofizică cae studiază interacţiunile dintre radiaţiile nucleare şi
organismele vii.
Legat de nivelul de organizare al sistemului biologic studiat, s-au dezvoltat diferite ramuri ale
biofizicii cum ar fi :
biofizica moleculară care studiază proprietăţile moleculelor, ale materiei vii,
biofizica celulară care se ocupă cu proprietăţile mecanice, electrice ale celulelor,
biofizica sistemelor complexe, etc .
După cum se observă, domeniul de cercetare al biofizicii este foarte vast, începând cu nivelul
atomic continuând apoi cu moleculele, celulele şi terminând cu omul.
Scurt istoric al dezvoltării biofizicii
Deşi are un caracter interdisciplinar, şi după cum am arătat, este relativ nouă, primele cercetări în
domeniul care astăzi îl cuprinde biofizica, au fost făcute de aproximativ două secole în urmă.
Originile biofizicii le putem considera studiile de biomecanică ale lui Leonardo da Vinci, pictor
genial dar, în acelaşi timp, inginer şi anatomist care a studiat zborului păsărilor şi funcţionarea muşchilor.
Un moment foarte important pentru dezvoltarea ştiinţelor în general îl constituie inventarea microscopului
de către Anthony Leeuvenhoeck, un modest funcţionar la primăria unui oraş olandez dar pasionat
constructor de lentile. Cercetările privind bioelectricitatea efectuate de Luigi Galvani asupra efectului
electricităţii statice a muşchiului de broască şi Alexandru Volta pot fi considerate însă ca început al
cercetărilor de biofizică .
In secolul al XIX-lea mari fiziologi ai lumii au efectuat cercetări de biofizică. Amintim cercetările
lui Hermann Helmholtz privind contracţia musculară si transmiterea influxului nervos şi care apoi a
dezvoltat teoria lui Thomas Young asupra vederii colorate şi asupra percepţiei sunetelor muzicale. A
conceput si dezvoltat instrumente de analiză a sunetelor şi aparate pentru oftalmologie. Un aport deosebit
îl are medicul german Robert Mayer în aprofundarea principiului I al termodinamicii privind conversia
energiei dintr-o formă în alta.
O contribuţie însemnată la dezvoltarea termodinamicii aduce şi inginerul francez Nicolas Sadi-
Carnot care pune bazele construcţiei primului motor termic. Incepând din ultimele două decenii ale
secolului al XIX-lea, dezvoltarea biofizicii ia o mare amploare ca apoi la începutul secolului al XX-lea să
se contureze ştiinţele cu caracter interdisciplinar aşa cum este biobizica.
Descoperirea radiaţiei X în 1895 de către Wilhelm Konrad Röntgen, a deschis calea celor mai
spectaculoase aplicaţii în biologie şi medicină, dintre care cea mai importantă este radiologia.
Secolul de abia încheiat este marcat de descoperirile lui Albert Einstein prin introducerea Teoriei
Relativităţii, explicarea fenomenului fotoelectric, etc.; de fapt aproape nu este domeniu în care acest
fizician să nu-şi fi adus aportul. Ideile sale inovatoare au deschis o nouă eră în cercetarea structurii
microscopice a corpurilor. Erwin Schrödinger pune bazele mecanicii cuantice care vor contribui la
dezvoltarea chimiei cuantice şi la o nouă abordare a cunoştinţelor privind structura materiei.
Descoperirea radioactivităţii naturale către Becquerel şi soţii Pierre şi Marie Curie şi apoi a celei
artificiale, cât şi obţinerea ulterioară a izotopilor radioactivi care se folosesc în cele mai variate domenii,
fac uneori ca biofizica să se confunde cu radiobiologia (care este ştiinţa legată de aplicaţiile acestor
izotopi radioactivi). Cea de a doua jumătate a secolului al XX-lea cuprinde remarcabile rezultate în
toate domeniile ştiinţifice, deci şi în biofizică.
Rezultatele cercetărilor de biofizica sunt numeroase şi dovada acestui fapt o reprezintă
numărul mare de premii Nobel acordate în cercetări cu caracter incontestabil de biofizica.
Domeniile de cercetare
După cum am arătat şi în scurtul istoric, radiobiologia este domeniul în care rezultatele ştiinţifice
adunate sunt impresionante şi în acelaşi timp domeniul este şi productiv. In prezent explorările funcţionale
folosesc frecvent terapia cu radioizotopi, iar pe de altă parte utilizarea acestora în mutaţii genetice poate
permite obţinerea unor mutanţi cu eficienţă economică mare.
Un alt domeniu al biofizicii în care se lucrează foarte mult este cel al fenomenelor electrice care
însoţesc activitatea celulelor şi a organelor excitabile ce permit aprofundarea cunoştinţelor despre funcţiile
acestora. Aceasta a iniţiat şi dezvoltat metode de investigaţii cum sunt electrocardiografia,
electroencefalografia, etc., fără de care în prezent în medicină nu se face nici o intervenţie chirurgicală.
Pornind de la rolul activ al membranelor biologice, studiul fenomenelor de membrană din sistemele
biologice a căpătat în ultimii ani o amploare deosebită, astfel că acestea şi-au găsit aplicaţii în cele mai
diverse domenii, pornind de la electrozii selectivi (membrane permeabile pentru anumiţi ioni ),
continuând cu rinichiul artificial (hemodializorul) şi până la instalaţii de desalinizare a apei de mare sau
de ultrafiltrare a rezidurilor industriale.
Pe lângă cele trei domenii mari prezentate mai sus în care biofizica a contribuit în mod esenţial,
există şi alte domenii conexe cum ar fi cel al cel al geneticii moleculare care are în prezent o dezvoltarea
spectaculoasă, al biopolimerilor, al biociberneticii etc.
Aceste cercetări însă necesită atât metodologie performantă cât şi un aparat matematic foarte
complex. Amintim aici că premiul Nobel în 1991 pentru medicină a fost acordat biofizicienilor germani
Neher şi Sakmann pentru tehnica “patch clamp” ce permite înregistrarea activităţii unui singur canal ionic
din membrana celulară (măsurători ale curenţilor ionici care sunt de ordinul picoamperilor!).
De asemenea subliniem că singurul român laureat al premiului Nobel, George Palade, este un
cercetător ce are ca obiect de studiu fenomene ce ţin de asemenea de biofizică.
BIOFIZICA MOLECULARA
Fluidele (gazele şi lichidele) reprezintă un mediu continuu, infinit divizibil, care îşi modifică forma
foarte mult sub acţiunea unei forţe mici Ele au coeziune moleculară mică datorită căruia curg şi iau forma
vasului. Inţelegerea unor procese complexe cum ar fi circulaţia sevei brute, circulaţia sangvină, respiraţia
etc., necesită cunoaşterea legilor fizice care guvernează procesele din fluide. De aceea vom prezenta în
continuare cîteva fenomene specifice fluidelor, fenomene ce explică funcţionarea organismelor vii (plante,
organismul uman şi animal).
Caracteristicile fluidelor
Fluidul se caracterizează prin anumiţi parametri ce descriu starea lui în orice moment : densitate ,
presiune p, viteza v, temperatura T, etc.
