Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Spre exemplu, ne interesează o regiune din ADN deoarece suspectăm existența unei
anumite mutații. Pentru a putea fi vizualizată, acea regiune trebuie copiată de un număr suficient
de ori. Cu ajutorul PCR-ului, vom amplifica acea regiune și vom avea milioane de molecule
identice cu regiunea de la care am plecat. Asta face PCR-ul sau reacția de polimerizare în lanț:
amplifică bucăți din ADN cu ajutorul unei enzime numite ADN-polimeraza. Această enzimă nu
poate amplifica ADN-ul când avem ambele catene răsucite una în jurul celeilalte. Pentu ca
enzima să poată acționa, cele 2 catene ale ADN-ului trebuiesc rupte una de cealaltă. Astfel,
putem vorbi despre cele 3 etape ale reacției de polimerizare în lanț: denaturare, hibridizarea
primerilor, elongație.
1
Universitatea ’’Alexandru Ioan Cuza’’ Iași Gorbănescu Andreea
Facultatea de Biologie- Master Genetică moleculară Anul I
Enzima nu poate copia catena de ADN din orice punct, ci are nevoie de o mică bucată de
ADN, numită PRIMER, pe care enzima o recunoaște. Astefel putem vorbi de a 2a etapă,
hibridizarea primerilor: la 55-65ºC, primerii se vor atașa complementar la capetele celor 2
catene. Practic, acesta este punctul din care enzima începe copierea catenei originale într-o
catenă complementară.
PCR “în timp real” este o metodă de cuantificare care oferă o analiză mai ușoară și mai
precisă a produșilor de amplificare, comparativ cu metodele clasice. Acumularea datelor de
amplificare se realizează cu ajutorul unor fluorocromi, a căror concentrație crește pe parcursul
reacției, permițând cuantificarea produșilor de amplificare pe măsură ce aceștia se formează. Cu
cât numărul de copii din secvența de interes este mai mare la începutul reacției, cu atât mai
puține cicluri de amplificare vor fi necesare pentru a genera numărul minim de ampliconi care
pot fi detectați (fluorescența atinge lungimea de undă necesară detecției). Se pot amplifica atât
probe ADN cât și probe ADNc cu aceeași viteză și eficiență