Reacția de polimerizare în lanț (PCR)

Reacția PCR este o metodă de amplificare enzimatică in vitro a

unei anumite secvențe de ADN. Din punct de vedere chimic, reacția PCR
este constituită din cicluri successive de replicare in vitro. Principalele
componente ale reacției sunt: ADN matriță, o ADN polimerază
termostabilă, primeri oligonucleotidici, deoxinucleotidtrifosfați (dNTP),
tamponul de reacție și ioni de Mg2+ .

O reacție PCR este formată din n cicluri( între 25 și 40), în

fiecare ciclu fiind parcurse 3 etape principale: denaturarea termică a
matriței (desfacerea dublului helix ADN), atașarea primerilor și
polimerizarea propriu-zisă. La terminarea unui ciclu de replicare in vitro
(de amplificare), cantitatea de ADN rezultată este dublă față de matriță.
Numărul final de copii ADN este 2nxy, unde y = numărul inițial
de copii, iar n= numărul de cicluri de replicare. În concluzie, reacția PCR
este o metodă prin care se obțin cantități mari dintr-o anumită
secvență ADN, molecule care pot fi ulterior manipulate sau analizate
fără a fi necesară o prealabilă clonare moleculară a acestora.
 Indicatii:
Diagnosticul infecțiilor virale și bacteriene
Boli genetice
Neoplasme
Evaluarea prognosticului recurenței anumitor afecțiuni, în special
maligne.
Tehnica este utilizata pentru detectia patogenilor bacterieni si virali
(ex: HIV-1, Cytomegalovirus, Virusuri enterice, Chlamydia trachomatis,
Neisseria gonorrhoeae, Mycobacterium tuberculosis, etc)
Un rezultat negativ înseamnă că agentul infecțios nu este detectat
Un rezultat pozitiv indică prezența ADN sau ARN patogen