Densitatea unui fluid neomogen într-un punct este:
dm
=
dV
m fiind masa fluidului, V volumul său iar “d “denotă diferenţiala acestor mărimi. Densitatea variază de la
punct la punct, precum şi de la un moment la altul, deci = ( r , t ).
Densitatea variază foarte puţin la lichide şi foarte mult la gaze, în cazul variaţiei presiunii şi
temperaturii.
In legătură cu acţiunea forţelor exterioare de suprafaţă trebuie precizat că, spre deosebire de solid
unde nu există nici o restricţie asupra direcţiei în care acţionează forţa, în cazul fluidului, forţa trebuie să
fie normală la suprafaţă. De aceea în cazul fluidelor acţiunea forţelor exterioare este descrisă prin
presiune:
dF N
p ( )
dS m 2
Dacă un fluid nu-şi modifică densitatea când este supus acţiunii unor forţe, el se numeşte
incompresibil.
Se consideră, de obicei, că lichidele sunt incompresibile iar gazele, compresibile. Se poate considera
că şi gazele sunt incompresibile dacă viteza lor de mişcare este mică în comparaţie cu viteza sunetului.
Pentru caracterizarea fluidelor din acest punct de vedere se introduce numărul lui Mach:
M = v/vs
unde v = viteza de deplasare a fluidului
vS = viteza sunetului
Pentru M < 0,3 fluidul este incompresibil (în cazul aerului M=0,3 pentru v=100 m/s)
Fenomene de suprafaţă. Tensiunea superficială
Existenţa tensiunii supereficiale explică multe fenomene din lumea vie. Două picături mai mici,
când se ating tind să se contopească. Picătura mai mare va avea o suprafaţă totală mai mică, deci o energie
superficială mai mică. Forma sferică a celulelor libere este, de asemenea, condiţionată de tensiunea
superficială. Deci fenomenele superficiale arată evoluţia unui sistem spre starea de echilibru care este
starea caracterizată printr-un minim energetic.
Să considerăm un lichid aflat într-un vas. O moleculă aflată în interiorul lichidului este atrasă de
celelalte molecule aflate în vecitătate cu forţe egale ca mărime astfel încât rezultanta acestor forţe este
nulă (Fig.1).
F l
Coeficientul de proporţionalitate se numeşte coeficient de tensiune superficială şi în SI se măsoară în
N/m.
Coeficientul de tensiune superficială poate fi definit şi în funcţie de energia consumată pentru a
menţine neschimbată suprafaţa liberă a lichidului. Lucrul mecanic consumat în acest scop va fi, după
definiţie:
d L Fdl
Inlocuind se obţine:
d L ldl dS
Coeficientul de tensiune superficială reprezintă energia consumată pentru a mări cu o unitate
suprafaţa liberă a lichidului. In SI se măsoară în J/m 2.
Datorită tensiunii superficiale care tinde să micşoreze suprafaţa liberă a lichidului, acesta se
comportă ca o membrană elastică. Deoarece forma sferică este forma care, pentru un volum dat, are
suprafaţa minimă, din acest motiv picăturile de lichid sunt sferice. Forma celulelor libere şi a unor fiinţe
unicelulare este determinată de asemenea de tensiunea superficila, acestea căpătând forme ce corespund
unor suprafeţe minimale. Coeficientul de tensiune superficială este influenţat de o serie de factori:
temperatură, concentraţie de săruri etc.
Solviţii modifică tensiunea superficială a solventului. In cazul apei, solviţii minerali(acizi, baze, săruri
minerale) măresc uşor tensiunea superficială. Solviţii organici, însă, reduc tensiunea superficială.
Foarte importante sunt substanţele tensioactive care au proprietatea de a micşora tensiunea
superficială: alcooli, acizi organici, detergenţi.
Moleculele acestor substanţe au proprietatea de a micşora forţele de coeziune dintre moleculele
solventului.
Lichidele din organismele vii au, în majoritatea cazurilor, coeficienţi de tensiune superficială mai
mici decît ai apei.
Tensiunea superficială a serului sangvin este 67*10-3 N/m iar a urinei este 70*10-3N/m. In cazul
hepatitei sau în cazul unor leziuni hepatice tensiunea superficială se modifică, (=50*10-3) deoarece ajung
în urină săruri biliare tensioactive.
Anestezicele, care sunt substanţe tensioactive, determină micşorarea tensiunii superficiale a
sângelui pe când diureticele o măresc. Aceste modificări ale tensiunii superficiale servesc la detectarea
unor cazuri de astfel de maladii..
Substanţele tensioactive au un rol important şi în cazul procesului de dializă.
Tensiunea superficială mare a apei, proprietăţile asemănătoare unei membrane elastice favorizează
menţinerea şi deplasarea unor insecte marine pe suprafaţa apei (Hidrometa). Ele prezintă la extremităţile
membrelor ramificaţii fine unse cu grăsimi care face ca ele să nu se ude.
Larvele ţânţarului anofel se prind de suprafaţa apei. Stropind apa cu petrol se poate lupta împotriva
malariei pentru că petrolul scade tensiunea superficială a apei iar larvele cad la adâncime şi mor.
Observaţie. Mai multe detalii despre tensiunea superficială vor fi studiate la lucrările practice de
laborator.
Fenomene de contact.Capilaritatea.
La contactul dintre solid şi lichid apare o forţă de interacţiune, ca rezultantă a forţelor ce se
exercită între moleculele de lichid şi de solid.
a) Dacă forţa de coeziune dintre moleculele lichidului este mai mare decât forţa de adeziune (ce se
manifestă între moleculele de solid şi cele de lichid) se spune că lichidul nu udă vasul în care se
află. Astfel de lichide formează meniscuri convexe (Fig. 2).
Pentru a calcula debitul volumic de fluid prin conductă, se consideră un strat de fluid cuprins între
r şi r dr . Debitul volumic elementar din acest strat este, după definiţie:
dV ldS
dQ vdS (I.17)
dt dt
După un calcul mai lung, pentru debitul volumic se obţine expresia:
p1 p 2 4
Q R (I.18)
8 l
unde: p1 p 2 este diferenţa de presiune ce produce curgerea
-l este lungimea tubului
-R este raza tubului cilindric
- coeficientul de vâscozitate dinamică a lichidului.
Expresia (I.18) este legea Hagen-Poiseuille.
Legea Hagen-Poiseuille afirmă că debitul de fluid real ce curge printr-o conductă cilindrică este
p p2
proporţional cu puterea a patra a razei acesteia şi cu gradientul de presiune 1 .
l
Ea are aplicaţii foarte importante în fiziologia sanguină.
Proporţionalitatea cu puterea a patra de raza capilarului a debitului sângelui are consecinţe
fiziologice în cazul circulaţiei sangvine. Distribuţia sângelui în diferitele părţi ale corpului este reglată
cu ajutorul musculaturii netede din pereţii arteriali. Prin contracţia acestor muşchi, declanşată pe cale
neurohormonală, vasul se micşorează, ceeace determină o reducere puternică a debitului, deci se poate
face o reglare eficace a debitului.
Fig.I.24 Difuzia
Viteza de difuzie este proporţională cu gradientul de concentraţie şi suprafaţa de difuzie
dc
j D (I.27)
dx
In (I.27) j este densitatea curentului de difuzie şi este egal cu numărul de particule ce traversează unitatea
de suprafaţă în unitatea de timp, adică:
N
j (I.28)
St
(N fiind numărul de particule, S suprafaţa şi t timpul), c este concentraţia substanţei,
N
c (I.29)
V
(V este volumul delimitat în fig. I.18), iar D este coeficientul de difuzie.
Expresia dată în (I.27) poartă numele de legea I-a a lui Fick.
Semnul minus din legea lui Fick apare deoarece fluxul de substanţă se realizează de la concentraţie
mai mare spre concentraţie mai mică. Transportul de substanţă prin difuzie conduce la modificarea
concentraţiei în fiecare punct al spaţiului astfel că în final, pentru t , se ajunge la o egalizare a
concentraţiei substanţei.
Generalizarea ecuaţiei I-a alui Fick în cazul când concentraţia substanţei variază în toate direcţiile
este:
j D c ( x. y.z.t )
Din combinarea legii I-a alui Fick cu legea conservării masei, se obţine legea a II-a a lui Fick.
Numărul de particule care trec în unitatea de timp prin suprafaţa S este:
j N
( j j ) S dj.S dxS = (I.30)
x t
j fiind fluxul incident de particule pe suprafaţa S iar j fluxul emergent pe o suprafaţă egală.
Dar după definiţia (I.29) pentru concentraţie avem:
N c
Sdx (I.31)
t t
Din ultimele două relaţii se obţine:
j c
(I.32)
x t
Derivând în raport cu coordonata prima lege a lui Fick, avem:
j 2c
D 2
x x
In cazul în care se consideră că difuzia are loc în planul xOy soluţia ecuaţiei I.33 este reprezentata în
Fig.I.27 şi este cunoscută sub numele de “clopotul lui Gauss”.
Fig.I.27 Curba (clopotul) lui Gauss
Coeficientul de difuzie se defineşte după relaţia (I.27), ca fiind cantitatea de substanţă ce străbate
unitatea de suprafaţă, în unitatea de timp, dacă gradientul de concentraţie este egal cu unitatea. Experienţa
arată că D variază direct proporţional cu temperatura, depinzând în acelaşi timp şi de forma particulelor.
Pentru particule coloidale de formă sferică coeficientul de difuzie este dat de formula lui Einstein:
kT
D (I.34)
6r
In (I.34) k este constanta lui Boltzmann, T este temperatura absolută, r este raza sferei iar este
coeficientul de vâscozitate dinamică a lichidului. Deci viteza de difuzie este proporţională cu temperatura
absolută dar este invers proporţională cu vâscozitatea ceea ce explică de ce difuzia într-un gel este mult
mai înceată decât într-un fluid.
In sistemele biologice însă, nu se realizează difuzia liberă, ci difuzia prin membrane. Fenomenul de
difuzie are un rol esenţial pentru organismele vii. Fenomenul de difuzie intervine între organism şi mediu
sau între celule şi mediul său, precum şi între diferite compartimente celulare. Organele specializate
pentru schimbul prin difuzie sunt: branhiile şi plămânii la animale şi frunzele la vegetale. La animalele
inferioare chiar toată suprafaţa tegumentului este adaptată la schimbul prin difuzie.
In aceste situaţii nu este vorba de difuzie liberă, ci prin membrane.
I.7. OSMOZA
Membranele nu sunt la fel de permeabile pentru toate substanţele, ci sunt selectiv permeabile. O
membrană permeabilă pentru solvent dar impermeabilă pentru solvit se numeşte semipermeabilă.
Membranele biologice sunt permeabile nu numai pentru solvent ci şi pentru substanţe cu moleculă mică.
Fenomenul de osmoză este fenomenul de difuzie printr-o membrană semipermeabilă.
Fie două soluţii de concentraţii diferite despărţite printr-o membrană semipermeabilă, ca în Fig.I.25.
Fig.I.25 Osmometru
Dacă în vasul A se pune o soluţie concentrată iar în vasul B o soluţie mai puţin concentrată, atunci
moleculele solventului din vasul B vor trece prin membrana semipermeabilă, în vasul A.
Osmoza continuă pînă ce nivelul lichidului din vasul A produce la manometru denivelarea h cînd se
realizează echilibrul. Acest echilibru se realizează cînd presiunea hidrostatică a coloanei de lichid cu
înălţimea h egalează presiunea exercitată de fluxul osmotic, care este presiunea osmotică.
I.7.3. Electroosmoza
Electroosmoza reprezintă deplasarea apei printr-o membrană ce conţine sarcini electrice, în
absenţa unei diferenţe de presiune osmotică, atunci când este aplicată o diferenţă de potenţial electric.
Fenomenul a fost detectat în celulele unor alge.
Observaţie
Procariotele nu au organite specializate în diferite funcţii însă au membrane adaptate la o serie de
funcţii. Structura membranelor depinde de tipul de organism şi de condiţiile metabolice. Aspectul comun
sugerează o legătură cu structura mitocondriilor. De fapt membrana internă a mitocondriei are trăsături
commune cu membrana celulară a bacteriei.
Faptul că atât mitocondriile cât şi cloroplastele se divid (în unele cazuri odată cu diviziunea celulară,
în alte cazuri independent) a sugerat că organismele procariote şi organitele specializate în conversia
energiei au o origine comună.
Celulele eucariotelor de origine animală sunt diferite de cele vegetale. Atât celulele animale cât şi
cele vegetale au membrana citoplasmatică; cele vegetale au însă o structură rigidă formată din celuloză
sau din material asemănător celulozei, fapt ce le conferă o anumită rigiditate.
II.2.2 Macrotransportul
Fagocitoza se realizează prin întinderea membranei care înconjoară particula şi o introduce în
interior. (Fig. II.4a)
Pinocitoza independentă de receptori se realizază prin pătrunderea fluidului din vecinătatea
celulei, membrana formând canale (Fig. II.4b)
Pinocitoza mediată se realizează astefel: o moleculă mare sau o particulă se leagă de un receptor
specific, formează un complex care este absorbit de citoplasmă (Fig.II.4c).
Exocitoza se realizează prin fuziunea unor vezicule din citoplasmă cu membrana şi conţinutul din
vezicule este eliminat în exterior.
Transcitoza realizează transportul macromoleculelor prin celulele endoteliului capilar.
G.E. Palade a observat la microscopul electronic în citoplasma celulelor endoteliale vezicule ce
traversează celulele, sugerând rolul veziculelor în transportul macromoleculelor din plasmă în afara
patului vascular.
Fig.II.4 Fagocitoza şi pinocitoza
II.2.3.1.Difuzia simplă
In cazul membranelor biologice difuzia simplă se realizează pe două căi:
prin dublul strat lipidic şi
prin proteinele intrinseci.
Difuzia simplă prin stratul bilipidic a fost pusă în evidenţă de Overton care a arătat că viteza de
pătrundere a substanţelor în celulă este proporţională cu solubilitatea acestora în lipide.
Difuziunea simplă este guvernată de legea lui Fick (care a fost studiată în capitolul “Fenomene
moleculare în lichide”). Cantitatea de substanţă transportată variază liniar cu diferenţa de concentraţie.
La începutul anilor 1900, Albert Einstein a arătat că există o relaţie simplă între coeficientul de
difuzie D, al unei substanţe şi timpul t necesar pentru difuzia la o distanţă medie d, într-un mediu fluid:
d 2 2 Dt
Pentru a difuza prin celula intestinului, care este de circa 10m, glucoza are nevoie de 0,08 secunde.
Pentru celulele protozoarelor, care au lungime foarte mari, timpii de difuzie devin mari astfel încât,
datorită constrângerilor difuziei, se ajunge la o limitare a mărimii celulelor biologice
Pentru moleculele mici hidrofile şi pentru apă această explicaţie a suscitat numeroase controverse.
Difuziunea apei este mult mai intensă decît a oricărei substanţe. De aceea s-a admis că în acest caz
transportul se realizează prin difuziune simplă mediată de proteine.
De exemplu apa care traversează în cele două sensuri membrana hematiei în timp de o secundă are
volumul mai mare de 100 de ori decât volumul hematiei, dar fluxul net este nul şi volumul hematiei
rămâne constant.
In anumite condiţii poate apare o diferenţă de concentraţie transmembranară pentru apă şi atunci
există un flux hidric net ducînd la turgescenţa celulei. Transportul apei poate fi blocat prin adăugarea
substanţelor care conţin mercur. Adăugarea hormonilor antidiuretici în rinichii mamiferelor şi în pielea de
broască creşte puternic viteza de mişcare a apei în epitelii. In rinichii mamiferelor acest flux de apă este
esenţial pentru abilitatea rinichiului de a reţine apa în organism în perioade de dezhidratare (în special
pentru animalele care trăiesc în deşert).
Fenomenul de difuziune a apei prin membranele celulare este fenomenul de osmoză, pus în evidenţă
de Dutrochet în anul 1809, cu mult înainte de a se cunoaşte structura membranei celulare. In prezent sunt
în studiu şi alte fenomene legate de transportul apei, sub două aspecte:
a) precizarea stării apei, în special cea intracelulară, unde o parte din molecule sunt în stare liberă iar
altele legate, îndeosebi la nivelul proteinelor
b) punerea în evidenţă a structurilor de la nivelul membranei ce concură la transport
c) existenţa unor pori sau canale specifice apei
d) existenţa unor canale sau pori de transport pentru apă şi unii anioni
e) existenţa unor transpotori
Tehnicile de mare precizie a măsurătorilor vor da probabil răspuns la aceste întrebări.
Sau poate se va confirma observaţia lui Schrodinger după care materia vie nu eludează legile fizicii, ci
poate să implice “alte legi ale fizicii”, necunoscute încă.
Este deci posibil ca unele cercetări din biologie să antreneze noi cercetări în domeniul fizicii, aşa cum
unele fenomene din fizică au impus dezvoltarea unor noi formalisme matematice care să le poată
explica.
Substanţele sunt transportate prin intermediul unor proteine specifice care se comportă ca nişte
enzime (se şi aseamănă cu cataliza enzimatică). Fiecare proteină transportoare prezintă un loc specific de
legare a substanţei transportate; cînd toate locurile de legare sunt ocupate, viteza de transport ajunge la o
valoare maximă, caracteristică fiecărui transportor, ceea ce explică saturaţia.
Extinderea şi detaliile cunoaşterii transportorilor de glucoză din celulele organismului animal au
permis să se formuleze unele ipoteze privind transportul facilitat.
Mecanismul difuziei facilitate comportă două etape:
a) substanţa transportată este recunoscută de transportator
b) transportul propriu-zis
O diagramă formală a unui model de transport facilitat este modelul “carrier”.
In acest caz proteinele care se comportă ca nişte transportatori mobili, (realizează transportul prin
mecanismul “carrier”= transportator), fac “naveta” prin membrană. (Fig.II.6)
deplaseze în câmp electric. Această afirmaţie a fost verificată experimental în anul 1973, prin măsurarea
curentului de poartă.
Cu ajutorul tehnicii “patch-clamp” s-a reuşit efectuarea unor măsurători la nivelul unui singur
canal ionic.
Fig.II.9 Pompa de Na şi K
Subunităţile prezintă 3 situsuri receptoare ale Na şi un situs care fixează ATP-ul. Pe subunităţile
se găsesc 2 situsuri pentru K.
Funcţionarea pompei de Na şi K poate fi descrisă după cum urmează:
In citosol există un anumit număr de ioni de Na.
Datorită agitaţiei termice, ionii de Na din apropierea tetramerului (pe faţa internă) determină o
mişcare de vibraţie care produce deschiderea canalului spre citosol. Aceasta permite ionilor de Na să
ajungă la situsurile receptoare şi să fie fixaţi.
Concomitent se produce şi o hidroliză a ATP-ului cu eliminarea de ADP în citoplasmă şi menţinerea
pe subunităţile a unui P anorganic. In urma hidrolizei ATP-ului rezultă energie ce asigură
funcţionarea pompei. In acest moment K din spaţiu extracelular ajunge în apropierea celulelor
existând posibilitatea ca doi ioni de K să se fixeze pe situsurile de K.
Se produce apoi o defosforilare a subunităţilor , fosforul abordând ADP-ul şi resintetizând ATP-
ul. Defosforilizarea unităţilor produce o nouă mişcare de vibraţie ce produce eliminarea ionilor de Na
spre exterior.
Stoechiometria pompei de sodiu poate fi redată prin ecuaţia:
3Nai 2 K e ATPi 3Nae 2 K i ADPi Pi
Aici indicii i şi e se referă la compartimentul intern respectiv extern.
Pompa de sodiu şi potasiu intervine în nenumărate procese fiziologice din care amintim transportul
aminoacizilor şi al glucozei, în controlul eliberării neorotransmiţătorilor în creier, etc. Pe de altă parte,
există o serie de factori fiziologici care influenţează (Na+,K+)ATP-aza.
De exemplu viteza maximă de translocare depinde de numărul de unităţi transportoare care este
determinat ereditar.
De asemenea, activitatea pompei depinde de gradul de maturare al ţesutului.
Fluiditatea membranei afectează şi ea activitatea pompei.
Unul din factorii abiotici cu profunde implicaţii pentru organisme este temperatura. Însăşi apariţia
vieţii a fost posibilă la o anumită temperatură. De acest factor depinde existenţa vieţii pe pământ şi tot ea
influenţează una dintre cele mai importante proprietăţi ale sistemelor vii, metabolismul.
Termodinamica biologică se ocupă cu studiul proprietăţilor fizice ale sistemelor biologice din punct
de vedere al conversiei energiei şi al fenomenelor termice.
Dar cum forţa care acţionează asupra pistonului este F pS (p fiind presiunea exercitată de gaz) rezultă
că:
L Fdr = pdV (IV.6)
Principiul I al termodinamicii a fost formulat prima dată de către medicul german R. Mayer şi acesta
afirmă că:
a) Dacă sistemul se consideră izolat adiabatic (adică nu se face schimb de căldură cu mediul
inconjurator), Q 0 şi:
L dU (IV.7)
b) Dacă sistemul nu este izolat adiabatic, pentru procese infinitezimale principiul I al
termodinamicii se scrie:
Q dU L (IV.8)
Dacă se înlocuieşte expresia lucrului mecanic din formula (IV.6), atunci se obţine principiul I al
termodinamicii
Principiul I al termodinamicii are forma locală:
Q dU pdV (IV.9)
Sub forma globală principiul I al termodinamicii se poate scrie:
Q U L (IV.10)
Din expresia ( IV.8) sau (IV.9) pentru principiul I al termodinamicii rezultă o concluzie asupra
funcţionării maşinilor termice. Dacă într-o maşină termică substanţa de lucru efectuează un ciclu de
transformări după care revine în poziţia iniţială, deci
U U f U i 0
Q L ,
şi ca urmare se poate obţine lucru mecanic numai pe baza schimbului de căldură cu exteriorul.
Este imposibilă construcţia unui perpetuum mobile de speţa I, adică a unei maşini care să
producă lucru mecanic fără a primi energie.
Aceasta este de fapt o altă formulare a principiului I al termodinamicii.
Aici T1 şi T2 reprezintă temperatura izvorului cald, respectiv rece iar S1 şi S2 entropiile în stările
respective.
Pentru randamentul motorului termic se obţine atunci după (IV.19):
T
1 2 (IV.21)
T1
Din expresia ( IV.21) se obţin următoarele concluzii:
Randamentul unui motor termic nu depinde de substanţa de lucru ci numai de temperaturile sursei
calde şi a sursei reci.
Randamentul unui motor termic este întotdeauna subunitar întrucât T1 nu poate fi şi nici T2 nu
poate fi 0.
Kelvin a arătat că nu se poate efectua un proces în care să se transforme complet căldura în lucru
mecanic, ceea ce constituie o altă formulare pentru principiul al II-lea al termodinamicii.
Un motor funcţionează cu două izvoare de căldură. Această concluzie conduce la o altă formulare a
principiului al II-lea al termodinamicii.
Este imposibilă construcţia unui perpetuum mobile de speţa II-a , o maşină care ar da energie
(lucru mecanic) pe seama răcirii unui singur rezervor termic.
De exemplu, nu se poate realiza un motor care să lucreze pe seama răcirii apei oceanelor. Deci deşi
pluteşte pe un “ocean de energie”, omenirea foloseşte tot benzină sau cărbuni.
Deoarece ciclul Carnot este reversibil şi entropia este o funcţie de stare, variaţia totală de entropie în
timpul unui ciclu este nulă, adică:
S S12 S 23 S 34 S 41 0
Dar
Q1
S12
T1
S 23 0 (transformarea 2-3 este adiabatică)
S 34 0 (conform principiului al IV-lea al termodinamicii)
S 41 0 (transformarea 4-1 este adiabatică)
Sumând variaţiile entropiilor, pentru ciclul întreg se obţine
S 0 ceea ce contrazice prima relaţie.
Rezultă că pe izoterma de zero absolut 3-4 nu se poate realiza o transformare termodinamică. Deci
temperatura de 0K nu este realizabilă.
Organismele vii sunt se află în interacţiune cu mediul în care trăiesc, depind în mare măsură de
acest mediu, astfel încât ele sunt supuse în permanenţă acţiunii de natură fizică, chimică şi biologică a
mediului exterior.
Acţiunea factorilor fizici se manifestă în mod diferenţiat la nivelul fiecărei trepte de organizare a
organismelor vii. Cercetările au arătat că, pe măsura creşterii complexităţii organismelor, sensibilitatea
faţă de acţiunea factorilor fizici creşte şi ea.
In cazul creşterii intensive a animalelor, în complexele industriale, când acestea sunt ţinute în
condiţii artificiale, când animalele sunt lipsite de mişcare, se modifică metabolismul acestora şi apar
schimbări ale proceselor biologice. Astfel scade pragul de excitabilitate şi capacitatea de apărare şi
sporeşte sensibilitatea faţă de factorii de mediu, apar tulburări nervoase şi infecţioase.
In aceste condiţii, schimbarea factorilor fizici ai microclimatului şi a altor factori fizici produce
stări de stress, apar cazuri de îmbolnăviri şi, ca urmare, calitatea şi cantitatea produselor se diminuează.
De aceea omul trebuie să acţioneze prin diferite mijloace de natură fizică, chimică sau biologică astfel
încât să asigure dezvoltarea normală a funcţiilor ce asigură dezvoltarea şi creşterea cât mai armonioasă a
animalelor.
V.1.1. Acţiunea undelor electromagnetice asupra organismelor
Numeroase tehnici privind tratamentul sau diagnosticul folosesc diferite tipuri de unde
electromagnetice; unele dintre cele reprezentative vor fi discutate în cele ce urmează. Din punct de vedere
al energiei pe care o transportă undele electromagnetice pot fi radiaţii neionizante şi ionizante.
Radiaţiile luminoase (cu lungimi de undă cuprinse între 400-760nm), deşi au domeniul lungimilor
de undă foarte mic în spectrul undelor electromagnetice au un rol primordial asupra vieţii. Diferitele
regiuni ale spectrului undelor electromagnetice au efecte fiziologice foarte diferite, funcţie de frecvenţa
sau lungimea lor de undă.
De exemplu, corpul omenesc este transparent faţă de undele radio, devine opac pentru radiaţiile
din domeniul vizibil şi devine din nou transparent pentru razele Röntgen (X). Faptul că radiaţiile
electromagnetice au diferite efecte se explică prin faptul că acestea posedă energii diferite în funcţie de
frecvenţă. Spectrul undelor electromagnetice este dat în Fig.
Radiaţiile
Neutroni
Observaţie
In ciuda faptului că particulele sunt nuclee de heliu iar sunt electroni şi pozitroni, denumirea
folosită în mod curent este cea de radiaţii din motive istorice.
V.2.2. Efectele radiaţ iilor X asupra organismelor
Puterea mare de penetrare şi absorbţia diferenţiată a radiaţiei X în interiorul ţesuturilor face ca
acestea să fie folosite în diagnosticul radiologic. Corpul este iradiat cu raze X şi se urmăreşte radiaţia
transmisă. Aceasta impresionează un ecran fluorescent, a cărui luminozitate este observată visual
(radioscopie) sau pe o peliculă fotosensibilă (radiografie).
Alte utilizări ale radiaţilor X, ce privesc metodele de cercetare în biofizică, vor fi discutate în
capitolul următor.
Radiaţiile nucleare sunt acele radiaţii, denumite , , care sunt emise de nucleele atomice.
Energia acestor radiaţii este mare, ele produc ionizări şi de aceea sunt clasificate, împreună cu radiaţiile X,
în categoria radiaţiilor ionizante.
Fenomenul de dezintegrare radioactivă a fost studiat de Becquerel şi de soţii Pierre şi Marie Curie.
Primul element radioactiv obţinut a fost denumit Poloniu în cinstea patriei Marie-ei Curie care era de
origine poloneză. Următorul element descoperit, radiul, cel mai activ a dat şi denumirea fenomenului
respectiv de radiaoactivitate.
Marie Sklodovska Curie (1867-1934), a primit premiul Nobel pentru cercetările în domeniul
radioactivităţii în anul 1903 împreună cu Becquerel şi cu soţul ei, apoi singură în anul 1911. Este singura
femeie care are în palmares două premii Nobel.
Z X Z 1Y 1 e
A A 0
Z X Z 1Y 1 e
A A 0
(V.1)
Radiaţiile însoţesc radiaţiile ş i , dar pot apare şi singure; fotonii având sarcină şi
masă de repaus nule, nu schimbă izotopul primar, dacă dezintegrarea nu este însoţită de alte
dezintegrări radioactive.
Ulterior s-a descoperit o posibilitate de transformare nucleară, care are loc prin captarea de către
nucleu a unuia din electronii de pe stratul K, ducând la schimbarea structurii nucleului în mod asemănător
cu schema:
Z X 1 e Z 1Y
A 0 A
(V.2)
Relaţiile (IV.1) şi (V.2) sunt cunoscute sub denumirea de legile deplasării nucleelor, deoarece în
urma dezintegrărilor, elementele care le suportă se deplasează cu una, două căsuţe în sistemul periodic al
elementelor.
Dezintegrarea radioactivă este un fenomen statistic şi nu s-a descoperit pînă în prezent, vreo
posibilitate de influenţare a ritmului în care au loc.
Numărul de nuclee dN care se dezintegreazã într-un timp dt este proporţional cu numărul total N
de nuclee de tipul respectiv din preparat şi cu intervalul de timp dt:
dN Ndt (V.3)
În relaţia (V.3) este constanta de dezintegrare şi este o caracteristică a fiecărei specii nucleare.
Semnul „ –„ indică o scădere a numărului de nuclee care se dezintegrează pe măsură ce timpul creşte.
Dacă la momentul iniţial t0=0, preparatul conţinea N0 nuclee radioactive, numărul de nuclee
radioactive care se mai află în preparat după timpul t (adică numărul de nuclee rămase nedezintegrate) se
obţine din relaţia (V.3) prin integrare:
N N 0 exp( t ) (V.4)
Aceasta este legea dezintegrãrii radioactive.
Timpul T1/2 după care numărul de nuclee rămase nedezintegrate scade la jumătate se obţine
imediat din (V.4), dacă se ia N=N0/2. Se găseşte imediat că:
ln 2
T1 (V.5)
2
Acesta este timpul de înjumătăţire şi, la fel ca şi constanta de dezintegrare , este o caracteristică a
fiecărei specii nucleare.
Există izotopi radioactivi cu timpi de înjumătăţire foarte mici (de exemplu izotopul 214 84 Po are
144
T1/2=3.10-7s) sau din contră, foarte mari (se estimează că izotopul 60 Nd are T1/2=5.1015ani).
In tabelul V.1 prezentăm timpii de înjumătăţire şi radiaţia emisă pentru câţiva radionuclizi
Tabelul V.1
Element T1 / 2 Radiaţia emisă
Hidrogen 12 ani
Carbon 5730 ani
Fosfor 14 zile
Potasiu 1,28*109 ani şi
Cobalt 5 ani şi
Stronţiu 28 ani
Iod 8 zile şi
Cesiu 30 ani
Radiu 1600 ani şi
Uraniu 7,1*108 ani şi
Plutoniu 24.400 ani şi
Relaţia (V.4) indică faptul că, în orice moment, oricât de îndepărtat de cel iniţial (al obţinerii
preparatului radioactiv) mai există nuclee nedezintegrate.
Numărul de nuclee dezintegrate în unitatea de timp
dN
(V.6)
dt
se numeşte vitezã de dezintegrare sau activitate radioactivã.
Utilizînd relaţia (V.3), (V.6) devine
dN
N (V.7)
dt
Viteza de dezintegrare scade exponenţial în timp.
Combinînd (V.7) cu (V.3), se obţine imediat
0 exp( t ) (V.8)
Viteza de dezintegrare se măsoară în dezintegrări pe secundã.
Unitatea de măsură pentru viteza de dezintegrare (activitatea radioactivă) în Sistemul Internaţional
de Unităţi (SI) este denumită Becquerel (Bq) şi ea reprezintă 1 dezintegrare pe secundă. Se tolereazã ca
unitate de măsură a activităţii radioactive, cea denumitã Curie, egală cu
1Ci=3,7.1010 dezintegrări pe secundã
1Ci este definit ca activitatea (în particule ) a unui gram de 226Ra pur, proaspăt preparat. (1Ci =
3,7.1010 Bq). Curie-ul este o activitate foarte mare, periculoasă pentru om, chiar şi la un timp de expunere
scurt.
Adeseori nucleele obþinute prin dezintegrări radioactive sunt la rândul lor instabile şi suferă de
asemenea dezintegrări radioactive. Aceştia sunt nuclizi genetic legaţi. Un exemplu este dat de
dezintegrarea în lanţ:
72
30 Zn31
72
Ga 32
72
Ge
Concluzii
Putem spune că absorbţia radiaţiilor ionizante de către materia vie cuprinde următoarele faze:
Ionizarea şi excitarea moleculeor urmate de formarea ionilor şi radicalilor liberi
Reacţii chimice
Modificarea funcţiilor şi structurii celulelor
Iată de ce efectele nocive nu apar imediat ci după o anumită perioadă. Efectul radiaţiilor ionizante
la mult timp după expunere ca şi faptul că aceste doze de radiaţii se cumulează în timp, sunt nişte
probleme încă în studiu.
In sfârşit întrebarea care se pune insistent este dacă există o doză de prag sub care nu se produce
nici un efect negativ; din păcate existenţa unui asemenea prag nu a fost dovedită.
O serie de evenimente cu un puternic impact asupra oamenilor, cum a fost accidentul nuclear de la
Cernobîl din 26 aprilie 1986, au zguduit opinia publică prin efectele sale care sunt puternice şi în
momentul de faţă şi au reintrodus în rândul preocupărilor individuale şi ale instituţiilor studiul efectele
radiaţiilor ionizante.
Incă nu se cunosc toate efectele pe termen lung ale puternicei iradieri produse şi la noi de explozia
reactorului nuclear de la Cernobîl, care a eliberat în atmosferă o masă de substanţă radioactivă cu o
energie de 10 ori mai mare decât cea eliberată în urma exploziei bombei nucleare de la Hiroshima.
In legatură cu « moştenirea » Cernobîl-ului, J.T.Smith şi colaboratorii, în lucrarea « Cernobil’s
legacy in food and water », Nature 2000, apreciază că efectele acestei catastrofe vor fi timp de 30 de ani
după accident în Anglia şi circa 50 de ani în ţările din fosta Uniune Sovietică.
CAPITOLUL VI
METODE FIZICE DE INVIESTIGATIE A STRUCTURILOR BIOLOGICE
Biofizica dispune în prezent de numeroase metode de studiu ale proprietăţilor fizice ale
constituienţilor sistemelor biologice. In cele ce urmează ne vom referi numai la unele dintre ele, dat fiind
că spaţiul nu ne permite decât abordarea celor mai uzuale.
VI.1.SEDIMENTAREA, DIFUZIUNEA, ULTRACENTRIFUGAREA
Masele unor particule sau macromolecule se determină uzual prin observarea mişcării lor sub
influenţa unor forţe exterioare.
VI.1.1. Sedimentarea
In cazul mişcării libere a unei particule, se presupune că asupra particulei de masă m acţioneză
următoarele forţe:
greutatea G=mg,
forţa arhimedică, F A=m og
forţa de frecare, 6rv (forţa Stokes).
La echilibru acestor forţe se poate scrie:
6rv = (m - m0)g (VI.1)
Când echilibrul este atins, particula va sedimenta cu o vitezã constantă v (care este viteza de mişcare a
particulei în momentul atingerii echilibrului), egală cu:
0
m(1 )g
(VI.2)
v
6r
Aici este densitatea corpului care se emulsionează; 0 a lichidului iar g este acceleraţia
gravitaţionalã,.
Se admite că particulele coloidale au formă sferică şi că au raza r, deci volumul V este:
4 3
V r (VI.3)
3
Condiţia de echilibru (VI.1) devine:
4 3
r ( 0 ) g = 6rv (VI.4)
3
respectiv viteza de sedimentare v se obţine din relaţia:
2r 2 ( 0 )
v (VI.5)
9
Din aceastã relaţie se poate determina raza particulei:
9 v v
r 0,06773 (VI.6)
2g 0 0
Echilibrul de sedimentare i-a permis lui J.Perrin să determine numărul lui Avogadro NA.
Atunci când un mol de gaz trece de la presiunea p0 la p, lucrul mecanic L executat de acesta
p0
L RT ln
p
este egal cu variaţia energiei potenţiale a gazului,
U = mgh,
Aici h este diferenţa (de nivel) dintre nivelul iniţial (0) şi nivelul final la care este adus gazul.
Deoarece M = NAm, se obţine:
p0 N m
ln A gh (VI.7)
p RT
Aplicând formula lui Clausius pentru gaze, ceea ce implică faptul că particulele sunt suficient de
mici faţă de distanţa dintre ele, se obţine:
p 0 n0
, (VI.8)
p n
unde n0 şi n sunt numãrul de particule ce se găsesc într-un cm3 la diferite înãlţimi,
Din (VI.7) şi (VI.8 ) rezultã:
n N mgh
ln 0 A (VI.9)
n RT
J. Perrin a determinat cu ultramicroscopul că raportul n0/n este 100/12.
Inlocuind în relaţia (VI.9) valorile numerice ale constantelor, se obţine:
100 N A * 7,22.10 12 * 1,1.10 2
ln
12 8,31.10 7 * 293
de unde se calculează:
N A 6,023 *10 23 molecule/mol
RT dc
vc (VI.12)
6rN A dx
Viteza (rata) de difuzie adică numărul de particule din substanţă transportată prin difuziune în unitatea de
timp prin secţiunea transversală egală cu unitatea este dată de legea I-a a lui E.Fick, sub forma:
dn dc
j D
dt dx
Viteza de sedimentare (numărul de particule ce sedimentează în unitatea de timp şi unitatea de suprafaţă)
este egală cu produsul dintre viteza particulei şi concentraţie:
dn
vc (VI.13)
dt
Dar la echilibru viteza de sedimentare trebuie să fie egală cu viteza de difuzie. Identificînd relaţiile
(VI.12) şi (VI.13) se obţine coeficientul de difuziune al substanţei D:
RT 1
D (VI.14)
N A 6r
care este tocmai relaţia lui Einstein
Relaţia lui Einstein poate fi utilizatã la determinarea masei moleculare a particulelor coloidale.
Notând cu Vs volumul specific, adică volumul unui gram de particule, în ipoteza cã particula este
sfericã şi are raza r, iar M este masa moleculară a particulelor coloidale, se poate scrie:
4 3
MVs N A r (VI.15)
3
Scoţând pe r din valoarea lui D dată de relaţia (VI.14) şi înlocuind în relaţia (VI.15) se obţine:
3
1 RT 1
M (VI.16)
162 2 N A D V s
2
sau
MD 3 K (VI.17)
unde K este o constantă la o temperaturã dată şi pentru aceleaşi particule coloidale.
Folosind o astfel de formulã s-a calculat masa molecularã a albuminei din ou obţinându-se masa
molecularã M = 62.000 (valoare mai mare decât cea determinată experimental prin alte metode).
In capitolul I la studiul presiunii osmotice am arătat că măsurarea acesteia serveşte la determinarea
masei molecularea a unor molecule.
In tabelul VI.1 sunt date masele moleculare ale unor substanţe determinate determinate prin diferite
metode.
Tabelul VI.1
Substanţa Presiunea Difuziune Sedimentare
osmoticã
Albumină umană 14000 17000
Gelatinã 30000
Hemoglobină 66800
OVIalbumină 34500
InVIertină 54000
VI.1.3. Ultracentrifugarea
Dezvoltarea tehnicilor de ultracentrifugare face această metodă utilizabilă pentru molecule cum ar fi
proteinele sau chiar molecule mici. In acest caz acceleraţia gravitaţională este înlocuită de acceleraţia
centripetă x unde este viteza unghiulară a maşinii centrifuge iar x distanţa dintre particulă şi centrul de
rotaţie.
Se numeşte constantă de sedimentare mărimea
v
s 2 (VI.18)
x
şi ea este caracteristică pentru o specie moleculară într-un solvent dat.
Ea se exprimă în unităţi Svedberg,
1 Svedberg = 10 –13secunde.
Din (VI.18) viteza particulei este:
v s 2 x (VI.19)
Inlocuind (VI.19) în (VI.2) pentru masa particulei care se roteşte, se obţine:
6rs
m
(VI.20)
(1 0 )
Din (VI.20) şi din faptul că
M mN A
se găseşte pentru masa moleculară expresia:
sRT
M
(VI.21)
D1 0
R fiind constanta gazului ideal.
VIiteza de sedimentare a moleculelor poate fi determinată rotind suspensia (soluţia) într-o centrifugă
şi observând mişcarea laterală.
Utilizând o metodă optică cunoscută sub denumirea de optică Schlieren se poate înregistra mişcarea
particulelor în funcţie de gradientul de concentraţie.
La echilibru viteza cu care particulele se mişcă de la axa de rotaţie spre exterior este egală cu viteza
cu care ele se mişcă în sens opus datorită gradientului de concentraţie. Inlocuind pe s din (VI.21) în
(VI.19) şi apoi în (VI.12), rata de sedimentare devine:
dn M 2 x
vc c D1 0 (VI.22)
dt RT
Această expresie pentru masa moleculară este independentă de mărimea şi forma moleculelor
(particulelor).
Pentru determinarea maselor moleculare metoda nu necesită o determinare independentă a
coeficientului de difuzie, D.
Timpul necesar atingerii echilibrului este însă destul de lung astfel încât metoda nu este practică
pentru molecule având masa moleculară mai mare de 5000.
VI.2. ELECTROFOREZA
Electroforeza se bazează pe studiul mişcării macromoleculelor încărcate cu sarcină electrică într-un
fluid, ca urmare a aplicării unui câmp electric. Dacă macromolecula are sarcina electrică q şi se află într-
un câmp electric de intensitate E, asupra ei acţionează o forţă de natură electrică :
F qE (VI.25)
Forţei electrice i se opune forţa de frecare Stokes, 6rv .
Forţa electrică imprimă particulei o acceleraţie până ce particula atinge viteza v, constantă care se obţine
la echilibrul acestor forţe:
qE = 6rv .
Se defineşte mobilitatea macromoleculei u, raportul între viteza particulei şi intensitatea câmpului electric:
v
u (VI.26)
E
Mobilitatea unei particule de sarcină q=ze (e fiind sarcina elementară) şi rază r va fi după (VI.25) şi
(VI.26):
ze
u (VI.27)
6r
Numeroase măsurători cantitative au arătat că mobilitatea este o funcţie liniară a logaritmului masei
moleculare, adică:
u b a log M (VI.28)
Aici M este masa moleculară iar a şi b sunt nişte constante care depind de concentraţia şi proprietăţile
substanţei. De fapt se poate face calibrarea instalaţiei ca să se citească direct masele moleculare.
Jz= L z (VI.42)
2
Pentru cazul când electronul se găseşte în starea fundamentală (n=1; l 0 ) momentul cinetic
orbital se anulează; momentul cinetic de spin însă este diferit de zero.
Momentul cinetic de spin nu poate fi zero niciodată, deci mişcarea de spin nu poate fi anulată.
Deci spre deosebire de momentul cinetic orbital care este legat de spaţialitate, momentul
cinetic de spin este o mărime intrinsecă, aşa cum sunt masa şi sarcina.
Corespunzător mişcării de spin, atomul cu un electron posedă şi un moment magnetic de spin
care are valoarea:
e
s S
m0 (VI.43)
Valoarea frecvenţei de rezonanţă şi a semilărgimii de rezonanţă oferă indicaţii foarte precise asupra
factorului giromagnetic şi a câmpului local, ceeace permite estimări asupra structurii moleculelor organice
complexe.
În acest ultim caz spectrul de absorbţie RMN nu prezintă o singură linie, ci mai multe, cu
amplitudini şi semilărgimi diferite.
Semilărgimea unei linii depinde de distanţa pînă la vecinii cei mai apropiaţi şi indică lungimea
legăturii cu vecinii, iar poziţia liniei dă tăria interacţiunii. Aceste mărimi permit determinarea cu mare
exactitate a formulei structurale a substanţei analizate dacă formula brută (compoziţia procentuală este
cunoscută).
Dacă protonii unei anumite grupări dintr-o moleculă sunt înlocuiţi cu deuteroni, se pot studia prin
RMN comportările grupării respective (în acest fel se pot obţine acizi graşi complet deuteraţi).
Diferenţele între datele obţinute prin metoda RES şi RMN (în cazul acizilor graşi) arată că ataşarea
markerilor de spin reprezintă o perturbare mai mare a moleculei decît în cazul înlocuirii protonului cu
deuteriul, în cazul RMN-ului. Ca urmare, informaţiile obţinute prin metoda RMN sunt mult mai apropiate
de realitate decât cele date de RES.
Combinarea celor două metode, RES şi RMN a condus la apariţia tehnicii de dublă rezonanţă
electronică-nucleară (ENDOR-Electron Nuclear Double Resonance). Tehnica ENDOR permite obţinerea
unor informaţii suplimentare privind studiul radicalilor liberi organici.
Această emisie stimulată continuă până când populaţia stării superioare se micşoreazã suficient
pentru a deveni egală cu cea a stării inferioare.
Pentru a obţine inversia de populaţie, sistemul cuantic (mediul activ) trebuie sã fie excitat (sau
"pompat") la o distribuţie de neechilibru, prin folosirea unei surse externe de energie.
Intr-un sistem cuantic cu două nivele, inversia de populaţie se poate realiza numai prin alegerea şi
separarea constituenţilor aflaţi în starea excitatã de cei în stare neexcitatã, adică prin sortare. Sortarea se
poate efectua doar dacă particulele sistemului cuantic sunt independente (de exemplu, în stare gazoasã). In
acest mod se obţine inversia de populaţie în cazul maserului cu amoniac.
Sistemele cuantice cu mai multe nivele energetice (3 sau 4) permit obţinerea inversiunii de
populaţie prin pompaj optic.
Pentru apariţia efectului laser, mai este necesar ca timpul mediu de viaţă al stării de plecare a
tranziţiei laser să fie mare în comparaţie cu timpii de viaţă medie corespunzători celorlalte stări excitate.
BIBLIOGRAFIE
1. Baran. T., Biofizica medicală, Institutul de Medicină şi Farmacie Iaşi, Iaşi (1985)
2. Condurache D., Badescu Rodica, Grecu Irinel, Oancea Servilia, Fizica clasică în 15 lecţii,
Univ. Tehnică"Gh. Asachi" Iaşi, (1994)
3. Creanga D., Elemente de electrofiziologie celulară, Editura Cermi, Iasi, (2003)
4. Dimoftache C., Herman S., Biofizică medicală, Editura Cerma, Bucureşti, (1996)
5. Dragomirescu Elena, Rusu Fl., Contrea A., Bozac Rodica, Elemente de Biofizică, EDP,
Bucureşti, (1979)
6. Isac M., Filipescu C., Isac Rodica Maria, Biofizica, De la Big-Bang la Ecosisteme, Ed.
Tehnică, Bucureşti, (1996)
7. Johnn H., Phipps C., Gascoyne S., Hawkey C., Rampling M.W., A comparison of the
viscometric properties of the blood from a wide range of mammals, Clinical Hemorh. (1992),
Vol.12, 639
8. Luca, E. Zet, Gh., ş.a., Fizica generală, Editura Didactică şi Pedagogică,, Bucureşti, (1981)
9. Neacşu I, Cîmpeanu C. S, Elemente de biofizică şi biologie celulară, Editura Cerim, Iaşi
(2000)
10. Nicolaescu I., Fundamente de Biofizică, Universitatea de Medicină şI Farmacie Tg. Mureş,
11. Oancea, S., Condurache D., Badescu R., Grecu I., Fizica cuantica în 15 lecţii, Univ Tehnică
"Gh. Asachi" Iaşi, (1998)
12. Oancea S., Foca N., Condurache D., Băleanu A., Atomi. Molecule. Stări de agregare, Edit
DAN, Iaşi, (1999).
13. Oancea S., Râpă A., Oancea I., Introducere in Biofizica, Editura TEHNOPRESS, (2000)
14. Oancea S., Fizică elementară, Editura PIM, Iaşi, (2003)
15. Sybesma Ch., Biophysics An Introduction, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, Boston,
London, (1989)